河北科技大学HPLC法进行地塞米松磷酸钠中特殊杂质的检查及含量测定

第一篇：河北科技大学HPLC法进行地塞米松磷酸钠中特殊杂质的检查及含量测定

实验五HPLC法进行地塞米松磷酸钠中特殊杂质的检查及含量测定

一．目的要求

1.掌握实验中药物特殊杂质的来源和检察原理。

2.掌握高效液相色谱法用于特殊杂质检查及含量测定的方法。

二、实验方法

有关物质取本品，加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含1mg的溶液，作为供试品溶液；取地塞米松对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并稀释成每1ml中约含1mg的溶液，作为对照品溶液；精密量取供试品溶液与对照品溶液各1ml，置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。照含量测定项下的色谱条件，取对照溶液20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使地塞米松磷酸钠色谱峰的峰高为满量程的15%～20%，再精密量取供试品溶液与对照溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。供试品溶液色谱图中如有与地塞米松保留时间一致的峰，按外标法以峰面积计算，含量不得超过0.5%；其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液中地塞米松磷酸钠峰面积的1/2，其他杂质峰面积的和不得大于对照溶液中地塞米松磷酸钠峰面积的2倍。

【含量测定】照高效液相色谱法（附录V D）测定。

色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以三乙胺溶液（取三乙胺7.5ml，加水至1000ml,用磷酸调节pH值至3.0±0.05）－甲醇－乙腈（55：40：5）为流动相；检测波长为242nm.理论板数按地塞米松磷酸钠峰计算一般为7000，地塞米松磷酸钠与地塞米松的分离度应大于4.4。

测定法 取本品适量，精密称定，置50ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取适量，用流动相定量稀释制成每1ml中含40μg的溶液，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取地塞米松磷酸钠对照品适量，精密称定，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。

四、注意事项：

五、思考题：

1.何谓反相高效液相色谱法？其常用的固定相和流动相有哪些？如何选择？

2.液相色谱流动相、样品前处理注意事项有哪些？