动物性食品中盐酸克伦特罗(瘦肉精)残留危害及其检测方法研究进.

第一篇：动物性食品中盐酸克伦特罗(瘦肉精)残留危害及其检测方法研究进.

食品与发酵工业 Food and Fermentation Industries

动物性食品中盐酸克伦特罗(瘦肉精残留危害 及其检测方法研究进展 张清安 范学辉(陕西师范大学食品工程系,西安,710062 摘 要 介绍了盐酸克伦特罗(瘦肉精的理化特性,分析了它在动物性食品中残留对人体和国民 经济所造成的危害,同时又综述了动物肌肉组织中残留盐酸克伦特罗(瘦肉精的各种分析检测方 法并作了展望。关键词 动物性食品,盐酸克伦特罗,残留,检测方法 第一作者:硕士,讲师。收稿时间:2004-06-22 1 盐酸克伦特罗的理化特性及药用机 理 1.1 盐酸克伦特罗的理化特性 盐酸克伦特罗(clenbuteerol ,CLB ,又名克 喘素、氨哮素、双氯醇胺,俗名瘦肉精,化学名为 α2[(叔丁氨基甲基]242氨基23 , 52二氯苯甲醇 盐酸盐,分子式为C12 H18 Cl12 N2O·HCl ,相对分 子质量为313165。它是一种选择性β2肾上腺 素受体激动剂,白色或类似白色的结晶体粉末, 无臭、味微苦,易溶于水、甲醇、乙醇,微溶于氯 仿,不溶于苯和乙醚,化学性质稳定,加热到 172℃才开始分解,经260℃油煎5 min才会破 坏减半[1 ,2 ]。口服后在胃肠道中迅速吸收,10～20 min起效,2～3 h血液浓度达到峰值,作用 维持5 h左右,半衰期为25～39 h ,消除5个半 衰期(消除97 % ,约需5～8 d ,在动物眼睛、毛 发、肝、肺、肾等组织中易引起蓄积[3 ]。112 盐酸克伦特罗的药用机理 盐酸克伦特罗(CLB于1964年首次在美 国合成,属于β类兴奋剂,最初在临床上主要用 于防治人、畜支气管哮喘和痉挛。研究证明作 为药物CLB对呼吸、生殖、泌尿、骨骼、神经等 系统疾病具有较好治疗作用。其机理在传出神 经系统,β受体主要分布于血管、支气管、骨骼 肌和平滑肌等部位,盐酸克伦特罗与β受体选 择性结合后,使β2受体出现兴奋效应,主要表 现为平滑肌舒张、通气改善等[ 4 ]。1984年美国(> 1μg/ kg· 明显促进动物生长、改善胴体品质、提高瘦肉 率,于是欧美等国开始将CLB广泛用于动物饲 一家公司意外发现高于治疗剂量5～10倍以上 d CLB添加于饲料饲喂动物后,可 料[5]。20世纪 80年代后期 ,我国部分大专院 校和科研机构也开始向饲料企业和养殖户推广 该物质作为饲料添加剂使用。由于 CLB能使 饲料转化率和瘦肉率提高 10 %～15 %,骨骼肌 脂肪降低 8%～15 %,所以养殖户和饲料企业 经常把 CLB叫作“瘦肉精”或“肉多素”。其提 高瘦肉率机理在于 CLB通过肾上腺素刺激腺 苷酸环化酶的合成 ,从而升高环磷酸腺苷(cAMP的浓度 ,提高激素敏感脂酶的活性 ,加 快脂肪分解 ,使血液中游离脂肪

酸(FFA进入 肌肉量增加 ,进一步为蛋白质的合成提供物质 基础;同时 ,CLB作为一种植物性神经调节剂 , 可降低血液中抑制肌肉兴奋性的 Mg2 +浓度 , 间接促进肌肉兴奋 ,改变细胞膜的通透性 ,参与 机体内的代谢调控及营养重新分配 —— ——抑制蛋 白质的分解和脂肪的合成 ,进而增加氮的组织 沉积[6]。2 动物性食品中盐酸克伦特罗的残留 危害 211 动物性食品中盐酸克伦特罗的残留 108

2004 Vol.30 No.9(Total 201 分析与检测 由于盐酸克伦特罗在动物生产中有明显的 促生长和提高瘦肉率的作用 ,受此利益驱使国 内外 CLB在养殖业中滥用问题非常严重。又 因 CLB在生产中的用量是治疗量的 5～10倍 , 而且持续添加时间(3周以上 和在体内消除半 衰期(25～39h都很长 ,所以极易在动物组织中 蓄积残留 [6]。在机体的各个组织中 ,CLB在眼 和毛发中残留的浓度最高 ,如眼中 CLB残留量 比血浆中浓度高 107倍。原因是 CLB对不同 组织有选择性 ,首先选择有色素沉着的眼组织 和毛发组织沉积 ,且在眼组织中主要结合在有 色素沉着的视网膜和脉络膜上 ,而在无色素的 眼的其他部位则蓄积较少。除了眼和毛发 ,其 他器官的残留情况是:肺、肝、肾约为血浆浓度 的20～90倍,肌肉和脂肪为3～15倍。如果在 屠宰前没有休药期,则残留量将更高[6 ,7 ]。早在1987,欧盟、美国已宣布禁止使用 今世界范围内已有数以千计甚至万计因食用残 留有瘦肉精的动物源食品而中毒的人员。人食 用残留有盐酸克伦特罗的畜产品后表现为肌肉 兴奋性增强,有的人中毒后表现为肌肉震颤,重 症者腓肠肌痉挛;同时引起心肌收缩加强,心率 加快[8 ];对高血压患者危害更大, CLB分解脂 肪成游离脂肪酸进入血液,使血管壁弹性降低, 引起血压升高,微循环血管膨胀,压迫刺激周围 的神经,引起头痛头晕;引起人内脏横纹肌和平滑肌兴奋性增强,表现为呕吐和腹泻;又因体内 K+、Ca2 +、Na +和Mg2 +等浓度的平衡破坏,导 致细胞膜生物电位去极化能力增强,复极化能 力减弱,细胞膜对离子通透性改变,心电图可呈 “T波倒置或底平”, ST段下移等,若患者发生 死亡,则死于心脏舒张期或心肌梗死。CLB中 毒的患者群中,对患心、脑血管疾病、糖尿病、甲 状腺亢进、青光眼、前列腺肥大者可造成威胁生 CLB作为兽用饲料添加剂我国政府也于,1997 年在“浓牧发 [1997 ]3号《关于严禁非法使用兽 药的通知》 ”中已明确禁止其在饲料中添加使 用。但也有许多国家并没有确定动物性产品中 CLB的最大残留限量(MRL。美国

食品药物 管理局(FDA和世界卫生组织(WHO建议盐 酸克伦特罗在动物组织中最高残留限量为 :肉 012μg/ kg、肝 016μg/ kg、肾 016μg/ kg、脂肪 012μg/ kg、乳 0105μg/ kg;部分欧盟成员国如英 国规定可食性组织中 MRL值为 015μg/ kg ,荷 兰规定牛、马肝脏组织中 MRL值 015μg/ kg[8]。212 动物性食品中盐酸克伦特罗的残留危害 虽然盐酸克伦特罗的毒性并不是很强 ,小 鼠、豚鼠静脉注射的半数致死量分别是每公斤 体重 2716 mg和 1216 mg[2]。但是由于它的半 衰期长 ,在体内代谢慢 ,极易蓄积残留于动物体 内 ,在动物肝脏中 CLB平均浓度可达 45 mg/ kg ,也就是说 ,按临床最高治疗剂量每天 018 μg/ kg计算 ,人食用 100 g被 CLB污染的动物 肝脏摄入体内的 CLB就相当于一次治疗剂量 的 10倍以上 ,因而极有可能通过食物链使人体 中毒而对健康构成威胁 [9]。自上世纪 80年代 中期欧美国家发现瘦肉精的毒副作用以来 ,至 命的恶果。孕妇中毒又可导致癌变、胎儿致畸 的严重危害性 [ 10 ,11 ]。欧盟成员国已将 CLB残 留作为肉品进口必检项目 ,因而这也成了 WTO成员国之间进行国际贸易的技术壁垒。由此可见 ,CLB的非法使用及残留不但严重地 威胁着消费者的健康 ,而且也影响着一个国家 的对外贸易和声誉。我们应借鉴美国、欧盟等 国家在动物产品生产和食品工业上实施的良好 生产规范(GMP、危害分析与关键控制点(HACCP和全过程质量控制(IKB等管理经 验 ,并结合我国动物产品生产的特点 ,引入全过 程质量控制的新理念 ,加强养殖、屠宰加工和销 售环节的质量管理 ,减小甚至消除 CLB残留造 成的危害 [12 ]。3 动物性食品中盐酸克伦特罗的检测 方法

当前 ,造成盐酸克伦特罗屡禁不止的原因 之一就是国内外检测 CLB的方法、手段还不完 善 ,还没有建立宰前监测体系和准确、迅速、方 便、精确的检测方法 ,从而使不法分子有机可 乘。目前国内外用于检测动物性食品中盐酸克 伦特罗的方法主要有以下几种。109 2004年第 30卷第 9期(总第 201期

分析与检测 国已将 HPLC法作为检测饲料中 CLB残留的 半确证法 ,将 GC2MS法定为确证性方法 ,主要 用于最后确认和仲裁 ,而对于动物性食品中 CLB残留尚未有检测标准。HPLC法中常用的 检测器有电化学检测器、紫外检测器;HPLC法 优点是检测精确度高 ,其最低检测限范围为 1～15 ng/ g ,而且假阳性率低 ,与 GC2MS法相 比样品不必衍生;缺点是检测过程烦琐、检测时 间长 ,需贵重仪器、难

于操作、价格昂贵 [18 ]。GC2MS法优点是能在多种残留物同时存在情 况下对某种特定的残留物进行定性、定量分析。与 HPLC相比 , GC2MS法灵敏度更高 ,假阳性 率更低 ,其缺点也同 HPLC法一样。CE法非 常适用于难以用传统的液相色谱法分离的离子 化样品的分离与分析。优点是有很大的灵活 性 ,许多分离参数 ,如缓冲液的组成和 pH值 , 毛细管的类型以及所使用的电场的波形都可以 调节 ,操作简便 ,所需样品量极少 ,一般只需几 纳升。缺点是检测时间仍很长 ,不能满足在线 检测 ,仪器复杂、缺乏配套的检测器 [19 ]。((TLC [4 ,12 ,15～17 ] GC2MS、毛细管区带电泳法。其中前3种方法最常用,中、薄层色谱法F TIR 2GC((CE、高效液相 傅立 的 R2biopharm公司分别开发出了检测肉品、饲 色谱 2质谱联用法

(HPLC2MS、气相色谱 2料中 CLB残留的 EL ISA试剂盒 ,但其价格费 叶红外联用法 用极高 ,每检测一份猪肉是否含 CLB的费用是 1 200～1 400元。正因如此 ,国内许多科研院 311 感官识别 [ 13 ,14 ] 凡饲喂盐酸克伦特罗比较严重的猪宰后肉 色特别鲜红、后臀肌肉饱满突出 ,脂肪非常薄 , 肉皮紧贴着瘦肉、瘦肉纤维比较疏松 ,肉皮与瘦 肉之间无肥肉(肥膘厚度不到 115 cm ,有时有 少量“汗水”渗出肉面 ,这种肉就很可能含有 CLB;而一般健康肉淡红色 ,肉质弹性好 ,也不 会有 “出汗”现象。通过这种感官识别方法就可 以快速、简单、定性对动物性食品中有无 CLB 作出初步判定。312 色谱检测技术 目前 ,检测 CLB残留常用的色谱技术有高 效液相色谱(HPLC、气相色谱 2质谱联用法 313 免疫分析技术(IA 标记免疫分析技术是 “迈向 21世纪的医学 检验技术”之一 ,其发展趋势是 :新标记物的发 110

2004 Vol.30 No.9(Total 201 展与联合应用、单克隆以及基因工程抗体的应 用和免疫放大技术 ,可明显提高检测特异性 ,灵-敏度可达 zepto(10-20、yocto(10 24 水平,即 可实现分子水平的检测 [20 ]。目前 ,用于检测 CLB残留的免疫分析技术主要有放射免疫分 析技术(RIA和酶免疫分析技术(EIA。国外 已生产出运用 RIA测定 CLB残留的试剂盒 , 还建立了类似放射免疫分析法的放射受体分析 法 ,这种方法是用受体代替抗体结合 CLB ,检 测限可达 214 ng/ g ,国内在此方面的研究尚属 空白 [21～23 ]。对于 EIA分析技术中检测 CLB 残留较高效的是酶联免疫吸附技术(EL ISA。目前 ,英国的 Randox Laboratories Ltd和德国 所都在开发研制检测 CLB残留的 E

L ISA试剂 盒。据报道 ,中国疾病预防控制中心营养与食 品安全研究所和上海市畜牧兽医站与上海赛群 生物科技有限公司联合开发研制的瘦肉精 EL ISA检测试剂盒也已分别问世 ,且后 2家单 位联合开发产品已投入商品化生产及实际应用 中。经与同类进口试剂进行对比试验 ,结果显 示国产试剂盒在灵敏度、准确性上都已达到进 口试剂盒的水平,而在稳定性、回收率方面要优 于进口试剂盒 ,且价格费用要下降很多 [24 ]。EL ISA的优点是灵敏度高、操作简便、检测迅 速;缺点是仍不能实现在线检测 ,而且假阳性率 较高。314 综合化学法 根据 CLB的化学结构与性质 ,参照国家药 典标准方法可以进行综合鉴别 [25 ]。因其溶于 水和乙醇 ,故可以用水进行提取。CLB可显示 芳香一胺类的鉴别反应 ,也可以显示氯化物的 鉴别反应 ,同时 ,用分光光度计检测 ,可在 243 nm与 296 nm的波长处得到最大吸收。综合分 析可以判定动物性食品中是否存在 CLB类物 质 ,且该法不需昂贵的仪器与试剂 ,也没有复杂 的样品前处理 ,操作简单 ,无疑是基层卫生防疫 分析与检测 CLB的高效在线检测 [15 ] 原理为当分子识别部分与被识别物质相接触 光变化以及直接 诱导电信号 ,而后利用电学测量方法进行检测、控制和显示输出。国外已有用生物传感器技术 检测 CLB残留的资料报道 [26] ,其优点是特异 性强、假阳性率低、高效、方便 ,国内未见有开发 成功的相关报道。总之 ,尽快研制出高效、方 便、迅速的 DIGFA试纸条和生物传感器是检 测 CLB残留较为理想的方法和途径 ,也是今后 发展趋势。及准确度均很理想。如果研制出检测。对于生物传感器,其 时,可发生化学变化、热变化、CLB的13 闫红军,马巧娥.提高卫生知识水平严防 中毒[J ].动物医学进展,2003 ,24(5 :127 “瘦肉精” 滴金免疫试纸条或滴金免疫测试盒则可实现 14 李 杰.瘦肉精残留危害与动物性食品安全 [J ].中国饲料 ,2003 ,4 :31～32 工作者初选 CLB残留的有效方法 ,但最低检测 限较高 ,灵敏度低。4 盐酸克伦特罗检测技术的未来趋势 和发展方向

根据目前国内外检测 CLB各种方法的进 展情况以及 CLB滥用及残留的严峻性 ,建立一 种克服上述各种检测方法缺点的简便、快速、精 确、可实现在线检测的 CLB技术势在必行。滴 金免疫技术(DIGFA 和生物传感器技术(biosensor ,BS是 2种快速、高效的残留物分析 技术。其中 DIGFA技术已成功的运用于早孕 诊断、弓形虫病诊断、血吸虫病诊断等 ,灵敏

度 参考文献 1 张琪玉 ,李海云 1盐酸克伦特罗中毒 40例分析 [J ]1中国医师杂志 ,2002 ,4(9 :1 035～1 036 2 蒋巧燕 1盐酸克伦特罗中毒 11例分析 [J ]1医学理 论与实践 ,2002 ,15(4 :434 3 陈永壮 “瘦肉精”中毒的流行病学特征及防治对策 1 [J ]1中国卫生监督杂志 ,2002 ,9(5 :280～281 4 刘国艳 ,柴春彦 1如何全面认识 “瘦肉精” [J ]1动物 科学与动物医学 ,2002 ,19(6 :1～3 5 Elliott C T , Mccaughey W J , Crooks S R H et al1Residues of clenbuterol in cattle receiving therapeu2 tic doses:Implicationsfor differentiating between legal and illegal use[J ]1 Vet Q ,1995 ,17 :100～102 6 凌明亮 ,黄仁术 1瘦肉精的危害及检测方法 [J ]1安 徽农学通报 ,2003 ,9(4 :87～88 7 Sauern M J ,Pickett R J H ,Limer S et al1Distribution and elimination of clenbuterol in tissues and fluids of calves following prolonged oral administration at a grow-promoting dose[J ]1J Vet Pharmacol Therap , 1995 ,18 :81～86 8 林荣泉 1瘦肉精对人的危害及防治 [J ]1肉类工业 , 2002 ,7 :30～31 9 张 玲 ,邵春花 1瘦肉精的危害及其预防措施 [J ]1新疆农垦科技 ,2003 ,6 :19～20 10 汪令四 1含“瘦肉精”畜产品对人体健康的危害 [J ]1畜牧兽医杂志 ,2002 ,21(4 :29～30 11 张 呤 ,陈一农 1克伦特罗药理作用的研究进展 [J ]1海峡药学 ,2002 ,14(5 :10～11 12 宋兴国 ,陈 杰.瘦肉精的快速检测方法 [J ].山东 畜牧兽医 ,2003 ,3 :28～29 15 黄传峰 ,李晓华 ,吴宜群.克伦特罗检测方法进展 [J ].中国卫生检验杂志 ,2002 ,12(5 :634～636 16 黄宏南 ,谢剑峰.盐酸克伦特罗(瘦肉精 的检测方 法进展 [J ].福建畜牧兽医 ,2003 ,10 :27～28 17 蔡玉枝 ,罗晓燕 ,苏文周.高效液相色谱法测定猪 组织中盐酸克伦特罗残留量 [J ].中国卫生检验杂 志 ,2002 ,12(2 :193～194 18

Miyazaki T , Nakajima T , Hashimoto T et al.Deter2 mination of clenbuterol in animal tissues by high per2 formanceliquidchromatography[J].J FoodHygSo2 ciety of Japan , 1995 ,36(2 :269～273 19 Giancarlo B , Robert A , Pietro T et al.Positive chemical ionization and tandem mass spectrometric fragmentation for the gaschromatographic analysis of β2agonists using the ion trap technique [J ].JMass Spectrum ,1999 ,34 :1 346～1 353 20 刘国艳 ,柴春彦.动物性产品中盐酸克伦特罗(瘦 肉精 检测方法研究进展 [J ].动物科学和动物医 学 ,2002 ,19(4 :32～34 21 Polettini A J , Segara G，Gonzalez X et al.Clen2 buterol andβ-adrenergic drugs detected in hair of treated animals by ELISA [J ].Clin Chem , 1995 , 41 :945～946 22 Sawya W N , Lone K, H usain A et al.Screening forβ2 Agonists in sheep urine and eyes by an enzyme2linked immunosorbent assay in the state of Kuwait [J ].Food Control , 2000 ,11 :1～5(下转第 119页 111 2004年第 30卷第 9期(总第 201期

分离与提纯 表 3 不同抗氧剂对猪油的抗氧化 作用(POV值 mmol/ kg 样 品 时间 /d 0 48 013 %提取液 01062 01068 01287 013 %抗坏血酸 01062 01089 01301 013 %柠檬酸 01062 01132 01413 013 %EDTA 01062 01066 01279 3 结 论 比较了几种不同提取方法的提取效果 ,实 验显示 :体积分数 75 %乙醇提取法提取率较 高 ,提取物比较容易浓缩和干燥 ,是一种较好的 提取方法。柿叶黄酮类化合物的抗氧化性较强 ,通过 对猪油的抗氧化效果试验发现 :其抗氧化效果 比抗坏血酸和柠檬酸稍强。参考文献 1 谭仁祥 1植物成分分析 [M]1北京 :科学出版社 , 2002.486～502 2 万素英 ,赵亚军 ,李 琳等 1食品抗氧化剂 [M]1北 京 :中国轻工业出版社 ,1998 Study on Extraction Method and AntiSong Changchun Bao Qingsheng(Department of Basic Courses , Anhui Technical Teachers College , Bengbu , 233100 2oxidation Property of Flavonoid Compound from Leaves of Diospyros kaki ABSTRACT The extraction method of flavonoid in leaves of Diospyros kaki was studied1 The opti2 mum extracting process was put forward , and anti2oxidation property of the extract from the leaves of Diospyros kaki was studied1 The results showed that the optimum extracting technical process was 75 % alcohol1 Effect of flavonoid from the leaves of Diospyros kaki was higher than ascorbic acid and citric acid1 Key words leaves of Diospyros kaki , flavonoid ,extraction method ,antioxidant(上接第 111页 和国药典 [M].北京 :化学工业出版社 ,1995.62923 彭笑蓉 ,孙文梅.竞争酶标免疫法检测“瘦肉精” ～630 [J ].河北畜牧兽医 ,2003 ,19(4 :42～43 26 Pizaariello A , Stred’ansky M , Stred’ansky S et al.24 张苏华 ,黄士新.国产“瘦肉精” EL ISA试剂盒与A Solid binging matrix/ molecularly imprinted poly2 同类进口试剂盒的对比试验 [J ].上海畜牧兽医通mer-based sensor system for the determination of 讯 ,2003 ,4 :20～21 clenbuterol in bovine liver using differential-pulse 25 中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共

voltametry [J ].Sensors and Actuators B ,2001 ,76 : 286～294 Hazard of Clenbuterol Residual in Animal Food and Research Progress on Its Determination Method Zhang Qing’an Fan Xuehui(Department of Food Engineering ,Shaanxi Normal University , Xi’an , 710062 ABSTRACT In this paper we introduced the physicochemical characteristics and mechanism of clen2 buterol ,analyzed its hazard to human health and national economy , and summarized testing methods of residual clenbuterol in animal food1 Key words animal food ,clenbuterol ,residual ,determination method 119 2004年第 30卷第 9期(总第 201期

第二篇：瘦肉精(盐酸克伦特罗)快速检测卡

猪繁殖与呼吸综合症抗体快速检测试剂盒

——（胶体金法）使用说明书

1、检测原理

猪蓝耳病抗体快速检测试剂盒（胶体金法），系采用胶体金免疫层析技术，检测样品（血清、血浆或全血）中蓝耳病抗体的方法。在玻璃纤维纸上预包被金标记灭活猪蓝耳病抗体（Au-Agl）,在硝酸纤维素膜上检测线和对照线处分别包被猪蓝耳病抗原（Ag2）和兔抗猪蓝耳病抗体。当检测样品为阳性时，样品中猪蓝耳病抗体与胶体金标记猪蓝耳病抗原（Au-Agl）结合形成复合物，由于层析作用复合物沿纸条向前移动，经过检测线时与预包被的猪蓝耳病抗原(Ag2)形成“Au-Agl-猪蓝耳病抗体-Ag2-固相材料”免疫复合物而凝聚显色，游离金标记抗原则在对照线处与兔抗猪蓝耳病抗体结合而富集显色。阴性样品则仅在对照线处显色。操作简便，快速，结果直观、准确，灵敏度高，容易判定。

2、试剂组成

“猪蓝耳病抗体”快速检测卡（20 块）； 说明书1份

3、用途

用于检测猪血清/血浆/全血样品中猪繁殖与呼吸综合症（又称蓝耳病，以下同，Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS）抗体。

4、操作步骤以及结果判读：

⑴ 将检测卡从铝箔袋中取出，水平放置并做好标记。

⑵ 在检测卡的加样孔内加入2滴（70-100ul）待检血清/血浆/全血标本。⑶ 20分钟内观察并记录实验结果。

阳性：对照线区（C）和检测线区（T）各出现一条紫红色线。检测线(T)的颜色越深，表明猪蓝耳病抗体的滴度越高。

阴性：只有对照线区(C)出现一条紫红色线。

无效：未出现紫红色线或只在检测线区（T）出现紫红色线，对照线区（C）未出现紫红色线。

5、储存及有效期：

原包装在2-30℃阴凉避光干燥处储存，有效期为12 个 月，批号和有效期见包装盒。

6、注意事项：

(1)检测卡在室温下一次性使用。

(2)自来水、蒸馏水或去离子水不能作为阴性对照。

(3)实验环境应保持一定湿度，避风，避免在过高温度下进行试验。

(4)试剂盒在室温下保存.如在2-8℃冷藏，使用前降至室温后方可打开铝箔袋进行检测操作。

第三篇：盐酸克伦特罗快速检测

盐酸克伦特罗快速检测

摘 要

本实验采用了百睿TM盐酸克伦特罗快速检测卡对样品进行定性检测。盐酸克伦特罗快速检测卡适用于尿样、瘦肉、肝脏、肺脏、肾脏和饲料等样本中盐酸克伦特罗的测定。检出限为3ng/mL（3ppb）。关键词 盐酸克伦特罗快速检测卡

定性

检出限

前 言

盐酸克伦特罗(Clenbuterol,CLB),又名瘦肉精,分子式为C12H18Cl2N2O•HCl,药品名为克喘素、氨哮素等,为白色或类白色的结晶粉末,无臭、味苦,易溶于水、甲醇、乙醇,微溶于丙酮、氯仿,不溶于乙醚和苯,化学性质稳定;它是一种人工合成的B-肾上腺素受体激动剂,具有扩张支气管的作用,常用来防治哮喘、肺气肿等肺部疾病(Mersmann,1998)。当其应用剂量达到治疗量的5~10倍时,又具有能量重分配作用,可使肌肉合成增加,脂肪沉积减少,因此将其俗称为瘦肉精,在养猪业中一些非法使用者将其作为一种生长促进剂添加到饲料中(Kuip-er,1998),用以改善胴体的品质,但同时也造成了猪肉中盐酸克伦特罗的残留。当人们食用含有盐酸克伦特罗残留的肉品后,常常造成心动过速,低血钾,低磷酸盐血症,肌肉震颤,头晕,口干,失眠甚至于瘫痪等中毒症状,对心脏病患者更有生命危险。国家农业部农牧发[2002]1号文5关于发布食品动物禁用的兽药及其他化合物清单的通知6中,盐酸克伦特罗被列为所有食品动物禁止使用。

1实验步骤

（1）使用前将待测样本溶液恢复至室温

（2）取出检测卡平放，用移液枪吸取待测样品溶液100ul，垂直加于加样孔，开始计时

（3）结果应在3~5min读取，其他时间判读无效，根据示意图判定结果。

【结果判断】

阴性（-）：两条紫红色条带出现。表示样品中盐酸克伦特罗浓度低于3 ng/mL，或不含有。

阳性（+）：检测T线无显色，则表示样品中盐酸克伦特罗浓度高于3 ng/mL。

无效：未出现质控C线，表明操作过程不正确或检测卡已失效。实验结果

实验结果如下图 1

由图可知，左边表示样品中盐酸克伦特罗浓度低于3 ng/mL，或不含有盐酸克伦特罗；右边样品中盐酸克伦特罗浓度高于3 ng/mL。

3结果与讨论

3.1实验原理

若待测样品溶液中不含盐酸克伦特罗,当样品溶液进入测试端,盐酸克伦特罗金标单抗在硝酸纤维素膜上层析泳动,被硝酸纤维素膜上检测印迹处的盐酸克伦特罗-BSA偶联物拦截形成盐酸克伦特罗-BSA偶联物)金标盐酸克伦特罗单抗 复合物,并在该印迹处形成红色的条带(检测线);测试端多余的金标盐酸克伦特罗单抗在硝酸纤维素膜上继续层析可被对照印迹羊抗鼠IgG单克隆抗体捕获形成红色的对照条带(对照线)。当待测尿样中含有一定量的盐酸克伦特罗时,盐酸克伦特罗与盐酸克伦特罗金标单抗形成复合物,从而与硝酸纤维素膜上的盐酸克伦特罗-BSA偶联物形成竞争,抑制了检测印迹处包被的盐酸克伦特罗-BSA偶联物捕获盐酸克伦特罗金标单抗的量,而不能在检测线形成红色印迹或形成颜色较浅的红色印迹,多余的盒标盐酸克伦特罗单抗继续层析在对照印迹处形成对照线。根据该反应模式,检测线颜色深浅与样品中盐酸克伦特罗含量呈负相关,即检测线颜色越浅表示样品中盐酸克伦特罗含量越高。3.2 试纸条组成

1.样品垫的作用是尽快地将加样孔中的样品吸附到试纸中去，以利于继续加样； 2.结合垫中则是含有胶体金标记的盐酸克伦特罗单抗；

3.硝酸纤维素膜上则预先标记了两种物质，在检测线处标记的是盐酸克伦特罗-BSA偶联物。

4.吸收垫一般由吸水纸构成，主要作用是保持从加样垫到吸收垫之间的毛细管作用力[1]。

参考文献

[1] 姜艳彬，孙冠如，王海，等.盐酸克伦特罗胶体金快速检测试纸条的研制[J].中国畜牧兽医.2010(10): 109-113.

第四篇：食品中抗生素残留危害及检测方法

食品中抗生素残留危害及检测方法

随着人们生活质量的提高，食品安全问题越来越为广大消费者所关注，特别是农药和抗生素等药物残留问题更是广大消费者所关注的焦点问题。在食品安全这个全球关注的热点问题上，如何快速、准确地检测食品安全的问题已成为重中之重。要检测抗生素在食品中的残留，必须选择特异性强、灵敏度高、高效快速的检测方法。因此，研究各种抗生素类残留检测的方法，提高其灵敏度与选择性具有十分重要的意义。

抗生素具有哪些危害

人们吃了有抗生素残留的肉、蛋、奶等食物后，会造成抗生素在人体内蓄积，使人产生对抗生素的抗性，引起各种组织器官病变，甚至癌变。

对人类健康的危害

对人体肠道菌群的影响

人体肠道菌群是一个平衡的生态系统，对保持人体健康起着非常重要的作用。如果人们长期摄入含有抗生素的食品后，会使敏感菌群被杀灭或抑制，而耐药菌群却大量繁殖，从而打破原来的平衡状态造成菌群失调，这就可能会导致长期腹泻或营养不良，严重时还可造成耐药菌感染，给临床治疗带来困难。

引起过敏和变态反应 青霉素、四环素、磺胺类及某些氨基糖苷类抗生素能使部分人群发生过敏反应和变态反应，氯霉素可破坏机体造血功能，诱发再生障碍性贫血。经常食用含抗生素的动物性食品，轻者出现皮肤瘙痒、荨麻疹、关节肿痛，重者导致血管性水肿、休克、甚至死亡。

导致细菌耐药性增加

目前，由于抗生素的广泛使用，使得细菌的耐药性不断增加，食用含抗生素残留的动物性食品后，人体内细菌的耐药性增加。同时，动物体内的耐药性菌株的耐药性也可能转移到人体细菌中，从而对人类产生极大的危害。

其他毒害作用

动物性食品中残留的链霉素进入人体后可引起肾损害和听神经受损。长期摄入氨基糖苷类抗生素残留严重超标的动物性食品，可损害第8 对脑神经，出现头晕、头痛、耳鸣、耳聋、恶心、呕吐等症状。四环素会引起肝损伤，与骨骼或牙齿中的钙质结合后，使骨骼及牙齿黄染，还可影响儿童的生长发育。邻氯青霉素、头孢菌素等可引起人类免疫性疾病；氯霉素会损害人的造血功能，抑制蛋白质

摘要：文章综述了抗生素残留的来源与途径, 介绍了抗生素残留对人类健康、乳制品生产、环境及其他方面造成的危害，分析了检测抗生素残留的方法，包括微生物检测法、仪器检验法、免疫学分析法等，并指出了这些检测方法的研究现状与发展前景。

对乳制品生产工艺的危害

由于含有抗生素的奶无法制成酸奶、奶酪等一些高质量牛奶产品，容易造成大量原料奶的浪费，给乳品企业造成经济损失。另一方面，一些不法奶户在高温季节为防止鲜乳的酸败，往往向牛乳中掺杂各种抗生素，从而造成乳中抗生素残留，对人体也造成了很大的危害。

对环境的危害

一些性质稳定的药物被排泄到环境中仍能稳定存在很长时间，从而造成环境中的药物残留。链霉素、土霉素在环境中不易降解；螺旋霉素低浓度降解很快，但浓度高时需6 个月才能降解完；杆菌肽锌在有氧的条件下完全降解需3～4个月，在无氧环境中降解所需要的时间更长。据报道，动物养殖场污水处理池中红霉素、复红霉素、磺胺甲唑质量浓度可达69g/L，这些药物的排放污染了环境，破坏了生态平衡。

抗生素残留量的检测方法

随着社会的进步和人们对抗生素残留的日益重视，在客观上就要求改进传统的检测方法。引进先进的检测仪器，寻求一种快速、精确的检测方法，使得检测结果更加准确、可靠。

微生物检测方法

微生物检测方法的主要原理是根据抗微生物药对特异微生物的抑制作用，来定性或定量检测受检样品中残留的抗微生物药。微生物检测法应用较为广泛，是抗生素残留检测的传统方法，但测定时间长，结果误差较大，操作复杂。其优点是费用低，一般实验室都能操作。

氯化三苯四氮唑法（TTC）

这是目前我国食品卫生标准中用来检查牛乳中抗生素残留的检测方法。如果牛乳中有抗生素存在，当乳中加入菌种（嗜热链球菌）经培养后，菌种不增殖。此时，加入的TTC 指示剂不发生还原反应，所以仍呈无色状态。如果没有抗生素存在，则加入菌种就可增殖，TTC 还原变成红色，使样品染成红色。

棉拭法或纸片法

这是检测胴体内可疑抗生素残留的现场试验方法，简便而又有一定准确性，被世界普遍采用，具有广域的灵敏性。它是用棉拭插入待检部位浸润20min取出，放入有枯草杆菌的培养基中培养18h～24 h，或用圆滤纸从肾脏或乳取样，与含有枯草杆菌等细菌的营养琼脂贴合培养，通过观察棉拭周围有无抑菌圈或根据其大小判定有无抗菌物质存在。该法的特点是能够确定抗生素的种类，提高检出率和准确率。如，氯霉素最低检出限量为0.01mg/kg、土霉素为0.05mg/kg等。

杯蝶法

样品经处理后，注入牛津杯中，与含菌液的检定平板贴合。培养后，根据抑菌圈的有无及大小判定结果。采用不同的试验菌种，可检测不同的抗生素。如检测肉中四环素类抗生素用蜡样芽孢杆菌；检测青霉素用金黄色葡萄球菌；检测链霉素或双氢链霉素用枯草杆菌。

电泳生物检测法

该法灵敏度较高。Fusac（1989）应用电泳和微生物自显影技术测定动物组织中残留的氨基糖苷类抗生素（如，双氢链霉素、卡那霉素等），取得了满意的结果。

琼脂扩散法

Korkela 以猪肾为样品采用琼脂扩散法对几种抗生素残留检测进行了比较。能检测出土霉素和链霉素的残留。Untermann（1986）报道，采用枯草杆菌进行琼脂扩散法检测出了牛、猪及山羊的肌肉中和肾脏内抗生素的残留。

仪器检验方法

仪器检验方法是利用抗生素分子中的基团所具有的特殊反应或性质来测定其含量，进行定性定量

和药剂鉴定。其敏感性较高，但有的检测程序较复杂或检测费用较高。

液相色谱法（LC）

德国Russel 报道了液相色谱法检测氯霉素残留，检测限为10μg/kg，回收率为63%～79%。Jefery等（1994）报道了用LC法测定沙拉沙星在海峡鲇鱼肌肉中的残留，沙拉沙星的检测限为1.4ng/g，回收率为85.4％～104％。

气相色谱法（GC）

该法有许多高灵敏、通用性或专一性强的检测器供选用。Plomp和Maes报道了在血液和羊水中甲砜霉素的快速气相色谱检测方法，检测限为0.1μg/mL，甲砜霉素血清的回收率为91.3％，羊水的回收率为90.3％。

薄层色谱法（TLC）

该法经常作为样品筛选方法。其优点是速度快，有利于现场应用，且已在饲料、组织和体液等的分析中得到了广泛的应用。Bossuyt 等（1976）报道用TLC 法测定牛奶中新霉素的残留。但新霉素的检测限为15μg/g，远高于牛奶中的新霉素残留限量。

高效薄层色谱法（HPTLC）

该法现已成为仅次于HPLC的残留分析法。HPTLC在兽药残留的快速筛选检测方面应用广泛。测定组织样品时需在样品展开后喷以硫酸-高氯酸试液，灵敏度可提高10倍，检测限达10μg/kg。

高效液相色谱法（HPLC）

这是目前广泛应用的一种理化检测方法。该法对抗生素残留的检测具有较高的灵敏性。Anadan等（1995）报道了用HPLC法测定鸡脂肪、肝脏、肾脏、肺脏及皮肤中恩诺沙星及代谢产物环丙沙星浓度，检测限为0.003 μg/g，在各种组织中提取回收率均大于70％。Rolinski 等（1997）用HPLC 法检测了肉鸡组织和鸡蛋中诺氟沙星残留，检测限为0.0025μg/g。

超临界流体色谱法（SFC）

该法可弥补GC和HPLC法的不足，但不可能取代二者。SFC 最大优点是可以方便地连接各种灵敏的检测器。Pensabene 等将鸡蛋样品进行超临界流体萃取后进行磺胺类药物的残留分析，检测限为25 μg/kg，回收率为81％~101%。

毛细管电泳法（CE）Ackermans 等将猪肉样品加乙腈提取，离心后上清液过滤膜后直接进行毛细管区带电泳分析。测出肉样中15 种磺胺类药物的检测限在2 mg/kg~9mg/kg 的范围内。

联用技术

联用技术可扬长避短，一般兼分离、定量和定性（分子结构信息）于一体，因而特别适用于确证性分析。常见的联用技术有薄层色谱-质谱（TLC-MS）、气相色谱-质谱（GC-MS）、液相色谱-质谱（LC-MS）等。色谱和质谱联用由于实现了高效层析分离和检测联机，可用微电脑控制层析条件、程序和数据处理，其特异性、灵敏度和重复性均好，并可一次同时完成同一样本中多种药物及其代谢物的检测。

免疫分析法

免疫分析法主要有放射免疫分析（RIA）、酶免疫分析（EIA）、荧光免疫分析（FIA）和酶联免疫吸附法（ELISA）。与常规的理化分析技术相比，免疫分析技术最突出的优点是操作简单、容量大、速度快、仪器化程度低且分析成本低，分析效率则为HPLC 或GC 的几十倍以上。免疫分析法能与其他技术联用。

放射免疫分析（RIA）

Mahon 等曾将卡那霉素与人血清白蛋白直接连接制备结合抗原，并建立了血清样品的放射免疫测定法，检测限为10 ng/mL。1984 年Arnold 等即建立了氯霉素的放射免疫测定法，其检测限为0.21μg/kg。酶联免疫吸附法（ELISA）

Prithipal Singh 等（1989）建立了检测猪血中磺胺二甲嘧啶的ELISA 方法，其检测范围为10ng/mL~1 000 ng/mL。国内刘智宏等（1998）建立了检测血清中磺胺二甲基嘧啶的ELISA 方法，其检测限为50 ng/mL。杨红（1999）建立了测定牛奶、猪血浆等样本的ELISA 检测方法，其检测限约0.025 ng/mL。

第五篇：蔬菜水果中27种有机磷农药残留快速扫描检测方法研究

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蔬菜水果中27种有机磷农药残留快速扫描检测方法研究

作者：黄锦沛

来源：《新农村》2012年第07期

摘 要：当前，随着社会经济持续发展进而人们生活水平不断提高，人们对生活质量的要求越来越高，蔬菜水果的质量问题受到了人们的高度重视，其中蔬菜水果的农药残留污染问题受到了全球消费者的关注。因此，检测蔬菜水果的农药残留情况成为提高人们生活质量的主要途径。本篇文章针对当前蔬菜水果农药残留问题的现状，对蔬菜水果中27种有机磷农药残留快速扫描检测方法进行了深入的探究。