H1N1亚型猪流感诊断方法的研究新进展?

第一篇：H1N1亚型猪流感诊断方法的研究新进展?

龙源期刊网 http://.责任编辑 陈玉敏 责任校对 李岩

第二篇：猪附红细胞体形态学诊断方法研究

东北农业大学学士学位论文 学号：004A30106001

猪附红细胞体形态学诊断方法研究 Study of eperythrozoon suis morphology

diagnosis method

学生姓名：李楠 指导老师：张久丽 所在院系：网络教育学院 所学专业：动物医学 研究方向：猪病研究

东 北 农 业 大 学 中国·哈尔滨 2012年3月

猪附红细胞体形态学诊断方法研究

摘 要

附红细胞体病是由附红细胞体寄生于动物红细胞和血浆中而引起的一种人畜共患的热性传染病。患病动物广泛，隐性感染率高。临床以发热、贫血、黄疸为主要特征。2011年8月，某个体养猪场饲养的育肥猪群，临床主要表现为精神沉郁、高热、胸腹皮下有大小不等的出血点或紫斑等。我们从中选取15头病猪，对其进行了形态学学检查方法的比较研究。

在瑞氏、吉姆萨、吉-瑞氏染色几种常规染色的基础上，首次运用PAS染色和Goodpasture染色对猪附红细胞体病形态学诊断方法进行了比较观察研究。血涂片Goodpasture染色红细胞被染成橘黄色，周边清晰。附红细胞体被染成乳白色；PAS染色红细胞被染成淡橘红色，明显变形，附红细胞体呈乳白色。形态学诊断方法比较结果表明： PAS及Goodpasture方法检出率较高，瑞氏染色最低。

本次试验表明，除常规染色外，PAS和 Goodpasture 两种特殊染色法可用于附红细胞体病诊断。

关键词：猪

附红细胞体病

形态学诊断

I

猪附红细胞体形态学诊断方法研究

Abstract Swine Eperythrozoonsis was a contagion of the human and livestock by Eperythrozoonsuis infecting.The swine was parasitized by the Eperythrozoonsuis that it was a microorganism on red cells and in plasm and marrow.All kinds of animal mould be infected by the Eperythrozoonsuis.All kinds of animal would be infected by the Eperythrozoonsuis.severe economic loss was formed by the sick.Eperythrozoonsis were reported in our country.In the august 2011, the pig were breed on iangsu.Fever, jaundice, anaemia and icterus were manifested in these pigs.This experiment took 15 nature in feeted Epehrozoonosis young pigs for experiment alanimal.The Observation of the Morphology of Swine Eperythrozoonsis was maked by Wright’s, Giemsa, Giemsa-Wright’s, Goodpasture and PAS methods.Under optical microscope after Goodpasture we can see the blood cells are orange, The E.suis was staine creamy and stick to surfaces of blood cell show a radial pattern.After PAS we can see the blood cells are orange The E.suis was staine creamy.E.suis stick to surfaces of blood cell show coronavirus-like.The detectiong rate of PAS and Goodpasture was higher than Wright’s.The results of this study suggest that Goodpasture stain and PAS stain can also play a role in the test of eperythrozoonosis except conventional diagnostic methods of Giemsa,Wright's stain.Key words: Pig, eperythrozoon suis, morphology diagnosis

II

猪附红细胞体形态学诊断方法研究

目 录

摘要„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„I Abstract„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„II 1 前言„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„1 1.1 研究的目的和意义„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„1 1.2 国内外研究文献综述„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„1 1.3 本文研究的主要内容„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„1 2 材料与方法„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„2 2.1材料„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„2 2.2方法„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„2 3结果„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„4 3.1鲜血压片镜检„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„4 3.2瑞氏染色镜检„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„4 3.3姬姆萨染色镜检„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„4 3.4吉姆萨-瑞氏染色镜检„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„4 3.5 Goodpasture 染色镜检„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„4 3.6 过碘酸-雪夫氏(PAS)染色镜检„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„5 4 分析与讨论„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„5 4.1 临床症„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„5 4.2解剖学变„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„5 4.3各种染色的比较观察„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„5 参考文献„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„8 附录„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„9 致谢„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„11 III

猪附红细胞体形态学诊断方法研究 前言

1.1 研究的目的和意义

附红细胞体病呈全球性分布和全国性分布，无地域差异，发病动物种类广泛。在高热、多雨且吸血昆虫繁殖滋生的夏秋发生较多。

从 20 世纪中期代猪附红细胞体病被发现至今，猪附红细胞体病已成为一种危害日益严重的人兽共患传染病。我国是畜牧产品生产大国，大部分地区陆续报道了猪感染附红细胞体病的事例，给养猪业带来了很大的经济损失。为了我国养猪生产也得健康发展，实践中更要严格控制本病的发生和流行。尽管近几年国内对此病的研究取得了很大的进展，但还需更进一步的进行深入的研究与探讨。因此清楚透彻的对猪附红细胞体形态学诊断方法进行研究对对犬瘟热的正确诊断和防制有很重大的意义。

1.2 国内外研究文献综述

附红细胞体病（Eperythrozoonosis, EH）是一种人兽共患病，是由血液寄生物—附红细胞体（Eperythrozoon）寄生于红细胞表面引起的传染性、热性、溶血性疾病。该病以红细胞压积降低、血红蛋白浓度降低、白细胞增多、发热、贫血、黄疸为主要临床特征[1, 2]。此病也被称为 “红皮病”，“类边虫病”，能感染、牛、羊及马属动物，人类也可感染[1, 2]。

1929 年 Schiling 首次报道鼠附红细胞体病[3]。猪附红细胞体病最早于 1932年由 doyle 在印度发现[4]。1934 年 neitz 等在绵羊的红细胞周围发现多形态微生物[5]。1981 年晋希明在家兔体内发现兔附红细胞体[3]。1986 年，puntarie 等正式描述了人类附红细胞体病[6]。自 80 年代后，该病作为一种人畜共患的传染病，日益受到国内外各方面的关注，已有近30 个国家和地区报告发生该病。特别是自 1993 年以来，附红细胞体病在我国很多地方爆发流行，已成为危害我国养猪业发展的重要疫病之一。猪附红细胞体病多呈隐性经过，并且易与猪的常见病混合感染，难以准确诊断，使病情复杂难以有效控制而暴发，给养殖户带来很大的经济损失[4]。附红细胞体对苯胺色素易于着染[4]，革兰氏染色为阴性[7]，瑞氏染色为蓝红色。姬姆萨染色呈紫红色，吖啶橙染色观察附红细胞体为典型的橘黄色光，对碘不着色[7,8]。姬姆萨-瑞氏混合液染色，红细胞呈淡紫色，轮廓清晰，猪附红细胞体呈蓝紫色[9,10]。Macchiavllo 染色红细胞核、附红细胞体呈紫红色，红细胞呈蓝色[11]。Feulgen 反应显微镜下观察，红细胞呈绿色，附红细胞体、白细胞核均呈紫红色，但二者的大小悬殊，易于区别[11]。附红细胞体可对不同年龄和品种的易感动物造成感染，在临床上以幼龄及体弱动物发病较多见，隐性感染率高，猪EH的感染率可高达90%以上[12,13]。

1.3 本文研究的主要内容

猪附红细胞体形态学诊断方法研究

3.染色方法：推片自然干燥后，滴加瑞士染色液，染色3min，然后加等量蒸馏水再染5min，蒸馏水冲洗。

4.染色步骤：用蜡笔于血膜两端各划一道横线，以防染色液外溢，将血片放在水平支架上；滴加染色液，以盖满血膜为度，染色 1～2min；再加等量的缓冲液，小心地和染色液均匀，再染 5～8min 后，再用蒸馏水或自来水冲洗。冲洗时应平置载玻片，是水流缓慢流过载玻片，以免染色液色素沉积，干燥后镜检。

2.2.3 吉姆萨染色

吉姆萨(Giemsa)染液的配制

1.取 1.5g 吉姆萨粉末放入 50mL 甘油，置于 60℃温箱，约 3h 后溶解。

2.取出后倒入 50mL 中性甲醇，即为母液。于棕色瓶可长久保存。需要注意的是，有的甲醇内含醋酸，会使染液中的伊红沉淀出来，不利染色。

3.将母液与 0.1 mol/L PBS(PH6.9～7.2)按 1:9 混合即成工作液。吉姆萨染液对 pH 极敏感，偏酸时染色过红，偏碱时则过蓝。所以，工作液宜现用现配。

4.染色步骤：取固定后的血液涂片，滴加姬姆氏染色应用液至盖满血膜（约 2mL）或将血片放于盛有同样染液的染色缸中。根据室温的高低染色20～40min，流水冲洗，干燥后镜检。

2.2.4 吉姆萨-瑞氏染色

1.染色试剂：瑞氏染粉 0.8～1g，吉姆萨染粉 0.5g，甘油 33mL 甲醇500mL。

2.配制方法：将瑞氏染粉放入研钵中，加入少量甘油研磨，再加入少量吉姆萨染粉磨，再加入少量甘油磨，倒出，将未溶部分，继续加入甘油磨„„直至全溶，加入甲醇，或中间加入甲醇亦可。

3.染色步骤与吉姆萨染色步骤相同。

2.2.5 Goodpasture 染色

试剂：50%硝酸银溶液：5g硝酸银（AR）溶解在10mL蒸馏水中，保存在铝箔包裹的玻璃容器内，可稳定保存1年。明胶显影：2g 明胶粉末溶解在99mL蒸馏水中，加1mL甲酸。

染色步骤：

l.在一培养皿底部放一张蒸馏水润湿的滤纸，上放两根竹签，置水浴内保温60℃。

2.将玻片标本正面向上平放其上，将50%硝酸银溶液和明胶显影液以2:1体积混匀，加至玻片上，覆以盖片，至玻片标呈现褐色为止，一般3～4min。

3.自来水流洗去盖片和染料，空气中晾干。

4.显微镜下镜检。

2.2.6 过碘酸-雪夫氏（PAS）染色

猪附红细胞体形态学诊断方法研究

形态不一，变形明显，部分红细胞呈椭圆形、钝点状肾形或三角形。附红细胞体被染成乳白色，清晰地附着于红细胞的表面，或呈放射状黏附于红细胞的周边，在血浆中也可看到大量呈乳白色的附红细胞体（图 3-5）。

3.6 过碘酸-雪夫氏(PAS)染色镜检

红细胞被过碘酸-雪夫氏液染成淡橘红色。其大小不一，少数呈碎状，有明显的变形，边缘不整，有突起，呈星状或锯齿状。附红细胞体被染成乳白色，附状于红细胞表面，尤其是红细胞的周边很明显。由于红细胞的周边有大量附红细胞体附着，使红细胞体呈现冠状病 分析与讨论

4.1临床症状

病猪被毛粗乱，走路时步态不稳，精神沉郁，全身皮肤黄染，可视粘膜苍白或黄染，两耳轻度肿胀，耳尖干燥，在病猪的耳朵末梢、四肢内侧、胸腹皮肤有大小不等的出血点或紫斑，如如鳞片状，指压不褪色；食欲减退甚至废绝，消瘦、贫血，四肢步态不稳，体温升高至41℃，呼吸、心率加快；部分病情严重的气喘、呼吸困难，有不同程度的呕吐、腹泻。发病2～3d后，病猪后肢站立不起，尿赤黄，大便干燥等（图4-1）。

4.2 解剖学变化

急性病死猪血液稀薄如水样，凝固不良，全身皮肤黄染病猪耳部、四肢、胸腹部、臀部皮肤上有许多出血点。四肢、耳部的皮肤出现局灶性坏死。眼结膜白，下颌淋巴结、胃肠等全身淋巴结肿大、水肿，切面多汁呈黄色；出血，尤其苍是体表淋巴结肿大明显；皮下脂肪出血，心外膜脂肪黄染，胸腔和腹腔积液；心肌苍白松软，肺肿胀，充血水肿间质增宽，胸腔和腹腔积液；肝脏肿大变性，质地脆弱，部分区域呈淡黄或灰白色。胆囊肿大胆汁浓稠；脾脏肿大、质软脆，有暗红色出血点出血；胃大弯水肿，胃底部出血，胃粘膜脱落，部分病例的结肠系膜水肿。肠粘膜出血，水肿，小肠壁变薄，肠粘膜脱落，部分肠道积液；脑膜充血、并有针尖状出血点，肠系膜淋巴结肿大呈索状；肾周围脂肪及心冠脂肪呈淡黄色肾脏苍白、水肿，包膜下有出血点； 膀胱积尿，尿液呈深黄色胃粘膜出血，水肿，膀胱粘膜有点状出血；肌肉苍白、水肿（图 4-2）。

4.3 各种染色的比较观察

猪附红细胞体感染根据临床症状病理变化并结合实验室血液压片、涂片染色等作出诊断。

血液压片镜检目前是以观察到红细胞呈不规则形态即判断为感染附红细胞体。诊断时要注意，由于动物体内血液生化、营养代谢，以及使用不同的生理盐水作稀释液等因素也会引

猪附红细胞体形态学诊断方法研究

粒状、小块状或弥漫均匀红色。PAS反应的阳性程度通常以强阳性、阳性、弱阳性和阴性来表示。红细胞系列糖原含量程度标准（-）胞质无颗粒（+）有少数红色颗粒（++）有较粗红色颗粒或弥漫红色（+++）有粗大红色颗粒或深红色（++++）有粗大红色块状或紫红色。通过本次试验可以看到，Goodpasture染色和PAS染色能很好的区别附红细胞体及染色素杂质，且操作简便易行，能很有效的对猪附红细胞体病做出诊断，适宜在生产实践中加以推广。

本研究丰富了猪附红细胞体病形态学诊断方法。观察了猪附红细胞体在不同染色方法下呈现不同的颜色特性和检出率，PAS 及 Goodpasture 方法检出率较高，瑞氏染色最低。实践中可根据不同条件、不同需要来选择其中的一种或几种方法进行染色。

猪附红细胞体形态学诊断方法研究

致 谢

时光荏苒，我即将结束我的大学生活，迈向新的工作岗位。在我学习生活期间，老师们对我进行了无私的帮助和严格的教导，特别要向我的指导教师吉洁老师致以敬意。他以严谨的学风，广博的知识，热忱的态度赢得了广大学生的尊敬。在我论文创作完成期间，他给予我莫大的帮助与鼓励。

我还要向我学院其他教师致意，向曾经传授我知识的老师等表达我真诚的谢意，正是在您们的言传身教下，我才得以成长、进步。

我还要向在我生活上关心我的父母表示感谢，正是他们给予我物质与精神的支持，帮助我成长与进步。

第三篇：认识新型猪流感及防护方法

認識新型豬流感及防護方法

《宣導》新聞小辭典╱認識新型豬流感及防護方法

截止目前為止，墨西哥及美國西南地區爆發豬流感疫情爆發人感染豬流感疾情，已經攀升到103人死亡，請各位親友注意，避免至疾區旅遊或至此出差、旅遊返台者，注意自身健康及防護~

新聞小辭典╱新型豬流感(一)何謂豬流感？

A型流感病毒H1N1，墨西哥大流行為變種病毒，同時帶有豬流感、禽流感和人流感的基因，秋冬是它的好發季節，但全年都會傳染。(二)豬流感有何症狀？

感染到豬流感，症狀跟感冒非常類似，會發燒到38.5度以上，咳嗽、喉嚨痛，肌肉、關節和骨頭痠痛、疲勞、流鼻水、胸腹疼痛、噁心、腹瀉的情況，最後會出現嚴重的肺炎。(三)豬流感的致死率？

在墨西哥，致命率有6.7%，死亡病患大多是25到40歲的壯年人。(四)如何預防豬流感？

◎勤洗手

◎避免到人多的地方

◎不要跟他人一起吃一盤食物或一杯飲料(五)傳染方式

飛沫傳染如打噴嚏、咳嗽或身體接觸傳染，散播病毒。

已經排除吃豬肉會傳染的可能，所以請大家放心囉。(六)疫區

墨西哥爆發的新型流感疫情之外，其他如美國，紐西蘭、法國、西班牙、加拿大及以色列、澳洲、蘇格蘭、哥倫比亞，都有疑似感染的病患出現。

(七)豬流感V.S一般流感 比一比

---本郵件來自HiNet WebMail---

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Subject: 認識新型豬流感及防護方法

《宣導》新聞小辭典╱認識新型豬流感及防護方法

截止目前為止，墨西哥及美國西南地區爆發豬流感疫情爆發人感染豬流感疾情，已經攀升到103人死亡，請各位親友注意，避免至疾區旅遊或至此出差、旅遊返台者，注意自身健康及防護~

新聞小辭典╱新型豬流感(一)何謂豬流感？

A型流感病毒H1N1，墨西哥大流行為變種病毒，同時帶有豬流感、禽流感和人流感的基因，秋冬是它的好發季節，但全年都會傳染。(二)豬流感有何症狀？

感染到豬流感，症狀跟感冒非常類似，會發燒到38.5度以上，咳嗽、喉嚨痛，肌肉、關節和骨頭痠痛、疲勞、流鼻水、胸腹疼痛、噁心、腹瀉的情況，最後會出現嚴重的肺炎。(三)豬流感的致死率？

在墨西哥，致命率有6.7%，死亡病患大多是25到40歲的壯年人。(四)如何預防豬流感？ ◎勤洗手

◎避免到人多的地方

◎不要跟他人一起吃一盤食物或一杯飲料(五)傳染方式

飛沫傳染如打噴嚏、咳嗽或身體接觸傳染，散播病毒。

已經排除吃豬肉會傳染的可能，所以請大家放心囉。(六)疫區

墨西哥爆發的新型流感疫情之外，其他如美國，紐西蘭、法國、西班牙、加拿大及以色列、澳洲、蘇格蘭、哥倫比亞，都有疑似感染的病患出現。

(七)豬流感V.S一般流感 比一比