临床微生物学检验在医院感染检测中的应用

第一篇：临床微生物学检验在医院感染检测中的应用

临床微生物学检验在医院感染检测中的应用

【摘要】医疗中感染问题一直是困扰医学界的一个难题，院内的交叉感染是引发多种感染性疾病、减慢康复速率、增加患者死亡率的主要根源。由于医院中免疫抑制剂的应用、放化疗的大力开展以及内科介入疗法的广泛应用，使得院内感染人数日益增多。临床上微生物的检验主要针对传染源、传播途径、易感人群这三个方面，切断这三个方面中的任何一个方面都能有效降低院内感染的概率。现针对临床微生物检验对有效控制医院感染的价值进行讨论。

【关键词】临床微生物；检验；感染检测

【中图分类号】R-0 【文献标识码】B 【文章编号】1671-8801（2016）02-0213-01

引言：医院感染的发生包括3个重要的环节，即传染原的存在、传播途径和易感人群，每个环节都和微生物学检查有着极为密切的关系。医院感染的发生主要有两种类型，即外源性感染（系指由患者本身以外的微生物引起的感染）、内源性感染（系指由患者本身携带的微生物引起的感染）。要对不同类型的感染作出正确的诊断，必须进行微生物学检查。因此临床微生物学检验在医院感染的诊断、监测，医院感染的流行病学调查、消毒灭菌效果评价以及抗菌药物的合理使用等方面，具有极其重要的作用。

1.常用微生物检测技术

目前常用的微生物检测技术有显微技术、染色技术、分离纯化技术、微生物鉴定技术、细菌诊断技术、聚合酶技术等几大类。

1.1 显微技术

显微技术是微生物检测中常用的技术之一，包括普通光学显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜、荧光显微镜、电子显微镜等多种设备，在不同的检测需求中所运用的检测设备并不相同。显微技术是微生物检测中最为简便，操作最为容易的检测技术之一，但检测结果准确度和检测控制较差，直接观测的结果有可能会产生极大的误差。

1.2 染色技术

染色技术则是对微生物细胞进行染色后，对微生物进行观察检测的一种技术，不过由于染色后微生物标准基本是死的，其形态和结构会在染色过程中发生一定变化，无法切实反应出活细胞的真实情况，因此通常只作为辅助检测手段。在实际操作中，整个流程也较为繁琐，染色、脱色都需要严格控制，否则将会影响检测结果的准确性。

1.3 分离纯化技术

自然环境中的微生物通常是杂居混生的，在微生物检测中需要对混生微生物群体进行分离纯化，以对纯微生物进行检测的技术，分离纯化技术常用于菌种鉴定中，分离纯化技术是微生物检测的一项重要技术，是微生物检测的重要基础。

1.4 其它技术

在微生物常规检测中，通常对微生物进行形态结构、培养特性方面的观察，再利用化学反应来测定微生物的代谢物，以鉴别一些形态和其它方面不易区别的微生物，以更好的进行微生物分类鉴定。近年来，在环境监测中，微生物检测技术运用方法较为广泛，如运用细菌总数和粪便污染指示菌监测水质，运用发光细菌检测环境有毒物质，运用水中藻类生长量监测水质或物质霉性等等，这些方法都已经有了较为成熟的操作手段和检验标准，具有较强的实践价值。

2.临床微生物检验技术的运用

2.1重视原始标本直接涂片的诊断价值

原始标本涂片检查不仅对微生物检验全过程起着导向作用，还可快速为诊断提供有价值的信息。在细菌培养过程中，受细菌生长缓慢且培养特异性的制约，不能快速回报结果，可通过细菌培养前对标本进行涂片镜枪，包括未染色湿片位相显微镜观察和染色标本片检查，结合患者的临床表现，快速提供诊断信息，对一些感染性疾病特别是急重症感染有重要的实用价值。例如无菌体液如血液、胸腹水、脑脊液等的阳性标本可直接根据涂片细菌形态和染色特征快速回报临床，指导其经验用药，显微镜形态学在细菌鉴定中体现的价值远甚于此，但是由于目前自动化仪器以及分子生物学技术的广泛应用，临床似乎有忽视形态学检查的倾向，同时，由于缺少模式菌株形态学图谱，以及鉴定镜下形态需要丰富的经验，更使得显微镜形态学检查在各医院开展困难重重，这就需要每一位检验工作者从态度上给予高度重视，平时苦练基本功，善于总结归纳。此外，相关机构应尽快建立形态学检查的标准方法，使临床有据可依，真正体现显微镜形态学的应有价值。

2.2发展快速准确的诊断技术

对于发病率和病死率很高的感染性疾病，特别对那些体外难培养的病原微生物，临床迫切需要快速且准确的诊断方法。目前血清免疫学、多重聚合酶链反应（PCR）、基因芯片和多肽质谱分析等技术在微生物领域的应用，提高了疑难病原确诊率。由于条件限制一些前沿技术很难在基层医院开展，如何更有效地提高此类医院对感染性疾病的快速诊断水平，是摆在每一位微生物检验工作者面前的一个崭新课题。

2.3做好细菌药敏试验标准化

加强药敏试验标准化和规范化是获得药敏试验准确性的关键。首先，准确的药敏试验需要合格的药敏试剂和标准的试验方法。目前国内许多医院的微生物室采用K-B纸片扩散法进行药敏试验，该方法是美国临床和实验室标准化协会（CLSI）公认的药敏试验方法，但较易受纸片质量、M-H琼脂厚度和菌液浓度等因素的影响，所以欲得到准确的药敏结果，必须进行严格的室内质量控制，保证药敏纸片以及M-H琼脂等的在控状态，同时也应充分了解K-B法的局限性，对于不能使用此法进行检测的菌株，应参照CLSI推荐的最低抑菌浓度（MIC）法检测；其次，临床微生物检验工作者应注重自身业务能力的培养，随着临床对细菌耐药性认识的不断深入及新的抗感染治疗药物的层出不穷，古老的微生物学重新焕发了光彩，如何更好地了解细菌药敏试验，需要微生物检验工作者不断地增加知识储备，积极参加本专业学术交流，掌握细菌药敏发展的新动向，积极参加室间质量评价，提高检验技术水平。

结束语

微生物检验技术正朝着简便、高效、快速、自动化方向发展，许多新的检测技术还在不断涌现出来，除了上面介绍的技术，还有代谢学技术、传感器技术、流式细胞术、基因探针技术、生物芯片技术等等。每种检测技术都有其优缺点，研究检测人员应该根据不同的检测目标，不同的实验环境及条件，选择适当的检测方法，进一步地，还可以将不同的技术结合起来比对、使用，以提高检测的准确性。

参考文献：

[1]帅丽华，胡志坚，孙晓红，周会祥.临床微生物检验质量保证和持续改进[J].实验与检验医学.2012（05）

[2]兰燕.临床尿标本微生物检验采样过程存在的问题与控制[J].现代诊断与治疗.2012（05）

[3]郝淑贤.临床微生物学检验与医院感染相关性研究[J].当代医学.2012（14）

第二篇：PCR技术在临床检验中的应用

PCR技术在临床检验中的应用

http://www.xiexiebang.com 生物技术支持

医学检验大致可分为形态学、生物化学、血清免疫学和分子生物学几大类，其分别代表几代实验诊断技术。60年代DNA双螺旋结构及半保留复制模式的出现，70年代基因重组及体外基因克隆技术、分子杂交技术的应用使分子生物学在疾病诊断中得到了长足的发展。特别是1985年Mullis发明了聚合酶链式反应（PCR）技术，使医学界真正兴起了基因诊断技术热，成为现代医学发展的又一里程碑。用于临床检验的PCR技术与经典的PCR反应在操作上稍有区别，有其自己的特色。一般在样品处理上，多采用非离子去污剂一次加热处理，这种方法对DNA纯化有限，但适应临床微量、快速的特点。另外PCR反应体系中各组成成份往往都预分装到反应管中，既减少操作者的工作强度而且也减少了污染的机会，具有极高的使用价值。本公司率先研制并推出单管单人份的PCR诊断试剂，具有开创性意义。这些改进都不影响PCR效果，同样表现出高特异性、高敏感性、简便快捷等PCR最优秀的特征，在常见传染病、性病、肿瘤、遗传病、寄生虫病、优生优育、法医学等广泛领域中有相当高的实际应用价值。

常见的传染性疾病有细菌、病毒、衣原体、支原体等，可引起消化、呼吸、循环、泌尿生殖等不同系统相应的病变。消化系统感染性疾病在我国具有代表性意义的有肝炎、胃炎及肠道感染性疾病。引起肝炎的病原体主要包括乙型肝炎病毒（乙肝）、丙型肝炎病毒（丙肝），其它还有甲型肝炎病毒（甲肝）、丁型肝炎病毒（丁肝）、戊型肝炎病毒（戊肝）、庚型肝炎病毒（庚肝）等。这几种肝炎病毒中只有乙型肝炎病毒是DNA病毒，其余均为RNA病毒。我国是乙肝高发区，乙肝病人为世界乙肝病人总数的50％。乙肝病毒经血液传播，病毒主要在肝细胞中增殖，也可以长期存留在骨髓细胞或外周血白细胞中。通常用PCR法检测血清中的乙肝病毒。有报道用PCR法可以在泪液、乳汁、精液及血白细胞中检出乙肝病毒，这些发现提示其它传染途经存在的可能。PCR法检测乙肝的优势表现在：①早期诊断，因为PCR扩增极其敏感，理论上可检出100CID/ml乙肝病毒的患者血清，在感染潜伏期即可被PCR法检出。②对低持续感染乙肝病人的诊断，有些乙肝病人体内的病毒长期低复制感染，血清病毒浓度极低，一般酶标试剂无法检出，可以用PCR法检出。③疗效跟踪及病程判断，因为PCR能半定量检测乙肝病毒基因，是病毒是否存在及其数量多少的最直接指标。在治疗过程中通过监测血清或白细胞中病毒基因存在与否及其动态变化即能准确地了解病情。丙型肝炎病毒在血清中的浓度很低，丙肝病毒的分离尚未成功。目前用于丙肝病毒检验的方法主要是ELISA法测定血清中的HCV抗体。由于HCV尚无法分离纯化，所以用于包被的抗原是人工合成肽或基因工程蛋白，这些人工抗原与天然病毒抗原有一定的区别，理论上是存在假阳性或假阴性。同时血清中抗体的出现及动态变化与病人病情无线性相关关系。RT－PCR技术使这些困难得到解决。HCV是RNA病毒，需先将病毒RNA逆转录为cDNA（RT）后再进行PCR扩增，这种技术称之为逆转录－PCR（RT－PCR）。PCR敏感性高可以检测出血清中低浓度的病毒，了解病毒在体内复制的动态状况。RNA纯化要求严格，是RT－PCR的技术关键，本公司目前使用的高效基因释放剂，联合特异性固相基因吸附乳胶颗粒，对样本中的RNA进行分离纯化，使这一问题得到解决。通常用于RNA→cDNA逆转录的酶大致可以分为二大类，即低温逆转录酶，如AMV/MLV逆转录酶，高温逆转录酶，如Tth酶。Tth酶在锰离子作用下，具有逆转录酶活性，Tth酶活性温度高，可以使核酸充分线性化，提高逆转录效率及特异性。Tth酶在镁离子的作用下，又具有DNA聚合酶活性，从而真正实现单管单酶单人份的扩增要求，这样就在不降低扩增敏感性的条件下，一步完成扩增，不仅简化操作，而且又减少污染，提高检测的准确性。国内本公司已采用这种技术推出单管单酶单人份的RT－PCR诊断试剂。丁型肝炎病毒是缺陷病毒，与乙型肝炎病毒协同感染。甲型肝炎病毒、戊型肝炎病毒主要存在于急性病人粪便样本中，戊型肝炎病毒也长期存在于血清中。在PCR检测时，需注意取材的合理性。在消化道传染性疾病中，另一类最重要的感染性疾病是幽门螺旋杆菌（HP）所引起的胃炎、胃溃疡等。HP可以经口－口途经传播并定位于胃粘膜上皮细胞，早期表现为浅表性胃炎，可发展成为胃溃疡。我国胃炎发病率之高估计比乙型肝炎更严重，对HP的检测应受到广大医务工作者的重视。对HP的检测可以用生化法测试尿素酶或用免疫法测试血清中对HP特异性抗体，也可对胃液、胃粘膜样本进行细菌培养及菌种鉴定。PCR法检测HP非常敏感且特异性高，有研究发现可以从病人的唾液或口腔含漱液中检出HP。PCR法避免了取胃液及胃粘膜，减少病人痛苦，是目前最理想的方法。

呼吸系统感染性疾病主要的有肺结核、非典型性肺炎等。结核杆菌感染曾给人类健康带来很大威胁，一度是较严重的致死性疾病之一。解放以后由于对结核病的预防的重视，特别是特效抗痨药物的出现，使结核病流行基本被控制。近来结核病有抬头的趋势，基原因可能有两方面，其一是耐药株的不断出现，其二是对结核预防重视不足。结核菌痰涂片镜检阳性率太低，酶标法又因抗原交叉反应易出现假阳性，结核检测的金标准是结核菌培养法。但培养法费时昂贵并且受到用药的影响，在实际应用中受到限制。PCR在结核菌检测方面有简便、敏感、特异的优点。一般认为样本中内要有100个左右的结核菌即可被检出。目前用于结核菌PCR诊断的试剂，其引物主要来源于以下基因片段36KD/65KD抗原蛋白基因；染色体重复插入序列IS986、IS960、IS6110、染色体质粒DNA PH7311、PMTB4、P36基因等。其中最常用的是染色体重复插入序列IS986或IS6110，1990年Hermans首先介绍并使用了IS986基因设计的引物扩增产物为245BP，研究表明这一基因对人型结核菌有特异性。而后Thierry又介绍了插入序列IS6110基因，并认为这一基因对人型结核菌具有比IS986更高的特异性及敏感性，最适合M.TB的检测。结核菌痰标本的PCR检测应注意以下几种常见的问题。其一，多条带。即扩增产物电泳后有三条或三条以上的萤光除最前面的引物以外有两条产物带，这与插入序列本身各片段长度有差异、结核菌在治疗过程中染色体畸变、断裂、缺欠及不等位交换有关。这种扩增结果的判断应特别注意，凡在阳性对照相应位置有明显条带的判阳性，否则应为阴性，或建议病人过一些时间后再复检一次；其二，结核痰样本PCR检测时，要使样本充分液化，否则痰液中的粘液成份将影响扩增效果，甚至会导致严重非特异性扩增，电泳结果呈雾状；基三，结核痰样本PCR检测结果可能表现为阳性、阴性交替出现，这与结核病灶的不规律排菌有关。

循环系统以肠道小RNA病毒感染最具代表意义，如柯萨奇病毒等。这些病毒经肠道粘膜、淋巴结进入血液，最终可定位于心肌细胞中导致心肌炎。目前对这些病毒的血液样本检测往往比较困难。PCR用于柯萨奇病毒检测时因其是RNA病毒所以应注意样本的保存。外在环境中存在大量RNA酶，病毒脱壳后RNA将被迅速降解。一般用于RNA检测的血清常温下不应超过24小时，4℃下可保存2天，-20℃下可以保存2月以下。

PCR检测在性传播性疾病(STD)的诊断中有较广泛的应用。经典的性传播疾病有梅毒、淋病、腹股沟淋巴肉芽肿、软锐湿疠、硬下疳等。而在现代STD中、解尿支原体及沙眼衣原体引起的非淋菌性尿道炎（NGU）可能更具有代表性意义。梅毒是由梅毒螺旋体感染布致，首先在局部形成硬软下疳，布后经血行播散到全身，最严重的是波及中枢神经系统。感染早期，梅毒螺旋体大量存在于硬下疳中，可以用生理盐水湿棉签擦去皮疹表面污物再用钝刀片轻轻刮去上皮及结痂，用洁净棉签取渗出液样本作PCR检测，其敏感性及特异性极高。二期梅毒皮疹中也存在梅毒螺体其取样方法同埂下疳，三期梅毒皮疹中一般无螺旋体存在，因此III病人及部分无皮疹的I、II期梅毒病人可以取EDTA抗凝全血检测。淋病是目前发病率最高的性传播性疾病之一，由淋病双球菌引起。淋病双球菌一般为胞内寄生，常见的感染部位为外生殖器、尿道粘膜最常见。在尿道及外生殖器分泌物中有许多非致病的双菌存在，对分泌物拭子进行涂片镜检时，常导致误诊。另外目前非淋球菌性尿道炎的发病率不断增加，鉴别诊断特要，培养法准确但费时且费用高，受用药的影响。PCR法简便、快捷、准确非常理想。常用的引物多采用外膜蛋白抗原基因、隐性质粒DNA或16s RNA基因。16s RNA基因设计的引物特异性高但其敏感性低；隐性质粒设计的引物敏感性高但偶尔出现多条带的扩增产物，判断结果时应以阳性对照为标准，凡在阳性对照相应部位有明显条带的为阳性，其余均为阴性。以往对沙眼衣原体及解脲支原体的检测主要靠培养法，费时且昂贵，简便快速的PCR检测对其有极高的使用价值。沙眼衣原体、解脲支原体样本来源主要是尿道及宫颈分泌物拭子，由于分泌物中有许多污物含有PCR扩增的抑制剂，因此每次采样时尽量避免采集过多脓性分泌物，如果宫颈分泌物太多可以先用湿棉签将表面的分泌物擦去，再用洁净的湿棉签轻压旋转采集宫颈脱落细胞送检，其准确性更高。PCR也可以用检测单纯疱疹病毒、EB病毒、乳头瘤病毒等。引物尖锐湿疣的病毒是人类乳头瘤（HPV）,可致生殖系统感染的乳头瘤病毒主要是6、11、16、18、33型。新近研究结果表明，在乳头瘤病毒引起的良、恶性生殖器病变中，与血清型的关系并不密切，经常有交叉或多型民时感染。为简化操作，对其基因对比分析寻找共同序列设计的简并引物可以同时检出这几种型别的病毒既简化操作又减少费用是一种极理想的方法。

我国恶性肿瘤为人口死亡的第一位原因，其中以肺癌、胃癌及食管癌的发病率最高，占恶性肿瘤死亡总数的60％以上。引起肿瘤的原因非常复杂包括外界环境因素及遗传背景。外界因此可分为三大类即化学、物理及生物因素。肿瘤与遗传有关的证据越来越多，除已知的单基因遗传肿瘤如视网膜细胞瘤、肾母细胞瘤等以外，还在几乎所有的肿瘤细胞中观察到原癌基因的重排，这些基因的变化常导致细胞增殖调控失调终形成肿瘤。癌基因是指在自然或实验条件下具有潜在诱导细胞恶性转化的基因，它们是在研究逆转录病毒时发现的。目前已知的肿瘤基因有60多种，1969年Hubner根据Rous(1911)的实验，在小鸡肉瘤滤液中发现一种能诱导宿主细胞转化的RNA病毒性癌基因（Viral Oncogene）。后来又在其它哺乳动物基因中发现与病毒癌基因同源序列，这种正常的细胞基因表达产物与细胞生长、增殖、分化有关。但若被某种因素激活就会转化为有活力的癌基因，通常称之为原癌基因（Proto Oncogene）。为了与病毒癌基因区分，分别用V-Onc及C-Onc基因来代表。目前了解较多的癌基因（C-one）有scr基因族、ras基因族、mgc及myb基因族。原癌基因存在于正常细胞中，并表达生物功能，只有在原癌基因被激活后才能诱导细胞转化，可能的原癌基因活化机理有：①点突变，受到射线、化学因素、生物因素的诱导，这样微小的变化，就会活化癌基因，活化的基因产物仅有极微的结构差异，但在功能在却有很大的区别。②获得启动子，原癌基因从病毒基因中获得启动子而活化。③基因易位，内外界因素能导致染色体的某些基因易位、重排使原来无活性的原癌基因移至某些强的启动因子或增强子附近而被活化。④原癌基因的过量扩增，原癌基因产物一般与生长因子、生长因子受体、跨膜信息蛋白有关或功能相近，过度表达时，会因调控失常而引起细胞癌变。另一类与肿瘤相关的基因是抑癌基因如P53。抑癌基因较复杂，作用机理不太清楚。癌基因检测中常用的分子生物学技术有：杂交、DNA分子克隆、PCR扩增及序列分析。PCR扩增简便、快捷有较强的实用性，甚至可从病人体液样本中检测活化的癌基因而不需取活组织，对癌症的早期诊断有极重要的意义。Ras基因是1964年首次从大鼠肉瘤的急性逆转录病毒（Harver Murine Sarcoma and Kister Murine Sarcoma Virus）中分离出来取大鼠肉瘤（Rat Sarcoma）的字首命名。1982年首次在人膀胱细胞细胞癌中检出有转化能力的ras基因与Harver大鼠肉瘤病毒癌基因有同源性称C-H-ras基因，后从肺细胞癌中发现了与Kister大鼠肉瘤癌基因同源的C-K-ras基因，从神经母细胞中又发现了N-ras基因。Ras基因激活的最常见方式是点突变。人类原发肿瘤时点突变主要发生在密码子12、13、59、61位。激活后的ras基因不牟自行灭活，根据其点突变的情况可以基因诊断、疗效观察。用PCR扩增样本ras原癌基因，再使用杂交法、限制性内切酶消化或产物测序法检测基因的突变情况即可用诊断。P53是抑制癌基因的代表，位于17号染色体短臂上，其产物为53KD分子量的蛋白从此而得名，可分为突变型和野生型，前者为癌基因，后者为抗癌基因。1979年Cane发现了P53蛋白Eliyahu发现了p53基因有抑癌作用。P53突变后其产物突变蛋白稳定性增加，半衰期较野生型基因产物长，在细胞内堆积，可以用免疫组化法测出。PCR-RELP、PCR-SSCP则因方法简单、快速、特异性高，更具有实用价值。在SSCP分析中，单链DNA因碱基序列的变异，导致构型改变，在进行凝胶电泳时，其泳动速率发生改变，从布将变异的DNA与正常DNA区分开，统计表明100-300bp分子大小的ssDNA突变检出率可达97％，300-450bp标出率可达69％，因此大于400bp的片段多态性应采用其它方法检测。

遗传病是由于遗传基础异常而引起的疾病，人类遗传病约有3000多种，患者占总人口数的10％。遗传病大概可分为单基因、多基因及染色体遗传病。常用诊断方法有家系谱分析、染色体检查（特别是显带法）、生物化分析等。随分子生物学发展，基因诊断愈来愈表现出其优越性，PCR技术是基因诊断的主要技术之一，为快速、准确地检测人类遗传病开辟了一个新的途径，预计与遗传相关的疾病的检测有80％将在3-5年内被PCR法所取代。PCR在遗传病诊断应用中，可以利用引物直接扩增变化的基因产物，也可以结合应用限制内切酶，分子杂交及电泳图谱分析进行诊断。应用较为广泛的有PCR法检测中海贫血、苯丙酮尿症、血友病、脆性X综合症及性别鉴定等。地中海贫血（Thalassmia）是世界上最常见的单基因遗传病，不有同类型，以a地中海贫血及在中海贫血最常见。a珠蛋白基因位于11号染色体短臂上，a珠蛋白基因突变致血红蛋白的全成减少或缺失，表现溶血性贫血，肝脾肿大，在我国发病率为0.66％，贵州、四川等地高发可达2.2％。应用PCR技术可以直接检测突变的基因诊断此病。苯丙酮尿症（Phenylketouria,PKU）是一种常染色体隐性遗传病。病人肝脏苯丙氨酸羟化酶严重缺乏使苯丙氨酸不能转化为酷氨酸血症，出现脑组织损伤，智力障碍。此病患者出生时正常，出生后一经确诊立即停止母乳喂养，采用低苯丙氨酸饮食治疗8-10年不致影响患者智力，但低苯丙氨酸饮食代价之昂贵是一般家庭所不能承受的，关键在于避免患儿出生。因此本病的早期诊断有极其重要的意义。PCR结合斑点杂交能有效诊断PKU。遗传性疾病的基因变化很复杂，单基因固定位点变异布致病的情况很少，因此基因诊断过程中往往需要PCR技术与限制性内切酶、斑点杂交、聚丙烯酰胺胶电泳图谱分析及扩增产物序列分析结合，作综合判断。

优生学包括基础优生学、社会优生学、临床优生学及环境优生学。孕期检查及产前诊断是临床优生学的最重要内容之一。孕期检查除一般项目外还能及时了解孕妇是患有某些对胎儿发育有严重影响的疾病如风疹病毒感染、沙眼衣原体、解脲支原体、单纯疱疹病毒、巨细胞病毒、弓体感染等，及时发现及时治疗并采取有效措施预防发展成为宫内感染。PCR技术对这些病原体的检测简便而确实，另外利用PCR技术可以对地中海贫血、血友病、苯丙酮尿症、脆性X综合症等遗传性疾病进行宫内诊断。可见PCR在优生优育方面有很高的应用价值。

PCR技术的出现对法医学的发展也有不可低估的作用。在法医物证如血斑、毛发、组织碎片等的确证，DAN多态性分析远比血清学或等方法确实可靠。早期DNA多态性分析主要使用Southern印迹杂交的方法。1985年Jeffreys首先采用肌红基因第一个内含子中的串联重复序列作探针，从人的基因库中筛选出小卫量DNA，使用阿交法产生杂交图谱即DNA指纹。这一技术成功地应用于个人识别及亲子鉴定。这种方法仍受到样本量的限制，当样本DNA数量不足时或DAN严重降解则不能正常检出。且杂交技术常使用同位素杯记探针要求较镐的防护措施。PCR技术的出现，可以对极少量物证如一根毛发、一滴血液、极小精斑都可以进行分析。在人类基因组中有许多由10-15bp核心顺序构成的串联重复DNA序列，具有单位点特征的称为VNTR结构，多位点串联成为卫星DNA。由于VNTR在等位基因中的多态性便构成了遗传标记。使用PCR技术对其进行扩增结合对扩增产物凝胶电泳图谱分析即可进行个人识别及亲子鉴定。由2-6核苷组成的重复串联序列称为微卫星。在人类基因组中，微卫星更加丰富。微卫星的重复序列比VNTR短，扩增分型简便，易于自动化，在VNTR或微卫星不仅重复片段的数量不同而且重复片段的核苷酸也具有多态性。在VNTR或微卫星多态性分析时，如再结合碱基配对分析可以藜得更大量的信息，这一种更有希望的标志即MVR（Microsatllite Variant Repeats）。理论上其对嫌疑人的排除率为99.999％。PCR技术可以完成替代早期的Southern印迹法进行多态性分析而且操作简便，敏感性及准确性都有大幅度的提高。当然PCR技术在法医中的应用仍在起步阶段有许多技术问题等待解决，如样本中的抑制剂、检村中DNA的损报告伤、PCR扩增污染等。想念随着PCR技术的不断完善它将在法医学领域中有更加广泛的应用。

第三篇：《临床微生物学检验》教学大纲

《临床微生物学检验》教学大纲

课程号

制定单位

制定人洪秀华 审核人 胡翊群

制定时间

课程概述

临床微生物学检验是国家教委规定的医学检验专业主干学科和必修课程，在 医学检验人才培养中发挥主要作用。主要讲授微生物学基础理论及其技术，临床上重要的病原菌的生物学性状、致病性和微生物学检验方法。通过本课程学习，掌握各类感染性疾病的微生物特性和系统的检出病原体检验方法，为临床诊断、治疗、预防提供科学依据。课程适用于医学检验专业4年制学生使用，课程总学时数为162，其中实验71学时。课程使用中国医药科技出版社出版的《临床微生物学检验》为教材；实验教材为北京人民卫生科出版社出版的《临床微生物学与微生物检验实验指导》;参考教材为北京科技文献出版社出版的考试辅导丛书《临床微生物学检验》。考试采用闭卷形式。

课程教学基本要求

讲授内容和时数

讲授内容

讲授时数

实验时数

绪论 1 微生物的信息贮存与传递 2 细菌的生理学 5 6 细菌代谢 2 细菌遗传变异 4 细菌感染与宿主免疫 5 细菌实验诊断技术与质量控制 3 5 细菌耐药性检測 6 3 微生物的分类与命名 1 球菌 5 6 肠杆菌科 7 9 非发酵革兰阴性菌 3 3 弧菌 3 2.5 弯曲菌、螺杆菌 3 0.5 需氧革兰阳性杆菌 3 3 革兰阴性小细菌 3 2 分枝杆菌 3 2 厌氧菌 5 2 螺旋体、2.5 1 立克次体、支原体、衣原体 2.5 0.5 真菌 3 1.5 病毒的基本性状 3 病毒感染与宿主免疫 1 病毒实验室诊断 2 3 病毒学各论 6 临床标本的微生物检测 3 19 考试 4 2 合计 91 71

绪论

【目的要求】

掌握

微生物分类其主要特点和微生物学的定义。

了解

医学微生物学发展简史和临床微生物学的任务及其在检验医学中的地位。【教学时数】

讲授1学时。【讲授内容】

微生物定义、种类、存在、和人类的关系，医学微生物研究的内容和郭霍原则，临床微生物学的任务及其在医学检验专业中的地位，微生物学的发展简史和临床微生物学的发展方向。

【自学内容】

医学微生物学发展史上的重要时期，免疫学的兴起和发展、微生物对遗传学和分子生物学发展的影响。

第二章 细菌生理学

【目的要求】

掌握 细菌大小及其测量单位、细菌的基本形态；细菌的结构、化学组成和功能；细菌各种结构的生物学意义和临床意义及在细菌检验中的作用。革兰阳性菌与阴性菌的结构差异。细菌生长繁殖方式和生长速度，细菌生长曲线意义，影响细菌生长的因素。

细菌的人工培养，培养基的分类及用途。细菌生长繁殖条件，细菌繁殖方式、速度及其生长曲线；细菌的人工培养的培养基、培养方法及生长现象观察。

熟悉

细菌的营养类型，营养物质及其吸收。消毒灭菌的常用术语、方法、机制和适用范围。【教学时数】

讲授5学时，实验6学时。【讲授内容】

细菌的大小和形态 大小和形态及它们受细菌种类、菌龄和环境因素影响。鞭毛 定义、分类、作用与意义；菌毛的定义、分型、作用与意义。荚膜与糖萼 定义、分类、作用与意义

细胞壁的结构、化学组成和功能 肽聚糖骨架及其联结方式；革兰阳性细菌细胞壁的特殊组成；革兰阴性菌的外膜和周浆间隙；不同组成的细胞壁与革兰染色性、致病性和对抗生素敏感性的关系；细胞壁缺陷细菌(原生质体和圆球体)的临床意义。

细胞膜的结构、化学组成和功能 细胞膜和真核细胞膜的异同点；细胞膜的特殊结构－中介体。

细胞质的化学组成和功能 核蛋白体、异染颗粒、质粒、芽胞。

核质的特点和功能(详见第四章)【实验内容】

细菌的形态学检验 显微镜的构造和应用；细菌不染色标本检查；革兰染液的配制；细菌涂片的制作和革兰染色；细菌的基本形态和特殊结构。

细菌培养技术

培养基制备技术；细菌培养方法；分离培养和接种技术； 倾注培养和活菌计数；细菌生长现象的观察。【复习思考题】

名词解释：芽胞、鞭毛、荚膜、菌毛、中介体、原生质体、圆球体、细菌L型、培养基、细菌生长曲线、菌落、自养菌、异养菌、污染菌落。

问答题：

1.简述革兰阴性和革兰阳性细菌细胞壁的结构差异及其临床意义。2.试述观察细菌的大小和形态的方法及其注意点。3.细菌L型的检查在临床上有何意义? 4.简述细菌生长曲线的临床意义。

5.如何观察细菌在各种不同培养基生长的现象？ 6.简述细菌生长的必需条件。

第三章 细菌代谢

【目的要求】

掌握

细菌的化学组成，细菌的物理性状。合成代谢、分解代谢、中间代谢、发酵、呼吸、有氧呼吸、厌氧呼吸概念，细菌的合成代谢产物（热原质、毒素和侵袭性酶类、色素、抗生素、细菌素、维生素）及其在医学上的意义。

了解

细菌的化学组成、物理性状及其临床意义。【教学时数】

讲授2学时。【讲授内容】

细菌的物理性状

带电现象，巨大表面积，半透明和渗透压，光学性质。

细菌分解代谢和生化反应

糖分解、蛋白质分解。

细菌合成代谢产物

热原质、毒素、侵袭性酶、色素、抗生素、细菌素、维生素。

【自学内容】

细菌摄取营养的机制，细菌的生物氧化，需氧呼吸，发酵。【复习思考题】

名词解释：IMViC、氧化酶试验、凝固酶、生化反应、细菌数值分类。

问答题：

1.简述细菌生长曲线的临床意义。

2.如何观察细菌在各种不同培养基生长的现象？

3.简述不同物理性状的培养基在检验中的不同用途。

4.简述细菌生长的必需条件。

第四章

细菌遗传

【目的要求】

掌握

突变的类型、规律和发生机制，诱变剂的种类；基因重组的类型和机制，转座子的分类和转座的意义；质粒的结构、功能和特点，接合发生的过程和机制，高频率重组菌株和F’质粒的概念；噬菌体的生物学性状，噬菌体的生活周期及其与宿主的相互关系，转导的机制及意义；细菌转化的机制和人工转化的原理及意义。遗传变异的物质基础；微生物变异的机制；耐药性变异。

熟悉

细菌变异的表现形式和研究意义。

【教学时数】

讲授4学时。【讲授内容】

遗传变异的物质基础

细菌染色体(结构特点，细菌DNA复制、表达和调节)；细菌的质粒(质粒基本特性，质粒的分类，F质粒、R质粒)；细菌的插入顺序及转座子，转座噬菌体。噬菌体生物学性状，噬菌体的增殖和宿主相互关系(溶菌和溶原)，噬菌体在医学和生物学中的应用。

变异类型

遗传性变异和非遗传性变异，形态与结构的变异，培养特性的变异，抗原性变异，毒力变异，耐药性变异。

微生物变异的机理

突变(概念、规律、类型、机制)，细菌基因物质转移和重组（转化、转导、接合、溶原性转换、原生质体融合）。

遗传变异的实际应用 【复习思考题】

名词解释：突变、转座子、插入顺序、转化、转导、接合、溶原性转换、高频重组株、普遍性转导、局限性转导、R质粒、F质粒、突变株、BCG、空斑形成、温度敏感突变株(ts)，毒性噬菌体、温和噬菌体、溶原菌、前噬菌体。

问答题

试述细菌耐药变异的机制。

第五章 细菌感染与宿主免疫

【目的要求】

掌握

传染病的概念、病原菌感染类型及其传播方式。病原菌的致病性；条件致病菌的意义、条件致病菌与内源性感染的关系、引起内源性感染的机制。医院感染的类型、途径及病原菌的特点。正常菌群与菌群失调的概念、人体重要的正常菌群、菌群检测指标

了解 人体细菌的分类及与人体的关系；机体免疫防御系统组成。【教学时数】

讲授5学时。

【讲授内容】

感染，致病菌，非致病菌，条件性致病菌，正常菌群概念。

宿主与菌群的相互关系（有益菌、条件致病菌、病原菌）。病原菌的致病性与宿主免疫反应：病原菌的毒力包括侵袭力和毒素。毒素按其来源、性质和作用，分为外毒素内毒素两种。病原菌与传染病；医院感染；外源性感染和内源性感染。人体菌群与微生态相关疾病；常见微生态相关疾病微生态诊断。【自学内容】

宿主抵抗力，机体的基本抵抗力，抗细菌免疫。【复习思考题】

名词解释：正常菌群、菌群失调、条件性致病菌、外毒素、内毒素、外源性感染、内源性感染、社会感染、医院感染、显形感染、隐性或亚临床感染、持续性感染、潜伏感染细菌密集度。问答题：

1.2.3.4.5.6.7.试述人体细菌的分类及与宿主的关系并举例说明。试述细菌的致病物质及与致病有关的结构有哪些？ 简述机体非特异性免疫防御系统的组成。简述机体特异性免疫防御系统的组成。简述内源性感染的发病机制。何谓菌群失调，并举例说明之。

试述微生物如何入侵机体引起机体感染？

第六章

细菌实验诊断技术与质量控制

【目的要求】

掌握

掌握临床常见标本的细菌学检验程序和方法；掌握细菌学检验的形态学检 查方法；掌握细菌的分离培养技术和方法；掌握细菌代谢产物检测与鉴定技术。掌握细菌检验的质量控制。

了解

几种常用免疫学检测技术的原理和应用；核酸杂交与聚合酶链反应技术原理和应用。细菌感染的分子生物学检测技术、细菌感染免疫学检测、细菌毒素的检测、【教学时数】

讲授3学时，实验5学时。【讲授内容】

细菌形态学检查

普通光学显微镜的原理和应用；暗视野显微镜、相差显微镜、荧光显微镜、电子显微镜观察细菌形态和结构的意义。细菌染色标本检查：革兰染色法原理、步骤、结果判断；细菌不染色标本检查：细菌动力观察。

细菌的人工培养和生化反应

细菌生长条件、培养基；细菌接种方法；细菌培养方法；生化反应的原理；常见生化反应IMViC、蛋白分解产物试验、呼吸酶类试验、脂酶、凝固酶等原理和结果判断。【实验内容】

细菌鉴定技术

生物化学鉴定；数值编码鉴定；血清鉴定。生化反应的原理；常见生化反应IMViC、蛋白分解产物试验、呼吸酶类试验、脂酶、凝固酶等原理和结果判断；菌毒素检测。【自学内容】

动物实验：实验动物选择、动物接种法、动物实验的应用。

免疫检测技术：免疫荧光、酶免疫测定、凝集反应、免疫印迹、气－液相色谱技术、发光分析技术。

核酸技术：杂交技术、PCR技术。【复习思考题】

名词解释：生化反应、细菌数值分类、鉴别培养基。

问答题：

1.临床常见标本的细菌学检验程序和方法有哪些？

2.培养和鉴定细菌方法有哪些？各有何用途？

第七章-细菌耐药性检测

【目的要求】

掌握

抗菌药物敏感试验体外药敏试验意义、方法、原理和结果判断；细菌的耐药性产生机制和细菌的耐药性检查

熟悉

体外药敏试验的步骤；厌氧菌、真菌及分支杆菌体外药敏试验。

了解

临床常用抗菌药物作用机制。【教学时数】

讲授6学时，实验3学时。【讲授内容】

体外药敏试验

K-B纸片琼脂扩散法、稀释法、E试验、最低抑菌浓度测定和体外联合药敏试验原理、方法、结果判断及质量控制。

细菌耐药性检测

特殊耐药菌检测：耐甲氧西林葡萄球菌检测、耐青霉素肺炎链球菌检测、耐万古霉素肠球菌检测、产超广谱β-内酰胺酶的肠杆菌科细菌检测。

结核分枝杆菌及酵母样真菌体外抗菌药物敏感试验

稀释法原理及结果判断解释。

【实验内容】

抗生素敏感试验

纸片扩散法、稀释法、E试验。特殊耐药菌检测。【自学内容】

体内抗菌药物的活性和浓度的测定：微生物测定法和非微生物法。

【复习思考题】

名词解释：-内酰胺酶、E试验。

问答题：

1.试述抗菌药物敏感性检测方法的原理和质量检测。

2.试述检测细菌耐药性的几种方法。

第八章 微生物的分类与命名

【目的要求】

掌握

微生物在生物分类学中的地位；细菌的分类单位和命名。

熟悉

细菌的分类系统；细菌的分类方法。【教学时数】

讲授1学时。【自学内容】

微生物在生物分类学中的地位

细菌和原核生物界；真菌和真菌界；病毒和病毒界。

细菌的分类单位、系统和命名

细菌分类单位—种、属、科；细菌的株和型；细菌的双命名法；细菌的伯杰分类系统和CDC分类系统。

细菌的分类方法

生理学与生物学分类法(传统分类法和数值分类法)；遗传学分类法(DNA G+C mol%、核酸同源值测定、核蛋白体RNA硷基序列测定)。

病毒的分类方法

ICTV分类；习惯分类法。【复习思考题】

名词解释：株、标准株、型、种、属、科。

问答题：

试述细菌的双命名法和它们的分类系统。

第九章 球菌

【目的要求】

掌握 常见化脓性球菌的种类。葡萄球菌的分类方法、微生物特性、微生物学检 验，链球菌的分类方法、微生物特性、微生物学检验，鉴别甲型链球菌和肺炎链球菌的主要试验。肠球菌的分类、微生物特性、微生物学检验，奈瑟菌属的分类方法、微生物特性、微生物学检验

熟悉

葡萄球菌属、链球菌属、肠球菌属、奈瑟菌属细菌其致病因素及所致主要疾病。

【教学时数】

讲授5学时，实验6学时。【讲授内容】

葡萄球菌属

分类

与链球菌属的鉴定要点；凝固酶阳性葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌。

生物学性状

形态与染色(革兰阳性球菌、葡萄状)，培养特点(耐盐)，生化反应，抗原结构，抵抗力。

临床意义

致病物质(毒素、杀白细胞素、血浆凝固酶、肠毒素、皮肤坏死毒素)；致病特点(化脓性感染、食物中毒)；耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和凝固酶阴性葡萄球菌(MRSCN)。

微生物学检查

检验程序，检验方法(直接涂片、分离培养及鉴定)，结果的评价和报告。

.链球菌属

链球菌

分类

按溶血性分为甲、乙、丙三大类；按Lancefied分类。

生物学性状

形态与染色(革兰阳性球菌、链状)，培养特性(营养要求高)，生化反应，抗原结构(群和型特异性抗原)。

临床意义

致病物质(毒素－溶血素O及S，酶－透明质酸酶、链激酶、链道酶、蛋白酶、核糖核酸酶)；所致疾病(化脓性感染,中毒性感染－猩红热,变态反应性疾病－风湿热、肾小球肾炎)。

微生物学检查

标本(咽拭、血液、脓液、血清)；分离培养及鉴定；链球菌分群试验；血清学反应(抗链球菌溶血素“O”)。

肺炎链球菌

生物学性状

形态与染色(革兰阳性双球菌、矛头状有荚膜，与甲型溶血性链球菌鉴别)，生化反应(胆汁溶菌等)，抗原结构。耐青霉素的肺炎链球菌(penicillinresistant streptococous pneomonia，PRSP)

肠球菌属

生物学性状

形态与染色，培养特性，分类。

临床意义

医院感染，耐药菌株，耐万古霉素肠球菌(VRE)。

微生物学检查

检验程序，检验方法(直接涂片、分离培养和鉴定、种间鉴定)，耐万古肠球菌。脑膜炎奈瑟菌

生物学特性

形态(肾形双球菌，细胞内)与染色，培养特性(营养要求高)，抵抗力(抵抗力极低易自溶)，抗原结构与分型，流行菌群。

临床意义

传染源，传播途径，鼻咽炎，菌血症，脑膜炎，带菌者。

微生物学检查

标本采集(按不同病期采取不同标本)，送检(保温)，检验程序，检查方法(涂片、分离培养、血清学分群)。淋病奈瑟菌

生物学性状

形态与染色，培养特性，生化反应。

临床意义

致病性(性病、新生儿眼结膜炎)，耐药性。

微生物学检查

标本采集和运送；分泌物涂片、分离培养、鉴定。

.布兰汉菌

形态与染色，培养特性，生化反应，所致疾病。【实验内容】

金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌形态染色、菌落特性、血浆凝固酶试验；链球菌(甲、乙、丙三型)、肺炎链球菌、粪肠球菌形态染色，菌落观察，生化反应；链球菌溶血素O试验；淋病奈瑟菌阴道涂片染色，菌落观察生化反应。【自学内容】

了解葡萄球菌生化反应鉴定程序；微球菌属的生物学特性及细菌学检查；其他奈瑟菌属。

【复习思考题】

名词解释：血浆凝固酶、MRSA、MRSCN、VRE、PRSP。

问答题：

1.金黄色葡萄球菌和乙型溶血性链球菌在形态、培养、对抗菌药物的抵抗力及产生毒性物质方面有何不同？

2.鉴定链球菌有哪些试验 ？

3.肺炎链球菌形态结构有何特点？它与甲型链球菌如何鉴别？

4.淋病奈瑟菌是怎样传播的？在其微生物学检查中应注意哪些事项？

第十章 肠杆菌科

【目的要求】

掌握

肠杆菌科的命名与分类；肠杆菌科细菌的共同特性、临床意义和微生物学检验；大肠埃希菌、沙门菌属、志贺菌属、与临床医学密切相关的肠杆菌科（变形杆菌属、克雷伯菌属、肠杆菌属）的生物学特性、临床意义和微生物学检查。

熟悉

耶尔森菌属生物学特性、临床意义。

了解

沙雷菌属、哈夫尼菌属、普罗威登菌属、摩根菌属生物学特性、临床意义和微生物学检查。【教学时数】

讲授7学时，实验9学时。【讲授内容】

.概述

肠杆菌科定义、命名与分类(伯杰系统细菌学手册)、共同特性(染色特性、培养特性、生化反应及抗原结构)；临床意义和微生物学检查(标本采集运送、分离培养、鉴定和血清学检测)。.埃希菌属

生物学性状

形态染色、培养特性、生化反应、抗原结构。

临床意义

致病因素(侵袭力、内毒素和肠毒素)；所致疾病(肠道外感染，肠道感染－产毒素性大肠埃希菌、肠致病性大肠埃希菌、肠侵袭性大肠埃希菌、肠出血性大肠埃希菌、肠凝聚型大肠埃希菌)。

微生物学检查

检验程序、分离培养、生化反应、血清学鉴定及毒素(LT、ST)检测。

沙门菌属

血清学分类

生物学性状

形态染色，常用培养基及特性，生化反应，抗原构造，变异性。

临床意义

传染源，传播途径，致病因素及所致疾病(伤寒、副伤寒、胃肠炎、菌血症和败血症)。

微生物学检查

标本采集、分离培养和鉴定(初步鉴定—氧化酶、KIA、MIU，最后鉴定—肠杆菌科试剂盒、沙门因子血清凝集试验)；Vi噬菌体分型、肥达反应。.志贺菌属

生物学性状

形态染色、培养特性、生化反应、抗原构造(分类与分型)、变异性。

临床意义

传染源、传播方式。

变形杆菌属、克雷伯菌属、肠杆菌属 生物学特性、临床意义和微生物学检查。

耶尔森菌属

生物学性状

形态染色、培养特点、生化反应、抗原构造。

临床意义

致病因素(内毒素、外毒素)；所致疾病临床类型(鼠疫耶尔森菌引起鼠疫，小肠结肠耶尔森菌引起小肠结肠炎)。

微生物学检查

标本采集、检验程序、分离培养和鉴定。【实验内容】

.大肠埃希菌、沙门菌属、志贺菌属细菌形态染色，菌落观察，生化反应，血清学试验；肥达试验；小肠结肠耶尔森菌、枸橼酸杆菌属、克雷伯菌属、肠杆菌属、沙雷菌属、变形杆菌属细菌形态染色，菌落观察，生化反应。【自学内容】

蜂房哈夫尼菌、多源菌属、普罗威登菌属及摩根菌属。【复习思考题】

名词解释：SS琼脂、KIA、MIU。

问答题：

1.肠杆菌科根据伯杰系统细菌学手册共分几属？各写出一个代表菌种。

2.大肠埃希菌在临床上主要引起哪些疾病？引起肠道感染的该菌可分几组？(用 中、英文写出)。

3.伤寒患者的细菌学检验，根椐病程有何特殊的采样要求。

4.列出志贺菌属及伤寒沙门菌在KIA和MIU的基本生化反应。

肺炎克雷伯菌处初次分离时菌落有何特点？ 6．何谓产ESBL株，其临床意义是什么？

第十一章 非发酵革兰阴性菌

【目的要求】

掌握

非发酵革兰阴性菌的概念、种类和初步鉴定特征。假单胞菌属的分类、临床意义、细菌特性、实验室检查和耐药性。铜绿假单胞菌的临床意义、细菌特性、实验室检查和耐药性。荧光假单胞菌、不动杆菌属、寡养单胞菌属、产碱杆菌属和军团菌的临床意义、细菌特性、实验室检查和耐药性。

了解

恶臭假单胞菌、斯氏假单胞菌的临床意义、细菌特性和实验室检查。黄杆菌属和莫拉菌属的细菌特性和实验室检查。莫拉菌属、军团菌属生物学性状，临床意义和微生物学检查。

【教学时数】

讲授3学时，实验3学时。【讲授内容】

概述

非发酵菌定义、主要菌属、假单胞菌分类。铜绿假单胞菌生物学性状(单端鞭毛、生长温度范围25~42℃、绿脓素)；临床意义(条件性致病菌)；微生物学检查(标本采集、检验程序、分离培养和鉴定)。荧光假单胞菌生物学形状、临床意义和微生物学检查。

嗜麦芽黄 寡养单胞菌细菌特性、实验室检查和耐药性；

不动杆菌属、产碱杆菌属和军团菌黄杆菌属的主要菌种、临床意义，生物学性状及其临床意义(条件性致病菌)。

军团菌属

分类命名、生物学性状、临床意义和微生物学检查。【实验内容】

假单胞菌属和嗜麦芽寡养单胞菌形态染色、菌落观察、生化反应；不动杆菌属和产碱杆菌属形态染色、菌落观察和生化反应。【复习思考题】

名词解释：非发酵菌、O-F培养基、氧化酶试验。

问答题：

1.非发酵菌为条件性致病菌，常引起人类哪些疾病？如何鉴定之？

2.临床上引起感染的非发酵菌主要有哪些？

第十二章 弧菌属、气单胞菌属和邻单胞菌属

【目的要求】

掌握

霍乱弧菌、副溶血弧菌的生物学性状、临床意义和微生物学检查。

熟悉

非O1群霍乱弧菌、O139、气单胞菌属的生物学性状、临床意义和微生物学检查。气单胞菌和 邻单胞菌属生物学性状、临床意义、微生物学检查。

【教学时数】

讲授3学时，实验2.5学时 【讲授内容】

弧菌属

霍乱弧菌

生物学性状(形态染色、活泼动力)，培养特性(嗜碱、需氧)，选择鉴别培养基，生化反应(发酵蔗糖)，抗原结构，变异性，抵抗力；临床意义(致病因素、所致疾病)；微生物学检查(标本采集、检验程序、检验方法)。

非O1群霍乱弧菌

血清学分型。

O139血清学分型

血清学分型。

副溶血弧菌

生物学性状(形态染色、活泼动力)，培养特性(嗜盐性、耐碱性)，选择鉴别培养基，生化反应，神奈川现象，抗原结构，抵抗力；临床意义(耐热溶血毒素和类似毒素，所致疾病)；微生物学检查(标本采集、检验程序与方法)。

.气单胞菌属和邻单胞菌属

分类，气单胞菌属生物学性状，临床意义和微生物学检查。【实验内容】

霍乱弧菌和副溶血弧菌形态观察、菌落观察、生化反应；霍乱弧菌分型试验、副溶血弧菌鉴定试验。气单胞菌和邻单胞菌生物学性状、临床意义和微生物学检查。

【复习思考题】

名词解释：TCBS培养基、神奈川现象。

问答题：

1.如何进行霍乱弧菌和副溶血弧菌的培养、分离和鉴定？

2.霍乱弧菌及副溶血弧菌主要的致病因素和致病机制。

第十三章

弯曲菌属和螺杆菌属

【目的要求】

掌握

螺杆菌属的主要特性、分类；幽门螺杆菌的临床意义、细菌特性、实验室检查。

熟悉

弯曲菌属的主要特性、分类；幽门螺杆菌的临床意义、细菌特性、实验室检查。

【教学时数】

讲授3学时，实验0.5学时。【讲授内容】 弯曲菌属

弯曲菌的主要特性、分类；空场弯曲菌、大肠弯曲菌、胎儿弯曲菌的鉴别、致病。弯曲菌的微生物学检查。

螺杆菌属

幽门螺杆菌生物学性状(形态染色、培养所需气体条件)、选择培养基；与慢性胃炎关系；微生物学检查(快速脲酶试验、碳标记呼吸试验、PCR检测HP、分离培养和鉴定)。幽门螺杆菌的临床意义、细菌特性、实验室检查。【实验内容】

幽门螺杆菌形态染色和培养特性、生化反应(氧化酶、脲酶和快速脲酶试验)。【复习思考题】

名词解释：快速脲酶试验。问答题：

1．螺杆菌的致病机制及主要细菌特性。

2．如何培养鉴定胃炎活体组织标本中的幽门螺杆菌。

第十四章苛养菌与人兽共患病原菌

【目的要求】

掌握

苛养菌概念;嗜血杆菌属主要细菌的生物学性状、临床意义和微生物学检查。

熟悉

鲍特菌属的生物学性状、临床意义和微生物学检查。了解

人兽共患病原菌的概念，常见细菌。

【教学时数】

讲授3学时，实验2学时。【讲授内容】 苛养菌概念

嗜血杆菌属

主要菌种、形态染色、培养(X、V因子)、卫星现象、生化反应；临床意义；主要菌种、形态染色、培养(标本采集、检验程序和检查方法)。

鲍特菌属

主要菌种、形态染色、培养特性，主要菌种、形态染色；微生物学检查。

人兽共患病原菌

布鲁菌属、巴斯德菌属、弗朗西斯菌属主要细菌的微生物学特性及其临床意义。

【实验内容】 【复习思考题】

名词解释：流感嗜血杆菌

形态染色、菌落观察、卫星现象、X＋V因子试验。

第十五章 革兰阳性需氧杆菌

【目的要求】

掌握

白喉棒状杆菌生物学性状、临床意义和微生物学检查；炭疽芽胞杆菌和蜡 样芽胞杆菌生物学形状、临床意义和微生物学检查；产单核细胞李斯特菌生物学形状、临床意义和微生物学检查。

讲授3，实验3学时。【讲授内容】

炭疽芽胞杆菌

生物学性状(形态染色芽胞、抗原结构)；临床意义(炭疽毒素、所致疾病)；微生物学检查(标本采集处理、检验程序和方法、鉴定试验、动物试验)。【自学内容】

蜡样芽胞杆菌

生物学性状(形态染色芽胞、卵磷脂酶试验)；临床意义和微生物学检查。

产单核细胞李斯特菌

生物学性状；临床意义；微生物学检查。白喉棒状杆菌

生物学形状(形态、染色、异染颗粒、培养特性、亚碲酸钾培养基、生化反应、抗原构造)；临床意义(白喉外毒素的特性、致病机制、预防接种、锡克试验)；微生物学检查(标本采集、检验程序和检验方法)。

其他棒状杆菌

常见的菌种及所致疾病；与白喉棒状杆菌的鉴别 【实验内容】

蜡样芽胞杆菌形态及菌落观察、生化反应和活菌计数；

炭疽芽胞杆菌形态及菌落观察、生化反应；产单李斯特菌形态及菌落观察、生化反应。【复习思考题】

名词解释：Elek平板毒力试验、异染颗粒、吕氏血清斜面。

问答题；

1.白喉棒状杆菌和类白喉棒状杆菌的区别。

2.炭疽芽胞杆菌和蜡样芽胞杆菌的鉴别。

3.产单李斯特菌的主要生物学形状。

第十六章分枝杆菌属

【目的要求】

掌握

分枝杆菌属主要种别；结核分枝杆菌的生物学性状、临床意义和微生物学检查。

熟悉

麻风分枝杆菌生物学性状、临床意义和微生物学检查。

【教学时数】

讲授3学时，实验2学时。【讲授内容】

分枝杆菌属

共同生物学性状；主要种别；国际上应用的分类。

结核分枝杆菌

形态染色(抗酸阳性、分枝生长、Much颗粒)；专性需氧培养、菌落特征；生化反应；菌体成分和抗原；变异及抵抗力；临床意义、Koch现象、结核菌素试验；微生物学检查(标本采集、涂片检查、分离培养、核酸检测)。

非典型分枝杆菌

分类、与结核分枝杆菌的鉴别。

麻风分枝杆菌

生物学形状、临床意义、微生物学检查。

【实验内容】

结核分枝杆菌

涂片法检查、抗酸染色、金胺“O”荧光染色，菌落观察、培养。

麻风分枝杆菌

病理组织切片涂片染色检查。【复习思考题】

名词解释：抗酸染色、鲁琴培养基、结核菌素试验。

问答题：

1.试述结核分枝杆菌感染和免疫的关系。

2.结核分枝杆菌的主要致病因素是什么？

第十七章 厌氧菌

【目的要求】

掌握 厌氧菌的概念、种类及其在人体中的分布特点。厌氧菌感染的特点，厌氧菌感染的临床及细菌学指征。厌氧菌标本采集与送检的要求及方法，厌氧菌的检验程序，厌氧培养方法。无芽胞厌氧菌在临床厌氧菌感染中的意义、常见种类、细菌学特性与细菌检验方法。厌氧性细菌的概念、分布及其在临床各科中感染的普遍性；厌氧菌的分类；厌氧菌标本的采集和送检；厌氧菌分离与鉴定。

熟悉

梭状芽胞杆菌属细菌的生物学性状；临床意义和微生物学检查；无芽胞厌氧菌的常见种类及其它们的生物学性状、临床意义和微生物学检查。【教学时数】

讲授5学时，实验2学时。【讲授内容】

概述

分布特性、种类；厌氧菌感染因素；感染的临床及细菌学特征。

厌氧菌的分离培养和鉴定

标本的采集方法；标本的运送－无氧小瓶运送法、针筒运送法、厌氧袋运送法、大量液体标本运送法；培养基的种类和选择；厌氧培养法－厌氧罐培养法、抽气换气法、气袋法、厌氧手套箱法；鉴定试验－形态染色、菌落性状、抗生素敏感性鉴定试验、生化特性、气液相色谱分析。

梭状芽胞杆菌属

破伤风梭菌、气性坏疽病原梭菌、肉毒梭菌和艰难梭菌的生物学性状、临床意义和微生物学检查。

类杆菌属

脆弱类杆菌群、产黑色素类杆菌群和厌氧性球菌的生物学性状、临床意义和微生物学检查。【实验内容】

破伤风梭菌、产气荚膜梭菌形态染色、菌落观察、芽胞染色；庖肉基生长现象、卵磷脂酶试验、汹涌发酵、动物试验(毒素被抗毒素中和)。

脆弱类杆菌和产黑色素类杆菌形态染色、厌氧培养、生化反应、胞外酶快速试验。【自学内容】

无芽胞厌氧菌—梭杆菌属、双歧杆菌属、乳酸杆菌属 【复习思考题】

名词解释：庖肉培养基、汹涌发酵现象、聂格尔试验。

问答题：

1．试述厌氧培养成功的关键。

2．试述厌氧菌微生物学检查的程序和方法。

第十八章 螺旋体

【目的要求】

掌握

螺旋体的生物学性状，临床意义和微生物学检查，相互之间的生物学性状的比较。

熟悉

螺旋体生物学性状，临床意义及微生物学检查。【教学时数】

讲授2.5学时，实验1学时。

【讲授内容】

螺旋体

概述

生物学性状

形态结构(细胞壁、细胞质组成的原生质圆柱体、轴丝、周浆鞭毛)，染色性，活泼螺旋式运动；培养特性(需氧生长、柯氏培养基、密螺旋体的组织培养)；抗原结构(特异性抗原、类属抗原)；抵抗力。

临床意义

性传播性疾病，自然疫源性疾病(钩端螺旋体病，莱姆病，回归热)

微生物学检查梅毒螺旋体血清学试验。【复习思考题】

名词解释：RPR

问答题：

1.试述螺旋体的生物学性状。

2.螺旋体微生物学检查原则。

第十九章 立克次体、支原体、衣原体

【目的要求】

掌握

支原体、立克次体和衣原体的生物学性状，临床意义和微生物学检查，相互之间的生物学性状的比较。

熟悉

支原体、立克次体、衣原体和人类感染密切的菌种生物学性状，临床意义及微生物学检查。【教学时数】

讲授2.5学时，实验0.5学时。【讲授内容】 支原体

概述

生物学性状

形态结构(无细胞壁、多形性、革兰染色阴性)；培养特性(pH、马或小牛血清、微氧环境、油煎蛋样菌落)；生化反应(葡萄糖、精氨酸、尿素、CCU)；抗原结构(GIT及MIT)；抵抗力。

临床意义泌尿生殖道感染的常见支原体的致病性。

微生物学检查

标本采集，分离鉴定。

立克次体

概述

生物学性状

形态结构、繁殖代谢、抗原成分、变异性、抵抗力。

临床意义

立克次体病、衣原体

概述

生物学性状

独特生活周期，抗原成分LPS和外膜蛋白，抵抗力。

临床意义

沙眼衣原体感染，肺炎衣原体感染。

微生物学检查

标本采集与处理，直接镜检，分离与鉴定。

【实验内容】 支原体鉴定板条 【复习思考题】

名词解释：始体、原体、CCU。问答题：

1.支原体、衣原体、立克次体微生物学检查原则。

2.支原体、衣原体、立克次体的生物学性状及他们和细菌、病毒的相互比较。

第二十章 真菌学检验

【目的要求】

掌握

真菌的基本特征、分类、致病性、微生物学检查；医学上重要的真菌临床意义及微生物学检查。

了解

医学上有关的真菌性疾病与病原性真菌。

【教学时数】

讲授3学时，实验1.5学时。【讲授内容】

概述

生物学性状(营养体、繁殖体、孢子)，分类与致病，致病特点，微生物学检查(标本采集、非培养法、培养法)。

医学上重要酵母菌

念珠菌

临床意义，真菌检验和血清学诊断。

隐球菌

临床意义，真菌检验。

二相性真菌

特征，真菌检验，血清免疫学试验。

曲霉菌

特征，分离鉴定，血清免疫学诊断。

毛霉菌

特征，分离鉴定，血清免疫学诊断。

皮肤真菌 临床意义，真菌检验(标本采集、直接镜检、分离鉴定)。【实验内容】

浅部真菌（石膏样小孢子、石膏样毛霉菌、絮状表皮藓菌）的菌落观察；芽管形成试验；菌丝、孢子镜下观察；白假丝酵母菌菌落观察、镜下形态；科玛嘉真菌显色平板。

【复习思考题】

名词解释：菌丝、孢子、二相型真菌、沙氏培养基。

问答题：

1.试述真菌的结构特征及其在真菌检验中的重要意义。

2.深部真菌感染有何临床意义？

第二十一章病毒基本性状

【目的要求】

掌握

病毒体大小、测量单位、基本形态；病毒的基本特性、结构和化学组成及功能；病毒的复制周期及增殖过程中的异常现象；噬菌体生物学特性及其应用。

了解

理化因素对病毒的影响。【教学时数】

讲授3学时。【讲授内容】

病毒体的形态结构

病毒大小与形态；病毒结构：核心、衣壳、包膜、辅助结构；核衣壳对称型。

病毒的复制周期

吸附、穿入、脱壳、生物合成、组装与成熟、释放。

异常病毒复制

顿挫感染与缺损病毒。

干扰现象

干扰类型、干扰机制、干扰现象意义。

亚病毒

类病毒、卫星RNA、朊病毒。

理化因素对病毒的影响

温度、pH、射线、脂溶剂。【自学内容】

两种病毒感染同一宿主细胞时的增殖。【复习思考题】

名词解释：病毒体、衣壳、核衣壳、核衣壳对称型、包膜、病毒的灭活、病毒复制周期、顿挫感染、缺损病毒、问答题： 叙述病毒的基本特性。在形态大小、结构、生长繁殖、培养方法和细菌相比较有何区别?

第二十二章 病毒感染与宿主免疫 第二十三章 病毒感染的实验诊断

【目的要求】

掌握

病毒的感染类型；病毒的致病机制；病毒学分离培养鉴定的方法及病毒增殖的指标；病毒血清学诊断方法及原理；病毒感染的早期诊断的原则。了解

病毒的感染方式与途径；宿主的抗病毒免疫。【教学时数】

讲授3学时，实验3学时。【讲授内容】

病毒感染的方式与途径

水平传播、垂直传播。

病毒的感染类型

隐性感染、显性感染。

病毒的致病机制

病毒对宿主细胞的直接作用：杀细胞效应、稳定状态感染、细胞凋亡包涵体的形成、细胞转化增生与整合感染；免疫病理损伤及对免疫系统的影响。宿主的抗病毒免疫

非特异性抗病毒免疫；特异性抗病毒免疫。

病毒学检验原则

直接检查病毒体、病毒核酸和病毒抗原；分离培养鉴定病毒体、病毒学清学诊断患者血清中特异抗体。

病毒分离培养与鉴定

标本采集时间、部位，标本的运送和保存，标本的处理；分离培养方法(组织培养、动物接种、鸡胚接种)；病毒的鉴定(初步鉴定、最后鉴定)；病毒培养结果的报告。

病毒血清学诊断

原理、补体结合试验、中和试验、TCID50、血凝抑制试验、间接免疫荧光检测、酶联免疫吸附测定。

病毒感染早期诊断

病毒胞内抗原检出，病毒胞外抗原检出；光学显微镜检查病毒包涵体；电镜及免疫电镜检查病毒体。【实验内容】

病毒鸡胚接种技术、流感病毒血凝试验、正常细胞与病毒感染细胞CPE效应的观察，酶免法测EB病毒。

【复习思考题】

名词解释：潜伏感染、隐性感染、TCID50、包涵体、血凝现象。

问答题：

1.试述细胞水平的病毒感染。

2.试述病毒分离检验的基本原则、方法和步骤。

3.解释各种病毒增殖指标的含义和原理。

4.概括引起常见的感染性疾病病毒的生物学性状、临床意义和检测特点

第24章肝炎病毒 第25章疱疹病毒 第26章呼吸道病毒

第29章人类免疫缺陷病毒 【目的要求】

掌握 甲型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、丁型肝炎病毒、戊型肝炎病毒、单纯疱疹病毒、水痘-带状疱疹病毒、巨细胞病毒、EB病毒、流感病毒、SARS-CoV、人类免疫缺陷病毒的临床意义、微生物特性、微生物检验

熟悉 肠道病毒的生物学性状，临床意义和微生物学检查。了解

狂犬病毒、人乳头瘤病毒的临床意义和微生物学检查。【教学时数】。

讲授6学时 【讲授内容】

甲型肝炎病毒 丙型肝炎病毒丁型肝炎病毒戊型肝炎病毒分类、临床意义、微生物特性、微生物检验

疱疹病毒的种类和共同特点单纯疱疹病毒的水痘-带状疱疹病毒巨细胞病毒EB病毒致病性和检测方法。

呼吸道病毒的种类。掌握流感病毒、SARS-CoV的分类方法、生物学性状、微生物学检验方法，熟悉所致主要疾病及发病机理。

人类免疫缺陷病毒的概念、形态结构、传播途径、致病机制、培养特性及其常用实验室检查法的原理。【复习思考题】

问答题：试述上述病毒分离检验的基本原则、方法和步骤。

各种临床标本的微生物学检查

【目的要求】

掌握

血液、脑脊液、粪便、生殖道分泌物、尿液、脓汁及痰液标本的常见病原微生物检测的程序和结果报告；各种临床标本微生物学检测的基本技能。【教学时数】

讲授3学时，实验19学时。【讲授内容】

各种临床标本

采集和运送；常见致病菌的检验方法和鉴定要求；检测报告的发出方式。

【实验内容】

血液标本

标本采集和接种；A群链球菌、枯草芽孢杆菌、产气肠杆菌、沙门菌属和葡萄球菌鉴定。

粪便标本

标本采集；一般性状检查(量、外观、气味、酸碱反应、寄生虫和结石)；化学检查(隐血试验、粪胆色素检查)；显微镜检查(细胞、食物残渣、结晶)；细菌学检查(SS琼脂平板接种、志贺氏菌属的鉴定)。

尿液标本

标本和采集；尿液标本的细菌学检验程序；尿液标本细菌计数法；肠球菌、大肠埃希菌和变形杆菌的鉴定。

泌尿生殖道标本

标本采集；外观及清洁度检查；细菌学检查(淋病奈瑟菌、支原 体和衣原体鉴定)。

痰液标本

标本采集；细菌检测程序；细菌鉴定(结核分枝杆菌、肺炎链球菌和甲型溶血性链球菌)。

脓汁分泌物标本

标本采集；检测程序；细菌鉴定(铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌)。

脑脊液标本

标本采集；一般性状检查；化学检查；显微镜细胞检查；细菌学检查(脑脊液奈瑟菌和新型隐球菌、产单核李斯特菌)【复习思考题】

名词解释：运送培养基、标本处理。

问答题：

简述各种临床标本微生物学检查的程序及常见病原微生物的鉴定。21

第四篇：PCR在临床检验中的应用

PCR在临床检验中的应用

医学检验大致可分为形态学、生物化学、血清免疫学和分子生物学几大类，其分别代表几代实验诊断技术。60年代DNA双螺旋结构及半保留复制模式的出现，70年代基因重组及体外基因克隆技术、分子杂交技术的应用使分子生物学在疾病诊断中得到了长足的发展。特别是1985年Mullis发明了聚合酶链式反应（PCR）技术，使医学界真正兴起了基因诊断技术热，成为现代医学发展的又一里程碑。用于临床检验的PCR技术与经典的PCR反应在操作上稍有区别，有其自己的特色。一般在样品处理上，多采用非离子去污剂一次加热处理，这种方法对DNA纯化有限，但适应临床微量、快速的特点。另外PCR反应体系中各组成成份往往都预分装到反应管中，既减少操作者的工作强度而且也减少了污染的机会，具有极高的使用价值。本公司率先研制并推出单管单人份的PCR诊断试剂，具有开创性意义。这些改进都不影响PCR效果，同样表现出高特异性、高敏感性、简便快捷等PCR最优秀的特征，在常见传染病、性病、肿瘤、遗传病、寄生虫病、优生优育、法医学等广泛领域中有相当高的实际应用价值。

常见的传染性疾病有细菌、病毒、衣原体、支原体等，可引起消化、呼吸、循环、泌尿生殖等不同系统相应的病变。消化系统感染性疾病在我国具有代表性意义的有肝炎、胃炎及肠道感染性疾病。引起肝炎的病原体主要包括乙型肝炎病毒（乙肝）、丙型肝炎病毒（丙肝），其它还有甲型肝炎病毒（甲肝）、丁型肝炎病毒（丁肝）、戊型肝炎病毒（戊肝）、庚型肝炎病毒（庚肝）等。这几种肝炎病毒中只有乙型肝炎病毒是DNA病毒，其余均为RNA病毒。我国是乙肝高发区，乙肝病人为世界乙肝病人总数的50％。乙肝病毒经血液传播，病毒主要在肝细胞中增殖，也可以长期存留在骨髓细胞或外周血白细胞中。通常用PCR法检测血清中的乙肝病毒。有报道用PCR法可以在泪液、乳汁、精液及血白细胞中检出乙肝病毒，这些发现提示其它传染途经存在的可能。PCR法检测乙肝的优势表现在： ① 早期诊断，因为PCR扩增极其敏感，理论上可检出100CID/ml乙肝病毒的患者血清，在感染潜伏期即可被PCR法检出。② 对低持续感染乙肝病人的诊断，有些乙肝病人体内的病毒长期低复制感染，血清病毒浓度极低，一般酶标试剂无法检出，可以用PCR法检出。③ 疗效跟踪及病程判断，因为PCR能半定量检测乙肝病毒基因，是病毒是否存在及其数量多少的最直接指标。在治疗过程中通过监测血清或白细胞中病毒基因存在与否及其动态变化即能准确地了解病情。丙型肝炎病毒在血清中的浓度很低，丙肝病毒的分离尚未成功。目前用于丙肝病毒检验的方法主要是ELISA法测定血清中的HCV抗体。由于HCV尚无法分离纯化，所以用于包被的抗原是人工合成肽或基因工程蛋白，这些人工抗原与天然病毒抗原有一定的区别，理论上是存在假阳性或假阴性。同时血清中抗体的出现及动态变化与病人病情无线性相关关系。RT－PCR技术使这些困难得到解决。HCV是RNA病毒，需先将病毒RNA逆转录为cDNA（RT）后再进行PCR扩增，这种技术称之为逆转录－PCR（RT－PCR）。PCR敏感性高可以检测出血清中低浓度的病毒，了解病毒在体内复制的动态状况。RNA纯化要求严格，是RT－PCR的技术关键，本公司目前使用的高效基因释放剂，联合特异性固相基因吸附乳胶颗粒，对样本中的RNA进行分离纯化，使这一问题得到解决。通常用于RNA→cDNA逆转录的酶大致可以分为二大类，即低逆转录酶，如AMV/MLV逆转录酶，高逆转录酶，如Tth酶。Tth酶在锰离子作用下，具有逆转录酶活性，Tth酶活性度高，可以使核酸充分线性化，提高逆转录效率及特异性。Tth酶在镁离子的作用下，又具有DNA聚合酶活性，从而真正实现单管单酶单人份的扩增要求，这样就在不降低扩增敏感性的条件下，一步完成扩增，不仅简化操作，而且又减少污染，提高检测的准确性。国内本公司已采用这种技术推出单管单酶单人份的RT－PCR诊断试剂。丁型肝炎病毒是缺陷病毒，与乙型肝炎病毒协同感染。甲型肝炎病毒、戊型肝炎病毒主要存在于急性病人粪便样本中，戊型肝炎病毒也长期存在于血清中。在PCR检测时，需注意取材的合理性。在消化道传染性疾病中，另一类最重要的感染性疾病是幽门螺旋杆菌（HP）所引起的胃炎、胃溃疡等。HP可以经口－口途经传播并定位于胃粘膜上皮细胞，早期表现为浅表性胃炎，可发展成为胃溃疡。我国胃炎发病率之高估计比乙型肝炎更严重，对HP的检测应受到广大医务工作者的重视。对HP的检测可以用生化法测试尿素酶或用免疫法测试血清中对HP特异性抗体，也可对胃液、胃粘膜样本进行细菌培养及菌种鉴定。PCR法检测HP非常敏感且特异性高，有研究发现可以从病人的唾液或口腔含漱液中检出HP。PCR法避免了取胃液及胃粘膜，减少病人痛苦，是目前最理想的方法。

呼吸系统感染性疾病主要的有肺结核、非典型性肺炎等。结核杆菌感染曾给人类健康带来很大威胁，一度是较严重的致死性疾病之一。解放以后由于对结核病的预防的重视，特别是特效抗痨药物的出现，使结核病流行基本被控制。近来结核病有抬头的趋势，基原因可能有两方面，其一是耐药株的不断出现，其二是对结核预防重视不足。结核菌痰涂片镜检阳性率太低，酶标法又因抗原交叉反应易出现假阳性，结核检测的金标准是结核菌培养法。但培养法费时昂贵并且受到用药的影响，在实际应用中受到限制。PCR在结核菌检测方面有简便、敏感、特异的优点。一般认为样本中内要有100个左右的结核菌即可被检出。目前用于结核菌PCR诊断的试剂，其引物主要来源于以下基因片段36KD/65KD抗原蛋白基因；染色体重复插入序列IS986、IS960、IS6110、染色体质粒DNA PH7311、PMTB4、P36基因等。其中最常用的是染色体重复插入序列IS986或IS6110，1990年Hermans首先介绍并使用了IS986基因设计的引物扩增产物为245BP，研究表明这一基因对人型结核菌有特异性。而后Thierry又介绍了插入序列IS6110基因，并认为这一基因对人型结核菌具有比IS986更高的特异性及敏感性，最适合M.TB的检测。结核菌痰标本的PCR检测应注意以下几种常见的问题。其一，多条带。即扩增产物电泳后有三条或三条以上的萤光除最前面的引物以外有两条产物带，这与插入序列本身各片段长度有差异、结核菌在治疗过程中染色体畸变、断裂、缺欠及不等位交换有关。这种扩增结果的判断应特别注意，凡在阳性对照相应位置有明显条带的判阳性，否则应为阴性，或建议病人过一些时间后再复检一次；其二，结核痰样本PCR检测时，要使样本充分液化，否则痰液中的粘液成份将影响扩增效果，甚至会导致严重非特异性扩增，电泳结果呈雾状；基三，结核痰样本PCR检测结果可能表现为阳性、阴性交替出现，这与结核病灶的不规律排菌有关。

循环系统以肠道小RNA病毒感染最具代表意义，如柯萨奇病毒等。这些病毒经肠道粘膜、淋巴结进入血液，最终可定位于心肌细胞中导致心肌炎。目前对这些病毒的血液样本检测往往比较困难。PCR用于柯萨奇病毒检测时因其是RNA病毒所以应注意样本的保存。外在环境中存在大量RNA酶，病毒脱壳后RNA将被迅速降解。一般用于RNA检测的血清常下不应超过24小时，4℃下可保存2天，-20℃下可以保存2月以下。

PCR检测在性传播性疾病（STD）的诊断中有较广泛的应用。经典的性传播疾病有、淋病、腹股沟淋巴肉芽肿、软锐湿疠、硬下疳等。而在现代STD中、解尿支原体及沙眼衣原体引起的非淋菌性尿道炎（NGU）可能更具有代表性意义。是由螺旋体感染布致，首先在局部形成硬软下疳，布后经血行播散到全身，最严重的是波及中枢神经系统。感染早期，螺旋体大量存在于硬下疳中，可以用生理盐水湿棉签擦去皮疹表面污物再用钝刀片轻轻刮去上皮及结痂，用洁净棉签取渗出液样本作PCR检测，其敏感性及特异性极高。二期皮疹中也存在螺体其取样方法同埂下疳，三期皮疹中一般无螺旋体存在，因此III病人及部分无皮疹的I、II期病人可以取EDTA抗凝全血检测。淋病是目前发病率最高的性传播性疾病之一，由淋病双球菌引起。淋病双球菌一般为胞内寄生，常见的感染部位为外生殖器、尿道粘膜最常见。在尿道及外生殖器分泌物中有许多非致病的双菌存在，对分泌物拭子进行涂片镜检时，常导致误诊。另外目前非淋球菌性尿道炎的发病率不断增加，鉴别诊断特要，培养法准确但费时且费用高，受用药的影响。PCR法简便、快捷、准确非常理想。常用的引物多采用外膜蛋白抗原基因、隐性质粒DNA或16s RNA基因。16s RNA基因设计的引物特异性高但其敏感性低；隐性质粒设计的引物敏感性高但偶尔出现多条带的扩增产物，判断结果时应以阳性对照为标准，凡在阳性对照相应部位有明显条带的为阳性，其余均为阴性。以往对沙眼衣原体及解脲支原体的检测主要靠培养法，费时且昂贵，简便快速的PCR检测对其有极高的使用价值。沙眼衣原体、解脲支原体样本来源主要是尿道及宫颈分泌物拭子，由于分泌物中有许多污物含有PCR扩增的抑制剂，因此每次采样时尽量避免采集过多脓性分泌物，如果宫颈分泌物太多可以先用湿棉签将表面的分泌物擦去，再用洁净的湿棉签轻压旋转采集宫颈脱落细胞送检，其准确性更高。PCR也可以用检测单纯疱疹病毒、EB病毒、乳头瘤病毒等。引物尖锐湿疣的病毒是人类乳头瘤（HPV）,可致生殖系统感染的乳头瘤病毒主要是6、11、16、18、33型。新近研究结果表明，在乳头瘤病毒引起的良、恶性生殖器病变中，与血清型的关系并不密切，经常有交叉或多型时感染。为简化操作，对其基因对比分析寻找同序列设计的简并引物可以同时检出这几种型别的病毒既简化操作又减少费用是一种极理想的方法。

我国恶性肿瘤为人口死亡的第一位原因，其中以肺癌、胃癌及食管癌的发病率最高，占恶性肿瘤死亡总数的60％以上。引起肿瘤的原因非常复杂包括外界环境因素及遗传背景。外界因此可分为三大类即化学、物理及生物因素。肿瘤与遗传有关的证据越来越多，除已知的单基因遗传肿瘤如视网膜细胞瘤、肾母细胞瘤等以外，还在几乎所有的肿瘤细胞中观察到原癌基因的重排，这些基因的变化常导致细胞增殖调控失调终形成肿瘤。癌基因是指在自然或实验条件下具有潜在诱导细胞恶性转化的基因，它们是在研究逆转录病毒时发现的。目前已知的肿瘤基因有60多种，1969年Hubner根据Rous（1911）的实验，在小鸡肉瘤滤液中发现一种能诱导宿主细胞转化的RNA病毒性癌基因（Viral Oncogene）。后来又在其它哺乳动物基因中发现与病毒癌基因同源序列，这种正常的细胞基因表达产物与细胞生长、增殖、分化有关。但若被某种因素激活就会转化为有活力的癌基因，通常称之为原癌基因（Proto Oncogene）。为了与病毒癌基因区分，分别用V-Onc及C-Onc基因来代表。目前了解较多的癌基因（C-one）有scr基因族、ras基因族、mgc及myb基因族。原癌基因存在于正常细胞中，并表达生物功能，只有在原癌基因被激活后才能诱导细胞转化，可能的原癌基因活化机理有：①点突变，受到射线、化学因素、生物因素的诱导，这样微小的变化，就会活化癌基因，活化的基因产物仅有极微的结构差异，但在功能在却有很大的区别。②获得启动子，原癌基因从病毒基因中获得启动子而活化。③基因易位，内外界因素能导致染色体的某些基因易位、重排使原来无活性的原癌基因移至某些强的启动因子或增强子附近而被活化。④原癌基因的过量扩增，原癌基因产物一般与生长因子、生长因子受体、跨膜信息蛋白有关或功能相近，过度表达时，会因调控失常而引起细胞癌变。另一类与肿瘤相关的基因是抑癌基因如P53。抑癌基因较复杂，作用机理不太清楚。癌基因检测中常用的分子生物学技术有：杂交、DNA分子克隆、PCR扩增及序列分析。PCR扩增简便、快捷有较强的实用性，甚至可从病人体液样本中检测活化的癌基因而不需取活组织，对癌症的早期诊断有极重要的意义。Ras基因是1964年首次从大鼠肉瘤的急性逆转录病毒（Harver Murine Sarcoma and Kister Murine Sarcoma Virus）中分离出来取大鼠肉瘤（Rat Sarcoma）的字首名。1982年首次在人膀胱细胞细胞癌中检出有转化能力的ras基因与Harver大鼠肉瘤病毒癌基因有同源性称C-H-ras基因，后从肺细胞癌中发现了与Kister大鼠肉瘤癌基因同源的C-K-ras基因，从神经母细胞中又发现了N-ras基因。Ras基因激活的最常见方式是点突变。人类原发肿瘤时点突变主要发生在密码子12、13、59、61位。激活后的ras基因不牟自行灭活，根据其点突变的情况可以基因诊断、疗效观察。用PCR扩增样本ras原癌基因，再使用杂交法、限制性内切酶消化或产物测序法检测基因的突变情况即可用诊断。P53是抑制癌基因的代表，位于17号染色体短臂上，其产物为53KD分子量的蛋白从此而得名，可分为突变型和野生型，前者为癌基因，后者为抗癌基因。1979年Cane发现了P53蛋白Eliyahu发现了p53基因有抑癌作用。P53突变后其产物突变蛋白稳定性增加，半衰期较野生型基因产物长，在细胞内堆积，可以用免疫组化法测出。PCR-RELP、PCR-SSCP则因方法简单、快速、特异性高，更具有实用价值。在SSCP分析中，单链DNA因碱基序列的变异，导致构型改变，在进行凝胶电泳时，其泳动速率发生改变，从布将变异的DNA与正常DNA区分开，统计表明100-300bp分子大小的ssDNA突变检出率可达97％，300-450bp标出率可达69％，因此大于400bp的片段多态性应采用其它方法检测。

遗传病是由于遗传基础异常而引起的疾病，人类遗传病约有3000多种，患者占总人口数的10％。遗传病大概可分为单基因、多基因及染色体遗传病。常用诊断方法有家系谱分析、染色体检查（特别是显带法）、生物化分析等。随分子生物学发展，基因诊断愈来愈表现出其优越性，PCR技术是基因诊断的主要技术之一，为快速、准确地检测人类遗传病开辟了一个新的途径，预计与遗传相关的疾病的检测有80％将在3-5年内被PCR法所取代。PCR在遗传病诊断应用中，可以利用引物直接扩增变化的基因产物，也可以结合应用限制内切酶，分子杂交及电泳图谱分析进行诊断。应用较为广泛的有PCR法检测中海贫血、苯丙酮尿症、血友病、脆性X综合症及性别鉴定等。地中海贫血（Thalassmia）是世界上最常见的单基因遗传病，不有同类型，以a地中海贫血及在中海贫血最常见。a珠蛋白基因位于11号染色体短臂上，a珠蛋白基因突变致血红蛋白的全成减少或缺失，表现溶血性贫血，肝脾肿大，在我国发病率为0.66％，贵州、四川等地高发可达2.2％。应用PCR技术可以直接检测突变的基因诊断此病。苯丙酮尿症（Phenylketouria,PKU）是一种常染色体隐性遗传病。病人肝脏苯丙氨酸羟化酶严重缺乏使苯丙氨酸不能转化为酷氨酸血症，出现脑组织损伤，智力障碍。此病患者出生时正常，出生后一经确诊立即停止母乳喂养，采用低苯丙氨酸饮食治疗8-10年不致影响患者智力，但低苯丙氨酸饮食代价之昂贵是一般家庭所不能承受的，关键在于避免患儿出生。因此本病的早期诊断有极其重要的意义。PCR结合斑点杂交能有效诊断PKU。遗传性疾病的基因变化很复杂，单基因固定位点变异布致病的情况很少，因此基因诊断过程中往往需要PCR技术与限制性内切酶、斑点杂交、聚丙烯酰胺胶电泳图谱分析及扩增产物序列分析结合，作综合判断。

优生学包括基础优生学、会优生学、临床优生学及环境优生学。孕期检查及产前诊断是临床优生学的最重要内容之一。孕期检查除一般项目外还能及时了解孕妇是患有某些对胎儿发育有严重影响的疾病如风疹病毒感染、沙眼衣原体、解脲支原体、单纯疱疹病毒、巨细胞病毒、弓体感染等，及时发现及时治疗并采取有效措施预防发展成为宫内感染。PCR技术对这些病原体的检测简便而确实，另外利用PCR技术可以对地中海贫血、血友病、苯丙酮尿症、脆性X综合症等遗传性疾病进行宫内诊断。可见PCR在优生优育方面有很高的应用价值。

PCR技术的出现对法医学的发展也有不可低估的作用。在法医物证如血斑、毛发、组织碎片等的确证，DAN多态性分析远比血清学或等方法确实可靠。早期DNA多态性分析主要使用Southern印迹杂交的方法。1985年Jeffreys首先采用肌红基因第一个内含子中的串联重复序列作探针，从人的基因库中筛选出小卫量DNA，使用阿交法产生杂交图谱即DNA指纹。这一技术成功地应用于个人识别及亲子鉴定。这种方法仍受到样本量的限制，当样本DNA数量不足时或DAN严重降解则不能正常检出。且杂交技术常使用同位素杯记探针要求较镐的防护措施。PCR技术的出现，可以对极少量物证如一根毛发、一滴血液、极小精斑都可以进行分析。在人类基因组中有许多由10-15bp核心顺序构成的串联重复DNA序列，具有单位点特征的称为VNTR结构，多位点串联成为卫星DNA。由于VNTR在等位基因中的多态性便构成了遗传标记。使用PCR技术对其进行扩增结合对扩增产物凝胶电泳图谱分析即可进行个人识别及亲子鉴定。由2-6核苷组成的重复串联序列称为微卫星。在人类基因组中，微卫星更加丰富。微卫星的重复序列比VNTR短，扩增分型简便，易于自动化，在VNTR或微卫星不仅重复片段的数量不同而且重复片段的核苷酸也具有多态性。在VNTR或微卫星多态性分析时，如再结合碱基配对分析可以藜得更大量的信息，这一种更有希望的标志即MVR（Microsatllite Variant Repeats）。理论上其对嫌疑人的排除率为99.999％。PCR技术可以完成替代早期的Southern印迹法进行多态性分析而且操作简便，敏感性及准确性都有大幅度的提高。当然PCR技术在法医中的应用仍在起步阶段有许多技术问题等待解决，如样本中的抑制剂、检村中DNA的损报告伤、PCR扩增污染等。想念随着PCR技术的不断完善它将在法医学领域中有更加广泛的应用。

第五篇：临床微生物学与检验教学大纲

临床微生物学与检验教学大纲

长沙医学院医学检验系

微生物学与检验教学大纲

前言

适用专业:医学检验专业 课程的性质、目的及任务：

微生物学及检验是医学微生物学、临床微生物学以及微生物学技术密切结合的一门新兴学科，是医学检验专业的一门专业主干课程，它综合了临床医学、免疫学、临床抗生素学和医院流行病学等几方面的知识和技能，研究感染性疾病的病原体特征，提供快速、准确的病原学诊断，密切结合临床提出及时有效的治疗方案，对医院内感染进行动态监控。

课程内容：该课程包括医学微生物学和临床微生物学两部分，前者主要研究与医学有关的病原微生物的生物学特性、致病性、免疫性、以及防治措施的学科。后者侧重于研究感染性疾病，快速、准确的诊断病原体的策略与方法，为临床诊断提供依据。教学内容覆盖了《医学微生物学》和《临床微生物学及微生物学检验》两本教材，在教学过程中将两本教材的内容有机融合在一起。本课程包括五篇：细菌学总论，细菌学各论及检验，真菌学及检验，病毒学及检验，微生物学检验。

课程教学基本要求：

1．掌握微生物的基本特性。

2．掌握病原微生物对人体的致病性以及人体的抗感染免疫 3．掌握微生物学检验的基本技术。

4．掌握各类临床标本的采集方法、检验程序及常规检验方法。5．选择最佳鉴定方法对感染性病原体进行鉴定或快速诊断。6．熟悉感染性疾病的预防及治疗原则。

7．了解病原微生物学检验的新方法、新技术及发展动向。8．能够正确运用微生物实验室常用自动化仪器和微量装置。9．能够进行正确的抗菌药物敏感实验并准确报告。10.能够对实验结果进行正确的分析及致病性评价。教学模式及教学环节： 微生物学及检验是一门实践性、应用性很强的课程，在广泛吸纳国内外先进教学方法的基础上，结合本课程的特点，经过多年的教学改革实践，形成了风格迥异的教学模式，即将传统沿用的“理论与实验教学”改为“理论与实验合二为一”，课堂上以学生为主体，以直观、形象、立体的实验内容为切入点，同时辅以讨论、交流、归纳等诸多教学实践活动，将理论与实验相融合，学生参与、老师引导并行，同时根据不同的教学内容，采用不同的灵活多样的教学实践活动，充分调动学生学习的主动性，课堂效率大大提高。本着不断充实和丰富提高的原则，在总结教改经验的基础上制定了本教学大纲。

学时分配：

在教学过程中理论与实验时间为1:1，本课程总学时数为162学时，其中： 第一篇细菌学总论40学时（理论21学时，实验19学时）；第二篇细菌学各论及检验70学时（理论34学时，实验36学时）；第三篇真菌学及检验10学时（理论5学时，实验5学时）； 第四篇病毒学及检验34学时（理论24学时，实验10学时）；第五篇微生物学检验8学时（理论3学时，实验5学时）。

通过微生物学及检验的学习，使学生具备医学检验专业高素质的专门人才所必需的微生物学检验技术的基本知识和基本技能。为学生学习相关专业知识和职业技能，提高全面素质，增强适应职业变化的能力和继续学习的能力打下一定的基础。

教学大纲内容

第一章 绪论

教学目的：

掌握有关微生物及微生物学的概念，了解微生物学的发展简史。教学时数：1学时 教学内容：

一、微生物、医学微生物学、临床微生物学

二、微生物学的发展简史

三、临床微生物学的任务及在临床医学中的地位

第一篇细菌学总论

第二章 细菌的形态与结构

教学目的：

掌握细菌的形态、基本结构、细菌特殊结构的含义与意义，革兰染色的原理、步骤、结果及致病性；熟悉不染色标本检查法及特殊染色法。教学时数：9学时（理论3学时，实验6学时）教学内容：

一、细菌的大小与形态

（一）细菌的大小

（二）细菌的形态

二、细菌的结构

（一）基本结构

（二）特殊结构

三、细菌形态学染色法

第三章 细菌的生理

教学目的：

掌握细菌的生长条件、生长繁殖规律及培养基的制备方法，掌握细菌的分解代谢产物及其意义，熟悉其合成代谢产物及意义。了解微生物的分类与命名原则 教学时数：6学时（理论2学时，实验4学时）教学内容：

一、细菌的生长繁殖

（一）细菌的理化性状

（二）细菌的营养与繁殖条件（三)细菌的新陈代谢

1.细菌的分解代谢产物及其意义 2.细菌的合成代谢产物及其意义

（四）细菌的能量转换

二、细菌的人工培养

（一）培养基

（二）细菌在各种培养基上的生长现象

（三）人工培养细菌的意义

三、细菌的命名细菌分类学

（一）基本概念

（二）细菌分类等级

（三）细菌命名法

第四章 消毒与灭菌

教学目的：

掌握消毒、灭菌的基本概念，物理灭菌法的条件及应用，熟悉化学消毒剂的应用及影响因素，了解化学消毒剂的种类及杀菌机理 教学时数：4学时（理论2学时，实验2学时）教学内容：

一、基本概念

二、物理灭菌法

（一）高温

1.干热灭菌法 2.湿热灭菌法

（二）紫外线及辐射

（三）超声波

（四）滤过除菌

三、化学消毒法

（一）化学消毒剂的种类及用途

（二）影响化学消毒剂的因素

四、微生物实验室生物安全

第五章 细菌的遗传与变异

教学目的：

掌握细菌变异的物质基础及机理，熟悉细菌的各种变异现象，熟悉细菌基因转移和重组的过程，了解遗传变异的实际意义。教学时数：4学时（理论3学时，实验1学时）教学内容：

一、噬菌体

（一）毒性噬菌体

（二）温和噬菌体

二、遗传变异的物质基础

（一）细菌染色体

（二）质粒

（三）转位因子

三、细菌基因表达的调节

四、细菌基因的转移和重组

五、基因突变

六、遗传变异研究的意义

第六章 抗微生物药物敏感性实验和耐药性

教学目的：

掌握抗菌药物敏感性实验的方法；掌握细菌对抗菌药物产生耐药的机制及耐药性检测主要方法。熟悉抗菌药物的种类。教学时数：6学时（理论4学时，实验2学时）教学内容：

一、常用抗菌药物

二、抗菌药物敏感性实验

（一）抗菌药物敏感性实验的原理和意义

（二）纸片扩散法

（三）稀释法

（四）E实验

三、细菌耐药性和发生机制

第七章 细菌的感染与免疫

教学目的：

掌握细菌的致病性、感染类型；熟悉正常菌群的分布及生理作用；了解机体的抗菌免疫。了解医院感染概况，掌握医院感染常见微生物及监测方法 教学时数：8学时（理论5学时，实验3学时）教学内容：

一、正常菌群和机会性致病菌

二、细菌的致病作用

（一）细菌的毒力 1.侵袭力

2.毒素：内外毒素的主要区别

（二）细菌的侵入数量

（三）细菌的侵入门户

三、宿主的免疫防御机制

（一）非特异性免疫

（二）特异性免疫

四、感染的发生与发展

（一）感染途径

（二）感染种类

（三）感染类型

五、院内感染

（一）医院感染的概述与流行特点

（二）医院感染的监测

（三）医院感染的控制 第八章 细菌感染的检查方法与防治原则

教学目的：

掌握标本采集的原则、标本的处理方法及常用实验诊断技术。了解微生物感染的防治原则

教学时数：2学时（理论1学时,实验1学时）教学内容：

一、临床标本的采集与处理

二、病原学诊断：

（一）细菌的形态学检查

（二）细菌的分离培养与接种技术

（三）细菌生化实验

（四）细菌感染的血清学检测

（五）细菌感染的分子生物学检测

（六）动物实验

（七）免疫学检验技术

三、人工主动免疫

（一）疫苗

（二）类毒素

四、人工被动免疫

五、细菌感染的治疗

第二篇 细菌学各论及检验

第九章 球菌

教学目的：

掌握葡萄球菌属、链球菌属、肠球菌属、奈瑟菌属的主要生物学性状及检查，熟悉其致病性。

教学时数：10学时（理论5学时,实验5学时）教学内容：

一、概述

二、葡萄球菌属

（一）生物学性状

（二）致病性

（三）微生物学检验

1．标本采集

2．检验程序 3.检验方法

4.鉴定依据 5.报告方式

三、链球菌属

（一）生物学性状

（二）致病性

（三）微生物学检验

1．标本采集 2．检验程序 3.检验方法

4.鉴定依据 5.报告方式

四、肠球菌属

（一）生物学性状

（二）致病性及耐药性：

（三）微生物学检验

1．检验程序： 2．检验方法：

五、奈瑟菌属和布兰汉菌属

（一）生物学性状

（二）致病性

（三）微生物学检验

第十章 肠杆菌科

教学目的：

掌握大肠埃希菌、沙门菌和志贺菌的检验程序及检验方法，掌握肥达氏反应原理、方法及致病性，熟悉各种肠杆菌的致病性。教学时数：10学时（理论5学时,实验5学时）教学内容：

一、概述：

（一）肠杆菌科的定义及分类

（二）肠杆菌科的共同特性：

二、埃希菌属（以大肠埃希菌为代表）

（一）生物学性状

（二）致病性

（三）微生物学检验 1．标本采集 2．检验程序

3．检验方法

三、沙门菌属

（一）生物学性状

（二）致病性

（三）微生物学检验： 1.标本采集； 2.检验程序； 3.检验方法

4.血清学试验---肥达反应

四、志贺菌属

（一）生物学性状

（二）致病性

（三）微生物学检验 1.标本采集 2.检验程序 3.检验方法

4.快速诊断

五、耶尔森菌属 克雷伯菌属 肠杆菌属 变形杆菌 沙雷菌属

（一）生物学性状

（二）致病性

（三）微生物学检验： 1．检验程序 2．鉴定试验

第十一章 小细菌

教学目的：

掌握嗜血杆菌属、布鲁菌属、鲍特菌属主要生物学性状及鉴定方法。教学时数：4学时（理论2学时,实验2学时）教学内容：

一、嗜血杆菌属

（一）生物学性状

（二）致病性

（三）微生物学检验

二、布鲁菌属

（一）生物学性状

（二）致病性

（三）微生物学检验

三、鲍特菌属

（一）生物学性状

（二）致病性

（三）微生物学检验

第十二章 非发酵革兰阴性菌

教学目的：

掌握非发酵菌的鉴定要点及铜绿假单胞菌主要鉴定特征，熟悉不动杆菌属、产碱杆菌属、黄杆菌属、军团菌属的主要鉴定特征。教学时数：6学时（理论3学时,实验3学时）教学内容：

一、概述

二、铜绿假单胞菌

（一）生物学性状

（二）致病性

（三）微生物学检验 1．标本采集 2．检验程序 3．检验方法 4．鉴定依据

三、荧光假单胞菌：与铜绿假单胞菌的区别

四、军团菌

（一）生物学性状

（二）致病性

（三）微生物学检验

五、其他非发酵菌

第十三章 弧菌属 气单胞菌属

教学目的：

掌握霍乱弧菌的生物学性状及鉴定方法，熟悉气单胞菌属、邻单胞菌属之间的主要区别以及与弧菌属的区别。

教学时数：2学时（理论1学时,实验1学时）教学内容：

一、弧菌属

（一）霍乱菌属 1．生物学性状 2．致病性 3．微生物学检验（1）标本采集（2）检验程序（3）检验方法

（4）快速诊断

（二）副溶血性弧菌：与霍乱弧菌的主要区别。

二、气单胞菌属、邻单胞菌属

两属之间的主要区别以及与弧菌属的区别。

第十四章 弯曲菌属和螺杆菌属

教学目的：

熟悉弯曲菌和幽门螺杆菌的生物学性状及主要鉴别试验 教学时数：2学时（理论1学时,实验1学时）教学内容：

一、弯曲菌属

（一）概述

（二）生物学性状

（三）致病性：肠道感染；肠道外感染

（四）微生物学检验

二、螺杆菌属—幽门螺杆菌

（一）生物学性状

（二）致病性

（三）微生物学检验

第十五章 需氧革兰阳性杆菌

教学目的：

掌握白喉棒状杆菌的生物学性状及检验方法，炭疽芽胞杆菌的培养特性及检验方法；熟悉李斯特菌、红斑丹毒丝菌、阴道加特纳菌的生物学特性及主要鉴定试验。

教学时数：6学时（理论3学时,实验3学时）教学内容：

一、白喉棒状杆菌

（一）生物学性状

（二）致病性

（三）微生物学检验： 1.标本采集 2.检验程序 3.检验方法

二、其他棒状杆菌：与白喉棒状杆菌的鉴别

三、炭疽芽胞杆菌

（一）生物学性状

（二）致病性

（三）微生物学检验 1.标本采集 2．检验程序 3.检验方法

四、蜡样芽胞杆菌

五、产单核细胞李斯特菌和红斑丹毒丝菌

六、阴道加特纳菌

微生物学检验

第十六章 分枝杆菌属

教学目的：

掌握结核分枝杆菌的生物学性状，检验程序及主要鉴定方法，了解其他分枝杆菌的检验程序及鉴定方法

教学时数：8学时（理论3学时,实验5学时）教学内容：

一、概述

二、结核分枝杆菌与非典型分枝杆菌

（一）结核分枝杆菌 1．生物学性状 2．致病性

3．微生物学检验

⑴ 标本采集 ⑵ 检验程序 ⑶ 检验方法

（二）非典型分枝杆菌

三、麻风分枝杆菌

四、放线菌属和诺卡菌属

第十七章 厌氧菌

教学目的：

掌握厌氧菌的培养方法、检验程序、检验方法；掌握梭状芽胞杆菌的检验方法，熟悉其致病性；熟悉无芽胞厌氧菌的检验方法及致病性。教学时数：8学时（理论4学时,实验4学时）教学内容：

一、概述

二、厌氧菌的分布与致病性

三、厌氧菌标本的采集与送检

（一）标本采集

（二）标本运送与处理

四、厌氧菌的分离与鉴定

（一）检验程序

（二）检验方法

五、梭状芽胞杆菌属

（一）破伤风梭菌 1.生物学性状 2.致病性

（二）产气荚膜梭菌 1.生物学性状 2.致病性

3.微生物学检验

（三）肉毒梭菌 1.生物学性状 2.致病性

3.微生物学检验

（四）艰难梭菌

六、无芽胞厌氧菌

致病性

第十八章支原体 立克次体 衣原体

教学目的：

掌握支原体的生物学特性，肺炎支原体和解脲脲原体的检验方法，沙眼衣原体的检验方法；熟悉立克次体，衣原体的致病性。教学时数：4学时（理论3学时，实验1学时）教学内容：

一、支原体

（一）概述

（二）生物学性状

（三）致病性

（四）微生物学检验 1.标本采集

2.检验方法 3.鉴定依据

二、衣原体

（一）命名与分类

（二）生物学性状

（三）致病性 1.沙眼衣原体 2.鹦鹉热

3.肺炎衣原体感染

（四）微生物学检验 1.标本采集处理 2.检验方法

三、立克次体：

检验方法和致病性。

第十九章 螺旋体

教学目的：

掌握螺旋体生物学性状及梅毒螺旋体和钩端螺旋体的微生物学检验，熟悉螺旋体的致病性。

教学时数：8学时（理论4学时,实验4学时）教学内容：

一、钩端螺旋体

（一）生物学性状

（二）致病性

（三）微生物学检验

1．标本采集 2．检验方法 3．检验程序

二、梅毒螺旋体

（一）生物学性状

（二）致病性

（三）微生物学检验

1．标本采集 2．检验方法

三、疏螺旋体

（一）伯氏疏螺旋体

（二）回归热疏螺旋体

（三）奋森疏螺旋体

细菌学录像

教学时数：2学时

第三篇 真菌学

第二十章 真菌学及检验 教学目的：

掌握真菌生物学性状及检验方法，了解真菌的致病性。教学时数：10学时（理论5学时,实验5学时）教学内容：

一、真菌生物学性状：

（一）形态与结构

（二）培养特性

（三）分类与致病

二、真菌检验 1.标本采集 2.检验程序

3.检验方法

三、病原性真菌

（一）浅部真菌 1.致病性 2.检验方法

（二）白假丝酵母菌、隐球菌及其他医学上重要的霉菌 1.致病性 2.检验方法

第四篇 病毒学及检验

第二十一章 病毒总论

教学目的：

掌握病毒的基本性状；掌握病毒的致病性及抗病毒免疫；掌握病毒感染常用诊断方法。

教学时数：10学时（理论8学时，录像2学时）教学内容：

一、病毒的基本性状

（一）病毒的概念

（二）病毒的特点

（三）病毒的形态结构与化学组成

（四）病毒的增殖

（五）理化因素对病毒的影响

（六）病毒的分类与命名

（七）病毒的遗传与变异

二、病毒的感染与免疫

（一）病毒的致病机理

（二）病毒性感染的方式与类型

（三）抗病毒免疫

三、病毒感染的检查方法与预防原则

（一）标本采集

（二）检验方法 1．直接检查 2．分离培养鉴定 3．病毒抗原检测 4．早期IgM抗体检测 5．病毒核酸检测

（三）病毒感染的治疗

第二十二章 呼吸道病毒

教学目的：

掌握流感病毒生物学性状及检测方法，熟悉呼吸道病毒的种类及其致病性。教学时数：6学时（理论3学时，实验3学时）教学内容：

一、概述

二、流行性感冒病毒

（一）生物学性状

（二）致病性

（三）微生物学检查 1．病毒的分离与鉴定 2．血清学诊断

三、副粘病毒科（呼吸道合胞病毒、副流感病毒、腮腺炎病毒、麻疹病毒）

四、其他呼吸道病毒（冠状病毒、风疹病毒）

第二十三章 肠道病毒

教学目的：

熟悉肠道病毒的微生物学特性，了解肠道病毒生物检测及致病性。教学时数：2学时（理论1学时，录象1学时）教学内容：

一、概述

二、脊髓灰质炎病毒

（一）生物学性状

（二）微生物学检查

三、柯萨奇病毒简介

四、埃可病毒、新型肠道病毒简介

五、轮状病毒

（一）生物学性状

（二）微生物学检查

第二十四章出血热病毒及虫媒病毒

教学目的：

掌握流行性乙型脑炎病毒的检验方法，熟悉其致病性；掌握流行性出血热病毒的检验方法，熟悉其致病性。

教学时数：2学时（理论1学时，录象1学时）教学内容：

一、流行性出血热病毒

（一）汉坦病毒

（二）新疆出血热病毒

二、虫媒病毒

（一）概述

（二）流行性乙型脑炎病毒

（三）森林脑炎病毒

（四）登革病毒

第二十五章 肝炎病毒

教学目的：

掌握甲型、乙型、丙型肝炎病毒的致病性及微生物学检查，熟悉其它肝炎病毒的致病性。

教学时数：6学时（理论5学时，实验1学时）教学内容：

一、各型肝炎病毒性状比较

二、甲型肝炎病毒

（一）生物学性状

（二）微生物学检查法： 1.标本采集

2.检查方法：电镜直接查病毒颗粒；早期抗HAV-IgM抗体检测。

三、乙型肝炎病毒

（一）生物学性状

（二）致病性

（三）微生物学检验方法

四、其他肝炎病毒

（一）生物学性状

（二）微生物学检验方法

第二十六章逆转录病毒

教学目的：

掌握人类免疫缺陷病毒的生物学性状及检验方法，熟悉其致病性特点。教学时数：4学时（理论3学时，录象1学时）教学内容：

一、人类免疫缺陷病毒

（一）生物学性状

（二）致病性与免疫性

（三）微生物学检验 1.标本采集 2.检验方法

二、人类嗜T淋巴细胞病毒简介

第二十七章 疱疹病毒 教学目的：

掌握各种疱疹病毒的微生物学检验方法，熟悉其致病性。教学时数：2学时（理论1学时，实验1学时）教学内容：

一、概述

二、单纯疱疹病毒

（一）致病性

（二）检验方法

三、水痘带状疱疹病毒

四、巨细胞病毒

（一）致病性

（二）检验方法

五、EB病毒

（一）致病性

（二）检验方法

第二十八章 其他病毒

教学目的：

掌握狂犬病毒的生物学性状及微生物学检验，熟悉其致病特点及防治原则。教学时数：1学时 教学内容：

一、狂犬病毒

（一）生物学性状

（二）致病性

（三）微生物学检验

（四）防治原则

二、人乳头瘤病毒

第二十九章 朊粒

教学目的：

掌握朊粒的生物学性状及微生物学检查，熟悉其致病性特点，了解其发现过程。

教学时数：1学时 教学内容：

一、朊粒的发现

二、朊粒的定义

三、朊粒的生物学性状

四、朊粒的致病性

五、微生物学检查

第五篇 微生物学检验

第三十章 临床标本的细菌学检验与微生物商品化、自动化检验

教学目的：

掌握临床标本的采集原则、检验程序及检查方法。了解微生物鉴定和药敏实 验的自动化分析系统、血培养自动化分析系统。教学时数：6学时（理论1学时，实验5学时）教学内容：

一、临床标本检查的一般原则

二、标本的采集原则

三、检查方法的选择

四、常见临床标本的检查

（一）粪便标本的检验

（二）尿标本的检验

（三）痰标本的检验

四、细菌耐药性的检测方法

五、医院见习

六、SENSITRE微生物鉴定与药敏分析系统。

第三十一章 微生物学检验的质量控制

教学目的：

掌握微生物学检验室内质控的方法，熟悉室间质控的评判方法及意义。教学时数：2学时 教学内容：

一、概述

二、室内质量控制

（一）人员与组织管理

（二）操作手册

（三）培养基

（四）试剂、抗血清和染液的质量控制

（五）抗生素选择与质控

（六）仪器

（七）标准菌株

三、室间质量评价