木本植物基因组DNA提取方法的对比研究开题报告

第一篇：木本植物基因组DNA提取方法的对比研究开题报告

1.选题依据

1.1 论文题目及研究领域

1.1.1 论文题目: 木本植物基因组ＤＮＡ提取方法的对比研究 1.1.2 研究领域: 木本植物DNA的提取研究 1.2 论文研究的理论意义和应用价值

DNA是遗传信息的载体,是最重要的生物信息分子,是分子生物学研究的主要对象,因此DNA的提取也应是分子生物学实验技术中的最重要、最基本的操作，如不能有效的完成DNA提取方面的工作，那就根本谈不上进行分子生物学方面的实验。植物DNA的提取和纯化是植物基因工程研究的基础操作，实施分子标记，基因文库的构建，基因分离及遗传转化和鉴定等都是以提取DNA为前提。如何简捷高效地提取到纯净、合格的DNA分子，一直是植物生物学者关注的问题。

随着DNA分子标记技术和重组DNA技术的发展，制备完整、纯度较高的基因组DNA日益显得重要。我们在进行木本植物DNA水平遗传多样性研究时，首先遇到的问题是如何快速获得较完整、纯度较高的基因组DNA。由于植物细胞与动物细胞不同，具有一层坚硬的细胞壁，且含有较多的多糖、色素、脂质和多酚等物质，给植物DNA提取带来很多困难，特别是多糖和多酚类物质不易与DNA分开。相对于草本植物，多年生木本植物的次生代谢类物质含量更高，高质量的DNA提取难度更大[1]。

大多数植物DNA提取方法所提取得到的DNA粗提物中往往含有大量RNA、蛋白质、多糖、单宁和色素等杂质，这些杂质有时很难从DNA中除去，大多数蛋白质可通过酚-氯仿-异戊醇处理后变性、沉淀除去，绝大部分RNA可通过经RNase 处理后除去。但大多数木本植物富含多糖、多酚类物质，DNA常受到严重的多酚污染，造成DNA沉淀物难以溶解或溶液色深；多糖污染直接影响基因组DNA的限制性核酸内切酶的酶切效果。多酚类、多糖物质的污染会造成AFLP酶切连接等后续实验效果差，甚至后续PCR没有扩增产物[2]。在大多数木本植物基因组DNA的提取方法中，SDS法和CTAB法是目前最为常用的两种方法。

本试验以细胞生物学研究为基础，以如何获取高质量、高纯度DNA为目的，比较CTAB法和SDS法红豆杉和银杏基因组DNA的提取效果，对两种方法提取的DNA进行琼脂糖凝胶电泳分析和紫外吸收分析，分别对两种方法所提取的红豆杉和银杏基因组DNA的效率和质量进行分析，从中选出一种更适合木本植物基因组DNA的提取方法。

1.3 DNA提取研究概况和发展趋势

Avery在1944年的研究报告中写道：“当溶液中酒精的体积达到9/10时，有纤维状物质析出。如稍加搅拌，它就会象棉线在线轴上一样绕在硬棒上，溶液中的其它成份则呈颗粒状沉淀。溶解纤维状物质并重复数次，可提高其纯度。这一物质具有很强的生物学活性，初步实验证实，它很可能就是DNA（谁能想到！）”。对DNA分子的物理化学研究导致了现代生物学翻天覆地的革命，这更是Avery所没有想到。Fricdrich Miescher ,瑞士生物学家，有机化学家。1868年医学毕业以后，在著名的有机化学家Hoppe-Seyle的实验室以脓细胞为材料，研究淋巴细胞的组成。1869年他从脓细胞的细胞核中分离出含有大量磷的“核素”即是DNA,是人类第一次真正提取的的DNA。

年代初,DNA被证明是所有生物最主要的遗传物质。随着生物化学、分子生物学、遗传学的发展,基因工程和生物技术的创立,DNA的有关技术也得到了飞速发展。DNA提取方法成了这些研究和应用中最重要的技术之一。目前已经建立了用于各种不同目的的DNA提取方法,这些方法也被用于生物学,尤其是生物工程的各个方面。但是,对于不同的植物样品,由于其组织成分的差异,采取的DNA 提取方法不完全一致。.文献综述

2.1 南方红豆杉概况

红豆杉属(Taxus L．)植物属红豆杉科，为常绿乔木或灌木。红豆杉(Taxus mairei)又名紫杉、赤柏松，是第三世纪孑遗植物，被称为植物王国里的“活化石”，因其资源稀少，被列为世界珍稀树种加以保护，在我国为珍稀濒危物种。在几千万年的历史长河中，红豆杉是历经强度阳光、低薄空气、高温干旱、严寒冰川等地球气候巨变的考验，演化遗留下来的物种。其树体极大的适应存活能力所具有的各种生物石碱、化合物，既是本身生存的需要，也是现在被人类认识和开发的珍稀贵重药物。南方红豆杉广泛分布福建、浙江、安徽、江西、湖南、湖北、四川等省，生于海拔1300米以下，喜湿润的微酸性粘质土壤，多生长在山的中下部及沟谷旁，常与刺栲、丝栗栲、甜槠、木荷、杜英、枫香、杉木等混生。2.2 南方红豆杉的化学组分

根据国家标准共测定我国南方红豆杉的平均化学指标分别为(10项): 原料含水率7.94﹪、冷水抽提物0.385﹪、热水抽提物0.765 ﹪、乙醚抽出物2.855﹪、NAOH抽出物12.17 ﹪、苯醇抽出物1.391 ﹪、木素含量27.01 ﹪、半纤维素含量11.78 ﹪、综纤维素含量65.5 ﹪、PH值5.33[3]。2.3 红豆杉主要价值

红豆杉因其次生代谢物质紫杉醇良好的抗癌效果而受到人类的关注，从红豆杉树皮和嫩叶中提取的紫杉醇，是继阿霉素和顺铂之后被公认最好的广普、强活性天然抗癌药。红豆杉除了重要的药用价值以外，其独特的外观造型、四季常青的鲜艳绿色，又是不可多得的绿化树种，具有很高的观赏价值。其次红豆杉属植物木材由于其优良品质还是不可多得的木材树种。2.4 银杏概况

银杏（Ginkgo Liloba L.）俗称白果，公孙树。最早出现于3.45亿年前的石炭纪，曾广泛分布于北半球的欧、亚、美洲，与动物界的恐龙一样称王称霸于世，至50万年前，发生了第四纪冰川运动，地球突然变冷，绝大多数银杏类植物濒于绝种，唯有我国自然条件优越，才奇迹般的保存下来。所以，科学家称它为“活化石”，“植物界的熊猫”。2.5 银杏主要价值

银杏叶也具有重要的药用价值。到目前为止已知其化学成分的银杏叶提取物多达160余种。主要有黄酮类、萜类、酚类、生物碱、聚异戊烯、奎宁酸、亚油酸、蟒草酸、抗坏血酸、a-已烯醛、白果醇、白果酮等。中国科学院植物所等单位于60年代用银杏叶研制出舒血宁针剂，经试验对冠心病、心绞痛、脑血管疾病有一定的疗效。同时，银杏叶也可以作为农药使用[4]。

3.实验原理

2.1 CTAB法提取原理

CTAB(cetyltriethyammoniumb romide,十六烷基三甲基溴化铵)法是一种快速简便提取植物基因组DNA的方法：先将新鲜的叶片放在液氮中研磨，破碎其细胞，然后加入CTAB分离缓冲液。再经氯仿-异戊醇抽体除去蛋白质，最后得到DNA。

2.2 SDS法提取原理

SDS法(Sodium dodecyl sulfate，十二烷基磺酸钠)先将新鲜的叶片在液氮中研磨破碎其细胞壁，然后加入SDS使其细胞膜破裂。并同时将蛋白质、多糖等杂质同核酸分开。加入KAc可使SDS—蛋白质复合物转变为更小的钾盐形式，使沉淀更加完全[5]。

2.3 紫外吸收法分析原理

组成核酸分子的碱基，均具有一定的吸收紫外线特性，最大吸收值在波长为25038 ［3］丁晓东，吕柳新.从顽拗植物荔枝中提取基因组DNA技术的研究［J］.应用与环境生物学报.2000，6(2)：142370.［5］王景雪, 孙毅, 高武军.-种简便实用的植物总DNA提取方法[J].山西大学学报，2000，23(3): 27139.［8］黄丰, 周联等.植物中药材总DNA提取方法比较[J].中药新药与临床理,1999 ,10(1): 1814.［11］李思光，罗玉萍, 陈万秋等.猕猴桃基因组DNA的提取及其RAPD扩增研究[J].南昌大学学报，2001，25(3):264–268.

第二篇：DNA提取方法和试剂作用汇总

1试剂的作用

氯仿的作用？

氯仿：克服酚的缺点；加速有机相与液相分层。

最后用氯仿抽提：去除核酸溶液中的迹量酚。（酚易溶于氯仿中）

用酚-氯仿抽提细胞基因组DNA时，通常要在酚-氯仿中加少许异戊醇，为什么？

异戊醇：减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。异戊醇可以降低表面张力，从而减少气泡产生。另外，异戊醇有助于分相，使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。

用乙醇沉淀DNA时，为什么加入单价的阳离子？

用乙醇沉淀DNA时，通常要在溶液中加入单价的阳离子，如NaCl 或 NaAc，Na+中和DNA分子上的负电荷，减少DNA分子之间的同性电荷相斥力，而易于聚集沉淀。DNA提取分为三个基本步骤

每个步骤的具体方法可根据样品种类、影响提取的物质以及后续步骤的不同而有区别。

.细胞的破碎

细菌有坚硬的细胞壁，首先要破碎经胞。方法有三种;①机械方法：超声波处理法、研磨法、匀浆法;②化学试剂法：用SDS处理细胞;③酶解法：加入溶菌酶或蜗牛酶，都可使细胞壁破碎。

利用研磨或者超声破碎细胞，并通过加入去污剂以除掉膜脂。

加入蛋白酶，醋酸盐沉淀，或者酚/氯仿抽提，以除掉细胞内的蛋白，如与DNA结合的组蛋白。将DNA在冷乙醇或异丙醇中沉淀，因为DNA在醇中不可溶而黏在一起，这一步也能除掉盐分。另外，目前也有利用吸附过柱的方法提取DNA的商业化试剂盒。

DNA提取的几种方法(1).浓盐法

A.利用RNA和DNA在电解溶液中溶解度不同，将二者分离，常用的方法是用1M 氯纳抽提,得到的DNA粘液与含有少量蛋白质 氯仿一起摇荡,使乳化,再离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间，而DNA位于上层水相中,用2倍体积95%乙醇可将DNA 钠盐沉淀出来.B.也可用0.15 MNaCL液反复洗涤细胞破碎液除去RNA,再以1MNaCL提取脱氧核糖蛋白,再按氯仿---异醇法除去蛋白.两种方法比较,后种方法使核酸降解可能少一些.C.以稀盐酸溶液提取DNA 时,加入适量去污剂,如SDS可有助于蛋白质与DNA 的分离。在提取过程中为抑制组织中的DNase对DNA 的降解作用,在氯化钠溶液中加入柠檬酸钠作为金属离子的烙合剂.通常用.15MNaCL,0.015M柠檬钠,并称SSC溶液,提取DNA.（2）.阴离子去污剂法;用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性,可以直接从生物材料中提取DNA.由于细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合,因为阴离子去污剂能够破坏这种价键,所以常用阴离子去污剂提取DNA

（3）.苯酚抽提法：苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制了DNase的降解作用.用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA 联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。离心分层后取出水层，多次重复操作，再合并含DNA 的水相，利用核酸不溶于醇的性质，用乙醇沉淀DNA。此时DNA是十分粘稠的物质，可用玻璃漫漫绕成一团，取出。此法的特点是使提取的DNA保持天然状态

（4）.水抽提法:利用核酸溶解于水的性质,将组织细胞破碎后,用低盐溶液除去RNA，然后将沉淀溶于水中，使DNA充分溶解于水中,离心后收集上清液.在上清中加入固体氯化钠调节至2.6M.加入2倍体积95%乙醇,立即用搅拌法搅出.然后分别用66%，80%和95%乙醇以及丙铜洗涤,最后在空气中干燥,既得DNA样品.此法提取的DNA中蛋白质含量较高,故一般不用.为除蛋白可将此法加以改良,在提取过程中加入SDS.1.动物来源的DNA的提取 1.1经典提取方法

酚抽提法、异丙醇沉淀法以及甲酞胺裂解法是提取DNA最为经典的方法，目前很多方法的改进都是在这些方法的基础上进行的，这三种方法均利用蛋白酶K和十二烷基硫酸钠(SDS)消化破碎细胞。在前两种方法中裂解液先用酚/氯仿去除蛋白质，再分别用乙醇或异丙醇沉淀DNA。甲酞胺法是利用高浓度的甲酞胺解聚蛋白质与DNA的结合，然后利用透析来处理DNA样品。这些经典方法获得的DNA纯度很高，能够满足各种试验的要求，但操作繁琐，用时长，且所用试剂具有一定的毒性。

1.2 玻璃棒缠绕法

该 法 用 盐酸肌裂解细胞，然后将细胞裂解物小心铺在离心管中的乙醇上，用一个带钩的或前端为U形的玻璃棒在这两层液体的交界面慢慢搅动，沉淀出的胶状DNA缠绕在玻璃棒上。玻璃棒上的DNA经多次乙醇浸泡并于室温下蒸干乙醇，由胶状逐渐回缩，然后浸人TE中过夜，使其重新吸水膨胀进而和玻璃棒分离。这种方法对操作技术要求较高，但简单快速。

1.3 血细胞DNA的快速提取法

采用 非离子变性剂NP40(乙基苯基聚乙二醇)代替SDS裂解细胞，提取细胞核，然后用酚/氯仿抽提DNA。这样从血液中分离获得的DNA纯度高，能够满足各种临床检验和实验的需要。也可采用NP40和Tween-20同时作用破碎细胞膜，以避免SDS对以后步骤的负面作用。Ba sun i等 [‘〕采用了4种常用的从血液中提取DNA的方法:High Pure Viral Nucleic 试剂盒法、QlAamp试剂盒法、Tri-PureTM试剂分离提取法以及经典酚抽提法，对通常作抛弃处理的血凝块进行人DNA 及病毒DNA的抽提，发现前两种方法可以迅速高效获得目的DNA，从而建立了由血凝块中提取DNA的方法，扩大了临床检验样本的来源。

1.4 玻璃颗粒吸附法

在该 法 中首先利用含异硫氰酸肌的细胞裂解液裂解细胞，然后加人含有能够与DNA 结合的玻璃颗粒的缓冲液，经沉淀收集结合染色体DNA的玻璃颗粒，利用洗脱液进行洗脱获得DNA。不仅玻璃颗粒可以与DNA 进行结合，一定大小的硅胶颗粒也可以与 DNA进行结合，据此，不少实验工作者实践了很多利用颗粒结合DNA 的提取方法。Pichler等[2〕在从抹香鲸(Physeter macrocephalus)牙齿及骨骼中抽提DNA时采用了一种以二氧化硅为吸附介质的方法，从抹香鲸标本骨骼组织中钻取的少量粉末中获得了足够用于分析的DNA产物，此方法扩大了对稀有哺乳动物DNA研究的取材范围。Caldarelli-stefano等[3〕在从福尔马林固定、石蜡包埋的人体组织标本中提取DNA时利用小磁珠作为结合核，也获得了理想的纯化 DNA。很多试剂公司也依此设计生产了许多颗粒提取试剂盒，Pint。等[4]就探讨了采用 Gibc。公司的GlassMAX系统，对福尔马林固定的组织进行DNA提取的具体操作方法，目前这些试剂盒在临床上广为应用，省时省力。

1.5 三乙醇胺月桂基硫酸盐(TLS)法

由于 常 规 方法中使用的蛋白酶K的水解条件不好掌握，采用TLS来提取组织、细胞以及外周血DNA可以克服这一弊端。TLS是一种较强的表面活性剂，将其直接作用于细胞或组织匀浆，可迅速溶解细胞膜、核膜，而且蛋白质与其结合后即失去对DNA 的结合，进一步的纯化可采用常规方法。

1.6 临床病理标本的DNA提取方法

由于 PC R技术不仅可用于基因分离、核酸序列分析，还可用于突变体和重组体的构建、基因表达调控研究、基因病的诊断及肿瘤发生机理的探讨等。近年来，PCR技术已广泛应用于病理学研究，尤其对福尔马林固定石蜡包埋病理标本进行相关的研究更成为关注的焦点。对于从这些病理标本中提取 DNA的方法研究也很多。一般采用酚/氯仿抽提法，该法虽然效率较高，但费时费力，而且其操作中要求多次离心，增加了样品污染的可能性。近年来很多高效灵敏的方法在实践中得以采用，这些方法通常采用加热或微波法〔s〕去除包埋的石蜡，使用Sephadex G-5。柱色谱或盐析法[s7等去除蛋白质。高文涛[71等在研究福尔马林固定石蜡包埋组织 DNA提取方法对PCR的影响时，发现在组织切片中加人鳌合树脂(Chelating Resin，亚氨基二乙酸)提取获得的DNA可取得较好的PCR扩增结果。Coombs等〔s〕则采用热循环方法，将标本上的蜡融人样品溶液，在酶的作用下进行裂解，然后用Chelex-100进行吸附，离心去蜡，这种方法安全、简便、有效、经济。1.7 盐析法

该 法用 饱 和氯化钠代替有机溶剂去除蛋白质，所获得的DNA质量可以满足PCR模板的要求，但产率相对较低，纯度较差。谭建明等[9]对上述盐析法进行了改进，即将处理过的样本加人SDS和蛋白酶K后，在56'C 消化1h，然后用饱和氯化钠沉淀蛋白质，并经离心除去，上清直接用乙醇沉淀DNA。该法简化了DNA的抽提步骤，可用于人体各种样本DNA的提取，所获DNA的纯度可以满足各种检测的需要。植物来源的DNA提取

利用 基 因工程手段对植物进行定向改造，已成为当今植物育种学发展的一个新领域，植物基因工程操作离不开植物基因组总 DNA的制备，不同植物的核酸结合蛋白的情况各不相同，因而要采取不同的提取方法[10]。由于植物中次生代谢产物— 多酚类化合物可介导DNA降解，而多糖的污染也是影响植物DNA纯度最常见的问题，这些多糖能抑制限制酶、连接酶及DNA聚合酶等酶类的生物活性。因此要从富含多酚和多糖的植物组织中分离获得高质量的基因组 DNA也并非易事[11l。目前采用的方法有以下几种。

2.1 十六烷基三乙基澳化按(CTAB)法

CTAB 是 一种阳离子去污剂，它能与核酸形成复合物，这些复合物在低盐溶液中会因溶解度的降低而沉淀，而在高盐溶液中可解离，从而使DNA和多糖分开，再用乙醇沉淀DNA 而除去CTAB。在该法中使用的聚维酮(PVP)与多酚结合形成复合物，从而可有效避免多酚类化合物介导的DNA降解[121。王卓伟等[13〕在对桑叶DNA提取方法研究过程中发现PVI〕还能有效地去除多糖。罗志勇等[14〕在研究中对这种方法进行了几点改进: ①提高CTAB的浓度;②对于含多酚类较多的植物，增加CTAB提取缓冲液中琉基乙醇的含量，同时加人PVP使其与多酚类物质结合形成复合物;③增加低盐沉淀缓冲液的量;④增加高盐溶液中盐的浓度。用改进的方法从人参、西洋参、三七等药用植物中分离获得了高纯度的DNA, Porebski等[1s]在沉淀粗提 DNA时，将提取缓冲液中氯化钠的浓度提高至2.5m o卜L-’以使DNA在高盐缓冲条件下优先沉淀，可更有效地除去多糖。Stein等[16] 对传统的CTAB法进行了优化，创建了一种从新鲜草本植物样本中提取DNA的方法。首先在特制的有96个孔的托盘上种植植物样本，并依照不同样本在托盘中的位置进行编号，然后取适量植物叶子分装在充满提取液的塑料袋中，除去袋中的空气并封口，再用特制的手工匀化器将各袋中的样本混匀，56`C孵育 1h后将袋中的液体取出进行离心以及DNA 的沉淀。Xin等〔17〕则采用简易的96孔托盘作为提取时的容器，将多种植物样本经研磨处理后分别放在不同的孔中进行提取，在一天内由一人就可完成上千个样本的DNA提取，为高通量植物基因分析及筛选提供了极大的便利。

2.2 SDS法

为 了避 免 CTAB法试验步骤多、操作繁琐的不足之处，近年来又提出了利用SDSTris-Cl--EDTA等直接裂解细胞使其释放出DNA的方法]。在该法后续的DNA纯化过程中通常采用酚/氯仿处理，但对于植物 DNA纯化不是一个很好的选择，因为酚的使用可降低DNA的提取效率和纯度。在用该法提取DNA的过程中采用较大的离心力和较长的离心时间，然后用氯仿一异戊醇代替酚来去除变性蛋白质，从而克服了由于酚的掺人及残留对以后酶切带来的困难。用琉基乙醇代替SDS，对大豆DNA分离提取能够更有效地去除蛋白质，而且可以有效防止褐变，获得天然双链高分子量的DNA产物，并且减少了SDS对 PCR、随机扩增多态性DNA技术(Random amplified polymorphic DNA, RAPD)等操作的影响。在对辣椒DNA进行提取时为了提高DNA的产率将待提取的植物材料首先在液氮中研磨成粉末，并且针对辣椒叶子中多酚类物质极少的特点将其中的加人PVP的步骤省去，消除了PVP对以后操作的影响.2.3 氯化千法在对称猴桃的基因组DNA 提取过程中选用了氯化节法，与其他方法相比该法的得率较高，其原因可能是氯化节不仅可与植物细胞壁上的多糖经基反应生成醚，而且与细胞液中多糖物质的All基反应，起到破坏糖链的作用，利于DNA的释放和提纯。

2.4 高盐低pH法

该 法 中 所用的提纯试剂仅为无机盐和异丙醇。通常采用的无机盐为醋酸钾，低pH的醋酸钾是有效的蛋白质沉淀剂。与一般氯仿一异丙醇反复抽提去除蛋白质的操作相比该法操作更方便省时，所需样品量少，适用于 濒危植物DNA的提取。

2.5 果胶酶法

Ste ve n等 [2s采用果胶酶对植物细胞破碎后的抽提混合物进行消化处理使与DNA共沉淀的胶状物质分解成小的片段，从而无法与DNA一起沉淀下来，降低了DNA的纯化难度，提高纯化效率。微生物来源DNA的提取

常规 的微 生物DNA提取多是根据某种微生物的具体特点选择合适的方法。在实际的科学研究过程中，很多科学工作者通过实践总结出许多快速实用的提取方法，现择其中比较典型的加以总结。

3.1 细菌质粒的提取方法

质粒是独立于细菌染色体DNA之外的环状DNA，它能携带外源基因进人细菌进行扩增，或表达外源基因，是基因工程中常用的载体，在DNA重组技术、DNA测序、转基因等方面具有广泛的应用。对于细菌质粒的提

取比较经典的方法有:碱裂解法、煮沸法、SDS裂解法以及Triton-溶菌酶裂解法等。这些方法的选择取决于质粒的大小、细菌菌株的性质等。Keunosky等GE_发展了一种以 Zn'+诱导DNA沉淀的方法，在该法中利用一定浓度的ZnCl:溶液使一定体积的细菌菌液质粒DNA大量沉淀，无需多次离心，大大简化了抽提的步骤。

近年 来，一些生物技术公司，比如Promega公司及Qiagen公司等纷纷推出质粒抽提试剂盒，这些试剂盒多运用树脂材料或硅胶来特异性的吸附质粒DNA，提取过程用时少，效率高。

3.2 真菌DNA提取方法

对 真菌 DNA的提取关键是破碎细胞，通常采取酶解破壁法或以液氮冷冻处理增加细胞壁脆性的物理破壁法。在这两种方法中酶解破壁法较为简单，易于操作和控制，而物理破壁法在处理过程中容易造成细胞核的大量破损。在提取获得核酸一蛋白质复合物后，对其中蛋白质的沉淀也多采用传统的氯仿一异戊醇沉淀法或高盐沉淀法。韩利刚等C25用CTA13法直接从丝状真菌的新鲜菌丝中提取DNA，并将所提取的DNA进行 RAPD，得到了较清晰的扩增图谱。Loeffler 等[Z6为满足快速灵敏准确的临床检验的需要，利用MagNA Pure LC系统建立了一种实用的快速提取方法，该法自动化程度高，避免了可能的交叉污染。Manian等[z7〕在对真菌进行DNA抽提时采用几个循环的快速制冷、煮沸以破碎真菌细胞壁，并通过Qiagen 公司的QIAquick DNA纯化柱，迅速从极微量的真菌中获得高纯度的DNA大分子。3.3 结核杆菌DNA的提取方法

利用 PC R微孔板杂交技术检测临床标本中结核杆菌DNA是诊断结核杆菌感染的一种快速灵敏和特异的方法。从不同的临床标本中获得DNA是检测准确和成功的关键。而不同来源的结核杆菌又分别受到不同来源材料的影响，所以提取方法各不相同。同时由于结核杆菌的细胞壁比较厚不易破碎，一般的微波法、异硫氰酸肌法、冻融法等难以破坏结核杆菌的细胞壁。通常采取的方法有:经典酶一酚一氯仿法，碱一SDS裂解法，碱裂解煮沸法，超声裂解法，Chelex-100 法，玻璃粉一硅吸附法等。杨正林等[28〕通过对以上几种方法的比较发现玻璃粉一硅吸附法操作简单，假阳性低，适合临床检测使用。3.4 土壤微生物总DNA的提取方法

土壤 中 细 菌的含量丰富，种类齐全，从中提取细菌DNA可用于检测不可培养的细菌，跟踪某些目标菌或重组基因在自然环境中的行为，也可用来解释土壤微生物生态系统中的基因的多样性及其随环境的变化。从土壤中提取和纯化DNA是最关键的技术之一。Courtoi:等[29]对比了在土壤中直接裂解微生物体、然后提取DNA和先将微生物菌体通过梯度离心与土壤颗粒分开再进行提取的方法，利用PCR技术以及杂交技术检测不同方法获得DNA的种类和纯度，发现前一种方法具有更高的效率，能够提取获得较多微生物物种的 DNA。张瑞福等[30]采用SDS高盐提取法和透析袋回收法对9种不同来源的土壤进行微生物DNA的提取，与通常采用的对菌体细胞的超声破碎法以及对粗提DNA的微型柱纯化法相比，既保证了一定提取与回收效率，又兼顾了DNA的质量，使DNA在提取和纯化过程中不会受到损伤。4 海洋生物DNA的提取方法

海洋 是 地 球上最大的生物资源库，同时由于海水的保护使海洋生物变化很少，物种得到较好的保存，这样就为研究生命现象的基本问题提供了丰富的资料。在利用这些资源探讨诸如生命的起源、生物进化、生物与环境的关系、改造海洋生物以为人类服务(如生产某种药物)时离不开对生物核酸的研究。对于海洋来源的动物、植物、微生物由于其不同于陆生生物的组织和细胞结构特点往往采用不同的DNA提取方法。

张海 琪 等 [31_在对不同方法保存的大黄鱼(Pseudosciaena crocea)肌肉样品基因组 DNA进行提取时发现，经福尔马林、乙醇及含有EDTA的乙醇保存的样品可以同鲜活样品和冷冻样品一样获得基因组DNA，但相比之下采用乙醇作为固定剂更方便快速，所提取的DNA用于RAPD分析，获得了满意的效果。杨文新等[32〕利用75%的乙醇固定鲍鱼(Haliotis discus)样本并进行DNA的提取，证明用乙醇固定海洋动物组织是一种切实可行的方法，材料处理后可同步提取，增加了实验的同步性、可比性，适用于大量样本的提取。由于组织中含有许多DNA酶，绝大多数DNA酶需要一个二价阳离子作为辅助因子，因此采用含适量EDTA的乙醇固定剂是野外标本采集和运输的一种更简便有效的方法。

韩兵 社 等 33:针对传统的有机溶剂提取工艺进行改进，应用多种萃取液体系从废弃物鱿鱼肝脏中提取核酸，与原工艺相比，核酸提取产量提高30%-60%，整体工艺得到简化，而且避免了有机物的残留。

赤 潮 是 在特定的环境前提条件下，海水中的某些浮游生物、原生动物或细菌爆发性增殖或高度聚集而引起水体变色的一种有害生态现象，对海洋渔业、水产资源以及人类的健康造成很大的威胁。发生赤潮的生物类型主要为藻类，铜绿微囊藻(Microcytis aeruginosa)是造成赤潮的藻类之一。陆源等[34〕用乙醇乙醚混合液对纯化的铜绿微囊藻作预处理，破坏了其胶质鞘，从而使蛋白酶K和 SDS能更好地直接作用于其细胞壁，细胞内的DNA释放完全，提高了总DNA的得率。通过提取获得的DNA有助于开展对有害藻类的研究，为防范赤潮提供依据。在对 紫 菜(Porphyras p.)进行DNA提取时，郭宝太等[35〕先用海螺酶处理样品制备紫菜体细胞，然后用SDS和蛋白酶K裂解细胞提取总DNA，再用Wizard DNA clean-up;树脂进行纯化。经海螺酶处理的紫菜细胞解决了通常采用的液氮破碎细胞后裂解物勃稠、DNA得率低且有严重的多糖污染等难题。但这种方法对植物组织需求量较多，不适于个体体积小的紫菜。刘必谦等[36〕采用美国Roche公司的DNA Isolation Kit for Cell and Tissue和上海生工公司的UNIQ-10小量柱式基因组DNA提取试剂盒对个体体积较小的圆紫菜(Porphyra suborbiculato)、铁钉菜(Ishige okamurae)等进行DNA 的提取，获得高纯度的基因组DNA，完全能满足酶切片段长度多态性(Amplified Fragment Length Polymorphism, AFLP)技术的需要。

陈子 桂 等[371以海洋尾丝虫(Uronema marinum)为材料，针对纤毛虫难以建立培养以及个体丰度不高等特点，就微量条件下提取DNA的方法进行了探讨，成功地获得了活体直接提取、活体酚/氯仿抽提、固定标本直接提取以及固定标本酚/氯仿抽提等四种简便有效的微量DNA提取方法，解决了纤毛虫微量DNA提取的困难。

综合 DN A的提取方法，虽然不同生物 DNA的提取方法不尽相同，但各种提取方法也有很多相通之处，可以相互借鉴。随着生物技术的飞速发展，对这一技术的经验总结将会越来越多，一些生物领域新的DNA提取方法也将逐渐固定下来，更为简捷、高效的方法也必将出现，为基因工程提供更高纯度的DNA.1）学习并掌握动物组织总DNA的提取方法及其原理。（2）从肝脏组织中提取到一定量的纯净的DNA样品。【实验原理】

DNA是一切生物细胞的重要组成成分，主要存在于细胞核中。通过研磨和SDS作用破碎细胞；苯酚和氯仿可使蛋白质变性，用其混合液（酚：氯仿：异戊醇）重复抽提，使蛋白质变性，然后离心除去变性蛋白质；RNase降解RNA，从而得到纯净的DNA分子。【仪器、材料、试剂】

（一）仪器 1．高速离心机 2．烘箱 3．冰箱 4．水浴锅 5．微量移液器 6．高压灭菌锅

（二）材料 1．生理盐水

2．十二烷基硫酸钠（SDS）3．三羟甲基氨基甲烷（Tris）4．乙二胺四乙酸（EDTA）5．饱和酚 6．氯仿 7．异戊醇 8．无水乙醇 9．75%乙醇 10．蛋白酶K 11．RNase酶

12．手术剪刀、镊子、吸水纸 13．微量取液器

14．研钵、1.5mL 离心管、一次性手套、1.5mL离心管架、记号笔

（三）试剂配制 1．Tris–HCL 1mol/L PH8.0 50ml 配制方法：

40ml双蒸水，6.057g固体Tris放入烧杯中溶解，用浓盐酸调PH值到8.0，转移到50ml容量瓶中，加入双蒸水定容，摇匀后，转到准备好的输液瓶中，贴上标签，高压灭菌后，降至室温，4℃保存备用。

2．生理盐水: 0.85%NaCL 100ml 配制方法：

在20ml双蒸水中溶解0.85g固体NaCL，加水定容至100ml，摇匀后，转到准备好的输液瓶中，贴上标签，高压灭菌后，降至室温，4℃保存备用。3．EDTA 0.5mol/L PH8.0 50ml 配制方法：

将9.08g的EDTA·Na2·2H2O溶解于40ml双蒸水，用1g的NaOH颗粒（慢慢逐步加入）调PH值到8.0，用50ml容量瓶定容，如果EDTA难溶，先加NaOH溶解，然后逐步加EDTA·Na2·2H2O。

4．TES缓冲液（释放DNA）100ml 配制方法：

将0.5844g的5 mol/lNaCl溶解于80ml双蒸水，在分别加入1ml的0.5 mol/l EDTA、0.2ml的Tris-HCl(pH=8.0)，加定容至100ml, 摇匀后，转到准备好的输液瓶中，贴上标签，高压灭菌后，降至室温，4℃保存备用。

5．10% SDS（变性剂 破细胞壁）100ml 配制方法：

将10g的十二烷基硫酸钠（SDS）溶解于80ml双蒸水于68℃加热溶解，用浓HCl调至PH=7.2，定容至100ml，摇匀后，转到准备好的输液瓶中，贴上标签，4℃保存备用。6．蛋白酶K（降解蛋白质）：20mg/mL 无菌三蒸水溶解。7．RNA酶（降解RNA）配制方法：

将胰RNA酶（RNA酶A）溶于10mmol/L的Tris·CL（PH7.5）、15mmol/LNaCL中，配成10mg/ml的浓度，于100℃加热15min，缓慢冷却至室温，分装成小份存于–20℃。8．氯仿：异戊醇=24：1 100ml 按24:1的比例加入氯仿、异戊醇，摇匀，转到准备好的瓶中，贴上标签，4℃保存备用。9．TE缓冲液（溶解DNA）PH8.0 50ml 配制方法：

将0.5ml 的10mmol Tris-HCl(PH8.0)、0.1ml的0.5mol/l EDTA(PH8.0)加入到50ml的容量瓶中，调PH8.0定容至50ml摇匀后，转到准备好的瓶中，贴上标签，高压灭菌后，降至室温，4℃保存备用。【实验步骤】

1．组织块解冻，用生理盐水洗去血污，剪取约0.5g组织，放入1.5ml离心管中，剪碎。2．加入0.45ml TES混匀，再加入50ul SDS（10%），5.0ul蛋白酶K（20mg/ml），充分混匀后，于56°C保温4-6h，每2h摇1次。3．放置到室温，加入等体积饱和酚（500ul），颠倒混匀，10000r/m，离心10m，分离水相和有机相，小心吸取上层含核酸的水相，到一个新的1.5ml离心管。4．加入等体积酚：氯仿：异戊醇（25：24：1），颠倒混匀，10000r/m，离心10分钟，取上层转移到新的1.5ml离心管中。5．加入等体积氯仿：异戊醇（24：1），颠倒混匀，10000r/m，离心10分钟，取上层清液到一个新的1.5ml离心管。6．加入2.5倍体积的-20°C预冷的无水乙醇沉淀DNA，观察现象。7．12000 r/m，离心10分钟，弃乙醇。8．-20°C保存的75%乙醇洗涤，10000 r/m，离心5分钟，去乙醇，55°C干燥DNA。9．加入适量TE溶解DNA（具体依DNA的多少而定），-20°C保存备用。【注意事项】

1．抽提每一步用力要柔和，防止机械剪切力对DNA的损伤。2．取上层清液时，注意不要吸起中间的蛋白质层。3．乙醇漂洗去乙醇时，不要荡起DNA。

4．离心后，不要晃动离心管，拿管要稳，斜面朝外。

第三篇：教育研究方法开题报告

桂林市农村留守儿童教育问题研究”课题

开题报告

数学科学学院 数学与应用数学 201010700015 徐小鸿 一．研究的背景

所谓留守儿童，是指父母双方或一方流动到其他地区工作，孩子留在户籍所在地不能和父母共同生活在一起的儿童,大规模的人口流动形成了一个特殊群体：留守儿童。父母外出打工后，孩子留在了家中(主要在农村)，他们被称为留守儿童。

由于地理和历史等原因，我国不同区域的经济发展很不平衡，农村人地矛盾尖锐。在市场经济迅猛发展的推动下，大量农村剩余劳动力为改变生存状况外出务工，其中大部分为夫妻一同外出，因经济等原因无法将子女带在身边，由此引发“留守儿童”问题。由于留守儿童多由祖辈照顾，父母监护教育角色的缺失，对留守儿童的全面健康成长造成不良影响，“隔代教育”问题在“留守儿童”群体中最为突出。

据调查显示，父母外出打工后，与留守儿童聚少离多，沟通少，远远达不到其作为监护人的角色要求，而占绝对大比例的隔代教育又有诸多不尽人意处，这种状况容易导致留守儿童“亲情饥渴”，心理健康、性格等方面出现偏差，学习受到影响。

二、研究目的：

课题研究、实施的主要目的在于将留守儿童的这一特殊群体的问题与社会转型期少年儿童发展中普遍存在的共性问题区别开来，真实、全面地了解留守儿童的心理、学习、生活状态，了解留守儿童的教育状况、分析留守儿童长远发展趋势和中国社会的长远发展趋势，探索有效推进留守儿童教育、发展的方法和手段，为学校和政府相关部门制定政策提供背景资料和学术支持。

三、课题研究的价值

1、通过本课题的研究，找到农村留守儿童的学习、生活和行为习惯方面存在的问题，分析这些问题产生的原因。

2、加强家校联系，对留守儿童的学习、生活和行为习惯进行指导，培养留守儿童健全的个性心理品质及社会适应能力。

3、有计划地推行行之有效的措施与方法，狠抓落实，全面推广“留守儿童之家”工程，为留守儿童创建健康、安全、平等的成长环境。

四、国内外相近课题研究情况： 由于国外国情的差异，留守儿童比例较少，留守儿童教育问题并不十分突出，所以相关的课题研究基本没有。

国内对留守儿童问题的关注，主要是近几年才有的。中央教科所和部分市县教育部门对留守儿童教育问题的研究逐渐增多，大多正在课题研究过程。

五、研究的方法 1、文献资料法

搜集、整理与课题有关的教育教学理论，为课题研究提供充实可行的理论依据。、问卷调查法

抽样调查桂林市农村的一些学校留守儿童基本情况及存在的问题。3、教育实验法

对留守儿童与其他学生进行比较实验研究，以便发现、验证因果规律。4、经验总结法

对收集的资料和实验研究结果主要运用经验总结法，探求留守儿童的教育方法和手段。5、案例研究法

选择恰当的学生样本，通过跟踪调查、教育引导，摸索留守儿童教育的一般规律。

六、正文提纲：

1、桂林市农村留守儿童基本情况调查研究。

2、桂林市农村留守儿童生存现状分析。

3、桂林市农村留守儿童教育中存在的问题及产生原因。

4、桂林市农村留守儿童个案研究。

5、桂林市农村留守儿童教育的对策与建议。

七、进度安排

第一阶段：准备阶段（2013年4月15――2011年4月30）

计划开题，收集资料调查桂林市留守儿童教育现状，确定研究子课题，搜集已有研究成果，学习理论，写出研究实验方案。

第二阶段：实验阶段（2012年5月――2012年5月）

坚持学习、实践、研究。边实施，边改进，边研究，积累收集资料，总结归纳桂林市农村留守儿童教育存在的问题，研究桂林市农村留守儿童教育的对策，撰写阶段研究报告、典型案例分析或论文。

第三阶段：结题阶段（2013年6月――2013年6月）收集、整理实验原始资料，撰写实验课题研究报告和课题总结，进行结题验收和研究成果交流。

八、目前的困惑

1、怎么样做到尽可能深入了解留守儿童的真实情况，做到数据的均衡性。

2、怎样能和留守儿童的父母做一个交流，探讨下有关留守儿童中的一些问题在那些父母心里的真实想法，或者让他们重视孩子身心成长的重要性。

九、参考文献 ［1］ 徐群．关注留守儿童教育与创建和谐新农村［J］．现代农业科技，2007（11）:156-157．

［2］ 常青.农村留守儿童人格特征研究——以江西玉山县为例［D］．华东师范大学硕士论文，2007：17-23． ［3］ 方铭琳．留守儿童的关爱教育机制［J］．中国农村教育，2007（10）:32．

第四篇：15年开题报告研究方法

15年开题报告研究方法

随着新课程改革的不断深人，“教师成为研究者”的观念逐渐深人人心。开展和参与课题研究是教师获得自我持续发展能力的最佳途径。事实证明，通过开展课题研究，边学习边做课题，边研究边实践，逐渐成为研究型的教师不乏其人。

课题研究是教育科研活动的一项重要内容。“凡事预则立，不预则废”。对于课题研究，开题报告如同建筑师的蓝图。有了好的开题报告，才能使研究工作者有计划、有系统、有组织地开展研究工作，以保证课题研究任务的顺利完成。因此，制定开题报告是课题由设想转化为实际行动的关键步骤。当前许多教师由于过去从未做过课题研究，现在要申报课题，撰写课题开题报告不知从何人手。为了使广大教师更加积极而有效地开展课题研究活动，培养、提高教师撰写课题开题报告的能力和水平，本文从课题开题报告的含义、作用、结构等方面来谈教师应该如何规范撰写开题报告，力求对教师提供一点启示。

一、课题开题报告的含义与作用

著名的物理学家爱因斯坦说过，提出一个问题比解决一个问题更重要。何谓有价值、有创见性的问题?这样的问题从何而来呢?这需要研究者长期实践、细心观察和深思熟虑。当自己提出的课题得到上级认可后，就要把自己的研究方案设计好，即撰写科研课题开题报告。

课题开题报告就是课题研究方案的设计、规划和制定。换言之，就是当课题方向确定之后，课题负责人在调查研究的基础上撰写的课题实施计划。开题报告主要说明这个课题有价值进行研究，自己有条件进行研究以及准备如何开展研究等问题，也可以说是对课题的论证和设计。

撰写课题开题报告是提高选题质量和水平的重要环节，是创新新知，不是可有可无的。正如学者文翁说过，“搞好开题报告的主要目的是促使大家理清研究思路，完善研究设计”。制定课题研究计划和安排，是为解决自己提出的问题提供探索的途径。课题开报告初步规定了课题研究各方面的具体内容和步骤，对整个研究工作的顺利开展起着关键的作用。对于科研经验较少的人来讲，一个好的方案，可以使他们明确课题研究的方向，避免发生进行一段时间后不知道下一步干什么的情况，保证整个研究工作有条不紊地进行。可以说，课题开题报告水平的高低，是一个课题质量与水平的重要反映。没有科学的开题报告，就没有科学而有价值的成果。随着教育科研管理工作规范化不断加强，开题论证问题越来越受到教育科研管理部门的重视。

二、撰写课题开题报告的基础性工作

写好科研课题开题报告要了解其基本结构与写法，但“汝果欲学诗，功夫在诗外”，重要的还是要做好基础性工作。首先，要了解别人在这一领域研究的基本情况。研究工作最根本的特点就是要有创造性，熟悉了别人在这方面的研究情况，才不会在别人已经研究很多、很成熟的情况下，重复别人走过的路，而是站在别人研究的基础上，从更高层次、更有价值的方面去研究;其次，要掌握与研究课题相关的基础理论知识。理论基础扎实，研究工作才能有一个坚实的基础，否则，没有理论基础，你就很难深人进去，很难有真正的创造。因此，我们进行教育科学研究，一定要多方面地收集资料。要加强理论学习，只有这样制定出的开题报告才能更科学、更完善。

三、课题开题报告的结构

撰写开题报告是进行科研课题申请后的首要工作。通过开题报告的思考与写作可以帮助我们清楚地了解自己为什么要做这个课题，究竟想做什么，想得到什么，怎么做，能否达到自己的预期目标?若分析后觉得不现实，则可以立即调整自己的方向和目标，使课题目标的达成有可能性，从而避免“大题小作”或“小题大作”。课题开题报告的写法根据课题研究的类别略有不同。但一般地说，科研课题开题报告主要包括以下几个方面:

1.课题研究的背景

2.国内外同一研究领域的现状与趋势分析、本课题与之联系和区别

3.课题研究的实践意义与理论价值

4.课题核心概念的界定

5.课题研究的目标

6.课题研究的内容(所要解决的主要问题)

7.课题研究的过程

8.课题研究的方法

9.预期研究成果

10.完成课题研究的可行性分析

11.参考文献

四、课题开题报告撰写规范

(一)课题提出的背景

首先，要阐明课题研究的背景，即根据什么、受什么启发而进行这项研究的。因为任何课题研究都不是凭空来的，都有一定的背景和思路。其次，要阐明为什么要研究这个课题、研究它有什么价值，能解决什么问题。一般可以先从现实需要方面去论述，指出现实中存在这个问题，需要去研究，去解决，本课题的研究有什么实际作用，然后，再写课题的理论和学术价值，最后就是所要解决的主要问题，课题研究所要解决的主要问题要有针对性、可操作性，这是课题研究的生命力所在。解决的重要问题与提出的背景间有着必然的、照应的联系，不能游离或架空。

这些都要写得具体，不能漫无边际地空喊口号，写成诸如坚持党的教育方针、实施素质教育、提高教育教学质量等一般性的口号。一位高中化学教师在课题开题报告中对其课题意义是这样写的:“高考实施3十x方案后，化学学科作为一门选考科目，其教育、教学必将受到一定影响。如何在当前的形势下进一步提高高中化学教学和教育水平，这是化学工作者所面临的一个急待解决的问题。本课题正是以3十x对高中化学教学的影响为引线，以1999届至xx届为观察样本，运用观察、统计、访问等现代教育科学研究方法，……研究如何在3十x实施过程中调整教学模式，提高学生综合素质等问题，为在教学改革的新形势下提高高中化学教学水平进行有益的探讨”。这样有针对性地写使别人一看就觉得科学性、实用性比较强，的确有价值。

(二)国内外同一研究领域的现状与趋势分析、本课题与之联系和区别

阐述这部分内容必须采用文献资料研究的方法，通过查阅资料、搜索发现国内外近似或界于同一课题研 究的历史、现状与趋势。

历史背景方面的内容：按时间顺序，简述本课题的来龙去脉，着重说明本课题前人研究过没有?哪些方面已有人作过研究?取得了哪些成果?这些研究成果所表达出来的观点是否一致?如有分歧，那么他们的分歧是什么?存在什么不足，通过历史对比，说明各阶段的研究水平。

现状评述，重点论述当前本课题国内外的研究现状，着重评述本课题目前存在的争论焦点，比较各种观点的异同，阐述本课题与之联系及区别，力求表现出自己课题研究的个性及特色。这一部分的内容应力求精当，力求体现自身研究的价值。

发展方向方面的内容：通过纵(向)横(向)对比，肯定本课题目前国内外已达到的研究水平，指出存在的问题，提出可能的发展趋势，指明研究方向，提出可能解决的方法。

(三)课题研究的实践意义和理论价值

实践意义，指向操作层面，即通过课题研究对学校、教师、学生的可持续发展有什么促进，在具体的教育教学实践中有哪些好处。它的阐述是通过假设关系，勾勒出通过研究可能会或一定会产生的实践效果。

中小学的教育科研更多地取向于应用研究和发展研究，在理论方面的学术研究价值可能比较匮乏，但也不可否认，通过研究，可能达到了对某一相关理论的细化和补充，对某一理论进行了具体阐述与充实，或许还会产生赋予全新内涵的实用理论。这部分内容有就写，无则免。

(四)课题核心概念的界定

界定即定义，课题界定，即对课题的诠释，对课题的核心概念进行说明。采用归纳和演绎的方法，引用教育理论、整合文献知识等，以分段或标题陈述的形式确定概念及其内涵与外延，采用分——总的方法，对课题中的研究对象、范畴、方法，抽取出本质属性分别给予概括，最终形成对整个研究课题名称的科学界定。

如：在《培养学生创新精神和实践能力策略研究》这个课题中，对课题的界定为：

本课题的研究就是围绕着教育改革与发展的核心问题，运用心理学、教育学、社会学理论和知识，积极探索与研究培养学生创新精神与实践能力的途径、方法、手段及学校环境等方面的问题，为职业学校进行学生创新精神与实践能力的培养提供可借鉴的实践模型。

创新精神是指人的综合性的积极稳定的创造性心理品质，是人们在认识世界、改造世界时表现出来的一种不因循守旧而积极求新的精神，是驱动外显创新行为的内隐动力。人的一切创新活动都是以创新精神为基础，没有创精神便没有人的一切创新活动。因此人类的创新精神是创新活动的根本动力与灵魂。

实践能力是指人们运用理论知识、操作、分析、解决问题的能力。

支撑性理论也就是课题研究的理论依据。理论支撑行动，科学的理论是科学研究的保证。比如：我们要进行活动课实验研究，就必须以课程理论、学习心理学理论、教育心理学理论为研究试验的理论依据;进行教育模式创新实验研究，就必须以教学理论、教育实验理论为理论依据

(五)课题研究的目标

课题研究的目标就是通过研究，要达到什么目标?研究的目标是比较具体的，不能笼统地讲，必须清楚地写出来。只有目标明确而具体，才能知道工作的具体方向是什么，才知道研究的重点是什么，思路就不会被各种因素所干扰。研究目标一般包含以下三方面：

1.教师：通过研究希望获得某一(些)教育教学规律，落实在知识产品上，表现为教师教育知识的增长，教育经验的丰富，教育方法的创新和教育理论的发展等。

2.学生：通过研究所要达到的培养人才的目标，落实在学生的身上，表现为学生的发展和成长。

3.学校：通过研究所要达到的学校教育工作改革和发展的目标，落实在学校工作过程中，表现在学校的效益上。

确定课题研究目标时，一方面要考虑课题本身的要求，另一方面要考虑课题实际的工作条件与工作水平。

(六)课题研究的内容(所要解决的主要问题)

有了课题的研究目标，就要将研究题目依据研究目标展开、细化为若干小问题。课题越大，内容越多，越要具体，研究范围较大的课题应列出各子课题的内容。

目前在这方面存在的主要问题是:

1、只有课题而无具体研究内容;

2、研究内容与课题不吻合;

3、课题很大而研究内容却很少;4,把研究的目的、意义当作研究内容。

因此，我们要学会把课题进行分解，一点一点地去做。例如：《初中语文活动课实验研究》的开题报告指出，本课题研究的中心是，如何科学有序、切实有效地开展初中语文活动课。具体内容包括下列三个方面:

1、根据初中各年级学生的情况和语文教学要求，对初中各年级语文活动课对学生认知领域、情感领域和动作技能领域素质的发展进行详细的目标规定，从而建立初中语文活动类课程的目标体系。

2、根据初中各年级语文活动课目标和语文学科的特点，安排初中各年级语文活动课的内容，内容的安排力求充实、精确、有序，并初步形成一个相对完整的活动课内容体系。

3、根据初中各年级语文活动课目标内容和初中各年级学生的特点，探索初中语文活动类课程的学习活动方式，确定活动类课程的教学时间、空间及程序，并在此基础上形成多种切实可行的可操作的语文活动教学模式。

(七)课题研究的过程(步骤和计划)

课题研究的步骤，就是课题研究在时间和顺序上的安排。研究的步骤要充分考虑研究内容的相互关系和难易程度，一般情况下，都是从基础性问题开始，分阶段进行。一般划分为三个阶段：前期准备阶段、中期实施阶段、后期总结阶段。每一个阶段有明显的时间设定，从什么时间开始，至什么时间结束都要有规定，要有详尽的研究内容安排、具体的目标落实，从而保证研究过程的环环紧扣，有条不紊、循序渐进。

每一阶段的工作任务和要求，不仅要胸中有数，还要落实到书面计划中。从而保证课题研究按时保质保量完成，课题研究的管理也可据此对课题研究进行检查、督促和管理。

(八)课题研究的方法

任何科学研究除了要应用哲学方法和一般科学方法之外，还要有具体的研究方法、技术手段。“研究方法”这部分，主要反映一项课题的研究通过什么方法来验证我们的假设，为什么要用这个方法?以及要“做什么”、“怎么做”。教育研究的方法很多，包括文献研究法、调查研究法、实验研究法、个案研究法、经验总结法、行动研究法等等。一个大的课题往往需要多种方法，小的课题可能主要是

一、两种方法。比如，要研究学生实践能力的现状必定离不开调查法;要研究问题家庭学生的教育对策可采用个案法等等。这一部分是课题方案设计的主体，课题研究是否有价值、目标任务如何得到研究落实，在这部分应给人一览无余的感觉。

(九)课题研究的预期成果与表现形式

课题研究成果预测即研究过程中可能会带来什么成果?成果形式包括研究报告、教育教学论文、专著、影像资料(含课件)、典型的教案、教具学具、学生作品等。课题不同，研究成果的内容、形式也不一样，但不管形式是什么，课题研究必须有成果，否则，就是这个课题没有完成。在开题报告中设计出成果形式，可以使研究者明确将来用什么表现研究成果，以便从开始就可以着手努力积累材料、构思框架、进行分工，以利于研究成果的顺利问世。同时也有利于课题管理者据此对课题进行检查验收。

(十)完成课题的可行性分析

可行性，即研究课题的可实施性，是指课题研究所需的条件是否具备，如研究所需的信息资料、实验器材、研究经费、学生的知识水平和技能及研究者的学历、学习能力、研究能力和研究经验等等是否具备。它建构于先进的理念、科学的设计、扎实的功底等，一句话，就是要从若干方面说明对本课题的研究，我们有实力、有能力、有潜力去完成。

成立课题组、健全研究机构，做到研究任务、时间、人员三落实;制度保证：制定课题管理条例、规范学习、研究制度，以激励为杠杆，激活教师研究热情;经费保证：设立课题研究专项经费，保证研究过程中相关书籍、必要设备的添置及外出学习、开展活动等的经费来源;技术保证：聘请专家担任顾问，选派骨干外出培训，组织外出参观学习等;课题研究与学校工作相协调：做到教学科研化，科研教学化，使学校教育教学与教育科研同步发展、共同提高。

第五篇：教育研究方法开题报告材料

有关大学生考试作弊现象的研究

（一）研究背景分析

1．选题背景

在当今社会上，应试教育已经是普遍的一种选拔人才的教育制度，不论中小学生，还是高中生，甚至是大学生，都必须面临考试。而现在许许多多的在校大学生们都需要通过考试，从而获得学分，当获得足够多的学分时，才能够顺利毕业；否则将面临无法毕业的情况。可是，现在的大学校园生活里，学生的学习氛围越来越淡薄，许多学生把精力、心思都放在社团活动或者是兼职等方面上。已经不再像高中时期那样，把所有心思都放在学习上。也有不少大学生平时总是逃课或者是不听课，导致一点知识都没有学进去，然而，不管怎样在大学里，所有学生都必须通过考试来获得学分，而且想要申请一些奖项时，申请条件中总会有要求学生的成绩要很好，所以这时成绩显得尤为重要，但是，对于那些没有认真学习过的学生而言，要顺利通过考试，那是相当有难度的，于是，他们为了通过考试，盲目地选择了作弊。

2．选题意义

当代社会，诚信问题已经是大众所关注的焦点，现在许多公司或者是招聘单位都会明确表明他们需要的人才具备诚信的品质。因为诚信在当今社会中起着举足轻重的地位，诚信往往与许多事情有关系，例如：商品质量、公司信誉度、员工素质等等，诚信往往能够决定一个单位的存亡问题，所以对于要在社会建立一个立足点，诚信是必不可少的。

核心概念的界定

作弊一词的含义，在《当代汉语词典》中，是指用欺骗的手法做违法乱纪或不合规定的事情。

（二）文献综述

我国已有许多学者对大学生考试作弊进行研究，探讨究竟是什么因素影响大学生，导致他们在考试中进行作弊。

《高校对话型全员德育新体系研究》中，第九章《对话的艰难性——大学生德育工作中的另类问题剖析》谈论到作弊这样问题。其中文中的第一部分讲述了作弊问题，作者分成三部分阐述，第一部分是大学生作弊的主要类型，在此作者提出了三个类型：纸条传递型、肢体语言表达型、信息技术应用型。作者比较详细地讲述了这些作弊类型；而第二部分讲的是大学生作弊的主要原因，作者从宏观角度和微观角度来分析大学生的作弊行为。从宏观角度讲，作者认为社会不良风气、高校人才评定标准的偏颇和高等教育教学管理工作中的弊端导

致大学生考试作弊；从微观角度出发，则是大学生自身做人标准问题出现偏差；第三部分则是高校德育工作的应对策略，作者从强化舆论宣传、建立健全制度、教学改革等角度提出自己的见解。

还有其他相关文章，在翟红的《大学生考试作弊成因分析及对策》中，从作弊的行为特点、心理等方面进行研究，又如曹容平、董九元、王刚等人写的《当代大学生考试作弊行为特征研究》通过数据分析等也对大学生考试作弊这一现象进行探讨。

2011年3月8日，在《武进日报》中，有一篇《英国大学生作弊严重论文买卖交易额超2亿英镑》，里面讲述了英国大学生的作弊现象。

在《教育·实践·创新：高职高专学生思想政治教育研究》里，何酉宁和杨浩的《大学生作弊行为的原因分析及对策研究——以成都纺织高等专科学校为例》，具体分析了成都纺织高等专科学校里大学生作弊的现象。

（三）研究内容及目标

1．研究内容

（1）研究大学生考试作弊现状。

（2）研究大学生考试作弊原因，从家庭因素、社会因素、学校因素、个人因素等等方面进行研究，并提出一些建议。

2．研究目标

详细分析并整理大学生考试作弊的原因并就这些原因提出对学校、对学生都有效的意见或建议。

（四）研究的方法及具体措施

1．研究的方法：

（1）图书馆查找文献。学校图书馆是一个资源库，到图书馆里查找有关考试作弊的相关文献，有利于我们更好的研究“大学生考试作弊原因”的这个课题。

（2）网上查找。网上有很多关于大学生考试作弊的相关内容，我们可以借此作为参考

2．研究的具体措施

（1）我们组成员聚在一起讨论对于这个课题所要研究的方向、步骤、分工。

（2）我们组成员各自去图书馆或网络上查找相关的书籍、资料、报告等等。

（五）研究人员分工及步骤

XXX：

搜集资料，包括通过网络检索以及图书馆馆藏书籍的查阅等手段，其

中网络工具的检索使用较多。最后对工作进行总结。

在选定课题后分析选题背景，界定大学生考试作弊原因的核心概念以及选题的意义。

调查国内相关高校学生考试作弊的研究综述。

XXX：

负责整合资料，研究内容的最终确定以及探究研究目标。

XXX：

确定研究人员的分工以及研究步骤。

研究步骤：

1、小组讨论，草拟研究课题

2、调查资料，估计课题实施的可行性

3、最终确定研究课题

4、明确分工，开始行动

5、小组讨论分析资料

6、按原本的分工，将分析结果以书面形式呈现。

7、作总结

（六）课题研究条件分析

作为研究人员的马晓铭、黎小英、胡文君都是韶关学院教育学院2010级小学教育专业的学生，作为身处被调查对象集中校园中的一名大学生，在正确选择调查问题方面有相对优势。

现今社会推行诚信为人的准则，作为教育中较为高层次的大学生作弊现象更被公众所关注，因此调查分析大学生作弊屡禁不止现象的原因、找出解决问题的方案就显得十分必要。我们的组员在再三思虑后决定将其作为我们的调查研究对象。

作为社会上众人关注的问题之一，有关大学生考试作弊现象的研究的相关成果也不少。以下是部分我们搜索到的资料。

《大学生考试作弊屡禁不止的原因及对策》——曲秀英2004.03.31 经济导报

《大学生考试作弊现象浅析》——明哲2005.3 吉林农业科技学院学报第14卷第1期

《浅析大学生考试作弊行为原因及对策》——丁娜、马健平、张洪纲 2009 文化与教育技术

《大学生考试作弊的原因和对策》——李宝华 辽宁教育研究，1999.05

《高校学生考试作弊的现状调查及其对策》——王金彪，张丽霞 2004.01 大学教育科学

《大学生考试作弊的原因与对策》——王术，陈耀武 2008.08 高等教育农业

《加强考风建设、构建和谐校园》——范玉辉，周先进 2007.03 华中农业大学学报

《高校学生考试作弊问题的调查研究与对策》——陆桂平，陈龙，王小全 2002.02 中国高等医学教育

《试论大学生考试作弊行为的现状与对策》——陈志国，郭宏英 2009.3 中小企业管理与科技

《大学生考试作弊浅析》——王丽萍，梅永刚 2008.7（第13卷）西安邮电学院学报

《大学生学业作弊现象成因及对策探讨》——徐亚，徐甜甜 2007（第三期）职业圈

《关于大学生考试作弊现象的探讨》——崔玉波，乔志和，王忠民 2010.06 教书育人.高校论坛

《大学生考试作弊行为的博弈分析与对策》——孙世民，李世峰 2004

（8）高等农业教育

《大学生考试作弊成因分析与对策探讨》——漆勇政，魏友博 2003

（5）；83-86 高等农业

（七）课题研究预期的成果表达形式

大学生考试作弊的现状：

在现在的大学校园里，大学生考试作弊现象是实实在在地存在的，不论是中小学学校还是高等学府，考试作弊总是存在的。学生作弊无非是为了取得自己想要的成绩，所以只要还存在考试制度，那么学生考试作弊就会一直存在。

研究预期成果：

一、找出大学生作弊的主要原因：

1.学生自身学习兴趣不浓

学生自身的兴趣、爱好不同导致对某一方面的投入精力不足，我们常说每个人的智力水平基本差不多，不存在智力过大的差异，之所以有学习成绩好的学生，学生差的学生，主要是学生对于学习的态度不同。有的学生把学习知识当作兴趣；有的则把学习当作负担，但相反的可能动手的能力比较强等；还有的学生不爱学习，热衷于经商；还有的家庭生活困难的学生平时大部分时间和精力用于家教等方面，以致对学习用心不足，考试只好企图作弊过关。

2.学生之间的“传帮”作用

刚刚入学的新生，有的可能在高中时或多或少积累了一些作弊经验，但由于刚刚步入大学的校门，如果学校抓的严，或许收敛一些，如果有机可乘，便可通过作弊获得成绩合格。但时间不长，高年级的学生便会向低年级的学生、老乡便会向老乡传授作弊经验、心得，这是一个非常可怕的现象，如果长此以往，而不加治理，学校的名声可能会

毁于一旦。

3.学生的心理原因

⑴ 学生的不平衡心理，有的学生平时不努力学习，如果考试作弊成功，将会取得一个好的分数，而平时努力学习的学生不作弊可能考试成绩并不理想，这样一来，好的学生有的就会出现不平衡心理，如果意志力薄弱，也会加入作弊的行列。

⑵ 学生之间的同情心，有的学生看到别人总是被抓科，补考还不过，而且大家又是同班同学，平时处得又比较好，于是考试时就会伸出援助之手，如果不帮忙，又怕同学的关系弄僵，更助长了作弊之风。⑶ 赌博心理，这类学生主要是平时根本不努力学习，上课逃课，考试经常不及格。经常作弊如果过了固然好，考试不过也不会太在乎。

4.社会激烈竞争与大学生就业压力增加带来的影响

随着高校扩招后的毕业生数量大幅增加,社会竞争加剧,就业紧张,优秀毕业生倍受社会青睐。各类资格考试、等级考试将用人单位迷惑,用人单位对人才的评价标准也首先是以学习成绩为标准,不考虑学生的综合素质高低,在招聘人才时只选用成绩好、证书多的学生。这种错误的价值导向造成了很多学生为了证明自己是优秀的,用作弊来提高自己的考试分数,而学习成绩较好的学生为了能在找工作时胜过别人,也加入到作弊的行列。

二、解决方案：

1.帮助学生树立正确的道德观、人生观和价值观。

2.科学地进行考试方式和教育方式的改革。

3.积极深化素质教育,建立科学的素质评价体系。

4.健全并严格执行考试制度,加强监督与管理。