产气荚膜梭菌肠毒素分离和鉴定方法[全文5篇]

第一篇：产气荚膜梭菌肠毒素分离和鉴定方法

产气荚膜梭菌肠毒素的分离和鉴定方法毒素检查

羊只死亡后，尽快取小肠内容物（最好是回肠内容物），加1%的氯仿防腐，在冷藏条件下送检。实验室在收到送检材料后，用生理盐水稀释2~4倍（若内容物稀薄，不必稀释），充分混合后经离心沉淀（3000 r/min）15 min，取上清液，用赛氏滤器过滤后，1份直接注射动物（两只），另1份加1%的胰蛋白酶粉，在室温处理1 h以致活ε和1毒素，破坏β毒素，然后注射另一组动物（两只）。若无离心机和赛氏滤器，可用滤纸反复过滤，直到滤液清朗即可。动物可用小鼠（静脉注射0.2 mL~0.4mL）或家兔（静脉注射2mL~4mL）。注射后至少观察24h，根据两组动物的反应情况作出判断。如肠毒素含量低，动物也可能于注射后一定时间内呈现轻度昏迷，呼吸加快，经1h左右可能恢复。.正常绵羊肠内容物注射后不引起反应。

也可用豚鼠进行毒素检查。方法为皮内注射上述检滤液0.2 mL~0.4 mL，观察48 h，如果有毒素存在，注射部可见坏死变化。中和试验

2.1

取灭菌试管5支，编为1、2、3、4、5号，然后按表1所列，分别加入含毒素滤液、抗毒素和生理盐水，每管总量为1.2 mL。混合后将5个管同时放置37C温箱中，中和40 min。

表1

中和试验方法加样表 管号 肠内容物滤液（mL）

抗毒素（mL）

生理盐水（mL）

中和 静脉注射小鼠 B 型 C 型 D 型 E 型 数量（只）

剂量（mL/只）0.9 0.3----37℃，40min 2 0.4 2 0.9-0.3---2 0.4 3 0.9--0.3--2 0.4 4 0.9---0.3-2 0.4 5 0.9----0.3 2 0.4 2.1.1 小鼠10只，分为5组，每组2只，各组依次静脉注射上述5个管中一个管中的混合液，注射剂量为每鼠0.4 mL，观察72 h，按表2判断结果。

表2

试验结果判定

第一种 结果 第二种 结果 第三种 结果 第四种 结果 第五种 结果 第六种 结果

B型血清+肠内容物滤液

活

肠 毒 素 是 A 型

活

肠 毒 素 是 B 型 活

肠 毒 素 是 C 型 活

肠 毒 素 是 D 型 死

肠 毒 素 是 E 型 死

1.不是魏氏梭菌毒素，考虑其它毒素或毒物

C型血清+肠内容物滤液

活 死 活 死 死 死 D型血清+肠内容物滤液

活 死 死 活 死 死 2.检查各型血清，尤其是B型血清是否失效 E型血清+肠内容物滤液

活 死 死 死 活 死