GB_T 23217-2008_水产品中河豚毒素的测定 液相色谱-荧光检测法

第一篇：GB_T 23217-2008_水产品中河豚毒素的测定 液相色谱-荧光检测法

GB/T 23217-2008 水产品中河豚毒素的测定 液相色谱-荧光检测

法

基本信息

【英文名称】Determination of tetrodotoxin in aquatic products―HPLC-fluorescence detection method 【标准状态】被代替 【全文语种】中文简体 【发布日期】2008/12/31 【实施日期】2009/5/1 【修订日期】2008/12/31 【中国标准分类号】X04 【国际标准分类号】67.050

关联标准

【代替标准】暂无

【被代替标准】GB 5009.206-2016

【引用标准】GB/T 6379.1,GB/T 6379.2,GB/T 6682

适用范围&文摘

本标准规定了水产品中河豚毒素测定的液相色谱测定方法与液相色谱串联质谱确证方法。本标准适用于河豚鱼、织纹螺、虾、牡蛎、花蛤、鱿鱼中河豚毒素的测定与确证。本标准方法的检出限为0.05 mg/kg。

第二篇：高效液相色谱系统中气泡对检测的影响及其解决方法

高效液相色谱系统中气泡对检测的影响及其解决方法

在我们进行液相色谱分析时，有时会遇到这样一个问题：系统的流路中存在气泡。

由于气泡的存在，会造成色谱图上出现尖锐的噪声峰，严重时会造成分析灵敏度下降；气泡变大进入流路或色谱柱时会使流动相的流速变慢或不稳定，使基线起伏。

造成上述现象的主要原因有三条：一是流动相溶液中往往因溶解有氧气或混入了空气而形成气泡；二是系统开始工作时未能将流路中的空气驱赶干净；三是在注入样品时不注意混入了空气。

为了避免这类问题的出现，液相色谱实际分析过程中必须重视对流动相进行脱气处理。常用的脱气方法有以下几种：

1.吹氦脱气法 使用在液体中比空气溶解度低的氦气，在0.1Mpa压力下，以约60ml/min流速通入流动相10-15min以驱除溶解的气体。此法使用于所有的溶剂，脱气效果较好，但在国内因氦气价格较贵，本法使用较少；

2.加热回流法 此法的脱气效果较好；

3.抽真空脱气法 此时可使用微型真空泵，降压至0.05-0.07MPa即可除区溶解的气体。显然使用水泵连接抽滤瓶和G4微孔玻璃漏斗可一起完成过滤机械杂质和脱气的双重任务。由于抽真空会引起混合溶剂组成的变化，故此法适用于单一溶剂体系脱气。对多元溶剂体系应预先脱气后再进行混合，以保证混合后的比例不变。

4.超声波脱气法 它是目前实验室使用最广泛的脱气方法，将配制好的流动相连同容器一起放入超声波水漕中脱气10-20min即可。该方法操作简便，基本能满足日常分析的要求。

5.在线真空脱气法 把真空脱气装置串联到储液系统中，并结合膜过滤器，实现了流动相在进入输液泵前的连续真空脱气。此法的脱气效果明显优于上述几种方法，并适用于多元溶剂体系。

其二，在液相色谱系统开始工作前，可以用注射器连接恒流泵的排空阀，抽入流动相，将流路中的空气驱赶干净。

其三，在注入样品前注意排出样品注射器中的空气。

第三篇：水产品中氯霉素的快速检测 胶体金免疫层析法（KJ201905）

附件5

水产品中氯霉素的快速检测

胶体金免疫层析法

（KJ201905）

范围

本方法规定了水产品中氯霉素的胶体金免疫层析快速检测方法。

本方法适用于水产品中氯霉素的快速测定。

原理

本方法的测定以竞争抑制免疫层析原理为基础。样品中的氯霉素经有机试剂提取，固相萃取小柱净化，浓缩复溶后，氯霉素与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，抑制了抗体和微孔膜检测线（T线）上抗原的结合，从而导致检测线颜色深浅的变化。通过检测线与控制线颜色深浅比较，对样品中氯霉素含量进行定性判定。

试剂和材料

除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为

GB/T

6682

规定的二级水。

3.1

试剂

3.1.1

正己烷。

3.1.2

丙酮。

3.1.3

乙酸乙酯。

3.1.4乙腈

3.1.5磷酸二氢钠，NaH2PO4·2H2O。

3.1.6磷酸氢二钠，Na2HPO4·12H2O。

3.1.7

氯化钠

3.1.8

复溶液：称取0.12

g磷酸二氢钠

(3.1.5)置于100

mL容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，制成溶液A；称取磷酸氢二钠7.16

g

(3.1.6)置于100

mL容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，制成溶液B。取溶液A

2.8

mL、溶液B

7.2

mL、氯化钠(3.1.7)0.85

g，用水溶解并稀释至100

mL，得磷酸盐缓冲液，即为复溶液。

3.1.9丙酮-正己烷（1+9）：丙酮（3.1.2）、正己烷（3.1.1）按体积比1：9混匀。

3.1.10丙酮-正己烷（6+4）：丙酮（3.1.2）、正己烷（3.1.1）按体积比6：4混匀。

3.2

标准物质

氯霉素标准物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分之式、相对分子质量见表1，纯度≥98.6%。

表1

氯霉素参考物质中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量

中文名称

英文名称

CAS登录号

分子式

相对分子量

氯霉素

Chloramphenicol

56-75-7

C11H12Cl2N2O5

323.13

注：或等同可溯源物质。

3.3标准溶液配制

3.3.1

氯霉素标准储备液（1

mg/mL）：精密称取氯霉素标准物质（3.2）10

mg，置于10

mL容量瓶中，用乙腈（3.1.4）溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为1

mg/mL的氯霉素标准储备液。4℃避光保存，有效期6个月。

3.3.2

氯霉素标准中间液A（10

μg/mL）：精密量取氯霉素标准储备液（1

mg/mL）（3.3.1）0.1

mL，置于10

mL

容量瓶中，用乙腈（3.1.4）稀释至刻度，摇匀，制成10

μg/mL的氯霉素标准中间液A。4℃避光保存，有效期3个月。

3.3.3

氯霉素标准工作液（0.01

μg/mL）：精密移取氯霉素标准中间液A（10

μg/mL）（3.3.2）0.01

mL分别置于10

mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，制成浓度为0.01

μg/mL的氯霉素标准工作液。临用新配。

3.4材料

3.4.1固相萃取小柱：Cleanert

Silica，200

mg/6mL。LOT：0170198。

3.4.2免疫胶体金试剂盒（在2～30℃、干燥阴凉条件下保存，在产品有效期内使用）。

3.4.2.1

金标微孔。

3.4.2.2

试纸条或检测卡。

仪器和设备

4.1

移液器：200

μL、1

mL和5

mL。

4.2

涡旋混合器。

4.3

离心机：转速≥4000

r/min。

4.4

电子天平：感量分别为

0.01

mg和

0.01

g。

4.5

样品浓缩仪：如有需要。

4.6

环境条件：

温度：15～25℃，相对湿度：≤60%。

5分析步骤

5.1试样制备

取具有代表性样品约500

g，充分粉碎混匀，均分成两份，分别装入洁净容器作为试样和留样，密封，标记，于常温保存。

5.2试样提取和净化

准确称取试样6

g（精确至0.01

g）置于50

mL具塞离心管中，依次加入1

mL水和8

mL乙酸乙酯（3.1.3），涡旋提取5

min，以4000

r/min离心5

min。转移全部乙酸乙酯层于50

mL具塞离心管中，加入正己烷25

mL，氯化钠1

g涡旋混匀，4000

r/min

离心1

min，上清液待净化。5

mL丙酮-正己烷（1+9）（3.1.9）淋洗LC-Si硅胶小柱，弃去淋洗液，将待净化溶液转移到固相萃取小柱上，弃去流出液，用5

mL丙酮-正己烷（6+4）（3.1.10）洗脱，收集洗脱液，洗脱液于40℃氮气吹干，精密加入600

µL复溶液（3.1.8），涡旋混合1

min，作为待测液。

5.3

测定步骤

5.3.1

检测卡与金标微孔测定步骤

吸取150

µL样品待测液于反应微孔（3.4.2.1）中，抽吸

5～10次使混合均匀，室温温育3

min；温育结束后，将金标微孔中溶液滴加到检测卡（3.4.2.2）上的加样孔中，室温温育5～8

min，对结果进行判定。

5.3.2

试纸条与金标微孔测定步骤

吸取150

µL样品待测液于反应微孔（3.4.2.1）中，抽吸5～10次使混合均匀，室温温育3

min；温育结束后，将检测试纸条（3.4.2.2）吸水海绵端垂直向下插入反应微孔中，室温温育3

min，从微孔中取出试纸条，去掉试纸条下端的吸水海绵，并于5

min内进行结果判定。

5.3.3

检测卡测定步骤

吸取150

µL样品待测液滴加到检测卡（3.4.2.2）上的加样孔中，室温温育5～8

min，对结果进行判定。

5.4质控试验

每批样品应同时进行空白试验和加标质控试验。

5.4.1

空白试验

称取空白试样，按照5.2和5.3步骤与样品同法操作。

5.4.2

加标质控试验

准确称取空白样品6

g或适量（精确至0.01

g）置于15

mL具塞离心管中，加入180

μL氯霉素标准工作液（0.01

μg/mL）（3.3.3），使氯霉素浓度为0.3

μg/kg，一式2份，按照

5.2和5.3步骤与样品同法操作。

结果判定要求

通过对比控制线和检测线的颜色深浅进行结果判定。由于长时间放置会引起检测线颜色的变化，需在规定时间内进行结果判定。目视结果判读依据如图1所示。

6.1

无效

控制线（C线）不显色，表明不正确操作或试纸条/检测卡无效。

6.2

阳性结果

检测线（T线）不显色或检测线（T线）颜色比控制线（C线）颜色浅，表明样品中氯霉素含量高于方法检测限，判定为阳性。

6.3

阴性结果

检测线（T线）颜色比控制线（C线）颜色深或者检测线（T线）颜色与控制线（C线）颜色相当，表明样品中氯霉素含量低于方法检测限，判定为阴性。

6.4质量控制要求

空白试验测定结果应为阴性，加标质控试验测定结果应为阳性。

结论

如被测样品中氯霉素检测结果为阳性时，应采用确证方法进行确证检测。

性能指标

8.1

检测限

氯霉素为0.1

μg/kg。

8.2

灵敏度

灵敏度应≥98%。

8.3

特异性

特异性应≥90%。

8.4

假阴性率

假阴性率应≤1%。

8.5

假阳性率

假阳性率应≤10%。

注：性能指标计算方法见附录A

9其他

本方法所述试剂、试剂盒信息及操作步骤是为给方法使用者提供方便，在使用本方法时不做限定。方法使用者在使用替代试剂、试剂盒或操作步骤前，须对其进行考察，应满足本方法规定的各项性能指标。

本方法参比标准为GB/T

22338-2008

动物源性食品中氯霉素类药物残留量测定

(包括所有修改单)。

附录

A

定性方法性能计算表

样品情况a

检验结果b

总数

阳性

阴性

阳性

N11

N12

N1.=N11+N12

阴性

N21

N22

N2.=N21+N22

总数

N.1=N11+N21

N.2=N12+N22

N=N1.+N2.或N.1+N.2

显著性差异(χ2)

χ2=(|N12-N21|-1)2/(N12+N21),自由度（df）=1

灵敏度（p+）

p+=N11/N1.特异性（p-）

p-=N22/N2.假阴性率(pf-)

pf-=N12/N1.=1-灵敏度

假阳性率(pf+)

pf+=N21/N2.=1-特异性

相对准确度

（N11+N22）/(N1.+N2.)

注：N:任何特定单元的结果数，第一个下标指行，第二个下标指列。例如：N11表示第一行，第一列，N1.表示所有的第一行，N.2表示所有的第二列；N12表示第一行，第二列。

a由基准方法检验得到的结果；

b由本方法检验得到的结果。灵敏度的计算使用确认后的结果。

本方法负责起草单位：山西省食品药品检验所。

验证单位：陕西省食品药品检验所、广东省药品检验所、四川省食品药品检验检测院。

主要起草人：李倩、阎安婷、陈煜、杨国伟。