第一篇:PCR实验室规化设计说明
P C R 检 测 实 验 室 建 设
设 计 说 明
DNA检测室是一种特殊实验室,它不仅采用了获得诺贝尔奖的实时荧光定量PCR技术,尤其是对设计建造过程中的室内空气污染控制和操作流程过程中的交叉污染控制有着及其特殊和非常严格的要求;本设计专为刑侦技术DNA检测实验区室内空气污染控制环境建设提出了整体解决方案。此方案在为华北、东北、西北地区十余个地市级公安局设计中多次得到公安部二所数名领导、专家的支持和指导,并在与各局刑侦技术主管领导、法医和我公司专业技术人员等三方共同研究讨论过程中不断达到理念清晰、布局合理、设计规范、设置完善,即符合实际使用需求,又符合公安部系统刑侦技术DNA检测实验室验收及国家实验室认可、卫生部临床检验中心验收的硬件标准;由于各地客观条件有所不同,须在此整体解决方案的基本框架和原则内因地制宜。
参照标准:《法庭科学DNA实验室检验规范》公安部GA/T 383-2002 《法庭科学DNA实验室规范》公安部GA/T 382-2002 《临床基因扩增检验实验室工作规范》卫医发[2002]8号文
《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》卫医发[2002]10号文
《临床基因扩增检验实验室设置标准》卫医发[2002]10号文附件
《基因检验实验室技术要求》国家质监检验总局SN/T 1193-2003 《洁净室及相关受控环境-生物污染控制》国际标准 ISO 14698 《洁净厂房设计规范》国家标准 GB 50073-2001 《洁净室施工及验收规范》建设部 JGJ 71-90 《室内空气质量标准》国家标准GB/T 1883-2002 《实验室 生物安全通用要求》国家标准GB 19489-2004 《生物安全实验室建筑技术规范》国家标准GB 50346-2004 《病原微生物实验室生物安全管理条例》卫生部(2004-11-12)
《低压电气施工及检收规范》国家标准GB 50254-96 《通风与空调工程施工质量验收规范》 国家标准GB50043-2002 设计参数:洁 净 度——CLASS 7(主实验室)CLASS 8.3(辅助间)
换气次数——15h-1~25h-1(7级)8h-1~10h-1(8.3级)
温 度——20℃~22℃(冬季)24℃~26℃(夏季)
湿 度——30%~50%RH(冬季)50%~70%RH(夏季)
照 度——≥250Lux(操作区)≥150Lux(辅助区)
噪 音——≤60dB(A)
压 差——≤-5 Pa(负压间)≥ +5 Pa(正压间)
格局规划:实验室高度为2.6-3米,各功能间将根据其不可逆工艺流程、实际用途、设备摆放及人性化等因素通盘布局划分;
功能区分为:
一、普通实验区——法医物证常规检验室、法医物证存储室、受案室、检材室、骨骼提取实验室、数据比对分析室、紧急淋浴洗眼间、洁具间、洗衣间、测序仪专用UPS机房;
二、特殊实验区 / 污染控制区——更鞋 / 缓冲走廊、更衣 / 缓冲间、现场物证DNA提取间(30-50㎡)、嫌犯血样DNA提取间(15-30㎡)、试剂混配间(15-30㎡)、PCR扩增间(15-30㎡)、扩增产物测序间(15-30㎡);
三、污染控制区基本格局
方案
1、各功能间相互串通,即用套间方式进行人流/物流,此案应严禁采用,首先从房间格局上避免交叉污染;
方案
2、设置独立缓冲间为最佳(尤其是DNA提取间、PCR扩增间、试剂混配间),且人流/物流分道,流程相临间应设置物流传递窗。
方案
3、设置共用缓冲间/缓冲走廊为亦可,操作流程:
完全双通道流程:
常规物证 → 物证存放
↑ 现场物证DNA提取 → PCR扩增 → 产物测序 ↑ ↗ ↗ ↘ 受案 → 检材 原始试剂混配 数据处理
↘ ↘ ↗ 嫌犯血样DNA提取 → PCR扩增 → 产物测序
简化双通道流程:
常规物证 → 物证存放
↑ ↗ 现场物证DNA提取 ↘
受案 → 检材 → 嫌犯血样DNA提取 → PCR扩增 → 产物测序 → 数据处理
原始试剂混配 ↗
单通道流程:
常规物证 → 物证存放
受案↑→ 检材 → DNA提取 → PCR扩增 → 产物测序 → 数据处理
原始试剂混配 ↗
气流组织:
1、原始试剂混配室应为正压间,在微环境百级超净台内操作,须防止其它程序功能间对本操作间的污染;
2、DNA提取室应为微负压间,须设置排风系统,以防止核酸提取时可能产生的气溶胶对人员的侵害和对其它程序功能间的扩散污染;
3、PCR扩增室应为微负压间,须设置排风系统,以防止大量扩增产物对其它程序功能间的扩散污染;
4、检测室应为微负压间,须设置排风系统,以防止扩增产物在电泳测序过程中的扩散污染;同时因3130分析仪散热量较大,会提高室内温度3-5℃;
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5、试剂混配室、DNA提取室、PCR扩增室、检测室如设置缓冲间,功能间内可均为正压,而在缓冲间内设置负压,气流从其双道门的门缝处分别向缓冲间内流动,用合理的气流组织方式避免各功能间的交叉污染;
6、高效送风口为顶送风,侧下回/排风(竖井、夹道、缓冲间)方式。
通风空调:特殊实验区各主要功能间采用非单向流、三级过滤、各自独立送/回风、集中(或独立)新/排风的净化系统,室内空调全部选用悬挂风管式商用空调,通过新风/送风/回风管道、风阀等连接悬挂式袋式中效净化加压风机箱,避免集中回风后再循环可能造成的空气交叉污染,同时亦可避免如采用全新风全排风方式而造成的室内热量/冷量大量流失、难以控制和洁净度无法保证的技术问题,从而提高制热/制冷效果,降低运行能耗;主要功能间内或其配套的缓冲间均加装排风装置,以防止室内污染空气外漏它屋而造成的交叉污染,达到置换室内空气。
电气照明:室内照明灯具采用了国内优质的防尘净化灯,为双管40瓦,在应急照明方面,采用了优质的应急净化灯,当遭遇临时停电或紧急事故断电时,部分净化灯管可迅速转入蓄电池供电,以保证每间自动开启一盏应急照明灯管,方便人员在15分钟内撤离,而平时,此应急净化灯与其它净化灯同样使用,无任何区别,省去了购买安装应急灯组的麻烦,使整个试验区内浑然一体、专业实用;功能间及缓冲间设UV灯。
室内电路上,均应采用达到国家标准的电气线缆,采用并联方式,主线使用班4~6MM2 线缆,插座及照明使用2.5 MM2 线缆,所有线路均为暗装,并使用PVC阻燃线管,接头在技术夹层中采用线盒安装,杜绝施工及维修中的安全隐患。配电柜及空气开关均使用国内著名厂家的元器件,寿命长、安全可靠,风机动力配电箱与空调、照明、插座等总配电箱将分别设置,各间净化风机箱与空调可依据使用需求即可集中操控,亦可单独使用。装修材料:特殊实验区搭建室内环境污染控制二级屏障——密闭间,其围护、吊顶全部采用厚度为50mm的EPS夹芯净化彩钢复合板(双面钢板厚度0.5mmEPS容重16Kg/m3),平整、无漏缝、易清洁、不发尘;
所有墙与顶、地、窗对接角均采用内圆弧(阴角)或外圆弧(阳角)和工艺,室内无死角、不集尘、易清洁;50槽、门框料、窗框料、圆弧角等结构件均选用净化专用铝型材料;
实验区域内地面全部选用纯进口国际知名品牌的优质复合型/通体型PVC地面,多层工艺处理,PVC无缝焊接,防渗漏、防腐蚀、易清洁、美观大方;
室内围护屏障所设固定采光窗/观察窗均采用净化专用铝型材、浮法玻璃制作,不可开启;室内门可通过尺寸为宽850mm、高1900 mm,负压较大的室门向外侧开启,正压室门向内侧开启,走廊或主通道门向外侧开启,门上均设置有长方形观察窗;
作为二级屏障以降低外环境空气或沙尘污染对室内的影响。
配套设备:本实验室内根据需要将可配备具有国家注册商标的“世安” 牌微环境百级生物型超净工作台、拥有国家专利的“世安” 牌补风型排毒通风柜、国内独家生产的“世安” 牌内排式净化捕尘柜、ⅡA型生物安全柜等作为微环境污染控制的一级屏障;超净工作台、净化捕尘柜、生物安全柜均选用世界著名品牌德国EBM风机,噪音低、体积小、风量均匀,及自主研发的程序控制器,选用0.3μm效率≥99.97%的高效过滤器;并与冰箱等其他落地设备、试剂柜/仪器台/操作台/电脑桌等现代实验室家具、PCR仪/测序仪/离心机/工作站/计算机等各种台式仪器及功能间格局等统一设计规划;尤其是美国ABI公司提供的测序仪和PCR仪对室内空气及温湿度的环境控制具有一定的要求;
各实验室间配备不锈钢传递窗作为物流专用单向通道,其具备双门机械联动互锁,双控紫外灭菌灯开关,传送便捷,人 / 物分流,从最大程度上降低交叉污染。
各功能间仪器、设备基本配置(参考):
一、物证接案室
1、收案实验台
2、万向排气罩
3、立式更衣柜
4、卧式更鞋柜
5、液晶屏台式电脑
6、打印机
7、脚踏式不锈钢垃圾桶
二、检材准备室
1、钢结构实芯理化板台面实验台
2、柜式PP水槽洗涤台
3、双门试剂柜
4、常温冰柜
5、-40℃超低温冰箱
6、电热恒温冰箱
7、压力蒸汽灭菌锅
8、照像仪
9、通风柜(腐败物等)
10、液晶屏台式电脑
11、脚踏式不锈钢垃圾桶
三、核酸提取室(现场物证)
1、钢结构实芯理化板台面实验台
2、柜式PP水槽洗涤台
3、紧急洗眼器
4、手消毒/烘干器
5、ⅡA型生物安全柜/补风型通风柜/内排式净化捕尘柜(骨格粉碎提取等)
6、电冰箱
7、电热恒温水浴锅
8、纯水器
9、加样枪
10、定时恒温磁力搅拌器
11、电子分析天平仪
12、加湿器
13、液晶屏台式电脑
14、DNA扩增仪
15、冷冻离心机
16、高速离心机
17、振荡器
18、脚踏式不锈钢垃圾桶
四、核酸提取室(嫌犯血样)
1、钢结构实芯理化板台面实验台
2、柜式PP水槽洗涤台
3、电冰箱
4、加样枪
5、液晶屏台式电脑
6、ⅡA型生物安全柜/补风型通风柜/无管道净化通风柜
7、冷冻离心机
8、高速离心机
9、定时恒温磁力搅拌器
10、电子分析天平仪
11、电热恒温水浴锅
12、振荡器
13、脚踏式不锈钢垃圾桶
五、试剂混配室
1、钢结构实芯理化板台面实验台
2、柜式PP水槽洗涤台
3、电冰箱
4、加样枪
5、液晶屏台式电脑
6、生物型单面垂直送风百级洁净工作台
7、小离心机
8、不锈钢试剂配送车
9、脚踏式不锈钢垃圾桶
六、PCR扩增室
1、钢结构实芯理化板台面实验台
2、柜式PP水槽洗涤台
3、电冰箱
4、加样枪 5、9700扩增仪
6、液晶屏台式电脑
7、脚踏式不锈钢垃圾桶
七、产物测序室
1、钢结构实芯理化板台面实验台
2、柜式PP水槽洗涤台
3、电冰箱
4、加样枪 5、3130分析仪
及其专用UPS不间断电源(距检测室较近处设可散热UPS机房)
6、液晶屏台式电脑
7、小离心机 8、96孔平板离心机
9、脚踏式不锈钢垃圾桶
八、数据分析室
1、钢结构实芯理化板台面实验台
2、液晶屏台式电脑
3、打印机
4、脚踏式不锈钢垃圾桶
第二篇:PCR实验室设计说明分析
实验室设计说明
PCR实验室分为四个区域,进入各工作区域必须严格按照单一方向进行,不同的工作区域使用不同的工作服(例如不同的颜色)。工作人员离开各工作区域时,不得将工作服带出,四区域分别为: 1.试剂配制区n 2.样品处理区n 3.核酸扩增区n 4.产物分析区n 如使用全自动分析仪,区域可适当合并,三四区可合并为扩增产物分析。各区的功能是:
1.1.1 试剂准备区:扩增试剂的配制、分装和保存。
1.1.2 样品处理区:样品登记、分装;核酸提取、保存和加样。
1.1.3 扩增产物分析区:扩增产物的测定、结果分析、登记及报告。
1.2 扩增前区与扩增后区应严格分开,须使用不同的房间,两区之间最好有一定的间隔。
1.3 使用商品化试剂盒可在样品处理区进行少量试剂配制。
1.4 在满足下列操作和清洁处理要求的前提下样品处理区和试剂准备区可设在同一房间内:
1.4.1 在生物安全柜内操作。
1.4.2 每个实验人员、实验组分别使用各自的试剂及耗材。
1.4.3 盛放污染材料的器皿密封并一次性使用。
1.4.4 用有效的方法对操作区域和共享器具在实验前后进行清洁及消毒。设计要求:
PCR实验室可以是分散形式,也可以是组合形式,现要主要是以组合形式为主流。完成一组PCR实验,通常应经过试剂配制、样品处理、核酸扩增及产物分析四个实验过程,若实验工艺需要,还应增加样品粉碎过程。
一、分散形式PCR实验室
所谓分散形式PCR实验室,是指完成上述实验过程的实验用房彼此相距较远,呈分散布置形式。对于这种布置形式的PCR实验室,由于各个实验之间不易相互干扰,因此无需特殊条件要求。
二、组合形式PCR实验室
所谓组合形式PCR实验室, 是指完成PCR四个实验过程的实验用房相邻布置,组成独立实验区域的形式。对于组合形式PCR实验室,由于各个实验间集中布置,容易造成相互干扰,因此,对总体布局以及屏障系统具有一定的要求。各室在入口处设缓冲间,以减少室内外空气交换。
试剂配制室及样品处理室宜呈微正压,以防外界含核酸气溶胶的空气进入,造成污染,可以通过控制进风风量大于排风风量达到正压效果。
以防含核酸的气溶胶扩散出去污染试剂与样品,可以通过控制排风风量大于进风风量达到负压效果。
在理想情况下,PCR实验室缓冲间内,可设置正压,使室内空气不流向室外,室外空气不流向室内。PCR实验室进风由原有中央空调控制,要求将中央空调风口安装到指定定点,且高度为地面铺装好后2600mm处。
如果使用荧光PCR仪,扩增室和产物分析室可以合并。
若房间进深允许,可设PCR内部专用走廊。需要指出的是在减少室内外空气交换方面,缓冲间比专用走廊更有意义。
各个区域之间应具备单向的实验工艺流、物流、人流与气流,形成单向流程的保护屏障,避免实验之间的相互干扰,防止核酸气溶胶对实验过程造成污染产生假性结果。
实验室的墙体,包括顶棚,应结构牢固、气密性好;所有阴角宜采用圆弧形线条过渡;墙体内壁光洁、不吸附、耐腐蚀、易清洗消毒;地面材料应满足无缝隙、无渗漏、光洁、耐腐蚀的要求。如果使用荧光PCR仪,扩增室和产物分析室可以合并。
若房间进深允许,可设PCR内部专用走廊。需要指出的是在减少室内外空气交换方面,缓冲间比专用走廊更有意义。
各个区域之间应具备单向的实验工艺流、物流、人流与气流,形成单向流程的保护屏障,避免实验之间的相互干扰,防止核酸气溶胶对实验过程造成污染产生假性结果。
实验室的墙体,包括顶棚,应结构牢固、气密性好;所有阴角宜采用圆弧形线条过渡;墙体内壁光洁、不吸附、耐腐蚀、易清洗消毒;地面材料应满足无缝隙、无渗漏、光洁、耐腐蚀的要求。主要设备
试剂准备区
仪器设备主要有冰箱、超净台、加样器、混匀器、天平和离心机等,加样器、天平除了要专用外,还应有定期校准。
试剂分装应在超净台中进行
扩增反应混合液应使用分子生物学级的,试剂制备好后应有质检:一是否有污染、二是检测试剂的扩增效果。标本制备区
仪器设备主要有生物安全柜、加样器、离心机、温育仪、混匀器等
扩增区
扩增区的主要仪器是核酸扩增仪、超净台、微量加样器、离心机、可移动紫外灯。扩增仪需进行校准。并配备UPS电源,以防止由于电压的波动,停电对扩增效果的影响。分析区
本区所使用的仪器设备有酶标仪、洗板机、加样器和水浴箱等 洁净实验区的缓冲间部分面积不能超过主实验室的八分之一,这是有规定的.、主体结构:
主体为彩钢板、铝合金型材。室内所有阴角、阳角均采用铝合金50内圆角铝,从而解决容易污染、积尘、不易清扫等问题。结构牢固,线条简明,美观大方,密封性好。
2、标准的四区分隔和气压调节:
将PCR过程分成试剂准备、标本制备和PCR扩增,产物分析四个独立的实验区。整个区域有一个整体缓冲走廊。每个独立实验区设置有缓冲区,同时各区通过气压调节,使整个PCR实验过程中试剂和标本免受气溶胶的污染并降低扩增产物对人员和环境的污染。
可打开缓冲区Ⅰ,缓冲区Ⅱ和 PCR 扩增区的排风扇往外排气,在实验区的外墙上和各扇门上都安装有风量可调的回风口,空气通过回风口向室内换气。
3、消毒:
在三个实验区和三个缓冲区顶部以及传送窗内部安装有紫外灯,供消毒用。在试剂准备区和标本制备区 还设置移动紫外线灯,对实验桌进行局部消毒。
4、不锈钢传递窗:
试剂和标本通过机械连锁不锈钢(不建议使用电子连锁方式)传递窗传递,保证试剂和标本在传递过程中不受污染(人物分流)。
5、地面
地面建议使用PVC卷材地面或自流坪地面,整体性好。便于进行清扫,耐腐蚀。
6、照明
灯具要选用净化灯具,能达到便于清洗、不积尘的特点。在建设的过程中应注意:
●规范的安装流程和全面的服务流程。●严格按照规范科学设计的安装流程。
●安装前需要确定以下安装条件,如:电源电压,电源进线位置,电话网络线进线位置,进水水压,最小安装空间,地面平整度,通风孔、进水管和下水管的位置等,理想状态的空间尺寸
样本处理区
三、工作区域及设备要求
(一)试剂储存和准备区1、2-8C和-15C冰箱
2、混匀器
3、微量加样器(覆盖1-1000ul)
4、移动紫外灯(近工作台面)
5、消耗品:一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头(带滤心)
6、专用工作服和工作鞋
7、专用办公用品
(二)标本制备区 1、2-8C冰箱、-20C或-80C冰箱
2、高速台式冷冻离心机
3、混允器
4、水浴箱或加热模块
5、微量加样器(覆盖1-1000ul)
6、可移动紫外灯(近工作台面)
7、生物安全柜
8、消耗品:一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头(带滤心)
9、专用工作服和工作鞋
10、专用办公用品
如需处理大分子DNA,应具有超声波水浴仪。
(三)扩增反应混合物配制和扩增区
1、核酸扩增仪
2、微量加样器(覆盖1-1000ul)
3、可移动紫外灯(近工作台面)
4、消耗品:一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头(带滤心)
5、专用工作服和工作鞋
6、专用办公用品
(四)扩增产物分析区
视检验方法不同而定。基本仪器设备如下:
1、微量加样器(覆盖1-1000ul)
2、可移动紫外灯(近工作台面)
3、消耗品:一次性手套、一次性吸水纸、加样器吸头(带滤心)
4、专用工作服和工作鞋
5、专用办公用品
5.人员和样品的安全是由生物安全柜和定向气流共同来保证。PCR实验室设计规程中规定人员和样品必须单向流动。即从 “试剂准备区到样品制备区,再从样品制备走向扩增区和产物分析区”,绝对不能反向流动,以辟免交叉污染。气流方向只规定试剂准备区为微正压或常压,样品制备区为常压或负压,扩增区和产物分析区为负压,压力梯度是从试剂准备到产物分析区,是高到低的。规程并没有规定要做成全新风系统,但是为降低交叉污染的风险,建议做成全新风系统。概述
临床基因扩增实验又称PCR实验,是专门用来检验艾滋病、乙型肝炎、禽疫病等病毒感染性疾病的一种检测手段。它可以通过将病毒体内所含的基因进行扩增的方法,测出一些病毒含量不高的感染者体内是否含有特定的病毒。由于该检测方法可以测出普通检验难以检测出的病毒并具有灵敏度高、特异性高、快捷、对样品要求低等优点,因此被临床医生广为认可,已广泛应用于医院的临床诊断和各防疫检测部门的禽疫病诊断。但是,这种实验需要有能保证绝对安全、配置合理的实验室和非常规范的操作为前提。近年来对临床基因扩增检验实验室的建设越来越得到重视,因为它对检测结果的可靠性、准确性和安全性起到至关重要的作用。本文主要从临床基因扩增检验实验室的平面布局,空调通风系统设计、气流控制和污染的防制几个方面对
实验室设计中的主要特点进行了阐述。
临床基因扩增检验实验室设计的核心问题是如何避免污染。因此,实验室的平面布局、空调通风系统设计、气流控制等都是围绕这个核心问题进行的。下面就对这几个方面分别进说明。PCR实验室平面布局
临床基因扩增检验实验室原则上分为四个单独的工作区域:试剂贮存和准备区、标本制备区、扩增反应混合物配制和扩增区、扩增产物分析区。为避免交叉污染,进入各个工作区域必须严格遵循单一方向进行,即只能从试剂贮存和准备区→标本制备区→扩增反应混合物配制和扩增区→扩增产物分析区。
各实验区之间的试剂及样品传递应通过传递窗进行。
PCR实验室平面布置示意图如图1所示。
图1 PCR实验室平面布置示意图 实验室空调通风系统设计及压力控制 PCR实验室并没有严格的净化要求,但是为避免各个实验区域间交叉污染的可能性,宜采用全送全排的气流组织形式。同时,要严格控制送、排风的比例以保证各实验区的压力要求。
3.1 试剂贮存和准备区
该实验区主要进行的操作为贮存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备。试剂和用于标本制作的材料应直接运送至该区,不得经过其他区域。试剂原材料必须贮存在本区内,并在本区内制备
成所需的贮存试剂。
对与气流压力的控制,本区并没有严格的要求。
3.2 标本制备区
该区域主要进行的操作为临床标本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定RNA时cDNA的合成。
本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为正压,以避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。另外,由于在加样操作中可能会发生气溶胶所致的污染,所以应避免在本区内不必要的走动。
3.3 扩增反应混合物配制和扩增区
该区域主要进行的操作为DNA或cDNA扩增。此外,已制备的DNA模板和合成的cDNA(来自样本制备区)的加入和主反应混合液(来自试剂贮存和制备区)制备成反应混合液等也可在本区内进行。在巢式PCR测定中,通常在第一轮扩增后必须打开反应管,因此巢式扩增有较高的污染危险性,第二次加样必须在本区内进行。
本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为负压,以避免气溶胶从本区漏出。为避免气溶胶所致的污染,应尽量减少在本区内的不必要的走动。个别操作如加样等应在超净台内进行。
3.4 扩增产物分析区
该区域主要进行的操作为扩增片段的测定。如使用全自动封闭分析仪器检测,此区域可不设。
本区是最主要的扩增产物污染来源,因此对本区的压力梯度的要求为:相对于邻近区域为负压,以避免扩增产物从本区扩散至其它区域。污染的预防与控制
PCR实验室设计的核心问题是如何避免污染。在实际工作中,常见的有以下几种污染类型:扩增产物的污染;天然基因组DNA的污染;试剂的污染以及标本间的污染。由于一旦发生污染,实验就必须停止,直到找到污染源为止,而且实验结果必须作废,需重新进行实验。所以发生污染后再围绕实验室来寻找污染源不但耗时而且繁琐,浪费人力物力。因此要避免污染,首先应是预防,而不是排除。
4.1 工作区域的严格划分
(1)各个实验区域设置合理;
(2)各个实验区域要有明显的标记(如醒目的门牌或不同的地面颜色等),以避免各个不同实验区域设备物品、试剂等发生混淆。
4.2 合理的系统设置
(1)合理的空调通风系统设置,尽量采用全送全排的空调系统;
(2)严格的气流压力控制,保证不同的实验区内不同的压力要求。
4.3 规范的操作
(1)临床基因扩增检验实验室的技术人员必须进行上岗培训,经培训合格后才能从事临床基因扩增检验的工作;
(2)在实验操作过程中,操作者必须戴手套,并经常更换。此外,操作中使用一次性帽子也是一个有效地防止污染的措施;
(3)清洁工作及时、正确。实验工作结束后,必须立即对本区进行清洁。除常规的消毒液体对表面进行擦拭消毒或紫外线灯的照射消毒外,对一些实验设备还应进行高压消毒处理。
4.4 严格的管理
(1)严格控制进出实验室的人员。与实验无关的人员不得随意进出实验室,有条件的情况下要设置独立的通道和进出整个实验区的门;
(2)在各个实验区域使用带有明显区别标志的工作服(如不同颜色),当工作人员离开时不得将本区的工作服带至其它区域;
(3)尽量减少在实验区内不必要的走动以减少交叉污染的可能性。
(4)扩增产物分析区是最主要的扩增产物污染来源,废液不能在实验室中倾倒,必须经消毒液浸泡消毒后在远离实验室的地方弃掉,用过的吸头等一次性材料也应经消毒液浸泡消毒后统一处理,如焚烧等;
(5)扩增产物分析区可能会用到某些可致基因突变和有毒物质,应特别注意实验人员的安全防护。
4.5 完备的实验室配套设施
完备的实验室配套设施是保证实验工作的必要条件,应根据各个实验室实验内容的不同配备相应的设备和仪器,如超净工作台、离心机、加样器等。
PCR实验室并没有严格的净化要求,但是为避免各个实验区域间交叉污染的可能性,宜采用全送全排的气流组织形式。同时,要严格控制送、排风的比例以保证各实验区的压力要求。
3.1 试剂贮存和准备区
该实验区主要进行的操作为贮存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备。试剂和用于标本制作的材料应直接运送至该区,不得经过其他区域。试剂原材料必须贮存在本区内,并在本区内制备成所需的贮存试剂。
对与气流压力的控制,本区并没有严格的要求。
3.2 标本制备区
该区域主要进行的操作为临床标本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定RNA时cDNA的合成。
本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为正压,以避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。另外,由于在加样操作中可能会发生气溶胶所致的污染,所以应避免在本区内不必要的走动。
3.3 扩增反应混合物配制和扩增区
该区域主要进行的操作为DNA或cDNA扩增。此外,已制备的DNA模板和合成的cDNA(来自样本制备区)的加入和主反应混合液(来自试剂贮存和制备区)制备成反应混合液等也可在本区内进行。在巢式PCR测定中,通常在第一轮扩增后必须打开反应管,因此巢式扩增有较高的污染危险性,第二次加样必须在本区内进行。
本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为负压,以避免气溶胶从本区漏出。为避免气溶胶所致的污染,应尽量减少在本区内的不必要的走动。个别操作如加样等应在超净台内进行。
3.4 扩增产物分析区
该区域主要进行的操作为扩增片段的测定。如使用全自动封闭分析仪器检测,此区域可不设。
本区是最主要的扩增产物污染来源,因此对本区的压力梯度的要求为:相对于邻近区域为负压,以避免扩增产物从本区扩散至其它区域。4.0传递窗口的尺寸:
普通传递窗规格: SAT500 500x500x500(工作尺寸)SAT600 600x600x600(工作尺寸)洁净传递窗规格: SAT600 600x600x600(工作尺寸)SAT1000 600x1000x600(工作尺寸)
第三篇:PCR实验室
高端PCR实验室控制设计说明
PCR实验室即分子生物学实验室,在医疗、科研、生物技术方面得到广泛的应用。因其在不同行业的应用各有区别,在具体设计时也有不同之处,就医疗机构的应用而言,主要使用三区或四区设计,即试剂准备区、样品提取区、扩增分析区;此类三区设计时候应用于类似荧光定量型或同类PCR分析设备,及扩增与分析过程在设备内一次完成。而四区设计在三区的基础上讲扩增分析区拆分为扩增区与分析区适用于其他类型的pcr设备及手工处理。
在PCR实验的设计上,经过多年的经验累积,已经在一些关键技术上达成了共识。因为PCR实验中所产生的DNA与RNA片段过于微小,以至于可以穿透高效过滤器,所以在实验室设计上已经不在强制要求设计高效净化系统,但是为了提高实验环境水平及保护实验室内的敖贵设备方面,如果在具备条件的情况下可考虑追加高效空气净化系统;建议净化级别万级。在PCR实验中所产生的DNA与RNA片段污染是一直以来PCR实验的重点问题。此类污染主要至上次试验中所产生的基因片段对下次试验产生的污染,而且一旦试验环境中的污染形成后很难处理。因为消毒等传统方式对于基因污染没有很良好的效果。所以在PCR实验室设计中一般将整套实验室设计为全新风型实验室,这样而已通过有效的换气次数来达到净化室内污染的作用。而在控制方面也有很多不同之处,因为各单位对PCR实验的重视程度各有不同,所以在设计上也有不同,主要的控制设计有定送定排式压力控制系统、变送定排式压力控制系统变送变排式压力控制系统。在控制设备方面也有很多区分如压力无关型控制系统、压力有关型控制系统。
根据业主要求,本PCR实验室为三区设计,各区可独立使用,不设置高效过滤系统等相关要求,根据业主以上要求,我方给出的设计方案为压力无关型变送变排压力控制系统。本系统的特点是,设备启动后可根据实验室内使用节点调节送风量及排风量来控制各房间状态,系统说明见下图
每个房间可分别控制,使用时通过房间开关输出启动信号,当设备接到启动信号时设备运行,运行中根据管道压力反馈决定变频器大小,房间内送排风量由压力无关型风量调节阀控制。 当有多个房间开启或关闭时,设备更加管道压力反馈,调节设备变频器增加或减少送排风量来稳定管道压力。各房间内压力又房间内的压力无关型定风量阀进行控制。
当BSC(生物安全柜,B2全排)开启时BSC专用供风机组运行,BSC-供风机-排风机连锁运转。
当BSC做变风量调节时,根据房间内压力变化,BSC专用供风机组前安装的压力无关型变风量调节阀根据压力变化增减送风量,确保房间压力执行在可控范围内。
当房间不适用时,房间与缓冲间均关闭电动密闭阀,确保房间处在密闭状态避免布朗运动造成的可能污染风险。
房间换气次数均按照一定净化标准设计,当室内污染发生时,通过一定时间的换气处理后,污染问题可以基本解决。 本系统如果业主需要,可在室内送风口末端加装高效过滤设备,房间可升级为净化型实验室。
压力无关型风阀简介:压力无关型风阀的特点是不会根据管道压力的变化而影响风阀内部的送风量,在一定管道压力区间内能够自行调节阀体阻力,来稳定送风量,是高端实验室必备的关键部件,目前此类阀体技术均有国外生产厂家控制,目前国内主用使用的产品有妥思、文丘里、西门子等品牌。
第四篇:PCR实验室
简介
Pcr实验室又叫基因扩增实验室。PCR是聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)的简称。是一种分子生物学技术,用于放大特定的DNA片段,可看作生物体外的特殊DNA复制。通过DNA基因追踪系统,能迅速掌握患者体内的病毒含量,其精确度高达纳米级别,精确检测乙肝病毒在患者体内存在的数量、是否复制、是否传染、传染性有多强、是否必要服药、肝功能有否异常改变能及时判断病人最适合使用哪类抗病毒药物、判断药物疗效如何、给临床治疗提供了可靠的检验依据
条件
1、必须拥有标准的的PCR荧光实验室;实时荧光定量PCR技术于1996年由美国Applied Biosystems公司推出 由于该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃,而且与常规PCR相比,它 有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点,目前已得到广 泛应用。本文试就其定量原理、方法及参照问题作一介绍
2、检测设备必须符合标准PCR荧光实验室设置要求;荧光定量PCR仪+实时荧光定量试剂+通用电脑+自动分析软件,构成PCR-DNA/RNA实时荧光定量检测系统。
3、必须通过国家临床检验中心的验收和认证;
4、检测人员必须通过国家临检中心业务培训并取得合格证书;PCR实验室内工作人员必须参加由国家卫生部或各省临床检验中心举办的临床基因扩增培训班,并持证上岗。PCR实验室通过验收,实验室至少必须应有两个以上持有“临床基因检测上岗证”。PCR实验室必须建立严格的实验室管理制度、建立标准化操作程序(SOP)、建立系列质量管理文件等,确保实验室日常运行符合国家卫生部的要求,确保检测结果准确、确保实验室卫生安全,确保实验室长期稳定运行
5、必须在无菌无尘环境下进行操作
功能
能够对患者病情进行科学、准确、实时的掌控,并结合抗HBV与T细胞免疫来打破免疫耐受,阻断肝病病毒复制的疗法、有效的分解肝炎病毒,解决了乙肝病毒易变异、耐药,病毒复制模板难以治疗,人体免疫耐受状态不易打破等医学难题,能迅速消除临床症状,而且有效抑制乙肝病毒复制,明显加快e抗原、抗体的血清转换速度,杀灭血液及肝细胞内的病毒,为防止再感染提供了长期保护,有效阻断和逆转肝纤维化、肝硬化进程。
建立方法
1、建立样品准备区
这个区域专门用作样品的准备,在制备和操作用于核酸提取的试剂时应该采取预防措施:⑴PCR产物和带有要扩增序列的DNA克隆不能在这个房间操作。⑵组织培养物、组织标本和血清样品都带进样品准备间处理,以根据应用的需要提取DNA或RNA。⑶用于样品处理的工具不能被用作普通分子克隆的工具,也不能用作操作靶序列。⑷DNA样品应该用有专门的防护或正压活塞式移液管操作,以防止在吸取样品时有气溶胶遗留。⑸大体积样品应该用单独包装的无菌一次性移液管吸取。⑹管子打开前都要简短离心以减少气溶胶的产生,而且管子不能用力崩开,这样会产生气溶胶。⑺任何时候都应该穿实验服和带手套,手套要经常更换,尤其在抽提过程中每一步之间都要更换。实验服要专门用于样品准备间,经常清洗。
2、样品准备和RNA-PCR RNA-PCR的额外步骤需要额外的样品操作,这样增加了样品之间污染的机会。为了避免这一问题,反转录一步可以在样品准备区进行。在RNA-PCR中应用UNG以防止污染的方法也有报道。
3、建立前PCR区。
该去专门用于准备各种反应,这个区域必须保持干净,而且没有来自克隆和样品准备的污染。前PCR区必须要有试剂和准备,特别是专门用于前PCR区的正压活塞式移液管。
4、PCR实验室试剂的操作。
⑴所用的所有溶液都应该没有核酸和(或)核酸酶(DNase和RNase)污染。⑵所有PCR试剂中使用的水都应该是高质量的-新鲜蒸馏的去离子水,用0.22μm过滤的,并且是高压灭菌。⑶在20℃到25℃贮存的试剂建议加点像叠氮钠一类的抗微生物剂,在扩增试剂或样品制备试剂中加入0.025%的叠氮钠不抑制扩增反应。⑷所用试剂都应该以大体积配制,实验一下看试剂是否满意,然后分装成仅够一次使用的量进行贮存。⑸所有试剂和样品准备过程中都要使用一次性灭菌的瓶子和管子。⑹新配制的试剂在用于准备新的标本之前应该加以检验。⑺样品准备和前PCR区所使用的移液管在不使用时都应该小心保存。
5、在前PCR区建立PCR混合物。
⑴可以把即刻可用的“主混合物”溶液配好、分装并保存在-20℃或4℃,在实验室只涉及到扩增一种或少数几种特异序列时这样做很有用。⑵如果你的实验室使用多套引物,以致于配制包括所有试剂的单一反应混合物不够经济,可以考虑分装保存够一天的PCR成分。⑶作为一个规则,应该保存一套阴性、弱阳性和强阳性对照样品来分析样品配制和PCR前过程的效率和洁净程度。而且,你也希望通过使用一个已知的弱阳性样品来验证你的样品缓冲液以证明里面不含扩增抑制物。⑷阴性样品要与每组样品同时做,以分析是否存在样品与样品之间的污染以及是否存在PCR产物的污染,阴性对照应该包括核酸以外的所有试剂。⑸当做阳性对照时,有两个理由决定了应该使用最少数量的核酸。⑹由于必须有对照反应,对照模板的特点应该予以考虑。
6、控制污染的方法。
已设计出很有力的酶学方法用来消除一种形式的污染—使用UNG,这一技术能有效地消除由PCR产物引起的污染。另一种控制污染的方法是使用紫外线,这种方法不能完全消除污染问题,但可以将污染降低几个数量级。
7、后PCR区PCR完成以后,需要分析样品并解释数据,应该留出一个专门用于反应后处理样品的地方。后PCR活动中使用的所用试剂、一次性耗材和仪器都必须是专门用于这一目的,决不能把实验室这一区域的试剂或仪器用于任何前PCR活动
第五篇:PCR实验室说明
PCR实验室设计
PCR实验室分为四个区域,进入各工作区域必须严格按照单一方向进行,不同的工作区域使用不同的工作服(例如不同的颜色)。工作人员离开各工作区域时,不得将工作服带出,四区域分别为: 1.试剂配制区n 2.样品处理区n 3.核酸扩增区n 4.产物分析区n 如使用全自动分析仪,区域可适当合并,三四区可合并为扩增产物分析。
各区的功能是: 1.1.1 试剂准备区:扩增试剂的配制、分装和保存。1.1.2 样品处理区:样品登记、分装;核酸提取、保存和加样。1.1.3 扩增产物分析区:扩增产物的测定、结果分析、登记及报告。1.2 扩增前区与扩增后区应严格分开,须使用不同的房间,两区之间最好有一定的间隔。1.3 使用商品化试剂盒可在样品处理区进行少量试剂配制。1.4 在满足下列操作和清洁处理要求的前提下样品处理区和试剂准备区可设在同一房间内: 1.4.1 在生物安全柜内操作。1.4.2 每个实验人员、实验组分别使用各自的试剂及耗材。1.4.3 盛放污染材料的器皿密封并一次性使用。1.4.4 用有效的方法对操作区域和共享器具在实验前后进行清洁及消毒。设计要求:
PCR实验室可以是分散形式,也可以是组合形式,现要主要是以组合形式为主流。完成一组PCR实验,通常应经过试剂配制、样品处理、核酸扩增及产物分析四个实验过程,若实验工艺需要,还应增加样品粉碎过程。
一、分散形式PCR实验室 所谓分散形式PCR实验室,是指完成上述实验过程的实验用房彼此相距较远,呈分散布置形式。对于这种布置形式的PCR实验室,由于各个实验之间不易相互干扰,因此无需特殊条件要求。
二、组合形式PCR实验室 所谓组合形式PCR实验室, 是指完成PCR四个实验过程的实验用房相邻布置,组成独立实验区域的形式。对于组合形式PCR实验室,由于各个实验间集中布置,容易造成相互干扰,因此,对总体布局以及屏障系统具有一定的要求。各室在入口处设缓冲间,以减少室内外空气交换。
试剂配制室及样品处理室宜呈微正压,以防外界含核酸气溶胶的空气进入,造成污染,可以通过控制进风风量大于排风风量达到正压效果。
核酸扩增室及产物分析室应呈微负压,以防含核酸的气溶胶扩散出去污染试剂与样品,可以通过控制排风风量大于进风风量达到负压效果。
在理想情况下,PCR实验室缓冲间内,可设置正压,使室内空气不流向室外,室外空气不流向室内。
PCR实验室进风由原有中央空调控制,要求将中央空调风口安装到指定定点,且高度为地面铺装好后2600mm处。
如果使用荧光PCR仪,扩增室和产物分析室可以合并。
若房间进深允许,可设PCR内部专用走廊。需要指出的是在减少室内外空气交换方面,缓冲间比专用走廊更有意义。各个区域之间应具备单向的实验工艺流、物流、人流与气流,形成单向流程的保护屏障,避免实验之间的相互干扰,防止核酸气溶胶对实验过程造成污染产生假性结果。实验室的墙体,包括顶棚,应结构牢固、气密性好;所有阴角宜采用圆弧形线条过渡;墙体内壁光洁、不吸附、耐腐蚀、易清洗消毒;地面材料应满足无缝隙、无渗漏、光洁、耐腐蚀的要求。
如果使用荧光PCR仪,扩增室和产物分析室可以合并。
若房间进深允许,可设PCR内部专用走廊。需要指出的是在减少室内外空气交换方面,缓冲间比专用走廊更有意义。各个区域之间应具备单向的实验工艺流、物流、人流与气流,形成单向流程的保护屏障,避免实验之间的相互干扰,防止核酸气溶胶对实验过程造成污染产生假性结果。实验室的墙体,包括顶棚,应结构牢固、气密性好;所有阴角宜采用圆弧形线条过渡;墙体内壁光洁、不吸附、耐腐蚀、易清洗消毒;地面材料应满足无缝隙、无渗漏、光洁、耐腐蚀的要求。主要设备试剂准备区 仪器设备主要有冰箱、超净台、加样器、混匀器、天平和离心机等,加样器、天平除了要专用外,还应有定期校准。试剂分装应在超净台中进行 扩增反应混合液应使用分子生物学级的,试剂制备好后应有质检:一是否有污染、二是检测试剂的扩增效果。标本制备区 仪器设备主要有生物安全柜、加样器、离心机、温育仪、混匀器等
扩增区 扩增区的主要仪器是核酸扩增仪、超净台、微量加样器、离心机、可移动紫外灯。扩增仪需进行校准。并配备UPS电源,以防止由于电压的波动,停电对扩增效果的影响。分析区 本区所使用的仪器设备有酶标仪、洗板机、加样器和水浴箱等
洁净实验区的缓冲间部分面积不能超过主实验室的八分之一,这是有规定的.1、主体结构: 主体为彩钢板、铝合金型材。室内所有阴角、阳角均采用铝合金50内圆角铝,从而解决容易污染、积尘、不易清扫等问题。结构牢固,线条简明,美观大方,密封性好。
2、标准的四区分隔和气压调节: 将PCR过程分成试剂准备、标本制备和PCR扩增,产物分析四个独立的实验区。整个区域有一个整体缓冲走廊。每个独立实验区设置有缓冲区,同时各区通过气压调节,使整个PCR实验过程中试剂和标本免受气溶胶的污染并降低扩增产物对人员和环境的污染。可打开缓冲区Ⅰ,缓冲区Ⅱ和 PCR 扩增区的排风扇往外排气,在实验区的外墙上和各扇门上都安装有风量可调的回风口,空气通过回风口向室内换气。
3、消毒: 在三个实验区和三个缓冲区顶部以及传送窗内部安装有紫外灯,供消毒用。在试剂准备区和标本制备区 还设置移动紫外线灯,对实验桌进行局部消毒。
4、不锈钢传递窗: 试剂和标本通过机械连锁不锈钢(不建议使用电子连锁方式)传递窗传递,保证试剂和标本在传递过程中不受污染(人物分流)。
5、地面 地面建议使用PVC卷材地面或自流坪地面,整体性好。便于进行清扫,耐腐蚀。
6、照明 灯具要选用净化灯具,能达到便于清洗、不积尘的特点。在建设的过程中应注意: ●规范的安装流程和全面的服务流程。●严格按照规范科学设计的安装流程。●安装前需要确定以下安装条件,如:电源电压,电源进线位置,电话网络线进线位置,进水水压,最小安装空间,地面平整度,通风孔、进水管和下水管的位置等,理想状态的空间尺寸 样本处理区
三、工作区域及设备要求
(一)试剂储存和准备区 1、2-8C和-15C冰箱
2、混匀器
3、微量加样器(覆盖1-1000ul)
4、移动紫外灯(近工作台面)
5、消耗品:一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头(带滤心)
6、专用工作服和工作鞋
7、专用办公用品
(二)标本制备区 1、2-8C冰箱、-20C或-80C冰箱
2、高速台式冷冻离心机
3、混允器
4、水浴箱或加热模块
5、微量加样器(覆盖1-1000ul)
6、可移动紫外灯(近工作台面)
7、生物安全柜
8、消耗品:一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头(带滤心)
9、专用工作服和工作鞋
10、专用办公用品 如需处理大分子DNA,应具有超声波水浴仪。
(三)扩增反应混合物配制和扩增区
1、核酸扩增仪
2、微量加样器(覆盖1-1000ul)
3、可移动紫外灯(近工作台面)
4、消耗品:一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头(带滤心)
5、专用工作服和工作鞋
6、专用办公用品(四)扩增产物分析区 视检验方法不同而定。基本仪器设备如下:
1、微量加样器(覆盖1-1000ul)
2、可移动紫外灯(近工作台面)
3、消耗品:一次性手套、一次性吸水纸、加样器吸头(带滤心)
4、专用工作服和工作鞋
5、专用办公用品 5.人员和样品的安全是由生物安全柜和定向气流共同来保证。PCR实验室设计规程中规定人员和样品必须单向流动。即从 “试剂准备区到样品制备区,再从样品制备走向扩增区和产物分析区”,绝对不能反向流动,以辟免交叉污染。气流方向只规定试剂准备区为微正压或常压,样品制备区为常压或负压,扩增区和产物分析区为负压,压力梯度是从试剂准备到产物分析区,是高到低的。规程并没有规定要做成全新风系统,但是为降低交叉污染的风险,建议做成全新风系统。概述 临床基因扩增实验又称PCR实验,是专门用来检验艾滋病、乙型肝炎、禽疫病等病毒感染性疾病的一种检测手段。它可以通过将病毒体内所含的基因进行扩增的方法,测出一些病毒含量不高的感染者体内是否含有特定的病毒。由于该检测方法可以测出普通检验难以检测出的病毒并具有灵敏度高、特异性高、快捷、对样品要求低等优点,因此被临床医生广为认可,已广泛应用于医院的临床诊断和各防疫检测部门的禽疫病诊断。但是,这种实验需要有能保证绝对安全、配置合理的实验室和非常规范的操作为前提。近年来对临床基因扩增检验实验室的建设越来越得到重视,因为它对检测结果的可靠性、准确性和安全性起到至关重要的作用。本文主要从临床基因扩增检验实验室的平面布局,空调通风系统设计、气流控制和污染的防制几个方面对 实验室设计中的主要特点进行了阐述。临床基因扩增检验实验室设计的核心问题是如何避免污染。因此,实验室的平面布局、空调通风系统设计、气流控制等都是围绕这个核心问题进行的。下面就对这几个方面分别进说明。2 PCR实验室平面布局 临床基因扩增检验实验室原则上分为四个单独的工作区域:试剂贮存和准备区、标本制备区、扩增反应混合物配制和扩增区、扩增产物分析区。为避免交叉污染,进入各个工作区域必须严格遵循单一方向进行,即只能从试剂贮存和准备区→标本制备区→扩增反应混合物配制和扩增区→扩增产物分析区。各实验区之间的试剂及样品传递应通过传递窗进行。PCR实验室平面布置示意图如图1所示。图1 PCR实验室平面布置示意图 3 实验室空调通风系统设计及压力控制 PCR实验室并没有严格的净化要求,但是为避免各个实验区域间交叉污染的可能性,宜采用全送全排的气流组织形式。同时,要严格控制送、排风的比例以保证各实验区的压力要求。3.1 试剂贮存和准备区 该实验区主要进行的操作为贮存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备。试剂和用于标本制作的材料应直接运送至该区,不得经过其他区域。试剂原材料必须贮存在本区内,并在本区内制备成所需的贮存试剂。对与气流压力的控制,本区并没有严格的要求。3.2 标本制备区 该区域主要进行的操作为临床标本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定RNA时cDNA的合成。本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为正压,以避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。另外,由于在加样操作中可能会发生气溶胶所致的污染,所以应避免在本区内不必要的走动。3.3 扩增反应混合物配制和扩增区 该区域主要进行的操作为DNA或cDNA扩增。此外,已制备的DNA模板和合成的cDNA(来自样本制备区)的加入和主反应混合液(来自试剂贮存和制备区)制备成反应混合液等也可在本区内进行。在巢式PCR测定中,通常在第一轮扩增后必须打开反应管,因此巢式扩增有较高的污染危险性,第二次加样必须在本区内进行。本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为负压,以避免气溶胶从本区漏出。为避免气溶胶所致的污染,应尽量减少在本区内的不必要的走动。个别操作如加样等应在超净台内进行。3.4 扩增产物分析区 该区域主要进行的操作为扩增片段的测定。如使用全自动封闭分析仪器检测,此区域可不设。本区是最主要的扩增产物污染来源,因此对本区的压力梯度的要求为:相对于邻近区域为负压,以避免扩增产物从本区扩散至其它区域。4 污染的预防与控制 PCR实验室设计的核心问题是如何避免污染。在实际工作中,常见的有以下几种污染类型:扩增产物的污染;天然基因组DNA的污染;试剂的污染以及标本间的污染。由于一旦发生污染,实验就必须停止,直到找到污染源为止,而且实验结果必须作废,需重新进行实验。所以发生污染后再围绕实验室来寻找污染源不但耗时而且繁琐,浪费人力物力。因此要避免污染,首先应是预防,而不是排除。4.1 工作区域的严格划分(1)各个实验区域设置合理;(2)各个实验区域要有明显的标记(如醒目的门牌或不同的地面颜色等),以避免各个不同实验区域设备物品、试剂等发生混淆。4.2 合理的系统设置(1)合理的空调通风系统设置,尽量采用全送全排的空调系统;(2)严格的气流压力控制,保证不同的实验区内不同的压力要求。4.3 规范的操作(1)临床基因扩增检验实验室的技术人员必须进行上岗培训,经培训合格后才能从事临床基因扩增检验的工作;(2)在实验操作过程中,操作者必须戴手套,并经常更换。此外,操作中使用一次性帽子也是一个有效地防止污染的措施;(3)清洁工作及时、正确。实验工作结束后,必须立即对本区进行清洁。除常规的消毒液体对表面进行擦拭消毒或紫外线灯的照射消毒外,对一些实验设备还应进行高压消毒处理。4.4 严格的管理(1)严格控制进出实验室的人员。与实验无关的人员不得随意进出实验室,有条件的情况下要设置独立的通道和进出整个实验区的门;(2)在各个实验区域使用带有明显区别标志的工作服(如不同颜色),当工作人员离开时不得将本区的工作服带至其它区域;(3)尽量减少在实验区内不必要的走动以减少交叉污染的可能性。(4)扩增产物分析区是最主要的扩增产物污染来源,废液不能在实验室中倾倒,必须经消毒液浸泡消毒后在远离实验室的地方弃掉,用过的吸头等一次性材料也应经消毒液浸泡消毒后统一处理,如焚烧等;(5)扩增产物分析区可能会用到某些可致基因突变和有毒物质,应特别注意实验人员的安全防护。4.5 完备的实验室配套设施 完备的实验室配套设施是保证实验工作的必要条件,应根据各个实验室实验内容的不同配备相应的设备和仪器,如超净工作台、离心机、加样器等。
PCR实验室并没有严格的净化要求,但是为避免各个实验区域间交叉污染的可能性,宜采用全送全排的气流组织形式。同时,要严格控制送、排风的比例以保证各实验区的压力要求。3.1 试剂贮存和准备区 该实验区主要进行的操作为贮存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备。试剂和用于标本制作的材料应直接运送至该区,不得经过其他区域。试剂原材料必须贮存在本区内,并在本区内制备成所需的贮存试剂。对与气流压力的控制,本区并没有严格的要求。3.2 标本制备区 该区域主要进行的操作为临床标本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定RNA时cDNA的合成。本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为正压,以避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。另外,由于在加样操作中可能会发生气溶胶所致的污染,所以应避免在本区内不必要的走动。3.3 扩增反应混合物配制和扩增区 该区域主要进行的操作为DNA或cDNA扩增。此外,已制备的DNA模板和合成的cDNA(来自样本制备区)的加入和主反应混合液(来自试剂贮存和制备区)制备成反应混合液等也可在本区内进行。在巢式PCR测定中,通常在第一轮扩增后必须打开反应管,因此巢式扩增有较高的污染危险性,第二次加样必须在本区内进行。本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为负压,以避免气溶胶从本区漏出。为避免气溶胶所致的污染,应尽量减少在本区内的不必要的走动。个别操作如加样等应在超净台内进行。3.4 扩增产物分析区 该区域主要进行的操作为扩增片段的测定。如使用全自动封闭分析仪器检测,此区域可不设。本区是最主要的扩增产物污染来源,因此对本区的压力梯度的要求为:相对于邻近区域为负压,以避免扩增产物从本区扩散至其它区域。4.0传递窗口的尺寸:
普通传递窗规格: SAT500 500x500x500(工作尺寸)SAT600 600x600x600(工作尺寸)洁净传递窗规格: SAT600 600x600x600(工作尺寸)SAT1000 600x1000x600(工作尺寸)