第一篇：分子生物学实验室的常规仪器设备
(一)温度控制系统：
1.冰箱: 根据药品、试剂及多种生物制剂保存的需要，必须具备不同控温级别的冰箱，最常使用的有：4℃、-20℃、-80℃冰箱。4℃适合储存某些溶液、试剂、药品等。
-20℃适用于某些试剂、药品、酶、血清、配好的抗生素和DNA、蛋白质样品等。-80℃适合某些长期低温保存的样品、纯化的样品、特殊的低温处理消化液等的保存。0-10℃的冷柜适合低温条件下的电泳、层析、透析等实验。
2．液氮罐：有些实验材料、某些器官组织、细胞株、菌株及纯化的样品等，要求速冻和长期保存在超低温环境下，就需要一个液氮罐（-196℃）具有经济、省力和较好地保持细胞生物学特性的优点。
3．培养箱：37℃恒温箱用于细菌的固体培养和细胞培养。
CO2培养箱适用于培养各种细胞，可恒定地提供一定量的CO2（通常5%），用来维持培养液的酸度（pH值）。
37℃恒温空气摇床可进行液体细菌的培养。4.水浴锅：用于保温。
25-100℃水浴摇床可用于分子杂交试验，各种生物化学酶反应等试验的保温。25-100℃水浴箱用于常规试验。5.烘箱：主用于烘干实验器皿，有些需要温度高些，有些需要温度低些。用于RNA方面的实验用具，需要在250℃烤箱中烘干，有些塑料用具只能在42-45℃的烤箱中进行烘干。
（二）水的净化装置：随着分子生物学的飞速发展，许多实验对水纯度的要求越来越高。1.蒸馏水皿：单蒸水常难以满足实验要求。双蒸水、三蒸水配液，许多实验要去离子水。多次蒸馏水可除去水中挥发性杂质，不能完全除去水中溶解的气体杂质（Mn2、Cu2、Zn2、Fe3、Mo(Ⅵ)）。
2.离子交换器：去离子水—用离子交换法制取的水，称去离子水。
去离子效果好，但不能除去水中的非离子型杂质，其中常含有微量的有机物（树脂等）。3．超纯水：用蒸馏水、离子交换水、反渗透纯水做为供水，磁铁耦合齿轮泵作用使水循环。用于PCR、PCR氨基酸分析、DNA测序、酶反应、组织和细胞培养等。
（三）菌消毒设备：分子生物学所用大部分试剂，而且实验用具都应严格消毒灭菌。1．蒸汽消毒锅：用于小批量物品的随时消毒。大批实验物品、试剂、培养基可使用大型消毒且定时进行消毒
2.紫外线：75%乙醇、0.1%SDS（消毒剂）
一些耐高压、高温消毒且可用紫外线照射或乙醇和SDS浸泡。
紫外线照射使用方便，且很方便，但灭菌效果与距离有关，且产生臭氧污染安全，用于无菌室，超净台和塑料用具的消毒。
3.滤器滤膜：不耐高温、高压的试剂用其处菌。4.煮沸消毒：主用于金属器械和针急需时采用。
（四）计量系统： 1.称量系统：（各种天平）台秤、托盘天平、钮力摆动天平、光电分子天平、精密电子分析天平
2.液体体积的度量：精：量筒、移液管、微量取液器 粗：刻度试管、烧杯、锥形瓶 3.pH值测量：
pH计：测定溶液中H 的直接电位的仪器，主要通过一对电极，在不同的pH溶液中产生不同的电动势用pH值表示出来。
pH试纸：只适用于培养液、酚饱和液、缓冲液或其它试剂溶液的pH值的粗略估计。而大部分试剂的配制要求严格的pH值，需精确度高（小数点后两位）的pH计。4.OD值测量：光密度、分光光度计是利用物质在可见光和紫外线区域中的吸收光谱来鉴定该物质的性质及其含量的一种仪器。它是由光源、单色器、吸收池、接收器、测量仪表或显示屏幕所组成。OD值是许多溶液中溶质定量的方便指标之一，通过所产生的单色光而测定某一溶液对该单色光的吸收值，利用它可进行核酸溶液定量和纯度的初步判断。
（五）离心机：离心技术是研究生物的结构和功能中不可缺少的一种物理技术手段。因为各种物质在沉淀系数、浮力、和质量等方面有差异，可利用强大的离心力场，使其分离、纯化和浓缩。目前有各种各样的离心机。可供少于0.05ml到几升的样品离心之用。离心技术应用广泛，包括收集和分离细胞、细胞器和生物大分子等。据其转速的不同，可分为以下几种类型：
1.普通离心机：最大转速6000 r/m，最大离心力6000g ①医用或台式离心机：是离心机中最简单而廉价的，最常用于收集快速沉降系数的物质，如红细胞、粗大的沉淀物、酵母菌和细菌等。
②低速冷冻离心机：主要用于细胞、细胞核、细胞膜和细菌的沉淀和收集等。2 2.高速离心机：最大转速25000 r/m，最大离心力89000g 有冷冻和常温两种，多用于制备和手收集微生物、细胞碎片、细胞、大的细胞器、硫酸铵沉淀物以及免疫沉淀物等。
3.超速离心机：最大转速9000 r/m，最大离心力694000g。
4.台式超速离心机：最大转速12000r/m，最大离心力625000g。
（六）超净工作台：内有紫外灯、照明灯、还应有酒精灯火焰、75%乙醇等灭菌的设备，是一种提供局部洁净度的设备。其原理是鼓风机驱动空气，经过低、中效的过滤器后，通过工作台面，使实验操作区域成为无菌的环境。超净台按气流方向的不同大致有几种类型： ①侧流式：净化后气流，从左侧或右侧通过工作台面，流向对侧，或者从上往下或从下往上流向对侧，他们都能形成气流屏障而保障台面无菌。
缺点：在净化气流和外边气体交界处，可因气体的流向而出现负压，使少量的未净化气体混入，而造成污染。
②外流式：气流是面向操作人员的方向流动，从而保证外面气体不能混入。
缺点：在进行有害物质实验时，对操作人员不利，但可采用有机玻璃把上半部分遮挡起来，使气流往下方流出。
（七）电泳系统：电泳技术是检测、鉴定各种生物大分子的纯度、含量及描述它们的特征，甚至还是分离、纯化、回收和浓缩样品的工具之一。核酸和蛋白质等都带有电荷，当它们被置于电场中时，能够移动。
电泳装置由两部分组成：电源装置和电泳槽装置。
① 电泳装置：电源需经稳流通过稳压器，既能提供稳定的直流电，又能输出稳定的电压。可用于三种： 常度稳压电泳仪：输出电压0-500v 0-15mA 中度稳压电泳仪：输出电压400-1000v 高度稳压电泳仪：输出电压1000以上的电源装置。② 电泳槽装置：分两种
水平式电泳槽：一般分为微型电泳槽和大号水平式电泳槽 垂直式电泳槽：分垂直平板电泳槽和圆柱形电泳槽装置。
（八）PCR仪：Polymerase Chain
Reaction仪，也称DNA热循环仪，基因扩增，它是使一对寡核苷酸引物结合到正负DNA链上的靶序列两侧，从而酶促合成拷贝数百万倍的靶序列DNA片段，它的每一循环包括在三种不同温度进行的DNA变性，引物复性，DNA聚合酶催化的延伸反应三个过程。
（九）凝胶成像分析系统: 对电泳后含溴乙锭（EB）核酸样品的观察分析。
（十）干燥设备： 3 1.真空加热干燥箱：核酸在硝酸纤维素膜和尼龙膜上固定，用于杂交实验。
2.电泳凝胶干燥箱：电泳后的凝胶进行脱水干燥的仪器，一般可将凝胶干燥到一些玻璃纸上，干燥后的凝胶易于保存。
3.液氮冷冻干燥：适用于活性蛋白质样品的干燥与结晶。
4.真空泵：许多实验都需要抽真空。如：乙醇沉淀后核酸样品的干燥，电泳凝胶的干燥等。
（十一）其他
1.微波炉：便于一些溶液的快速加热和定温加热，电泳琼脂糖凝胶配制、溶化等。
2.制冰机：用于制造大多数核酸、蛋白质的实验操作所需的低温环境，以减少核酸酶或蛋白质酶的水解。3.层析装置：（色谱分离）是一种分离多组分混合物的有效物理方法。
真空印记系统，DNA合成/测序仪：这些都是对核酸进行深入研究的必备仪器。4.磁力搅拌器：多角度旋转混匀器、快速振荡混合器：用于混合仪器。5.组织匀浆器：超声组织及细胞破碎器，用其进行样品的分离提纯实验。
6.通风橱：很多溶剂能逸出毒气，必备柜，放射性试验还要有有机玻璃屏蔽。7.玻璃蒸馏器、电热加帽、变压器：用于酚等有机溶剂的蒸馏。8.Tip头、Eppendorf管： 微管移液器tip头（吸液尖）、Eppendorf管（微量离心管）可洗涤，硅化消毒后反复使用。对一些要求严格的实验，如RNA的提取、保存等操作，应使用新的消毒tip头与Eppendorf管。另外还应备有常用规格的离心管（1000ml、500 ml、250 ml、50 ml、7 ml等）及96孔、24孔、12孔、6孔的细胞培养塑料平板等。9.小型设备、用具：
定时器、滤膜、保鲜膜、防护眼镜鸭嘴镊、常规的玻璃或塑料器皿（包括平皿、试管、烧杯、量瓶、试剂分液漏斗、避光保存的试剂应使用棕色试剂瓶，如饱和酚、巯基乙醇等）、记号笔、各种手套PE、乳胶、家用、防酸的等）
第二篇：分子生物学实验室的常规仪器设备及有关操作
分子生物学实验室的常规仪器设备及有关操作
一、验室的常规仪器、设备(一)温度控制系统：
1.冰箱: 根据药品、试剂及多种生物制剂保存的需要，必须具备不同控温级别的冰箱，最常使用的有：4℃、-20℃、-80℃冰箱。
4℃适合储存某些溶液、试剂、药品等。
-20℃适用于某些试剂、药品、酶、血清、配好的抗生素和DNA、蛋白质样品等。
-80℃适合某些长期低温保存的样品、纯化的样品、特殊的低温处理消化液等的保存。
0-10℃的冷柜适合低温条件下的电泳、层析、透析等实验。2．液氮罐：有些实验材料、某些器官组织、细胞株、菌株及纯化的样品等，要求速冻和长期保存在超低温环境下，就需要一个液氮罐（-196℃）具有经济、省力和较好地保持细胞生物学特性的优点。
3．培养箱：37℃恒温箱用于细菌的固体培养和细胞培养。CO2培养箱适用于培养各种细胞，可恒定地提供一定量的CO2（通常5%），用来维持培养液的酸度（pH值）。
37℃恒温空气摇床可进行液体细菌的培养。4.水浴锅：用于保温。
25-100℃水浴摇床可用于分子杂交试验，各种生物化学酶反应等试验的保温。
25-100℃水浴箱用于常规试验。
5.烘箱：主用于烘干实验器皿，有些需要温度高些，有些需要温度低些。用于RNA方面的实验用具，需要在250℃烤箱中烘干，有些塑料用具只能在42-45℃的烤箱中进行烘干。
（二）水的净化装置：随着分子生物学的飞速发展，许多实验对水纯度的要求越来越高。1.蒸馏水皿：单蒸水常难以满足实验要求。双蒸水、三蒸水配液，许多实验要去离子水。
多次蒸馏水可除去水中挥发性杂质，不能完全除去水中溶解的气体杂质（Mn2+、Cu2+、Zn2+、Fe3+、Mo(Ⅵ)）。
2.离子交换器：去离子水—用离子交换法制取的水，称去离子水。
去离子效果好，但不能除去水中的非离子型杂质，其中常含有微量的有机物（树脂等）。
3．超纯水：用蒸馏水、离子交换水、反渗透纯水做为供水，磁铁耦合齿轮泵作用使水循环。用于PCR、PCR氨基酸分析、DNA测序、酶反应、组织和细胞培养等。
（三）菌消毒设备：分子生物学所用大部分试剂，而且实验用具都应严格消毒灭菌。
1．蒸汽消毒锅：用于小批量物品的随时消毒。大批实验物品、试剂、培养基可使用大型消毒且定时进行消毒
2.紫外线：75%乙醇、0.1%SDS（消毒剂）
一些耐高压、高温消毒且可用紫外线照射或乙醇和SDS浸泡。紫外线照射使用方便，且很方便，但灭菌效果与距离有关，且产生臭氧污染安全，用于无菌室，超净台和塑料用具的消毒。
3.滤器滤膜：不耐高温、高压的试剂用其处菌。4.煮沸消毒：主用于金属器械和针急需时采用。
（四）计量系统：
1.称量系统：（各种天平）台秤、托盘天平、钮力摆动天平、光电分子天平、精密电子分析天平
2.液体体积的度量：精：量筒、移液管、微量取液器，粗：刻度试管、烧杯、锥形瓶
3.pH值测量：
pH计：测定溶液中H+的直接电位的仪器，主要通过一对电极，在不同的pH溶液中产生不同的电动势用pH值表示出来。pH试纸：只适用于培养液、酚饱和液、缓冲液或其它试剂溶液的pH值的粗略估计。而大部分试剂的配制要求严格的pH值，需精确度高（小数点后两位）的pH计。
4.OD值测量：光密度、分光光度计是利用物质在可见光和紫外线区域中的吸收光谱来鉴定该物质的性质及其含量的一种仪器。它是由光源、单色器、吸收池、接收器、测量仪表或显示屏幕所组成。OD值是许多溶液中溶质定量的方便指标之一，通过所产生的单色光而测定某一溶液对该单色光的吸收值，利用它可进行核酸溶液定量和纯度的初步判断。
（五）离心机：离心技术是研究生物的结构和功能中不可缺少的一种物理技术手段。因为各种物质在沉淀系数、浮力、和质量等方面有差异，可利用强大的离心力场，使其分离、纯化和浓缩。目前有各种各样的离心机。可供少于0.05ml到几升的样品离心之用。离心技术应用广泛，包括收集和分离细胞、细胞器和生物大分子等。据其转速的不同，可分为以下几种类型：
1.普通离心机：最大转速6000 r/m，最大离心力6000g ①医用或台式离心机：是离心机中最简单而廉价的，最常用于收集快速沉降系数的物质，如红细胞、粗大的沉淀物、酵母菌和细菌等。
②低速冷冻离心机：主要用于细胞、细胞核、细胞膜和细菌的沉淀和收集等。
2.高速离心机：最大转速25000 r/m，最大离心力89000g 有冷冻和常温两种，多用于制备和手收集微生物、细胞碎片、细胞、大的细胞器、硫酸铵沉淀物以及免疫沉淀物等。
3.超速离心机：最大转速9000 r/m，最大离心力694000g。4.台式超速离心机：最大转速12000r/m，最大离心力625000g。
（六）超净工作台：内有紫外灯、照明灯、还应有酒精灯火焰、75%乙醇等灭菌的设备，是一种提供局部洁净度的设备。其原理是鼓风机驱动空气，经过低、中效的过滤器后，通过工作台面，使实验操作区域成为无菌的环境。超净台按气流方向的不同大致有几种类型： ①侧流式：净化后气流，从左侧或右侧通过工作台面，流向对侧，或者从上往下或从下往上流向对侧，他们都能形成气流屏障而保障台面无菌。
缺点：在净化气流和外边气体交界处，可因气体的流向而出现负压，使少量的未净化气体混入，而造成污染。
②外流式：气流是面向操作人员的方向流动，从而保证外面气体不能混入。
缺点：在进行有害物质实验时，对操作人员不利，但可采用有机玻璃把上半部分遮挡起来，使气流往下方流出。
（七）电泳系统：电泳技术是检测、鉴定各种生物大分子的纯度、含量及描述它们的特征，甚至还是分离、纯化、回收和浓缩样品的工具之一。核酸和蛋白质等都带有电荷，当它们被置于电场中时，能够移动。
电泳装置由两部分组成：电源装置和电泳槽装置。
① 电泳装置：电源需经稳流通过稳压器，既能提供稳定的直流电，又能输出稳定的电压。可用于三种：
常度稳压电泳仪：输出电压0-500v 0-15mA 中度稳压电泳仪：输出电压400-1000v 高度稳压电泳仪：输出电压1000以上的电源装置。② 电泳槽装置：分两种
水平式电泳槽：一般分为微型电泳槽和大号水平式电泳槽 垂直式电泳槽：分垂直平板电泳槽和圆柱形电泳槽装置。
（八）PCR仪：Polymerase Chain Reaction仪，也称DNA热循环仪，基因扩增，它是使一对寡核苷酸引物结合到正负DNA链上的靶序列两侧，从而酶促合成拷贝数百万倍的靶序列DNA片段，它的每一循环包括在三种不同温度进行的DNA变性，引物复性，DNA聚合酶催化的延伸反应三个过程。
（九）凝胶成像分析系统: 对电泳后含溴乙锭（EB）核酸样品的观察分析。
（十）干燥设备：
1.真空加热干燥箱：核酸在硝酸纤维素膜和尼龙膜上固定，用于杂交实验。
2.电泳凝胶干燥箱：电泳后的凝胶进行脱水干燥的仪器，一般可将凝胶干燥到一些玻璃纸上，干燥后的凝胶易于保存。
3.液氮冷冻干燥：适用于活性蛋白质样品的干燥与结晶。4.真空泵：许多实验都需要抽真空。如：乙醇沉淀后核酸样品的干燥，电泳凝胶的干燥等。
（十一）其他
1.微波炉：便于一些溶液的快速加热和定温加热，电泳琼脂糖凝胶配制、溶化等。
2.制冰机：用于制造大多数核酸、蛋白质的实验操作所需的低温环境，以减少核酸酶或蛋白质酶的水解。
3.层析装置：（色谱分离）是一种分离多组分混合物的有效物理方法。
真空印记系统，DNA合成/测序仪：这些都是对核酸进行深入研究的必备仪器。
4.磁力搅拌器：多角度旋转混匀器、快速振荡混合器：用于混合仪器。
5.组织匀浆器：超声组织及细胞破碎器，用其进行样品的分离提纯实验。
6.通风橱：很多溶剂能逸出毒气，必备柜，放射性试验还要有有机玻璃屏蔽。
7.玻璃蒸馏器、电热加帽、变压器：用于酚等有机溶剂的蒸馏。8.Tip头、Eppendorf管：
微管移液器tip头（吸液尖）、Eppendorf管（微量离心管）可洗涤，硅化消毒后反复使用。对一些要求严格的实验，如RNA的提取、保存等操作，应使用新的消毒tip头与Eppendorf管。另外还应备有常用规格的离心管（1000ml、500 ml、250 ml、50 ml、7 ml等）及96孔、24孔、12孔、6孔的细胞培养塑料平板等。9.小型设备、用具：
定时器、滤膜、保鲜膜、防护眼镜鸭嘴镊、常规的玻璃或塑料器皿（包括平皿、试管、烧杯、量瓶、试剂分液漏斗、避光保存的试剂应使用棕色试剂瓶，如饱和酚、巯基乙醇等）、记号笔、各种手套PE、乳胶、家用、防酸的等）
二、本期实验所用主要仪器、设备的功能及操作 1.酚的重蒸馏装置：空气冷凝式玻璃蒸馏器。
一般酚是无色透明的结晶，如呈粉色或黄色，表明其中含有酚的氧化产物，如醌、二酸等，变色的酚不能用于实验，因其中的酚氧化物可破坏核酸的磷酸二酯键，并引起DNA链的交联。使用前必须在160℃-180℃重蒸馏以去除能引起RNA和DNA断裂和交联的污染杂质，从而得到纯净的酚。
2.磁力搅拌器：81-2型恒温磁力搅拌器
将导电温度表用导线与二芯插头连接，插入后面的温度表孔内，当温度上升到预先调整好的度数时即自动停止加热（控温搅拌）。主要用于物质的快速搅拌、溶解和混匀。如配制试剂，制备酚的水饱和液等。4 3.蒸馏水器：1810B自动双重纯水蒸馏器，石英管加热式，本器的一次及二次蒸馏均有保护装置，使用安全可靠，热继电器当冷却水突然中断或缺水的情况下，即自动切断电源。干簧继电器控制二次蒸馏瓶内的水位，其高度应以在水位降低时能自动切断电源为准，从而达到自动控制水位的目的。
该仪器主要用于制备双蒸水和三蒸水。
4.离心机：TGL-16G台式高速离心机，最大转速20000rpm，主要用于核酸提取时蛋白质的沉淀和有机相与水相的分层，PCR检测的瞬时离心。
5.微量取液器：主要用于精确量取微量液体体积和核酸水相的转移。
6.匀浆器：5ml、10ml玻璃匀浆器。主用于组织细胞的破碎。7.凝胶成像分析系统 主用于核酸样品琼脂糖凝胶和PCR电泳结果的紫外观察和照像。8.PCR仪：PTC-200基因扩增仪 体外扩增核酸的仪器
9.蒸汽消毒锅：用于实验用试剂、器皿、用具等的灭菌清毒 有电加热式、电炉加热式两种。
10.超净台：JJT-1300型洁净工作台，侧流式。
原理：吸进气经过初、中级过滤皿（无纺布滤过）后，再通过风机经高级过滤器（超细玻璃纤维滤纸制成）而形成洁净空气。主要是在局部空气造成洁净空气环境，以使工作区域中的悬浮粒子及微生物控制在最低限度内。
本台操作压为垂直层流压，因此出风面与操作位置不应放置多余的物品，以免妨碍气流的正常流动，影响洁净度，台面板上的孔作为通风孔，使用时避免有液体或其他物品漏入空中，以免影响内部构件。风速可调。
使用：75%乙醇消毒2-3次，摆放好实验用品。插上电源，紫外消毒30分钟，启动风机5m后关灯，关灯后10分钟打开照明灯，即可使用。
11.电泳系统：
①电泳仪：HV-3000型高度三恒多用电泳仪（恒压、恒流、恒功率）
②电泳槽：水平式两种。
12．微波炉：主要用于琼脂糖的快速溶解。
第三篇：分子生物学实验室常用仪器设备简介(精)
实验一 分子生物学实验室常用仪器设备简介
实验室主要仪器，设备的简介及使用方法 微量移液器
微量移液器是连续可调的、计量和转移液体的专用仪器，其装有直接读数容量计。
微量移液器有多种规格，在移液器量程范围内能连续调节读数。移液器常见的四种规格分别是：
0.5～10μl(读数窗显示0.5～10.0,每转1档为0.1μl);10～100μl(读数窗显示10.0～100, 每转1档为1μl);20～200μl(读数窗显示20～200, 每转1档1μl);100～1000μl(读数窗显示100～1000, 每转1档为5μl).量液的操作步骤：
1． 将微量移液器装上吸头（不同规格的移液器用不同的吸头）2． 将微量移液器按钮轻轻压至第一停点； 3． 垂直握持微量移液器，使吸嘴浸入液样面下几毫米，千万不要将吸嘴直接插到液体底部； 4． 缓慢、平稳地松开控制按钮，吸上样液。否则液体进入吸嘴太快，导致液体倒吸入移液器内部，或吸入体积减少； 5． 等一秒钟后将吸嘴提离液面
6．平稳地把按钮压到第一停点，再把按钮压至第二停点以排出剩余液体； 7． 提起微量移液器，然后按吸嘴弹射器除去吸嘴。
量液操作注意问题：
1． 未装吸嘴的微量移液器绝对不可用来吸取任何液体。
2． 一定要在允许量程范围内设定容量，千万不要将读数的调节超出其适用的刻度范围，否则会造成损坏。
3． 不要横放带有残余液体吸嘴的移液器。4． 不要用大量程的移液器移取小体积样品。
5.移液器使用完后，将刻度调到最大刻度，收藏。低温台式高速离心机 离心机的分类
低速：每分钟几千转
高速：每分钟1 ~ 3万转
超速：每分钟3万转以上
离心机的功能：
分离，纯化 低速：细胞等大分子
高速：DNA，蛋白等
超速: 病毒，蛋白等，根据用途又可分为分析超速离心 机和制备超速离心机。
低温分离技术是分子生物学研究中必不可少的手段 基因片段的分离、酶蛋白的沉淀和回收以及其它生物样品的分离制备实验中都离不开低温离心技术
本实验室所用离心机为台式高速离心机（IBM），配有角式转头：24×1.5ml；极限转速20000rpm
台式高速离心机使用步骤
1、把离心机放置于平面桌或平面台上，目测使之平衡，用手轻摇一下离心机，检查离心机是否放置平衡。
2、打开门盖，将离心管放入转子内，离心管必须成偶数对称放入，且要事先平衡，完毕用手轻轻旋转一下转子体，使离心管架运转灵活。
3、关上门盖，注意一定要使门盖锁紧，完毕用手检查门盖是否关紧。
4、插上电源插座，按下电源开关（电源开关在离心机背面，电源座上方）。
5、设置转子号、转速、时间：
在停止状态下时，用户可以设置转子号、转速、时间，此时离心机处于设置状态，停止灯亮、运行灯闪烁；按下启动离心开始（常用，最高转速为13000r/min，时间最长为20分钟）；
注意：对应的转子一定要设置在相应的转速范围内，不可超速使用，否则对试管或转子有损坏。
6、离心机时间倒计时到“0”时，离心机将自动停止，当转子停转后，打开门盖取出离心管，关断电源开关。注意事项：
1、离心机在运转时，不得移动离心机，不要打开门盖。
2、安放离心机的台面应坚实平整，四只橡胶机脚都应与台面接触和均匀受力，以免产生振动。
3、离心前，离心管加液要平衡，若加液差异过大运转时会产生大的振动，此时应停机检查，使加液符合要求，离心试管必须成偶数对称放入。
4、若运转时有离心试管破裂，会引起较大振动应立即停机处理。
5、离心机彻底停止后，才可开盖，取样 恒温气浴摇床 使用及性能：
摇床（振荡器）为实验室的常规设备。广泛用于对温度和振荡频率有较高要求的细菌培养、发酵、杂交、生物化学反应以及酶和组织研究等。实验室常用的液体摇匀，微生物、细菌和细胞培养。
SHK-99-Ⅱ型台式空气恒温摇床，采用微电脑控制系统，温度范围：室温＋5℃～60℃，精度±0.5℃；时间范围：1分钟～99小时59分钟；转速范围：60RPM～250RPM 操作程序：
1）样品瓶牢固放入弹簧夹中
2）接通电源开关，仪器进入准备状态
3）参数设定，（设定温度、时间、转速等参数）
4）按启动键仪器开始工作，按暂停键可暂停托盘的旋转；
5）按下控制面板的电源键两秒，显示屏显示消失，关闭电源总开关 超净工作台 使用及性能：
超净工作台为分子生物学无菌操作提供可能，分为垂直送风和水平送风两种。
超净台由三相电机作鼓风动力，功率145～260W左右，将空气通过由特制的微孔泡沫塑料片层叠合组成的“超级滤清器”后吹送出来，形成连续不断的无尘无菌的超净空气层流，即所谓“高效的特殊空气”，它除去了大于0.3μm的尘埃、真菌和细菌孢子等等。超净空气的流速为24～30m/min，这已足够防止附近空气可能袭扰而引起的污染，这样的流速也不会妨碍采用酒精灯或本生灯对器械等的灼烧消毒。工作人员就在这样的无菌条件下操作，保持无菌材料在转移接种过程中不受污染。
操作程序：
1）使用工作台时，先经过清洁液浸泡的纱布擦拭台面，然后用消毒剂擦拭消毒。
2）接通电源，提前30分钟打开紫外灯照射消毒，处理净化工作区内工作台表面积累的微生物，15分钟后，关闭紫外灯，开启送风机。
3）工作台面上，不要存放不必要的物品，以保持工作区内的洁净气流不受干扰。
4）操作结束后，清理工作台面，收集各废弃物，关闭风机及照明开关，用清洁剂及消毒剂擦拭消毒。
5）最后开启工作台紫外灯，照射消毒30分钟后，关闭紫外灯，切断电源。
注意事项：
操作时一定注意关掉紫外，防止对实验人员造成伤害 灭菌锅
使用及性能：
细菌和细胞培养以及核酸等有关实验所用的试剂、器皿及实验用具，应严格灭菌；应将实验器械，试剂等进行高压消毒。对于经过导入DNA重组分子的菌株，操作后必须进行严格的高压消毒灭活处理 ；大批实验物品、试剂、培养基等可以使用大型消毒器进行消毒。一些不能经受高压、高温消毒的试剂可用滤器滤膜除菌，器皿可用紫外线照射、75%乙醇或0.1%的十二烷基硫酸钠（SDS）浸泡消毒。所有的细胞培养、细菌培养的操作，都应在紫外线消毒后的超净工作台中进行
操作程序：
1）开盖：转动手轮，使锅盖离开密封圈，添加蒸馏水刚没至板上
2）通电：将控制面板上电源开关按至ON处，若水位低（LOW）红灯亮
3）堆放物品：需包扎的灭菌物品，体积不超过200mm×100mm×100mm为宜，各包装之间留有间隙，堆放在金属框内，这样有利于蒸汽的穿透，提高灭菌效果，灭菌时间： 121℃，20min，；如为液体，液体必须装在可耐高温的玻璃器皿中，且不可装满，2/3即可，121℃，18-20min 3）密封高压锅：推横梁入立柱内，旋转手轮，使锅盖下压，充分压紧
4）设定时间和温度，开始灭菌
5）灭菌结束，所有东西放入干燥箱干燥，排尽水气 注意事项：
如是手动的灭菌锅，在灭菌过程中，应注意排净锅内冷空气，锅内冷空气如排放不净，会影响灭菌效果，达不到彻底灭菌的目的。要等温度降为“0”，才可打开灭菌锅锅盖；
由于高压蒸汽灭菌时，要使用温度高达120℃、两个大气压的过热蒸汽，操作时，必须严格按照操作规程操作，否则容易发生意外事故。
PCR仪
PCR仪，也称DNA热循环仪、基因扩增仪，是使一对寡核苷酸引物结合到正负DNA链上的靶序列两侧，从而酶促合成拷贝数为百万倍的靶序列DNA片段，它的每一循环包括在三种不同温度进行DNA变性、引物复性、DNA聚合酶催化的延伸反应的三个过程
PCR仪主要应用于基础研究和应用研究等许多领域，如基因分析、序列分析、进化分析、临床诊断、法医学等等 操作步骤
1、开机：打开开关，视窗上显示“SELF TEST”,显示10秒中后，显示RUN-ENTER菜单
准备执行程序。
2、放入样品管，关紧盖子。
3、如果要运行已经编好的程序，则直接按《Proceed》，用箭头键选择已储存的程序，按《Proceed》，则屏幕显示
按《Proceed》选择ENABLE，则开始执行程序。
4、如果要输入新的程序，则在RUN-ENTER菜单上用箭头键选择ENTER PROGRAM,按《Proceed》，1）命名新的程序，最多8个字母，输入后按《Proceed》确认(如何输入字母、数字)。
2）输入程序步骤：名字输入后，确认，然后输入相关程序
5、输入完成的程序后，到RUN-ENTER菜单，选择新程序，开始运行。
6、其它：用《pause》可以暂停一个运行的程序，再按一次继续程序。
用《stop》或《Cancel》可停止运行的程序。
如何设置一个PCR程序：
一般分为8步：
1、预变性：可用94～95℃，2～10min,一般用 5min。
2、变性：一般用95℃，30s~2min,一般 45s~1min。
3、退火：温度自定，30s~2min。
4、延伸：72℃，对于〈1kb=1min,每增加 1kb加1min。
5、循环数：一般25～35个循环(2,3,4步循环）。
6、最终延伸：72℃，5～15min。
7、保存：4℃，时间设为0。
8、END。
电泳仪
电泳技术是分子生物学研究不可缺少的重要分析手段。电泳一般分为自由界面电泳和区带电泳两大类，自由界面电泳不需支持物，如等电聚焦电泳、等速电泳、密度梯度电泳及显微电泳等，这类电泳目前已很少使用。而区带电泳则需用各种类型的物质作为支持物，常用的支持物有滤纸、醋酸纤维薄膜、非凝胶性支持物、凝胶性支持物及硅胶-G薄层等，分子生物学领域中最常用的是琼脂糖凝胶电泳
应用电泳法可以对不同物质进行定性或定量分析，或将一定混合物进行组份分析或单个组份提取制备。
实验室所用DYY-12型电脑三恒多用电泳仪（北京六一仪器厂）操作程序：
1． 首先用导线将电泳槽的两个电极与电泳仪的直流输出端联接，注意极性不要接反。2．按电源开关，显示屏出现“欢迎使用DYY-12型电脑三恒多用电泳仪…”等字样后，同时系统初始化，蜂鸣4声，设置常设置。屏幕转成参数设置状态，根据工作需要选择稳压稳流方式及电压电流范围。
3．确认各参数无误后，按“启动”键，启动电泳仪输出程序。在显示屏状态栏中显示Start!并蜂鸣4声，提醒操作者电泳仪将输出高电压，注意安全。之后逐渐将输出电压加至设置值。同时在状态栏中显示“Run”，并有两个不断闪烁的高压符号，表示端口已有电压输出。在状态栏最下方，显示实际的工作时间（精确到秒）
4．电泳结束，仪器显示：“END”，并连续蜂鸣提醒。此时按任一键可止鸣 注意事项
1． 电泳仪通电进入工作状态后，禁止人体接触电极、电泳物及其它可能带电部分，也不能到电泳槽内取放东西，如需要应先断电，以免触电。同时要求仪器必须有良好接地端，以防漏电。
2． 仪器通电后，不要临时增加或拨除输出导线插头，以防短路现象发生，虽然仪器内部附设有保险丝，但短路现象仍有可能导致仪器损坏。
3． 由于不同介质支持物的电阻值不同，电泳时所通过的电流量也不同，其泳动速度及泳至终点所需时间也不同，故不同介质支持物的电泳不要同时在同一电泳仪上进行。4.使用过程中发现异常现象，如较大噪音、放电或异常气味，须立即切断电源，进行检修，以免发生意外事故。
作业
列出分子生物学常用仪器的名称，用途及操作时的注意事项。一，微量移液器
微量移液器是连续可调的、计量和转移液体的专用仪器，其装有直接读数容量计。量液操作注意问题
1． 未装吸嘴的微量移液器绝对不可用来吸取任何液体。
2． 一定要在允许量程范围内设定容量，千万不要将读数的调节超出其适用的刻度范围，否则会造成损坏。
3． 不要横放带有残余液体吸嘴的移液器。4． 不要用大量程的移液器移取小体积样品。
5.移液器使用完后，将刻度调到最大刻度，收藏。二，离心机的功能：
分离，纯化 注意事项：
1、离心机在运转时，不得移动离心机，不要打开门盖。
2、安放离心机的台面应坚实平整，四只橡胶机脚都应与台面接触和均匀受力，以免产生振动。
3、离心前，离心管加液要平衡，若加液差异过大运转时会产生大的振动，此时应停机检查，使加液符合要求，离心试管必须成偶数对称放入。
4、若运转时有离心试管破裂，会引起较大振动应立即停机处理。
5、离心机彻底停止后，才可开盖，取样 三，恒温气浴摇床 使用及性能：
摇床（振荡器）为实验室的常规设备。广泛用于对温度和振荡频率有较高要求的细菌培养、发酵、杂交、生物化学反应以及酶和组织研究等。实验室常用的液体摇匀，微生物、细菌和细胞培养。四超净工作台 使用及性能：
超净工作台为分子生物学无菌操作提供可能，分为垂直送风和水平送风两种。注意事项：
操作时一定注意关掉紫外，防止对实验人员造成伤害 五．灭菌锅 使用及性能：
细菌和细胞培养以及核酸等有关实验所用的试剂、器皿及实验用具，应严格灭菌；应将实验器械，试剂等进行高压消毒 注意事项：
如是手动的灭菌锅，在灭菌过程中，应注意排净锅内冷空气，锅内冷空气如排放不净，会影响灭菌效果，达不到彻底灭菌的目的。要等温度降为“0”，才可打开灭菌锅锅盖；
由于高压蒸汽灭菌时，要使用温度高达120℃、两个大气压的过热蒸汽，操作时，必须严格按照操作规程操作，否则容易发生意外事故。六．PCR仪
PCR仪，也称DNA热循环仪、基因扩增仪，是使一对寡核苷酸引物结合到正负DNA链上的靶序列两侧，从而酶促合成拷贝数为百万倍的靶序列DNA片段，它的每一循环包括在三种不同温度进行DNA变性、引物复性、DNA聚合酶催化的延伸反应的三个过程
PCR仪主要应用于基础研究和应用研究等许多领域，如基因分析、序列分析、进化分析、临床诊断、法医学等等 七．电泳仪
电泳技术是分子生物学研究不可缺少的重要分析手段。电泳一般分为自由界面电泳和区带电泳两大类，自由界面电泳不需支持物，如等电聚焦电泳、等速电泳、密度梯度电泳及显微电泳等，这类电泳目前已很少使用。而区带电泳则需用各种类型的物质作为支持物，常用的支持物有滤纸、醋酸纤维薄膜、非凝胶性支持物、凝胶性支持物及硅胶-G薄层等，分子生物学领域中最常用的是琼脂糖凝胶电泳
注意事项
1． 电泳仪通电进入工作状态后，禁止人体接触电极、电泳物及其它可能带电部分，也不能到电泳槽内取放东西，如需要应先断电，以免触电。同时要求仪器必须有良好接地端，以防漏电。
2． 仪器通电后，不要临时增加或拨除输出导线插头，以防短路现象发生，虽然仪器内部附设有保险丝，但短路现象仍有可能导致仪器损坏。
3． 由于不同介质支持物的电阻值不同，电泳时所通过的电流量也不同，其泳动速度及泳至终点所需时间也不同，故不同介质支持物的电泳不要同时在同一电泳仪上进行。
4.使用过程中发现异常现象，如较大噪音、放电或异常气味，须立即切断电源，进行检修，以免发生意外事故。
实验二
琼脂糖凝胶电泳的制备及核酸检测
带电荷的物质在电场中的趋向运动称为电泳。电泳的种类多，应用非常广泛，它已成为分子生物学技术中分离生物大分子的重要手段。琼脂糖凝胶电泳由于其操作简单、快速、灵敏等优点，已成为分离和鉴定核酸的常用方法。实验目的
掌握琼脂糖凝胶电泳的原理;学习琼脂糖凝胶电泳的操作。实验原理
琼脂糖是一种天然聚合长链状分子，沸水中溶解，45℃开始形成多孔性刚性滤孔，凝胶孔径的大小决定于琼脂糖的浓度。
DNA分子在碱性环境中带负电荷，在外加电场作用下向正极泳动。DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时，有电荷效应与分子筛效应。不同DNA，其分子量大小及构型不同，电泳时的泳动率就不同，从而分出不同的区带。琼脂糖凝胶电泳法分离DNA，主要是利用分子筛效应，迁移速度与分子量的对数值成反比关系。
溴化乙锭（EB）为扁平状分子，在紫外照射下发射荧光。EB可与DNA分子形成EB-DNA复合物，其发射的荧光强度较游离状态EB发射的荧光强度大10倍以上，且荧光强度与DNA的含量成正比。用肉眼观察，可检测到5 ng以上的DNA。1．影响DNA在琼脂糖凝胶中迁移速率的因素：
1)DNA分子大小
迁移速率U与logN成反比（N为碱基对数目）。分子大小相等，电荷基本相等（DNA结构重复性）。分子越大，迁移越慢。等量的空间结构紧密的电泳快（超螺旋>线性DNA）2)琼脂糖浓度：不同的凝胶浓度，分辨不同范围的DNA Agarose： 0.5%： 1-30 kb；
0.7%： 0.8-12 kb
1.2%： 0.4-7 kb；
1.5%： 0.2-3 kb.3)DNA构象：一般迁移速率超螺旋环状>线状DNA>单链开环。
4)所加电压：低电压时，线状DNA片段的迁移速率与所加电压成正比。使分辨效果好，凝胶上所加电压不应超过5V/cm
5)碱基组成与温度：一般影响不大4-30 ℃
6)嵌入染料的存在：降低线性DNA迁移率，(不提倡加在电泳液中)7)电泳缓冲液的组成及其离子强度影响DNA的迁移率，无离子存在时，核酸基本不泳动，离子强度过大产热厉害，熔化凝胶并导致DNA变性，一般采用1×TAE，1×TBE，1×TPE（均含EDTA pH8.0）。
2．溴化乙锭（EB）为致癌剂，操作时应戴手套，尽量减少台面污染。
3．电泳指示剂：核酸电泳常用的指示剂有两种，溴酚蓝（bromophenol blue, Bb）呈蓝紫色；二甲苯晴（xylene cyanol, Xc）呈蓝色，它携带的电荷量比溴酚蓝少，在凝胶中的迁移率比溴酚蓝慢。仪器和试剂 仪器
微量移液器，电泳仪，电泳槽，微波炉
试剂
琼脂糖：1.0%；
电泳缓冲液（50 × TAE 电泳缓冲液取Tris24.2g，冰醋酸5.7ml，0.25mol/L EDTA(pH8.0)20ml，加蒸馏水至100ml）
EB：5 µl / 100 ml TBE 电泳材料：标准分子量核酸（DL2000）操作步骤
（1）制胶（以20 mL为例）
a.称取0.2 g 琼脂糖，加入20 ml 的1XTAE缓冲液（pH 8.0），摇匀；
b.微波炉加热，至琼脂糖完全溶解（要防止过热溢出三角瓶）；
c.将制胶板放入制胶槽中，插入适当的梳子，将溶解的琼脂糖（约50℃）加入2ul EB后，混均匀，倒入其中，直至厚度为4～6 mm（如有气泡要把气泡赶出），在室温下冷却凝固(约30~ 45 min)；
d.小心垂直向上拔出梳子,以保证点样孔完好,将胶板置于电泳槽中。（2）点样
用微量移液器将5 µl含蓝色染液的 DL2000 加入点样孔下部。（3）电泳
打开电源开关，调节电压至3~5 V/cm(约100 V)，可见到溴酚蓝条带由负极向正极移动，约30-40分钟后即可观察结果。（4）观察
将电泳好的胶置于紫外透射检测仪上，打开紫外灯，可见到橙红色核酸条带，根据条带粗细，可粗略估计该样品DNA的浓度。如同时有已知分子量的标准DNA进行电泳，则可通过线性DNA条带的相对位置初步估计样品的分子量。实验结果及分析
实验结果不是很理想，可能的原因是小组间的点样间隔时间太长以至于样品扩散造成结果的不理想另一个人原因是点样没有到位造成的，第二种原因的可能性大一点。作业
做琼脂糖凝胶电泳应注意哪些问题。
答：1，溴化乙锭（EB）为致癌剂，操作时应戴手套，尽量减少台面污染 制琼脂糖凝胶时在特定的操作区操作。
2，微波炉加热使琼脂完全溶解要防止过热溢出三角瓶，要在瓶上加一张纸。
3，制胶时插入适当的梳子，当琼脂糖冷却凝固后，要小心垂直向上拔出梳子，小心样孔被弄破
4，点样时，要把样品点入点样孔下部，电泳时条带平整明亮。5，要正确使用微量移液器，等器材视点用后的结果不致出现错误。
第四篇：实验一 分子生物学实验室常用仪器设备简介.
实验一 分子生物学实验室常用仪器设备简介
一、实验目的
熟悉分子生物学实验室常用仪器并熟练使用
二、实验原理
1、恒温气浴摇床：用于对温度和振荡频率有较高要求的细菌培养，发酵，杂交，生化反应及酶和组织研究等。
2、超净工作台：用于分子生物学无菌操作。
3、低温台式高速离心机：用于分离纯化DNA和蛋白质等，如基因片段的分离，蛋白酶的沉淀和回收等。
4、微量移液管：是连续可调的，计量和转移液体的专用仪器，其装有直接读数容量计。有多种规格：①0.5-10μL②10-100μL③20-200μL④100-1000μL。
5、电泳仪：用于确定大分子物质的分子量以及鉴定物种亲缘关系的仪器。
6、PCR仪：用于目的基因的扩增，是一对寡糖核苷酸引物结合到正负DNA链上的靶序列两侧，从而酶促合成拷贝数为百万倍的靶序列DNA片段。主要用于基础研究和应用研究等领域。
7、灭菌锅：用于细菌和细胞培养及核酸等有关实验使用的试剂，器皿及实验用具的严格灭菌。
三、实验仪器
恒温气浴摇床、超净工作台、低温台式高速离心机、微量移液管、灭菌锅、PCR仪、电泳仪。
四、实验步骤
（一）、恒温气浴要穿的使用：
1、样品瓶牢固放入弹簧夹中
2、接通电源开关，仪器进入准备状态
3、参数设定，（设定温度、时间、转速等参数）
4、按启动键仪器开始工作，按暂停键可暂停托盘的旋转；
5、按电源键，显示屏显示消失，关闭电源总开关
（二）、超净工作台的使用
1、使用工作台时，先经过清洁液浸泡的纱布擦拭台面，然后用消毒剂擦拭消毒。
2、接通电源，提前30分钟打开紫外灯照射消毒，处理净化工作区内工作台表面积累的微生物，15分钟后，关闭紫外灯，开启送风机。
3、工作台面上，不要存放不必要的物品，以保持工作区内的洁净气流不受干扰。
4、操作结束后，清理工作台面，收集各废弃物，关闭风机及照明开关，用清洁剂及消毒剂擦拭消毒。
5、最后开启工作台紫外灯，照射消毒30分钟后，关闭紫外灯，切断电源。
（三）、低温台式高速离心机的使用
1、把离心机放置于平面桌或平面台上，目测使之平衡，用手轻摇一下离心机，检查离心机是否放置平衡。
2、打开门盖，将离心管放入转子内，离心管必须成偶数对称放入，且要事先平衡，完毕用手轻轻旋转一下转子体，使离心管架运转灵活。
3、关上门盖，注意一定要使门盖锁紧，完毕用手检查门盖是否关紧。
4、插上电源插座，按下电源开关（电源开关在离心机背面，电源座上方）。
5、设置转子号、转速、时间：
在停止状态下时，用户可以设置转子号、转速、时间，此时离心机处于设置状态，停止灯亮、运行灯闪烁；按下启动离心开始
（常用，最高转速为13000r/min，时间最长为20分钟）；
注意：对应的转子一定要设置在相应的转速范围内，不可超速使用，否则对试管或转子有损坏。
6、离心机时间倒计时到“0”时，离心机将自动停止，当转子停转后，打开门盖取出离心管，关断电源开关。
（四）、微量移液管的使用
1． 将微量移液器装上吸头（不同规格的移液器用不同的吸头）2． 将微量移液器按钮轻轻压至第一停点；
3． 垂直握持微量移液器，使吸嘴浸入液样面下几毫米，千万不要将吸嘴直接插到液体底部；
4． 缓慢、平稳地松开控制按钮，吸上样液。否则液体进入吸嘴太快，导致液体倒吸入移液器内部，或吸入体积减少； 5． 等一秒钟后将吸嘴提离液面
6．平稳地把按钮压到第一停点，再把按钮压至第二停点以排出剩余液体； 7． 提起微量移液器，然后按吸嘴弹射器除去吸嘴。
（五）、PCR的使用
1、开机：打开开关，视窗上显示“SELF TEST”。
2、放入样品管，关紧盖子。
3、如果要运行已经编好的程序，则直接按《Proceed》，用箭头键选择已储存的程序，按《Proceed》，则开始执行程序。
4、如果要输入新的程序，则在RUN-ENTER菜单上用箭头键选择ENTER PROGRAM,按《Proceed》，1）命名新的程序，最多8个字母，输入后按《Proceed》确认(如何输入字母、数字)。2）输入程序步骤：名字输入后，确认，然后输入相关程序
5、输入完成的程序后，到RUN-ENTER菜单，选择新程序，开始运行。
6、其它：用《pause》可以暂停一个运行的程序，再按一次继续程序。用《stop》或《Cancel》可停止运行的程序。
（六）、电泳仪的使用
1． 首先用导线将电泳槽的两个电极与电泳仪的直流输出端联接，注意极性不要接反。2．按电源开关，显示屏出现“欢迎使用DYY-12型电脑三恒多用电泳仪…”等字样后，同时系统初始化，蜂鸣4声，设置常设置。屏幕转成参数设置状态，根据工作需要选择稳压稳流方式及电压电流范围。3．确认各参数无误后，按“启动”键，启动电泳仪输出程序。在显示屏状态栏中显示Start!并蜂鸣4声，提醒操作者电泳仪将输出高电压，注意安全。之后逐渐将输出电压加至设置值。同时在状态栏中显示“Run”，并有两个不断闪烁的高压符号，表示端口已有电压输出。在状态栏最下方，显示实际的工作时间（精确到秒）
4．电泳结束，仪器显示：“END”，并连续蜂鸣提醒。此时按任一键可止鸣
（七）、高压灭菌锅
1、开盖：转动手轮，使锅盖离开密封圈，添加蒸馏水刚没至板上
2、通电：将控制面板上电源开关按至ON处，若水位低（LOW）红灯亮
3、堆放物品：需包扎的灭菌物品，体积不超过200mm×100mm×100mm为宜，各包装之间留有间隙，堆放在金属框内，这样有利 于蒸汽的穿透，提高灭菌效果，灭菌时间： 121℃，20min，；如为液体，液体必须装在可耐高温的玻璃器皿中，且不可装满，2/3即可，121℃，18-20min
4、密封高压锅：推横梁入立柱内，旋转手轮，使锅盖下压，充分压紧
5、设定时间和温度，开始灭菌
6、灭菌结束，所有东西放入干燥箱干燥，排尽水气
五、思考题
1、列出分子生物学常用仪器的名称，用途及操作时的注意事项。
答：①恒温气浴摇床：常用于液体摇匀以培养微生物、细菌和细胞等。注意要依据不同的用途设置不同的参数。②超净工作台：常用于为微生物学实验提供无菌操作环境。注意操作时关掉紫外灯，避免给人类带来伤害。③低温台式高速离心机：常用于分离纯化蛋白、病毒、细胞等。使用时不能随便移动离心机或打开盖子；离心机运行时要处于锁定状态；离心管的放置要处于平衡状态。④微量移液管：用于计量和转移微量液体的专用仪器。操作时注意避免枪头的污染；调节刻度时不宜超过最大量程；使用完后将刻度调到最大收藏。⑤电泳仪：可对不同物质进行定性或定量分析，或将一定混合物进行组分分析或单个组分的提取制备。操作时不可把导线极性接反；当电泳仪进入工作状态后，避免人体与其各部分的接触，不同介质支持物的电泳不要同时在同一电泳仪上进行；若使用时出现异常，要立刻切断电源。⑥PCR仪：用于扩增DNA片断。操作时应注意盖子要盖紧，按正确步骤进行。⑦高压高温灭菌锅：用于杀菌消毒。使用时应严格按照规程操作，避免发生安全事故。
实验二 琼脂糖凝胶电泳的制备及核酸检测
一.实验目的
1、掌握琼脂糖凝胶电泳的原理;
2、学习琼脂糖凝胶电泳的操作。二.实验原理
琼脂糖是一种天然聚合长链状分子，沸水中溶解，45℃开始形成多孔性刚性滤孔，凝胶孔径的大小决定于琼脂糖的浓度。
DNA分子在碱性环境中带负电荷，在外加电场作用下向正极泳动。DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时，有电荷效应与分子筛效应。不同DNA，其分子量大小及构型不同，电泳时的泳动率就不同，从而分出不同的区带。琼脂糖凝胶电泳法分离DNA，主要是利用分子筛效应，迁移速度与分子量的对数值成反比关系。溴化乙锭（EB）未扁平状分子，在紫外照射下发射荧光。EB可与DNA分子形成EB-DNA复合物，其发射的荧光强度较游离状态EB发射的荧光强度大10倍以上，且荧光强度与DNA含量成正比。
三、仪器和试剂
仪器： 微量移液器，电泳仪，电泳槽，微波炉
试剂： 琼脂糖：1.0%；电泳缓冲液（50 × TAE 电泳缓冲液取Tris24.2g，冰醋酸5.7ml，0.25mol/L EDTA(pH8.0)20ml，加蒸馏水至100ml）EB：5 µl / 100 ml TBE 电泳材料：标准分子量核酸（DL2000）四.操作步骤
（1）制胶（以20 mL为例）
a.称取0.2 g 琼脂糖，加入20 ml 的1XTAE缓冲液（pH 8.0），摇匀； b.微波炉加热，至琼脂糖完全溶解（要防止过热溢出三角瓶）；
c.将制胶板放入制胶槽中，插入适当的梳子，将溶解的琼脂糖（约50℃）加入2ul EB后，混均匀，倒入其中，直至厚度为4～6 mm（如有气泡要把气泡赶出），在室温下冷却凝固(约30~ 45 min)；
d.小心垂直向上拔出梳子,以保证点样孔完好,将胶板置于电泳槽中。（2）点样
用微量移液器将5 µl含蓝色染液的 DL2000 加入点样孔下部。（3）电泳
打开电源开关，调节电压至3~5 V/cm(约100 V)，可见到溴酚蓝条带由负极向正极移动，约30-40分钟后即可观察结果。（4）观察
将电泳好的胶置于紫外透射检测仪上，打开紫外灯，可见到橙红色核酸条带，根据条带粗细，可粗略估计该样品DNA的浓度。如同时有已知分子量的标准DNA进行电泳，则可通过线性DNA条带的相对位置初步估计样品的分子量。
五、实验结果
点样时效果较好的照片点出的白色荧光线比较亮，条带粗细均匀；条带没有出现两端粗中间细的情况
六、思考题
1、做琼脂糖凝胶电泳应注意哪些问题。
答：①EB为强致癌剂，使用时一定要戴手套，避免造成伤害。EB废液要进行正确的处理。②制胶过程中要注意细节，用微波炉加热时要分三步，每步只加热十秒，且要用不戴手套的那只手开微波炉，以免污染。③拔梳子时要垂直向上拔出，以防破坏点样孔。④点样时要小心，既要将样品点到样孔里，又不至于将点样孔戳破。⑤接电源时不可把正负极接反。
第五篇：分子生物学实验室
分子生物学实验室（P2设计）
1.功能：进行分
组织培养前实验室设计
标签：产经/公司实验室 微生物 洁净室 设计说明 通风柜 实验台 家俱
组织培养前实验室设计
在进行植物组织培养工作之前，首先应对工作中需要哪些最基本的设备条件有个全面的了解，以便因地制宜地利用现有房屋，或新建、改建实验室。实验室的大小取决于工作的目的和规模。以工厂化生产为目的，实验室规模太小，则会限制生产，影响效率。
在设计组织培养实验室时，应按组织培养程序来没计，避免某些环节倒排，引起日后工作混乱。植物组织培养是在严格无菌的条件下进行的。要做到无菌的条件，需要一定的设备、器材和用具，同时还需要人工控制温度、光照、湿度等培养条件。
实验室设计原则：保证无菌操作，达到工作方便，防止污染。
实验室组成：化学实验室、洗涤菌室、无菌操作室（接种室）、培养室、细胞学实验室、其他小型仪器设备。
1)化学实验室（准备室）：完成所使用的各种药品的贮备、称量、溶解、配制、培养基分装等。主要设备：药品柜、防尘橱（放置培养容器）、冰箱、天平、蒸馏水器、酸度计及常用的培养基配制用玻璃仪器.2)洗涤、灭菌室：完成各种器具的洗涤、干燥、保存、培养基的灭菌等。
主要设备：水池、操作台、高压灭菌锅、干燥灭菌器（如烘箱）等。
3)无菌操作室（接种室）：主要用于植物材料的消毒、接种、培养物的转移、试管苗的继代、原生质体的制备以及一切需要进行无菌操作的技术程序。
主要设备：紫外光源、超净工作台、消毒器、酒精灯、接种器械（接种镊子、剪刀、解剖刀、接种针）等。
接种室宜小不宜大，一般7～8平米，要求地面、天花板及四壁尽可能密闭光滑，易于清洁和消毒。配置拉动门，以减少开关门时的空气扰动。接种室要求干爽安静，清洁明亮。在适当位置吊装1～2盏紫外线灭菌灯，用以照射灭菌。最好安装一小型空调，使室温可控，这样可使门窗紧闭，减少与外界空气对流。接种室应设有缓冲问，面积1m2为宜。进入无菌操作室前在此更衣换鞋，以减少进出时带入接种室杂菌。缓冲间最好也安一盏紫外线灭菌灯，用以照射灭菌。
4)培养室：培养室是将接种的材料进行培养生长的场所。培养室的大小可根据需要培养架的大小、数目、及其他附属设备而定。其设计以充分利用空间和节省能源为原则。
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