癌症检测新方向-液体活检

第一篇：癌症检测新方向-液体活检

液体活检介绍

在我国癌症筛查结果中，只有20%是早期，80%的癌症查出来都是中晚期了，而这20%的癌症早期还是体检查出来的。”众所周知，癌症越早发现治愈率越高，但患者缺乏相应的筛查手段，体检得来的报告结果，其灵敏度和准确度都相对较低。如今在美国，一种被称为液体活检的检测方法正开始兴起，为一些病人省去了手术活检和穿刺活检，这两种活检是长期需要来指导病人癌症治疗的。目前国内也有一些生物公司在研发液体活检技术----只需抽取6~8ml血，就能筛查是否患有6大常见癌症（肺癌、胃癌、食管癌、肝癌、大肠癌、乳腺癌），准确率超过80%，花费约2000～3000元。

液体活检是什么？真的像宣传的那么有效么？

液体活检作为体外诊断的一个分支,是指一种非侵入式的血液测试,能监测肿瘤或转移灶释放到血液的循环肿瘤细胞(CTC)和循环肿瘤DNA(ctDNA)碎片,是检测肿瘤和癌症、辅助治疗的突破性技术。

它的优势在于能解决精准医疗的痛点,通过非侵入性取样降低活检危害,而且有效延长患者生存期,具有高性价比。液体活检技术主要包括CTC 和ctDNA，以及外泌体检测。

基因突变是肿瘤产生发展的重要原因，几乎所有癌症患者都携带有DNA突变，这些突变只存在于肿瘤细胞而不存在于正常细胞，因此为肿瘤组织的检测与跟踪提供了方便的特异性生物标记。种类繁多的突变位点及基因型也为肿瘤的精确诊疗提供了必要的信息。

1.液体活检尚不能用于肿瘤早筛。早筛是指对肿瘤的预测，以及早期肿瘤的检查。因为只有当肿瘤生长到一定阶段后，CTC或者ctDNA进入血液，才能通过液体活检的方式检测出来。而此时，肿瘤往往已经生长到一定规模，不再是早期肿瘤了。

2.液体活检技术不是传统检查的替代技术。肿瘤的初步诊断、确诊和疗效评估，应该根据实际情况，结合影像、肿瘤标志物和液体活检等检查方式综合判断。液体活检在一定程度上解决了传统技术的部分局限性，但尚不足以替代传统检测技术。

一、液体活检介绍

1.循环肿瘤细胞（circulating tumor cells,CTCs）

循环肿瘤细胞（circulating tumor cells,CTCs）是游离于血液循环系统中的肿瘤细胞，来源于原发肿瘤组织，是肿瘤细胞转移的重要方式，也是肿瘤患者术后复发的重要原因，同事还是激发癌症致死机制的重要因素。CTC作为肿瘤细胞，不仅包含肿瘤的DNA信息，同时还包含基因组、蛋白质组等信息，是研究肿瘤组织信息的丰富来源。（1）二代CTC检测技术 1.密度梯度离心

可将CTC与红细胞白细胞分离，根据不同密度沉降在不同区间而进行分离。目前市场上有较多的这种类型的试剂盒，Ficoll-paque solution（Pharmacia Fine Chmeicals，Sweden），OncoQuick等。2.过滤法

依据CTC体积大雨血细胞的特性，对CTC进行捕获。CTC的直径约为10~20um，而血细胞大小为7~12um，通过过滤，留下体积比较大的CTC.随着对CTC研究深入，发现很多CTC与白细胞大小类似甚至只有它一半或者更小。这些小或者超小CTC的数目比例在某些肿瘤中可高达三分之一。3.微控流芯片

针对CTC的体积和可变形性对CTC进行捕获，CTC的捕获率和特异性可达到80%以上。不仅能够检测CTC的数量，而且可以分离活细胞进行其他分析，是未来CTC检测的发展方向，微流控芯片内CTC的分选富集方法主要分为生物化学方法和物理分离法。生物化学方法指的是选择特异性抗体对细胞表面表达的标志物进行特异性的抗原抗体吸附，达到分选的目的，物理法主要应用外力场（电、磁场、流体场、超声波等）基于细胞间的物理特性差异（大小、变形性、密度、介电性等）进行分离。4.其他分离方法

核心原理还是利用CTC免疫学和物理学特性，但是缺乏临床数据验证。（2）CTC临床应用

1.辅助诊断。主要是在常规手段无法对早期肿瘤进行判断时进行。

2.疗效评估。癌症患者进行化疗、靶向治疗后进行CTC检测，若CTC数量减少，则提示治疗方式可能有效，相比于现阶段的CT、MRI等检查手段，CTC检测技术操作更方便，应用更简单，可以更及时地提示医生该患者是否适合化疗或者靶向治疗。

3.术后监测。以肺癌为例，肺癌患者手术后约50%可能复发，术后监测非常重要，目前主要监测手段是3或6个月进行CTC检查，因活检无法高频次检查，而CTC可以克服这个缺点，及时检测血液中CTC的变化，在癌症发生的早期就及时进行治疗，能提高患者存活率。

2.血浆游离肿瘤DNA(Cell-Free' Circulating Tumor DNA，ctDNA)

ctDNA:是指人体血液循环系统中不断流动的携带一定（包括突变、缺少、插入、重排、拷贝数异常、甲基化等）来自肿瘤基因组的DNA片段。CtDNA的主要来源包括：1.来自坏死的肿瘤细胞 2.来自凋亡的肿瘤细胞 3.循环肿瘤细胞 4.来自肿瘤细胞分泌的外排体。

cfDNA最成熟的应用是NIPT（无创产前基因检测），抽取孕妇静脉血分析胎儿游离的片段DNA，判断胎儿患唐氏综合征（21、18、13三体综合征）的概率。已经是国内常见的优生优育筛查手段。

对ctDNA的分析包括定性和定量的分析，其中定性分析包括检测基因突变、缺失、插入、融合、重排、拷贝数变异、甲基化、微卫星不稳定（MSI）和杂合性缺失（LOH）等，定量分析就是计算ctDNA在血液中实时的含量，定性和定量均可反应肿瘤的存在和严重程度。理论上说，一个细胞含有约6~7pg的DNA,1ml血能提取10ng游离DNA,相当于来自约2000~3000个凋亡细胞的DNA量，但是一般情况下只占整个循环DNA的1%，甚至0.01%。因此，这对DNA的检测技术提出了比较高的要求。目前国内外均没有成熟产品，主要有两个方向：一是应用测序技术直接获取ctDNA序列信息，另外利用DNA扩增技术（PCR）检测包含特定序列的ctDNA的浓度。

ctDNA的技术发展可以预测向着高精度和高通量的方向发展。NGS由于其价格因素，未来还是用于研发，所以最新的研究都集中在富集靶向DNA,将富集后的DNA做深度测序可以大幅度降低成本，但是如何高效准确的富集目的DNA序列仍旧是ctDNA检测的瓶颈。所以还是处于前期发展阶段，离真正走向临床还有一段距离要走。3．外泌体

外泌体（exosome）是细胞分泌出的小泡，小泡中包含蛋白质、DNA、信使RNA以及一些非编码RNA，是细胞之间沟通的载体，研究发现这些外泌体与肿瘤的发生、发展、转移以及抗药性具有一定的相关性。肿瘤细胞以这些小泡为载体帮助其逃过免疫系统的监视，这些小泡一方面给肿瘤细胞的转移指引方向，另一方面也创造适合肿瘤生长的微环境。

外泌体携带的信息多样化。其中的蛋白质和核酸，均可用于癌症的早诊、复发监测、抗药性监测等相关方面的分析。而且外泌体在数量上多于CTC,更容易富集，在形式上分泌小泡能够有效保护核酸类物质，克服了ctDNA在血液中易降解的问题，在临床应用上有广泛前景。但是外泌体的研究尚处于临床早期，参与公司较少。4．液体活检技术比较

二、市场现状

癌症液体活检作为基因测序产业下的一个细分领域，与基因测序有着非常相似的产业链模式。现有基因测序产业链分为上游仪器与耗材生产销售企业，中游检测服务提供企业，以及下游数据分析企业，由于单纯提供测序服务技术门槛不高、竞争激烈，导致中游测序服务企业利润微博。故国内大多数有能力的测序服务公司都自行提供结果分析服务，在肿瘤基因检测领域更甚。基因测序公司提供的肿瘤检测报告几乎都会提供相关的基因突变位点分析，供医生参考，因此，肿瘤液体活检产业链可以划分为上游器械耗材企业和中下游监测分析企业。上游企业的核心竞争力是技术。提供核心技术的CTC分析仪、数字PCR仪、二代测序仪及配合使用的试剂盒关键技术掌握在国外几个公司手里，而且技术壁垒较高，专利保护严格，这几个国外大公司相当于垄断瓜分大部分市场。在国内基因测序行业中，国外仪器提供商的议价能力很强，为摆脱这种影响，部分国内公司奋发图强，尝试自主研发仪器耗材或者通过重组并购上游企业。已有几家国内公司通过并购实现二代测序仪的生产。但在比拼核心技术方面，国内“山寨版”性能与同功能的国外版性能有不小的差距，而且国内产品同质化严重，竞争激烈。

目国内的肿瘤液体活检也绑上了火箭般的速度发展。据不完全统计，自2012年以来成立做二代测序的公司都达到了200多家，而开展肿瘤液体活检多数采用二代测序技术对ctDNA进行分析。所以液体活检初期发展阶段，在肿瘤组织活检市场上有强势销售地位的公司如若紧跟CTC、ctDNA的潮流，发挥原有市场的作用，对其进行部分产品替代，即可快速抢占液体活检市场份额。即谁有渠道进入医院就能占山为王。

中下游企业的竞争点除了销售渠道，就剩下数据解读分析能力了。样本量越大、信息越全面来源数据越可靠的数据库必定更受市场青睐。国内的基因测序公司都在积极积累自有数据库并优化基因数据的解读分析能力，但都没有形成绝对优势，行业标准也有待建立。

三、审批制度

在美国的医疗器械拿到临床准入有“双通道制”，第一是可以通过FDA认证，拿到临床准入，产品可以在市场上推广和销售；二是获得CLIA认证的实验室，可以实现临床实验室的消费级和科研应用。CLIA实验室能够根据市场的现实需求，快速地开发实验室自建项目，并通过在临床上的应用给与可靠的临床指导。CLIA认证解决了基础研究和临床应用之间低效率转化甚至脱节的问题，对转化医学和研究成果转化有非常重要的意义。美国大部分液态活检公司都是走CLIA认证而非FDA认证。国内也借鉴这种方式来规范基因检测公司的竞争。国内的基于基因检测的液态活检项目进入临床也实行双重监管，所有仪器设备，试剂归CFDA报批管理，临床实验室归属卫计委这与美国CLIA认证制度类似，即要求试点单位内部有严格的质量控制，并且相关工作人员需经培训合格上岗，则不受CFDA对仪器和试剂的注册限制。未来ctDNA的发展将会严重依赖渠道资源及疾病样本资源，且CFDA对产品临床资质的管理也将越来越严格，未来 ctDNA公司最可能的业务模式为：

①国家批准的临床应用试点单位自行进行临床实验，类似于美国CLIA实验室；

②不具有试点资格的企业通过与医院合作，获取医院外包服务资质，但以科研服务为主； ③不具有试点资格的企业通过与医院合作，自行进行诊断试剂盒报批，并把产品投向医院。值得注意的是，目前获得批准的临床试点单位数量较少，对应的样本量也受限，在大量ctDNA公司激烈竞争市场蛋糕的情况下，获得入场券、保证渠道及样本优势将会非常关键。所以，技术、渠道资源在ctDNA领域依然缺一不可。

四、国家政策支持

从精准医疗概念的提出，国家就制定了一系列战略计划积极鼓励以DNA测序为基础的精准医疗。2015年3月科技部召开国家首次精准医疗战略专家会议，提出在2030年以前投入600亿元用于精准医疗。同月卫计委发布《国家卫生计生委医政医管局关于肿瘤诊断与治疗项目高通量基因测序技术临床应用试点工作的通知》，包括14家医疗机构和6家第三方检验实验室。另外发布以肿瘤个体化治疗、药物代谢酶及作用靶点基因检测的技术指南，旨在规范化推广相关技术。2016年4月国家发展改革委员会下发了《关于第一批基因检测技术应用示范中心建设方案的复函》正式批复27个省市发改委关于基因检测技术应用示范中心的建设方案，从审批进度来看，未来示范单位的审批已经逐渐放开。这一系列政策的出台显示出政府对肿瘤基因测序从资金到监管的全方位支持，也奠定了肿瘤基因测序的高端发展路线。

五、国内外液体活检现有产品

六、液体活检临床应用方向、七、现状及展望

2016年3月《第13届中国肺癌高峰论坛会议》专家共识中也提到了关于液体活检：

（1）本次颁布的共识，首先将共识的级别进行了分类，因为液体活检属于新生事物，在许多判断上全球也没有统一的标准，因此首先将共识级别进行分类，为未来共识的进一步升级奠定了基础；

（2）共识二将液体活检范围扩大到了CTC、ctDNA和外泌体。随着免疫治疗对人群精准治疗的需求，未来相信针对肿瘤特异性免疫细胞和相关基因组序列特征的检测，用以展开免疫治疗疗效的评估会纳入共识二的更新版本中；

（3）共识三提到NGS的优势在于检测多个基因变异，随着一些靶点的复杂变异形式出现，期待未来的共识会从描述靶点转为描述变异位点，单个变异位点可能使用传统的检测方式更加合适，而即使是单靶点遇到复杂变异形式（如无热点突变），使用NGS更加合适；

（4）共识四提到NGS亦可用于研究探索，是其一个巨大优势，相信未来结合其他液体活检技术探索临床预后和监测疗效也会写进共识；

（5）共识五非常全面的关注到了早期筛查和术后复发监测，且提到目前无论是CTC还是ctDNA用于早期筛查都都仅限于科研探索。由于技术的限制，目前的确存在证据不足问题。随着时间进步，相信在2-3年内，不仅新的检测技术会纳入到共识五中，且应用也会进入临床实践级别；（6）共识六专家在2A级别共识了NGS检测要平衡患者利益、伦理和科学探索之间的关系，这是目前精准医疗的一个重要特点，每个患者都是数据点，每个数据点都可能通过科学探索贡献医学和临床，因此平衡好三者关系是推动精准医疗良性发展的重要基础。

任何技术的临床应用转化都会经历三个阶段：1.技术性能指标的确认；2.临床应用可行性的评估；3.临床产品的转化及落地。现阶段，液体活检技术整体还处于第一阶段到第二阶段的过渡中。液体活检的内容包含cfDNA、CTC和外泌体，但其实技术成熟度、应用广泛性、法规支持等方面有很大差异，目前在临床实际应用中，ctDNA仍是目前最常用的液体活检。而且，不论是NGS还是ARMS-PCR，目前应用较多的还是针对明确已知的体细胞突变进行靶向药物治疗的指导。对于多线治疗失败后无法取组织的患者进行液体活检对于探索耐药机制，进行疗效监测。NGS相比传统方法有巨大优势。但是在技术尚未完善和标准化之前，野蛮生长的产业也许会带来区域性的失控。

那么液体活检走到临床，还有哪些问题需要解决？（1）技术层面

一方面，CTC和ctDNA检测手段有待进一步提高。CTCs仅少量存在于外周血，且异质性很大，所以CTC的分离技术还面临着很多挑战，目前尚未找到特异的CTCs的表面标志物，所以依赖表面标志物的分离策略难以避免假阴性的出现，多种生物、物理技术被用来分离CTCs，使得CTCs的得率有了很大的提升，但是不同技术的原理不同，导致分离得到的细胞也各异，对CTCs的认识还处于盲人摸象的阶段，改进和规范化CTCs的分离技术显得至关重要。目前ctDNA检测常用驱动基因的检测，如外周血EGFR突变检测，尽管具有高的特异性，但是敏感性徘徊于50%~70%左右，成为ctDNA检测临床应用的瓶颈。

另一方面，基因突变、表观遗传学变化和基因差异表达是个体化诊疗的主要检测目标。对应的检测技术包括等位基因特异PCR、甲基特异PCR，芯片技术和NGS；其原理和技术参数均有不同。在临床应用中，只有很好的将样本类型与相关检测技术相匹配才能获得最优化的临床产品。满足可并行检测体细胞基因单一位点突变、基因扩增和融合等多种突变类型，降低样本用量。综合分析当前常用技术不难发现，真正符合这一要求的技术并不多，如常用的等位基因特异PCR技术灵敏度在1～10%左右，可基本满足肿瘤组织基因检测的要求，但在基因突变丰度如此低的液体活检样本面前却显得束手无策；ddPCR技术灵敏度可以达到0.1‰，可以用于低丰度基因突变检测，并已经成功应用于血浆EGFR检测。但ddPCR只能对已知突变位点进行检测，且不适用于融合基因。相比之下，NGS作为高通量的检测技术优势就显得非常明显；通过不断的优化，已经出现灵敏度达到万分之一的NGS检测试剂盒。而且NGS可以同时检测多种基因突变类型，包括体细胞突变、基因扩增和融合，可以对突变丰度低到0.02%的基因进行检测，且特意性达到96%，因此非常适合对液体活检进行基因检测。第三，CTC和ctDNA的诊断价值还需要更多的研究去验证。目前，CTC在临床上的使用还局限在术后或晚期病人计量外周血中CTCs的数量，预测预后，CTCs在早期患者中的研究很少，所以CTCs能否用于实体瘤早期诊断还不明确；CTCs表现出很大的异质性，经历了EMT的CTCs，它的表型和基因型是否能准确复制原发肿瘤，如何通过对CTCs的特点分析来指导个体化治疗还有待进一步研究。同样，明确EGFR-TKIs治疗过程中ctDNA中敏感和耐药基因的动态变化规律还需要更多的临床数据； ctDNA是否能用于癌症筛查还需要解决以下疑问：首先，增加检出灵敏性的同时也增加了基因杂音的干扰，从而导致了假阳性的增加；其次，不是所有的癌症都与离散的和一致的早期基因突变有关，很多癌症在疾病的任何阶段以意想不到的方式产生多种突变；此外，不是所有的肿瘤都会以相同的方式向血液中释放ctDNA；最重要的是，任何新的诊断检测必须经历临床验证，这是常规获批的必要步骤。（2）医学伦理层面

尚不成熟的技术推向市场带给大众的是恐慌多于福祉。近年来，肺癌的流行病学谱已发生了迁移，不吸烟、年轻、女性患者比例逐年增高。原来单纯以年龄和吸烟状态作为危险因素定义的依据远远不够。其次是如何取得早筛和过度诊断治疗的平衡。如果我们穷尽各种检测手段，仍然没有发现可见肿瘤，是否需要对这部分人群进行后续的随访复查？筛查本身的并发症，患者的精神忧虑和经济负担又如何衡量？

综合来看，液态活检应用前景广阔，但是现阶段更多处于科研探索阶段，亟待大规模的临床研究验证。液体活检可以作为组织活检的补充。能应用到临床上必须经过反复确认，并且是CFDA批准的试剂盒，必须严格区分临床应用和临床研究，对患者的安全负责。对于液态活检产品灵敏度和特异性是最关键要考虑的因素。NGS将会得到广泛应用，但是对数据的有效性分析将是一个不小的挑战，对数据的解读直接影响对患者预后判断，需要进一步提高NGS数据分析。

第二篇：探究癌症尿液检测试剂

探究癌症尿液检测试剂

吉林生物研究院发明快速检测癌症的尿液检测试剂

吉林生物研究院日前生产出一种可快速检测癌症的尿液检测试剂，这种检测试剂能在5分钟内发现癌症的早期迹象，从而为治疗争取更多时间。

吉林生物研究院的科研人员发表公报说，他们研发的这种检测试剂可以从病人的尿液中找到消化系统类癌症和其他癌症的肿瘤标志物，与传统检测方法相比，其检测结果更加准确，而且成本不高。肿瘤标志物是监测及追踪癌症发展的重要工具。

参与研究的人员介绍说，这种检测方法操作方便，只需从被检测者身上取5ml尿液即可，便可很快完成检测，整个过程只需5-10分钟。

研究人员认为，这种检测方法目前可以投入实际应用，但仍需进一步对其完善的基础上可以制造出更简便快捷精准的癌症诊断试剂。

第三篇：早期检测可以揪出癌症因子[最终版]

早期检测可以揪出癌症因子 2013-07-15 00:15:36 北京娱乐信报 发表评论

信报讯（记者闫峥）我国80%的癌症患者确诊时即属于中晚期。昨天，记者获悉，市疾控中心等共同启动癌症早早期检测项目，希望更多的患者能通过早早期检测揪出癌症的苗头。专家介绍，癌症发展到晚期，5年生存率极低。晚期肺癌一般存活期只有1年，肝癌晚期出现黄疸和腹水存活期为1至3个月。就肺癌而言，如果能早期发现，手术后可以作为慢性病治疗，存活几年、十几年没有问题。而目前我国每年新发胃癌患者中，七成都是晚期患者；而在日韩，早期胃癌患者占85%。我国的癌症治疗能力并不低，一些大医院的设备和诊治水平已经接近发达国家，但癌症防控的能力比较低。

记者了解到，90%的早期癌症是没有明显症状的，许多人刚刚患癌时没有任何感觉，等到癌症发展到中晚期出现了疼痛、出血、明显消瘦等状况时才开始察觉并重视，这时去就医，大多数患者已经失去了治愈的机会。想要早期发现癌症只能依靠定期体检，但健康体检和防癌体检是两码事。

据介绍，普通的健康体检不包括肿瘤筛查，不能发现肿瘤的踪迹及癌症潜伏的隐患。近年来，市疾控中心和市预防医学研究中心将科研重点放在癌症的更早期检测上，通过验血发现包括肝癌、乳腺癌、食道癌、前列腺癌等十多种常见肿瘤的发生概率，并给予受检者预防性建议，对肿瘤的早期防治提供超早期的预警。

据悉，目前国内已有部分公立医院和第三方基因检测机构开展类似的癌症早期检测项目，但价格比较贵。市疾控中心授权国药阳光健康管理研究院在全国开展P53基因检测后，检查者的费用将明显下降。

第四篇：液体乳中三聚氰胺的快速检测 拉曼光谱法（KJ201908）

附件8

液体乳中三聚氰胺的快速检测

拉曼光谱法

（KJ201908）

范围

本方法规定了液体乳制品中三聚氰胺快速测定方法。

本方法适用于生鲜乳、灭菌乳、巴氏杀菌乳、调制乳和发酵乳等液态乳制品中三聚氰胺含量的快速测定。

原理

样品经沉淀、溶剂提取，加表面增强拉曼试剂对信号增强，进行拉曼光谱扫描。以704±10cm-1处的拉曼特征峰作为三聚氰胺定量基准峰，以925±10cm-1或类似基质中稳定存在的拉曼峰为参比峰，根据三聚氰胺峰与参比峰的相对强度对三聚氰胺的浓度绘制标准曲线，内置仪器内进行判别。

试剂和材料

除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T

6682规定的二级水。

3.1

试剂

3.1.1

三氯乙酸。

3.1.2

三氯乙酸溶液（5%）：准确称取三氯乙酸（3.1.1）50

g于1

L容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，混匀后备用。

3.1.3

表面增强试剂：金或银纳米粒子溶胶，或相当者。

注：表面增强试剂的参考配制方法：

纳米金溶胶：取100mL0.01%氯金酸（AuCl3·HCl·4H2O）水溶液加热至沸，剧烈搅拌下准确加入1.0mL

1%柠檬酸三钠（Na3C6H5O7）水溶液，金黄色的氯金酸水溶液在2min内变为红色，继续煮沸15min，冷却后用蒸馏水补加到100mL。增强试剂配制用水为GB/T

6682规定的一级水。

纳米银溶胶：取200mL1.0mM硝酸银（AgNO3）水溶液加热沸腾，剧烈搅拌下逐滴准确滴加5.0mL1%柠檬酸三钠（Na3C6H5O7）水溶液，持续煮沸1h，溶液变为灰绿色，冷却后用蒸馏水补加到200mL。增强试剂配制用水为GB/T

6682规定的一级水。

3.1.4

促凝剂：金溶胶的促凝剂：称取5.85

g氯化钠，溶于100

mL水中，摇匀，备用，或配制成其他相当的无机盐溶液。银溶胶的促凝剂：称取5.85

g氯化钠和2

g氢氧化钠，溶于100

mL水中，摇匀，备用，或配制成其他相当的无机盐溶液。

3.2

参考物质

三聚氰胺参考物质中文名称、英文名称、CAS号、分子式、相对分子质量见表1，纯度≥99%。

表1

三聚氰胺中文名称、英文名称、CAS登记号、分子式、相对分子质量

中文名称

英文名称

CAS登录号

分子式

相对分子质量

三聚氰胺

Melamine

108-78-1

C3H6N6

126.12

注：或等同可溯源物质。

3.3

标准溶液配制

三聚氰胺标准工作液（500

µg/mL）：精密称取三聚氰胺标准品（3.2）适量，分别置于100

mL容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为500

μg/mL的标准储备液。于4℃避光保存，有效期1个月。

仪器和设备

4.1

便携式拉曼光谱仪

稳频激光光源：发射波长为785±1

nm，线宽<0.1

nm，能量≥250

mW；光谱分辨率≤15

cm-1；光谱响应范围500

cm-1~2000

cm-1，或大于该响应范围。

4.2

移液器：200

µL、1

mL和5

mL。

4.3

涡旋振荡器。

4.4

离心机：转速≥6000

r/min。

4.5

电子天平：感量为0.01

g。

4.6

塑料具塞离心管：2

mL。

分析步骤

5.1

试样的提取

取0.5

g样品加到2

mL离心管中，再加入1ml

5%三氯乙酸溶液，涡旋30

s混匀；放入离心机，以不低于6000

r/min转速离心1

min；上清液备用。

5.2

测定步骤

5.2.1

拉曼光谱仪器参考条件

激光能量≥250

mW，数据采集时间≥2

s。

5.2.2

测定

在仪器样品池中依次加入100

µL促凝剂，100

µL表面增强试剂，50

µL样品（5.1），快速摇晃均匀，等待20

s检测（检测需在样品加入后1

min内完成）。

5.3

质控试验

每批样品应同时进行空白试验和加标质控试验。

5.3.1

空白试验

称取空白试样，按照5.1和5.2步骤与样品同法操作。

5.3.2

加标质控试验

准确称取空白试样10

g置于15

mL具塞离心管中，加入50

μL三聚氰胺标准工作液（500

µg/mL）（3.3），使三聚氰胺浓度为2.5

mg/kg，按照5.1和5.2步骤与样品同法操作。

结果判定要求

仪器软件将测试结果与标准谱图库中的三聚氰胺进行匹配计算，根据谱图704

cm-1（±10

cm-1）处特征拉曼光谱及内置校准曲线，对样品中的三聚氰胺进行结果判定：显示测试结果并判定阴性或阳性。阴性代表该样品不含有三聚氰胺或低于2.5

mg/kg，阳性则代表该样品含有三聚氰胺且大于等于2.5

mg/kg。液态乳表面增强拉曼光谱图参见图1。

图1

液态乳表面增强拉曼光谱图

6.1

质控试验要求

空白试样测定结果应为阴性，加标质控样品测定结果应为阳性。

性能指标

7.1

检测限

2.5mg/kg。

7.2

灵敏度

灵敏度应≥99%。

7.3

特异性

特异性应≥85%。

7.4

假阴性率

假阴性率应≤1%。

7.5

假阳性率

假阳性率应≤15%。

注：性能指标计算方法见附录A。

确证

本方法为初筛方法，当检测结果为阳性时，应对结果进行确证。

其他

本方法所述纳米表面增强试剂及促凝剂信息及操作步骤是为给方法使用者提供方便，在使用本方法时不做限定。方法使用者在使用替代试剂或操作步骤前，须对其进行考察，应满足本方法规定的各项性能指标。

本方法参比标准为GB/T

22388-2008

《原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》。

附录A

快速检测方法性能计算表

表A.1

性能指标计算方法

样品情况a

检测结果b

总数

阳性

阴性

阳性

N11

N12

N1.=N11+N12

阴性

N21

N22

N2.=N21+N22

总数

N.1=N11+N12

N.2=N21+N22

N=N1.+N2.或N.1+N.2

显著性差异(х2)

c2=(|N12-N21|-1)2/(N12+N21),自由度（df）=1

灵敏度（p+，%）

p+=N11/N1.特异性（p-，%）

p-=N22/N2.假阴性率（pf-，%）

pf-=N12/N1.=100-灵敏度

假阳性率（pf+，%）

pf+=N21/N2.=100-特异性

相对准确度，%c

（N11+N22）/(N1.+N2.)

注：

a由参比方法检验得到的结果或者样品中实际的公议值结果；

b由待确认方法检验得到的结果。灵敏度的计算使用确认后的结果。

N：任何特定单元的结果数，第一个下标指行，第二个下标指列。例如：N11表示第一行，第一列，N1.表示所有的第一行，N.2表示所有的第二列；N12表示第一行，第二列。

C为方法的检测结果相对准确性的结果，与一致性分析和浓度检测趋势情况综合评价。

本方法负责起草单位：江苏省食品药品监督检验研究院。

验证单位：山东省食品药品检验研究院、江南大学、四川省食品药品检验检测院

主要起草人：徐春祥、张渊、张征、颜春荣、胡明燕、刘丽强、姚欢

第五篇：2017年上半年广东省造价工程师考试安装计量：液体渗透检测考试试题

2017年上半年广东省造价工程师考试安装计量：液体渗透

检测考试试题

一、单项选择题（共25题，每题2分，每题的备选项中，只有 1 个事最符合题意）

1、某工程本月按照预算价格应结算的工程款为1000万元，已知本月人工单价较基期上涨了1.0%，人工费在总费用中所占比重为15%，材料价格上涨了20%，材料费在总费用中所占比重为40%，则本月应结算的工程价款是__万元。A．1120 B．1050 C．1085 D．1095

2、有关道路等级及路面等级划分，下列叙述正确的是（）。A．公路按等级划分为快速路、主干路、次干路和支路 B．城市道路等级划分为高速路、一、二、三、四级路 C．二级公路应采用高级或次高级路面 D．三级公路应采用中级路面

3、关于混凝土模板及支架拆除，说法正确的是（）。A．梁侧模拆除时对混凝土强度无任何要求

B．拆模时应先拆除承重模板，后拆除非承重模板

C．后张法预应力构件的侧模应在预应力钢筋张拉前拆除 D．同种构件的底模拆除时对混凝土的强度要求相同

4、对于国家投资的项目，施工图的建筑面积不得超过初步设计的（），否则必须重新报批。A．9.9% B．8.6% C．3.5% D．5%

5、某工作的总时差为3天，自由时差为1天，由于非承包商的原因，使该工作的实际完成时间比最早完工时间延迟了5天，则承包商可索赔工期最多是（）天。A．1 B．2 C．3 D．4

6、建筑物地下室所有墙体都应设置水平防潮层，其中一道设置在地下室墙附近，另一道设置的位置应当是（）。

A．室外地面散水以上150～200mm处 B．室内地坪以下60mm处 C．垫层与地面面层之间

D．室外地面散水以下150～200mm处

7、地下室应按（）外边线所围水平面积计算。A．外墙勒脚 B．外墙防潮层 C．外墙保护墙 D．外墙上口

8、采用综合单价的工程量清单，将综合单价与各分部分项工程的工程量相乘可以得到各分部分项工程的__。A．直接费 B．部分费用 C．全部费用 D．全部造价

9、地下污水处理场及城市水、电、气、通信等公用设施。A．地表至-10m深度空间建设的地下工程。B．-30m～-10m深度空间内建设的地下工程 C．-30m以下建设的地下工程

D．一50m以下建设的深层开发建设工程

10、计算现浇混凝土楼梯工程量时，正确的做法是（）。A．以斜面积计算

B．扣除宽度小于500mm的楼梯井 C．伸人墙内部分不另增加 D．整体楼梯不包括连接梁

11、评标委员会提出书面评标报告后，招标人一般应当在__日内确定中标人，但最迟应当在投标有效期结束30个工作日前确定。A．5 B．10 C．15 D．20

12、空心墩按壁厚分为厚壁与薄壁，其中（）为厚壁。A．t/D≥1/10 B．t/D≥1/8 C．t/D≤1/12 D．t/D≤1/6

13、项目规模合理化的制约因素不包括__。A．投资因素 B．技术因素 C．市场因素 D．环境因素

14、为缩短总工期，应该采取措施缩短双代号网络计划中（）。A．总时差最大的工作的持续时间 B．自由时差为零的工作的持续时间

C．关键线路上某一项或几项工作的持续时间 D．所有非关键线路的持续时间

15、一栋四层坡屋顶住宅楼，勒脚以上结构外围水平面积每层为930m2，建筑物顶层全部加以利用，净高超过2.1m的面积为410m2，净高在1.2～2.1m的部位面积为200m2，其余部位净高小于1.2m，该住宅楼的建筑面积为（）m2。A．3100 B．3300 C．3400 D．3720

16、城市地下贮库的布置，应处理好与交通的关系，对小城市的地下贮库起决定作用的是（）。

A．市内供应线长短

B．对外运输的车站、码头等位置 C．市内运输设备类型 D．贮库类型和重要程度

17、下列关于建设工程索赔程序的说法，正确的是__。

A．设计变更发生后，承包人应在28天内向发包人提交索赔通知 B．索赔事件在持续进行，承包人应在事件终了后立即提交索赔报告

C．索赔意向通知发出后的14天内，承包人应向工程师提交索赔报告及有关资料

D．工程师在收到承包人送交的索赔报告的有关资料后28天内未予答复或未对承包人进一步要求，视为该项索赔已被认可

18、以下属于中级抹灰施工方法和施工工艺的是（）。A．三遍成活，阳角找方，一底层，一中层，一面层 B．两遍成活，一底层，一中层，表面压光 C．多遍成活，一底层，数中层，分层赶平D．两遍成活，一底层，一面层，阳角找方

19、下列关于工程变更的说法中不正确的是__。A．工程变更总是由承包商提出的

B．工程师审批工程设计变更时应与业主及设计单位协商 C．工程的变更指令应以书面的形式发出

D．发生工程变更，若合同中有适用于变更工程的价格，则应以此价格计算变更工程价款 20、（）、墙梁和基础梁等。A．抗风柱 B．排水槽 C．女儿墙 D．吸热膜

21、信息分类体系必须考虑到项目各个参与方所应用的编码体系的情况，项目信息的分类体系应能满足不同项目参与方高效信息交换的需要，这体现了工程造价信息分类的__原则。A．稳定性 B．兼容性 C．可扩展性 D．综合实用性

22、在FIDIC施工合同条件中，下列索赔事件，承包商不能得到经济补偿的是__。

A．修改设计 B．施工条件变化 C．传染病导致的工期延误 D．业主原因拖期

23、经济等方面的专家不得少于成员总数的__。A．1/2 B．3/5 C．3/4 D．2/3

24、推行工程量（）模式，目的是适应我国建筑市场发展的要求和国际市场竞争的需要，逐步与国际惯例接轨。A．预算计价 B．动态计价 C．清单计价 D．静态计价

25、材料和设备价格基础的__就是“估算日期”。A．开始日期 B．结束日期 C．截止日期 D．中间日期

二、多项选择题（共25 题，每题2分，每题的备选项中，有 2 个或 2 个以上符合题意，至少有1 个错项。错选，本题不得分；少选，所选的每个选项得 0.5 分）

1、工程的特点有__。A．大额性 B．动态性 C．复杂性 D．组合性 E．层次性

2、塔器类设备的半机械化吊装机具主要包括__。A．绞磨 B．卷扬机 C．滑轮组 D．钢丝绳

3、关于外墙砖砌体高度计算说法正确的有__。

A．有屋架且室外均有天棚者算至屋架下弦底另加200mm B．无天棚者算至屋架下弦另加 300mm C．平屋面算至钢筋混凝土底板 D．有框架渠时算至梁底 E．坡屋面算至梁底

4、田近乎常压的设备进行氨渗漏试验，当达到试验压力后5min，试纸未出现__色为合格。A．红 B．蓝 C．黑 D．黄

5、庖工项目管理规划的作用包括__。A．制定施工项目管理目标 B．规划合同谈判策略及目标 C．着眼于项目的全过程

D．对施工企业各相关部门进行绩效评价

6、根据《工程造价咨询单位管理办法》的规定，下列表述中正确的是__。A．工程造价咨询单位合并时，应交回原资质证书，重新申请资质等级 B．新开办的工程造价咨询单位只能申请乙级工程造价咨询单位资质等级 C．工程造价咨询单位资质年检结论分为优良、合格和不合格三种 D．对于年检不合格的工程造价咨询单位，其限期整改时间为1年 E．工程造价咨询单位停业半年以上时，应当办理备案手续

7、空圈、暖气包槽，壁龛的开口部分并入相应的工程量内的项目是__。A．石材楼地面 B．橡胶板楼地面 C．塑料板楼地面

D．现浇水磨石楼地面 E．菱苦土楼地面

8、阀门等需要拆卸的附件连接上。A．焊接 B．法兰 C．热熔 D．丝扣

9、高分子材料种类很多，工程通常根据机械性能和使用状态将其划分为__。A．塑料 B．玻璃 C．橡胶

D．合成纤维

10、下列关于建筑物的场地平整工程量的表述中错误的是__。A．按实际体积计算 B．按地下室面积计算

C．按基坑开挖上口面积计算

D．按设计图示尺寸以建筑物首层面积计算 E．展开面积计算

11、硅酸盐水泥的技术性质是其具体应用的主要依据，以下说法错误的是__。A．硅酸盐水泥不宜用于海岸堤防工程

B．水泥的终凝时间指从加水拌和到水泥浆达到标号强度的时间 C．体积安定性是指水泥在硬化过程中体积不收缩的特性 D．水泥的净浆强度是评定水泥强度等级的依据 E．水泥碱含量越低越好

12、不定型密封材料有下列的__。A．聚酯橡胶-PVC密封条 B．沥青嵌缝油膏 C．聚氯乙烯接缝膏 D．自粘性橡胶 E．聚氨酯密封条

13、温度、压力及法兰密封面的形式，可分为__。A．橡胶垫片 B．塑料垫片 C．金属垫片 D．玻璃垫片

14、在吊装用的索具中，常用的吊装工具有__。A．绳索 B．滚杠 C．吊索 D．吊钩

15、早强剂多用于抢修工程和冬季施工的混凝土。目前常用的早强剂有下列的__。A．硫酸盐早强剂 B．三乙醇胺早强剂 C．引气剂

D．氯盐早强剂 E．复合早强剂

16、工程造价所具有的不同于其他商品的特点有__。A．大额性 B．连续性 C．差异性 D．层次性 E．同一性

17、燃气工程中，人工燃气按制取方法不同可分为__。A．干馏燃气 B．裂化燃气 C．气化燃气 D．天燃燃气

18、在施工中较常用的球罐拼装方法有__。A．分片组装法 B．拼半球组装法 C．环带组装法 D．拼大片组装法

19、在下列方法中，__是控制成本的方法。A．网络计划图 B．香蕉曲线图 C．直方图

D．S形曲线控制法 E．控制图法

20、针对预应力筋的布置要点以下说法正确的是__。A．波浪形曲线

B．波浪形曲线曲率不宜过大 C．波浪形曲线曲率不宜过小

D．预应力筋的重心应尽可能地距离截面重心远些 E．预应力筋的重心应尽可能地距离截面重心近些

21、噪声的减弱与林带的__有密切关系。A．树木种类 B．配置方法 C．高度 D．位置 E．密度

22、项目组织结构中的层次包括__。A．决策层 B．经营层 C．协调层 D．执行层 E．操作层

23、下列情况属于重大偏差的是__。

A．投标文件没有投标人授权代表签字和加盖公章

B．投标文件载明的招标项目交代期限低于招标文件规定期限 C．明显不符合技术规格、技术标准的要求 D．投标文件附有招标人不能接受的条件

E．投标文件在实质上响应招标文件，但个别地方存在漏项或者提供了不完整的技术信息和数据情况

24、某工程双代号时标网络计划执行到第4周末和第10周末时，检查其实际进度如下图前锋线所示，检查结果表明（）。

A．第4周末检查时工作B拖后1周，但不影响工期 B．第4周末检查时工作A拖后1周，影响工期1周

C．第10周末检查时工作I提前1周，可使工期提前1周 D．第10周末检查时工作G拖后1周，但不影响工期

E．在第5周到第10周内，工作F和工作I的实际进度正常

25、低温不脆裂、抗拉强度高、伸长率较大等优点的防水卷材有（）。A．SBS改性沥青防水卷材 B．APP改性沥青防水卷材 C．石油沥青纸胎油毡 D．聚氯乙烯防水卷材 E．三元乙丙橡胶防水卷材