FACSAria流式细胞仪无菌分选的基本流程

第一篇：FACSAria流式细胞仪无菌分选的基本流程

FACSAria流式细胞仪无菌分选的基本流程

一、环境和液流的消毒

1、准备足量的无菌1×PBS（3L左右）和去离子水（10L左右）。PBS和去离子水可高压灭菌，sheath桶和装DI水的5L小桶依次用75％医用酒精和无菌去离子水各涮洗三次，然后将无菌PBS和去离子水分别注入相应桶内即可。

2、房间在分选前紫外灯照射15－20分钟；用1:50新洁尔灭拖地；用75％医用酒精擦拭工作台和收集架；用75％医用酒精喷洒分选细胞收集区和上样区。

二、开机和管道的消毒

1、将 Sheath液换为活性氯浓度为0.5%的次氯酸钠溶液（不要用75％的酒精），开机。开机前，先掀起流动室和分选室的罩盖，开启电源，打开计算机并等计 算机进入WINDOWS系统后，打开激光电源，运行FACSDiva软件，联机成功后，执行Fluidics startup命令。然后从FACSDiva的sort菜单进入sort setup，选择合适的液流压力（high、middle、low）。一般来说，100μm的喷嘴选用Low，而70μm的喷嘴选用middle。

2、打开breakoff window，点击显示窗上的液流开关，检查液流是否正好流入废液槽中间和液流的形态是否正常。如果出现异常，可以通过调整喷嘴的位置，改变 Breakoff 窗口的Amplitude的大小和打开Attenuation开关等来进行调整。（具体操作可参考Instrument User’s Guide的194－200页），直至液流形态和位置符合分选要求。

3、在上样管中装入1ml 活性氯浓度为0.5%的次氯酸钠溶液,将上样管放在上样架上，点击Acquisition窗口的Load开关，运行15－20分钟后，点击Unload开关，取下上样管。

4、将Sheath液换为无菌PBS，先后执行Fluidics shutdown和Fluidics startup程序各一次。

通过上述操作完成了环境和管道的消毒，为分选准备了无菌的环境，在后续的操作中应注意保持，以确保分选样本不被污染。

二、分选相关参数的调节

1、在side－stream window中，打开Voltage开关，确定在打开Voltage开关后，液流没有偏离中心位置，如果有偏离可以调整Voltage center，使其回到中间位置。

2、打开Test Sort，通过调整电压的大小来调整side stream的位置。让side stream能够正好落入收集管的相应位置中。

3、点击Browser中的Experiment图标，创立一个新的Experiment，并改名为Accudrop。

4、在Sheet或者Template中创立FSC图，并画一个可以包含所有Plot的gate。

5、打开Sort Layout，将Precision mode设置为purify，Target Events设置为continuous。

6、上一管装有Accudrop Beads的样品管。

7、调整速率，使获取速度为2000－4000events每秒。注意速率不要超过4。

8、点击打开Voltage，点击sort按钮，点击Optical Filter，调节drop delay，使屏幕左边的方框中的数值为98％以上，即调整好了drop delay。Drop delay是影响分选质和量的重要指标，一定要调整好。

通过上述操作即完成了全部的分选前的环境消毒和某些参数的调试工作，后续和分析无较大差别。

在 整个的无菌分选过程中，要时刻注意保持无菌的环境，注意观察液流的形态和位置。当液流出现异常时，一定要停止分选，及时的调整，因为正确的液流形态和位置 是保证分选纯度的前提条件。当分选结束后，应该及时将Sheath液换为去离子水，并执行Fluidics shutdown和Fluidics Startup程序各两次，用去离子水彻底的冲洗管道，以免PBS在管道中沉积，结晶。

上述文字是作者在FACSAria流式细胞仪无菌分选的操作中的一点心得体会，愿意与大家分享交流，并希望大家能提出意见和建议，谢谢大家！

上海生命科学研究院健康科学中心 流式细胞仪室 张健

第二篇：无菌操作技术流程（推荐）

无菌技术操作流程

1、尊敬的各位评委老师大家好，我今天操作的项目是：无菌操作技术

2、整理着装、手消毒液已开启在有效期——七步洗手法——戴口罩

3、我准备的用物是：清洁治疗盘——无菌持物钳——镊子筒——无菌治疗巾——无菌治疗包——无菌手套——无菌生理盐水——无菌治疗缸——碘伏——棉签——弯盘2个——抹布2块——物品已备齐，操作开始

4、评估环境：治疗室环境宽敞、光线充足，治疗车、治疗台清洁干燥符合无菌操作

5、拿盘、擦盘——快速洗手——无菌持物钳及镊子筒在有效期、包布无潮湿、无破损、3m胶带变色均匀，灭菌合格——去3m胶带贴桌上——打包——镊子筒放好夹出化学指示卡（化学指示卡变色均匀，灭菌合格）——写开启时间于3m胶带上——贴标签于缸缘下2cm处（已开启的持物筒有效期为4个小时）——无菌治疗巾在有效期、包布无潮湿、无破损、3m胶带变色均匀——打开治疗巾——镊子夹出化学指示卡（化学指示卡变色均匀，灭菌合格）——镊子夹治疗巾放入治疗盘中——打开——铺巾——检查无菌治疗包——打包（化学指示卡变色均匀，灭菌合格）—夹治疗碗放于无菌治疗巾上——无菌治疗缸已开启在有效期—夹取纱布——0.9%氯化钠注射液250ml在有效期——清洁瓶身——快速洗手——检查溶液——打开铝盖——消毒瓶盖（棉签、碘伏已开启在有效期——消毒瓶盖，打开瓶盖——瓶签在掌心，冲洗瓶口——向碗内倒入生理盐水，盖好瓶盖，消毒瓶周2遍，记录开启时间（已开启的生理盐水有效期为24小时）——铺好无菌盘——记录铺盘人及时间，已铺好的无菌盘，有效期为4个小时——七步洗手法——选择合适的无菌手套，检查手套（无菌手套在有效期，包装完好，挤压无漏气）——取出无菌手套——戴手套（按照规范方法戴手套）——手套戴好后双手交叉（调整手套位置），双手放于胸前——脱手套（按规范方法脱手套）——放入黄色垃圾袋中——医疗垃圾分类处理——七步洗手法——操作结束。

无菌技术是指在医疗护理操作过程中，保持无菌物品不被污染，防止一切微生物侵入或传播给他人的一系列操作技术和管理方法，是预防医院内感染的一项重要的基本措施。

无菌操作原则

1.环境清洁

进行无菌技术操作前30分钟，停止清扫工作，减少走动，防止尘埃飞扬。2.工作人员要求

修剪指甲、戴好口罩、帽子。必要时穿无菌衣，戴无菌手套。

3.物品保管

无菌物品和非无菌物品应分别放置，并有明显标志。无菌物品必须存放在无菌容器或无菌包内，不可暴露在空气中，无菌包或无菌容器外要注明物品名称、灭菌日期，物品按有效期先后顺序摆放。

4.操作时要求

工作人员面向无菌区，用无菌持物钳取无菌物品，手臂须保持在腰部水平或治疗台以上，注意不可跨越无菌区。操作时不可面向无菌区讲话、咳嗽、打喷嚏。无菌物品怀疑被污染时，给予更换。

5.一人一物 一份无菌物品，仅供一位患者使用，防止交叉感染。

一 无菌持物钳的使用

目的：

用于取放或传递无菌物品

注意事项：1无菌持钳使用时，取出和放入时必须垂直提起和放入，不可触碰到筒壁 和边缘。夹取物品时也是垂直夹取。不可倒置和横置。

2取远处物品时，应当连同容器一起移至物品旁进行操作。

3无菌持物钳不能夹取未灭菌的物品，也不能夹取油纱布（条、球）。

4无菌钳使用时不能低于腰部。

5打开包后的干持物筒、持物钳使用的有效期，≤4小时。

6不可直接从盖孔中取、放无菌持物钳。

7避免无菌持物钳在空气中暴露过久。

二无菌容器的使用

目 的：

无菌容器是用于盛放无菌物品并保持其无菌状态的容器。

注意事项：1.夹取无菌容器内物品时，无菌持物钳及无菌物品不可触及容器的边缘

2.移动无菌容器时，应托住底部，手不可触及无菌容器边缘 3.从无菌容器内取出的无菌物品，虽未使用，也不得在放回无菌容器内。4.无菌容器应定期灭菌，一般有限期为7天。

三.无菌包的使用

目 的：

用无菌包布包裹无菌物品，使无菌物品保持无菌状态。

注意事项：1.一般无菌包布的有效期：夏季为7天，冬季为14天，如超过有效期则

不可使用。

2.开包时手不可触及无菌区域，且包布的任何一角不能到操作台面以下。3.如包布内有剩余物品，其有效期为24h。

四 无菌溶液取用法

目 的：

供无菌操作使用

注意事项：1.检查溶液质量时要倒转瓶体，对光检查。

2.翻开瓶盖时，手不可触及瓶口。

3.倒无菌液时，瓶签置于掌心，瓶口不可触及无菌容器。4.已倒出的溶液虽未使用，也不可倒回瓶内。5.剩余的溶液如继续使用，有效期为24h。

五.铺无菌盘法

目 的：

通过铺无菌治疗巾，形成以无菌区域，放置无菌物品，供治疗护理使用。

注意事项：1.操作时，非无菌物品及身体应与无菌盘保持适当的距离，身体部位不可跨域无菌区。

2.无菌盘应保持干燥，避免潮湿污染。

3.已铺好的无菌盘应尽早使用，保留时间不得超过4h。

六.戴无菌手套法

目 的：

在某些医疗护理操作时为确保无菌效果操作者需戴无菌手套。

注意事项：1.未戴手套的手不可触及无菌手套的外面，已戴手套的手不可触及未戴手套的手及手套的内面。

2.戴手套后如发现手套有破损或不慎污染，应立即更换。

3.戴手套后，手臂不可下垂，应保持在腰以上，肩以下，两侧腋中线之间 的范围内活动。

第三篇：无菌技术操作流程

无菌技术

用物准备：治疗推车、治疗盘2个、弯盘1个、无菌持物钳、无菌治疗包、无菌治疗碗、无菌手套、无菌纱布缸、无菌溶液、棉签、启盖器、碘伏。操作台清洁、干燥、操作前禁止打扫卫生

操作步骤：“两位老师好，我考试的项目是无菌技术，用物已经准备齐全，请问可以开始了吗？”→洗手，戴口罩→携用物至操作台前→取治疗盘放置于操作台上→查看无菌持物钳灭菌是否有效，包布有无破损、潮湿，是否在有效期内，取出镊子罐置于治疗台上，在罐底端注明使用日期及时间→查看无菌治疗巾包灭菌是否有效，包布有无破损、潮湿，是否在有效期内，解系带放包布下，无菌包放置无障碍台上依次打开，查看灭菌指示卡→用镊子夹取无菌巾放于治疗盘内→按原折痕包回无菌包包布，注明开包日期、时间并放置治疗车上→无菌巾铺巾【①单巾：双手打开无菌巾双层平铺于治疗盘内呈扇形折叠→开口边向外；②双巾：双手持无菌巾近身一面两角→由对侧向近侧平铺于治疗盘中，无菌面朝上→取另一块无菌巾，用同样的方法打开无菌巾，无菌面朝下，由近侧向对侧覆盖于第一块无菌巾上→双手持上层无菌巾外面的两角呈扇形折叠于对侧，开口边向外】→放无菌治疗碗【查看无菌包灭菌是否有效，包布有无破损、潮湿，是否在有效期内→在手中打开无菌包布，查看灭菌指示卡→包布包裹手反放无菌治疗碗至无菌盘中】→取无菌纱布【查看无菌容器有效期→打开无菌容器时，其盖子朝上放在稳妥处或拿在手中→用镊子夹取无菌纱布放于无菌治疗碗内→用毕及时盖好】→倒无菌溶液【检查药液瓶签、是否在有效期内、瓶口有无松动、药液质量是否符合要求→打开瓶盖，冲洗瓶口→倒液体于治疗碗内】→折无菌巾（宽边向上双折，窄边向下单折）→注明铺盘时间→消毒瓶口，注明开瓶日期时间→开启无菌盘→戴无菌手套（先查对手套有效期及型号）→双手取无菌治疗碗→脱手套→整理用物，按院感要求分类处理→洗手（完成时间：4分钟）

第四篇：基本流程（推荐）

基本流程

1月22日。1126个分团团长，参加2011年广西十万大学生寒假社会服务活动授旗仪式。（具体时间、地点另行通知）

1月24日。组织分团成员在乡镇政府会议室进行培训。（到乡镇组织委员处领取社会各界为本次活动捐赠的物品并分发到对应的小组，准备文艺演出节目和熟悉工作纪律、采访提纲、政策宣讲内容）

1月25日。分团17个小组开展对应采访活动。（第1组采访乡镇党委书记、第2组采访乡镇纪检委员、第3组采访乡镇综治办主任、第4组采访县统战部部长、第5组采访乡镇派出所所长、第6组采访乡镇司法所所长、第7组采访乡镇交通管理站站长、第8组采访乡镇国土资源管理所所长、第9组采访乡镇计生服务所所长、第10组采访乡镇初中校长、第11组采访乡镇农业服务中心主任、第12组采访乡镇卫生院院长、第13组采访乡镇高中校长、第14组采访乡镇团委书记、第15组采访乡镇林业站站长、第16组采访乡镇文化站站长、第17组采访乡镇邮政储蓄银行行长）

1月26日。组织分团全体成员在乡镇街上开展文艺演出和政策宣讲活动，分发并收集问卷调查。

1月27日。根据乡镇行政村数量，按顺序分配分团小组开展采访村支书或村主任（例如：该乡镇有9个行政村，就分9个小组采访，每个小组采访一个村支书或村主任），其他小组志愿加入协助采访。采访小组要同时在对应的行政村开展老党员慰问、关爱农民工子女、给返乡青年和回乡大学生上党课、开展科技知识培训、开展金融和创业政策宣传活动、放红色经典电影、收集入党积极分子名单等活动。

1月28日-30日。组织分团成员在乡镇开展篮球赛，继续完成分团未完成的工作。

1月31日，组织分团成员与乡镇政府开展总结交流会，做好交流记录，与乡镇政府领导合影留念。

第五篇：跟单员基本流程

1.全面准备并了解订单资料（客户制单、生产工艺、最终确认样、面/辅料样卡、确认意见或更正资料、特殊情况可携带客样,或者大货样，船样之类），确认所掌握的所有资料之间制作工艺细节是否统一、详尽。对指示不明确的事项详细反映给相关工厂技术部和业务部，以便及时确认。

２、务必保证本公司与外加工厂之间所有要求及资料详细并明确、一致！（最好要有文字证明）

３、事先尽可能多地了解各加工厂的生产、经营状况并对工厂的优/劣势进行充分评估，做到知根知底。４、跟单员言行、态度均代表本公司,因此与各业务单位处理相应业务过程中，须把握基本原则、注意言行得体、态度不卑不亢。严禁以任何主观或客观理由对客户（或客户公司跟单员）有过激的言行。处理业务过程中不能随意越权表态,有问题及时请示公司决定。

５、预先充分估量工作中问题的潜在发生性，相应加强工作力度，完善细化前期工作，减少乃至杜绝其发生的可能性。不以发现问题为目的，预先充分防范、工作中重复发掘、及时处理问题并总结经验，对以后的工作方式和细则进一步完善方为根本之道。

６、订单跟单员与订单负责人（操作员）要保持密切的联系，出于双方的利益着想，双与对方沟通，将问题降到最低限度。

二、生产过程中的验货工作程序：

１、面/辅料到厂后，督促工厂最短时间内根据发货单详细盘点，并由工厂签收。若出现短码/少现象要亲自参与清点并确认。

２、如工厂前期未打过样品，须安排其速打出投产前样确认，并将检验结果书面通知工厂负责人和工厂技术科。特殊情况下须交至公司或客户确认,整改无误后方可投产。３、校对工厂裁剪样版后方可对其进行版长确认，详细记录后的单耗确认书由工厂负责人签名确认，并通知其开裁。

４、根据双方确认后的单耗要与工厂共同核对面/辅料的溢缺值，并将具体数据以书面形式通知公司。如有欠料，须及时落实补料事宜并告知加工厂。如有溢余则要告知工厂大货结束后退还我司，并督促其节约使用，杜绝浪费现象。

５、投产初期必须每个车间、每道工序高标准地进行半成品检验，如有问题要及时反映工厂负责人和相应管理人员，并监督、协助工厂落实整改。

６、每个车间下机首件成品后，要对其尺寸、做工、款式、工艺进行全面细致地检验。出具检验报告书（大货生产初期/中期/末期）及整改意见，经加工厂负责人签字确认后留工厂一份，自留一份并传真公司。

７、每天要记录、总结工作，制定明日工作方案。根据大货交期事先列出生产计划表，每日详实记录工厂裁剪进度、投产进度、产成品情况、投产机台数量,并按生产计划表落实进度并督促工厂。生产进度要随时汇报公司。８、针对客户跟单员或公司巡检到工厂所提出的制作、质量要求，要监督、协助加工厂落实到位，并及时汇报公司落实情况。

９、成品进入后整理车间,需随时检查实际操作工人的整烫、包装等质量，并不定期抽验包装好的成品，要做到有问题早发现、早处理。尽最大努力保证大货质量和交期。

１０、大货包装完毕后，要将裁剪明细与装箱单进行核对，检查每色、每号是否相符。如有问题必须查明原因并及时相应解决。

１１、加工结束后，详细清理并收回所有剩余面料、辅料。

１２、对生产过程中各环节（包括本公司相应部门和各业务单位）的协同配合力度、出现的问题、对问题的反应处理能力以及整个定单操作情况进行总结,以书面形式报告公司主管领导。

１３、在检查过程中一定要公平，真实。不能收到厂家的一点点好处，而忘了自己的职责