阿魏酸对过氧化氢诱导A375细胞凋亡的保护作用研究

第一篇：阿魏酸对过氧化氢诱导A375细胞凋亡的保护作用研究

阿魏酸对过氧化氢诱导A375细胞凋亡的保护作用研究

[摘要] 目的 ?^察阿魏酸对氧化应激诱导的黑素细胞凋亡的影响。方法 采用随机数字表法将A375细胞分为五组：空白对照组，模型组，阿魏酸高、中、低浓度组。空白对照组常规培养，模型组和阿魏酸各浓度组培养基中加入过氧化氢，使其终浓度为0.1 mmol/L，处理4 h。采用荧光染料DAPI染色细胞，荧光显微镜观察各组细胞凋亡情况，Caspase活性试剂盒测定各组细胞Caspase活性。结果 与空白对照组相比，模型组Caspase-3、8、9活性水平显著升高，差异有统计学意义（P < 0.01）。模型组细胞核、细胞质内可见致密浓染的颗粒，松散淡染的新月体或环状荧光，提示过氧化氢可诱导A375细胞凋亡。与模型组比较，阿魏酸高浓度组可显著下调Caspase-3和Caspase-8的表达，差异有统计学意义（P < 0.05或P < 0.01），但对Caspase-9作用不明显。阿魏酸高剂量组细胞核呈均匀亮蓝色，无致密凝集现象，阿魏酸低、中浓度组大多数细胞细胞核出现染色质凝集和边缘化。结论 阿魏酸通过下调过氧化氢诱导的Caspase活性而起到保护黑素细胞凋亡作用。

[关键词] 阿魏酸；Caspase；凋亡；A375细胞；氧化应激

[中图分类号] R758.41 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2017）11（b）-0011-03

[Abstract] Objective To observe the effect of ferulic acid on the apoptosis of melanocyte induced by oxidative stress.Methods According to random number table，A375 cells were divided into five groups： control group，model group，and high，middle，low concentrations of ferulic acid groups.Cells in the control group were cultured normally，while peroxide hydrogen was added into the cultured A375 cells of model group and high，middle，low concentrations of ferulic acid groups at the final concentration of 0.1 mmol/L，duration for 4 hours.The cells were stained with fluorescent dye DAPI.The apoptosis of each group was observed by fluorescence microscope.Caspase active kit was used to measure the activity of Caspase in each group.Results Compared with the control group，the activities of Caspase-3，8 and 9 in the model group were significantly increased，with statistically significant differences（P < 0.01）.In the model group，dense and concentrated particles and the loose light colored crescent or annular fluorescence could be seen in the nucleus and cytoplasm，which implied that hydrogen peroxide can induce apoptosis of A375 cells.Compared with the model group，the expression of Caspase-3 and Caspase-8 were significantly reduced in the high does concentration of ferulic acid group，with statistically significant differences（P < 0.05 or P < 0.01），but the effect on Caspase-9 was not obvious.The nucleus of cells in the high does concentration of ferulic acid group were even bright blue，without the phenomenon of dense condensation.There were chromatin agglutination and marginalization of most cell nucleus in the low and medium does concentrations of ferulic acid groups.Conclusion Ferulic acid can protect the apoptosis of melanocyte through lower the activity of Caspase induced by hydrogen peroxide.[Key words] Ferulic acid； Caspase； Apoptosis； A375 cells； Oxidative stress

皮肤黑素细胞凋亡是色素缺失性皮肤病发病的主要因素[1]，而凋亡的诱发因素中，氧化应激损伤占重要地位[2]。在生理状态下，L-酪氨酸经过一系列氧化反应最终形成黑色素，在这一过程中会同时引起表皮中过氧化氢的蓄积，而表皮黑素细胞在合成黑素小体的过程中也可导致胞浆内活性氧（ROS）蓄积[3]，当自由基的产生超出机体清除能力时，会产生氧化应激损伤。黑素细胞受氧化攻击后易发生凋亡[4]，黑素细胞凋亡又是色素缺失性皮肤病发病的重要原因，传统中药当归对本病有较好的治疗作用[5-6]，但其有效成分研究较少。阿魏酸（4-羟基-3-甲氧基肉桂酸）是桂皮酸的衍生物之一，也是当归的主要活性成分。研究显示，阿魏酸对过氧化氢导致的细胞损伤有很好的保护作用[7-8]。本研究在前期研究基础上，观察阿魏酸对黑素细胞氧化应激损伤的影响，为色素脱失性皮肤病治疗和药物研究提供理论依据。材料与方法

1.1 材料

阿魏酸标准品（0773-9910）购自中国药品生物制品检定所，人黑素瘤细胞（A375）购于武汉细胞典藏中心；胎牛血清（NXB0568）、胰蛋白酶（SH30042.01B）、DMEM培养基（AC10220191（）HyClone公司）；二甲基亚砜（D5879（）Sigma公司）；磷酸盐缓冲液（PBS）（ST476）、细胞培养用双抗（C0222）、噻唑蓝（MTT）（ST316）、Caspase3（C1115）、Caspase8（C1151）、Caspase9（C1157）活性检测试剂盒、DAPI染色液（C1005）（碧云天生物技术研究所）；MK3型酶标仪（热电上海仪器有限公司），过氧化氢等其他试剂均为国产分析醇。荧光显微镜（U-RFL-T，奥林巴斯）。

1.2 细胞培养与受试药

A375细胞常规培养，培养液由DMEM培养基、FBS、双抗按89∶10∶1比例配制。在处于对数生长期时，经胰蛋白酶消化，1000 r/min离心，弃上清用新鲜培养基重悬细胞，分瓶培养。待细胞生长至融合度达约70%时，随机数字表法将细胞分为空白对照组，模型组，阿魏酸低、中、高浓度组。空白对照组常规培养、模型组和阿魏酸各浓度组均预先用含0.1 mmol/L过氧化氢的培养基预处理相同时间。在前期工作中本课题组已摸索到阿魏酸在100 μmol/L浓度时增殖作用最强[9]，本研究以100、1、0.1 μmol/L 3个浓度进行后续实验，并命名为高浓度、中浓度和低浓度组。

1.3 凋亡形态学

调整细胞浓度约为2.0×104个/mL接种在24孔板中，每孔1 mL，每组设3个复孔。药物作用结束后弃培养基，用PBS清洗2次，按说明书操作，荧光显微镜测定。

1.4 Caspase-3、8、9活性测定

调整细胞数为1.5×104个/mL接种在96孔板中，每孔200 μL，每组设6个复孔。空白对照组加培养液常规培养，各实验组加入含不同浓度药物的培养基，每孔200 μL，?^续培养24 h后，按说明书要求操作，酶标仪405 nm波长测定各孔OD值。Caspase酶活性用OD405值表示。

1.5 统计学方法

采用SPSS 19.0统计学软件进行数据分析，计量资料数据用均数±标准差（x±s）表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验，以P < 0.05为差异有统计学意义。结果

2.1 阿魏酸对A375细胞形态学的影响

正常细胞的细胞核为暗蓝色，颜色较深，在用含过氧化氢培养基作用1～2 h后，细胞形态变化不明显，过氧化氢作用4 h出现较明显的凋亡形态改变，细胞核呈明亮鲜艳的蓝色荧光，作用8 h细胞出现部分死亡，见图1。空白对照组细胞核的荧光为弥散均匀的圆形或椭圆形；模型组细胞核或细胞质内可见致密浓染的颗粒、新月体或环状荧光，呈松散和淡染状，提示过氧化氢可诱导A375细胞凋亡；阿魏酸高剂量组细胞核呈均匀亮蓝色，无致密凝集现象；阿魏酸低、中剂量组大多数细胞细胞核出现染色质凝集和边缘化。见图2。

2.2 各组Caspase-3、8、9活性比较

与空白对照组相比，模型组Caspase-3、8、9活性显著升高（P 0.05）；而阿魏酸中、低浓度组的抑制作用不明显。见表1。讨论

白癜风是一种常见的色素脱失性皮肤病，发病率高，虽无明显的自觉症状，由于皮损部位黑素保护功能缺失，在日光照射下可出现局部皮肤潮红、瘙痒，严重者出现皮炎。白癜风因皮肤上的皮损色差影响患者的容貌，造成患者精神上的巨大压力，影响其工作、学习和生活。氧化应激致色素细胞功能异常并导致皮肤黑素的代谢障碍，产生白癜风等色素缺失性皮肤疾病[10-11]，严重者可累及毛发，造成灰发、白发等[12-13]。有研究证实，白癜风患者表皮黑素细胞存在氧化应激状态，并存在水平不断增高的现象[14-17]。氧化应激可通过线粒体、内质网和死亡受体等细胞内外途径引起黑素细胞的凋亡，促进了白癜风的发生、发展[18]。本研究从黑素细胞氧化应激损伤角度入手，以含0.1 mmol/L过氧化氢的培养基作用于A375细胞，造模方法参考了田军等[19]的研究结果，以细胞形态学和Caspase为观察对象，探讨阿魏酸对氧化应激诱导的黑素细胞凋亡的影响。

细胞凋亡过程中伴随着明显的形态学改变，通过使用荧光染料染色可以通过形态学改变观察细胞在凋亡中的进程。DAPI是一种结合于DNA双链的荧光染料，对凋亡过程中的DNA变化可以作出准确反映。观察含0.1 mmol/L过氧化氢的培养基作用细胞1、2、4、8 h后DAPI染色，结果可见，作用1、2 h对细胞损伤作用不明显，作用4 h开始出现较明显的变化，作用8 h后细胞死亡较多，不利于后续实验。本研究以0.1 mmol/L过氧化氢作用4 h为处理条件。在用药后，细胞凋亡的中心环节是由Caspase半胱氨酸蛋白酶家族引发的级联反应，其激活过程主要包括胞外死亡受体介导和线粒体依赖途径，依次激活下游的Caspase，通过切割特异性底物，导致细胞凋亡过程的不可逆。Caspase-

8、9都是细胞凋亡过程中的关键因子，参与该过程的程序化调控，这些因子受外源死亡受体途径和内源线粒体途径的激活，Caspase-

8、9是两个途径的共同部分。在应激状态下，酶原形式的Caspase-

8、9活化并激活Caspase-3触发细胞凋亡[20]。本实验检测了各组细胞中Caspase-3、8、9的活性，结果显示：模型组Caspase-3、8、9活性水平显著高于空白对照组，提示过氧化氢所致的氧化应激可激活A375细胞凋亡基因，阿魏酸高剂量组可显著下调Caspase-3和Caspase-8的表达，从而抑制过氧化氢诱导的A375细胞凋亡，这可能是阿魏酸抗细胞凋亡作用机制的环节之一，中、低剂量组作用不明显。

综上所述，阿魏酸通过下调过氧化氢诱导的Caspase活性而起到调节细胞凋亡作用。

[参考文献]

[1] Li QL，Wu YH，Niu M，et al.Protective effects of tacalcitol against oxidative damage in human epidermal melan？鄄ocytes [J].Int J Dermatol，2017，56（2）：232-238.[2] Lan WJ，Wang HY，Wei L，et al.Evidence that geniposide abrogates norepinephrine-induced hypopigmentation by the activation of GLP-1R-dependent c-kit receptor signaling in melanocyte [J].J Ethnopharmacol，2008，118（1）：154-158.[3] Nordlund JJ.Vitiligo：a review of some facts lesser known about depigmentation [J].Indian J Dermatol，2011，56（2）：180-189.[4] Kaspar JW，Niture SK，Jaiswal AK.Nrf2：INrf2（Keap1）signaling in oxidative stress [J].Free RadicBiol Med，2009，47（9）：1304-1309.[5] 丁小媛，乔树芳.中药的抗氧化作用治疗白癜风研究进展[J].中国中西医结合皮肤性病学杂志，2014，13（1）：66-68.[6] 张春艳，许爱娥.治疗白癜风的中药外用制剂总结分析[J]中华中医药学刊，2012，30（9）：2074-2077.[7] ?w润英，郝伟，孟祥军，等.阿魏酸川芎嗪对缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响[J].中国病理生理杂志，2013，29（12）：2139-2143.[8] 石卫州，杨秀芬，程允相，等.活血化瘀类中药及其有效成分对抗氧化酶的影响[J].时珍国医国药，2013，24（2）：284-288.[9] 李伟，王加志，曲岩，等.阿魏酸调节C-KIT/MITF蛋白表达影响黑素生成的实验研究[J].中国医药导报，2017，14（6）：28-31.[10] 赵晓菲，刘国艳.白癜风氧化应激发病机制的研究进展[J].中国麻风皮肤病杂志，2016，32（3）：189-191.[11] 范英姬，刘志军.白癜风的抗氧化治疗[J].中国麻风皮肤病杂志，2015，31（3）：160-163.[12] 石新荣.白癜风的病因病理及中医治疗研究[J].中外医疗，2011（17）：133

[13] 方红.白发症与系统疾病[J].中国医学文摘：皮肤科学，2016，33（4）：491-495.[14] 秦思，温炬，郑荣昌，等.氧化应激反应与白癜风的研究进展[J].现代医院，2014，14（2）：13-15.[15] 李伟，李世远，陆健群，等.白癜风患者皮肤组织液氧化-抗氧化物水平比较分析[J].中国皮肤性病学杂志，2012，26（4）：303-305.[16] 曾洲平，林宝珠，葛天华，等.白癜风患者血清和皮肤提取液中氧化与抗氧化能力的比较研究[J].皮肤病与性病，2015，37（3）：140-142.[17] 陈建萍，钟春燕，康云平，等.白癜风患者血清中抗氧化酶及脂质过氧化物的检测分析[J].中国基层医药，2012，19（20）：3104-3105.[18] 廖永晖，汤雨，千年松，等.氧化应激与细胞凋亡[J].新乡医学院学报，2011，28（1）：110-113.[19] 田军，朱龙飞，坚哲，等.过氧化氢诱导人黑素细胞氧化应激损伤模型的建立[J].实用皮肤病学杂志，2014，7（6）：406-405.[20] Chen W，Jiang Z，Zhang X，et al.N-acetyl-S-（p-chloro？鄄phenylcarbamoyl）cysteine induces mitochondrial-mediated apoptosis and suppresses migration in melanoma cells [J].Oncol Rep，2015，34（5）：2547-2456.

第二篇：细胞凋亡时细胞骨架的结构改变的研究

细胞凋亡时细胞骨架结构改变的研究

【摘要】细胞骨架是细胞重要的组成成分，维持着细胞正常形态和功能。凋亡时多种细胞骨架蛋白(如actin，myosin等)由于受凋亡因素作用，蛋白结构发生改变，进而引起凋亡细胞的形态改变。因而细胞骨架的改变在细胞凋亡发生过程中具有重要作用，提示可通过改变细胞骨架结构来诱导细胞凋亡，以达到治疗肿瘤及其他疾病的目的。【关键词】 细胞骨架

细胞凋亡

细胞骨架蛋白 0、引言

细胞骨架(cytoskeleton)是细胞内不同蛋白质纤维的聚合物和各种调控蛋白交错连接的网络结构，在维持真核细胞的形态、胞内运输、变形运动等方面发挥着重要的作用。细胞骨架主要有3个功能：细胞结构的空间组织作用；建立细胞内外环境中物理联系；协同细胞移动和改变细胞形态的作用。细胞骨架是动态结构，组成它的聚合物和调控蛋白处于连续不断地变化中，将细胞质蛋白和细胞器的活动整合为一个有机体。[1] 细胞凋亡是机体清除衰老、畸变或恶化细胞的一种主动、程序化的生理过程，是多细胞生物维系其结构稳定和内环境功能平衡及生长发育必须的最基本的生物学过程[2]

本文中就凋亡时细胞骨架蛋白的改变的研究进展作一综述。

1、细胞骨架的组成成分

细胞骨架聚合物控制着真核细胞的形态和动力学特征，包括3种主要形式：肌动蛋白丝(actin filament，AF)、微管(microtubule，MT)和中间丝(intermediate filament，IF)，三者被组装成网络结构来抵制细胞变形，但在响应外应力时能够重新组装，在维持细胞完整性方面发挥着重要功能。肌动蛋白丝和微管的聚合与解聚是细胞形态变化的直接因素，与此同时分子马达在细胞各种组分的装配过程中发挥重要功能。1.1微管

微管是由微管蛋白原丝组成的不分支的中空管状结构。直径约25 nm，是细胞骨架成分，与细胞支持和运动有关。纺锤体、真核细胞纤毛、中心粒等均系由微管组成的细胞器。微管有最复杂的聚合和解聚特征，在细胞内的压力下会弯曲，在分裂间期，许多细胞会集合放射状排列的微管以便利用其稳定性，这些微管担当起中心轮毅和细胞内运输功能。有丝分裂过程中，微管骨架会自发地重新排列形成纺锤体，把染色体排列在一条线上[3]。一条微管能在两种状态之问交换：延伸和收缩。其动力学不稳定性使得微管骨架能快速地重组[4] 1.2微丝

微丝(microfilaments，MF)是由肌动蛋自分子螺旋状聚合成的纤丝，又称肌动蛋白丝，是细胞骨架的主要成分之一。微丝对细胞贴附、铺展、运动、内吞、细胞分裂等许多细胞功能具有重要作用。它没有微管稳固，但绑定肌动蛋自丝的交联蛋自具有高度稳定性，装配形成的束状网络结构和树突状网络结构高度稳定。成束的微丝对伸出的丝状伪足起支持作用，丝状伪足使细胞具有趋化性以及参与细胞间的通讯，并能够产生像在吞噬过程中细胞形态的变化。肌动蛋白丝能响应细胞信号系统的作用发生连续的聚合和解聚。如吞噬细胞伸出的伪足是在细胞表面接受趋化性的受体传递下来的信号刺激后，在细胞活跃的边缘带聚合成的。成纤维细胞的收缩作用是在肌动蛋白束的装配过程中，细胞表面的跨膜蛋白与配体结合时触发的。当肌动蛋白纤维和一些解聚因子(比如切割蛋白家族成员)或与一些聚合因子相互作用时，会发生更加复杂的动力学变化[2] 1.3中间丝

中间丝是存在于真核细胞中介于微丝和微管之间，直径约10 nm的纤丝，是最稳定的细胞骨架成分，主要起支撑作用，因组成的蛋白质不同而有不同的命名。它们抵制拉力的能力比抵制压力要强的多，它们能被交联蛋白彼此或与肌动蛋白丝和微管交联在一起，通过和微管或肌动蛋白丝相互作用来形成细胞外应力响应结构，如上皮细胞中的中间丝组装成一个致密的网络抵御外力作用。近年来的研究表明，由核纤层蛋白聚合而成的中间丝，能维持真核细胞胞核结构的完整；核纤层蛋白被细胞周期蛋自依赖的激酶磷酸化从而促进有丝分裂开始时核膜的溶解 [5-6]。不同于微管及肌动蛋白丝，中间丝无极性，不能支持分子马达有方向性的运动。

2、凋亡时细胞骨架蛋白的改变 2.1.细胞凋亡的形态学改变

在细胞发生凋亡的过程中，其形态结构可发生一系列改变，如细胞与周围细胞群脱离，表面原有的微绒毛、细胞间连接消失，核糖体逐渐从粗面内质网上脱离，内质网囊腔扩胀，染色质固缩，核膜孔扩大及细胞出芽，凋亡小体形成。有研究显示，这些形态学改变与细胞骨架的变化关系密切[7]。

2.2 Caspase酶对细胞骨架的作用

细胞凋亡是受细胞内源性基因、酶类和多种信号转导途径控制,激活后呈一个“瀑布式”的信号转导过程。各种凋亡刺激信号如病毒感染、生长因子缺乏、Fas/Apo-1配体、TNF-Ⅱ/TNF-ⅡR等,启动凋亡的发生,由p53、Caspases、Fas相关死亡结构域蛋白(fas-associ-ated death-domain, FADD)及TNF-ⅡR相关死亡结构域蛋白(TNF-Ⅱrassociated death-domain,TRADD)等介导凋亡信号转导,由Bcl-2蛋白家族、细胞色素C及Caspases蛋白酶3个效应器所参与的调控、执行阶段,最后导致内源性核酸激酶激活,核细胞骨架重新组合,细胞骨架结构降解。

Caspase对细胞骨架的影响是通过裂解具有细胞骨架调节功能的蛋白质,如成簇黏附激酶(focaladhesion kinase, FAK), p21活性激酶(p21-activatedkinase,PAK2)等,达到间接地重组细胞骨架结构的作用,由此影响到细胞骨架蛋白发生结构及形态上的变化,导致细胞骨架结构破坏。研究显示,Caspase-3活化后,可使细胞肌动蛋白(actin)、层黏连蛋白(laminin,LN)、胞衬蛋白(fodrin)等多种作为细胞骨架的底物蛋白发生裂解,导致细胞从所黏附的基质或周围细胞群中脱离,同时细胞形态出现染色质浓缩、边集、细胞膜皱缩、凋亡小体形成等凋亡特征性改变。Kothakota等发现,由Fas和肿瘤坏死因子α(TNF-α)介导的人中性粒细胞凋亡过程中,Caspase-3激活后对其底物多聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(PARP)的裂解作用晚于对丝的作用,凝溶胶蛋白(gelsolin)蛋白裂解后产生一个352个氨基酸的NH2-末端。该末端可在细胞内以Ca2+非依赖方式对肌纤蛋白细胞骨架产生快速解聚会诱导细胞变圆,从其所黏附平板上脱落,并出现核碎裂等现象。其他研究也显示,表达该末端片段的腺病毒载体可导致黑色素瘤细胞A7、M2和NIH3T3多种细胞的快速死亡。因此,裂解的凝溶胶蛋白可能是细胞凋亡过程中形态变化的重要因素。

近年来,用砷剂(常用As2O3)治疗白血病和某些肿瘤,取得良好的临床效果。其机制就是影响bcl-2蛋白家族表达,通过Fas/FasL依赖的途径激活Caspase-8。研究显示,As2O3能阻滞细胞的增殖,促进细胞凋亡,用As2O3诱导后细胞内Ezrin(一种能与细胞骨架发生相互作用的关键蛋白)、肌动蛋白和细胞骨架均减少,细胞形态发生改变,从而产生凋亡。[2] 2.3 细胞骨架蛋白的改变

2.3.1微丝和肌动蛋白(actin)的改变

F-actin的解聚是凋亡过程中所必须的，其解聚出现在凋亡小体形成之前。actin是Caspases蛋白水解酶的作用底物，当Caspases攻击actin时，可将其切断降解为15kD和31kD两个片段，使之不能重新聚合，并由于15kD片段的形成而引起细胞凋亡形态的改变。Caspases除了可直接切断actin外，还可通过切断微丝系统中的调节蛋白来引起actin的变化。β-catenin是细胞间粘附调节蛋白，凋亡时被Caspase-3切断，去除了其N-末端和C-末端区的蛋白，而残余蛋白产物不能与α-catenin结合，影响actin组建，从而破坏了相邻细胞间actin微丝连接结构。胆固醇氧化物也可干扰actin的重组，表现为F-actin的解聚，应力纤维消失，微丝完全靠近细胞边缘并成块状等凋亡形态。微丝网络的重组也是凋亡小体形成中所必须，在凋亡小体中可见完好的微丝网络。用微丝干扰因子可以阻断凋亡小体的形成。2.3.2 肌球蛋白(myosin)的改变

细胞皱缩和细胞膜发泡是凋亡的重要形态改变。这一形态改变受肌球蛋白轻链(myosin light chain，MLC)磷酸化调节。当MLC磷酸化增加时，膜发泡增加。MLC激酶抑制可阻断MLC磷酸化，同时MLC磷酸化受Rho信号途径调节。actin也参与了膜发泡，actin皮质环中的myosin II可使actin环产生向心力，内陷而引起actin和质膜连接较弱处形成突起发泡，因此当actin受破坏时，膜发泡也受到抑制。Lechler等在研究酵母I型myosins功能时，发现myosins直接参与actin聚合过程。actin的聚合依赖myosin动力区的磷酸化，此过程受cdc42调节。myosin I联系质膜与actin微丝，它的运动可使质膜突起并使微丝延长。2.3.3 凝胶素(gelsolin)的改变

gelsolin是凋亡的调节蛋白和效应蛋白。Gelsolin是Caspase-3的底物，在Fas刺激下，Caspase-3可切断gelsolin，形成39kD的N-末端和41kD的C-末端两个片段，其中N-末端片段产物作用于actin丝，引起actin解聚、细胞变圆，粘附力丧失，进而核碎裂等凋亡改变。2.3.4 Gas 2的改变

Gas 2(growth-arrest-specific 2peptide)是gas基因表达的蛋白产物，是微丝系统的组成成分是微丝相关蛋白，也是Caspases的死亡底物。凋亡时，Caspase-3特异地切断Gas 2的C端区，引起微丝的重排，继而细胞发生明显凋亡改变。2.3.5 Fodrin的改变

α-fodrin是膜相关骨架蛋白，在Fas和TNF引起的凋亡中被快速而特异地切断。Fodrin的被切是由Caspases介导的，实验证实α-fodrin的切割必须有Caspase-3参加。细胞色素C可引起Caspase-3活化，进而Caspase-3切断fodrin引起凋亡。Fodrin的切断可能与膜发泡有关。Fodrin蛋白在actin微丝的末端交叉连接，将其连在质膜上，被Caspases降解后，影响actin结构致质膜发泡。2.3.6 PAK2的改变

PAKs(p21-activated kinases)是一类丝氨酸-苏氨酸激酶，其活性受小GTP酶如Rac，cdc42等调节。PAKs分子量为62kD，Jarkat T细胞凋亡时由Caspase-3介导的PAK2蛋白水解。将PAK2切成34kD的C端区片段，该片段的活性作用引起凋亡细胞形态和膜的改变。2.3.7 微管和微管蛋白(tubulin)的改变

许多破坏微管的药物如Dolastatin，可直接引起Bcl-2磷酸化而导致Bcl-2失活，并攻击微管，抑制微管和tubu-lin的装配，抑制有丝分裂的纺锤体形成而引起细胞凋亡。也有些药物可活化一些酶类使bcl-2磷酸化如Taxol可活化CAMP依赖的蛋白激酶(PKA)引起细胞bcl-2磷酸化和凋亡。Taxol也可引起Caspase3的活化，启动凋亡。AS2O3的作用也日益引起重视。AS2O3有微管蛋白增强剂和微管蛋白抑制剂两种特征，在体外实验中，AS2O3能显著抑制GTP引起的聚合作用，并攻击微管蛋白，影响微管形成。资料显示，AS2O3连结tubulin的2个半胱氨酸残基，阻断GTP结合位点，干扰有丝分裂中微管的正常动力学。2.3.8 细胞角蛋白(cytokeratin)和波形蛋白(vimentin)的改变

凋亡早期，中间丝的主要蛋白cytokeratin和vimentin发生解聚和蛋白水解而断裂，其蛋白水解也是由Caspases介导的，中间丝由原来的长丝状解聚成短粗的聚集物，同时伴随膜磷脂酰丝氨酸(PS)的暴露和染色质凝集。胆固醇氧化也可引起vimentin的重排，vimentin丝在细胞边缘形成块状聚集物或在核与胞浆外周之间形成环状网架，这时vimentin丝与核的紧密关系完全或部分消失。[8]

3、细胞骨架改变诱导细胞凋亡 3.1 肌动蛋白可能是凋亡早期的调控物之一

肌球蛋白是构成细胞骨架的主要成分，其表达水平的变化与细胞形态变化密切相关。有研究表明，细胞凋亡时，肌动蛋白细丝发生断裂，肌动蛋白网络结构遭到破坏。这是细胞凋亡时形态改变的一个典型特征。那么，通过改变这一典型特征是否就能导致细胞凋亡呢?对此，White等作了深入的研究。他们用细胞松弛剂D抑制气管1HAEo细胞和主支气管上皮细胞肌动蛋白的延伸，或通过Jasp-akinol-ide促进肌动蛋白的聚集，发现改变肌动蛋白的整体性会导致细胞在5 h内出现典型的凋亡形态学改变。细胞松弛剂D会阻碍黏附蛋白的表达，尽管纤维黏连蛋白受体是聚合在一起的，其诱导的细胞凋亡与前述的Caspase-8裂解有关，而Jasplakinolide诱导的细胞凋亡并不破坏细胞的黏连蛋白，与前Caspase-8裂解无关。它们都不受Caspase家族抑制物z-VAD-fmk和Ac-DEVD-cho的抑制，但受死亡受体Fas(CD95)抑制物的抑制，诱导的凋亡与细胞内复杂信号紊乱有关。有研究显示，尽管两种方法诱导的细胞凋亡机制有所不同，但都引起了细胞肌动蛋白网络结构的改变，提示肌动蛋白可能是细胞凋亡早期的调控物之一。用酵母菌所做的实验研究表明，肌动蛋白与细胞凋亡关系密切，破坏肌动蛋白的药物能导致线粒体膜的去极化，诱导酵母菌的衰老。临床上也应用肌动蛋白稳定剂的药物来防止细胞凋亡和预防器官老化。

3.2 任何能使微管结构或功能改变的物质都能导致细胞凋亡

微管与其他细胞器的关系密切，临床常用的一些抗肿瘤药物尽管机制不同，却均可引起微管结构的损伤，导致细胞发生凋亡。它们大致可分为两类：一类是阻滞微管结构聚合，从而抑制肿瘤细胞的增殖。如长春新碱能影响细胞中纺锤体的形成，通过阻滞微管蛋白的聚合，使有丝分裂停止在中期，同时对细胞增殖周期的M期有延滞或阻滞作用。秋水仙碱能与粒细胞的微管蛋白结合，妨碍粒细胞的活动，抑制粒细胞浸润，抑制细胞有丝分裂和结缔组织细胞外基质的合成和分泌，其结构中的C环与微管蛋白结合，阻止其聚合成纺锤体，使细胞分裂停止与中期。另一类是促进微管聚合，并与微管结合，抑制其解聚的抗癌药。其代表药是紫杉醇(Paclitaxel)，它能特异地结合到微管的β位上，导致微管聚合成团块状或束条状，抑制微管网的解聚，而对正常的细胞基本无影响。因此，紫杉醇是第一种作用独特的微管稳定型抗癌药，它可明显减少G1期细胞群，增加G2期和M期细胞数，其作用具有时间和浓度依赖性。临床应用发现，紫杉醇对卵巢癌、乳腺癌、肺癌及恶性黑色素瘤有独特的疗效，倍受临床关注。[9] 3.3 细胞骨架结构与功能相关的蛋白

细胞膜骨架和肌动蛋白骨架的改变在细胞表面的形态改变中起关键作用。细胞骨架蛋白是Caspase和钙结合蛋白酶(Calpain)家族的作用底物，它的破坏对细胞骨架的影响很大，易导致细胞凋亡。肌动蛋白细胞骨架的解体是骨架蛋白经Caspase和Calpain家族蛋白水解作用后的结果。

PIN又称动力蛋白轻链(dyein light chain，DLC)，是动力蛋白复合物和肌球蛋白V的组分，广泛分布于生物体内，藻类的鞭毛，动物成年个体的各组织和整个胚胎均可表达，定位于细胞质和细胞核。PIN作为动力蛋白和肌球蛋白V的组分，参与微管和肌动蛋白为基础的分子驱动器作用，与两种运动蛋白的导向和调节作用有关。动力蛋白是多亚基ATP酶，由多个重、中、轻链组成的分子运动原，作用于细胞鞭毛。实验表明，PIN部分失去功能的果蝇，应起刚毛、翅膀发育等严重的多效性形态缺陷和雌性不育，当功能全部丧失，则引起大量的凋亡和胚胎死亡。胚胎期PIN的缺失导致细胞骨架排列紊乱，说明PIN活性对改变和维持细胞骨架结构和空间分布起到一定作用。PIN的表达可影响细胞发育和分化，与抑制细胞凋亡有关。动力蛋白通过动力激活蛋白连接肌动蛋白相关的细胞骨架，说明PIN可通过肌动蛋白细胞骨架调节细胞反应。

3.4死亡相关蛋白激酶信号通路将细胞骨架和细胞凋亡联系起来 死亡相关蛋白激酶(death-associ-ated protein kinase，DAPK)是受钙调蛋白控制的丝氨酸/苏氨酸激酶。它由多个结构组成，包括1个典型的激酶结构域、1个钙调蛋白连接区、8个锚蛋白的重复序列、1个细胞骨架连接区和1个死亡区。这个前凋亡激酶的作用与肿瘤抑制基因相似，能诱导细胞凋亡。肌浆球蛋白Ⅱ轻链是DAPK在体内作用的第一个底物，通过部分磷酸化作用，DAPK作为有效的肌动蛋白细胞骨架的控制物，能导致细丝和结合点错误连接。另外，DAPK能通过内外机制使整合素活性降低，诱导细胞凋亡。有一些蛋白可通过细胞与细胞之间的相互作用以控制DAPK，如激酶、磷酸酶、编码蛋白等。因此，这些也对细胞骨架和凋亡有一定影响[10-11]。

4、展望及存在问题

综上所述，细胞骨架与细胞凋亡密切相关。利用这一点，我们可通过改变细胞骨架诱导细胞凋亡，提高对抗肿瘤药物的敏感性，达到治疗肿瘤的目的。另一方面也可通过纠正细胞骨架的异常改变，阻滞细胞凋亡，治疗机体组织细胞过度凋亡所致的疾病，延缓衰老。

怎样才能使特定的细胞或细胞群骨架发生改变，怎样才能使发生特定改变的细胞骨架恢复正常，或通过细胞骨架对细胞凋亡进行精确的调控，很值得进行深入的研究。

【参考文献】

[1] 谢朝晖、陈兰英，细胞骨架研究进展，《癌变 畸变 突变》2011年04期 [2] 高清、吴波，细胞凋亡与细胞骨架的改变，《医学研究生学报》2008年08期

[3] Jordan MA,Wilson L Microtubules as a target for anticancer drugs[J].Nature Rev Cancer, 2004.4(4):253-265 [4] Holy TE, Ieibler S.Dynamic instability of microtubules as an efficient way to search in space[J].Proc Natl Acad Sci, 1994, 91(12), 5682-5685.[5]陈兰英，唐剑，牛竞文，等，环六亚甲基双乙酞胺诱导人肝癌 SMMG-7721细胞分化过程中核基质一中问纤维系统的构型变化[J].《电子显微学报》，2007, 26(3): 212-217.[6] 陈兰英，杨海波，李祺福，等，姜黄素对人食管癌EC9706细胞凋亡的诱导作用[J]，《现代生物医学进展》，2008, 8(9)：1601一1604.[7] 吴波、马捷、孟奎 等.肝细胞凋亡的超微结构观察[J].《电子显微学报》，2000, 19(6): 791-797.[8]蔡军、姜叙诚，凋亡时细胞骨架结构的改变，《国外医学 生理、病理科学与临床分册》，2001年04期

[9] 王金惠、善亚君、从玉文.人体肝癌细胞急性低氧及低氧习服差异表达基因分析[J].《生理学报》, 2003, 55(3): 324-33 [10] 潘敏鸿、姜少军、吴波,等，海水浸泡对表皮细胞凋亡和增殖的影响[J].《医学研究生学报》, 2007, 20(9): 916-919.[11] 戴锴、田德英，瘦素通过调控细胞周期蛋白促进人肝癌细胞增殖[J].《医学研究生学报》，2007, 20(4): 339-342

第三篇：蛋白激酶在缺血大鼠海马神经元细胞中的保护作用论文

研究发现，缺血再灌注损伤是对组织造成损伤的主要因素，即再次恢复血液供应，缺血组织灌注时造成的微血管和实质器官的损伤，本研究旨在探讨糖皮质激素诱导的蛋白激酶1(SGK1)在大脑缺血再灌注过程中可能的保护机制。资料和方法

1.1 样本来源本研究用细胞为培养后的1 日龄SD 大鼠神经元细胞。对SD 大鼠采用椎脱臼处死法处死，用75% 酒精浸泡消毒3 ～ 5 min;取出海马神经元细胞进行培养。

1.2 试验方法

1.2.1 大鼠海马神经元细胞的额分离及培养选用1 日龄SD大鼠2 只。通过对大鼠进行消毒后处死，获取了SD 大鼠的海马细胞，并进行了体外培养。

1.2.2 已分离培养的SD 大鼠海马神经元细胞的免疫荧光鉴定采用海马神经元特异性抗微管相关蛋白2(MAP2)抗体免疫荧光来显示分离和培养的结果，在显微镜下计数，记录每个视野中染色阳性的细胞占所有细胞的比值，超过95%的为阳性。

1.2.3 通过氧糖剥夺诱导海马神经元凋亡将海马神经元细胞根据氧糖剥夺诱导时间不同分为正常海马神经元细胞组，氧糖剥夺诱导120 min 组、氧糖剥夺诱导120 min 后正常恢复10 min组、氧糖剥夺诱导120 min 后正常恢复30 min 组和氧糖剥夺诱导120 min 后正常恢复60 min 组。采用Annexin VFITC/PI 流式细胞术对样品进行检测，区分实验样本中正常、坏死、凋亡细胞。

1.2.4 Western 印迹技术检测上述步骤中各种细胞的SGK1 表达实验对样本进行总蛋白提取与定量，根据SGK1 的mRNA序列(序列号: NM_001193568.1)设计了该基因的全基因引物，获得目的基因SGK1 模板，构建质粒载体，并进行过表达效率检测。

1.3 统计学方法采用SPSS16.0 进行分析。结果

2.1 氧糖剥夺诱导海马神经元凋亡及SGK1 表达情况NC 代表未经任何处理的培养过的SD 大鼠海马神经元细胞、OGD 表示对培养过的SD 大鼠海马神经元细胞进行了120 min 的氧糖剥夺，而10 min 组、30 min 组和60 min 组则表示培养过的SD 大鼠海马神经元细胞在进行了120 min 的氧糖剥夺之后分别进行了10 min、30 min 和60 min 的氧糖正常供给。

2.2 SGK1 基因蛋白水平的过表达能阻止氧糖剥夺120 min 的培养过的SD 大鼠海马神经元细胞的凋亡与NC 组比较，转染SGK1 过表达载体的细胞内，可以SGK1 导致mRNA 的表达增加约5 倍;在转染了SGK1 过表达病毒载体的细胞中，SGK1 基因在蛋白水平的表达约超过未处理组的2.5倍。海马神经元分别转染了空载体或编码SGK1 基因的表达载体;在转染24 h 后，SGK1 在基因水平和蛋白质水平的变化情况和NC 相比具有显著性差异。海马神经元分别转染了空载体或编码SGK1 基因的表达载体24 h，然后进行120 min 的氧糖剥夺，然后使之恢复60 min;运用流式细胞仪分析用膜联蛋白V/PI 双染色法来检测细胞凋亡情况。通过免疫印迹实验检测SGK1 和活化的金属基质蛋白酶(caspase)-3 蛋白水平差异情况。讨论

缺血性脑血管病是目前导致人类，尤其是老年人致死和致残率最高的疾病之一。对于缺血性脑血管病当前最主要的治疗原则是对缺血区域进行血液灌注;然而近期发现对缺血性脑血管疾病的缺血再灌注非但没有使组织功能恢复，反而会导致缺血所致的功能障碍和结构破坏进一步加重，这种现象即缺血再灌注损伤，在各种模式生物和人类研究中都得到了一致的结果。

本研究结果发现，对体外培养的SD 大鼠海马神经元细胞进行氧糖剥夺可导致SD 海马神经元细胞凋亡数量的增加，而之后随着再恢复氧糖供应时间的增加，神经元细胞凋亡的数据则呈现进一步加剧的趋势。而SGK1 的过表达则可以抑制SD大鼠海马神经元细胞因氧糖剥夺导致的细胞凋亡的趋势。另外本结果显示，SGK1 的过表达能显著降低因氧糖剥夺导致的SD 大鼠海马神经元细胞凋亡的数量，这一结果得到了荧光辅助细胞筛选分析的支持，提示Akt 和GSK-β 可对经受缺血再灌注海马神经元细胞能起到保护作用。

第四篇：地方林业局在世界自然遗产地保护和管理中的作用研究

地方林业局在世界自然遗产地保护和管理中的作用研究

丽江玉龙县林业局作为政府林业职能部门在保护和管理老君山世界自然遗产地中起到了积极的作用，包括：提供强有力的法律法规保障体系，切实有效的开展退耕还林、森林防火、天然林保护、森林病虫害防治等各项工作，积极帮助自然遗产地农户发展替代生计等。

丽江老君山（黎明.格拉丹）片区有独特的生物多样性、文化多样性和地质地貌多样性，是世界自然遗产“三江并流”区域的核心区域。该区域位于丽江玉龙县境内，与之相对应的地方林业职能部门是丽江玉龙县林业局。

一、玉龙县林业局管理体制分析

玉龙县林业局除了主体行政机关外，下辖12个事业单位。除拉市海和玉龙雪山保护管理局外，其余10个单位对老君山世界遗产地管理保护工作都起到了积极的作用。其管理体制很好的体现出了细化和专业化的特点。这样的结构有利于各职能单位之间明确分工，发挥所长，并且避免相互推诿工作职责的现象。专业化的下辖单位之间又能通过林业局总体协调统筹，合作工作，能共同在老君山世界自然遗产地的保护和管理工作中发挥积极的作用。

二、玉龙县林业局在老君山世界自然遗产地管理中的作用

（一）提供强有力的法律法规保障。

首先，玉龙县林业局监督实施国家、省、市级的环境保护方针、政策、法律和法规，其中包括35部国家和省级的法律法规。其次，玉龙县林业局于2013年专门拟定并通过了《云南省玉龙纳西族自治县林业管理条例》，其中第二十二条就特别强调对老君山世界自然遗产等自然保护区加强管理。第三，玉龙县林业局根据遗产地实际情况协同老管局制定了《集体林共管协议》等乡规民约。最后，玉龙县林业局还不定期的对社区居民进行相关法律法规的宣传教育工作。

（二）切实有效的开展退耕还林、天然林保护、森林防火、森林病虫害防治、生态治理等工作，为老君山世界自然遗产地的森林、生态系统和生物多样性保护起到积极的作用。

1、退耕还林政策。玉龙县林业局在老君山地区严格执行国家的退耕还林（草）政策，同时加大退耕农户的科技培训力度。如2013年在黎明等乡镇进行了退耕还林及巩固成果等方面科技培训，并发放7000多份相关培训材料，培训人次达2000余人，全面提升退耕户的科技素质。退耕还林14年，黎明、格拉丹片区的森林生态系统恢复取得了明显的成效：共完成退耕还林（还草）4730亩，退耕还林地已成林面积为4020亩，占全部退耕面积的85%。目前，老君山区域内的森林覆盖率达到91.7%。

2、天然林保护。大力推进天然林保护二期工程：如加强天保工程森林管护基础设施的建设，在黎明等地开展国家森林抚育补贴项目，森林抚育作业区项目等。

3、森林防火工作。玉龙县林业局先后组建了三支东西中部林区专业扑火队，人员达到120人，切实提高了老君山自然遗产地森林火灾应急处理能力和森林防火综合防控水平。此外，重点加强节假日防火宣传活动。如玉龙县林业局在2014年春节前夕印发了《森林火灾的危害》、《森林防火宣传单》等宣传材料50000份，并到各个乡镇进行了防火督查。2013年，玉龙县林业局加强森林防火、林业有害生物防控和林区治安防控体系建设，并因此获得了“2013云南省平安林区创建活动先进集体”荣誉称号。

4、森林病虫害防治工作。玉龙县林业局建设有林业有害生物防控体系，并积极与多方科研机构合作，寻求各类有效防止森林病虫害的途径。如2014年2月，玉龙县森防站与福建农林大学林学院合作开展不同海拔松墨天牛的引诱试验，4月，邀请省林检局防治科专家到玉龙县指导小蠹虫治理工作。

5、生态治理工程。2013年，玉龙县林业局在黎明等7个乡（镇）17个村委会正式启动了陡坡地生态治理工程，对这些地区存在水土流失等生态退化现象陡坡进行了综合治理，有利于加快生态修复，治理水土流失，培植特色产业，并增加农民收入。

三、积极帮助自然遗产地农户发展替代生计，降低农户生活对林木产品的依赖，保护森林的同时增加农户收入。

对丽江老君山国家公园黎明和格拉丹社区居民家庭生活抽样调查表明：经济林收入分别占黎明和格拉丹社区居民总收入的2.67%和2.48%，老君山社区居民生产生活对自然资源的依赖性还很大。因此，玉龙县林业局除了在老君山地区严格贯彻退耕还林和天保工程等各项政策以外，还大力协助农户发展替代生计：中草药种植，核桃、油橄榄为主的木本油料种植等林产业，和生态旅游等各项产业，以降低社区居民生活对自然资源的依赖，从而达到在保护森林和生态系统的同时也提升社区居民的生活水平的目的。首先，发展各类经济林产业。玉龙县林业局在老君山世界自然遗产地各乡、镇、村推动以核桃、油橄榄为主的木本油料种植产业。核桃和油橄榄在玉龙县的种植面积分别达到了59.6和1.5万亩。其次，发展各类中草药等经济作物的种植业。老君山自然遗产地有越来越多的农户在种植天麻、玛咖、滇重楼等中草药。林业局不定期组织科技人员开展各项培训活动。最后，发展生态旅游业。如玉龙县林业局建议将发源于老君山的冲江河打造成“小九寨沟”生态旅游景区。

（作者单位：云南丽江师范高等专科学校）

第五篇：加强保护利用，推进革命遗址在“红色领航”工程中引领作用的研究

加强保护利用，推进革命遗址在福州“红色领航”工程中引领作用的研究

近年来，我市红色文化保护、传承和弘扬工作在市委宣传部的协调，各级各部门通力协作下取得明显成效，红色基因在革命传统教育、培育和弘扬民族精神，助推我市经济社会发展等方面不断迈上新台阶。革命遗址是红色文化的重要组成部分，是对广大党员干部、人民群众特别是青少年进行爱国主义教育和革命传统教育的重要阵地，是一笔宝贵的革命历史文化遗产。在红色文化保护、传承和弘扬和“红色领航”中发挥着重要的引领作用。

总书记强调：“用党的历史教育党员、教育干部、教育群众尤其是教育青少年，是党史工作服务党和国家大局的重要内容。”福州是福建省最早建立地方党组织的地区，是闽东土地革命的策源地和活动中心、中国工农红军北上抗日先遣队途经地、解放战争时期党领导城市运动和游击武装最活跃的地区之一，红色资源十分丰富。“历史是最好的教科书，中国革命史是最好的营养剂。”这些丰富的红色文化遗产，是党领导福州人民为民族独立和人民解放而英勇奋斗的历史见证，是激励我们不断从胜利走向胜利的力量之源。保护好、展示好、传承好这些红色资源对于建设和巩固社会主义思想文化阵地，大力发展先进文化，支持健康有益的红色文化，抵制腐朽文化，具有重要而深远的意义。

一、近年来我市保护利用革命遗址发挥“红色领航”引领作用取得的主要成效

（一）底数进一步摸清，分类保护更加细化有序

在2010年普查成果的基础上，我们近几年督导各县（市）区对本地区革命遗址情况进行了再摸底再补充，先后更新普查数据5次，对全市革命遗址情况有了比较全面的掌握。同时，分清权属，区分优劣，进行分类综合保护。比如，相当数量的革命遗址经与宣传、文物、民政等部门沟通，申报成文物保护单位和爱国主义教育基地，许多遗址列入到挂牌保护，有的在遗址处建立了纪念碑、亭和石刻，不少遗址通过修缮建立了纪念场馆，开展爱国主义和革命传统教育。从目前统计的情况来看，全市调查登记统计的革命遗址共290余处，其中保存状况较好以上的达179处。

现有革命遗址中，列为国家级和省、地、县级文物保护单位和爱国主义教育基地的共102处，列为市级党史教育基地的47处，市级党性教育基地的14处，特色教育基地如国防教育基地、廉政建设教育基地、“两学一做”学习教育基地、党的群众路线教育基地50余处。保存状况较差，确实无利用价值的遗址，暂时建档留存，定期派人巡视，防止被非法占用。

通过有效管护，革命遗址的挖掘建档、分类分属、定性申报、保护利用开发等已形成较规范的流程。有的革命遗址列入历史文化名街或船政文化街区一并修缮保护；有的在城市改造、农村建设等过程中因而免于毁坏。如仓山区高湖小学，原名“茭湖小学”，早在抗战时期，就成为福州红色摇篮，解放战争时期，不仅是中共福州市委机关所在地，而且还是省委、城工部、福州市委、五县中心县委多次召开会议的地方，2017年高湖村拆迁建设中，区委区政府认真听取有关方面的反映，及时终止了该旧址的拆迁。此外，一些党史方面的非物质文化遗产在遗址保护过程中得以妥善整理和留存，对红色文化的开发、利用、传播具有重要意义。总之，地方政府重视和保护革命遗址的氛围日益浓厚，开发利用红色资源，促进遗址保护和地方经济社会发展双赢的力度不断加大。

2017年，原市委党史研究室还成立革命遗址保护利用研究处，定期总结好的经验作法，对发现存在的问题，制定相应整改和落实措施，积极联合相关部门共同推进红色资源的保护开发利用。

（二）基地作用发挥明显，教育示范功能不断体现

近年来，全市通过打造的党史教育基地、党性教育基地、青少年革命传统教育基地、党的群众路线教育实践基地、“两学一做”学习教育基地、廉政建设教育基地、国防教育基地等特色教育基地，连同已经授牌的国家级和省级党史教育基地、爱国主义教育等基地，开展各类示范教育，有力配合了红色文化保护、传承和弘扬，提高了党史工作的科学化、规范化水平，发挥了革命遗址在红色教育中的积极作用，品牌效应日益突显。

利用特色基地开展红色教学逐步推广。比如市委旧址纪念馆党性教育实践基地及各县（市）区的不少基地场所都相应列入市、县（市）区党校教学计划和各类大中小学校的爱国主义教学安排中，逐步成为全市党员干部和青少年接受红色洗礼，继承革命传统的教育场所。

利用重大节庆和纪念日开展爱国主义教育机制形成。充分利用全市革命遗址资源，每逢“七一”

“八一”

“国庆”

“清明”等重大节日，部队、大中小学校、机关事业单位、社会团体都组织人员到各类纪念设施等革命遗址现场开展爱国主义教育和革命传统教育，通过不同形式的纪念活动，推动革命遗址宣传教育功效的扩展。

组织参观学习、加强革命教育已成常态。通过参观革命旧址和各类教育基地，组织“重走长征路”等体验活动，观看珍贵历史照片、塑像，以及战争实物如炸弹、手雷、枪械、大刀、马灯、织布机等，生动再现革命前辈和革命老区人民的英雄事绩，让前来瞻仰的人对先辈的革命精神肃然起敬，激发干事创业的精气神和奉献使命。

推进红色文化“六进”，特别是进校园工作全面铺开。编纂出版各类红色书籍和《福州史志》期刊，利用各种场合、通过各种方式，送阅社会各界人士，发挥红色教育功能。组织开展“弘扬红色文化

传承红色基因”等主题活动，推进培育和践行社会主义核心价值观在大中小学校有重点、分层次地全面展开。

（三）宣传平台全面发力，红色名片的特色效益积极彰显

积极运用现代科学技术，创新手段、方法和载体，不断增强红色宣传的吸引力和感染力。充分利用“福州史志”互联网、“福州史志”微信公众号、“福州史志”微博平台等现代传媒创建宣传教育专栏，开辟红色胜迹、红色故事等栏目，实现革命遗址中红色资源宣传教育的网络化、信息化。充分利用党史大事、纪念日开展各类征文比赛、图片展、书画剪纸作品展，开展红色故事宣讲比赛，让革命遗址蕴含的民族精神充分张扬。充分利用革命遗址中的党史资源著书和拍摄专题片，最大限度地发挥革命遗址的宣教作用。

（四）红色旅游大力跟进，经济社会效益开始显现

发展红色旅游，可谓顺应民意、合乎民望、关乎民生。首先，它能弘扬爱国主义精神，增强民族凝聚力。民众通过参观红色景区、瞻仰革命遗址，能深受先烈们爱国精神和民族气节的感染，从而激发爱国热忱，产生强烈的民族认同感和献身民族伟业的责任感。其次，发展红色旅游能扶贫富民，是对革命前辈和先烈们最好的告慰和纪念。我市革命老区经济社会发展相对落后，近几年通过发展红色旅游，打造红色旅游精品，将历史、文化和资源优势转化为经济优势，推动了当地经济结构的调整，扩大了就业并增加了民众收入，经济社会效益开始显现。

全市近年来打造红色精品旅游线路发挥作用较好的有：

永泰县青龙瀑布全域旅游＋红色文化精品示范景点区。景区中的红军洞已成为青龙瀑布景区一道亮丽的风景线和永泰县红色旅游4A级景区之一。

福清一都红色旅游区。福清一都是中央军委确认的“撑起南方一片天”的15个独立游击根据地之一。一都镇先后修复罗汉里红军学校、游击队司令部旧址和宋代廊桥、古驿道、东关寨等古迹，打造了红色+古色（迹）+绿色（自然景观）的红色A级旅游景区。

此外，马尾船政、三访七巷历史文化名街、福清漈头、斗垣、长乐南阳省委旧址、马尾牛项、连江透堡等景区在发挥红色教育宣传上也都形成了一定规模。通过精品旅游线路的“以红带古、红古结合，以红推绿、红绿相映”，让游客在品味福州山水的同时铭记红色传奇，在享受生态氧吧的过程中感悟红色精神，促进了革命传统教育与旅游产业发展的有机融合。

二、当前我市保护利用革命遗址发挥“红色领航”引领作用存在的问题

总的来说，革命遗址在红色文化保护、传承、弘扬和发挥“红色领航”的引领作用越来越明显。但从进一步推进我市“红色领航工程”，助推有福之州高质量发展要求来看，仍存在一些亟需解决的问题。近年来，媒体界、市人大代表、市政协委员和有识之士或刊文或提案，对我市革命遗址保护利用工作提出了很好的建议，我室也组织人力物力加大对全市革命遗址相关课题的调研。从调研情况来看，当前革命遗址保护利用主要存在以下3个方面问题：

（一）管理机制不够健全

一是联动机制不完善。2016年7月，市委召开协调会，决定成立由市民政局、市文物局、原市委党史研究室、市委宣传部、市财政局、编办、市文旅局等多部门参与的革命遗址保护利用工作联席会议，定期开会研究红色文化传承中的经验做法和存在问题，制定有关规章制度，针对问题采取相应整改和落实措施。通过联席会议的部门联动，强化责任分工，搞好部门协同，推动包括革命遗址保护利用在内的红色文化传承弘扬的深入实施。但目前这项联动机制还未形成，联席会议还未建立，作用难以有效发挥。

二是法律法规还不健全。近年来，各省市对革命遗址在红色文化传承弘扬中的引领作用越来越重视，不少地市制定并推动革命遗址保护利用走上法治化轨道。我省龙岩市2017年制定了《龙岩市红色文化遗产保护条例（草案）》，将红色文化保护、红色基因传承纳入法制轨道，列入龙岩市人大常委会立法项目。三明市2017年也出台了红色文化遗址保护管理办法，于3月1日起施行。而我市目前虽有组织制定《福州市红色文化生态保护开发规划》《福州市历史文化名城保护条例》等地方性法规，但尚未制定革命遗址保护利用管理的法规性文件，不利于革命遗址保护管理走上法治化轨道。

三是队伍还不够充实。从史志干部队伍来看，县（市）史志部门党史专业人员还相对比较稳定，但各区力量比较薄弱，史志室主任多为办公室兼职，专业人员编制存在被占用或挪用情况，一部分兼职人员对党史业务还不够熟悉，不利于革命遗址的挖掘保护利用。

（二）保护措施还不够有力

有的地方对革命遗址的管理重视不够。比如，闽侯县南通镇十八重溪风景区中的老爷洞，是中共福建省委机关1945年7月至1946年11月的驻地，因保护措施不力，洞口长期被

“道路年久失修，湿滑有危险”的标牌封闭。鼓山镇鼓一村的松山革命烈士陵园也因管理不善，杂草丛生，比较荒凉。

有的权属私人的革命遗址，因未受到保护管理上的指导、监督，遗址内设施损坏较重。比如，马尾区亭江镇象洋村的王助烈士纪念馆，里面的照片、字画、展板脱落掉地，有的都霉变看不清了，损毁程度令人震惊。

有的革命遗址宣传力度不够，红色基因在传承中存在被忽视、被戏说等问题。闽清县宏琳厝景区的项南住所暨《抗日救亡》周刊旧址，许多导游解说员对项南、舒诚、张徽等同志在此干革命的历史不清楚。连江县琯头镇青芝山景区里的抗战阵亡将士纪念碑、二七烈士林开庚纪念碑亭等景点也是这种情况。晋安区铁坑村是曾被敌人三次血洗、焚村的老区村，但村革命史展厅说明词对该村地下党组织隶属关系、重大事件的表述等均出现较多错误。

此外，不少革命遗址在郊县山区，复杂的地理位置和福州地区常年多潮湿暖热的气候对遗址保护带来不少困难，现有革命遗址中，保护一般和较差的达100余处，占遗址总数的百分之三十多。

（三）开发利用还不够充分

有的革命遗址利用简单、展示形式单一。主要是陈列布展模式简单，特色不够突出，缺乏对革命历史内涵的深度挖掘，社会影响力不够。有的革命遗址场所利用率不高，如林祥谦陵园场馆面积比较大，但除了重大纪念日或重大活动，平时多闲置。

利用革命遗址开发的红色文化精品还不够多。比如中小学校乡土教材中的红色故事比较缺乏，展现我市红色文化资源保护和利用的图文影像资料不足等。

打造红色旅游经典线路不够丰富，虽有一定成效，但总的来讲，数量不足，挖掘不深。还要进一步树立大资源、大手笔、大市场、大发展的红色旅游理念，特别是在突出地方特色，进一步开发特色旅游线路，丰富红色内涵、提高红色品位上要加大创新力度，挖掘更大空间。

三、进一步保护利用革命遗址发挥“红色领航”引领作用的对策建议

（一）加强组织领导，健全管理机制

尽快启动联动机制，建立红色文化保护、传承和弘扬工程联席会议。通过联席会议，推动红色文化为建设有福之州提供强大的“红色动力”。从职能和作用发挥上看，建议由一位市领导主抓，由市委宣传部（或市委办公厅或相关部门）牵头并处理日常工作，市委办公厅、文旅局、名城委、民政局、文物局、数字办、史志室、财政局、编办、规划局、文联、建委、教育局、科协、社科联、市属相关高校、研究机构、媒体等部门共同参与。同时，要求各县(市)区也成立相应机构，形成上下联动，齐抓共管的有效机制。

通过联席会议，制定红色文化保护、传承和弘扬工程的短、中、长期发展规划，订立规章制度；精心部署各项工作，抓好分工落实，并强化主动作为、相互配合、形成合力。

在革命遗址的挖掘保护利用上，通过联席会议抓好监督检查和定期评比，对挖掘保护利用开展较好的革命遗址试行星级评比，授予星级牌匾。注意抓典型引领示范，比如，近年来连江县在全面建立红色文化教育基地、全方位开展红色文化宣传教育活动、全力创建红色文化宣传平台等方面做得有声有色，走在全市前列，宣传推广他们的经验做法将起到很好的以点带面作用。

（二）出台法律法规，推动革命遗址走上法治化管理轨道

建议由市委史志室或民政局牵头，有关部门参与，着手编制《福州市革命遗址挖掘保护利用规定》，对革命遗址遗迹的范围、保护管理模式、经费保障、保护管理的措施（包括革命遗址遗迹的普查、认定、公布、保护规划和保护方案、日常巡查及报告制度、责任人的确定等）、开发利用的规定、处罚办法等进行立法，推进红色文物的保护、利用和提升。

在保护措施制定方面，特别注意根据不同的产权归属采取不同的政策。有的权属国家、集体的革命遗址，按所有权归政府、管理权归相关部门、经营权归公司模式，鼓励社会资本参与管理，对管理不善的，如前文提到的老爷洞中共福建省委机关旧址、松山革命烈士陵园等革命遗址，必须追究相关单位的责任。权属私人的革命遗址，如王助烈士纪念馆，建议由相关部门牵头，协调做好与业主的沟通，监管与奖励相结合，促其接受保护管理的指导、监督，鼓励其捐赠或投资保护。

（三）进一步更新观念，加大革命遗址宣传利用力度

开展多点宣传。通过联席会议，精心设计制作我市红色旅游宣传视频、图册、展板等，在我市重要交通要道、机场、火车站、公交站、地铁等人流量多的地方展示，扩大红色文化影响。

加大革命遗址在“福州史志”互联网、微信公众号、微博等平台宣传力度，发挥革命遗址在“红色领航”工程中的作用。

打造“の福州红色文化”平台，开设闽都红色讲坛，以革命遗址为依托，定期举办以重大事件、重要会议、重要文件、重要人物为题目的红色论坛，邀请党史研究专家登台宣讲，讲好红色故事，传播正能量。

加大红色精品旅游线路挖掘。建议由文旅部门牵头，多部门协同，加快打造更多有深度、有广度的福州特色红色精品旅游线路。当前，重点做好降虎、贵安红军北上抗日先遣队途经地沿线遗址，三坊七巷历史文化名街+红色旅游，永泰青云山+红色旅游，永泰嵩口中国历史文化名镇+红色旅游，永泰庄寨古韵+红色旅游，连江琯头青芝山红色旅游，黄岐畚箕山战备遗址等红色旅游线路的研究。此外，尝试举办一些高规格、有一定影响力的全国性、全省性重大旅游文化节，提升我市红色旅游品牌影响力。加大对导游解说员的红色文化普及，提高导游自身素质和解说质量，防止在红色旅游景区出现“一问三不知”的情况。

对新生代加强爱国主义教育是一项“技术活”，红色旅游如何打造出新意、吸引离那段历史越来越遥远的年轻人，考验着官方的智慧。一些深度游项目，比如上海推出的以角色扮演、密室逃脱等形式体验有故事性、互动性的“红色一公里”游，以及当前比较热的VR/AR

实体体验游，利用新技术让观众仿佛置身枪林弹雨、实现“沉浸式”游览项目，都是值得借鉴的创新探索。

（四）大力推进红色文化进校园，让红色基因种子成为青少年人生成长的强大动力

坚持活动引领，注重抓细抓实。多开展“我们的节日3+N”等道德教育示范活动，强化青少年理想信念教育，广泛开展“传承红色基因

讲好福州故事”系列主题活动，引导青少年弘扬革命精神，让红色基因内化于心、外化于行，奋力走好新时代的长征路，以实际行动争做时代先锋。

大力开展“红色义务小小宣讲团”宣讲活动，充分发挥“红色义务小小宣讲团”队伍作用，通过走进“学校课堂”“社区礼堂”“爱国学堂”等宣传阵地开展红色文化宣讲活动，构筑全市青少年理想信念教育体系。

坚持德育创新，注重教育实践，开展爱国主题教育。依托全市革命纪念馆、烈士陵园、红军墓等丰富的红色资源，开展爱国主义、传统美德、革命传统等主题教育。开展红色传承教育，开展“我们的节日·清明——传承红色基因

奋进筑梦征程”、网上祭英烈、童心向党、向国旗敬礼等系列主题活动，教育引导广大党员干部、群众和青少年学会感恩、懂得珍惜。

此外，建议教育部门在中小学校乡土教材中增加我市红色故事教育题材。继续打造特色教育基地，不断提升革命遗址的教育示范功能。

（五）发展影视动漫等产品，壮大红色文化产业

福州市红色文化资源虽然丰富，但长期以来缺乏震撼人心的红色影视动漫等产品，红色文化的宣传普及功能一度比较弱势。实际上，能搬上影视屏幕的福州红色文化资源内容非常多，比如，位于福州市西洪路边的鸡角弄，被市民称为“福州的雨花台”，先后有180多位优秀的中国共产党人在此英勇就义，他们为了民族独立和人民解放不惜抛头颅洒热血的革命事迹长年不为多数人所知。再比如，红军北上抗日先遣队征战福州，血战降虎，解放罗源县城，特别是600多位英烈遗骸长眠于连江桃源梧桐战场，惨烈的战斗和红军战士不畏牺牲的革命精神同样不为福州人民所熟知。等等红色文化故事都是搬上荧屏的有力素材，文旅局、史志室等部门有责任和义务去推动这些红色文化走上荧幕，让红色文化直抵人心,让红色精神润物无声。重点在以下几个方面进行努力：

1.电影和电视连续剧作品

电影作品如《先驱者的足迹》《征途》《红色闽东》等；电视连续剧作品如《为了解放》等；

2.纪录影片

如拍摄制作《福州解放》纪录影片，引入各级党校、大中小学校和全市各类教育基地，作为党员干部群众和青少年学生红色文化宣传教育的电教片长期使用。

3.微视频作品

以福州市革命遗址为素材，或以福州革命英烈为素材，拍摄50-100集革命故事微视频作品，每集1-3分钟，在电视台、大型户外LED屏、海博TV、网站、公众号、微博等渠道播放推广，推动红色文化传承深入人心。

4.主题快闪活动

编辑特色红色文化类节目，依托大中小学校，在重要时间节点开展丰富多彩的红色文化传承弘扬的主题快闪活动。

5.话剧或舞蹈剧作品

如《福州“雨花石”》《地下航线》《暴动》或《方尔灏》等人物话剧作品。

6.戏剧、音乐剧作品

如《根据地》《红色记忆》等。

7.动漫、动画、VR、AR等产品

从群众需要出发，精选红色文化成果，开发形式多样的作品，以适应互联网、手机、广播电视等不同载体的传播需要，以动感内容激发群众动心动情，让群众在短时间内能够基本了解福州红色文化。

8.开发红色游戏项目

让网民在游戏中了解福州革命历史，体验革命情怀和革命经历，接受红色洗礼。

（六）提升服务功能，扩大革命遗址教育场所的品牌效应

首先，各类纪念馆、纪念设施等革命遗址在提供优质服务上，要强化服务理念，完善服务规范。在服务内容、服务方式、服务手段方面积极探索创新，在接待咨询、参观引导、讲解宣传方面尽心尽力。在参观人数比较集中的重要纪念日、节假日，通过强化保障措施、延长开放时间等方式，做好观众引导、安全保卫、参观服务工作，营造庄严肃穆、秩序井然的和谐氛围。要坚持用公众至上的服务理念，多为游客提供免费停车、免费导游、免费讲解、免费饮水、免费用药、免费发放宣传资料等服务。

第二，在做好阵地接待宣传的同时，坚持把流动展览、移动党课、文艺演出送到工厂、农村、学校、军营、机关、社区，让百姓欢迎，让青少年受鼓舞。

第三，在以人民为中心的工作导向上，以培育和践行社会主义核心价值观为根本，积极主动地建立与周边学校、机关、企事业单位、城乡社区、驻地部队的文明共建和文化共享机制，开展缅怀祭扫、升国旗仪式、成人仪式、入队入团仪式，入党和重温入党誓词仪式，冬令营、夏令营、体验营等活动。通过各类活动，增进观众特别是青少年的爱国主义情怀。

第四，在拓宽教育范围，扩大爱国主义教育影响力上，下大力气建设网上纪念馆和智慧景区，利用互联网高速公路和数字化手段，全景式、立体式、延伸式全方位传播红色文化。同时通过微展览、微党课、微访谈、微视频和微信二维码语音导览系统平台，增强观众互动积极性，培育参观兴趣，营造学习氛围，努力把纪念馆建设成为文化殿堂、生态景区和精神家园

（七）加强队伍建设，不断增强源动力活力

首先要加强政治建设，增强政治意识，始终坚持主心骨。要深入学习贯彻总书记系列重要讲话精神和治国理政新理念新思想新战略，认真落实总书记关于党的历史和党史工作的指示要求，坚定理想信念，坚决听党话，跟党走；要加强业务能力建设，熟练掌握党史工作方法和基本规律，练好“看家”本领；要带头贯彻全面从严治党要求，严格按照党的原则、纪律规矩办事，抓好党风廉政建设，推动史志部门在当前主题教育中守初心、担使命、找差距、抓落实，努力打造具有铁一般信仰、铁一般信念、铁一般纪律、铁一般担当的史志工作队伍。

其次要加强人才培养和引进，建立“红色文化”项目库，完善激励机制，吸引优秀人才参与到红色文化保护传承中来。在革命遗址的挖掘保护利用上，重视解决队伍编制问题，特别是县（市）区，既要保证足额满编，又要确保专职人员数量。对兼职人员要重视业务培训，定期组织技能学习，提高业务水平。此外，街道、乡镇机关中要明确挑选素质高、业务熟且掌握一定党史知识的同志担任联络员，协助推进各项工作。加大干部对外交流力度，增进队伍生机活力，通过联席会议督促落实。