三氯化六氨合钴制备实验报告[合集5篇]

第一篇：三氯化六氨合钴制备实验报告

三氯化六氨合钴的制备实验报告

三氯化六氨合钴(?)的制备及其组成的 测定

一、实验目的

1.掌握三氯化六氨合钴(III)的合成及其组成测定的操作方法, 通过对产品的合成和组分的测定，确定配合物的实验式和结构。

2.练习三种滴定方法(酸碱滴定，氧化还原滴定，沉淀滴定)的操作。

3.通过对溶液的配制和标定、仪器的使用、处理实验结果等提高学生独立分析能力、解决问题的综合能力。.加深理解配合物的形成对三价钴稳定性的影响。

二、实验内容——三氯化六氨合钴(III)的制备及组成的测定

?、三氯化六氨合钴(III)的制备

(1)实验原理:

钴化合物有两个重要性质:第一，二价钴离子的盐较稳定;三价钴离子的盐一般是不稳定的，只能以固态或者配位化合物的形式存在。

显然，在制备三价钴氨配合物时，以较稳定的二价钴盐为原料，氨,氯化铵溶液为缓冲体系，先制成活性的二价钴配合物，然后以过氧化氢为氧化剂，将活性的二价钴氨配合物氧化为惰性的三价钴氨配合物。反应需加活性炭作催化剂。反应方程式:

2CoCl?6HO，10NH，2NHCl，HO====2[Co(NH)]Cl，14HO 223 422 363 2(橙黄色)(2)实验仪器及试剂:

仪器: 锥形瓶(250ml)、滴管、水浴加热装置、抽滤装置、温度计、蒸发皿、量筒(10ml、25ml、100ml)

药品:氯化铵固体、CoCl?6HO 晶体、活性炭、浓氨水、5%HO、浓 HCl、22222mol/L 的 HCl 溶液、乙醇溶液、冰、去离子水

(3)实验步骤:

在锥形瓶中，将 4gNHCl 溶于 8.4mL 水中，加热至沸(加速溶解并赶出 O2)，4 加入 6g 研细的 CoCl?6HO 晶体，溶解后，加 0.4g 活性炭(活性剂，需研细)，摇 22 动锥形瓶，使其混合均匀。用流水冷却后(防止后来加入的浓氨水挥发)，加入13.5mL 浓氨水，再冷却至 283K 以下(若温度过高 HO 溶液分解，降低反应速率，防止反应过 22 于激烈)，用滴管逐滴加入 13.5mL5% HO 溶液(氧化剂)，水浴加热至323~333K，22 保持 20min，并不断旋摇锥形瓶。然后用冰浴冷却至 273K 左右，吸滤，不必洗涤沉淀，直接把沉淀溶于 50ml 沸水中，水中含 1.7ml 浓盐酸(中和过量的氨)。趁热吸滤，慢慢加入 6.7ml 浓盐酸(同离子效应)于滤液中，即有大量橙黄色晶体([Co(NH)]Cl)析出。用冰浴冷却后吸滤，晶体以冷的 2ml 2mol/L HCl 洗涤，363 再用少许乙醇洗涤，吸干。晶体在水浴上干燥，称量，计算产率。

?、三氯化六氨合钴(III)组成的测定

(一)氨的测定

(1)实验原理:

由于[Co(NH3)]6Cl3 在强碱强酸作用下，基本不被分解，只有在沸热的条件下，才被强碱分解，所以式样液加 NaOH 溶液作用，加热至沸使其分解，并 磷酸溶液吸收，以甲基橙为指示剂，用 HCl 标准整出氨，整出的氨用过量的 2% 也滴定生成的磷酸氨，可计算出氨的百分量。

[Co(NH)]Cl，3NaOH====Co(OH)+6 NH+6 NaCl 3633 3+

NH+HBO==== NH HBO 333 423 NH HBO+HCl ==== HBO+ NHCl 423334(2)仪器与试剂:

仪器:250ml 锥形瓶、量筒、pH 试纸、滴定管

试剂:50ml2% H3BO3、HCl 溶液、甲基红溴甲酚氯

(3)实验步骤:

(1)用电子天平准确称取约 0.2g 样品于 250ml 管中，加 30ml 去离子水溶解，另准备 50ml2% HBO 溶液于 250ml 锥形瓶中，33(2)在 HBO 溶液加入 5-6 滴甲基红溴甲酚氯指示剂，将样品溶液倒入加 33 HBO 的锥形瓶中，然后将锥形瓶固定在凯氏定氮仪上，开启凯氏定氮仪，氨气33 开始产生并被 HBO 溶液吸收，吸收过程中，HBO 溶液颜色由浅绿色逐渐变为深3333 黑色，当溶液体积达到 100ml 左右时，可认为氨气已被完全吸收(也可利用 PH试纸检验氨气出口来确定氨气是否被完全蒸出)。

(3)用以用 NaCO 溶液标定准确浓度的 HCl 溶液滴定吸收了氨气的 HBO 溶 333 当溶液颜色由绿色变为浅红色时即为终点。读取并记录数据，计算氨的含量。

液，(二)钴的测定

(1)实验原理:-利用三价钴离子的氧化性，通过碘量法，即利用 I 的氧化性和I 的还原性 2 进行滴定用来测定钴的含量，以淀粉作指示剂。主要反应方程式: 3+[Co(NH)]Cl，3NaOH====Co(OH)+ 6NH+6 NaCl 3633 3+ Co(OH)+3HCl==== Co+ 3HO 323+-2+2 Co+2I====2 Co+I2-2-2-I +2SO ====2I+ SO22346

?仪器与试剂:

仪器:250ml 锥形瓶、250ml 碘量瓶、电炉、量筒、pH 试纸(精密)、电子天平、试剂:KI 固体、10, NaOH 溶液、6mol/LHCl 溶液、NaSO 溶液、2,淀粉 223 溶液

?实验步骤:

用电子天平准确称取 0.2g 样品于 250ml 锥形瓶中，加入 20ml 去离子水，10ml 10, NaOH 溶液，置于电炉微沸加热至无氨气放出(用 PH 试纸检验)。冷却至室温后加入 20ml 水，转移至碘量瓶中，再加入 1g KI 固体，15ml 6mol/LHCl 溶液，立即盖上碘量瓶瓶盖，充分摇荡后，在暗处反应 10min 后拿出。用已准确标定浓度的 NaSO 溶液滴定至浅黄色时，再加入 1ml 2,的淀粉溶液，继续滴 223 至溶液为粉红色即为反应终点(滴定开始阶段应迅速滴加，防止 I2 挥发)。读取并记录实验数据并计算钴的百分含量。

(三)氯的测定

?实验原理:

利用摩尔法测定氯的含量，即在中性或弱碱性溶液中，以 KCrO 作指示剂，24+2-用 AgNO 标准溶液滴定 Clˉ，由于 2Ag+CrO=AgCrO?(砖红色), Ksp=2.0×3424-12 +--1010;Ag+Cl=AgCl?(白色), Ksp=1.8×10, 由于 AgCl 的溶解度比 Ag CrO4+小，根据分布沉淀原理，溶液中首先析出 AgCl 沉淀，化学计量点附近，由于 Ag2-浓度增加，与 CrO 生成砖红色 AgCrO 沉淀指示滴定终点。另外为了准确滴定 424-Cl，需控制指示剂的浓度。根据实验数据计算氯的含量。

?仪器和试剂:

仪器:100ml 容量瓶，250ml 锥形瓶，酸式滴定管，玻璃棒，25ml 移液管 试剂: 2.5%的 KCrO 溶液，AgNO 溶液 243 ?实验步骤:

用电子天平准确称取约 0.2g 的样品用去离子水溶解，然后转移至 100ml 的容量瓶中定容，取 25ml 样品溶液于锥形瓶中，加入 5 滴 2.5%的 KCrO 溶液作指 24 示剂，用已准确标定浓度的 AgNO 溶液滴定，溶液由黄色变为砖红色且砖红色 303 秒不消失(不需摇动)即为终点，读取并记录数据，计算氯的含量。

(四)分裂能的测定

?实验原理:

分光光度法测量的理论依据是伯郎—比耳定律:当容液中的物质在光的照射和激发下，产生了对光吸收的效应。但物质对光的吸收有选择性，各种不同的物质的吸收光谱不同。所以当一束单色光通过一定浓度范围的稀有色溶液时，溶液对光的吸收程度 A 与溶液的浓度 c(g/l)或液层厚度 b(cm)成正比。其定律表达式 A=abc(a 是比例系数)。当 c 的单位为 mol/l 时，比例系数用 ε 表示，则 A=-1-1εbc 称为摩尔吸光系数，其单位为 L?mol?cm 它是有色物质在一定波长下的特征常数。

?仪器和药品:

分光光度计、烧杯、比色皿、样品溶液、去离子水

?实验步骤:

用电子天平称取样品约 0.1g，用去离子水溶解后用分光光度计测量其吸光度，测量波长在 400nm 至 600nm 处，注意要以去离子水设置空白实验。

?实验数据处理

m=0.1010g [Co(NH3)6]Cl3 表 1.波长:nm 400 420 440 460 470 475 480

吸光度 0.130 0(277 0(572 0.862 0.945 0.960 0.952

波长:nm 500 520 540 560 580 600 吸光度 0.729 0.377 0.136 0.045 0.021 0.014

三氯化六氨合钴的波长与吸光度的关系图

由图知:三氯化六氨合钴的最大吸收峰是 0.960，对应波长为 475nm

分裂能:

h，c E,，6.02，10^23J/mol 入

-348-723= 6.626×10×3×10?4.75×10×6.02×10

5=2.519×10J/mol

三、实验数据处理:

(1)三氯化六氨合钴的制备

[Co(NH3)6]Cl3 的制备产率

得到产品 m=3.26g

6.0，267.5,6.77g 称取样品 6.0g，理论产品质量为 M= 237.9 3.26 产率=，100%,48.2%6.77(2)氨的测定

氨的含量计算

m [Co(NH)]Cl=0.2032g C =0.1723mol/L 363HCl

滴定管读数: 滴定前:5.00ml 滴定后:32.42ml 消耗 27.42ml

根据反应方程式得 HCl 与 NH3 的计量比为 1:1，170.1723，27.42，17CHClVHCl3%，，100%,39.53%NH1000，样重 1000，0.2032 故样品中 1mol 样品中所含氨的物质的量为 0.3953×267.5?17=6.22mol

(3)钴的测定

已标定 NaSO 的浓度为 0.02393 mol/L 223 样品质量 m=0.2091g

滴定管读数 滴定前:0.11ml 滴定后:33.81ml 故 NaSO 体积为 33.70ml 2233+ 根据化学反应方程式可知 Co 与 NaSO 的计量比为 1:1 223，58.93CVNa2S2O3Na2S2O3%,Co1000，样重故样品中

0.02393，35.19，58.93,，100% ,23.73% 1000，0.2091 1mol 样品中所含钴的物质的量为 0.2373×267.5?58.93=1.08mol

(4)氯的测定

称取样品的质量 m=0.2053g 样品 已标定的 AgNO 的浓度 C=0.03110mol/L 3AgNO3 滴定管读数 滴定前:5.10ml 滴定结束:25.80ml 滴定用 AgNO 的体积 V=20.70ml 3AgNO3+-Ag+Cl=AgCl? 计量比为 1:1，35.50.03110，20.70，35.5CAgNO3VAgNO3%,，100%,11.13%所以 , Cl1000，样重 1000，0.20531mol 样品中所含氯的物质的量为0.1113×267.5?35.5=0.84mol

[Co(NH)]Cl 的含量测定结果汇总 363 氨 钴 氯

实验结果 39.53% 23.73% 11.13%

[Co(NH)]Cl 的理论结果 38.13% 22.06% 39.81% 363 偏差 1.40% 1.67%-28.68%

相对偏差 3.67% 7.57%-72.04%

摩尔比 氨:钴:氯=6.22:1.08:0.84

样品的实验式 [Co(NH)]Cl360.8

四、结果讨论误差与分析:

(1)样品产率低，原因有:

? 氯化铵加热时过度和温水浴时会释放出氨气，导致产率的下降。

? 冷水浴时不够完全，有部分固体没有析出或晶体析出后再溶解。

? 抽滤时滤纸会粘附一部分，导致损失

? 在反应搅拌与产品烘干时，都会导致损失

(2)通过对组分测定，氨、钴的含量偏高，氯的含量比较低。原因有:

? 氨的测定中，滴定终点判断有偏差，导致实验数据的误差。

? 钴的测定中，加淀粉时的黄色判断有点晚。

? 钴的测定中，滴定管最后产生个小气泡，使 Na2S2O3 滴定的体积偏小，影响实验。

? 氯的测定中，滴定终点不好把握，在没有达到终点时即停止滴定，导致误差较大。

? 产品中可能有其他物质，比如二氯化五氨合钴。

五、注意事项:

(1)三氯化六氨合钴的制备:

? CoC?6HO 溶解后加入活性炭冷却不能太慢，因为氯化铵在溶液中加热后 l22 会有氨气放出，活性炭在使用前一定要充分研磨以提供较大的比表面积;

? 加 HO 前必须降温处理，一是防止其分解，二是使反应温和的进行。

? 加 HO 时要逐滴加入，不可太快，因为溶液中的物质会与 HO 反应，会使 2222反应太剧烈，会产生爆炸。

? 两次冰浴冷却要充分，有助于沉淀的析出，提高产率。

? 趁热吸滤后加入 6.7mL 浓 HCl 是用同离子效应增加产率，若浓 HCl 加入过多，会因稀释作用而产生盐效应而使溶解度加大，从而降低产率(2)三氯化六氨合钴组分的测定:

? 分析天平称得质量要?0.2g，因为分析天平的精确度为 0.0001g，一次实验要称两次，误差为 0.0002g，要求误差?1‰，所以要大于 0.2g;

? 滴定管快滴定完时，要把悬浮的液体刮锥形瓶，减小误差;

?碘量瓶要用磨口塞子，防止碘的升华;

?碘量法测定钴，在碘量瓶中加入 KI 固体和 HCl 后应立即将碘量瓶转移至暗处;

?Cl 的测定中，在滴定后期，不要震荡锥形瓶，加入后产生砖红色，30 秒不 变色就为终点;

? 分光光度仪使用前要润洗，而且要用手拿磨光面，把亮光面擦拭干净。

六、思考题:

1.在[Co(NH)]Cl 的制备过程中氯化铵，活性炭，过氧化氢各起什么作用 363 答.(1)氯化铵的作用: 2+在没有铵盐的情况下，氨水遇钴盐后，即生成蓝色氢氧化钴(?)沉淀:Co + 2OH-?Co(OH)2?。此沉淀易溶于过量的沉淀剂和铵盐溶液中。当有铵盐存在时，2+2 将抑制 NH3?H2O 的解离，即抑制 OH-的产生使 [Co][OH-]达不到 氢氧化钴(?)的溶度积而形成[Co(NH3)6]2+，它随后被空气中的 O 氧化，生成 Co(?)配合物。2 另外，氯化铵还能提供产物所需的 NH。(2)活性炭起催化剂的作用，吸附反应物。

(3)过氧化氢起氧化剂的作用。

2+3+2.[Co(NH)]与[Co(NH)]比较，那个稳定，为什么, 36363+2+3 2 答:[Co(NH)]稳定，因为[Co(NH)]中心原子采用 spd 杂化，即外轨成键，36363+ 23 而[Co(NH)]中心原子采用 d sp 杂化，即内轨成键，根据配合物的价键理论，36 形成体与配位数相同的配合物，内轨型比外轨型稳定。

3、何为稀度,

答:所谓稀度即溶液的稀释程度，为物质的量浓度的倒数，如稀度为 128，表示128L 中含有 1mol 溶质。

第二篇：生物制品学实验报告----三价副猪嗜血杆菌油乳剂灭活疫苗的制备及检验（小编推荐）

三价副猪嗜血杆菌油乳剂灭活疫苗的制备及检验

副猪嗜血杆菌是猪格拉泽氏病(Glasser’s disease)的病原菌，属于巴斯德菌科嗜血杆菌属，是一种多形态、非溶血性、不运动、NAD 依赖型、革兰氏阴性细小杆菌。对营养要求比较苛刻，培养时必须供给含有V 因子（NAD）或（NADP)的新鲜血液才能生长。此菌有多种血清型，其中强毒力的有1、5、10、12、13、14型，常可致死动物；中等毒力的有2、4、8、15型，多表现为多发性浆膜炎，不致死；低毒力的有3、6、7、9、11型，常无临床表现和病变。在中国，4型和5型是主要分离株，而澳大利亚和丹麦的主要血清型为5型和13型。在研究2、4、5、12、13和14型间的交叉保护性时发现，除了血清12型制备的单菌和血清2、12型制备的二价苗外，其他型都能对同源菌株产生保护；用血清4型制备的菌苗，可以保护血清5型的攻击；用血清4、5型制备的二价菌苗，可以抵抗血清13、14型的攻击（仔猪病变的严重性和病死率明显降低）。三价灭活疫苗主要用于预防猪副嗜血杆菌病。该苗针对性强，安全可靠，能有效降低发病率和死亡率。一、实验目的 了解副猪嗜血杆菌油乳剂灭活苗制作的流程。2 掌握副猪嗜血杆菌油乳剂灭活苗制作的操作技术。

二、乳化的原理

乳化剂能降低分散物的表面张力，在微滴（粒）表面形成薄膜或双片层，以阻止微滴（粒）的相互凝结。

三、材料，试剂，培养基

（1）器材：不锈钢锅（或瓷锅）、电炉、乳化器、量筒、玻璃棒、离心机、吸管等。

（2）试剂：、甲醛（灭活剂）、白油（抗原油相）、Span-80（油相乳化剂）、Tween-80（抗原水相乳化剂）、硬脂酸铝（稳定剂）、4、5、13型分离菌株（抗原）。（3）培养基的制备：

1、配制0.2%的V因子

准确称0.2g的NAD（辅酶I）加入100mlddH2O，用0.22um的细菌过滤器过滤除菌，4°C保存备用。

2、制备TSA培养基

称16gTSA加入348ml双蒸水，121°C高压灭菌20min，当温度到50°C左右时（放入50°C水浴锅）加入0.2%的V因子，使V因子浓度达100ug/ml，然后加入32ml的灭活新生牛血清

100ml----4g TSA-----5ml V因子-------8ml血清

3、TSB培养基

称3gTSB于87 ml双蒸水中溶解。121°C高压灭菌15min，冷却至50°C左右，加入已配制的0.2%的V因子5ml，再加入灭活的新生小牛血清8ml，使血清浓度达0.8% 100ml-------3g TSB----5ml V因子----8ml血清

四、实验内容

（1）菌株菌液制备及培养繁殖 将副猪嗜血杆菌三株菌种按分别划线接种于TSA固体培养基平板上，37°C恒温培养18-24h，挑取单个菌落接种于TSB液体培养基中，37°C振荡培养12-16 h后，再将此菌液按l%的比例加入新配制的TSB液体培养基，37℃振荡培养12-16h后，按平板菌落计数法计数。培养24h后，收集菌液，用分光光度计法测定细菌总菌含量。经检验合格者作为制苗抗原。（2）制苗抗原的浓缩和细菌的灭活

将纯检合格的制苗抗原培养物以超滤器浓缩，作为制苗用浓缩抗原。然后按TSB液体培养基总体积加入终浓度为0.2%的甲醛（先10倍稀释），充分摇匀后，37°C温箱中灭活14h或分别在4、8、12、16、20h和24h取灭活菌液于TSA固体培养基划线培养，置普通恒温箱中37℃培养48h，观察细菌灭活效果。37°C灭活14h可达到较好的效果。（3）制苗用水相的制备

根据培养24h后的分光光度计法或麦氏比浊管测定的总菌数结果，参照培养12-16h的平板菌落计数法计数结果。取灭活的三种血清型按照一定的比例（等量）混合抗原液96份，然后过滤, 除去沉渣及杂物, 加入4份即终浓度为4%灭菌的Tween-80(96∶4)充分混匀, 边加边搅拌，使其充分融化（可加热助溶，温度低于37℃）, 作为制苗用水相，水相要摇匀，让吐温-80充分溶解。（4）制苗用油相的制备

取10号白油93份（先加一部分，后补足）置于不锈钢锅中缓慢加热后，加入硬脂酸铝1份，边加边搅拌，直到透明为止，再缓慢加入6份Span-80(司本-80)，充分混匀，121℃高压蒸汽灭菌3Omin，冷却至室温备用。或者按比例将工业白油94份置于不锈钢锅（或瓷锅）中加热后，缓慢加入6份 Span-80，混合后按总量加入2%硬脂酸铝，溶化后，继续升温至160℃，维持10min，待冷却后即可制苗。切勿用少量的白油与硬脂酸铝混合后边煮边搅拌，那样很容易烧焦冒烟。（5）疫苗的制备（乳化工艺）

按油相与水相2：1（v/v）混合乳化。即1份水相配2份油相在高速搅拌器中搅拌。先将处理好的油相2份置于高速搅拌器中，低速搅动油相，同时缓慢加入水相l份(油∶水= 2∶1)，乳化时胶体磨转速由慢变快，最后以8，000一10，OO0r/mln高速乳化2一5min，使水油充分乳化。乳剂混匀，分装于灭菌疫苗瓶中。在乳化过程中亦可根据乳剂黏稠度适当调整油、水相比。制成乳白色的W/O型油乳佐剂疫苗。

（6）油乳剂检验：油乳剂检验项目包括乳剂类型检查、黏度测定、稳定性测定、粒度大小及分布检测等，生产实际中以黏度测定与稳定性测定为主。在每批苗分装过程的前、中、后各抽样2瓶供物理性状检验及安全检验。无菌检验： 将制备好的灭活油乳苗分别接种于普通肉汤培养基和血琼脂培养基中 , 于37 ℃温箱中培养10 d, 观察有无细菌生长。均应无菌生长方合格。物理性状检验 : 观察疫苗颜色：眼观应为均匀一致的乳白色黏稠乳剂。稳定性检测 ：1）离心加速法，将疫苗置于 10m l 离心管内, 3 000 r/min离心15min水油不分层，可保存1年以上不破乳。2）加速老化法，疫苗于37℃储存10-30d不破乳，说明其稳定性良好。黏度检验：最简易的方法是在室温条件下用吸管吸取1ml乳剂, 然后垂直放出, 记录放出0.4ml所需时间。垂直放出0.4ml所需要的时间作为黏度单位，以0.4ml 2-6s为合格，说明黏度适中, 适合于注射应用，不得多余10-15s。

5剂型检测：将疫苗数滴滴于冷水表面, 观察油滴扩散情况，即观察疫苗滴于水中是否呈油滴状且不分散。滴于水中油滴呈规则的圆形, 未见扩散现象, 说明疫苗为油包水剂型。

6安全检验：对最小使用日龄靶动物一次单剂量接种的安全性灭活疫苗接种途径只有一种，就是肌肉注射。每批三价灭活苗随机取样3瓶,等量混合后接种兔2只,每只肌肉注射2mL；接种14日龄哺乳仔猪，每组5头，每头猪接种2ml，另设5头猪作为阴性对照，于耳后肌肉注射5-10 mL, 观察仔猪的临床表现，并每日测定体温，持续2周。

五、小结

（1）副猪嗜血杆菌对营养要求比较苛刻，培养时必须供给含有V 因子（NAD）或（NADP)的新鲜血液才能生长。且具有非常多的血清型，纯化非常困难。故对菌的纯化及灭活和疫苗的安全性试验是生产灭活苗的关键环节。由于副猪嗜血杆菌，在菌液制备的过程中容易生长杂菌，我们纯化了很多次菌，液体仍然很浑浊，使得实验进展延后。（2）注意事项： 细菌灭活过程中，甲醛浓度越高，碱性溶液中的抗原性损失就越大。故甲醛要注意适量 2 制备油相时，要使Span-80和硬脂酸铝充分溶解。3 制备水相时，抗原与Tween-80充分混匀。乳化时，油相必须冷却后方可与水相混和乳化，以防油温过高使抗原性降低。5 注意先加入油相后再加入水相，充分搅拌。6 疫苗在4℃、暗处保存，切勿冰冻。7 一定要做好安全检验