DF-1鸡胚成纤维传代细胞的染色体制备及核型分析、致瘤性试验研究方案

材料与方法细胞 DF-1细胞、CEF细胞、Hela细胞。裸鼠 2月龄（或体重18～22g）、或乳鼠（3~5日龄）、或小鼠（8~10g）。细胞营养液细胞生长液为无血清培养基。细胞染色体制备和核型分析

4.1 染色体标本制备按常规方法分别将DF1细胞进行秋水仙素处理、细胞消化与低渗处理、细胞固定与在固定、滴片与染色。

4.2 染色体特征及数目、细胞核型分析取有丝分裂中期的细胞进行姬母萨染色检查，（总共需要150个视野的图片）。细胞致瘤性试验

5.1 细胞样品的制备按常规方法制备好DF-1细胞。

5.2 阳性对照细胞将Hela细胞经胰酶消化分散，离心收集细胞。制成含活细胞数约106cells/0.2ml的细胞悬液。

5.3 阴性对照细胞按常规方法制备的鸡胚成纤维细胞（CEF），制成含活细胞数约107cells/0.2ml的细胞悬液。

5.4 致瘤性试验

5.4.1和5.4.2任选其一。

5.4.1 将细胞样品分别皮下注射裸鼠30只，每只107 cells /0.2ml细胞。

5.4.2 取3~5日龄乳鼠或8~10g小鼠，用抗胸腺血清处理后，将细胞样品分别皮下接种18只，每只107 cells /0.2ml细胞。

5.4.3 阳性对照每只裸鼠皮下或肌肉注射106 cells /0.2ml，共注射5只裸鼠，为阳性对照。（如以乳鼠或小鼠试验，注射剂量不变，数量为3只）。

5.4.4 阴性对照：每只裸鼠皮下注射107 cells /0.2ml，共注5只裸鼠，为阴性对照。（如以乳鼠或小鼠试验，注射剂量不变，数量为3只）。

5.5 实验动物检查及处理

5.5.1 逐日观察至14日，检查有无结节或肿瘤形成。如有结节或可疑病灶，应在观察至少7～14日后剖检，进行病理组织学检查。

5.5.2 未发现结节的动物，对其中的一半动物观察21日后剖检，另外一半动物观察12周后剖检，观察各个淋巴结核器官中是否形成结节，如有怀疑，应进行病理组织学检查。不应有移植瘤形成。

5.5.3 阳性对照组观察21日后，应出现明显的肿瘤。

5.5.4 阴性对照组观察21日，应为阴性。

试验要求提供以上的图片