一分子生物学室常用仪器设备简介目的熟悉分子

第一篇：一分子生物学室常用仪器设备简介目的熟悉分子

实验一 分子生物学实验室常用仪器设备简介

一、实验目的

熟悉分子生物学实验室常用仪器并熟练使用

二、实验原理

1、恒温气浴摇床：用于对温度和振荡频率有较高要求的细菌培养，发酵，杂交，生化反应及酶和组织研究等。

2、超净工作台：用于分子生物学无菌操作。

3、低温台式高速离心机：用于分离纯化DNA和蛋白质等，如基因片段的分离，蛋白酶的沉淀和回收等。

4、微量移液管：是连续可调的，计量和转移液体的专用仪器，其装有直接读数容量计。有多种规格：①0.5-10μL②10-100μL③20-200μL④100-1000μL。

5、电泳仪：用于确定大分子物质的分子量以及鉴定物种亲缘关系的仪器。

6、PCR仪：用于目的基因的扩增，是一对寡糖核苷酸引物结合到正负DNA链上的靶序列两侧，从而酶促合成拷贝数为百万倍的靶序列DNA片段。主要用于基础研究和应用研究等领域。

7、灭菌锅：用于细菌和细胞培养及核酸等有关实验使用的试剂，器皿及实验用具的严格灭菌。

三、实验仪器

恒温气浴摇床、超净工作台、低温台式高速离心机、微量移液管、灭菌锅、PCR仪、电泳仪。

四、实验步骤

（一）、恒温气浴要穿的使用：

1、样品瓶牢固放入弹簧夹中

2、接通电源开关，仪器进入准备状态

3、参数设定，（设定温度、时间、转速等参数）

4、按启动键仪器开始工作，按暂停键可暂停托盘的旋转；

5、按电源键，显示屏显示消失，关闭电源总开关

（二）、超净工作台的使用

1、使用工作台时，先经过清洁液浸泡的纱布擦拭台面，然后用消毒剂擦拭消毒。

2、接通电源，提前30分钟打开紫外灯照射消毒，处理净化工作区内工作台表面积累的微生物，15分钟后，关闭紫外灯，开启送风机。

3、工作台面上，不要存放不必要的物品，以保持工作区内的洁净气流不受干扰。

4、操作结束后，清理工作台面，收集各废弃物，关闭风机及照明开关，用清洁剂及消毒剂擦拭消毒。

5、最后开启工作台紫外灯，照射消毒30分钟后，关闭紫外灯，切断电源。

（三）、低温台式高速离心机的使用

1、把离心机放置于平面桌或平面台上，目测使之平衡，用手轻摇一下离心机，检查离心机是否放置平衡。

2、打开门盖，将离心管放入转子内，离心管必须成偶数对称放入，且要事先平衡，完毕用手轻轻旋转一下转子体，使离心管架运转灵活。

3、关上门盖，注意一定要使门盖锁紧，完毕用手检查门盖是否关紧。

4、插上电源插座，按下电源开关（电源开关在离心机背面，电源座上方）。

5、设置转子号、转速、时间：

在停止状态下时，用户可以设置转子号、转速、时间，此时离心机处于设置状态，停止灯亮、运行灯闪烁；按下启动离心开始

（常用，最高转速为13000r/min，时间最长为20分钟）；

注意：对应的转子一定要设置在相应的转速范围内，不可超速使用，否则对试管或转子有损坏。

6、离心机时间倒计时到“0”时，离心机将自动停止，当转子停转后，打开门盖取出离心管，关断电源开关。

（四）、微量移液管的使用

1． 将微量移液器装上吸头（不同规格的移液器用不同的吸头）2． 将微量移液器按钮轻轻压至第一停点；

3． 垂直握持微量移液器，使吸嘴浸入液样面下几毫米，千万不要将吸嘴直接插到液体底部；

4． 缓慢、平稳地松开控制按钮，吸上样液。否则液体进入吸嘴太快，导致液体倒吸入移液器内部，或吸入体积减少； 5． 等一秒钟后将吸嘴提离液面

6．平稳地把按钮压到第一停点，再把按钮压至第二停点以排出剩余液体； 7． 提起微量移液器，然后按吸嘴弹射器除去吸嘴。

（五）、PCR的使用

1、开机：打开开关，视窗上显示“SELF TEST”。

2、放入样品管，关紧盖子。

3、如果要运行已经编好的程序，则直接按《Proceed》，用箭头键选择已储存的程序，按《Proceed》，则开始执行程序。

4、如果要输入新的程序，则在RUN-ENTER菜单上用箭头键选择ENTER PROGRAM,按《Proceed》，1）命名新的程序，最多8个字母，输入后按《Proceed》确认(如何输入字母、数字)。2）输入程序步骤：名字输入后，确认，然后输入相关程序

5、输入完成的程序后，到RUN-ENTER菜单，选择新程序，开始运行。

6、其它：用《pause》可以暂停一个运行的程序，再按一次继续程序。用《stop》或《Cancel》可停止运行的程序。

（六）、电泳仪的使用

1． 首先用导线将电泳槽的两个电极与电泳仪的直流输出端联接，注意极性不要接反。2．按电源开关，显示屏出现“欢迎使用DYY-12型电脑三恒多用电泳仪…”等字样后，同时系统初始化，蜂鸣4声，设置常设置。屏幕转成参数设置状态，根据工作需要选择稳压稳流方式及电压电流范围。3．确认各参数无误后，按“启动”键，启动电泳仪输出程序。在显示屏状态栏中显示Start!并蜂鸣4声，提醒操作者电泳仪将输出高电压，注意安全。之后逐渐将输出电压加至设置值。同时在状态栏中显示“Run”，并有两个不断闪烁的高压符号，表示端口已有电压输出。在状态栏最下方，显示实际的工作时间（精确到秒）

4．电泳结束，仪器显示：“END”，并连续蜂鸣提醒。此时按任一键可止鸣

（七）、高压灭菌锅

1、开盖：转动手轮，使锅盖离开密封圈，添加蒸馏水刚没至板上

2、通电：将控制面板上电源开关按至ON处，若水位低（LOW）红灯亮

3、堆放物品：需包扎的灭菌物品，体积不超过200mm×100mm×100mm为宜，各包装之间留有间隙，堆放在金属框内，这样有利 于蒸汽的穿透，提高灭菌效果，灭菌时间： 121℃，20min，；如为液体，液体必须装在可耐高温的玻璃器皿中，且不可装满，2/3即可，121℃，18-20min

4、密封高压锅：推横梁入立柱内，旋转手轮，使锅盖下压，充分压紧

5、设定时间和温度，开始灭菌

6、灭菌结束，所有东西放入干燥箱干燥，排尽水气

五、思考题

1、列出分子生物学常用仪器的名称，用途及操作时的注意事项。

答：①恒温气浴摇床：常用于液体摇匀以培养微生物、细菌和细胞等。注意要依据不同的用途设置不同的参数。②超净工作台：常用于为微生物学实验提供无菌操作环境。注意操作时关掉紫外灯，避免给人类带来伤害。③低温台式高速离心机：常用于分离纯化蛋白、病毒、细胞等。使用时不能随便移动离心机或打开盖子；离心机运行时要处于锁定状态；离心管的放置要处于平衡状态。④微量移液管：用于计量和转移微量液体的专用仪器。操作时注意避免枪头的污染；调节刻度时不宜超过最大量程；使用完后将刻度调到最大收藏。⑤电泳仪：可对不同物质进行定性或定量分析，或将一定混合物进行组分分析或单个组分的提取制备。操作时不可把导线极性接反；当电泳仪进入工作状态后，避免人体与其各部分的接触，不同介质支持物的电泳不要同时在同一电泳仪上进行；若使用时出现异常，要立刻切断电源。⑥PCR仪：用于扩增DNA片断。操作时应注意盖子要盖紧，按正确步骤进行。⑦高压高温灭菌锅：用于杀菌消毒。使用时应严格按照规程操作，避免发生安全事故。

实验二 琼脂糖凝胶电泳的制备及核酸检测

一.实验目的

1、掌握琼脂糖凝胶电泳的原理;

2、学习琼脂糖凝胶电泳的操作。二.实验原理

琼脂糖是一种天然聚合长链状分子，沸水中溶解，45℃开始形成多孔性刚性滤孔，凝胶孔径的大小决定于琼脂糖的浓度。

DNA分子在碱性环境中带负电荷，在外加电场作用下向正极泳动。DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时，有电荷效应与分子筛效应。不同DNA，其分子量大小及构型不同，电泳时的泳动率就不同，从而分出不同的区带。琼脂糖凝胶电泳法分离DNA，主要是利用分子筛效应，迁移速度与分子量的对数值成反比关系。溴化乙锭（EB）未扁平状分子，在紫外照射下发射荧光。EB可与DNA分子形成EB-DNA复合物，其发射的荧光强度较游离状态EB发射的荧光强度大10倍以上，且荧光强度与DNA含量成正比。

三、仪器和试剂

仪器： 微量移液器，电泳仪，电泳槽，微波炉

试剂： 琼脂糖：1.0%；电泳缓冲液（50 × TAE 电泳缓冲液取Tris24.2g，冰醋酸5.7ml，0.25mol/L EDTA(pH8.0)20ml，加蒸馏水至100ml）EB：5 µl / 100 ml TBE 电泳材料：标准分子量核酸（DL2000）四.操作步骤

（1）制胶（以20 mL为例）

a.称取0.2 g 琼脂糖，加入20 ml 的1XTAE缓冲液（pH 8.0），摇匀； b.微波炉加热，至琼脂糖完全溶解（要防止过热溢出三角瓶）；

c.将制胶板放入制胶槽中，插入适当的梳子，将溶解的琼脂糖（约50℃）加入2ul EB后，混均匀，倒入其中，直至厚度为4～6 mm（如有气泡要把气泡赶出），在室温下冷却凝固(约30~ 45 min)；

d.小心垂直向上拔出梳子,以保证点样孔完好,将胶板置于电泳槽中。（2）点样

用微量移液器将5 µl含蓝色染液的 DL2000 加入点样孔下部。（3）电泳

打开电源开关，调节电压至3~5 V/cm(约100 V)，可见到溴酚蓝条带由负极向正极移动，约30-40分钟后即可观察结果。（4）观察

将电泳好的胶置于紫外透射检测仪上，打开紫外灯，可见到橙红色核酸条带，根据条带粗细，可粗略估计该样品DNA的浓度。如同时有已知分子量的标准DNA进行电泳，则可通过线性DNA条带的相对位置初步估计样品的分子量。

五、实验结果

点样时效果较好的照片点出的白色荧光线比较亮，条带粗细均匀；条带没有出现两端粗中间细的情况。我们可能是因为第一次做琼脂糖凝胶电泳的实验，点样也是首次，没有什么经验，所以效果可能不是很好。应该多加练习点样的技术。

六、思考题

2、做琼脂糖凝胶电泳应注意哪些问题。

答：①EB为强致癌剂，使用时一定要戴手套，避免造成伤害。EB废液要进行正确的处理。②制胶过程中要注意细节，微波炉加热琼脂糖使其溶化时，要保证容器的空间够大，防止液体外溢。③拔梳子时要垂直向上拔出，以防破坏点样孔。④点样时要小心，既要将样品点到样孔里，又不至于将点样孔戳破。

第二篇：实验一分子生物学实验室的安全规范,常规仪器设备及有关操作,常.

实验一分子生物学实验室的常规仪器设备及有关操作 【实验目的】

(1了解实验室规则与安全;(2了解分子生物学实验室的常规仪器、设备、耗材;枪头,离心管的灭菌(3掌握本实验所用仪器的功能和使用方法,尤其是移液枪的使用。(4学会常用溶液的配置。【实验原理】

生物技术实验不可避免地需要与各种有毒化学药品、废气废液以及病原微生物等打交道,所以安全工作是实验工作中的重中之重。忽视生物安全可导致实验室工作人员的感染,有毒物质的泄漏可造成严重后果,因此实验室生物安全问题已越来越受关注,并且已成为全世界共同关注的问题。

溶液的配置和用具的灭菌是实验的第一步,也是很实验成功与否很关键的一步。

【实验器具、药品试剂】

一、实验器具

1L 蓝盖瓶4个,500mL 蓝盖瓶1个,精细天平,1L量筒2个,500mL量筒2个, 1L烧杯2个,移液枪2套,高压灭菌锅, 白色枪头1袋,黄色枪头1袋,蓝色枪头1袋,枪头盒3种各5个,离心管3种规格各1袋,铝饭盒,PH试纸

二、药品试剂

Tris,HCl,NaCl,EDTA,NaOH,ddH2O,无水乙醇 【实验内容】

一、实验室常见事故分析及若干安全管理对策

二、常规仪器设备的使用

(一温度控制系统:冰箱,液氮罐,培养箱,水浴锅,烘箱(二水的净化装置:蒸馏水皿,离子交换器,超纯水

(三菌消毒设备:蒸汽消毒锅,紫外线、75%乙醇、0.1%SDS(消毒剂,滤器滤膜, 煮沸消毒

(四计量系统:称量系统,液体体积的度量,pH值测量,OD值测量,(五离心机:普通离心机,高速离心机,超速离心机,台式超速离心机(六电泳系统:(七PCR仪:电泳装置,电泳槽装置,(八凝胶成像分析系统:(九干燥设备:真空加热干燥箱,电泳凝胶干燥箱,液氮冷冻干燥,真空泵(十其他:微波炉,制冰机,磁力搅拌器,Tip头、Eppendorf管,常规的玻璃或塑 料器皿

(十一移液器的使用

三、常用储液的配置 1.1 L 灭菌双蒸水 2.1 L 1 M Tris HCl pH 8.0

取121.1 g Tris加入到700 ml H2O中,用HCl调PH值到8.0(大约需要50 ml HCl, 定容到1 L。

高温高压灭菌后,室温保存。

注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。

3.500 mL 0.5 M EDTA(pH 8.0 取98.06g EDTA,加入到350 ml H2O中,用NaOH调节pH值至8.0(约10 g NaOH。

注意:pH值至8.0时,EDTA才能完全溶解。定容至1 L。

适量分成小份后,高温高压灭菌。室温保存。4.1×TE Buffer 10 ml 1 M Tris HCl pH 8.0 2 ml 0.5 M EDTA 定容至1 L。5.1 L 5 M NaCl 取292.2 g NaCl到700 ml H2O溶解(不要一次加入所有的NaCl,这样很难溶解 定容至1 L。

高温高压灭菌后,4℃保存。

6.70% EtOH(乙醇

7.5 ×TBE 配方1L(Tip: 5 ×TBE较10 ×TBE更稳定 54g Tris +27.5g硼酸+20mlEDTA(0.5M,PH8.0 ddH2O定容至1L 8.10%APS:1g 过硫酸铵溶于10ml 的ddH2O。临用前配制,盛于棕色瓶,存放在4℃冰箱,长时间不用的应弃掉,重新配制。

四、储液,枪头,离心管的灭菌 1.储液的灭菌

试剂1,2,3,4,5在高压灭菌锅中灭菌15-20min。冷却至室温后放入4度冰箱中保存待用。(注意:灭菌时瓶盖不要拧太紧

2.枪头的灭菌: 枪头装入枪头盒中湿热灭菌。121度,15-20分。

为了避免水蒸气困扰,可以在枪头盒外包上报纸,或者灭菌后置于温箱中干燥。3.离心管: 离心管用报纸包好或放于铝饭盒中,121度灭菌15-20分钟,灭菌后置于温箱中干燥。【思考题】

1、如何处理对环境有污染的试剂?

2、如何正确使用微量移液器?使用中应特别注意哪些事项?

3、如何改变微量移液器的移液量?应自大调到小,还是自小调到大?为什么?

4、哪些试剂需要高温高压灭菌?哪些试剂不能采用高温高压灭菌?对于不能采用高温高压方式灭菌的试剂如何灭菌?灭菌后试剂如何保存?是否需要分装?

第三篇：医学检验科 分子诊断室简介

医学检验科 分子诊断室简介

分子诊断是应用分子生物学方法检测患者体内遗传物质的结构或表达水平变化而做出诊断的技术，是当代医学发展的重要前沿领域之一。

分子诊断是应用分子生物学方法检测患者体内遗传物质的结构或表达水平变化而做出诊断的技术，是当代医学发展的重要前沿领域之一。尤其近年来，随着人类基因组计划的巨大成功，相关医学研究迅速进展，已经研究明确的和遗传、疾病、药物代谢等性状相关的分子(基因)标志越来越多。相对于传统检验技术，分子诊断具有特异性和灵敏度高、检测速度快、窗口期短、直接揭示疾病发生原因和指导个体化治疗等优势。另一方面，随着专业知识和技术的普及，分子诊断已经成为医学检验领域一个新兴和快速发展的分支。

本中心分子诊断室即是将分子诊断的最新研究成果和检测技术应用于血液病、各种肿瘤和遗传病的临床诊断和疗效监测。本室的前身北京市道培医院分子诊断室在血液病肿瘤和遗传病诊断方面享有盛誉，建立六年的历史中，已积累了超过4万份分子诊断报告的经验，尤其擅长疑难情况分析。

目前本室已针对血液病、肿瘤和遗传病开发出了40余种临床检测项目。并且检测项目间综合设置，临床医生和患者可以更合理地选择检测项目，达到总体花费低、更快指导临床的效果。本室在项目设置和报告质量方面都居于国内领先水平，检测方法和项目准确率高，报告质量可靠，得到了各医院的广泛认可，服务范围已涵盖全国近百家医院(主要为三级医院)。其中包括针对初治病人的各种白血病融合基因筛查，筛查范围包括几十种融合基因的上百种剪接变异体，涵盖了常见型和少见型的融合基因，能够更准确地发现融合基因，为疾病诊断提供帮助。筛查发现阳性的融合基因后，可进一步做定量检测，对疾病的治疗反应情况和微小残留病进行监测。此外还包括淋巴瘤和淋巴系统白血病的免疫球蛋白(IG)和T细胞受体(TCR)克隆性分析、移植后供受者细胞嵌合状态、多种基因突变的检测。同时还开展了针对遗传性疾病(如噬血细胞综合症、范可尼贫血、铁粒幼细胞贫血等)的分子诊断项目，为很多难以诊断的患儿提供了诊断依据，使其得到及时正确的治疗。

本室坚持技术和临床应用的紧密结合，不仅关注血液病和肿瘤分子诊断指标的最新研究进展，在分子诊断技术方面也有多项创新，每一项检测方案都，在临床应用方面尤其擅长疑难病例的分析。本室首创的BCR-ABL1筛查项目，打破了以前根据已知基因型设定检测方案的思维，可以全面分析各种常见型和理论上可能的少见型BCR-ABL1融合基因，已帮助9例变异型BCR-ABL1患者得到正确诊断和治疗。通过技术方面的优化设计和严格的质控管理，本室对移植后供体细胞嵌合率的检测可稳定达到1%的，大大优于其它多数实验室只能检测到5%的灵敏度。

本室还注重临床应用性研究，致力于发展为一个临床应用和科学研究相互促进，集检测、科研为一体的研究型实验室。尤其在激酶抑制剂耐药规律研究、利用母体淋巴细胞输注治疗病毒感染性疾病、微嵌合的检测方法及其与移植免疫和自身免疫病的关系、噬血细胞综合征、范可尼贫血的遗传学诊断方面都有一定的研究成果。本室积极参与国内外学术交流，已在国内外学术期刊共发表论文30余篇，应邀在日本血液学年会和美国血液学年会发言共7次、论文交流6篇，在全国性的血液学会议上也多次应邀发言和论文交流。

经过几年的发展壮大，本室已初步建立了较为全面的血液病、肿瘤和遗传病分子诊断体系，并培养了高素质的人才队伍。实验室现有成员13人，其中硕士研

究生4人、本科7人、专科2人。实验室配备了先进的仪器设备，包括ABI3500XL基因分析仪、ABI 3500型荧光定量PCR仪、ABI Verity和AB 9700型PCR扩增仪等，并在国内临床实验室首家引进了Ion Torrent PGM个体化基因组测序仪，保证了临床检测以及科研的需要。下一步将采用高通量基因组测序、基因芯片等新技术、新方法，将分子生物学与临床应用更紧密、更深入地联系在一起，以更好地为临床服务，推动最新的分子诊断技术在血液病诊断中的应用与发展。