癌基因检测的意义

第一篇：癌基因检测的意义

到目前为止，在我国，癌症检测仍然是传统的方法更为可靠和稳妥。规范的肿瘤体检包括三个方面：一方面是为预防癌症所做的检查，如一位45岁以上的乙肝患者，应定期做腹部B超检查。另一方面是筛查早期癌症，如妇女进行宫颈涂片细胞学检查，以及时发现宫颈癌。第三是由经验丰富的医师进行详细诊断和物理检查，以早期发现癌症信号。

癌症如果是早期发现，手术后可以作为慢性病治疗，存活几年、十几年没有问题。甚至如果能更早期发现癌症的迹象，通过早干预、早预防，定期体检等手段完全可以避免或延缓癌症的发生和发展。目前，世界卫生组织(WHO)将癌症定义为可以治疗、控制、甚至治愈的慢性病，那是建立在早期发现，早期治疗的基础上，以及未来随着医学的进步，癌症可以像慢性病一样进行治疗。

核子基因表示，我国 80%的癌症患者确诊时即属于中晚期，癌症一旦出现转移或进入中晚期就变成了急性病，晚期肺癌一般存活期只有一年，肝癌晚期出现黄疸和腹水存活期为 1-3 个月。所以，癌症基因检测还是要尽早做。

癌症基因检测不仅能对癌症疾病起到早发现、早治疗的功效，而且在医学领域是预防、诊断和治疗癌症的重大课题。

第二篇：P53抑癌基因检测可行性报告

P53抑癌基因检测可行性报告

体检中心外检项目

北京疾控中心P53项目组

尚康阳光医院管理有限公司

目

录

1、我国癌症现状

2、P53检测项目简介

2.1 P53检测商业模式

2.2 什么是P53抑癌基因

2.3 P53抑癌基因检测和临床现有的肿瘤筛查方式的区别

2.4 P53案例展示

2.5 项目合作方案及经济效益分析

一、我国癌症现状分析

我国已经是“名副其实”的癌症第一大国，全世界新发肿瘤病人20%在中国„„其中，乳癌发病率增速全球第一，肺癌发病率全球第一，肝癌发病率全球第一，食道癌发病率全球第一，宫颈癌发病率全球第一，„„

52.4岁、胃癌58.2岁、结肠癌58.2岁、食管癌是59.3岁„„癌症多在50岁后高发，但年轻化趋势越来越明显。

上海癌症发生率全国最高。平均每1万人有35人患癌，平均一分钟6人得癌症。且每年1%比例持续上升。超过65岁人中约有10.44%被诊断为癌症，超过75岁后比率升至21.31%。

2010年北京户籍人口共报告恶性肿瘤新发病例3.7万多例，相当于平均每天104人被确诊，跃居北京市居民第一死因。

造成癌症发病率持续升高的的原因很多很多，但是引起癌症一经确诊就需要进行临床治疗（手术、放疗或者化疗等），并且临床治愈率并不乐观，所以老百姓才谈癌变色。究其原因是我们目前所采用的对癌症的早期检查方法，均是基于临床医学的检查方法，目的是确定现在是否已经患了癌症，一经发现就是临床分期的“早、中、晚”期，根本没有预防的时间空间。

假如有一种比较可信的检测手段，在癌症达到临床分期的早期更早的发现的话，那就有了足够的预防时间，再加上有可靠的药物预防手段的话，那么对癌症的预防就有极大的价值。

现在，北京疾控中心实验室开展的P53抑癌基因检测就是早于临床分期早期的检测手段，所以叫早早期检测。

二、P53项目介绍 2.1 P53项目介绍

1.检测名称：P53基因癌症早早期检测 2.检测流程：送检

3.检测单位：北京疾病预防控制中心 4.检测内容：基因检测

5.检测方法：采集体检者手指末端五滴血液制作成血斑，邮递北京疾控中心，由北京疾控中心的专家在国家级实验室内对血液进行基因提取 P53基因片段提取最后出检测报告。

2.2 什么是P53 P53基因是一种肿瘤抑制基因，位于人17号染色体短臂上，编码p53蛋白（分子量53KD)P53蛋白的正常功能是调节细胞增殖 P53蛋白是人体内最有效的肿瘤防御机制

P53与癌症

癌症中最容易出现的基因变异：>50种癌症 癌症中变异率最高的基因：>50%

P53文献

经查新，国内关于P53基因研究，公开发表的相关文献有2万余篇，现摘录部分文献供参考。详见附件。2.3 P53检测和临床现有的肿瘤筛查方式的优点

一、适用人群广

1、肿瘤高危人群：45岁以上，长期生活在大城市，工作压力大的职业；有肿瘤家族史或有遗传易感性的人群；因职业和环境原因长期接触有害化学物质或放射线；有慢性炎症或癌前病变人群；长期吸烟、饮酒者，过多摄入高脂肪食物导致肥胖者。

2、疑是肿瘤患者：身体里发现可疑肿块或病理检查有不典型增生、癌前病变，从分子层面鉴定是否有基因突变。

3、肿瘤患者治疗中或治疗后：跟踪检测血液中基因突变以评估疗效。

4、康复期癌症患者：既往曾患癌症，经治疗后可定期做P53抑癌基因检测，从基因层面监控复发迹象，评估预后。

二、P53抑癌基因检测与临床现有癌症检测方法的区别

1.p53检测已被列入到临床医疗检验项目目录：2013年国家卫计委下发的9号文件《医疗机构临床检验项目目录》，p53基因突变检测列入到临床分子细胞学检验目录，可以在临床开展；

其他第三方实验室开展的疾病易感基因的检测没有写入临床检测目录，不能在临床开展。

2.技术权威：

p53（抑癌）基因由北京疾病预防控制中心国家级实验室检测，并出具检测报告，结果权威可信。

3.技术先进：通过特异性PCR-SSCP方法扩增血液中p53基因上的突变片段，如扩增产物中包含与野生型p53基因不同的序列，扩增产物单链在电泳上会出现与野生型不同的带型，从而可以判断出 PCR产物中含有变异位点，从而推断出p53基因出现变异。罹患癌症的风险急剧增加

4.临床价值高：本检测技术先进、检测结果准确可靠，具有较高的临床早期诊断参考价值，北京协和医院、解放军总医院（301）、北京友谊医院等多数医院早已作为临床早期诊断标准之一普遍采用。

5.检测范围广： p53基因是迄今为止发现与癌症的发生关系最为密切的，p53基因的变化可导致包括肝癌、乳腺癌、膀胱癌、胃癌、结肠癌、前列腺癌、软组织肉瘤、卵巢癌、脑瘤、淋巴细胞 肿瘤、食道癌、肺癌、成骨肉瘤等人类高发癌症。

6.采样优势：此项检测采样简单，无痛苦，仅用末端血涂片即可。其他的癌症筛查方式采集3到5毫升的全血，离心沉淀提取血清比较麻烦，并且不适合远途送检。

上图为采样包样本

7.价格优势：价格低廉，适合大众普查使用。市场上易感基因检测单项检测最低都要高于5000元。按照浙江省基因检测的收费目录我们检测四个基因点位，价格不超过2400元。

8.后期服务 ：北京、上海权威专家团队提供检后干预方和绿色转诊通道。2.4 案例展示

本项目与2013年7月14日在人民日报社举行发布会，央视媒体，网络媒体对我们进行了报道 启动仪式图片

北京晚报 信报 健康时报 头版头条进行了报道

央视4套对我们公司进行了专访

目前已经陆续开展的城市有：北京、石家庄、邯郸、邢台、唐山、沧州、河南许昌、山西阳泉、长沙、株洲、武汉、深圳、珠海、佛山、成都、自贡、南充、济南、聊城、绍兴、宁波等

部分采样单位展示

截止2014年1月低全国30余家体检中心参与合作

河北省体检中心，河北地区最大的体检中心，年体检人流量10万人次，高端VIP客户8000余人

华西医院门诊部

河北省体检中心

河南省许昌市第六人民医院

南充第三人民医院

南充市肿瘤医院

陕西省阳泉市体检中心

民营体检中心代表

国药阳光体检中心全国10家体检中心

深圳第一健康体检 深圳瑞格尔体检

合作的大集团客户

北京空军司令部

深圳富士康2000人高管体检

中国核工业第九研究所

大亚湾核电站

广核电全员2万多名员工每年一次的常规体检项目。

2.5 项目合作方案及经济效益分析 对医院合作模式

1、合作科室：体检中心

2、合作模式：纳入体检中心体检套餐，由代理商和医院体检中心签订合作协议，给医院供货价格，医院体检中心收费，按照月度结算的办法。

3、技术实施:送检

4、供货价格：带上和医院体检中心协商决定。

5、收益分析：每一粒体检人次医院可以收入200元，每年2000人次P53检测量收益为800000纯收益。

第三篇：HPV检测的意义

■ 山东皮肤病医院病理科 陈学超

HPV是人乳头状病毒的英文缩写，是一类在自然界广泛存在的DNA病毒。人类感染HPV十分普遍，感染率也很高。在性活跃人群中，20%～80%以上的人有HPV感染史。HPV在温暖潮湿的环境中特别容易生存增殖，并且病毒可自身接种，故男女两性的外生殖器是最易感染的部位。

HPV感染生殖道是一个长期的过程，可潜伏在细胞内若干年，一旦机体免疫力降低，潜伏的病毒可恢复活动。人类乳头状瘤病毒(HPV)与部分癌的发生有关，特别是宫颈癌。1995年WHO已将HPV确定为宫颈癌的病因。可以这么说：没有HPV感染，就不会发生宫颈癌。但是，这并不是说感染了HPV就一定会得宫颈癌。

事实上，70%～80%的女性在其一生中都曾感染过HPV，绝大多数通过自身的免疫力，在感染后的1～2年内自行清除。借用某位教授的话说：“女性感染HPV就像得了感冒一样普遍”。所以，即使查出有HPV感染，也大可不必紧张。

HPV有高危型和低危型之分，一般认为，高危型HPV与宫颈癌发病有关，低危型HPV与生殖道良性病变有关。只有持续的感染高危型HPV才会有发生宫颈癌的风险。即使是高危型HPV，它的毒性(致癌性)也有强弱之分。

因此，对于性病患者来讲，无论男性或女患者，定期检测HPV尤其是检测HPV的型别非常重要，可以通过检测，早期治疗，达到预防或减少相关癌症尤其是宫颈癌的患病风险

第四篇：NGAL生化检测意义

一种新的肾损伤标志物—中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）的临床意义

中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinaseassociated lipocalin，NGAL)，又称人脂质运载蛋白2(lipocalin 2，Ln2)或噬铁蛋白(siderocalin)，是人脂质运载蛋白家族中的一个新成员。近年来，NGAL 作为一种新的肾损伤标志物倍受关注。

1、NGAL 的生物学特性

NGAL 是1993 年Kjeldsen 等［1］研究中性粒细胞时发现的一种特殊颗粒组分，与明胶酶

B 即基质金属蛋白酶9(matrixmetalloproteinase-9，MMP-9)密切相关。人类NGAL 基因定位于第9 号染色体长臂(9q34)，全长5 869 bp，包括1 695bp 的5'端非转录区、178 bp 的3'端非转录区及由7 个外显子与6 个内含子构成的3 696 bp 的原初转录区;其相对分子质量为25 000 bp。血小板活化因子(PAF)、白三烯-B4(LT-B4)与N-甲酸基-甲硫氨酸-亮氨酸-苯丙氨酸(N-formyl-Met-Leu-Phe)等是NGAL 的配体［2］。在生理状态下，中性粒细胞、肾小管上皮细胞、肺泡巨噬细胞、支气管上皮黏液细胞等分泌少量NGAL，而脑与周围神经、结肠、子宫与卵巢、胎盘、甲状腺等组织细胞中NGAL 的表达呈阴性。NGAL 的生理功能尚不完全清楚，可能参与不同的生理、病理过程，涉及胚胎发育、细胞分化、肿瘤的发生发展、细胞凋亡、炎症免疫应答、脂质代谢等。在胚胎期，NGAL 发挥类似生长因子的作用，参与各类组织发育、生长及分化，促进乳腺癌、食管癌等肿瘤细胞增殖。NGAL 与MMP-9 以二硫键形成12 500 bp 的复合物，延长MMP 的蛋白水解活性，促进MMP-9 对细胞基底膜的降解，从而浸润周围基质，介导癌细胞转移。过去研究认为，NGAL 促进细胞凋亡，但近年来研究发现NGAL 还是一类应激蛋白，在外界有害物质刺激下，细胞分泌NGAL 是一种机体自身防御机制，使组织细胞免于凋亡［3］。NGAL 还是一类新的急性期反应蛋白，作为介导铁离子向胞内运输的新型载体，通过竞争性夺取螯合物中的铁来阻止细菌对铁的吸收，从而抑制细菌生长。

2、NGAL 是急性肾损伤的标志物

2．1 早期诊断急性肾功能损伤(AKI)时血、尿NGAL 浓度通常会迅速升高，2 h 最为明显(比临界值升高几十至几百倍)，血清肌酐(sCr)、尿酶等传统指标往往要在24 ～72 h 才后明显升高，因而NGAL 可用于AKI 的早期诊断。Mishra等［4］在体外循环术并发AKI 患儿的队列研究中发现，2h 尿NGAL 诊断AKI 的AUCROC 为0．998，其临界值为50 μg /L(ELISA 法)时，敏感性、特异性分别为100%、98%，而血清NGAL 诊断AKI 的AUCROC为0．906，其临界值为25 μg /L 时，敏感性、特异性为70%、94%;多元回归分析显示，2 h 尿NGAL 水平是预测AKI 的强有力预测因子。也发现成年患者2 h 尿、血清NGAL 水平是诊断AKI 的可靠的早期诊断指标。meta 分析表明，NGAL 对AKI 的诊断效能受到标本类型、年龄、检测方法等因素影响，但NGAL 对儿童AKI 的诊断效能优于成年人，可能是成年人受到其他慢性疾病等因素影响。值得注意的是，脓毒血症等危重疾病患者，因受到炎症反应等因素影响，NGAL 可能并不适用于AKI 的早期诊断，诊断特异性欠佳。北美地区研究发现，143 名全身炎症反应综合征及脓毒性休克患儿入院后24 h 内，血清NGAL 诊断AKI 的AUCROC为0．677，在临界值为139 ng /mL 时，敏感性为86%，特异性仅为39%。经多变量分析后发现，血NGAL 并不是发生AKI 事件的预测指标［5］。在成人患者研究中也得到类似结论。另有研究表明，危重患儿48 h 内尿液NGAL 水平可以准确预测AKI 的发生(AUCROC 为0 ．79)。但当sCr 升高后，AUCROC降至0．63［6］。ICU 中的AKI 成人患者血浆NGAL水平在48 h 后与正常对照组亦无显著性差异［7］。但李萍珠等［8］发现尿NGAL 可作为脓毒血症后并发AKI 的早期诊断标志物，准确性达0．968，这可能与种族间水平差异有关。2．2 监测病情进展

NGAL 还可以反映肾功能损伤的严重程度。Kusaka 等［9］在接受尸体肾脏移植的患者中发现，血清NGAL 的变化呈“双相”特点，比sCr 及尿量提早回落基线水平。在经历第2 次高峰后NGAL 开始下降，即提示肾功能逐渐恢复正常。因此血清NGAL 水平的变化有助于监测肾功能延迟恢复患者的恢复情况，评估移植后是否需要进行血透治疗。尿NGAL 每升高100 ng /mL，肾移植患者发生肾功能延迟恢复的概率就增加20%［10］。ICU 中的患者血浆NGAL 浓度的增高与AKI 的严重程度(RIFLE 分级)相关［7］，用血浆NGAL 水平来预测是否患者需要肾替代疗法的准确性较高(AUCROC达0．82)。Zappitelli 等［6］的前瞻性研究中也有类似发现。RIFLE 分级每升高一个级别，尿NGAL平均值、最高值都随之增加，预示着肾功能的恶化。2．3 评估预后

NGAL 可作为AKI 的预后指标之一。体外循环术患者术后2、4、6 h 尿NGAL 水平与AKI 的持续时间、患者住院时间长短均显著相关，2h 尿NGAL 还与AKI 的严重程度(是否需要透析治疗)及患者病死率明显相关。Devarajan等［4］人研究发现血浆NGAL 也有类似的变化。一项队列研究［10］发现，尿NGAL 水平可预测肾移植患者移植一周内是否需要透析治疗，以及3 个月后器官功能的恢复状况。3、NGAL 预测慢性肾病(CKD)的进展

研究发现，CKD 患者的血清、尿NGAL 水平显著高于正常人群，并与肾小球滤过率(GFR)呈密切负相关，而sCr 与GFR 的关联程度不及NGAL。因此，CKD 患者NGAL 水平不仅是优于sCr 反映CFR 下降的指标，更是评价CKD 患者肾脏损伤程度的标志物。但CKD 患者尿NGAL 增高幅度不及AKI 患者，可能与受到其他慢性疾病因素的干扰有关。欧洲一项CKD 成年患者队列研究发现，血清NGAL ＞435 ng /mL或尿NGAL ＞231 ng /mL 的患者更早达到随访终点事件;并且血清、尿液NGAL 浓度每增高10 ng /mL，CKD 进展的风险分别提高了3%与2%，经多变量Cox 比例风险回归模型分析，血清、尿NGAL 是CKD 的进展风险的独立预测因子［11］。

3．1 糖尿病、肾病的诊断往往依据尿微量清蛋白(mAlb)，有研究发现，血清、尿NGAL 水平在1 型/2 型糖尿病肾病患者尿mAlb 升高前已显著增加，是诊断糖尿病并发肾损伤的灵敏指标。在2 型糖尿病肾病患者中，血清、尿NGAL 的AUCROC 分别为0．969、0．90［12］，且NGAL 水平随着肾功能的减退而升高，与sCr 呈正相关，与GFR 呈负相关。因此，NGAL 可以预测2 型糖尿病患者肾功能的损伤程度。Thrailkill 等［13］发现1 型糖尿病女性患者尿NGAL 水平远高于男性患者，推测雌激素可能对NGAL 在肾小管上皮细胞或尿道上皮细胞的表达发挥调节作用，女性糖尿病患者可能更易受高血糖的负面影响。随访1 型糖尿病肾病患者4 年［14］，尿NGAL 的升高水平与GFR 的降低无关，经多因素分析后发现尿NGAL 并不适用于评价1 型糖尿病肾功能损伤患者的预后情况。Nielsen 等［15］的研究结果支持这一观点。

3．2 狼疮肾病 随访狼疮肾病成年患者发现［16］，尿NGAL是优于抗dsDNA 抗体滴度的狼疮肾病诊断指标，其AUCROC值达0．76。当尿NGAL 临界值为13．6 ng /mL 时，诊断敏感性与特异性分别为89%、72%。在狼疮肾病患儿中发现尿、血浆NGAL 水平随着肾病活动性的增强而升高，但血浆NGAL 的变化差异无统计学意义。因此，尿NGAL 是狼疮肾病活动性的可靠的预测因子。与成人不同的是，儿童的尿NGAL 升高主要发生在狼疮肾病的前3 个月内［17］，这可能提示狼疮肾病患者NGAL 水平分布与年龄有关。

3．3 其他 尿NGAL 可作为IgA 肾病小管间质性损伤的早期诊断指标［18］。在药物损伤导致的慢性小管间质性肾炎中，尿NGAL 优于尿mAlb，α1-MG 等标志物，能更好地反映肾功能损伤程度。在常染色体显性多囊肾病中，检测尿NGAL 浓度能够评估肾脏病变严重程度［19］。4、NGAL 与心肾综合征

心肾综合征(cardio-renal syndromes，CRS)是一种心脏与肾脏的病理生理紊乱，即由一个器官的功能不全导致的另一个器官的功能不全，死亡率高，共分为5 个类型。Alvelos等［20］发现血NGAL 诊断1 型CRS 的AUCROC 达0．93，以170ng /mL 为临界值时，敏感性与特异性分别为100%、86．7%。因此，作为肾损伤的早期诊断指标，密切监测NGAL 水平，有利于临床医生正确评价CRS 中的肾功能损伤程度，并及时采取干预治疗，减少并发症的发生。已有学者提出，可联合应用生物学标志物NGAL 与B 型钠尿肽(BNP)共同诊断CRS，以改善患者预后，降低死亡率。

5、肾脏疾病的疗效指标

有研究发现，NGAL 可以反映血管球性肾炎等肾脏疾病的临床疗效［21］。如: 高血压慢性肾病患者服用ARB 类降血压后，尿NGAL 水平显著降低。另外，NGAL 还应用于评估不同治疗方案的肾功能临床试验中。如: 在一项研究手术期间静脉点滴碳酸氢钠对心脏术后患者肾功能影响的随机双盲临床试验中，尿NGAL 作为评价肾功能的终点指标［22］。

第五篇：胰腺癌基因诊断与基因治疗研究进展

胰腺癌基因诊断与基因治疗研究进展

胰腺癌是消化系统较常见的恶性肿瘤，起病隐匿，恶性程度高。现有的影像学检查及血清学检查尚不能达到早期诊断；其治疗以胰十二指肠切除术为基础，辅以放疗和化疗，预后较差。平均5年生存率低于5％，被称为“癌中之王”[1]。

近年来随着分子生物学技术的巨大进步发展起来的基因检测技术为胰腺癌的早期诊断提供了方向，为胰腺癌的有效治疗提供了新的途径。本文就胰腺癌基因诊断和基因治疗的研究进展作简要综述。

一、基因诊断 Ⅰ.胰腺腺癌

肿瘤的发生和发展是多个基因异常变化积累的结果。许多原癌基因、抑癌基因以及DNA错位修复基因等，都和胰腺癌有着不可分割的关系。1.原癌基因 1.1 K-ras 与胰腺癌有关的ras基因家族主要是K-ras和N-ras。其中以K-ras的点突变研究的最为深入和广泛，可见于90％胰腺癌，明显高于其他癌[2]。但由于K-ras突变也见于一些良性疾病，临床上可作为筛选指标。某些研究发现，用外周血浆检测K-ras突变还可用于评估肿瘤大小、可切除性以及预后[3]，因此外周血浆检测K-ras基因突变有望成为快速准确诊断胰腺癌的方法。1.2 C-erbB－2（Her2/neu）

C-erbB－2基因编码具酪氨酸蛋白激酶活性的跨膜糖蛋白Her2/neu，表皮生长因子受体家族成员之一。有结果显示近70％浸润性胰腺导管癌过度表达Her2/ neu。正常胰腺导管上皮不表达Her2/neu，82%的平坦型病变导管，86%的乳头状病变导管，92%的有异型的乳头状病变导管上皮表达Her2/neu[4]。胰腺癌中Her2/neu的强表达可能与肿瘤早期增殖有关，为早期诊断和治疗提供了线索。1.3 Bcl-2 Bcl-2的过度表达见于约50%的胰腺癌，可阻止胰腺癌细胞凋亡，导致肿瘤形成。但无转移的高分化胰腺癌的Bcl-2蛋白的表达明显高于有转移的低分化胰腺癌[5]。1.4 p8 40％以上的胰腺癌过表达p8基因产物，与分化程度、淋巴结转移相关，而与预后无关[

6、7]。

其他如Myc、C-fos、c-raf、HLA-DR-α和C-met基因都与胰腺癌有较大的关联。2.抑癌基因 2.1 p16 P16能抑制细胞周期蛋白D1－细胞周期依赖激酶CDK4/6，使细胞稳定的处于G1期，从而破坏整个通路。p16基因失活使活化转录因子释放，促进了细胞周期。约90％胰腺癌有p16基因异常[8]。据美国俄亥俄州大学研究，化学诱导的大鼠胰腺癌中90.3％与p16失活有关 [8]。检测p16基因突变可为胰腺癌早期诊断提供依据。2.2 p53

活化的p53上调p21，作用于细胞周期蛋白E/CDK2而避免细胞周期停滞于G1/S期。P53作用的另一个靶基因是其负调控因子MDM2。另外P53蛋白还能诱导细胞凋亡，阻止有癌变倾向的细胞产生[8]。约40％－75％的胰腺癌肿存在p53基因的异常。

血清中ｐ53蛋白浓度可用于胰腺癌的诊断及判断肿瘤的进展。2.3 DPC4 进化上非常保守的Smad基因家族。产物蛋白是TGF-β受体信号传导途径中的必需物质。DPC4的丢失可使细胞过度生长。临床上发现近50％胰腺癌都存在DPC4的缺失。DPC4失活被认为是肿瘤发生中的晚期事件。

其他如LKB1/STK11[9]、APC和MCC[10]、DCC[11]、MPP[12]、TGF-β超家族[13]、三联脆组基因FHIT[14]等也有资料表明其与胰腺癌的发生发展具相关性。3.基因组维持基因 3.1端粒酶

端粒酶是细胞核内的核糖核蛋白酶，具有逆转录酶的活性。人正常体细胞端粒酶活性为阴性,而90％左右恶性肿瘤细胞端粒酶呈活化状态。Hiyama等报道95％的胰腺癌组织中端粒酶活性呈阳性,而11例良性胰腺肿瘤均呈阴性[10]。因此端粒酶可作为胰腺癌诊断的基因标记物。3.2 BRCA2 最近的研究发现具有BRCA2胚系突变的病人其患胰腺癌的危险性明显增加。Goggins等发现在41例胰腺癌中，15例存在BRCA2杂合子缺失，4例存在突变[15]。4.血管生成相关基因

近年来的肿瘤研究确立了肿瘤血管生成在肿瘤生成、发展中的地位和作用。肿瘤血管生成相关基因的检测有助于胰腺癌预后的判断，但作为诊断手段尤其早期诊断还需要进一步研究。5.基因芯片技术

基因芯片技术是80年代发展起来的新兴技术，是基因突变分析、基因测序和基因表达研究的高效手段，具有高度敏感性、特异性和准确性。

利用基因芯片技术可筛选出在胰腺癌中呈特征性表达的基因，作出早期准确的诊断。更重要的是应用基因工程的方法来校正这些变异基因,可达到治愈肿瘤的目的。

Ⅱ.其他类型胰腺肿瘤 1.胰腺内分泌肿瘤

研究中发现胃泌素瘤和胰腺内分泌肿瘤中MEN－1等位缺失的发生率58.4％，突变的发生率23.2％。胃泌素瘤的基因半定量PCR分析发现与HER-2/neu相关。胰腺无功能内分泌肿瘤中，大部分有p16的失活，55％的无功能性胰腺内分泌肿瘤有DPC4/Smad4的异常。

2.导管内乳头粘液瘤(IPMT)：

65％IPMT有K-ras突变（浸润性腺癌90％突变），p16和p53杂合子的缺失在浸润性IPMT中明显高于非浸润性IPMT[16]。

二、基因治疗 Ⅰ.基因治疗策略

1.恢复抑癌基因和抑制癌基因

重新引入野生型抑癌基因拷贝修复突变基因的功能，来抑制肿瘤生长或诱导肿瘤细胞调亡，这在高突变率的个体中，并没有很大意义。关键是干扰肿瘤细胞持续性生长的途径。胰腺癌中主要用反义核酸和核酶技术直接破坏癌基因的mRNA的转录。如将含K-ras反义核苷酸的脂质体质粒载体经腹腔注射胰腺癌小鼠模型，获得明显的治疗效果[17]。2.酶解药物前体疗法

将非哺乳动物某些酶通过基因转导入肿瘤部位，再给予无毒性前体药物治疗，其经酶解代谢后的毒性产物在局部具有高浓度，能将肿瘤细胞杀死，而全身反应轻微。

在酶解药物前体治疗研究中还发现存在“旁观者效应”，利用已转导的肿瘤细胞杀死未发生基因转导的肿瘤细胞，或抑制其生长。3.免疫疗法

肿瘤的免疫治疗就是诱导及增强抗肿瘤的免疫反应。主要包括应用肿瘤疫苗、转染某些细胞因子基因和利用抗体等对肿瘤进行治疗。以肿瘤疫苗研究较为深入。Schnurr等将胰腺癌细胞提取物载入树突细胞制备抗肿瘤疫苗，避免了单一抗原的局限性，结果表明此种疫苗可以诱导较强的Ｔ细胞抗肿瘤免疫反应[18]。4.抗肿瘤血管生成

Kuo等构建的表达vEGF受体Flk1的病毒载体，通过离体和在体转染胰腺癌细胞，抑制胰腺癌生长[19]。Ⅱ.基因转导系统

肿瘤基因治疗受基因转导载体的限制，包括载体的有效浓度和转导的生物有效性。目前使用的基因转导方法有三种：病毒、非病毒和物理方法。常用的病毒载体有逆转录病毒、腺病毒和腺相关病毒；非病毒载体有裸DNA技术和脂质－DNA复合物；物理方法主要有细针注射和电穿孔[20]。病毒载体仍然是目前最有效的基因转导方法。

目前已有用于胰腺肿瘤细胞的逆转录病毒载体，如单克隆鼠白血病病毒（MoMLV）[21]。腺相关病毒（AAV）载体也已经用于胰腺癌细胞的基因转导[22]。

杂交载体转导是基因转导系统中的转折点。它既保留了原病毒载体的特性，又能解决滴度和免疫应答的问题。Ⅲ.胰腺癌基因治疗的靶基因 1.K-ras 消除优势途径：Kuzumaki等从原癌基因v-H-ras得到一种突变N116Y，通过脂质体将其导入8种具有K-ras突变的人胰腺癌细胞株后，发现可抑制细胞株的生长，而对正常的细胞则不起作用[23]。

免疫治疗途径：胰腺肿瘤肽可放大抗原递呈效应，细胞毒T细胞（CTL）对突变 4 的ras肽反应，能暂时将胰腺癌细胞株杀死 [24]。

反义RNA及核酶途径：在裸鼠模型中转导含反义RNA的质粒，能抑制胰腺肿瘤的生长[17]。另外的研究表明，用腺病毒系统转导针对K-ras第12密码子突变的核酶，发现突变的K-ras的mRNA和Bcl-2蛋白明显减少，并且能抑制肿瘤生长和诱导肿瘤细胞凋亡[25]。2.P16 直接在胰腺肿瘤部位或通过门静脉注射含p16的腺病毒载体（Adp16），在切除肿瘤后能抑制肿瘤的转移[26]。3.P53 腺病毒转导野生型p53至胰腺肿瘤细胞，在体内外均能抑制肿瘤细胞的生长。在体内研究中，同时转染p53和p16能提高细胞凋亡的程度。所以至少在胰腺癌模型中，可以得出p53和p16在诱导细胞凋亡上具有协同作用。

最近的研究中发现88％以上的胰腺癌与CaSm（肿瘤相关类sm原癌基因）有关，特别是与肿瘤的恶性表现联系紧密。腺病毒转导CaSm至胰腺肿瘤后，在体内外能抑制肿瘤细胞生长[27]。

三、结语

综上所述有关胰腺癌基因学方面的研究进展很快, 虽然目前尚未发现特异表达于胰腺癌组织的基因，但利用分子生物学技术检测这些基因改变,有希望成为一种新的早期诊断方法。

胰腺癌的基因治疗取得了可喜的进展。尽管目前采用的任何一种基因治疗措施都不尽完善,还存在许多问题,肿瘤的基因治疗已经显示了良好的发展前景,经过研究者们的不懈努力,通过基因治疗治愈胰腺癌有望成为本世纪新的有效治疗手段。

参考文献

1.Parker SL, Tong T, Bolden S, et al.Cancerstatistics.CA Cancer J Clin 1997;47(1):5-8 2.Dergham ST, Dugan MC, Arlauskas P, et al.Int J Pancreatol 1997;21(3):225-234.3.Hugh EM, Jacquekine L, Christine L, et al.A prospective study of K-ras mutation in the plasma of pancreatic cancer patient.Clin Cancer Res1998;4(2):272-275

4.于观贞.胰腺癌的分子变化基础及分子诊断.国外医学·生理、病理科学与临床分册2003;23(1):64－67 5.Nio Y, Dong M, Iguchi C, et al.Expression of Bcl-2 and p53 protein in resectable invasive ductal carcinoma of the pancreas: effects on clinical outcome and efficacy of adjuvant chemotherapy.J Surg Oncol2001;76(3): 188-196 6.Su SB, Motoo Y, Iovanna JL, et al.Overexpression of p8 is inversely correlated with apoptosis in pancreatic cancer.Clin Cancer Res 2001;7(5): 1320-1324

7.Su SB, Motoo Y, Iovanna JL, et al.Expression of p8 in human pancreatic cancer.Clin Cancer Res 2001;7(2): 309-313

8.Sarah M Cowgill, Peter Muscarella.The genetics of pancreatic cancer.The American Journal of Surgery 2003;186: 279–286 9.Su GH, Hruban RH, Bansal RK, et al.Germline and somatic mutations of the STK11/LKB1 Peutz-Jeghers gene in pancreatic and biliary cancers.Am J Pathol1999;154(6): 1835-1840

10.Hiyama E, Kodama T, Shinbara K, et al.Telomerase activity is detected in pancreatic cancer but not in benign tumors.Cancer Res1997;57(2): 326-331 11.Iwao T, Hiyama E, Yokoyama, et al.Telomerase activity for the preoperative diagnosis of pancreatic cancer.J Natl Cancer Inst 1997;89(21): 1621-1623

12.Xinqun Yang, Edgar D.Staren, John M.Howard, et al.Invasiveness and MMP Expression in Pancreatic Carcinoma.Journal of Surgical Research 2001;98:33–39 13.张俐,世珍,徐克强.TGF-β1和TβRⅡ在胰腺癌组织中的表达及临床意义.癌症.1999;18(2):246-248 14.蔡清萍,李海倩,付志仁等.三联脆组基因对胰腺癌细胞增殖及凋亡的影响.中华消化杂志2001;21(7):423-425.15.Nakao A, Oshima K, Takeda S, et al.Peritoneal washings cytology combined with immunocytochemical staining in pancreatic cancer.Hepatogastroenterology 1999;46(29): 2974-2977

16.Wada K.P16 and p53 gene alterations and accumulations in the malignant evolution of intraductal papillary-mucinous tumors of the pancreas.J Hepatobiliary Pancreat Surg 2002;9:76–85.17.Bouvet M, Bold RJ, Lee J, et al.Adenovirus-mediated wild-type p53 tumor suppressor gene therapy induces apoptosis and suppresses growth of human pancreatic cancer.Ann Surg Oncol 1998;5(8): 681-688

18.Schnurr M, Galambos P, Scholz C, et al.Tumor cell lysate-pulsed human dendritic cells induce a T-cell response against pancreatic carcinoma cells: an in vitro model for the assessment of tumor vaccines.Cancer Res 2001;61(17): 6445-6450 19.Kuo CJ, Farnebo F, Yu EY, et al.Adenovirus-mediated delivery of a soluble form of the VEGF receptor Flk1 delays the growth of murine and human pancreatic adenocarcinoma in mice.Surgery 2002;132(5): 857-865

20.Moutain A.Gene therapy: the first decade.Trends in Biotechnology 2000;18:119–128.21.Humphreys MJ, Greenhalf W, Neoptolemos JP, Ghaneh P.The potential for gene therapy in pancreatic cancer.International Journal of Pancreatology 1999;1:5–21.22.Kasuya H, Mizuno M, Yoshida J, Nishiyama Y, Nomoto S, Nakao A.Combined effects of adeno-associated virus vector anda herpes simplex virus mutant as neoplastic therapy.Journal of Surgical Oncology 2000;74(3):214–218.23.Takeuchi M, Shichinohe T, Senmaru N, Kuzumaki N.The dominant negative H-ras mutant, N116Y, suppresses growth of metastatic human pancreatic cancer cells in the liver of nude mice.Gene Ther 2000;7(6): 518-526。

24.Jaffee EM, Schutte M, Gossett J, et al.Development and characterisation of a cytokine-secreting pancreatic adenocarcinoma vaccine from primary tumours foruse in clinical trials.Cancer Journal Science American1998;4:194–203.25.Kijima H, Scanlon KJ.Ribozyme as an approach for growth suppression of human pancreatic cancer.Mol Biotechnol 2000;14(1): 59-72

26.Ghaneh P, Greenhalf W, Humpreys M, et al.Adenovirus mediated transfer of p53 and p16INK4A results in pancreatic cancer regression in vitro and in vivo.Gene Therapy 2001;8:199–208.27.Kelley JR, Brown JM, Frasier MM, et al.The cancer-associated Smlike oncogene: A novel target for the gene therapy of pancreaticcancer.Surgery 2000;128(2):353–360.8