腐败肝脏中氯氮平的高效液相色谱分析方法研究（精选）

第一篇：腐败肝脏中氯氮平的高效液相色谱分析方法研究（精选）

【摘要】 目的建立腐败肝脏组织中氯氮平的高效液相色谱分析方法。方法采用hypersil ods柱(150mm×

4．6mm id，5(m)，流动相为甲醇：水(80：20)，内含0．025 mo[／l的磷酸二氢钠和0．01 mo[／l的十二烷基磺酸钠(sds)

(ph5)。检测波长为：222 nm，228 nm和259 nm。

结果 用该方法从腐败肝脏组织中检出氯氮平。结论 所建立的高效液相色谱分析方法适用于腐败生物检材中氯氮平的检识，能为法医鉴定工作提供方法。

【关键词】氯氮平；腐败肝脏；hplc

【中图分类号】i3919．1；r927．

1【文献标识码】a

【文章编号】1007—9297(2004)02—0131—0

2study on detection of clozapine in decay liver using hplc．liao lin—chuan，yan you—yi，yang lin ．sichuan universi—

ty，chengdu 610041

【abstractl 0bjective for the purposes of detecting clozapine in decay liver． methods a hplc method was devel—

oped．samples were extracted by ether，compounds were separated on ods hypersil column(4．6mm i．d．×150mm)eluted

with methanol which contain 0．025mol／l nah2po4 and 0．olmol／lsds(ph5)．a sequential ultraviolet detection was used

(222，228 and 259nm)． results clozapine was successfully detected in decay liver samples． conclusion the method in

this study is useful in the forensic cases involved clozapine po ison．

【key wordsl clozapine；decay liver sample；hplc

氯氮平(clozapine)，化学名为8一氯一11一(4一甲基一1一哌

嗪基)一5h一二苯并[b，e]一[1，4]二氮杂卓，是一种抗精神病

药，主要用于治疗精神分裂症，由于其具有较高的抗精神分裂症

疗效，又很少产生锥体外系反应，故在临床上得到广泛应用。¨

关于氯氮平的检测方法，国内外有学者已对血浆及血清等机体

组织中该药的检测方法进行了研究，_2 但尚未见到肝脏组织

尤其是腐败组织中该药物检测方法的报道。本文对腐败肝脏组

织中该药物的检测作了尝试，报道如下。

仪器及材料

一、仪器

hp1100 series高效液相色谱仪，配以二极管阵列检测器，四

元泵及三维hp液相色谱化学工作站；日本岛津uv一260紫外

分光光度计；高速台式离心机(17 000 r／min)。

二、对照溶液及试药

精密称取氯氮平对照品，配制成对照品乙醇溶液，浓度0．0

1mg／ml；甲醇，购自fisher公司；水为超纯水(电阻(18 mo)；其他

试剂、试药均为色谱纯或分析纯。

三、材料

空白对照人肝组织，放至腐败；精神病患者腐败肝组织，生

前服用过氯氮平。

方法及结果

一、样品前处理

方法一，取腐败肝脏组织检材5 g，用氨水调节ph为8，先

后用乙醚10 ml，5 ml振摇萃取两次，分出乙醚层，合并滤液，过

三氧化二铝净化柱净化，乙醚液用酸性水液反提，酸水提取液经

碱化后再用乙醚提取；置乙醚提取液于40℃ 水浴中，挥干溶剂，残留物用甲醇溶解，16 000 rpm离心5 min后取上清液进样

hplc仪。

方法二，提取溶剂换用氯仿，余同上法，挥干溶剂时用空气

流吹干。

二、色谱流动相的筛选

本文选用ods hypersil柱(150mm×4．mm id，5 m)为分析

柱；同样填料(30t~m)短柱为预柱。先用已知对照品直接进样，对

下列流动相进行了筛选：(1)不同比例的甲醇与水溶液；(2)甲

醇：水：磷酸二氢钠：十二烷基磺酸钠的不同配比溶液，ph分别

为4．

5、5．0、5．

5、6．

2、7．0(浓磷酸调节)。结果表明流动相为甲

醇：水(80：20)，内含0．025 mol／l的磷酸二氢钠和0．01 mol／l的十二烷基磺酸钠(ph5)，氯氮平有适合的保留时间，且峰形较

好，拖尾因子最接近1(见图1 a)。在随后用生物样品进样情况

下仍能获得较满意的结果，见图1(b)(c)。

流速：1．2 ml／min；检

测波长：222 nm，228 nm，259 nm；柱温：30℃。

用上述乙醚和氯仿提取的样品进样，比较两种提取溶剂杂

质的干扰情况。

讨论

一、样品前处理方法

由于腐败肝脏组织中所含成分较复杂，所以本文采用有机

溶剂提取，过净化柱和酸性水液反提净化，酸水液经碱化后再用

有机溶剂提取；于40℃水浴中挥干溶剂，残留物用甲醇溶解．16

000 rpm离心后上清液进样hplc仪；虽然操作步骤略多，但却

能明显降低检材中的内源性杂质对检测的干扰。腐败肝脏组织

经以上预处理后，取20i~l进样测定，并通过阵列二极管搜集220

～ 350 nm紫外光谱图，两种萃取条件下均能检出氯氮平，从图

1(b)(c)可见在两种溶剂提取回收率接近，但用乙醚提取杂质峰更

少。样品前处理过程中，用氨水调节ph为8而不用氢氧化钠等

· 132 · 法律与医学杂志2004年第11卷(第2期)

其他强碱，主要是考虑到有些药物在强碱性条件下易分解，而氨 水易挥发，很容易除去，以免干扰测定。

mau mau

图1 氯氮平及肝脏提取物的高效液相色谱图 figl high performance liquid chromatogram of clozapine(a)and chro．

matogram of extracts from decay liver tissue(b and c)．

a

300 波长

图2 氯氮平甲醇溶液的紫外吸收光谱 fig 2 the

ultraviolet spectrum of clozapine in methanol,solution

二、紫外检测波长

在建立高效液相色谱方法时，需选择合适的检测波长，为

此，将氯氮平用乙醇溶解后，在200～500 nm范围测得其紫外光

谱(图2)，在波长228 am、259 am和294 am 处均有紫外吸收峰。

作者认为虽然在228 am处吸收最强，但由于许多内源性杂质在短波均有较强吸收，故在灵敏度足够的情况下，宜选较长的波长

如259 am 为主要检测波长。如提取过程样品净化较好，选228

am可提高检测灵敏度。

三、分析流动相

在筛选流动相的过程中，发现氯氮平在柱上有相当强的保

留能力，这可能是其结构中的碱性哌嗪基与ods柱上残留的硅

醇基作用之故。因而用甲醇：水(95：5)流动相冲洗近40分钟

(1ml／min)，仍不能将氯氮平从分析柱上冲出。考虑氯氮平为有

机碱类，所以作者通过：(1)选用十二烷基磺酸钠为离子对试剂；(2)在甲醇一水中加人一定量的铵盐；(3)通过调节流动相的ph值等

3种手段试图降低样品在分析柱上的吸附，并使峰形得到改善，结

果文中选用的流动相达到预期目的。

四、其他

该方法通过在多种色谱条件比对保留值及比较阵列二极管

紫外检测器所获得的全光谱紫外图．可作为定性判别药物的依

据。但由于氯氮平的代谢物与氯氮平的色谱行为及紫外光谱很

相似，故在有条件的情况下，应结合其他方法确证。有关定量方

面的研究另行探讨。

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(收稿：2004一ol一10)

第二篇：高效液相色谱系统中气泡对检测的影响及其解决方法

高效液相色谱系统中气泡对检测的影响及其解决方法

在我们进行液相色谱分析时，有时会遇到这样一个问题：系统的流路中存在气泡。

由于气泡的存在，会造成色谱图上出现尖锐的噪声峰，严重时会造成分析灵敏度下降；气泡变大进入流路或色谱柱时会使流动相的流速变慢或不稳定，使基线起伏。

造成上述现象的主要原因有三条：一是流动相溶液中往往因溶解有氧气或混入了空气而形成气泡；二是系统开始工作时未能将流路中的空气驱赶干净；三是在注入样品时不注意混入了空气。

为了避免这类问题的出现，液相色谱实际分析过程中必须重视对流动相进行脱气处理。常用的脱气方法有以下几种：

1.吹氦脱气法 使用在液体中比空气溶解度低的氦气，在0.1Mpa压力下，以约60ml/min流速通入流动相10-15min以驱除溶解的气体。此法使用于所有的溶剂，脱气效果较好，但在国内因氦气价格较贵，本法使用较少；

2.加热回流法 此法的脱气效果较好；

3.抽真空脱气法 此时可使用微型真空泵，降压至0.05-0.07MPa即可除区溶解的气体。显然使用水泵连接抽滤瓶和G4微孔玻璃漏斗可一起完成过滤机械杂质和脱气的双重任务。由于抽真空会引起混合溶剂组成的变化，故此法适用于单一溶剂体系脱气。对多元溶剂体系应预先脱气后再进行混合，以保证混合后的比例不变。

4.超声波脱气法 它是目前实验室使用最广泛的脱气方法，将配制好的流动相连同容器一起放入超声波水漕中脱气10-20min即可。该方法操作简便，基本能满足日常分析的要求。

5.在线真空脱气法 把真空脱气装置串联到储液系统中，并结合膜过滤器，实现了流动相在进入输液泵前的连续真空脱气。此法的脱气效果明显优于上述几种方法，并适用于多元溶剂体系。

其二，在液相色谱系统开始工作前，可以用注射器连接恒流泵的排空阀，抽入流动相，将流路中的空气驱赶干净。

其三，在注入样品前注意排出样品注射器中的空气。