第一篇：乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒(PCR荧光探针法)
乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒
样本要求
1.适用标本类型：血清或血浆 2.标本采集
1）血清：用一次性无菌注射器抽取受检者静脉血2毫升，注入无菌的干燥玻璃管，室温放置30—60min，血标本可自发完全凝集析出血清，或直接使用水平离心机，1500 rpm离心5分钟，吸取上层血清，转移至1.5ml灭菌离心管
2）血浆：用一次性无菌注射器抽取受检者静脉血2毫升，注入含EDTA-2K或枸橼酸钠的玻璃管，立即颠倒玻璃管混合5—10次，使抗凝剂和静脉血充分混匀，5—10分钟后即可分离血浆，转移至1.5 ml灭菌离心管
3.标本保存与运送：所采集的标本可立即用于测试，也可以保存在—20℃待测，保存期为6个月，标本运送采用0℃冰壶。检验方法
1.DNA提取（样品制备区）
将待测样本、阳性定量参考品、阴性质控品、HBV 强阳性质控品、HBV临界阳性质控品进行同步处理。1）取200μl样品，加入450μlDNA提取液I和4μl的内标溶液，用振荡器剧烈混匀15秒，瞬时离心数秒。100℃恒温处理10±1分钟 2）12000rpm离心5分钟，备用 2.PCR试剂准备（试剂准备区）直接使用HBV-PCR反应管 3.加样（样品制备区）
往上述HBV反应管中用带滤芯吸嘴分别加入待测样本、阴性质控品、HBV 强阳性质控品、HBV临界阳性质控品和阳性定量参考品的上清液各20μl。盖紧管盖，8000rpm离心数秒后转移至扩增检测区。
4.PCR扩增（扩增和产物分析区）5.结果分析
反应结束后自动保存结果，根据分析后的图像调节baseline值得Start值、End值以及Threshold值，点击Analysis自动获取分析结果，在Repoet界面查看结果，记录未知样本数值（C）6.质量控制
(1)阴性质控品：FAM通道无对数增长期或Ct值等于30，VIC检测通道扩增曲线为明显对数增长期
(2)HBV阳性质控品：FAM通道有明显的对数增长期且Ct值小于30(3)HBV阳性定量参考品：FAM通道有明显的对数增长期，呈典型S形曲线。CT<29且R²>0.98 7.结果判断（1）如果在FAM通道无明显的对数增长期或Ct值等于30，在VIC检测通道扩增曲线有对数增长期，则判定样本的HBV DNA浓度小于检测灵敏度。（2）如果在FAM通道有对数增长期或Ct值小于30 则1）若样本的C<100，则样本的HBV DNA浓度<100IU/ml 2）若样本的100《C《5.00E+008，则样本的HBV DNA浓度= C IU/ml 3）若样本的C>5.00E+008，则样本的HBV DNA浓度>5×10 ⁿ IU/ml
第二篇：2013-2018年中国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒市场竞争格局与投资战略研究报告
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2013-2018年中国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒市场竞争格局与投资战略研究报告
报告目录
第一部分 行业发展现状
第一章 乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业发展概述
第一节 乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒的相关知识
一、乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒的定义
二、乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒的特点
第二节 乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业发展成熟度
一、行业发展周期分析
二、行业中外市场成熟度对比
三、行业及其主要子行业成熟度分析
第三节 乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒市场特征分析
一、市场规模
二、产业关联度
三、影响需求的关键因素
四、国内和国际市场
五、主要竞争因素
六、生命周期
第二章 全球乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒市场发展分析
第一节 2008-2012年世界乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒产业发展综述
一、世界乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒产业特点分析
二、世界乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒主要厂家分析
三、世界乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒产业市场分析
第二节 2007-2012年世界乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业发展分析
一、2007-2012年世界乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业发展分析
二、2012年世界乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业发展分析 第三节 全球乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒市场分析
一、2011-2012年全球乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒需求分析
二、2011-2012年欧美乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒需求分析
三、2011-2012年中外乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒市场对比
第三章 我国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业发展现状
第一节 中国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业发展状况
一、2011-2012年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业发展状况分析
二、2011-2012年中国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业发展动态
三、2011-2012年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业经营业绩分析
四、2011-2012年我国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业发展热点 网 址：www.xiexiebang.com
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第二节 中国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒市场供需状况
一、2011-2012年中国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业供给能力
二、2011-2012年中国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒市场供给分析
三、2011-2012年中国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒市场需求分析
四、2011-2012年中国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒产品价格分析 第三节 我国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒市场分析
一、2010年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒市场分析
二、2011年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒市场分析
三、2012年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒市场的走向分析
第四章 乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒产业经济运行分析
第一节 2008-2012年中国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒产业工业总产值分析
一、2008-2012年中国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒产业工业总产值分析
二、不同规模企业工业总产值分析
三、不同所有制企业工业总产值比较
第二节 2008-2012年中国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒产业市场销售收入分析
一、2008-2012年中国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒产业市场总销售收入分析
二、不同规模企业总销售收入分析
三、不同所有制企业总销售收入比较
第三节 2008-2012年中国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒产业产品成本费用分析
一、2008-2012年中国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒产业成本费用总额分析
二、不同规模企业销售成本比较分析
三、不同所有制企业销售成本比较分析
第四节 2008-2012年中国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒产业利润总额分析
一、2008-2012年中国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒产业利润总额分析
二、不同规模企业利润总额比较分析
三、不同所有制企业利润总额比较分析
第五章 我国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒产业进出口分析
第一节 我国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒产品进口分析
一、2011年进口总量分析
二、2011年进口结构分析
三、2011年进口区域分析
第二节 我国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒产品出口分析 网 址：www.xiexiebang.com
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一、2011年出口总量分析
二、2011年出口结构分析
三、2011年出口区域分析
第三节 我国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒产品进出口预测
一、2011年进口分析
二、2011年出口分析
三、2013-2018年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒进口预测
四、2013-2018年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒出口预测
第六章 中国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒市场供需分析
第一节 乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒市场需求规模分析
一、中国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒总体市场规模分析
二、东北地区市场规模分析
三、华东地区市场规模分析
四、华中地区市场规模分析
五、华北地区市场规模分析
六、华南地区市场规模分析
七、西部地区市场规模分析
第二节 乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒市场需求特征分析
一、乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒消费群体的年龄特征分析
二、消费者关注的因素
三、市场需求潜力分析
第三节 乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒生产分析
一、乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业产量分析
二、乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业领先技术分析
三、乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业生产集中度分析 第四节 乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业经营绩效分析
一、行业营运情况分析
二、行业盈利指标分析
三、行业偿债能力分析
四、行业成长性分析
第二部分 行业竞争格局
第七章 乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业竞争格局分析
第一节 乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业历史竞争格局概况
一、乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业集中度分析
二、乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业竞争程度分析 第二节 中国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业竞争结构分析
一、现有企业间竞争
二、潜在进入者分析
三、替代品威胁分析
四、供应商议价能力
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五、客户议价能力
第三节 中国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒产业研发力分析
一、乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒产业研发重要性分析
二、中外乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒研发投入和运作方式对比
三、中国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒研发力问题分析 第四节 中国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒产业竞争状况
一、我国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业品类竞争现状
二、我国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒企业的竞争力分析
三、中国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业并购重组状况
四、我国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业并购整合分析 第五节 乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业竞争格局分析
第八章 乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒企业竞争策略分析
第一节 乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒市场竞争策略分析
一、2011-2012年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒市场增长潜力分析
二、2011-2012年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒主要潜力品种分析
三、现有乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒产品竞争策略分析
四、潜力乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒品种竞争策略选择
五、典型企业产品竞争策略分析
第二节 乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒企业竞争策略分析
一、后危机对乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业竞争格局的影响
二、后危机后乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业竞争格局的变化
三、2013-2018年我国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒市场竞争趋势
四、2013-2018年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业竞争格局展望
五、2013-2018年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业竞争策略分析
六、2013-2018年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒企业竞争策略分析
第九章 乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒重点企业竞争分析
第一节 A
一、企业概况
二、竞争优势分析
三、2008-2012年经营状况
四、2013-2018年发展战略 第二节 B
一、企业概况
二、竞争优势分析
三、2008-2012年经营状况
四、2013-2018年发展战略 第三节 C
一、企业概况
二、竞争优势分析
三、2008-2012年经营状况 网 址：www.xiexiebang.com
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四、2013-2018年发展战略 第四节 D
一、企业概况
二、竞争优势分析
三、2008-2012年经营状况
四、2013-2018年发展战略
略......第三部分 行业前景预测
第十章 乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业发展趋势分析
第一节 2013-2018年中国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒市场趋势分析
一、2013-2018年我国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒发展趋势分析
二、2008-2012年我国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒市场趋势总结
三、2013-2018年我国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒市场发展空间 第二节 2013-2018年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒产业发展趋势分析
一、2013-2018年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒产业政策趋向
二、2013-2018年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒技术革新趋势
三、2013-2018年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒价格走势分析
四、2013-2018年国际环境对行业的影响
第十一章 未来乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业发展预测
第一节 未来乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒需求与消费预测
一、2013-2018年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒产品消费预测
二、2013-2018年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒市场规模预测
三、2013-2018年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业总产值预测
四、2013-2018年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业销售收入预测
五、2013-2018年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业总资产预测 第二节 2013-2018年中国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业供需预测
一、2013-2018年中国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒供给预测
二、2013-2018年中国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒产量预测
三、2013-2018年中国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒需求预测
四、2013-2018年中国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒供需平衡预测
五、2013-2018年中国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒产品价格预测
六、2013-2018年主要乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒产品进出口预测
第四部分 投资战略研究
第十二章 乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业投资现状分析
第一节 2010-2012年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业投资情况分析
一、2010-2012年总体投资及结构
二、2010-2012年投资规模情况
三、2010-2012年投资增速情况 网 址：www.xiexiebang.com
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四、2010-2012年分行业投资分析
五、2010-2012年分地区投资分析
六、2010-2012年外商投资情况
第二节 2011-2012年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业投资情况分析
一、2011-2012年总体投资及结构
二、2011-2012年投资规模情况
三、2011-2012年投资增速情况
四、2011-2012年分行业投资分析
五、2011-2012年分地区投资分析
六、2011-2012年外商投资情况
第十三章 乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业投资环境分析
第一节 经济发展环境分析
一、2008-2012年我国宏观经济运行情况
二、2013-2018年我国宏观经济形势分析
三、2013-2018年投资趋势及其影响预测 第二节 政策法规环境分析
一、2011年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业政策环境分析
二、2011年国内宏观政策对其影响分析
三、2011年行业产业政策对其影响分析 第三节 技术发展环境分析
一、国内乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒技术现状
二、2011年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒技术发展分析
三、2013-2018年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒技术发展趋势分析 第四节 社会发展环境分析
一、国内社会环境发展现状
二、2011年社会环境发展分析
三、2013-2018年社会环境对行业的影响分析 第五节 中国医药卫生体制改革分析
一、医药卫生体制改革意义
二、医药卫生体制改革思想及目标
三、医药卫生体系与制度改革分析
四、医药卫生体系改革方向
五、医药卫生体制改革重点工作分析
六、医药卫生体制改革步骤分析
七、新医改8500亿的投向分析
八、新医改对乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业的影响分析
第十四章 乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业投资机会与风险
第一节 乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业投资效益分析
一、2008-2012年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业投资状况分析
二、2013-2018年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业投资效益分析 网 址：www.xiexiebang.com
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三、2013-2018年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业投资趋势预测
四、2013-2018年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业的投资方向
五、2013-2018年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业投资的建议
六、新进入者应注意的障碍因素分析
第二节 影响乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业发展的主要因素
一、2013-2018年影响乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业运行的有利因素分析
二、2013-2018年影响乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业运行的稳定因素分析
三、2013-2018年影响乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业运行的不利因素分析
四、2013-2018年我国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业发展面临的挑战分析
五、2013-2018年我国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业发展面临的机遇分析
第三节 乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业投资风险及控制策略分析
一、2013-2018年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业市场风险及控制策略
二、2013-2018年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业政策风险及控制策略
三、2013-2018年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业经营风险及控制策略
四、2013-2018年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业技术风险及控制策略
五、2013-2018年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒同业竞争风险及控制策略
六、2013-2018年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业其他风险及控制策略
第十五章 乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业投资战略研究
第一节 乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业发展战略研究
一、战略综合规划
二、技术开发战略
三、业务组合战略
四、区域战略规划
五、产业战略规划
六、营销品牌战略
七、竞争战略规划
第二节 对我国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒品牌的战略思考
一、企业品牌的重要性
二、乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒实施品牌战略的意义
三、乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒企业品牌的现状分析 网 址：www.xiexiebang.com
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四、我国乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒企业的品牌战略
五、乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒品牌战略管理的策略 第三节 乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒企业经营管理策略
一、成本控制策略
二、定价策略
三、竞争策略
四、并购重组策略
五、营销策略
六、人力资源
七、财务管理
八、国际化策略
第四节 乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业投资战略研究
一、2011年医疗器械行业投资战略
二、2011年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业投资战略
三、2013-2018年乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒行业投资战略
四、2013-2018年细分行业投资战略
图表略…………
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第三篇：实时荧光定量PCR检测限的统计推断
实时荧光定量PCR检测限的统计推断
来源：中国论文下载中心
作者：王文清，王昌富，袁琳，彭长华，常武
【摘要】 检测限是检测方法的重要性能指标，用Poisson分布的概率函数分式计算一次抽样检测出现的结果推论总体出现该结果的概率。以实时荧光定量PCR(FQPCR)检测乙型肝炎病毒DNA结果为例，计算可知，一次抽样反应管的检测结果≥4时，才可推论总体与0(空白)差异有显著性(P<0.05)。因而检测血清中病原体时扩增反应管中的检测限是4拷贝/ul计算也可知，1拷贝/ul表示一次抽样的结果为0的概率可达0.368，结果在0拷贝/ul～4拷贝/ul的概率为0.996，而1000拷贝/ml表示一次抽样结果为0的概率为0。结果在905拷贝/ml～1 095拷贝/ml的概率为0.997；而100 000拷贝/L表示一次抽样结果在997 000拷贝/L～1 003 000拷贝/L的概率为0.997。抽样单位ul不能随意放大为ml甚至L。
【关键词】 实时荧光定量PCR；检测限；统计推断
Statistical Conclusion of Limit of Quqntitation in Realtime Fluorescence Quantitative PCR
Abstract:Limit of quantiation is a important performance index of assay methods.Results of sample drawing are calculated through possiblity function equation of Poisson distribution,then the possibility of results emerged in population is deduced.For example,in Realtime Fluorescence quantitaive PCR to assay HBV DNA,only when sample drawing results≥4,significance of difference(P<0.05)could be deduced between population and blank.So limit of quantitation is 4 copies/ul denoting 0 in one sample drawing is 0,and Possibility of results between 905 copies/ml to 1095 copies/ml is 0.997.Possibility of 100 000 copies/L denoting results between 997 000 copies/L to 1 003 000 copies/L in one sample drawing is 0.997.Sample drawing unit ul could not be replace by ml or L.Key words：Realtime Fluorescence quantitative PCR；Limit of quantitation;Statistical conclusion
检测限是检测方法的重要性能指标，只有在检测报告中明确表达了检测方法的检测限，该检测报告在各实验间及同一项目的各种检测方法间才可进行比较。能检测到的最低分析物浓度为检测系统的检测限。当前，检测限术语混乱，如：灵敏度(sensitivity)、分析灵敏度(analllytical sensitivity)、定量限度(limit of quantitqtion)等［1］。每个词语的实际含义中包含有各自的实验方式、数据处理方式及由数据作出的推论等。我们采用统计学方法，以期得到一致的实时荧光定量PCR(Realtime fluorescence quantitative polymerase chain reaction,FQPCR)检测限，现介绍如下。
文献中FQPCR检测限的描述
检测乙型肝炎病毒DNA的文献中检测限使用了“最低检出量”［2，3］、灵敏度［5～7］等术语，它等于已知的高拷贝HBV DNA血清10倍系列稀释后能检测到扩增曲线的最大稀释倍数管浓度。表述有：阴性HBV DNA≤106拷贝/升［4］；荧光定量PCR法检测灵敏度102拷贝/ml［5］、104拷贝/ml［6］、8.6×102拷贝/ml［7］；HCⅡ法检测灵敏度1.4×105拷贝/ml［7］；103 Eq/ml理论值时到达检测极限［3］；PCRFP检测HBV DNA的最低检测出量1×101拷贝［2］；bDNA在105 Eq/ml时到达检测极限［3］。以上检测限术语各不相同，且同一方法检测HBV DNA在上述各实验室发出同样的“HBV DNA低于检测下限”的报告时其实际HBV DNA拷贝数相差可达100倍。
FQPCR检测过程简介
以测定血清乙型肝炎病毒DNA为例：将40 μl血清样本加40 μl DNA提取液处理后，将其中2 μl（相当于1 μl血清）加入主反应液（含DNA引物、酶、DNA构件分子dNTP等）管中，在自动热循环上进行温度循环，自动热循环仪记录每一反应管在每一次温度循环的荧光强度，记30次温度循环后结束。在PCR循环过程中，每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数称为Ct值（Cyclethreshold),它与反应管中DNA起始拷贝数的对数值（lgN)呈非常显著的直线相关关系。自动热循环仪对标准样品自动生成一条Ct值对于起始拷贝数值（lgN)的工作曲线，并通过该工作曲线来确定待测未知样品反应管的起始拷贝数（N）。当30次循环后某一待测管仍检测不到高于基线水平的荧光信号时，仪器默认Ct值为30，不计算起始拷贝。确定FQPCR检测限的统计学原理
如果被检物的含量和检测方法的空白响应量的波动服从正态分布规律，则检测限可用多次检测空白的方法来确定。可信限为95%时检测限＝x空白+2.s空白；可信限为99.7%时检测限=x空白+3.s空白。这是目前多数检测限的确定方法。对核酸检测方法的检测限的理解可能与此有差别，但是原理应是一致的［1］，FQPCR检测限也应是推论总体与空白有统计学差异的最小抽样结果。
FQPCR检测限的统计推断
假设病原体在血液等体液中的分布是随机的，则单位体积中(如1.0 μl)病原颗粒数的分布服从Poisson分布。以Poisson分布的概率函数公式计算一次抽样检测出现的结果推论总体概率。从理论上来说，使用PCR测定技术测定病原体核酸序列的量可低至1个拷贝［2］。例如：血清标本中加入等量的DNA提取液，于离心管中煮沸，4 ℃放置，离心，吸取上清液2 μl作模板 进行扩增检测(2 μl上清液相当于抽样1 μl血清)［2］，其中至少有1个拷贝的HBV DNA才能有典型扩增反应，这时检测结果是1拷贝/μl。由Poisson分布的概率函数公式可计算出1次抽样检测结果出现0时，推断总体为1～9的概率见表1。
表1 总体为1～9时抽样为0的概率及总体（略）
在FQPCR检测HBV DNA中，当30次循环后某一待测管仍检测不到高于基线水平的荧光信号(即当Ct≥30)，反应管检测结果为0时，推论总体拷贝数为1～9的概率之和>0.581 92，总体为其他的概率之和<0.5(此时报告0拷贝的可信限度低于50%)。总体为1时一次抽样结果分别为1～9时的概率见表1。当一次抽样结果≥4时，推论总体为1的概率≤0.015 33，所以对于病原体的检测，一次抽样反应管检测结果≥4拷贝时，才可推论总体与0(空白)差异有显著性(P<0.05)。因而上述检测血清中病原体时一次抽样反应管的检测限是4拷贝/μl。当总体为1、2、3时一次抽样结果为0的概率分别是0.367 88、0.135 34、0.049 79。如室间质量评价样本靶值选择1拷贝/μl、2拷贝/μl、3拷贝/μl时，无论实验室实际检测质量如何高，都将有36.79%、13.53%、4.98%的实验室检测结果为0而被判为不符合［按靶值的对数值GM±0.5 log(10)［9］作为可接受的定量范围］。2005年卫生部室间质量评价中靶值为1.51拷贝数/μl的样本符合率仅35.2%；Mancini C 等［9］报道一些实验室对检测下限附近的样本(3.00 log IU/ml)准确定量有困难；Raggi CC等［10］也报道28.6%的实验室(12/42)对最低浓度的样本不能定量。这些都是因为检测下限附近的样本一次抽样结果为0的概率太大所致，对此我们将另文详细讨论。造成上述文献中检测限差异较大的可能原因如下：用于10倍系列稀释的已知高拷贝HBV DNA血清本身拷贝数的差异；对检测限的理解差异，由一次抽样没能检测到典型扩增的稀释血清管推论总体浓度为0的可信度太低(<50%)；抽样单位的任意放大：在上述HBV DNA检测中，抽样单位是1 μl血清［如血清前处理过程中有抽提(浓缩)过程，取2 μl上清液相当于实际含12.5 μl血清，则抽样单位也只是12.5 μl］，而报告结果的单位是ml甚至L。当总体为1拷贝/μl时表示一次抽样结果为0的概率达0.368，结果在0拷贝/μl～4拷贝/μl的概率为0.996；而总体为1 000拷贝/ml时表示一次抽样结果为0的概率为0，结果在905拷贝/ml～1 095拷贝/ml的概率为0.997(Poisson分布总体>50时近似正态分布，范围是X±uα*√X，可信限为99.7%时uα=3);总体为100 000拷贝/L时表示一次抽样结果在997 000拷贝/L～1 003 000拷贝/L的概率为0.997。文中推理以HBVDNA的FQPCR检测为例，其他病源体核酸的FQPCR检测也与其相同，检测限是抽样反应管的检测限4拷贝/反应管；如反应管中加入模板量相当于12.5 μl血清则检测限相当于0.32拷贝/ μl。此推断仅是针对FQPCR技术本身的检测限度，未就临床上有意义的最小病源体核酸的拷贝数进行讨论。【参考文献】
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