实验报告等电点聚焦测蛋白质等电点[5篇范文]

第一篇：实验报告等电点聚焦测蛋白质等电点

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等电点聚焦测蛋白质等电点 1.了解蛋白质的两性解离性质和等电点聚焦的原理； 2.学习测定蛋白质等电点的方法并掌握圆盘电泳技术。

二.实验原理 等电点聚焦（IEF）是在电场中分离蛋白质技术的一个重要发展，IEF 实质 就是在稳定的 pH 梯度中按等电点的不同分离两性大分子的平衡电泳方法。

在电场中充有两性载体和抗对流介质，当加上电场后，由于两性载体移动的 结果，在两极之间逐步建立起稳定的 pH 梯度，当蛋白质分子或其它两性分子存 在于这样的 pH 梯度中时，这种分子便会由于其表面电荷在此电场中运动，并最 终到达一个使其表面静电荷为 0 的区带，这时的 pH 则是这种分子的 pl。聚焦在 等电点的分子也会不断地扩散。一旦偏离其等电点后，由于 pH 环境的改变，分 子又立即得到正电荷或负电荷，从而又向 pl 迁移。因此，这些分子总是处于不 断地扩散和抗扩散的平衡之中，在 pl 处得以“聚焦”。

三.实验步骤 1.凝胶制备 按表 1 的比例配制 4ml 工作胶液，在真空干燥器中抽气 10min。每组 4 管，每管 加胶液 1.8ml。混匀后立即注入到已准备好的凝胶管中，胶液加至离管顶部 1cm 处，在胶面上再覆盖 3mm 厚的水层，应注意不要让水破坏胶的表面，室温下放置 20〜30min 即可聚合。

表 1 凝胶工作液配比 凝胶母液（丙烯酰胺 30%甲叉双丙烯 酰胺 0.8%）

1ml 10%±硫酸铵 0.02ml 水 2.68ml 载体两性电解液 0.15ml 蛋白样品液 0.1ml,0.05ml TEMED 0.02ml 2.电泳 吸去凝胶柱表面上的水层，将凝胶管垂直固定于圆盘电泳槽中。于电泳槽下槽加 入0.2 %的 500ml 硫酸作正极；上槽加入 0.5 %的 800ml 乙醇胺作负极打开电源，/ 4

将电压恒定为 300V,因为聚焦过程是电阻不断加大的过程，故聚焦电泳过程中，电流将不断下降，降至稳定时，即表明聚焦已完成，继续电泳约 30min 后，停止 电泳，全程约需 3h。

3.剥胶 电泳结束后，取下凝胶管，用水洗去胶管两端的电极液，按照柱状电泳剥胶的方 法取出胶条，以胶条的正极为“头”，负极为“尾”，正极端呈酸性，负极端呈碱 性。剥离后，量出并记录凝胶的长度。

4.固定 取其中的凝胶条 3 根置于一个小培养皿内，倒入 10%放在三氯乙酸固定液中固定，约半小时后，即可看到胶条内蛋白质的白色沉淀带。

固定完毕，倒出固定液用直 尺量出胶条长度 L i 和正极端到蛋白质白色沉淀带中心，即聚焦部位的长度 L 2 o 5.pH 梯度的测量 切段法：将未经固定的 1 根胶条，按照从正极端（酸性端）到负极端（碱性端）的顺 序切成相等的 10 段，按次放人有标号的、装有 0.0IM 氯化钾的试管中，浸泡过 夜。然后用 pH 计测出每管浸泡液的 pH 并记录。

四•实验结果 1.凝胶条的长度及染色蛋白带的位置 凝胶条编号 1 2 3 4 固定前的长度 7.8cm 7.8cm 7.4cm 7.7cm L o

固定后的长度 7.7cm 7.8cm 7.4cm 未染色，测 pH L 1

梯度 蛋白带距酸端 1.3cm 1.4cm 1.3cm

距离 L 2

蛋白质距正极 1.32cm 1.4cm 1.3cm

实际长度 L S

2.pH 梯度表及其相应标准曲线 标号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 长度 /cm 0.77 0.77 0.77 0.77 0.77 0.77 0.77 0.77 0.77 0.77 pH 值 3.05 3.72 5.04 6.76 7.24 7.99 8.62 9.58 10.1 4 10.1 8 / 4

蛋白质样品等电点的计算：

蛋白质聚焦部位距凝胶条正极端的实际长度 =固定后的蛋白区带中心距凝胶条正 极端的距离*固定前凝胶条长度/固定后凝胶条长度 则将上述数据代入 L F L 2 *

-L O，求出蛋白质距正极实际长度 L s 分别为 1.3cm、1.4cm、L I

1.3cm o 由凝胶条 1、2 和 3 及其相应蛋白带距离可计算出蛋白带距酸端的平均距 离：(1.3+1.4+1.32)/3=1.34 ②计算出蛋白质聚焦部位距凝胶条正极端的实际长度后，直接从 pH 梯度曲线上 求出该蛋白质等电点。

得出其标准公式为：y = 0.8372X + 2.6273 则待测蛋白质的等电点为 0.8372*1.34+2.6273=3.75 五•实验分析及讨论(1)实验结果测得的样品蛋白的等电点为 3.75，通过查常见蛋白质等电点参 考值表格可知，其为 B-卵黄脂磷蛋白。由于记录凝胶长度及蛋白质距正极的距 离存在读数误差，所以也可能是伴花生球蛋白(3.7-5.0)o(2)

等电点聚焦测蛋白质等电点分辨率高，可将等电点相差 0.01 — 0.02pH 单位 的蛋白质分开。不像一般电泳易受扩散作用影响，使区带越走越宽；聚焦电泳则 能抵消扩散作用，使区带越走越窄。同时，很稀的样品也可以聚焦而浓缩，实验 操作起来也简单方便。

(3)其存在其不足之处是在实验操作过程当中，读数的取值、样品溶液是否含 盐、在等电点时蛋白质是否溶解或变性，都会影响实验结果。因为盐会增大电流 量，产生热量；盐分子移至两极时，将产生酸或碱，中和两性电解质。由于这些 影响因素的存在，个人认为利用这一种方法还不足以鉴定出蛋白质种类。/ 4

附 常见蛋白质等电点参考值

第电点 实 m 质 SFfe

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第二篇：点赞电商 点赞

佛山点赞网络科技有限公司（点赞电商）成首批进驻佛山市青年创业基地电商托管商3月19日，市青年创业孵化基地落户大沥广佛智城，该创业孵化基地首期投入500万，将为青年创业者提供免租金水电支持，以及包括人力资源培训、证照办理等一站式服务。“你有网店，但你不会运营，为什么不交给我们，让我来帮你做服务。”佛山点赞网络科技有限公司联合创世人兼总经理张祖奎是首批进驻基地的电商团队，从大一开始学习电子商务专业以来，该点赞电商团队成员均开过网店，任职过电商托管公司，更当过传统企业电商项目负责人，对于托管的创业前景，他们显得信心满满，目前已经有5家企业与该托管公司签约合作。

该创业基地成立后，将依托广佛智城打造中国电商体验之都等电子商务资源，首期将斥资500万打造面积约950平方米，设有可以容下100多号人的开放式办公区。基地同时成立了青年创业导师团，并为首批导师代表颁发聘书。今后，佛山各级团组织将整合青商会、青联资源，携手政府职能部门、高校、金融机构成立青年创业导师团。导师团成立后将重点物色好辅导群体和项目，着力加大对青年创业者的创业实践指导和创业后续经验供给，进行一对一或一对多的督导，降低青年创业风险，提高创业成功率。

“年轻人不一定有钱，但一定要有梦想。”授牌仪式上，王树斌勉励青年人要怀抱创业的激情，敢于追梦。作为我市青年创业平台的一个标杆，佛山市青年创业孵化基地广佛智城基地整合了政府、高校和群团组织的资源，该基地有关经验将在我市其他工商业园推广。

第三篇：电商联盟助点赞电商等年轻人圆电商梦

电商联盟助点赞电商等年轻人圆电商梦随着南海电商服务联盟在广佛智城的成立，进驻的中小型电商企业可以得到综合性专业服务，为不少刚毕业的大学生圆了他们的电商创业梦。

佛山点赞电商的负责人，这个月初和另外两个合伙人凑资30万创办了电子商务公司，业务范围主要是电子商务托管和网店代运营，是第一个进驻广佛智城的电商托管团队，也终于圆了他5年的电商梦。

企业其实有很多好的产品可以在网络渠道上销售，但是佛山这边，我们经过一年的调查，其实佛山这边很少有这种电子商务第三方服务公司。

目前公司已经承接了佛山、英德等地瓷砖、红茶、坐垫等产品的电商托管业务，而佛山的中小企业将是我们下一步合作的客户。负责人非常看好广佛智城以及临近的淘宝村的发展前景，公司下一步的发展目标将围绕电商人才进行服务培训。我们可以对他们（电商从业人员）进行培训，把一些更专业的东西教给他，这相当于一个产业链，我们只是产业链中的其中一个环节，淘宝村不可能全部都是卖家，也需要有仓储、物流的服务商。

到目前为止，营销服务类、摄影类、物流类等电商企业已经陆续进驻广佛智城。广佛智城电商运营总监：我们的总体规划是建造中国最大的电子商务体验之都，让线上的企业有机会体验的环境，也让线下的企业有机会通过广佛智城走向网络、走向电子商务。

第四篇：水、电、办公用品等管理制度

水、电、办公用品管理制度

为规范公司水、电、办公用品的使用，确保办公所需，倡导勤俭节约、物尽其用、杜绝铺张浪费、大手大脚，管好用好办公物品，特制定本制度。

一、节约用水

1、自然用水将龙头尽量开小，用完随手关闭，坚决避免“长流水”现象发生。

2、饮用水量身倒水，杜绝“剩半杯”现象，给顾客倒水以六七分为宜，喝完再续。饮水机一经发现漏水等损坏情况立即保修。

二、节约用电

1、强化照明系统节电。办公时间要充分利用自然光照，在阳光充足、室内光线好的情况下不开灯，长时间离开办公室或下班时要做到人走灯灭。

2、注重用电设备节电。各部门人员使用电脑、传真机、复印机等办公自动化设备时，尽量减少开启和使用次数，长时间不使用或下班后要彻底切断电源，减少办公设备待机能耗。

3、办公室、会议室等办公区域做到无人时不开空调，开空调时不开门窗。

三、节约办公用品（规定中的办公用品分为固定资产和一般办公用品）

1、固定资产主要指：桌椅、公文柜、电脑、电话机、打印机、饮水机、车辆等。

2、一般办公用品包括剪刀、胶带、橡皮擦、回形针、直尺、订书器、涂改液、裁纸刀、笔、信笺、笔记本、打印纸、复印纸、复写纸、印泥、钉书针、大头针、夹子、名片、账册、卷宗、档案袋（盒）、标签、纸杯、计算器、电池等。

3、节约用纸。公司鼓励员工尽量双面打印纸张，一面留白废纸应作草稿使用。

4、公司员工请自带饮水杯具，一般情况下禁止使用一次性纸杯。

5、尽量减少电话的通话时间，尽量长话短说；禁止私人电话与办公电话捆绑；禁止在办公场所用办公电话聊天。

6、节约办公用品。保管和使用好自己的办公用品，申领有度。对办公电器要注意保管和维修，长时间不用应切断电源，降低折旧。

7、办公用品应为办公所用，不得据为己有，不得移作他用或私用。

8、所有员工要勤俭节约，杜绝浪费，不许将办公用品随意丢弃废置，努力降低消耗和办公费用，精心使用办公设备。

第五篇：电机车、点瓶车司机承诺书

电机车、电瓶车司机承诺书

针对当前运输系统事故发生频繁，经矿研究决定，对全矿所有持电瓶车、电机车司机证人员进行培训，努力提高司机操作能力和岗位责任心，杜绝一切习惯性违章行为，实现安全生产。

特承诺如下：

1、全矿所有电机车、电瓶车司机必须经过专业技术培训，经考试合格后，持证上岗。

2、司机一律不准将机车转让他人操作，司机应随身携带手柄、矿灯、矿帽。

3、机车运行时，牵引矿车数量必须按矿规定数量牵引，严禁超挂矿车。

4、严禁司机在车外开车，严禁不松闸开车。

5、司机操作机车必须在驾驶室内，目视前方，不得背脸开车和将身体任何部位露出车外。

6、在检查过程中，如发现机车闸、灯、警铃、喇叭、链接器和撒沙装置任何一项不正常和防暴部分失爆时都不得开车。

7、机车运行时速度不得超过4米/秒，顶车速度不得超过1.4米/秒。

8、无顶车措施，绝对禁止顶车运行。

9、两台机车在同一条线路同一方向运行时，应保持不小于100米的距离。

10、空、重车在岔道相遇时，空车必须让重车先行通过。

11、机车接近风门、道口、弯道、道岔和坡度较大的地方及前方有机车、行人或视线有障碍时，必须发出警铃，减速行驶。

12、在行车时禁止倒转电机代替制动闸。

13、停车处理故障或检修时，必须拉下受电弓，切断电源，不准带电作业。

14、电瓶车充电时，严禁正负极插销接反。

15、机车在运行中若停电应将控制手柄扳回零位，等送电后再重新启动。

16、司机不准擅自离开座位，离开座位时必须切断电机电源，将控制手柄取下保管好，扳紧车闸，但不得关闭车灯。

17、以上内容如有违反，矿将视情节处以200元至1000元罚款，安通科备案，如一内没有违反，矿将对每人奖励200元至500元。

承诺人：

日期：