PCR个人经验总结5篇

第一篇：PCR个人经验总结

PCR经验总结

1.primers design

这是最重要的一步。理想的，只同目的序列两侧的单一序列而非其他序列退火的引物要符合下面的一些条件

a 足够长,18-24bp,以保证特异性.当然不是说越长越好,太长的引物同样会降低特异性,并且降低产量。

b GC% 40%-60% c 5'端和中间序列要多GC,以增加稳定性

d 避免3'端GC rich, 最后3个BASE不要有GC,或者最后5个有3个不要是GC e.避免3'端的互补, 否则容易造成DIMER f.避免3'端的错配

g.避免内部形成二级结构

h.附加序列(RT site, Promoter sequence)加到5'端, 在算Tm值时不需要加上这些序列,但在检测互补 和二级结构是要加上它们

i.需要使用兼并引物时, 要参考密码子使用表,注意生物的偏好性,不要在3'端使用兼并引物,并使用较高的引物浓度(1uM-3uM)j.最好学会使用一种design software.PP5,Oligo6,DNAstar, Vector NTI, Online desgin et al.* 引物的另一个重要参数是熔解温度（Tm）。这是当50％的引物和互补序列表现为双链DNA分子时的温度.Tm对于设定PCR退火温度是必需的。在理想状态下，退火温度足够低，以保证引物同目的序列有效退火，同时还要足够高，以减少非特异性结合。合理的退火温度从55℃到70℃。退火温度一般设定比引物的 Tm低5℃。

设定Tm有几种公式。有的是来源于高盐溶液中的杂交，适用于小于18碱基的引物。有的是根据GC含量估算Tm。确定引物Tm最可信的方法是近邻分析法。这种方法从序列一级结构和相邻碱基的特性预测引物的杂交稳定性。大部分计算机程序使用近邻分析法。

根据所使用的公式及引物序列的不同，Tm会差异很大。因为大部分公式提供一个估算的Tm值，所有退火温度只是一个起始点。可以通过分析几个逐步提高退火温度的反应以提高特异性。开始低于估算的Tm5℃，以2℃为增量，逐步提高退火温度。较高的退火温度会减少引物二聚体和非特异性产物的形成。

为获得最佳结果，两个引物应具有近似的Tm值。引物对的Tm差异如果超过5℃，就会引物在循环中使用较低的退火温度而表现出明显的错误起始。如果两个引物Tm不同，将退火温度设定为比最低的Tm低5℃或者为了提高特异性，可以在根据较高Tm设计的退火温度先进行5个循环，然后在根据较低Tm设计的退火温度进行剩余的循环。这使得在较为严紧的条件下可以获得目的模板的部分拷贝。2.stability of primers

定制引物的标准纯度对于大多数PCR应用是足够的。引物产量受合成化学的效率及纯化方法的影响。定制引物以干粉形式运输。最好在TE重溶引物，使其最终浓度为100μM。TE比去离子水好，因为水的pH经常偏酸，会引起寡核苷的水解。引物的稳定性依赖于储存条件。应将干粉和溶解的引物储存在-20℃。以大于10μM浓度溶于TE的引物在-20℃可以稳定保存6个月，但在室温（15℃到30℃）仅能保存不到1周。干粉引物可以在-20℃保存至少1年，在室温（15℃到30℃）最多可以保存 2个月。3.optimize reactants concentration a.magnesiom ions Mg离子的作用主要是 dNTP-Mg 与核酸骨架相互作用，并能影响Polymerase的活性。一般 的情况下 Mg的浓度在0.5-5mM之间调整。同样要记住的是在调整了dNTPs的浓度后要相应的调整Mg离子的浓度。对实时定量PCR，使用3-5mM带有荧光探针的镁离子溶液。

b.其他的离子

NH4+ K+都会影响PCR。增加K+的浓度后, 会因为中和了核酸骨架上磷酸基团的负电荷而影响退火的温度,从而降低了PCR的 严谨性(stringency).NH4+也有相同的作用.MBI公司的TAQ酶就提供了两种BUFFER, 一种是加Mg的一种是已经混合了(NH4)2SO4的.当然, 过高的阳离子浓度(KCL>0.2M)时, DNA在94度根本不会发生变性, 当然也就无从谈起PCR了.c.polymerase 不同公司的酶效有所不同,需要operator自己掌握适合的酶的浓度。一些高保真酶的效率要远远低于Taq polymerase,所以可能需要的酶的量也要大一些.另外, 一般的 情况下, 变性的温度可以使用90~92度, 变性的时间也可以缩短,从而保证polymerase的活性 d.template 50ul PCR SYSTEM human gDNA 0.1ug-1ug E.Coli 10ng-100ng Lamada DNA 0.5ng-5ng Plasmid DNA 0.1ng-10ng 4.temperature a.denaturation 常规是94度5分钟, GC Rich的摸板是95度5分钟，除了GC Rich外, 常规的APPLICATIONS可以将这部分时间缩短到1到2分钟, 或者在CYCLE 1时给予较长的时间,而取消开始的denaturation b.annealing 重点到了。一般情况下, 是从55度开始.根据情况配合以Mg离子浓度进行调整.有条件的可以做gradient pcr.退火的时间在30-60S, 时间短一些可以得到更好的效果.因为, polymerase 在annealing temp.时也会有一些活性.所以在A.T.的时间过长, 会极大的增加非特异性扩增的风险.另外,在对于一些困难户, 比如从gDNA里扩增大片段, 还可使用two step PCR.5.touchdown PCR

原理很简单,但的确是一个很有用的方法。举个例子就OK, ANNEALING TEMP.55度 94 5min—（94 30s—60 30s—72 1min）×2—（94 30s—59 30s—72 1min）×2—（94 30s—58 30s—72 1min）×2—........—（94 30s—51 30s—72 1min）×2—（94 30s—50 30s—72 1min）×20—72 5min

6.hot start PCR

热启动PCR是除了好的引物设计之外，提高PCR特异性最重要的方法之一。尽管Taq DNA聚合酶的最佳延伸温度在72℃，聚合酶在室温仍然有活性。因此，在进行PCR反应配制过程中，以及在热循环刚开始，保温温度低于退火温度时会产生非特异性的产物。这些非特异性产物一旦形成，就会被有效扩增。在用于引物设计的位点因为遗传元件的定位而受限时，如site-directed突变、表达克隆或用于DNA工程的遗传元件的构建和操作，热启动PCR尤为有效。限制Taq DNA聚合酶活性的常用方法是在冰上配制PCR反应液，并将其置于预热的PCR仪。这种方法简单便宜，但并不能完成抑制酶的活性，因此并不能完全消除非特异性产物的扩增。

热启动通过抑制一种基本成分延迟DNA合成，直到PCR仪达到变性温度。包括延缓加入Taq DNA聚合酶，在反应体系达到90度时，PAUSE，将温度保持在70度以上，手工加入polymerase，但这个方法 过于烦琐，尤其是对高通量应用，并容易造成污染。其他的热启动方法使用蜡防护层将一种基本成分，加入镁离子或酶，包裹起来，或者将反应成分，如模板和缓冲液，物理地隔离开。在热循环时，因蜡熔化而把各种成分释放出来并混合在一起。有很多公司提供这样的酶。

ampliwax PCR Gems(Perkin Elmer)Taq Bead Hot Start Polymerase(Promega)Magnesium wax beads(Stratagene).象手动热启动方法一样，蜡防护层法比较烦琐，易于污染，不适用于于高通量应用。还有一种方法是使用inactive DNA Polymerase.polymerase被抗体抑制失活，当变性温度超过70度时，抗体也变性了，这样polymerase又被激活了。

7.Booster PCR

我们知道1ug human genomic DNA 大约在3X105个模板分子,这样的模板分子数目可以是引物与模板很好的结合.当模板的浓度过低,比如低于100个分子时, 引物和模板之间就很难发生反应.引物容易自身进行反应形成二聚体.这样就有来了个 booster PCR 我一直找不到合适的词来翻译这个booster.具体是这样的.开始几个cycles保持primer的低浓度,保证primer:template的 molar ratio在107~ 108.以确保开始扩增的准确性.然后booste Primer的浓度到正常的水平8.循环数和长度

确定循环数的基本原理是: 产物能够保证你进一步分析操作的最小循环数.因为过多的循环数容易造 成ERRORS和非特异性产物的积累、产物的量不够, 优化的方法有: 1.增加TEMPLATE 2.增加循环数

如何确定循环数,有一个方法.做一个PCR体系,40循环,50ul, 分别在20,25,30,35循环时从体系中取5ul,一起跑电泳分析.从而确定最佳的循环数另一个会影响PCR特异性的是PCR cycling时在两个温度间变化的速率(ramping rate).当然是越高越好.不过咱们大部分条件有限,就那么几台PCR仪,也没有多少挑选的余地

9.thermal cycler

PCR仪的因素我们经常容易忽视.长时间的使用后需要调整PCR仪,以保证其能够到达正确的温度.现在的PCR仪基本上都有自检功能(self-diagnosis).10.PCR additives

附加物或者说enhancer实在是多种多样.基本上包括几类, 能够增加反应退火效率的化学因子, DNA结合蛋白和一些商业试剂.基本的原理不外是增加引物退火特异性,减少错配, 增加产物的长度和产量.在GC Rich情况中, additive可以造成配对碱基间的的不稳定,从而提高扩增的效率.而在另一种情况下,additive由于造成错配的primer-template 复合物的极大的不稳定, 而提高了扩增的忠实性.要注意的是,没有万能的enhancer全部通用,需要你根据自己的情况,最好结合gradient pcr选择最优条件.====== dimethyl sulfoxide(DMSO)up to 10% formamide at 5% trimethylammonium chloride 10-100uM detergents such as Tween 20 0.1-2.5% polyethylene glycol(PEG)6000 5-15% glycerol 10-15% single stranded DNA binding proteins Gene 32 protein 1nM E.coli single-stranded DNA binding protein 5uM 7 deaza-dGTP(for GC rich)150uM with 50uM dGTP Taq Extehder(stratagene)Perfect Match PCR Enhancer(stratagene)Q-solution(Qiagen)====== 要注意的是,DMSO,GLYCEROL等会抑制polymerase的活性,所以需要scouting出最适的浓度

11.Template DNA preparation

提取DNA时的试剂会抑制PCR反应的顺利进行.因此需要对TEMPLATE DNA进行纯化.特别是SDS(<0.01%)的情况下就能强烈抑制PCR的进行.可以加入一些nonionic试剂,如Tween, Nonid, Trition之类的反过来抑制SDS.还有proteinase K也要除干净, 不然会降解polymerase.12.Nested PCR

简单点说 设计两对引物, 一对是长的, 一对是包含在长引物内的, 用长引物扩增的产物作为第二次扩增的模板,这样可以增加产物的量.而且可以减少非特异性带和错配的情况.增加PCR的保真性 高保真酶

高温DNA POLYMERASE是以单链DNA或RNA为模板，在dNTP和一些阳离子的存在情况下，在特定的引物指导下按3'-5'方向合成DNA.包括3种类型：

a.5'-3'方向的DNA合成能力,没有3'-5'方向的外切酶特性.如Taq及其突变体.这类酶的合成能力强,因为他不纠正合成中出现的突变

b.与a类似,有合成活性,没有3-5的外切活性.但他们能以RNA为模板,合成DNA.如Tth DNA Polymerase c.有DNA聚合活性,没有逆转录活性,但有3-5方向的外切酶活性.如pfu DNA Polymerase.可以提高忠实性。但是这些聚合酶的产量比Taq DNA聚合酶低。酶的混合物

将Taq DNA聚合酶同带有3'到5'外切核酸酶活性第二种聚合酶混合在一起可以获得比单独Taq DNA聚合酶高的忠实性，并可以得到高产量及扩增长模板。其他因素

除了酶，高浓度的dNTP或镁离子会降低忠实性。将dNTP的浓度从200μM降低到25-50μM可以增加精确度如果四种核苷的浓度不同，忠实性会受影响。进行较少的PCR循环也会有助于增加忠实性，因为增加循环数目和产物长度就会增加突变可能性。

第二篇：PCR经验总结

PCR经验总结

实验注意事项：

（1）DNA处理最好用硅烷化塑料管以防粘附在管壁上，所有缓冲液吸头、离心管等用前必须高温高压处理，常规消耗用品用后作一次性处理，避免反复使用造成污染。

（2）PCR操作应戴手套并勤于更换，必要时应戴好帽子和口罩，就像做手术一样，要有“无菌观念”。

（3）成套试剂，小量分装，专一保存，防止它用。配制试剂用新器具，用后作一次性处理。（4）试剂管用前先瞬时离心（10s），使液体沉于管底，减少污染手套与加样器机会。（5）最后加模板DNA，马上盖好，混匀，瞬时离心（10s），使水相与有机相分开。加入模板且忌喷雾污染，所有非即用管都应盖严。加模板DNA后应更换手套。（6）实验设阳性、阴性对照。

还有诸如：移液枪用完要放到最大计量位置，防止久了弹簧失灵；防止RNA酶污染标本；低温下操作，防降解；试剂有致癌致畸作用，做好个人防护；头脑中各操作步骤要清楚，不要加错试剂。

问题及解决方案汇总：

一、假阴性，扩增无条带

PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及活性 ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。

模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有酶抑制剂，③模板中蛋白质没有消化除净，特别是染色体中的组蛋白，④在提取制备模板时丢失过多，或吸入酚。⑤模板核酸变性不彻底。在酶和引物质量好时，不出现扩增带，极有可能是标本的消化处理，模板核酸提取过程出了毛病，因而要配制有效而稳定的消化处理液，其程序亦应固定不宜随意更改。

酶失活：需更换新酶，或新旧两种酶同时使用，以分析是否因酶的活性丧失或不够而导致假阴性。需注意的是有时忘加Taq酶或溴乙锭。

引物：引物质量、引物的浓度、两条引物的浓度是否对称，是PCR失败或扩增条带不理想、容易弥散的常见原因。有些批号的引物合成质量有问题，两条引物一条浓度高，一条浓度低，造成低效率的不对称扩增，对策为：①选定一个好的引物合成单位。②引物的浓度不仅要看OD值，更要注重引物原液做琼脂糖凝胶电泳，一定要有引物条带出现，而且两引物带的亮度应大体一致，如一条引物有条带，一条引物无条带，此时做PCR有可能失败，应和引物合成单位协商解决。如一条引物亮度高，一条亮度低，在稀释引物时要平衡其浓度。③引物应高浓度小量分装保存，防止多次冻融或长期放冰箱冷藏部分，导致引物变质降解失效。④引物设计不合理，如引物长度不 够，引物之间形成二聚体等。

Mg2+浓度：Mg2+离子浓度对PCR扩增效率影响很大，浓度过高可降低PCR扩增的特异性，浓度过低则影响PCR扩增产量甚至使PCR扩增失败而不出扩增条带。

反应体积的改变：通常进行PCR扩增采用的体积为20ul、30ul、50ul。或100ul，应用多大体积进行PCR扩增，是根据科研和临床检测不同目的而设定，在做小体积如20ul后，再做大体积时，一定要模索条件，否则容易失败。

物理原因：变性对PCR扩增来说相当重要，如变性温度低，变性时间短，极有可能出现假阴性;退火温度过低，可致非特异性扩增而降低特异性扩增效率退火温度过高影响引物与模板的结合而降低PCR扩增效率。有时还有必要用标准的温度计，检测一下扩增仪或水溶锅内的变性、退火和延伸温度，这也是PCR失败的原因之一。

靶序列变异：如靶序列发生突变或缺失，影响引物与模板特异性结合，或因靶序列某段缺失使引物与模板失去互补序列，其PCR扩增是不会成功的。

二、假阳性

出现的PCR扩增条带与目的靶序列条带一致，有时其条带更整齐，亮度更高。

引物设计不合适：选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性，因而在进行PCR扩增时，扩增出的PCR产物为非目的性的序列。靶序列太短或引物太短，容易出现假阳性。需重新设计引物。

靶序列或扩增产物的交叉污染：这种污染有两种原因：一是整个基因组或大片段的交叉污染，导致假阳性。这种假阳性可用以下方法解决：①操作时应小心轻柔，防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。②除酶及不能耐高温的物质外，所有试剂或 器材均应高压消毒。所用离心管及样进枪头等均应一次性使用。③必要时，在加标本前，反应管和试剂用紫外线照射，以破坏存在的核酸。二是空气中的小片段核酸污染，这些小片段比靶序列短，但有一定的同源性。可互相拼接，与引物互补后，可扩增出PCR产物，而导致假阳性的产生，可用巢式PCR来减轻或消除。

三、出现非特异扩增带

PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致，或大或小，或者同时出现特异性扩增带与非特异性扩增带。非特异性条带的出现，其原因：一是引物与靶序列不完全互补、或引物聚合形成二聚体。二是Mg2+离子浓度过高、退火温度过低，及PCR循环次数过多有关。其次是酶的质和量，往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一来源的酶则不出现，酶量过多有时也会出现非特异性扩增。其对策有：①必要时重新设计引物。②减低酶量或调换另一来源的酶。③降低引物量，适当增加模板量，减少循环次数。④适当提高退火温度或采用两步法。

四、出现片状拖带或涂抹带

PCR扩增有时出现涂抹带或片状带或地毯样带。其原因往往由于酶量过多或酶的质量差，dNTP浓度过高，Mg2+浓度过高，退火温度过低，循环次数过多引起。其对策有：①减少酶量，或调换另一来源的酶。②减少dNTP的浓度。③适当降低Mg2+浓度。④增加模板量，减少循环次数。

五、出现大量引物二聚体

1.从引物自身着手，重新设计引物，这是最根本解决这一问题的办法； 2.可能模板有问题；

3.模板浓度过小，适当加大模板量；

4.Taq酶，引物，Mg2+浓度可能过高，可降低它们的浓度；

5.取你所要加的上下游引物混合后，在100摄氏度下的沸水中煮5分钟，然后迅速拿出置于冰上瞬时冷却，这时再加入反应体系当中，引物二聚体就会消失的；

6.所配Mix中加5%的甘油或者5%的DMSO，可以增强特异性；

7.PCR反应体系的配制在冰上进行，最后加Taq酶，PCR结束后，产物勿放置在室温下过长时间，有人认为室温下有些Taq酶会将多余的引物合成为二聚体。

8.增加循环数；

9.降低退火温度后有条带，则应逐渐提高温度，若提高温度的同时产物量减少，则考虑增加镁离子浓度（根据扩增片断长度而定，片段长则相应镁离子浓度应该高一些）；

10.若降低退火温度，发现还是只有引物二聚体，而且镁离子的浓度在20-25mM没有区别，则考虑Buffer等试剂没有完全融解、混匀，导致吸取的试剂浓度不对。11.以上次的PCR产物作模板二次PCR，可以提高引物与模板的特异性，减少引物二聚体，如果两次时间间隔短的话，可以把原产物稀释100－1000倍，如果间隔较长可以稀释50－100倍；

六、高GC与复杂结构的模板处理

将模板置于95℃水浴锅中处理10分钟以上，然后置于冰上瞬时冷却，可大大降低二级结构对PCR的影响。

七、长片段与短片段拼接失败（定点突变）

在做定点突变时，倘若突变位点距离基因的某一侧较近（短片段<200bp）时，通常拼接困难或者难以通过电泳结果直观判断是否拼接成功。此时，可在短片段的上方（突变近5’端）或下方（突变近3’端）选取一条载体通用引物与基因另一条引物PCR（控制产物大小>300bp），然后再做基因拼接。确认大小无误后，再以此产物为模板，用基因首尾引物PCR即可。

八、Long PCR无条带

对于>5Kb片段扩增，常规PCR很难得到较好的条带，建议①更换更适合于Long PCR的聚合酶；②添加PCR Enhancer调整体系；③设计多对引物分段扩增。

PCR增强剂（PCR Enhancer）：

常见的添加剂有：DMSO，甘油，甲酰胺，硫酸铵，甜菜碱，BSA等，它们对PCR反应的影响虽然有所不同，但都可提高PCR的扩增效率。

1.DMSO：解除模板DNA局部二级结构，增加引物与模板的特异性结合，使聚合酶更容易在二级结构处延伸，但是对酶活有抑制作用，且当其浓度大于10％时还会降低保真性。

2.甘油：可降低模板溶解温度（Tm），提高产量，但是对酶活有抑制作用。3.甲酰胺：促进某些“引物－模板”退火，降低带有二级结构的DNA的变性温度。4.硫酸铵：增加反应体系的离子强度，改变DNA的变性及退火温度，调节酶活。5.甜菜碱：有利于DNA双链的解开，Polymerase的结合，提高PCR的效率。

第三篇：个人经验总结

一学期很快地过去了，在各级领导和家长的支持下，幼儿各方面都取得了一定的成绩。为了将我的工作做得更好，特总结如下：

一、现状分析：

我班幼儿二十五人，其中男孩十二人，女孩有十三人，年龄在两岁半到三岁。其中十人是本期新插入的。本班大部分幼儿身体发育正常，他们喜欢问，求知欲强，对唱歌、跳舞有一定的兴趣，能用简单的语言表达愿望。经过一学期的学习，幼儿各方面进步很大。在本期以新《幼儿园教育指导纲要》和“三个代表”重要思想为指导，坚持“孩子第一”的原则，积极地将教育观念转变为教育行为，在一日保教各环节中认真落实《幼儿园教育指导纲要》；从而保证幼儿一日生活的愉快进行，促进孩子们全面发展。

二、政治思想方面：

本期在园领导组织下，观看学习了师德启示录和教师职业道德规范。在实际工作中把这种精神踏实奉献精神一直牢牢地记在心里，从而把孩子放在第一位，在工作中不分上下班，不计报酬，真正体现主人翁精神。

积极参加政治业务学习，做到认真做好笔记，会后写出自己的心得体会，不断提高自己的思想政治觉悟，不信、不传“法轮功”的歪理邪说，使自己的思想与党中央保持一致。

加强自身的文化修养，多读多看报刊杂志，努力提高自己的业务能力，用新的知识不断充实自己的头脑，尽快适应新形式的要求。

做到了团结同志，热爱集体，遵守幼儿园一切规章制度，保质保量的完成了本职工作。

工作中做到了服从领导安排，协调好本班教师的关系，共同配合，促进了幼儿全面发展。

三、业务工作内容

（1）教研工作

积极参加小班组的课题研究，仔细为新教师周碧上汇报课和教研课出力出策。认真听新教师的汇报课，并记录下来讨论，帮助了别人，也丰富了自己的已有经验。

认真完成教研组长交给的任务，主讲小班教师如何开展游戏。

（2）教学工作

细致耐心的做好个别幼儿工作。按照一日活动常规的要求，进行教养活动，着重教育幼儿爱护玩具，会收拾整理玩具，学会自己洗手，学会自己愉快进餐，愉快睡眠，自己上厕所等，培养幼儿养成良好的生活卫生习惯。促进了幼儿健康发展。根据季节变化，幼儿体质差异以及户外活动时活动量大小等及时给幼儿增减衣物，避免幼儿受热或着凉。开展符合本班实际的体育游戏，训练幼儿基本动作，锻炼幼儿身体动作的协调性，充分利用日光、空气、水等自然因素，对幼儿进行体格锻炼。培养幼儿活泼开朗的性格，增强了幼儿的自信心，敢于在陌生人面前展示自己，从而使自己的交往能力得到了提高。

环境创设：根据本班幼儿的实际特点和我班开展的亲子活动进行了环境的创设。比如：带孩子到公园进行户外亲子活动的照片以及六一庆祝活动的照片资料等。我们还布置了一些孩子喜欢的动物挂饰，以及节日彩带，气球等。

常规教育：托班幼儿自控力差，一日生活的自理能力还很差，因此，在常规教育中我们与幼儿家长保持了一定的联系，让自控能力差的孩子在家中也进行一定的常规教育，如：这学期新插入的幼儿，常有打人的情况，我们通过与家长共同教育，使孩子改掉了这一坏习惯。刘诺言、娄润秋和简靖逸开学时，爱抢别人的玩具，现在也有了很大的进步。

认真开展主题活动“家园共育”。结合《纲要》精神和我班幼儿的年龄特点，我班开展了主题活动“家园共育”，并制作了网络图，采取了家长助教，幼儿生日会，户外亲子活动，家园栏，每月一次家长开放日等多种形式，并随时记录幼儿的表现和张贴幼儿活动照片。让家长真正了解幼儿园，了解教师的工作，了解孩子的在园生活，更好地促进孩子的发展。

（三）保育工作。保育工作是幼儿园的永久之重，特别是我班幼儿年龄小，体制差，天气变化很容易生病，对此，我们几位老师非常重视保育工作。

记住家长的叮嘱，对每个幼儿的情况牢记在心，并落实。

对特殊幼儿细心照顾。如刘诺言,孙若馨等体质差的幼儿在游戏之后要及时隔背，冯唯恒小朋友有疝气，不能运动量太，如果肚痛就必须平着抱一会，婷婷小朋友上厕所时常常容易打湿裤脚，要时时注意，发现湿了立即换好„„.协助保健医生做好了卫生保健工作和预防工作，保证幼儿身体健康。为幼儿创设了丰富的物质环境，清洁卫生和生活环境。还为幼儿创设轻松愉快的精神环境，保证幼儿身心健康成长。

（四）家长工作

孩子年龄小，本期新生又多。家长工作是非常重要的。因此，从一开学，我们就向家长宣传先进的育儿经验，如：孩子入园的适应期，幼儿习惯养成，幼儿用药的正确性等。通过家园联系栏，家长借阅，电话联系，便条联系等多种形式，让家长了解幼儿在园的情况，也让我们了解了家长的想法，使教师我家长增进了理解和友谊。

通过开展家长会，家长开放日，“亲子”活动等，促进了家园之间的相互理解、支持。在教学活动、庆祝活动等都少不了家长的支持和理解，有的家长可以为孩子提供参观的场所；有的家长可以提供幼儿操作的材料„„不论是以哪种形式的帮助都是对幼儿教育的支持和理解

（五）安全工作 在一日保教活动中，我班教师始终以“安全第一”为原则。因为孩子有了安全才有健康发展。从晨间入园到离园，老师都要随时注意幼儿的安全，并检查幼儿活动场所的安全隐患。托班幼儿有流尿现象，我们也同样做到勤检查，勤换洗，像对待自己的孩子一样。

三、反思和今后改进方向

这一学期来，我的工作中还存在着很多不足，我班幼儿的常规还不够好，玩玩具时，不够爱惜，在收拾玩具和学具时，不能主动将其放回原处，并有随地乱扔的现象。同时，今后我要认真学习新的幼儿园指导《纲要》将纲要的精神落实到教育教学工作中。刻苦钻研新教材.加强理论学习，不断提高自己的理论水平。

第四篇：个人经验总结

个人经验总结

时间的脚步匆匆，在课改的春风下作为新课程实施的具体操作者，面对新课程赋予我们的更宽泛更具有弹性的选择空间。开展课程改革的目的在于让幼儿更快乐，健康的成长，以下是我在一个学期实践中的几点总结：

一、政治思想方面：

本人热爱祖国、热爱中国共产党。做为幼儿教师能时刻关注国际形式的变化，以三个代表的思想引领自我，爱岗敬业，遵守幼儿园的各种规章制度。能认真的参加政治学习，做好笔记，本学期主要学习了：十六届三中全会的精神；两会精神和《中国人民政治协商会议章程修正案》等内容。平时能严格的要求自己，以师德建设年的要求时刻提醒自己，认真的学习《中小学教师师德规范》，结合台江区优秀青年教师：郑婕老师的先进事迹鞭策自己的工作。时刻以“爱生敬业、诚实守信、服务家长、奉献社会”的口号严格要求自己。树立高度的责任心对待幼儿园中的新的教育形式，关注每一个幼儿和幼儿的每一个细节，以积极的情感态度和幼儿应对。积极参加团组织的活动，在活动中能积极发表自己的意见和建议，时时以一个优秀团员的标准要求自己。

二、业务工作方面

1、加强班级的管理工作，创设与幼儿互动的环境：

结合大班幼儿的特点构建一个安全、愉快、宽松的外部环境，让幼儿在教师，集体面前想表现、敢表现、喜欢表现并能得到教师与同伴的积极应对。在环境的创设上不再只是老师单方面的努力或者简单意义上幼儿的参与，而是让幼儿出主意、参与设计、参与材料收集、布置、参与环境的管理，体现幼儿的思维、幼儿的发现、幼儿的操作、幼儿的记录。物质环境上，让幼儿有丰富的操作材料进行动手探索，在实践的过程中对已有的经验进行整合并获得新经验。本学年主要创设了：数学区、特色角、科学区、语言区等。在数学区中投放更多的操作材料，并提供记录本，鼓励幼儿将自己发现的记录下来，培养记录的好习惯；科学区中投放：磁性、浮沉、轻重等方面的操作材料，让幼儿通过活动发现身边的秘密；在语言区重点提供拼音方面的内容，制作了有趣的拼音树，拼音小列车等，以游戏的形式巩固幼儿对拼音的认识；特色区的创设能时刻进行改动，根据幼儿最近绘画的状况，请幼儿自己发表怎样布置的意见，教师再和幼儿一起动手布置。结合安全教育创设安全墙饰，将幼儿的谈话、绘画内容和教师的壁画结合，设计更生动的墙饰，让环境更好的与幼儿互动。

最为班主任能做好班级财产的管理工作，按时领借材料，及时的归还保管室。随时根据主题和幼儿园要求调整班级环境和墙饰。本学期还能结合大班幼儿自尊心强的特点设计了名为“夺宝奇兵”的竞赛墙饰，改变以往单纯点红点点进行表扬的形式，采用幼儿自评，一月一总评的形式。新的形式不仅调动大班幼儿竞争的积极性，也使幼儿在每月的总评后有新的开始，让他们不会有一开始落后他人就泄气的想法，更加努力的表现自己争取进步。并将每月总评的结果和幼儿成长档案上及家园联系单上的星级宝宝评选挂钩，使幼儿更积极的参与到其中，取得更好的效果，使家长也投入到幼儿的进中。

2、教育教学方面

根据开放教育理念，及幼儿全面平衡发展的理论基础，以挖掘幼儿潜能为教育模式的基本框架，以幼儿的经验、能力、兴趣、需要为出发点，在课程统整化、教材生活化、教学活动化的理念指导下，用主题的形式，将各领域的学习关联起来，园内园外活动并重，使幼儿在生活中学习，在与环境中人、事、物产生交互作用中获取各种经验而成长。本学期主要开展了：一切都在变、有趣的桥、绿色家园、各式各样的服装、运动和我等活动。我能根据主题目标、幼儿的发展需求选择适合的活动，在开学初制订周计划并每周及时调整教学内容，严格按照周计划开展活动，完成教育教学任务。在活动中让孩子自主地学习，并对孩子的自主学习进行了研究和实践，努力探索孩子自主学习的所需要的条件和因素，总结教师在实践中，促进孩子自主学习所应具备的教育理念和教育策略，从而切切实实地促进孩子的自主学习能力的发展。小组教学和个别教育相结合，让教师和幼儿、幼儿与同伴之间有更多的交流和对话。和社区对话，利用社区的环境开展活动，在本学期中利用白马河公园开展了“我和小树交朋友”“学习雷锋好叔叔”的主题活动；在“绿色家园”的活动中，我能和孩子一起动手制作环保小标志，并一起张贴到社区的宣传栏中，获得较好的反响。

结合幼小衔接的特点开展数学和拼音的教育教学活动。采用一周一竞赛了解幼儿的学习情况；一周两教学是幼儿得到进步。对个别能力较弱的幼儿在平时的区角活动中进行个别辅导，并与个别家长进行交流，使每个孩子都得到进步。本学期我主要负责数学方面的教育教学，本班的孩子能熟练的掌握10以内数的加减法、区分左右、认识时钟、根据算式编应用题、以及10 以内数的连加连减。在学期末我们还开展了“我要上小学”的系列主题活动，在活动中让幼儿了解小学、了解小学生、了解小学生的学习情况；在平时的教育教学中模仿小学上课的形式，激发幼儿做一个优秀小学生的自豪感，样成良好的学习习惯。

注重幼儿品德教育，无论在教育活动或生活活动中，我都从细节做起，从一点一滴培养孩子的好习惯。在本学年中开展了“我是大班小朋友”“向雷峰叔叔学习”“从小爱劳动”等主题活动。同时还结合各种不同类型的活动对幼儿尽心爱父母，爱家乡的教育。结合安全教育活动和季节的变化对幼儿进行健康教育，还更加重视“关心他人”情感的培养，培养幼儿从小爱他人、关心他人、关心社会的良好情感。

3、爱的承诺方面

（1）平时能作到热爱学生，衣着整洁得体，语言规范健康，举止文明礼貌，注重自身的语言和谈吐，以优美大方的形象带给幼儿美好的体验。轻声细语的和孩子交流。结合主题活动，采取讨论的方式，和孩子共同制定班级常规。督促、提醒幼儿按讨论过的常规活动，提高幼儿的自省能力，建立以幼儿为中心的自律班级常规。培养良好的倾听和举手回答问题的好习惯。

（2）及时的撰写每月爱的承诺，根据家长的意见提出新的希望和要求。

（3）认真制定幼儿成长档案、社区成长档案和个人成长档案，能每月按时的增添新开展的内容，及时拍照记录，给幼儿的成长、自身的成长留下痕迹。丰富幼儿成长档案的内容，改变以往单纯以幼儿绘画作品为主的形式，收集幼儿绘画、手工、数学、拼音、谈话、记录等多种活动痕迹，并结合幼儿每月一评分发“小红花”丰富幼儿成长档案内容。还能利用问卷调查、小表格等形式让家长也参与到幼儿档案的制作中。在社区成长档案中制作班级主页，除了能介绍最近开展的活动外，还能根据家长的疑难给予解答，根据季节和实际情况的需要增添家教文章，如《幼儿心理健康的调查》《幼儿入小学注意》等；还能请个别家长撰写家教文章，向其余家长介绍自己的家教经验。认真的对待教师个人成长档案，每月及时反思，增添自己的学习心得和体会，制作个人主页，使成长档案更丰富。

（4）注意培养幼儿良好的生活习惯，如正确的睡姿、坐姿、站姿等，引导幼儿学会解决同伴间的小纠纷。教幼儿了解自我保护的常识和行为，如用眼卫生和换牙的注意事项等。根据天气的变化，提醒幼儿及时的穿脱衣物，多饮水。对个别体弱的孩子格外关心。

4、特色教学方面

认真的开展特色教育，在开学初制定好教学进度，画好所有范图，每周五按时开展活动。在活动中更加重视用笔和用墨的讲解和示范，使每个孩子都能较好的发展。注意个别幼儿的指导，纠正其不正确的用笔姿势。注意对幼儿作品的讲评，请幼儿自己观察发现优秀的作品，对有进步的孩子及时的表扬。将每次的幼儿作品进行展示，并请家长提出自己的意见和建议，及时的修改我们的教学。在期末布置幼儿特色展示区，将幼儿一学期以来的作品分别展示，让家长纵向比较了解孩子的进步。在期末撰写特色教育心得《教水墨画有感》。制作特色教育袋，整理特色教育的教材、范图、文章等内容，为今后开展活动做好准备。

5、其他方面

（1）能认真的开展年段长工作，带领年段教师开展教研和教育教学工作。在每次的教研活动中带头发表意见，总结年段教师的意见并进行交流。本学期与年段教师配合开展了年段班级家长会、家长开放日、六一海报的设计、六一游园活动、安全教育活动、毕业典礼等活动。

（2）本学期继续担任林张艳老师的指导教师，本学期主要对艺术教育教学方面的进行指导帮助。本学期在业务园长的带领下，开示范课：《歌曲——勤快人和懒惰人》、《绘画——我喜欢的桥》《绘画——海底的故事》，效果良好。年轻教师林张艳的汇报课也有很大的进步。

（3）本学期能认真对待幼儿园里的各项任务，在教师技能技巧比赛中获演讲二等奖、绘画三等奖、歌唱欢乐奖的好成绩。指导幼儿郑婧仪获市科协科幻画比赛一等奖，薛鑫仪获二等奖。薛鑫怡、张钰、詹妍、吴心悦、周仲卿分获幼儿园“爱妈妈”绘画比赛一二三等奖；薛鑫怡、林君艺、谢轩武获幼儿园“元宵花灯制作比赛”一二三等奖。

（4）本学期还能根据幼儿的发展选择科研的课题，从幼儿和教师的互动关系入手进行调查研究，撰写了论文《教师在教育过程中与幼儿互动关系的研究》。

三、做好家长工作——家园合作、同向同步

1、利用家园联系单向家长介绍幼儿每月的情况，及时的了解幼儿在家在园的情况，家园同步的开展教育教学工作。

2、本学期我们能认真的制作幼儿成长档案和社区成长档案，家长一起参与到制作的过程中，让他们更深刻的体验幼儿园教育的特殊性和趣味性，更家了解自己的孩子的发展状况。

3、通过及时更换家教之窗的家教知识，向家长宣传科学的育儿知识。本学期还承担了园社区宣传栏5月份设计工作，能根据幼儿园的动向和家长的需要制作有效的宣传栏，为家长提供帮助，得到家长的好评。

4、按时召开班级家长会和家委会，做好记录，能根据家长的意见和建议调整具体工作。在家委会的支持下开展好各种家长开放活动，如：家长开放日、六一游园活动等。

总之在这一年里我的工作取得了一定的成绩，但仍然存在许多的不足，如性格比较急，个别的家长也对我提出了意见和建议，在今后的工作中我会在反思中不断的改进自己提高自己。

胡天慧

2013年7月6日

第五篇：PCR学习心得

参加《临床基因扩增实验室技术人员上岗培训

班》心得

本人于2015年3月10至15日参加了广东省临检中心举办的临床基因扩增实验室技术人员上岗培训班。通过学习，除了取得广东省临检中心颁发的培训证书外，还极大的提高了理论和实验操作水平，现总结如下。

此次培训包括理论培训和实验操作。在理论培训课程当中，卫生部临床检验中心的李金明教授为我们详细讲解了《临床基因扩增实验室设计及质量管理体系的建立》、《临床基因扩增检验的质量保证》等内容。通过学习，了解到临床PCR实验室设计必须遵循各区独立、注意风向、因地制宜，方便工作的原则。质量管理的内涵：写你所做的，做你所写的，记录你已做的，分析你已做的。认识到临床标本的正确采集、运送、保存的重要性，是临床检验的质量保证的关键性环节，是解决涉及实验室检验的医患纠纷的方法之一。同时通过病例分析，对于临床基因扩增检验的检验前，检验中，检验后的质量控制，还有实验的结果处理和分析有了重新认识。对于实验室是否出现污染的鉴别，以及出现污染的处理措施有了深刻了解。

临床实验医学的发展现在经历了三个时代，分别是生化诊断时代，免疫诊断时代，和和现在的分子（基因）诊断时代，而现今时代的标志性技术正是PCR技术，是反映疾病本质的实验。正是有临床基因扩增检验技术在癌症等疾病的诊断方面有了多方应用，通过驱动基因的选择，为靶向治疗患者延长了生存期。为个体化诊疗中对疾病的鉴别诊断，诊治方案的设定提供重要的参考依据，同时也为治疗过程中临床对于治疗方案的调整提供依据。临床基因扩增检验技术在个体化诊疗中是不可或缺的一部分，是其重要的组成部分，具有强大的发展潜力和前景。

实验操作内容为EGFR突变基因检测。实验操作过程中，通过认真学习和细致听讲带教老师的规范实验操作，了解到了实验的关键操作，纠正了平常在临床实际工作操作上的一些不良习惯，为日后规范检验操作提供了基础。通过分组亲自操做实验，分析和判断自己的实验结果，做实验记录笔记，基本掌握EGFR突变基因检测。

通过为期六天的理论和实验培训，从中学习到了很多知识，掌握了严格的防污染以及污染的处理措施，了解到实验室设置的人流、物流、气流的走向设计原则，解决了日常工作中的实际问题，为日后临床基因扩增检验工作的开展打下了坚实的基础。了解到临床基因扩增检验技术的发展方向，受益匪浅。