实验7—荧光光度法测定药片中VB2的含量

第一篇：实验7—荧光光度法测定药片中VB2的含量

陕西理工学院·化学与环境科学学院·仪器分析实验教学组

仪器分析实验讲义07 实验地点 实验项目 化学楼205

实验学时

授课教师

荧光光度法测定药片中VB2的含量

预习提要

（自主查找资料，实验时随机提问，预习成绩计分点）

1.什么是荧光？

2.荧光与分子结构的关系； 3.荧光与溶剂环境的关系；

4.了解荧光光度计的基本构造和操作步骤； 5.激发波长、发射波长； 6.荧光比色皿使用方法；

7.荧光分光光度法定量分析原理；

8.荧光分光光度法测定药品中VB2的分析原理。9.荧光分光光度法的特点(与紫外相比较)； 10.标准曲线法。

实验报告部分

一、实验目的与要求

1.掌握荧光分光光度计的基本构造和基本操作技术； 2.学习荧光分光光度法测定药品中VB2的分析原理； 3.掌握测定药品中VB2的方法。

二、实验原理

1.荧光：当物质的分子接受光子能量被激发后，从激发单重态的最低振动能级返回基态时发射光子的过程，称之为荧光。

2.荧光分析法：荧光分析中包括激发光谱和发射光谱，是荧光物质的两个重要的性能指标。激发光谱是荧光物质在不同波长的激发光作用下测得的某一波长处的荧光强度的变化情况；荧光光谱则是某一固定波长的激发光作用下荧光强度在不同波长处的分布情况。利用物质被光照射后产生的荧光辐射对该物质进行定性分析和定量分析的方法，称为荧光分析法。3.荧光分光光度法定量分析原理：

对很稀的溶液，荧光强度F与该物质的浓度c有以下的关系：

F=K c，K为常数。因此，在低浓度的情况下，荧光物质的荧光强度与浓度呈线性关系。4.VB2的荧光光度法定量分析：

VB2(即核黄素)在430～450 nm光的照射下发出荧光，其峰值波长为530 nm左右。VB2的荧光在pH = 6～7时最强，在pH=11时消失，而且其荧光强度与其溶液浓度呈线性关系，因此可以用荧光光谱法测VB2的含量。

VB2在碱性溶液中经光线照射会发生分解而转化为光黄素，光黄素的荧光比核黄素的荧光强的多，故测VB2的荧光时溶液要控制在酸性范围内，且在避光条件下进行。5.荧光分光光度计基本操作

陕西理工学院·化学与环境科学学院·仪器分析实验教学组

(1)接通电源，先打开氙灯，再打开主机，然后打开计算机启动工作站并初始化仪器；(2)仪器初始化完毕后，在工作界面上选择测量项目，设置适当的仪器参数：激发波长= 440 nm(根据滤光片不同而不同)，发射波长=540 nm。(3)样品测定。

(4)退出主程序，关闭计算机，先关主机，最后关氙灯。

三、仪器与试剂

1.仪器：F4600型荧光光度计(1台)、石英荧光比色皿(2只)、5 mL吸量管1支、2 mL吸量管1支、50 mL棕色容量瓶7只、电子分析天平

2.试剂：10.0μg·mL-1VB2标准溶液（置阴暗处保存）、冰乙酸（AR）、药用VB2药片

四、实验步骤

1.标准系列溶液的配制及标准溶液荧光强度的测定：

(1)在6个干净的50 mL棕色容量瓶中，分别吸取0.50、1.00、1.50，2.00、2.50和3.00 mL VB2标准溶液，各加入2.00 mL冰乙酸，去离子水稀释至刻度，摇匀。(2)从稀到浓测量系列标准溶液的荧光强度。2.未知试样的配制与测定:(1)将VB2药片研磨成粉末状，精确称取2mg，用少量水溶解后转入50 mL棕色容量瓶中，加2.00 mL冰乙酸，稀释至刻度，摇匀。

(2)用测定标准系列时相同的条件，测量其荧光强度。

五、数据记录

1.标准溶液系列的浓度及荧光强度(三线表)2.未知样品的荧光强度(三线表)

六、实验注意事项

1.配制标准溶液时，为了减少仪器偏差，取不同体积的同种溶液应用同一移液管。

2.因荧光是从石英比色皿下部通过，所以拿取石英比色皿时，应用手指捏住池体的上部(捏比色皿对角棱角)，不能接触下部。清洗样品池后，应先用吸水纸吸干四个面的液滴，再用擦镜纸往同一方向进行轻轻擦拭。

3.在使用荧光分光光度计时，须按照既定程序进行。在测定系列标准溶液的浓度和荧光强度时，必须按顺序放入测定。

4.在测试样品时，应注意样品的浓度不能太高，否则由于存在荧光猝灭效应，样品浓度与荧光强度不呈线性关系，造成定量工作出现误差。

5.此次实验影响标准曲线的线性的主要因素是配制溶液时的操作是否规范、标准。

七、实验报告（结果与结论）

1.画出荧光分光光度计构造图

2.用标准系列溶液的荧光强度绘制标准工作曲线；

3.根据待测液的荧光强度，从标准工作曲线上求得其浓度，计算药片中VB2含量。(数据统计处理)

八、思考题

1.解释荧光光度法较吸收光度法灵敏度高的原因。

2.维生素B2在pH＝6～7时荧光最强，本实验为何在酸性溶液中测定？

九、实验学习与操作总结

1.见紫外部分的要求。(所有实验均按该要求进行)

陕西理工学院·化学与环境科学学院·仪器分析实验教学组

第二篇：《仪器分析》实验一 火焰原子吸收光谱法测定水中钙含量

实验一 火焰原子吸收光谱法测定水中钙含量

一、实验原理

在使用锐线光源条件下，基态原子蒸汽对共振线的吸收，符合朗伯-比尔定律，即：A=lg（I0/I）=KLN0

在试样原子化时，火焰温度低于3000 K时，对大多数元素来讲，原子蒸汽中基态原子的数目实际上十分接近原子总数。在一定实验条件下，待测元素的原子总数目与该元素在试样中的浓度呈正比。则：A=c

用A-c标准曲线法或标准加入法，可以求算出元素的含量。

二、仪器与试剂

1.仪器

（1）TAS原子吸收分光光度计；钙空心阴极灯。（2）10mL移液管一支（3）100 mL容量瓶六个

（4）2mL移液管一支 2.试剂

（1）1.0g.L-1钙标准储备液

（2）50 mg.L-1钙标准使用液(老师完成)配制用水均为二次蒸馏水。

三、实验步骤

1.配制钙系列标准溶液：2.0，4.0，6.0，8.0，10.0 mg.L-1。(老师完成)2.工作条件的设置(老师完成，具体实验过程中可能有变动，注意在实验过程中记录。)（1）吸收线波长

Ca 422.7 nm（2）空心阴极灯电流 4 mA（3）狭缝宽度 0.1 mm（4）原子化器高度 6 mm（5）空气流量 4 L.min-1，乙炔气流量1.2 L.min-1 3.钙的测定

（1）样品：移10.00 mL自来水于50 mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。（学生在C209食品分析实验室完成，韶关地处石灰岩地区，水的硬度比较高。如果稀释5倍钙离子浓度仍然在检测线性范围之外，则需要继续稀释。）

（2）加标样品：移10.00 mL自来水样和2.50 mL50 mg.L-1钙标准使用液于50 mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。（学生在C209食品分析实验室完成。请大家查阅资料，学习加标回收率的概念。）

（3）在最佳工作条件下，以蒸馏水为空白，测定钙系列标准溶液和自来水样、加标的自来水样吸光度A。(老师和学生在B102共同完成)4.实验结束后，用蒸馏水喷洗原子化系统2 min，按关机程序关机。（原子

吸收分光光度计的开机、关机程序，请看视频。）最后关闭乙炔钢瓶阀门，旋松乙炔稳压阀，关闭空压机和通风机电源。

5.绘制钙A-c标准曲线，由未知样的吸光度Ax，求算出自来水中钙（mg.L-1）和钙的加标回收率。或将数据输入计算机，按一元线性回归计算程序，计算钙的含量和钙的加标回收率。

四、TAS-986操作规程(火焰法)

1、开机

打开电源（稳压器），依次打开计算机电源，自动启动完Windows后，再打开仪器电源开关。

2、初始化 启动AAWIN系统，选择联机。系统很快就会进入初始化，初始化成功“OK”（确定）。每次开机都必须经过初始化才能控制仪器。

3、寻峰

3.1 初始化后出现元素灯选择窗口，如需更改元素灯可以根据需要进行选择。3.2 选择元素灯后，系统将会弹出被调整元素灯参数对话框，根据需要进行相关的参数设置。设置好参数后，下一步进行相应的元素灯寻峰。3.3 单击“寻峰”按钮对当前工作波长进行寻峰。当需要对当前元素的其他特征波长进行寻峰，可在“特征谱线”下拉框中选择相应的波长。

3.4 当需要查看仪器当前能量状态或需要对能量进行调整时，可依次选择主菜单的【应用】/【能量调试】，4、参数设置

寻峰结束后，程序进入系统测试状态，选择系统菜单的“仪器”下的“燃烧器参数设 置”，对燃气流量、燃烧器高度和位置进行设置。一般为1200-1800ml/min（燃气流量）。调整位置使光斑正好切入燃烧器中缝上方6-8mm。4.1在进入测量之前，对待测样品进行设置。单击工具按钮

即可打开样品设置向导。

4.2 对测量参数进行设置。单击工具按钮

即可打开测量参数设置对话框。选择计算方式为连续、积分时间为1-3秒、滤波系数0.6秒。

5、测量

使用火焰法时，在进入测量前,请依次打开空压机电源、乙炔钢瓶阀门，使乙炔分表压力在0.05-0.06Mpa.，并认真检查气路以及水封。当您确认无误后，可单击工具按钮即可将火焰点燃。再单击测量键进行测量。

6、关机

在关机前必须经过火焰状态下，先关闭乙炔钢瓶阀门，待火焰熄灭后再关闭空压机。退出AAS系统、再关闭主机、最后关闭电源。

思考题：

1、原子吸收光谱仪主要有哪几部分组成？各有什么作用？

2、空心阴极灯的原理是什么？结合共振吸收的概念，谈谈为什么检测特定的元素，要用专门的空心阴极灯？

3、使用空心阴极灯要注意什么？需要设置什么参数？是不是光源强度越强越好，为什么？

4、火焰原子吸收光谱仪的原子化火焰，根据氧化还原特性，分为多少种？测定钙离子应该选用什么样的火焰？

5、火焰原子吸收光谱仪的光谱干扰有哪些？如何消除？

6、火焰原子吸收光谱仪的背景吸收是怎样产生的？如何扣除？

数据记录（用打印预览，看三线表的格式）： 项 目 浓度（mg.L-1）吸光度A

标准品编号 St1 0

St2 2.0

St3 4.0

St4 6.0

St5 8.0

St6 10.0

样品 Sam1

加标样品 Sam2