猪魏氏梭菌病的诊治报告

第一篇：猪魏氏梭菌病的诊治报告

猪魏氏梭菌病的诊治报告

摘要：介绍了里例猪魏氏梭菌病的诊治情况。

关键词：猪；魏氏梭菌病；防治

中图分类号：S858.28文献标识码：B文章编号：1007-273X（2014）03-0032-02

猪魏氏梭菌是典型的条件性致病菌，它可引发地区性流行，每年都有猪因魏氏梭菌感染而死亡。猪魏氏梭菌病，发病急、病程短、死亡率高，表现出症状后常常来不及治疗。哺乳仔猪、种公猪发病率高，给猪场提出了巨大的问题。只有坚持以防为主的原则，定期在饲料中添加有效药物，给种猪使用魏氏梭菌的多价苗免疫接种，改善饲养管理，几方面结合提高猪的综合抵抗力，才能防止本病的发生与流行。

1流行病学

猪魏氏梭菌病多数在气候变化异常（寒冷、阴雨、潮湿）时发生流行，不分年龄、品种的猪均可感染发病，仔猪和种公猪发病率高。仔猪可暴发流行，病死率为20%～70%，中大猪和成年猪呈零星散发。发病突然，病程极短，很快死亡，而且死亡率高。尤其是1周龄之内的仔猪和经常使用的种公猪发病率和死亡率很高。

2发病情况

主诉：某猪场存栏1 506头，其中母猪132头，种公猪4头，肉猪1 162头，哺乳仔猪208头。一头种公猪突然倒地，病情严重。且在20d前也有类似情况的一头种公猪死亡，病得急，在以为是中毒所致。有53头哺乳仔猪发生腹泻，使用抗生素治疗效果不明显，先后死亡了26头，病死率近50%。

3临床症状

3.1种公猪

发病种公猪，呼吸困难，腹部稍微臌胀，耳尖、鼻唇发绀，精神沉郁，食欲废绝，口流白色泡沫，全身肌肉颤抖，呻吟。第二天死亡，死后腹部臌胀明显。

3.2仔猪

发病仔猪为7日龄内的哺乳猪，精神沉郁，食欲减退，呕吐，体温40℃～40.5℃，呼吸困难，粪便以黄红色、褐色、带有血液的稀粪为多，有恶臭，沾污肛门四周、后肢、尾部皮肤和被毛。仔猪被毛粗乱，消瘦，生长不良，肌肉颤抖，严重者倒地死亡，病程1～3d。

3.3肉猪情况

有3头肉猪精神沉郁，食欲减少，体温升高40.3～40.5℃，粪便呈褐色，并有恶臭，沾污肛门四周、后肢、尾部皮肤和被毛。

4剖检病变

肠肠道出血和臌气最明显。肠腔充气，肠壁变得薄而透明，部分仔猪肠黏膜坏死形成溃疡，肠腔内有暗红色稀粪、伴有气泡并有恶臭，肠黏膜有出血斑点，部分肠壁呈红色。

胃胃臌气、出血明显。胃表面浆膜血管充血，胃内充满内容物及气体，胃黏膜脱落、出血，胸腔、腹腔积液呈浅红色。

脾脾肿大明显，呈黑褐色，周边有出血点，质地脆容易破裂。

淋巴结肠系膜淋巴结、腹股沟淋巴结，肿胀、出血、呈大理石样变，甚至有的切面呈鲜红色。

肺肺充血，出血。气管和支气管中有白色泡沫。心、肾变化不明显。

5实验室诊断

（1）采集病死猪的小肠黏膜及肝脏、脾脏病变组织作为被检材料。

（2）将被检材料直接涂片瑞氏染色，见两端钝圆的粗大杆菌，有荚膜，部分菌体中央或近端有芽孢。

（3）将被检材料接种到肉肝汤培养基及紫奶培养基，置37 ℃温箱厌氧培养经6～8 h，肉肝汤变得混浊并产生大量气体。紫奶培养基中牛乳凝团成多孔的海绵状凝块

（4）葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、乳糖、果糖试验均产酸产气；不能发酵甘露醇。

6诊断结果

通过以上的发病情况、临床症状、剖检病变、实验室诊断，综合判定为猪魏氏梭菌病。

7防治措施

（1）首先在全场猪饲料中添加药物：每吨饲料中加入泰乐菌素200g和电解多维500g（或者氟苯尼考200g和痢菌净50g、碳酸氢钠1 500g）。连用7d，间隔一周，再用7d。预防其他猪发生本病。

（2）种猪采取免疫接种的方法来预防。使用魏氏梭菌的多价苗对母猪进行免疫接种，在临产前30d免疫接种1次，2周后再加强1次，使母猪产生免疫力，仔猪出生后通过母猪的母乳获得免疫，使仔猪安全的度过易感期。种公猪半年免疫接种1次。

（3）加强猪场饲养管理，饲料营养要科学合理，降低饲养密度，及时清除粪便，保持栏舍干燥，通风，夏天凉爽，冬天保暖，定时进行有效消毒。母猪接生前要清洗消毒母猪奶头、阴户，胎衣、尸体进行无害化处理，减少本病的发生与传播。

（4）对发病初期仔猪进行治疗：肌注泰乐菌素30 mg/kg体重，每天1次，连用5 d。

对发病初期的中大猪（怀孕母猪禁用）采取下列措施进行治疗（以体重150 kg计）：

肌肉注射硫酸阿托品注射液10 mg，镇痛解痉；用胃导管插入猪胃中放气，使猪腹压减小，然后通过胃导管向胃中灌入甲硝唑水溶液（取甲硝唑5 g溶于500 mL水中），杀灭胃肠的魏氏梭菌；静脉注射10%的葡萄糖1000 mL加甲硝唑4 g、维生素C10 mL。每天一次，连用3 d。达到补液抗菌消炎的目的；立即封锁猪场，处理病畜，尸体深埋，对发病猪栏舍、饮水器、料槽等用20%的漂白粉溶液彻底消毒，尽量控制本病的流行。经过上述综合措施的防治处理，一周后至今没有新病例出现，猪场生产恢复正常。

8小结与讨论

该病发病突然，来势凶猛，病程短，死亡率很高，表现出症状后常常来不及治疗，尤其是种公猪（猪场核心），值得养殖户和兽医技术人员关注。猪群密度过大、通风不良、气温突变等各种不良因素均可引起该病发生。因此，应该坚持以防为主的原则，定期在全场猪饲料中添加有效药物；给种猪使用魏氏梭菌的多价苗免疫接种；同时改善饲养管理，定时进行有效消毒。提高猪的综合抵抗力，才能防止该病的发生与流行。

第二篇：志贺氏菌的危害程度评估报告

志贺氏菌的危害程度评估报告

一、生物学特性

志贺氏菌属（Shigella）的细菌（通称痢疾杆菌），是细菌性痢疾的病原菌人类对痢疾杆菌有很高的易感性。在幼儿可引起急性中毒性菌痢，死亡率甚高。志贺氏菌和大肠杆菌都属于肠杆菌科，根据DNA杂交研究结果表明，志贺氏菌属的四个种和大肠杆菌属在生化上是难以区分的，因为有产气的志贺氏菌，也有乳糖阴性、不产气、不运动的大肠杆菌，有些大肠杆菌也能引起痢疾状的腹泻。志贺氏菌属细菌的形态与一般肠道杆菌无明显区别，为革兰氏阴性杆菌，长约2-3μ m ,宽0.5-0.7μ m。不形成芽胞，无荚膜，无鞭毛，不运动，有菌毛。志贺氏菌需氧或兼性厌氧。营养要求不高，能在普通培养基上生长，最适温度为37℃，最适pH为6.4-7.8。37℃培养18-24小时后菌落呈圆形、微凸、光滑湿润、无色、半透明、边缘整齐，直径约2nm，宋内氏菌菌落一般较大，较不透明，并常出现扁平的粗糙型菌落。在液体培养基中呈均匀浑浊生长，无菌膜形成。根据抗原构造的不同，按最新国际分类法，将本属细菌分为四个群、39个血清型。

二、危害程度分类

根据中华人民共和国卫生部制定《人间传染的病原微生物名录》该菌危害程度为第三类。

三、致病性和感染剂量

志贺氏菌引起的细菌性痢疾，主要通过消化道途径传播。根据宿主的健康状况和年龄，只需少量病菌（至少为10～100个细胞）进入，就有可能致病。致病因素：志贺氏菌的致病作用，主要是侵袭力、菌体内毒素个别菌株能产生外毒素。志贺氏菌引起的细菌性痢疾可分为两类一类是急性细菌性痢疾：又分急性典型、急性非典型、急性中毒性菌痢三型；二类是慢性细菌性痢疾：又分慢性迁延型、慢性隐伏型、慢性急性发作型三型。病后有一定的免疫力，但免疫期短，也不稳定。

四、暴露的潜在后果

暴露后可能引起感染，菌量大时可使实验人员显性感染，菌量很少时常呈暂时的带菌状态。被感不染后，成为传染源，可能对周围及环境造成污染，应及时得到控制。

五、感染途径

通过污染食品和水源经口传播，无其它感染途径。

六、微生物在环境中的稳定性

志贺氏菌属在外界环境中的生存力，以宋内氏最强，福氏菌次之，志贺氏菌最弱。一般在潮湿土壤中能存活34天，37℃水中存活20天，在粪便内（室温）存活11天。日光直接照射30分钟，56-60℃10分即被杀死，对高温和化学消毒剂很敏感，1%石炭酸中15-30分钟即被杀死，对氯霉素、磺胺类、链霉素敏感，但易产生耐药性。

七、浓度和浓缩标本的容量 一般样本检测。

八、自然和易感人群宿主

人和灵长类是志贺氏菌的适宜宿主，营养不良的幼儿、老人及免疫缺陷者更为易感。

九、实验操作活动

巳有文献证明，志贺氏菌可造成实验人员感染细菌性痢疾，仅在美国和英国就有数十例报告。尽管在捕获的非灵长类动物中曾有过暴发，但人类是惟一重要的传染源。然而，实验室感染的豚鼠、其他啮齿类动物和非人灵长类动物也是被证实的传染源。

这种病原体可以存在于受感染的人或动物的粪便中，极少存在于血液中。摄入及胃肠道外接种该病原体是主要的实验危害。人类经口感染福氏志贺菌的ID25～50大约是200个细菌。暴露在气溶胶中能否引起感染目前还不清楚。

按照国家标准方法对样本（粪便、食品、水样）进行分离，培养，鉴定。建议采用BSL-2级水平的操作技术，防扩散设备和设施。一旦发生意外，按照本实验室的《意外事故应对方案和应急程序》进行处理。

十、预防和治疗

志贺氏蓖可引起细菌性痢疾。细菌性痢疾又可分为两类，一类是急性细菌性痢疾：又分急性典型、急性非典型、急性中毒性菌痢三型；二类是慢性细菌性痢疾：又分慢性迁延型、慢性隐伏型、慢性急性发作型三型。

目前疫苗还不可用于人类。对本病的治疗，病人应予胃肠道隔离，除一般治疗外，可根据大便细菌培养及药物敏感试验选用适当的抗菌药物作病原治疗。如复方磺胺甲基异唑、氯霉素、庆大霉素及卡那霉素等。亦可应用氨苄青霉素或氧哌嗪青霉素等治疗。中毒性痢疾应予相应的抢救措施，如抗休克、冬眠药物和脱水药的应用等。慢性菌痢可采用保留灌肠的方法治疗。预防沙门氏菌感染，首先是要消灭传染源是预防措施之一，除治愈患者外，必须对托幼、饮食业及自来水厂工作人员定期检查，及时发现带菌者，调离工作岗位并予以治疗。切实做好饮食卫生、水源及粪便管理,消灭苍蝇,切断传播途径，防止病从口入。

十一、工作人员素质

卫生技术专业人员，并经过生物安全培训后获得上岗证书。

十二、评估结论

该菌生物性状较稳定，主要通过污染食品和水源经口传播，感染机会多，感染性中等，致病后主要是引起急、慢性细菌性痢疾等。预防手段主要控制传染源和做好餐饮业和托幼机构等的卫生管理。试验过程建仪采用BSL-2级水平的操作技术、防扩散设备和设施。实验室中应穿着工作服或罩衫等防护服。离开实验室时，防护服必须脱下并留在实验室内。不得穿着外出，更不能携带回家。用过的工作服应先在实验室中消毒，然后统一洗涤或丢弃。当手可能接触感染材料、污染的表面或设备时应戴手套。如可能发生感染性材料的溢出或溅出，宜戴两副手套。不得戴着手套离开实验室。工作完全结束后方可除去手套。一次性手套不得清洗和再次使用。操作台面用70%酒精或含氯消毒剂擦拭，废弃物处理按本实验室废弃物处理制度进行。

第三篇：实验九 食品中病原性大肠艾希氏菌的检验

实验九 食品中病原性大肠艾希氏菌的检验 目的

1.1 了解病原性大肠艾希氏菌的种类于非病原性大肠艾希氏菌的区别。

1.2 掌握病原性大肠艾希氏菌检验的原理和方法。原理

正常情况下，大肠艾希氏菌不致病，而且还能合成维生素B和K，生产大肠菌素，对 机体有利。但当机体抵抗力下降或大肠艾希氏菌侵入肠外组织或器官时，可作为条件性致病菌而引起肠道外感染。有些血清型可引起肠道感染，已知的引起致病性大肠艾希氏菌有四类，即产肠毒素大肠艾希氏菌、出血性大肠艾希氏菌、肠道侵袭性大肠艾希氏菌和肠道致病性大肠艾希氏菌，后者主要引起新生儿的腹泻。带菌的牛和猪是传播本菌引起食物中毒的重要原因，人的带菌亦可污染食品，引起中毒。材料

3.1 菌种和食品检样

产不耐热肠毒素（LT）和产耐热肠毒素（ST）大肠艾希氏菌标准菌株、食品检样。

3.2 试剂和培养基

多粘菌素B纸片；0.1％硫椰汞溶液；2％伊文思蓝溶液；革兰氏染色液。

乳糖胆盐发酵管；营养肉汤；肠道茵增菌肉汤；麦康凯琼脂；伊红美蓝琼脂(EMB)；三糖铁琼脂(TSI)；克氏双糖铁琼脂(KI)；糖发形管(乳糖、鼠李糖、木糖和甘露醇)；赖氨酸脱羧酶试验培养基；尿素琼脂(pH7．2)；氰化钾培养基；蛋白陈水、靛基质试剂；半固体琼脂；Honda氏产毒肉汤；E1ek氏培养基；氧化酶试剂。

3.3 动物和血清

小白鼠：1日龄一4日龄；致病性大肠艾希氏茵诊断血清；侵袭性大肠艾希氏菌诊断血清；产肠毒素大肠艾希氏菌诊断血清；出血性大肠艾希氏茵诊断血清；产肠毒素大肠艾希氏茵LT和ST酶标诊断试剂盒；抗LT抗毒素。

3.3 设备与材料

天平；均质器或乳钵；温箱(36土1)℃、42℃；水浴：显微镜；离心机；酶标仪；细菌浓度比浊管；灭菌广口瓶；灭菌三角烧瓶；灭菌平皿；灭菌试管；灭菌吸管；橡胶乳头；载玻片；酒精灯；灭茵金属匙或玻璃棒；接种棒、镍铬丝；)接种棒、镍铬丝；试管架、试管篓；冰箱；注射器；灭菌的刀子、剪子、镊子；硝酸纤维素滤膜。流程操作方法

5.1 增菌

样品采集后应尽快检验。以无菌操作称取检样25g，加在225mL营养肉汤中，以均质器打碎1min或用乳钵加灭菌砂磨碎。取出适量，接种乳糖胆盐培养基，以测定大肠菌群MPN，其余的移入500mL广口瓶内，于36土1℃培养6h。挑取1环，接种于1管30mL肠道菌增菌肉场内，于42℃培养18h。

5.2 分离

将乳糖发酵阳性的乳糖胆盐发酵管和增菌液分别划线接种麦康凯或伊红美蓝琼脂乎板；污染严重的检样，可将检样匀液直接划线接种麦康凯或伊红美蓝乎板，于36土1℃培养18h一24h，观察菌落。不但要注意乳糖发酵的菌落，同时也要注意乳糖不发酵和迟缓发酵的菌落。

5.3 生化试验

5.3.1 自鉴别平板上直接挑取数个菌落分别接种三糖铁(TSl)或克氏双糖铁琼脂(KI)。同时将这些培养物分别接种蛋白胨水、半固体、pH7．2尿素、琼脂、KCN肉汤和赖氨酸脱羧酶试验培养基。以上培养物均在36℃培养过夜。

5.3.2 TSI斜面产酸或不产酸，底层产酸，H2S阴性，KCN阴性和尿素阴性的培养物为大肠艾希氏茵。TSI底层不产酸，或H2S、KCN、尿素有任一项为阳性的培养物，均非大肠艾希氏菌。必要时做氧化酶试验或革兰氏染色镜检。

5.4 血清学试验

5.4.1 假定试验

挑取经生化试验证实为大肠艾希氏菌的琼脂培养物，用致病性大肠艾希氏菌、侵袭性大肠艾希氏苗、产肠毒素大肠艾希氏茵多价O血清和出血性大肠艾希氏苗O157，血清做玻片凝集试验。当与某一种多价O血清凝集时，再与该多价血清所包含的单价O血清做试验。致病性大肠艾希氏茵所包括的O抗原群见表9—1。如与某一个单价O血清呈现强凝集反应，即为假定试验阳性。

5.4.2 证实实验

制备O抗原悬液，稀释至与MacFarland 3号比浊管相当的浓度。原效价为1:160—1:320的O血清，用0.％盐水稀释至1:40。稀释血清与抗原悬液在10mm×75mm试管内等量混合，做试管凝集试验。混匀后放于50℃水浴箱内，经16h后观察结果。如出现凝集，可证实为该O抗原。

5.5 肠毒素试验

5.5.1 酶联免疫吸附试验检测LT和ST 5.5.1.1 产毒培养

将试验菌株和阳性及阴性对照菌株分别接种于0.6mLCAYE培养基内，37℃振荡培养过夜。加入20000IU／ml的多粘菌素B0.05mL，于37℃培养1h，4000r／min离心15min，分离上清液，加入0.1％硫柳汞0.05ml，于4℃保存待用。

5.5.1.2 LT检测方法(双抗体夹心法)

包被：先在产肠毒素大肠艾希氏茵CT和ST酶标诊断试剂盒中取出包被用LT抗体管，加入包被液0.5ml，混匀后全部吸出于3.6ml包被液中混匀，以每孔100μl量加入到40孔聚苯乙烯硬反应板中，第一孔留空作对照，于4℃冰箱湿盒中过夜。

洗板：将板中溶液甩去，用洗涤液I洗3次，甩尽液体，翻转反应板，在吸水纸上拍打，去尽孔中残留液体。

封闭：每孔加100μL封闭液，于37℃水浴中lh。

洗板：用洗涤液II洗3次，操作同上。

加样本：每孔分别加多种试验菌株产毒培养液100μl，37℃水浴中lh。

洗板：用洗涤液II洗3次，操作同上。

加酶标抗体：先在酶标LT抗体管中加0.5ml稀释液，混匀后全部吸出于3.6ml稀释液中混匀，每孔加100μl，37℃水浴中1h。

洗板：用洗涤液II洗3次，操作同上。

酶底物反应：每孔(包括第一孔)各加基质液100μl，室温下避光作用5min~10min，加入终液50μl。

结果判定：以酶标仪在波长492nm下测定吸光度0D值，待测标本OD值大于阴性对照3倍以上为阳性，目测颜色为桶黄色或明显高于阴性对照为阳性。

5.5.1.3 ST检测方法(抗原竞争法)

包被：先在包被用ST抗原管中加0.5ml包被液，混匀后全部吸出于1.6ml包被液中混匀，以每孔50μl加入于40孔聚苯乙烯软反应板中。加液后轻轻敲板，使液体布满孔底。第一孔留空作对照，置4℃冰箱湿盒中过夜。

洗板：用洗涤液I洗3次，操作同上。

封闭：每孔加100μl封闭液，37℃水浴比。

洗板：用洗涤液II洗3次，操作同上。加样本及ST单克隆抗体：每孔分别加各试验菌株产毒培养液50μl、稀释的ST单克隆抗体50μl(先在ST单克隆抗体管中加0.5mL稀释液，混匀后全部吸出于1.6ml稀释液中，混合)，37℃水浴1h。

洗板：用洗涤液II洗3次，操作同上。•

加酶标记兔抗鼠1g复合物：先在酶标记免抗鼠1g复合物管中加0.5mL稀释液，混匀后全部吸出于3.6mL稀释液中混匀，每孔加100μl，37℃水浴1h。

洗板：用洗涤液II洗3次，操作同上。

酶底板反应：每孔(包括第一孔)各加基质液100μl，室温下避光5min~10min，再加入终止液50μl。

结果判定：以酶标仪在波长492nm下测定吸光度OD值：

目测无色或明显淡于阴性对照为阳性。

5.5.2 双向琼脂扩散试验检测LT

将被检菌株按五点环形接种于E1ek氏培养基上。以同样操作，共做两份，于36℃培养48h。在每株菌苔上放多粘菌素B纸片，于36℃经5h～6h，使肠毒素渗入琼脂中，在距五点环形菌苔各5mm处的中央，挖一个直径4mm的圆孔，并用一滴琼脂垫底。在平板的中央孔内滴加LT抗毒素30μl，用已知产LT和不产毒菌作对照，经15h～20h观察结果。在菌斑和抗毒素孔之间出现白色沉淀带者为阳性，无沉淀带者为阴性。

5.5.3 乳鼠灌胃试验检测ST

将被检菌株接种于Honda氏产毒肉汤内，于36℃培养24h，以3000r／min离心30min，取上清液经薄膜滤器过滤，加热60℃30min，每mL滤液内加入2％伊文思蓝溶液0.02mL。将此滤液用塑料小管注入1日龄一4日龄的乳鼠胃内0.1mL，同时接种3只～4只，禁食3h～4h后用三氯甲烷麻醉，取出全部肠管，称量肠管(包括积液)重量及剩余体重。肠管重量与剩余体重之比大于0.09为阳性，0.07—0.09为可疑。结果

6.1 通过实验，有否检出致病性大肠艾希氏菌？

6.2 综合以上生化试验、血清学试验、肠毒素试验作出报告思考题 致病性大肠艾希氏菌有哪几种?主要引起哪几种症状的疾病? 2 怎样预防致病性大肠艾希氏菌引起的食物中毒? 3 致病性大肠艾希氏菌的检验程序。