暨大朱嘉明遗传学实验-小白鼠骨髓嗜多染红细胞的微核测定大全

第一篇：暨大朱嘉明遗传学实验-小白鼠骨髓嗜多染红细胞的微核测定大全

暨南大学本科实验报告专用纸

课程名称 遗传学实验成绩评定

实验项目名称小白鼠骨髓嗜多染红细胞的微核测定指导教师朱嘉明 实验项目编号实验项目类型实验地点生物楼

学生姓名李金超学号

2011051838

学院生命科学技术学院系生物工程学系专业生物技术 实验时间2013年月日午～2013月日午温度℃湿度

1.实验目的

初步掌握小鼠骨髓嗜多染红细胞的制片技术,学习微核(micronucleus，MCN)的识别和计数方法。

2.实验原理

2.1 微核的定义：在间期细胞的细胞质中出现的与核相似的圆形结构，其染色特性与核相似，大小应在主核的1/3以下。

2.2 微核的来源：在细胞分裂间期受理化或生物因子作用而受损的染色体，会产生丧失着丝点的染色体断片，在进入有丝分裂后期时，这些染色体断片不能向两极移动而滞留在赤道板附近，到分裂末期形成子细胞核时，这些片段不能进入子细胞核，形成独立的游离于细胞质中的微核。

2.3 微核测定：以微核数量的多少来检测活体内染色体或有丝分裂器损伤的一种遗传毒性试验方法。已经证实，细胞内微核率和诱变因子的剂量呈正相关，因此微核试验法可用于对环境致突变、致癌、致畸变物质的初级筛选监测。2.4 微核试验的优点：经济、简单、快速。该方法在敏感性、特异性和准确性方面，与经典的繁杂的中期染色体畸变分析方法基本相当。

2.5 本实验用注射用环磷酰胺对小鼠进行腹腔注射，测定骨髓细胞微核率来测定环磷酰胺的诱变活力。

3.实验用品

3.1 仪器： 10ml刻度离心管、吸管、解剖剪、解剖刀、止血钳、1ml注射器、l／2号针头、载玻片、盖玻片、染缸、滤纸、计数器、显微镜、离心机、5ml注射器、7号针头、lOml离心管等。

3.2 药物：小牛血清(经56℃水溶保温30分钟灭活)，Giemsa染色液，磷酸缓冲液(Serensen配方，pH6.8—6.9),生理盐水，注射用水，分析纯甲醇，二甲苯，中性树胶，注射用环磷酰胺(cyclophosphamide,CP)。3.3 实验动物：体重l8—25克的小白鼠(雌雄均可)。

4.实验步骤

4.1 动物染毒：取注射用环磷酰胺结晶（20mg）加入l0ml注射用水，溶解后对小鼠进行腹腔注射，注射剂量为l20－150mg／kg（3.6－4.5mg/30g，目前我们用最高剂量）。24小时后按上述剂量再次注射，末次给药后6小时取材料(即小鼠经染毒后30小时)4.2 骨髓液的制备：取上述小鼠以颈椎脱臼法处死，剖取两根股骨，把肌肉剔除干净，用纱布擦掉附在股骨上的血污和肉后，剪去两端股骨头。将股骨置于盛有2ml生理盐水的小烧杯内，用止血钳反复夹碎，充分洗脱出骨髓，静置片刻，去掉骨渣。也可将针斗插入骨髓腔中，用2ml生理盐水冲洗骨髓腔几次，将骨髓从骨髓腔中冲洗出来。用吸管将骨髓细胞悬液移入刻度离心管中

4.3 离心：l000rpm离心l0min，然后用毛细吸管吸去上清液，沉淀物滴加小牛血清2滴，充分混匀。

4.4 涂片、干燥：吸取上述混悬液一小滴于载玻片的一端，按血液学常规涂片法涂片，在空气中晾干。

4.5 固定：用甲醇固定5一l0分钟(即使当日不染色，也应固定后保存)。4.6 染色：Ciemsa染色液染色10分钟左右，然后用pH6.8－6.9的磷酸缓冲液迅速冲洗。

4.7 镜检：用滤纸吸干片背面的水分，再小心吸去涂面上的水滴（滤纸不要接触涂面），便可直接镜检。先以低倍镜、高倍镜粗检，选择细胞分解均匀，细胞无损，染色好的区域，再换到油镜观察。

5.实验结果