第一篇：实验计划：MTT法检验某化合物X的抑癌作用
MTT法检验化合物X的抑癌作用实验计划
1.主要试剂和仪器
MCF-7细胞系
1640培养基
小牛血清
双抗：青霉素，链霉素
胰酶
四氮唑蓝(MTT)
二甲亚砜(DMSO)
CO2培养箱
96孔板
酶标仪
2.分组设计：
（1）给药组，加入化合物X的浓度可设为1 mg/ L、10 mg/ L、100 mg/ L三个浓度梯度，药物处理时间可设为12h、24h、36h、48h。
（2）阳性对照组，加入与给药组相应浓度的氟尿嘧啶（有待进一步确定），处理时间与给药组相同。
（3）空白对照组，不经药物处理。
（4）PBS对照组。
（5）调零组 不加细胞 相同处理。
本预实验选取10 mg/ L的化合物X浓度，处理48h。设3个平行孔。
3.实验流程：
培养MCF-7细胞
↓
加药处理
↓
MTT 法检测细胞生长抑制率
4.具体实验方法
4细胞培养：MCF-7细胞以5×10cells / mL密度接种在含10 %新鲜小牛血清、100 μg/
mL青霉素、链霉素的1640培养液中，置37 ℃、5 % CO2 孵箱中培养，隔天换液一次，取对数生长期细胞用于实验。
MTT 法检测细胞生长抑制率：取对数生长期细胞，在平底96 孔细胞培养板每孔加入5×104cells/ mL 100μL，培养24h后，换液，加入化合物X使其在细胞培养孔中的终浓度分别为10 mg/ L、100 mg/ L，以加有细胞而不含药物的培养液孔为对照，加入与药物等量的PBS对照。37 ℃、5 % CO2、饱和湿度，培养48 h 后，取出培养板，弃上清，每孔加入浓度为5 g/ L 的MTT 20μL，继续培养4 h，快速弃上清，每孔加细胞溶解液二甲亚砜150μL，震荡20 min，最后用酶标仪测定各孔于495 nm 下的OD值，计算肿瘤细胞杀伤率。细胞杀伤率以如下公式计算：细胞杀伤率(%)=(1-实验孔OD值/ 对照孔OD值)×100 %。根据各组药物对MCF-7细胞的细胞杀伤率，运用SPSS 软件中Probit 求出药物半数抑制浓度(IC50)。
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