第一篇：石蜡包埋步骤
石蜡包埋步骤
1组织脱水、渗透与包埋 脱水： ○50% 乙醇（90min）→70% 乙醇（90min）→85%乙醇(90min)→95%乙醇(90min)→100%乙醇(60min)→100%乙醇(60min)。
注：○1若组织数量过多时，应分开脱水（20个组织左右）
○2脱水的体积至少为组织提及的4倍
○3乙醇纯度越高时，脱水的时间减少，否则引起组织过硬
○4 最好能搅拌，使脱水充分透明： ○1/2乙醇＋1/2二甲苯 → 二甲苯 → 二甲苯，每步60min。
注：在二甲苯的时间不宜过短或过长。时间过短引起透明不充分，影响后面渗透包埋；时间过长则引起组织变脆。
渗透： ○ 1/2二甲苯＋1/2石蜡(90min)→石蜡I(120min)→石蜡II(120min),62℃。
注：若出现从脱水到渗透时间太长，可在1/2二甲苯＋1/2石蜡或石蜡I的步骤停下,即将进入1/2二甲苯＋1/2石或石蜡I后，立即冷却，将组织封进里面，到第二天复融；第二天融解时温度不能超过65℃，并且需到完全溶解时开始进入步骤算时间。包埋： ○将组织放入盛有石蜡的模具中，摆好位置，于石蜡包埋机的冷台上冷却。
注：包埋时，切忌用手按石蜡盒中间，因为冷凝后，中间仍较软。切片和贴片
将包埋好的组织块于切片机中约5µm，放于漂片机中展开，再将切片捞于多聚赖氨酸附膜载玻片上，编号，70℃干烤1h，贴片后60℃烤5h。
第二篇：石蜡包埋人体组织STR检验的探讨
【摘要l目的探讨普通甲醛对人体组织dna的影响及提高str检出率的手段。方法取少量石蜡包埋组织，65℃水浴脱蜡，chelex一100法提取dna，pcr扩增，循环次数分别为28次和28+6次，扩增产物经310型测序检测。结果普通甲醛固定5 d以内的组织基本上可检出amel及15个str基因座。固定时间延长，检
出率下降；pcr循环次数增加，灵敏度增加，但有错误分型的情况。
结论普通甲醛固定时问长短直接影响pcr—str的检验。减少模板量有利于pcr反应成功，pcr次数为28+6时，灵敏度增加，但
应谨慎判读结果，以免错误分型。
【关键词】石蜡包埋组织；dna提取；str
【中图分类号】d919．
2【文献标识码】b
【文章编号】1007—9297(2006)01—0050—0
3在某些民事案件中。成功对石蜡包埋组织进行
pcr—str分型来判断其归属问题。对案件的解决起到
重要作用。目前国内医院及科研机构大多使用普通
10％甲醛固定人体组织。普通10％甲醛固定石蜡包埋的组织中dna降解相对严重，提取高质量的dna并
进行pcr—str分型较为困难。实践中人体组织固定
时间长短不一，但以1周左右多见。本文的目的是探
索普通10％甲醛固定时间对pcr—str分型的影响以
及提高检出率的适当方法。
材料与方法
一、材料
石蜡包埋人体组织均取自本所病理室。5个无关
个体的心、肾组织用1o％普通甲醛固定5 d、8 d、12 d
和15 d以上时．剪取组织边缘甲醛完全浸润处。石蜡
包埋，常规切片he染色，显微镜下观察确保组织结构
清晰，无自溶、坏死和大片出血后，作为本研究材料使
用。
二、方法
1．预处理。切取8 ixm厚的石蜡包埋组织，尽量剔
除石蜡部分，放入0．5 ml离心管中；或挖取小米粒大的石蜡包埋组织，放入0．5 ml离心管中。加入500
ddw，65c【=保温10min脱蜡，弃除液体。【 】
2．dna的提取。向每个离心管中加入150 ixl的5％chelex一100和8 l pk(20mg／m1)，56 c【=保温过夜，次日再加4 lpk(20mg／m1)，再消化4h，振荡后，100cc
8rain，13000 rpm／min离心3rain，4 oc备用。
3．pcr扩增。采用identifiler荧光复合扩增。采用l反应体系，热循环条件：95 c【=预变性l1 rain；9
4oc 1rain，59 oc lmin，72℃ lmin，循环次数分别为28
次，28+6次(循环28次后，每反应管加0．3 ixl ampli
taq gold dna聚合酶，再循环6次)；[2】最后60℃延伸
45raino
4．上样检测。取1．5 l dna pcr产物与l2 l甲
酰胺(formamide)、0．4 ixl内标(liz)混合后，经过abi
310 dna自动测序仪电泳荧光检测，使用genescan(3．
1．2)和genotyper软件分析得出基因分型结果。
结果
1．经普通甲醛固定5 d、石蜡包埋的心和肾组织基
本上能检出完整的str等位基因型。而随着固定时间的延长，能检出的str基因座数目逐渐减少．出现了
大片段等位基因缺失、等位基因扩增不平衡的现象
(见图1。2)。本次试验中观测到最短固定时间为8 d的组织，因大片段等位基因缺失而造成假纯合子的错
误分型(见图3)。而固定时间超过15 d时。则最多只
能检出性别及个别小片段str基因型，常伴有分型错
误。
2．当pcr循环数从28次增加到28+6次(先循环
28次再加酶循环6次)时，可以检出以前信号弱、无法
判读的峰，提高了检出率(见图4)。循环次数的增加，dna检测灵敏度有所提高。但随着固定时间的延长，dna降解严重，增加扩增循环次数．易引起部分str
基因座的分型错误．如图5中d3s1358基因座出现的pull—up峰。
讨论
【作者简介】~gg(1971-)，女，硕士研究生，江西九江人，主要从事法医dna工作。tel：+86—10—68621174；e—mail：yuanliwcy@yahoo．com．cn
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第三篇：病理石蜡切片心得体会
病理石蜡切片心得体会
石蜡切片是组织学常规制片技术中最为广泛应用的方法。石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构，也是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法，而且也已相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中。
我从事病理技术工作刚刚一年多，细细回味自己在实际工作中的切片过程，有一点点心得体会，在这里向大家做一简单汇报。
一、组织脱水：
要想切出一张好的石蜡切片，组织处理非常重要。经典的脱水方法，酒精脱水，二甲苯透明，石蜡浸蜡是最简单、方便、容易掌握，也是最便宜效果最好的方法。但脱水过程中尤其要注意的是梯度酒精脱水。在实际工作中，有时为了省事，往往采取倒掉第一缸酒精，后面往前移，这样会导致第一缸酒精浓度偏高，高浓度酒精，能使蛋白质凝固，使组织表面发硬，酒精无法渗透到组织深处，造成组织脱水效果不佳，从而不能切出优质石蜡切片。我的做法是，在更换液体时，尽管是后边液体往前边倒，但一定要测量其浓度，不合适就要调整到合适为止。这样像子宫平滑肌瘤这样的硬组织也能切除很好的切片。
二、组织包埋：
组织包埋好坏同样会影响石蜡切片质量。有些小组织，特别是内窥镜活检组织，如果组织没切全，就有可能会影响诊断。因此。小组织切出优质切片的重要步骤是把好组织包埋这一关。首先，最好选用5x5mm或更小的包埋底模，这样的底模即可将组织完全置于蜡块切面的中心，又可连续切片并将蜡片捞在载拨片相对集中的区域而利于阅片诊断。另外，包埋时先把底模放入少许石蜡，将组织移放在底模里移至冰上，待石蜡略冷却再用齿科镊子将组织集中到一块并按压到一个平面后，再注满石蜡，平移到冰台上。
三、组织切片：
切片工艺上稍加讲究，就可做到“多”、“快”、“好”、“省”。
1、先粗切所有蜡块。用废弃刀片将每个蜡块粗切至组织全部暴露的最大切面，边切边排序，摆放在事先做好的冰盘中冷冻。
2、全部蜡块粗切完成后，再更换新刀片细切。将冰冻好的蜡块迅速按放固定好，先切2-3张，削去浮蜡后即可连续切片，切片时要求用力均匀柔和，摇速不宜过快或者过慢，切片厚度一般为3-5um，如为淋巴结，切片厚度应为3um，这样镜下细胞无重叠，清晰，透亮利于诊断。切出的蜡片先放在入40℃热水中，在这种温度下，蜡片迅速舒展得非常平整，再裱贴至载玻片上。采用这种方法切片，既有速度又节省刀片，最主要的是能切出高质量的切片。
四、染色：
染色同样会影响切片的整体质量。染色过程中最重要的是苏木素染色后经盐酸酒精分化，流水冲洗即反蓝过程，时间一定要充分，否则切片再好，镜下结构也不够清晰。
切片经过染色后，通过各级酒精脱水，由低浓度到高浓度，低浓度酒精对伊红有分化作用，时间要短，向高浓度时逐步延长脱水时间，染色经过脱水后必须经过二甲苯处理，这样的切片看切来才晶莹剔透，使阅片者赏心悦目。
以上是我在工作中得出的一点体会，不足之处请各位批评指正。
第四篇：石蜡化工有限公司安全协议书
甲方：沈阳石蜡化工有限公司
乙方：
为了加强太蜡输油管线两输油站及输油管道的安全管理工作，防止安全生产事故的发生，特制定本协议：
一、甲乙双方必须根据《安全生产法》、《消防法》、《劳动法》、《沈阳市安全生产条例》及双方签订的《沈阳“太-蜡”输油管道全额费用管理协议》的规定，坚持“安全第一、预防为主”的方针，明确各级人员的安全责任制，建立安全组织机构，严格遵守公司的各项安全生产规章制度、输油管线安全操作规程。
增加：
二、乙方全面负责太平庄、门台输油站站场内的安全生产工作，同时负责太蜡输油管线的日常管理及巡检工作。
二、乙方现场安全管理负责人应由取得安全从业资格的人员担任，根据输油管线的特点组织制定相应的安全防护措施，消除安全隐患，及时、如实的向甲方报告生产安全事故。
建议：乙方现场安全管理负责人应由取得安全从业资格的人员担任，根据输油站场的特点组织制定相应的安全防护措施，消除安全隐患，及时、如实的向甲方报告生产安全事故。
三、乙方要经常组织相关人员学习国家的法律法规及输油管线安全操作规程，杜绝“三违”现象,教育相关人员遵守劳动安全纪律，做到不违章指挥，不违章作业，提高自我保护能力和意识。
建议：乙方要经常组织相关人员学习国家的法律法规及输油站场安全操作规程，杜绝“三违”现象,教育相关人员遵守劳动安全纪律，做到不违章指挥，不违章作业，提高自我保护能力和意识。
四、乙方必须依法加强对输油管线的安全生产的管理，执行安全生产责任制度。采用有效措施，防止伤亡和其他安全生产事故的发生。同时要保证足够的资金投入，切实做到安全生产防护设施和人员劳动保护用品到位。
建议：乙方必须依法加强对输油站场的安全生产管理，执行安全生产责任制度。采用有效措施，防止伤亡和其他安全生产事故的发生。同时要保证足够的资金投入，切实做到安全生产防护设施和人员劳动保护用品到位。
五、乙方在现场必须配备专兼职安全员，负责对生产安全进行现场监督检查，及时发现事故隐患，对违章指挥、违章操作的行为立即制止。
六、乙方从事特殊作业的人员，必须经过国家规定的有关部门进行安全教育和安全技术培训，并经考试合格取得操作证者，方准操作，严禁无证人员操作。
七、乙方要经常性，定期性对输油管线进行安全检查，必须保证安全防护措施的执行，消除事故隐患，并作好记录。随时接受上级安全管理部门和甲方的安全检查，监督。
建议：乙方要相关规范要求，定期性对输油管线进行安全巡查，必须保证管道阴极保护设备设施完好投用，并作好记录。随时接受上级安全管理部门和甲方的安全检查，监督。
八、乙方一旦发现隐患或发生事故应立即启动应急救援预案，采取有效措施并保护现场，及时向甲方及有关单位汇报，并参加事故的调查和处理工作。现场遇突发事故，要及时与甲方联系，服从统一指挥，积极参加抢救。
建议：
1、乙方所管理的输油站场一旦发现隐患或发生事故应立即启动相关应急救援预案，采取有效措施并保护现场，及时向甲方及有关单位通报，同时负责事故的调查和处理工作，积极组织尽快恢复生产。
2、乙方负责日常管理和巡护的输油管线一旦发生事故应立即启动相关应急救援预案，采取有效措施并保护现场，及时向甲方及有关单位（消防、公安部门）通报，配合甲方进行事故的调查和处理工作，抢修完成后积极组织尽快恢复生产。
九、乙方在操作过程中发生塌方、触电、失火、车祸、人员意外伤亡及食物中毒等事故，所造成的一切损失均由乙方自负。
建议：乙方在对两输油站、输油管道日常管理过程中所发生塌方、触电、失火、车祸、人员意外伤亡及食物中毒等事故，所造成的一切损失均由乙方自负。
九、按照国家要求，配置必备的消防器材、设备和设施，由乙方安排专人负责保养、维修和管理，其他人员不得随意动用。
建议：按照国家要求，乙方负责太平庄、门台输油站站场配置必备的消防器材、设备和设施，由乙方安排专人负责保养、维修和管理，其他人员不得随意动用。
十、甲方应严格按照安全生产管理规定，对乙方的输油管线进行全面的安全检查。对检查出的安全隐患问题，乙方必须按有关要求及时整改，对存在重大安全隐患甲方有权要求乙方停工整改，并报上级单位有关部门予以处理。
建议：乙方应严格按照安全生产管理规定，对甲方的输油管线定期进行的安全检查。对检查出的安全隐患问题，乙方应及时通告甲方，甲方应及时处理，确保输油管线安全运行，十一、本协议一式两份，甲乙双方各持一份。
十二、本协议双方签字后即生效。
甲方单位：（盖章）乙方单位（盖章）
负责人签字： 负责人签字：
年 月 日 年 月 日
第五篇：有机包埋标本的使用中和其他传统制作的标本的优劣比较
有机包埋标本的使用中和其他传统制作的标本的优劣比较
南宁沛鸿民族中学生物实验室陆芝宁
有机包埋标本是采用环保树脂(俗称有机玻璃)和先进的包埋技术对标本进行包埋,将动植物等标本紧密包裹起来,经过固化、抛光等先进的工艺处理后，形成了稳固透明的“有机包埋标本”。这种标本具有以下特点和优点：
一、无毒无味，安全环保
因为有机包埋标本均采用甲基丙烯酸甲酯等无毒无味的的包埋材料以及先进的包埋技术使标本与空气完全隔离，有效克服传统浸泡或干制标本产生的安全卫生威胁，避免了标本对环境的二次污染。而用福尔马林浸制的标本常常有漏气、漏液现象，干制标本也有霉变、虫咬现象，使得教室环境收到污染，学生不敢近，不敢摸。相比有机包埋标本就可以让学生用手去触摸自然，用脸去贴近自然。
二、不易破碎，便于携带运输
经过这种有机树脂包埋的标本它是一个固体晶体艺术品，与玻璃、水晶相比树脂产品强度和韧性更具有可靠性，而且坚实不容易被摔破，你可以随意摆放，更方便携带运输。而用福尔马林浸制的标本就经常出现使用、搬动过程中液体晃动造成标本脱落、破碎、挤作一堆（如寄居蟹从螺壳里脱落出来，蛔虫从固定的玻璃板上瘫落下来等）；干制标本也容易在使用过程中出现折断，散落现象（如竹节虫、蝗虫断腰断腿，蜜蜂的巢被巢虫损毁消失等）；相反有机包埋标本就可以方便到随意放进口袋里携带。
三、栩栩如生，永久保存
福尔马林浸制的标本就经常由于液体减少和浑浊需要补液、换液，标本不能保色，也没有光泽。干制标本也由于潮湿霉变，脱胶，架子生锈等原因，需要经常翻晒太阳和从新作防虫处理。相反有机包埋标本的产品除非是高温和阳光直射环境下放置或者与其他溶剂接触，一般条件下保管，它不会变色或变形，并且不会腐烂，你不必担心标本折断、脱色等问题，可做到永久保存。有机包埋标本产品具有水晶、玻璃的透明度，产品晶莹剔透，栩栩如生，更加具有欣赏和收藏价值，可激发学生探索大自然的无穷兴趣
以上是我们在使用有机包埋标本过程中，体会到它具有的特点和优点。不过大件的有机包埋标本还是比较重；使用久和表面磨损严重的，光洁度透明度容易下降；不太圆滑的边角容易被碰缺碰碎„„。如果能在这些方面有所改进就更好了。
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