微生物与生化药学专业

第一篇：微生物与生化药学专业

微生物与生化药学专业

2009年硕士研究生入学复试具体实施办法

生物与制药工程学院“微生物与生化药学”专业2009年硕士研究生入学复试办法按《武汉工业学院2009年硕士研究生复试办法》执行，具体实施办法如下：

一、复试内容

1、综合面试：包含外语听说能力测试、专业知识考核和面试及实践环节测试等复试内容。

（1）外语听说能力测试：主要包括专业外语和日常用语两方面的考核，采取口试形式，满分为100分。

（2）专业知识考核：满分为100分。重点考查考生对专业理论与技能及相关知识的掌握是否扎实、深厚和宽广，是否具备本专业研究生入学的基本要求。考核设天然药物资源利用、药物设计与合成、药物的微生物转化和提取、微生物与生化药物四个方向的问题。

（3）面试及实践环节测试：采取口试形式，满分为100分。主要考查政治思想品德、专业综合知识、实践动手能力、科学思维、创新能力和反应的能力等。

（4）计分方法：总分＝外语听说能力测试成绩×20%＋专业知识考核成绩×40%＋面试及实践环节测试成绩×40%。

说明：考生复试程序为：首先进行专业知识考核的考试，然后进行逐个面试。面试部分先进行英文自我介绍，导师提问，最后进行实践环节测试。

2、同等学历加试

同等学历加试科目：生物工程专业加试“生物工艺原理”和“分子生物学”；

制药工程专业加试“药剂学”和“药理学”。均采取笔试形式，满分为100分，答题时间为120分钟。

二、复试时间及地点

1、综合面试：4月13日上午9:00进行专业知识及综合面试。地点为生工学院会议室。

2、同等学历加试： 4月14日上午9:00－11:00，药理学、生物工艺原理；下午2：00～4：00，药剂学、分子生物学，地点为生工学院会议室。

三、复试次序

考生的个人复试次序按研究生处提供的名单次序进行。考生在参加复试时，应提供复试通知书、毕业证书（应届生带学生证）、个人身份证和准考证。

四、分次复试安排

4月13日以后调剂我硕士点的考生采用分阶段复试方式，灵活复试时间，一考生到校时间为主。

五、复试小组

组长：陈平

成员：刘志国陶兴无赵静国缪礼鸿钟方旭刘军闫达中张红菱

记录员：王继刚

联系电话：027－83956793联系人：王老师

武汉工业学院生物与制药工程学院

2009.04.10

第二篇：2013微生物与生化药学复试

复试分为三部分：

分科面试、英语笔试、专业课笔试分科面试

考试内容比较随机，2012年考试内容有：

①考看视频回答问题：视频为配制培养基、使用灭菌锅。要回答的问题好像是操作注意事项，和不同菌种使用的培养基，比如培养放线菌使用的培养基等。

② 实验操作部分：显微镜的使用和斜面划线接种，两个任选一，抽签方式。③专业英语笔试：20min，20个选择题，有关生物方面的专业词汇，还有个词条提示。

④面试：英语口试（自我介绍），与老师交流，老师提问问题

注：听说2013年的入学面试与2012年不同，没有①和②，而是换成看图片辨认仪器；还有专外笔试换成翻译文献，是去年获得诺贝尔奖的文章，有关G蛋白欧联受体，30min，翻译几段，涉及专业词汇。面试部分，面试部分比较灵活，题型随机，我觉得事先准备个英文自我介绍比较好，不一定怎么考。英语笔试（为四六级考试形式，有听力，阅读比较简单，我感觉听力的语速介于四六级之间，我们考试那年的考试形式与四六级不太一样，不是边听变涂卡，而是一下听完，然后再涂卡，可能每年都会有点不一样，这个需要练习一下）专业课笔试：包含三科，即分离纯化，生物技术制药，发酵工艺学原理 ①分离纯化，我复习的是课本，不是所有的章节都考到了，记得我们那年考题里有些什么大分子和小分子的分离纯化方法的简答题，有些关于分离纯化的名词解释

②发酵工艺学原理，看的是课件，不记得考过什么了

③生物技术制药，看的是课本与课件，课件看的稍多些，这科的重点是基因工程部分，好像还有些关于抗体的东西。

可以在学校复印社买到以上三门课的复习资料，如课件，期末试题，或者有人总结的笔记资料等，也有些重复的题，但是好像每年考的都不一样。另外可以看一些关于微生物的复习材料。

第三篇：天津大学微生物与生化药学考研真题

天津大学微生物与生化药学考研真题-考研资料-笔记讲义-考研经验谈

天津考研网独家推出天津大学微生物与生化药学考研资料、真题解析班等辅导资料，帮助考生在考研复习中能够理清做题思路，出题方向及复习重点。以下为相关资料的介绍。

天津大学微生物与生化药学考研资料格式为A4纸打印版+手写版多种资料形式数百页，清晰易复习，由多届优秀考生研究生团队执笔，集合多方力量历时3年积淀精制而成，填补了此专业原创资料空白的局面，天津考研网已于编写者签订资料保真转让协议，各位研友可放心使用参考！特别提示：本站尽力保证资料的有用性，但由于个人复习态度进度不同，故请酌情参考本资料！

由于天津大学微生物与生化药学考的是药学综合，考试时为四选二科目（普通生物化学、基础有机化学、基础生物学、基础分析化学四部分考题中任选两部分参加以下资料），请根据自身报考情况选择两科

第一部分天津大学微生物与生化药学核心原创资料（请按科目选择4选2）：

天津大学药学院微生物与生化药学研究生入学考试初试四选二科目中，每两科仅参考书目就有很多本，但是并不是都必须要看的，这些科目中可以说知识点繁杂，且联系也并不是很紧密，如何对其取舍？对于知识点应掌握到何种程度？对于考试又应怎样从宏观上去把握？初试复试又应该怎样去安排复习进度，最需要关注哪些问题？等等一系列问题，相信本资料都会给出您满意的答案！

天津大学微生物与生化药学考研资料为您提供了以下信息，让您的复习事半功倍：

1、缩小指定书目范围，并推荐了一些难易程度与真题相近的复习资料，对于备考中的一系列细节问题：包括复习时间安排、资料获取等关键问题进行解答。

2、非常详细全面地为大家讲解每个章节的重点，明确指出知识点所应掌握的程度：包括重点记忆、记忆、掌握、理解、了解。针对可能命题知识点以及命题形式给出总结与预测。

3、对于学院内部的情况给予介绍，包括老师的最新研究方向、出题老师的相关任命情况等。这些信息对于考生全面了解院校，进行相关选择具有重要意义。

4、详细解析天津大学微生物与生化药学考研历年真题，按照考试题型进行介绍，对于考生全面备考做到心中有数，并对以后真题命题进行预测。

5、讲解答题技巧，因为天大药学院药学综合300分，考试时间仅有3个小时，如何能在这三个小时中发挥出自己的最佳水平，如何能尽可能的拿到更多的分数至关重要。

6、对复试进行详细分析，包括复试流程、复试内容、复试如何准备、复试的答题技巧。准备复试就像是大海捞针，因为其范围大，时间紧，本资料为大家缩小复习范围，增强考试信心提出方法，教会给您在面试中何去何从！

资料目录：

一、天津大学药学院简介：对天津大学药学院建院历史、学院基础设施、师资队伍、招生政策情况、就业前景、办学方法与特色等方面给出客观中肯的评价，有助于考生更加合理地选择自己的目标院校与方向。

二、药学院导师情况简介：从药物分析、药物化学、药剂学、药理学、生药学、微生物等分方向介绍导师目前的主要科研课题与成果。

三、获取信息的相关途径

四、天津大学微生物与生化药学考研备考之有机化学

1、备考前准备：资料的选择途径与获取方法、考研大致时间安排、考研心理调试、租房注意、研友。

2、近年考研真题解析：重点对于从07年之后的真题进行分析，总结其命题规律，把握出题方向，简要点明复习重点所在，让考生对考试不再陌生，心理上占据优势。本章最后单独对2011年、2012年真题进行了解析说明

3、复习精要：以历年真题作为主要依托，介绍考试重点与常考易考题型，精析知识体系，合理安排复习进度，每天进步一点一点，最终收获一片天！分章节进行知识点汇总，中间穿插对于知识点的分析，预测考试出题重点与出题形式。

4、补充说明：主要是针对在完成上述内容中无法插入或是临时想到的问题，给予补充说明。例如：计划设置方法、考前心态调整、考场时间安排等等。讲一些自身经历的小故事，希望能够通过这些激发考生的斗志与毅力，同时更能贴近他们的心声，感受到考研的精彩与意义！

五、天津大学微生物与生化药学考研备考之分析化学：考研资料、历年考研真题和笔记讲义构成如有机化学部分

六、天津大学微生物与生化药学考研备考之生物学：考研参考书目介绍、知识点分析、考研真题分析和命题趋势，专业课答题技巧

七、天津大学微生物与生化药学考研备考之生物化学：考研参考书目介绍、知识点分析、考研真题分析和命题趋势，专业课答题技巧

八、复试事项

（一）、讲解复试流程与规则（从2011年起天津大学药学院复试招生政策已发生重大变化）。

（二）、举两到三个实际例子，通过讲故事的方法让考生真实体验复试全过程。

第二部分天津大学微生物与生化药学考研其他重要资料（请按科目选择4选2）：

★基础生物化学部分：

1、天津大学基础生物化学03－05年考研试题；天津大学微生物与生化药学考研科目349药学综合-基础生物化学部分2007-2010年考研真题，原版真题，内部渠道获得（市场独家最全，全国独家推出，掌握最新试题动向先人一步），众所周知天大出题重复率高，一般多年的试题就是一个小题库，所以历年试题一定要仔细研究，通过多年试卷可总结出出题重点及思路；

2、天津大学349药学综合-基础生物化学部分2007-2010年考研试题参考答案，解决学生答题后勘误的困惑，试题保证100%正确率，市面上的答案基本都有错误，本套答案为签约团队独家主创，请同学认真分辨市面一些低价劣质的资料，以免耽误考研；

3、基础生物化学本科课件，天津大学药学院本科授课课件、笔记讲义，ppt格式，只收集到部分重点章节，图文并茂；

4、指定参考书籍Stryer《Biochemistry》5th.Edition；黄熙泰、于自然主编《现代生物化学》第二版；

5、天津大学药学综合2008-2013年考研大纲，打印版，通过历年大纲对比可以更深入了解历年考试考点及参考书目变化情况从而预测趋势，独家提供

★有机化学部分：

1、天津大学①基础化学（含基础有机化学与分析化学)02—05年考研试题，其中02及05年有详细参考答案，同时按题型精确分析了02-05年考研试题（有机化学和分析化学）之间的关系、出题思路、出题重点及部分试题介绍，手写版，此为两个版本，对比使用效果更好；②天津大学微生物与生化药学考研科目349药学综合-有机化学部分2007-2010年原版考研真题，内部渠道获得；③349药学综合-有机化学部分2011、2012年考研试题回忆版，众所周知天大出题重复率高，一般多年的试题就是一个小题库，所以历年试题一定要仔细研究，通过多年试卷可总结出出题重点及思路；

2、天津大学微生物与生化药学考研科目349药学综合-有机化学部分2007-2009年考研试题参考答案，解决学生答题后勘误的困惑，试题保证100%正确率，市面上的答案基本都有错误，本套答案为天津考研网签约团队独家主创，请同学认真分辨市面一些低价劣质的考研资料，以免耽误考研；

3、有机化学本科课件，天津大学药学院本科授课课件，ppt格式，只收集到部分考研重点章节，图文并茂；

4、有机化学04年校内辅导班笔记讲义，04年最后一次校内主办辅导班，绝版笔记，药学院老师主讲，所用考生当年成绩相当优异，手写版100余页，字迹工整，重点突出；

5、有机化学辅导班高分考生总结笔记，由参加04年最后一届校内辅导班的考生总结而成，手写版，按考题题型总结，具有重要参考价值，此资料同04辅导班笔记对比搭配使用，同时赠送按章节、反应的有机化学总结一份；

6、指定参考书籍邢其毅等着《基础有机化学》（第二版）教程及配套习题答案、邢其毅等《基础有机化学习题解答与解题示例》（电子版）；

7、天津大学药学综合2008-2013年考研大纲，打印版，通过历年大纲对比可以更深入了解历年考试考点及参考书目变化情况从而预测趋势，独家提供

★分析化学部分：

1、天津大学①基础化学（含基础有机化学与分析化学)02—05年考研试题，其中02及05年有详细参考答案，同时按题型精确分析了02-05年考研试题（有机化学和分析化学）之间的关系、出题思路、出题重点及部分试题介绍，手写版，此为两个版本，对比使用效果更好；②天津大学微生物与生化药学考研科目349药学综合-分析化学部分2007-2009年原版考研真题，内部渠道获得；③天津大学微生物与生化药学考研科目349药学综合-分析化学部分2011、2012年考研试题回忆版，众所周知天大出题重复率高，一般多年的试题就是一个小题库，所以历年试题一定要仔细研究，通过多年试卷可总结出出题重点及思路；

2、天津大学微生物与生化药学考研科目349药学综合-分析化学部分2007-2009年考研试题参考答案，解决学生答题后勘误的困惑，试题保证100%正确率，市面上的答案基本都有错误，本套答案为签约团队独家主创，请同学认真分辨市面一些低价劣质的考研资料，以免耽误考研；

3、分析化学本科课件，天津大学药学院本科授课课件，图文并茂，内容详尽，重点突出，ppt格式e-mail发送，参考书目为：《药物分析》刘文英主编，人民卫生出版社；《分析化学》李发美主编，人民卫生出版社；《药物分析》盛龙生等编写，化学工业出版社；Pharmaceutical Analysis:A Textbook for pharmacy students and pharmaceutical Chemists, David G.Watson，Edinburgh；

4、分析化学高分考生总结笔记，由天大高分考生精心整理而成，手写版40余页，全面涵盖分析化学核心知识点，极具参考价值；

5、分析化学本科生课堂重点思考题及解答，天津大学药学院本科生老师授课课堂讨论题及参考答案，打印版10余页，附有重点勾画；

6、天津大学药学综合2008-2013年考研大纲，打印版，通过历年大纲对比可以更深入了解历年考试考点及参考书目变化情况从而预测趋势，独家提供

★基础生物学部分：

1、天津大学微生物与生化药学考研科目①349药学综合-基础生物学部分07-09年原版考研真题，内部渠道获得；②天津大学微生物与生化药学考研科目349药学综合-基础生物学部分2010、2013年考研真题（回忆版），众所周知天大出题重复率高，一般多年的试题就是一个小题库，所以历年试题一定要仔细研究，通过多年试卷可总结出出题重点及思路；

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3、天津大学药学综合2008-2013年考研大纲，打印版，通过历年大纲对比可以更深入了解历年考试考点及参考书目变化情况从而预测趋势，独家提供；

第六部分 考研红宝卷

天津考研网独家品牌《考研红宝卷》，包含天津大学天津大学微生物与生化药学考研科目349药学综合的全真模拟预测卷3套并含参考答案及解析过程，与历年考研真题出题趋势、思路、侧重点一脉相承，在天津考研学子圈中享有极高声誉，非常适合在冲刺阶段作为全真模拟使用，可以起到摸底测试、查漏补缺的作用，同时具有极高的押题性质。

第四篇：药学微生物学期末归纳总结

二、名词解释（20分）

1.异染颗粒_____________胞质颗粒中含有一种主要成分为RNA和多偏磷酸盐的颗粒，其嗜碱性强，经亚甲蓝染色后着色较深，叫异染颗粒，常见于白喉棒状杆菌。

2.菌落__________由单个细胞在适宜固体培养基表面生长繁殖，经过一段时间后，在培养基表面形成肉眼可见的微生物群落，称为菌落。3.条件致病菌____________有些细菌在人体皮肤与外界相通的腔道内寄生、增殖，当条件改变或因宿主免疫功能下降时引起致病。这类细菌称为条件致病菌。

4.肥达试验___________将已知的伤寒沙门菌的O、H抗原和甲乙丙副伤寒沙门菌的H抗原与不同稀释度的病人血清做凝集试验。通过检测抗体滴度的高低和初期、恢复期抗体的增长程度来诊断伤寒和副伤寒。

5.汹涌发酵____________产气荚膜梭菌在牛乳培养基中生长时发酵乳糖产酸，使酪蛋白凝固，同时产生大量的气体，将凝固的酪蛋白冲成蜂窝状，并将封闭的凡士林冲至试管口等现象。

6.卡介苗___________将有毒力的牛型结核分枝杆菌培养在含胆汁、甘油、马铃薯的培养基中，经过上百次的接种，历经13年的传代培养而获得的减毒活疫苗。可使人获得对结核病的免疫力。

7.菌群失调____________正常菌群之间的数量和组成发生明显的改变称为菌群失调。多见于长期使用抗生素。

8.SPA________即葡萄球菌A蛋白。是葡萄球菌细胞壁的一种表面蛋白。能与人及某些哺乳动物的lgG分子的Fc受体发生非特异性结合，与吞噬细胞表面的Fc受体争夺Fc段，降低了抗体的调理吞噬作用。起到了协助细菌抗吞噬的作用。

9.SSPE________即亚急性硬化性全脑炎。是一种以白质和灰质损害为主的全脑炎。由缺损型麻疹病毒慢性持续感染引起的一种罕见的致命性的中枢神经系统衰退性疾病。

10.转导______是以温和噬菌体为载体，将供体菌的遗传物质转移到受体菌内，使受体菌获得新的遗传形状。这样的方式成为转导。11.HBsAg__________即乙肝表面抗原。存在于Dane颗粒表面、小球型颗粒和管型颗粒中，可大量存在于感染血清中。是HBV感染的重要标志。

12.内基小体________是狂犬病病毒在易感动物或人的中枢神经细胞中增殖时，可在胞质内形成圆形或卵圆形的嗜酸性颗粒，称为包涵体，或内基小体。具有诊断价值。

13.细菌的L型_______细菌细胞壁肽聚糖结构在某些理化或生物作用下被破坏或抑制，但在高渗的环境中仍可存活。称为细菌的L型。14.质粒__________是细菌染色体外的遗传物质，其结构为闭合环状双链DNA，可携带遗传信息，控制细菌某些特定的遗传性状，并具有独立自我复制能力。

15.半数致死量________在一定条件下引起50%实验动物死亡或感染的最小微生物或毒素的量。

16.基因整合___________在病毒感染宿主细胞的过程中，病毒基因组的DNA片段可插入到宿主细胞的染色体DNA中，这种将病毒基因组与细胞基因组重组的过程，称为基因整合。

三、简答题（50分）

1、外毒素与内毒素的主要区别？ 答：外毒素-大部分来源于革兰阳性菌，少部分来源于革兰阴性菌；大多数由活菌分泌释放；其本质是蛋白质，不耐热受热易分解；抗原性强，经甲醛处理可获得脱毒的类毒素；毒性强，对组织细胞有选择性毒性效应，引起特殊的临床表现。

内毒素-主要来源于革兰阴性菌；大多数由细菌裂解后释放；其本质是脂多糖，耐热受热不易分解；抗原性弱，经甲醛处理不能获得类毒素；毒性较弱毒性效应大致相同，引起发热、白细胞增多、休克等临床表现。

2、细菌有哪些特殊结构及其特点？

答：荚膜-不宜染色，具有抗吞噬、粘附、抗有害物质损伤等作用。与细菌致病性有关。

鞭毛-菌体上附着的细长丝状物，是细菌的运动器官，具有特异的抗原性。与细菌致病性有关。

菌毛-分为普通菌毛和性菌毛，前者与致病性有关，后者与遗传物质的传递有关。芽孢-由革兰阳性菌形成，是细菌的休眠体，有助于鉴别细菌，抵抗力强。

3、细菌耐药性的产生机制？ 答：1.细菌产生灭活酶，即钝化酶的产生

2.作用靶位的改变

3.细菌细胞膜通透性改变

4.细菌主动药物外排机制

5.细菌生物被膜的形成。

4、狂犬病的预防和补救措施？

答：预防-捕杀野犬，加强家犬管理并注射犬类狂犬疫苗。

补救-1.清洗伤口，用20%肥皂水、0.1%消毒剂或清水清洗伤口，并用酒精消毒。

2.被动免疫，在伤口周围注射高效价的狂犬病病毒抗血清。

3.主动免疫，早期接种疫苗可预防狂犬病的发病。

5、破伤风梭菌致病的治病条件及产生机制？

答：在局部伤口形成厌氧微环境，如伤口窄而深，有泥土或异物感染，大面积创伤，坏死组织多，局部组织出血等，同时有需氧菌或兼性厌氧菌混合形成厌氧微环境，有利于破伤风梭菌的形成。

机制：破伤风梭菌没有侵袭力，只在局部繁殖，产生痉挛毒素。该毒素经末梢神经、血液及淋巴液进入中枢神经系统，并通过重链与脑组织细胞表面受体结合，通过轻链进入细胞发挥毒素作用。从而破坏了正常的抑制调节作用，导致中枢超常反射，出现破伤风特有的角弓反张、牙关紧闭等症状。

6、生物学标本采集的原则？

答：早期采集-采集尽量在病程早期及使用抗菌药物之前。

无菌采集-采集过程中严格遵守无菌操作，避免标本污染。

一对一采集-不同细菌用不同方法采集，如厌氧菌、L型细菌。

针对性采集-采集有代表性的标本，相同疾病在不同时期标本不同。

采集标记-采集后做好标记，保证各环节准确无误。

采集新鲜-标本必须新鲜，采集后尽快送检。

7、正常菌群的生理作用？

答：生物拮抗作用-阻止病原菌侵入机体。

营养作用-正常菌群参与宿主的物质代谢、营养转化。免疫作用-正常菌群作为抗原刺激机体发生免疫应答。抗衰老作用-保护组织细胞免受损伤。抗肿瘤作用-抑制肿瘤的细胞的无限增殖。

8、医院内感染的预防和控制？

答：合理使用抗生素、避免侵袭性操作、保护易感人群、缩短住院时间、严格执行病毒隔离措施、重视检测工作、污物处理。

9、全身感染的常见类型？

答：菌血症-如细菌进入细胞短暂停留，不产生毒素，伤寒杆菌引起的感染；

败血症-如细菌在表面繁殖产生毒素，脑膜炎球菌引起的全身性中毒；

毒血症-如细菌在表面繁殖，毒素进入血液，白喉棒状杆菌产生外毒素引起的病变； 脓毒血症-如细菌侵入细胞，释放毒素。金葡菌引起的肝脓肿。内毒素血症-内毒素进入血液引起的疾病，小儿痢疾。

10、细菌外毒素有哪些毒性作用？

答：细胞毒素作用-如白喉棒状杆菌产生的白喉毒素，可抑制细胞蛋白质的合成，导致靶细胞坏死，心肌损伤，肾上腺出血。

神经毒素作用-如破伤风杆菌产生的痉挛毒素，阻断神经元之间递质的传递，引起骨骼肌强直性痉挛。

肠毒素作用-如金葡菌产生的肠毒素，引起以呕吐为主的食物中毒。

11、细菌合成代谢产物的种类及意义？ 答：与致病性有关的产物：侵袭性酶、热原质、毒素；

与检验细菌（鉴定与分型）的产物：细菌素、色素； 用于临床治疗的产物：抗生素、维生素。

12、简述病毒的基本特征？

答：体积微小，以nm计算，能通过虑菌器，需用电镜观察；

非细胞结构，其主要有核心和蛋白衣壳组成； 只含一种核酸，DNA或RNA； 严格的易感活细胞内寄生； 耐冷不耐热，对抗生素不敏感。

13、大肠杆菌的主要类型及致病特点？

答：ETEC-肠产毒，引起婴儿和旅游者严重腹泻的主要病原菌。

EIEC-侵袭型，引起儿童成人腹痛、发热、脓血便的主要病原菌。

EPEC-致病型，引起婴幼儿腹泻的主要病原菌。

EHEC-出血型，引起腹泻和血样便，污染食品是其主要传染源。

EAEC-集聚型，引起婴幼儿持续性腹泻、脱水的主要病原菌。

14、乙肝抗原抗体的检测有何医学意义？

答：有助于诊断；有助于判断疾病的预后；筛选病原；流行病学调查；检测注射疫苗的效果。

15、细菌感染的传播方式？

答：呼吸道传播；消化道传播；血液传播；虫媒传播；性传播；皮肤传播；接触传播。

16、简述致病菌的三大致病条件？

答：菌群失调；宿主免疫功能下降；正常菌群的寄居部位发生改变。

第五篇：微生物鉴定的生理生化反应汇总

微生物鉴定的生理生化反应

各种细菌具有各自独特的酶系统，因而对底物的分解能力不同，其代谢产物也不同。用生物化学方法测定这些代谢产物，可用来区别和鉴定细菌的种类。利用生物化学方法来鉴别不同细菌，称为细菌的生物化学试验或称生化反应。生物化学试验的方法很多，主要有以下几类。

一、碳水化合物的代谢试验 1．糖（醇、苷）类发酵试验

（1）原理：不同种类细菌含有发酵不同糖（醇、苷）类的酶，因而对各种糖（醇、苷）类的代谢能力也有所不同，即使能分解某种糖（醇、苷）类，其代谢产物可因菌种而异。检查细菌对培养基中所含糖（醇、苷）降解后产酸或产酸产气的能力，可用以鉴定细菌种类。

(2)方法：在基础培养基中（如酚红肉汤基础培养基pH7.4）加入0.5~1.0％（w/v）的特定糖（醇、苷）类。所使用的糖（醇、苷）类有很多种，根据不同需要可选择单糖、多糖或低聚糖、多元醇和环醇等，见表6-4-1。将待鉴定的纯培养细菌接种入试验培养基中，置35℃孵育箱内孵育数小时到两周（视方法及菌种而定）后，观察结果。若用微量发酵管，或要求培养时间较长时，应注意保持其周围的湿度，以免培养基干燥。

(3)结果：能分解糖（醇、苷）产酸的细菌，培养基中的指示剂呈酸性反应（如酚红变为黄色），产气的细菌可在小倒管（Durham小管）中产生气泡，固体培养基则产生裂隙。不分解糖则无变化。

(4)应用：糖（醇、苷）类发酵试验，是鉴定细菌的生化反应试验中最主要的试验，不同细菌可发酵 不同的糖（醇、苷）类，如沙门菌可发酵葡萄糖，但不能发酵乳糖，大肠埃希菌则可发酵葡萄糖和乳糖。即便是两种细菌均可发酵同一种糖类，其发酵结果也不尽相同，如志贺菌和大肠埃希菌均可发酵葡萄糖，但前者仅产酸，而后者则产酸、产气，故可利用此试验鉴别细菌。

表6-4-1 常用于细菌糖发酵试验的糖、醇类

单糖 四碳糖：赤藓糖 , 五碳糖：核糖 核酮糖 木糖

阿拉伯糖, 六碳糖：葡萄糖 果糖 半乳糖 甘露糖

双糖 蔗糖（葡萄糖＋果糖）乳糖（葡萄糖＋半乳糖）麦芽糖（两分子葡萄糖）三糖 棉子糖（葡萄糖＋果糖＋半乳糖）多糖 菊糖（多分子果糖）淀粉

醇类 侧金盏花醇 卫茅醇 甘露醇 山梨醇 非糖类 肌醇

2．葡萄糖代谢类型鉴别试验

(1)原理：细菌在分解葡萄糖的过程中，必须有分子氧参加的，称为氧化型；能进行无氧降解的为发酵型；不分解葡萄糖的细菌为产碱型。发酵型细菌无论在有氧或无氧环境中都能分解葡萄糖，而氧化型细菌在无氧环境中则不能分解葡萄糖。本试验又称氧化发酵（O/F或Hugh－Leifson，HL）试验，可用于区别细菌的代谢类型。

(2)方法：挑取少许纯培养物（不要从选择性平板中挑取）接种2支HL培养管中，在其中一管加入高度至少为0.5cm的无菌液体石蜡以隔绝空气（作为密封管），另一管不加（作为开放管）。置35℃孵箱孵育48h以上。

(3)结果： 两管培养基均不产酸（颜色不变）为阴性；两管都产酸（变黄）为发酵型；加液体石蜡管不产酸，不加液体石蜡管产酸为氧化型。(4)应用：主要用于肠杆菌科与其它非发酵菌的鉴别。肠杆菌科、弧菌科细菌为发酵型，非发酵菌为氧化型或产碱型。也可用于鉴别葡萄球菌（发酵型）与微球菌（氧化型）。3．甲基红（MR）试验

(1)原理：某些细菌在糖代谢过程中，分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸进一步被分解为甲酸、乙酸和琥珀酸等，使培养基pH下降至4.5以下时，加入甲基红指示剂呈红色。如细菌分解葡萄糖产酸量少，或产生的酸进一步转化为其它物质（如醇、醛、酮、气体和水），培养基pH在 5.4以上，加入甲基红指示剂呈桔黄色。

(2)方法：将待试菌接种于葡萄糖磷酸盐蛋白胨水中，35℃孵育48h~96h后，于5ml培养基中滴加5~6滴甲基红指示剂，立即观察结果。

(3)结果判定：呈现红色者为阳性，桔黄色为阴性，桔红色为弱阳性。

(4)应用：常用于肠杆菌科内某些种属的鉴别，如大肠埃希菌和产气肠杆菌，前者为阳性，后者为阴性。肠杆菌属和哈夫尼亚菌属为阴性，而沙门菌属、志贺菌属、枸橼酸杆菌属和变形杆菌属等为阳性。

4．β－半乳糖苷酶试验（ONPG试验）

(1)原理：乳糖发酵过程中需要乳糖通透酶和β－半乳糖苷酶才能快速分解。有些细菌只有半乳糖苷酶，因而只能迟缓发酵乳糖，所有乳糖快速发酵和迟缓发酵的细菌均可快速水解邻硝基酚-β-D-半乳糖苷（O-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside,ONPG）而生成黄色的邻硝基酚。用于枸橼酸菌属、亚利桑那菌属与沙门菌属的鉴别。

(2)方法：将待试菌接种于ONPG肉汤中，35℃水浴或孵箱孵育18~24h，观察结果。(3)结果：呈现亮黄色为阳性，无色为阴性。

(4)应用：可用于迟缓发酵乳糖细菌的快速鉴定，本法对于迅速及迟缓分解乳糖的细菌均可短时间内呈现阳性。埃希菌属、枸橼酸杆菌属、克雷伯菌属、哈夫尼亚菌属、沙雷菌属和肠杆菌属等均为试验阳性，而沙门菌属、变形杆菌属和普罗威登斯菌属等为阴性。

5．VP试验

(1)原理：测定细菌产生乙酰甲基甲醇的能力。某些细菌如产气肠杆菌，分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸进一步脱羧形成乙酰甲基甲醇。在碱性条件下，乙酰甲基甲醇被氧化成二乙酰，进而与培养基中的精氨酸等含胍基的物质结合形成红色化合物。即V-P试验阳性。(2)方法：将待检菌接种于葡萄糖磷酸盐蛋白胨水中，35℃孵育24~48h，加入50g/Lα－萘酚（95％乙醇溶液）0.6ml，轻轻振摇试管，然后加0.2ml 400g/L KOH，轻轻振摇试管30s至1min，然后静置观察结果。

(3)结果：红色者为阳性，黄色或类似铜色为阴性。

(4)应用：主要用于大肠埃希菌和产气肠杆菌的鉴别。本试验常与MR试验一起使用，一般情况下，前者为阳性的细菌，后者常为阴性，反之亦然。但肠杆菌科细菌不一定都这样规律，如蜂房哈夫尼亚菌和奇异变形杆菌的VP试验和MR试验常同为阳性。6．胆汁七叶苷水解试验

（1）原理：在10%~40％胆汁存在下，测定细菌水解七叶苷的能力。七叶苷被细菌分解生成的七叶素，七叶素与培养基中的枸橼酸铁的二价铁离子发生反应形成黑色化合物。

(2)方法：将被检菌接种于胆汁七叶苷培养基中，35℃孵育18~24h后，观察结果。(3)结果：培养基完全变黑为阳性，不变黑为阴性。

(4)应用：主要用于鉴别D群链球菌与其它链球菌的区别，以及肠杆菌科的某些种、某些厌氧菌（如脆弱拟杆菌等）的初步鉴别。D群链球菌本试验为阳性。7．淀粉水解试验

(1)原理：产生淀粉酶的细菌能将淀粉水解为糖类，在培养基上滴加碘液时，可在菌落周围出现透明区。

(2)方法：将被检菌划线接种于淀粉琼脂平板或试管中，35℃孵育18~24h，加入革兰碘液数滴，立即观察结果。

(3)结果：阳性反应，菌落周围有无色透明区，其它地方蓝色；阴性反应，培养基全部为蓝色。

(4)应用：用于白喉棒状杆菌生物型的分型，重型淀粉水解试验阳性，轻、中型阴性；芽胞杆菌属菌种和厌氧菌某些种的鉴定。8．甘油复红试验

(1)原理：甘油可被细菌分解生成丙酮酸，丙酮酸脱去羧基为乙醛，乙醛与无色的复红生成醌式化合物，呈深紫红色。

(2)方法：取被检菌接种于甘油复红肉汤培养基中，于35℃孵育，观察2~8d。应同时做阴性对照。

(3)结果：紫红色为阳性，与对照管颜色相同为阴性。

(4)应用：主要用于沙门菌属内各菌种间的鉴别。伤寒沙门菌、甲（丙）型副伤寒沙门菌、猪霍乱沙门菌、孔道夫沙门菌和仙台沙门菌本试验为阴性，乙型副伤寒沙门菌结果不定，其它不常见沙门菌多数为阳性。9．葡萄糖酸氧化试验

(1)原理：某些细菌可氧化葡萄糖酸钾，生成α-酮基葡萄糖酸。α-酮基葡萄糖酸是一种还原性物质，可与班氏试剂起反应，出现棕色或砖红色的氧化亚铜沉淀。

(2)方法：将待检菌接种于葡萄糖酸盐培养基中(1ml)，置35℃孵育48h,加入班氏试剂1ml，于水浴中煮沸10min并迅速冷却，观察结果。

(3)结果：出现黄到砖红色沉淀为阳性。不变或仍为蓝色为阴性。

(4)应用：主要用于假单胞菌的鉴定和肠杆菌科菌分群。

二、氨基酸和蛋白质的代谢试验 1．硫化氢试验

(1)原理：某些细菌能分解含硫氨基酸生成硫化氢，与亚铁离子或铅离子结合形成黑色沉淀物。

(2)方法：将待检菌接种于含硫化物及亚铁离子的培养基或克氏双糖铁琼脂（KIA）中，35℃孵育18~24h，观察有无黑色沉淀出现。或用醋酸铅纸条，悬挂于KIA管中（白色滤纸，根据试管大小裁剪适当，在热的50g/L醋酸铅饱和水溶液中浸泡，然后于50~60℃烘干，121℃15min高压灭菌备用）。醋酸铅是最敏感的方法。(3)结果：有黑色沉淀物为阳性。

(4)应用：主要用于鉴别肠杆菌科细菌，如沙门菌属、枸橼酸杆菌属、变形杆菌属、爱德华菌属等为阳性，其它菌属大多为阴性。但沙门菌属中亦有部分硫化氢阴性菌株，如甲型副伤寒、仙台、猪霍乱沙门菌等。2．明胶液化试验

(1)原理：细菌分泌的胞外蛋白水解酶（明胶酶）能分解明胶，使明胶失去凝固能力而液化。(2)方法：将待检菌接种于明胶培养基中，35℃孵育24h到7d或更长时间，每24h取出放入4℃冰箱约2h后，观察有无凝固。

(3)结果：如无凝固，则表示明胶已被水解，液化试验阳性。如凝固，则继续培养。

(3)应用：奇异变形杆菌、普通变形杆菌、沙雷菌属和阴沟肠杆菌等到能液化明胶，肠杆菌科中的其它细菌很少液化明胶。有些厌氧菌如产气荚膜梭菌、脆弱类杆菌等也能液化明胶。另外，许多假单胞菌也能产生明胶酶而使明胶液化。3．吲哚试验（靛基质试验）(1)原理：某些细菌有色氨酸酶，能分解色氨酸产生吲哚，吲哚与对二甲氨基苯甲醛形成红色的玫瑰吲哚。

(2)方法：将待检菌接种于富含色氨酸的蛋白胨水培养基中，35℃孵育24~48h，加入靛基质试剂，观察结果。

(3)结果：红色为阳性，无色为阴性。

(4)应用：主要用于肠杆菌科细菌的鉴定，如大肠埃希菌与产气肠杆菌，肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌等的鉴别。4．苯丙氨酸脱氨酶试验

(1)原理：测定细菌是否产生苯丙氨酸脱氨酶。细菌产生的苯丙氨酸脱氨酶使苯丙氨酸脱氨后生成苯丙酮酸，加入三氯化铁试剂后产生绿色反应。若延长时间，会引起退色。

(2)方法：将待检菌大量接种入苯丙氨酸培养基中，35℃孵育18~24h，滴加100g/L三氯化铁试剂4~5滴，立即观察菌落生长处有无绿色出现。(3)结果：有绿色出现为阳性。

(4)应用：变形杆菌属、普罗威登菌属、摩根菌属均为阳性，肠杆菌科其它细菌均为阴性。5．氨基酸脱羧酶试验

(1)原理：某些细菌可产生氨基酸脱羧酶使氨基酸脱羧生成胺和二氧化碳。由于胺的生成使培养基变为碱性，可用指示剂指示出来。

(2)方法：将待检菌分别接种于1支氨基酸（赖氨酸，鸟氨酸或精氨酸）脱羧酶试验管和1支氨基酸脱羧酶对照管（无氨基酸），各覆盖至少0.5cm高度的无菌石蜡油，35℃孵育1~4d，观察结果。

(3)结果：若为溴甲酚紫指示剂，则试验管紫色为阳性，黄色为阴性，对照管应为黄色。(4)应用：主要用于某些细菌种间的鉴别，如赖氨酸用于产气肠杆菌（阳性）与阴沟肠杆菌（阴性）；鸟氨酸用于阴沟肠杆菌（阳性）和克雷伯菌（阴性）；精氨酸用于阴沟肠杆菌（阳性）和产气肠杆菌（阴性）等。6．精氨酸双水解酶试验

(1)原理：精氨酸经两次水解后,生成鸟氨酸、氨及二氧化碳。鸟氨酸又在脱羧酶的作用下生成腐胺。氨及腐胺均为碱性物质，故可使培养基变碱，用指示剂指示出来。(1)方法：将待检菌接种于试验培养上，置35℃孵箱孵育1~4d，观察结果。

(2)结果：溴甲酚紫指示剂呈紫色为阳性，酚红指示剂呈红色为阳性。黄色为阴性。(3)应用：主要用于肠杆菌科及假单胞菌属的鉴定。7．尿素酶试验

(1)原理：某些细菌能产生尿素酶，分解尿素产生大量的氨，使培养基变碱。(2)方法：将待检菌接种于含有尿素的培养基中，35℃孵育18~24h，观察结果。(3)结果：红色为阳性，不变为阴性。

(4)应用：主要用于肠杆菌科变形杆菌属、普罗威登菌属、克雷伯菌属及假单胞菌属的鉴定。

8．霍乱红试验

(1)原理：霍乱弧菌分解色氨酸生成吲哚，并能使硝酸盐还原为亚硝酸盐，当加入硫酸后生成亚硝酸吲哚，呈红色反应。

(2)方法：将待检菌接种于蛋白胨水中，置35℃孵育24h，加入浓硫酸数滴，观察结果。(3)结果：呈红色者为阳性。

(4)应用：霍乱弧菌呈阳性反应，但本试验并非霍乱弧菌所特有。凡能产生吲哚并还原硝酸盐为亚硝酸盐的细菌，均可呈现阳性反应。

三、碳源和氮源利用试验 1．枸橼酸盐利用试验

(1)原理：某些细菌能利用枸橼酸盐作为唯一碳源，而在此培养基上生长，并分解枸橼酸盐生成碳酸钠，使培养基变碱性。

(2)方法：将待检菌接种于枸橼酸盐培养基上，置35℃孵育1~4d，逐日观察结果。

(3)结果：若用溴麝香草酚兰指示剂，斜面出现菌落或菌苔，培养基变蓝色为阳性；无菌落生长，培养基绿色为阴性。

(4)应用：可用此试验作细菌种属间鉴定。埃希菌属、志贺菌属、爱德华菌属和耶尔森菌属均为阴性，沙门菌属、克雷伯菌属通常阳性，粘质和液化沙雷菌和某些变形杆菌及枸橼酸杆菌阳性。此外，铜绿假单胞菌、洋葱伯克霍尔德菌和嗜水气单胞菌也能利用枸橼酸盐。

2．丙二酸盐利用试验

(1)原理：某些细菌能利用丙二酸盐作为唯一碳源，丙二酸盐被分解生成碳酸钠，使培养基变碱。

(2)方法：将待检菌接种于丙二酸盐培养基中，置35℃孵育24~48h，观察结果。(3)结果：培养基由绿色变为蓝色为阳性。颜色无变化为阴性。

(4)应用：肠杆菌科中亚利桑那菌和克雷伯菌属为阳性，枸橼酸杆菌属、肠杆菌属和哈夫尼亚菌属有不同生物型反应，其它各菌属均为阴性。

3．醋酸钠利用试验

(1)原理：细菌利用铵盐作为唯一氮源，同时，利用醋酸盐作为唯一碳源时，可在醋酸盐培养上生长，分解醋酸盐生成碳酸钠，使培养基变为碱性。

(2)方法：将被检菌接种于醋酸盐培养基中，置35℃孵育2~7d，逐日观察结果。(3)结果：培养基上有细菌生长，并变为蓝色为阳性。

(4)应用：主要用于大肠埃希菌和志贺菌属的鉴别，前者为阳性，而后者为阴性。4．马尿酸钠水解试验

(1)原理：某些细菌可具有马尿酸水解酶，可使马尿酸水解为苯甲酸和甘氨酸，苯甲酸与三氯化铁试剂结合，形成苯甲酸铁沉淀。

(2)方法：将待检菌接种于马尿酸钠培养基中，置35℃孵育48h，离心沉淀，取上清液0.8ml，加入三氯化铁试剂0.2ml，立即混匀，经10~15min观察结果。(3)结果：出现恒定之沉淀物为阳性。(5)应用：主要用于B群链球菌的鉴定。

5、乙酰胺利用试验

(1)原理：许多非发酵菌产生一种脱酰胺酶，可使乙酰胺经脱酰胺作用释放氨，使培养基变碱。

(2)方法：将被检菌接种于乙酰胺培养基中，置35℃孵育24~48h，观察结果。

(3)结果：培养基由绿色变为蓝色为阳性。如不生长，或稍有生长，但培养基颜色不变为阴性。

(4)应用：主要用于非发酵菌的鉴定。铜绿假单胞菌、去硝化产碱杆菌、食酸假单胞菌为阳性，其它非发酵菌大多数为阴性。

四、酶类试验 1.氧化酶试验

(1)原理：氧化酶又称细胞色素氧化酶，是细胞色素氧化酶系统中的最终呼吸酶。此酶并不直接与氧化酶试剂起反应，而是先使细胞色素C氧化，然后此氧化型细胞色素C再使对苯二胺氧化，产生颜色反应。因此，本试验结果与细胞色素C的存在有关。

(2)方法：取洁净滤纸条，沾取菌落少许，加氧化酶试剂（10g/L盐酸四甲基对苯二胺水溶液或10g/L盐酸二甲基对苯二胺水溶液）1滴，1min内观察结果。也可将试剂滴加到菌落上进行试验。

(3)结果：阳性者立即变粉红色，5~10s内呈深紫色。无色为阴性。

(4)应用：用于奈瑟菌属的菌种鉴定，该属细菌均阳性。此外，也用于假单胞菌属与肠杆菌科细菌的区别，前者阳性，而后者阴性。莫拉菌属、产碱杆菌属等均为阳性。

注意事项： ①试验时应避免接触含铁物质，以免出现假阳性。②10g/L盐酸四甲基对苯二胺或10g/L盐酸四甲基对苯二胺水溶液为无色溶液，在空气中易被氧化而失效，故应经常更换新试剂，并盛于棕色瓶中，若试剂已变成深蓝色，应弃去不用。

2．触酶试验

(1)原理：触酶又称过氧化氢酶，具有过氧化氢酶的细菌，能催化过氧化氢成为水和原子态氧，继而形成氧分子，出现气泡。

(2)方法：取洁净玻片1张，用接种环挑取细菌，加3％H2O2 1滴，立即观察结果。(3)结果：若立即出现大量气泡为阳性。无气泡为阴性。

(4)应用：大多需氧和兼性厌氧菌均产生过氧化氢酶，但链球菌科阴性，故常用此试验来鉴定。此外，金氏杆菌属的细菌也为阴性。分枝杆菌的鉴别则用耐热触酶试验，结核分枝杆菌为阴性，戈氏分枝杆菌和地分枝杆菌为阳性。

注意事项：①3％H2O2溶液要新鲜配制。②不宜用血琼脂平板上生长的菌落，因红细胞含有触酶，可致假阳性反应，③取对数生长期的细菌。3．凝固酶试验

(1)原理：凝固酶试验是鉴定葡萄球菌致病性的重要试验。致病性葡萄球菌可产生两种凝固酶，一种是与细胞壁结合的凝聚因子，称结合凝固酶，它直接作用于血浆中纤维蛋白原，使发生沉淀，包围于细菌外面而凝聚成块，玻片法阳性结果是由此凝聚因子所致；另一种凝固酶是分泌至菌体外，称为游离凝固酶，它能使凝血酶原变成凝血酶类产物，使纤维蛋白原变为纤维蛋白，从而使血浆凝固。试管法可同时测定结合型和游离型凝固酶。(2)方法: ①玻片法：在一张洁净玻片中央加1滴生理盐水，用接种环取待检培养物与其混合（设阳性和阴性对照）制成菌悬液，若经10~20s内无自凝现象发生，则加入人或兔新鲜血浆1环，与菌悬液混合，观察结果。②试管法：于试管内加1﹕4稀释的兔或人血浆0.5ml，再加1~2个待试菌菌落，置37℃水浴，每30min观察1次结果。

(3)结果：①玻片法：5~10s内出现凝集者为阳性。②试管法：如有凝块或整管凝集出现为阳性。2h后无上述现象出现，则放置过夜后再观察。

(4)应用：本试验仅用于致病性葡萄球的鉴定。

注意事项：①玻片法为筛选试验，阳性、阴性均需进行试管法测定。②血浆必须新鲜。③应使用肝素而非枸橼酸盐作抗凝剂抗凝的血浆。④本试验也可用市购的胶乳凝集试验试剂盒测定。

4．DNA酶试验

(1)原理： 某些细菌能产生DNA酶，水解外源性DNA使之成为寡核苷酸。DNA可被酸沉淀，而寡核苷酸则不会。故在DNA琼脂平板上加盐酸后，可在菌落周围形成透明区。

(2)方法：在DNA琼脂平板上点种待检菌，35℃孵育18~24h，用1 mol/L盐酸倾注平板，观察结果。

(3)结果：如菌落周围有透明区者为阳性，无透明区为阴性。

(4)应用：主要用于肠杆菌科及葡萄球菌属某些菌种的鉴定。沙雷菌、变形杆菌和金黄色葡萄球菌DNA酶均阳性。

5．胆汁溶菌试验

(1)原理：胆汁或去氧胆酸钠能导致某些细菌溶解，一方面是由于胆汁或去氧胆酸钠降低了细菌细胞膜上的表面张力，使细菌的细胞膜破损或使菌体裂解。另一方面可能与激活细菌体内的自溶酶有关。

(2)方法：①试管法：用纯培养物制备1ml生理盐水浓菌悬液，pH调至7.0，分装两支试管，各0.5ml。其中一管加0.5ml 100g/L去氧胆酸钠为试验管，另一管加0.5ml生理盐水作对照。35℃孵育每小时观察1次结果。②平板法：在血平板上选取单个可疑菌落，作好标记，直接在菌落上加1接种环20g/L去氧胆酸钠（pH7.0），置35℃孵育30min（平板不要翻转）观察结果。

(3)结果：①试管法：在3h内液体透明为阳性。②平板法：如菌落消失，仅留下溶血区为阳性，菌落不消失为阴性。

(4)应用：用于肺炎链球菌的鉴定。6．硝酸盐还原试验

(1)原理：硝酸盐还原反应包括两个过程，其一是在合成代谢过程中，硝酸盐还原为亚硝酸盐和氨，再由氨转化为氨基酸和细胞内其它含氮化合物；另一是在分解代谢过程中，硝酸盐或亚硝酸盐代替氧作为呼吸酶系统中的终末受氢体。硝酸盐还原过程可因细菌不同而异。有的细菌仅使硝酸盐还原为亚硝酸盐，如大肠埃希菌等；有的细菌可使其还原为亚硝酸盐和离子态的铵；有的细菌能使硝酸盐或亚硝酸盐还原为氮，如沙雷菌属；有的细菌还可以将其还原产物在合成性代谢中完全利用。硝酸盐或亚硝酸盐如果还原生成气体的终末产物如氮或氧化氮，则称为脱硝化或脱氮化作用。某些细菌能还原硝酸盐为亚硝酸盐，亚硝酸盐与醋酸作用，生成亚硝酸，亚硝酸与试剂中的对氨基苯磺酸作用生成重氮基苯磺酸，后者与α-萘胺结合生成N-α萘胺偶苯磺酸。

(2)方法：将待检菌接种于硝酸盐培养基（内含小倒管）中，35℃孵育1~4d。将甲、乙等量混合液（用时混合）0.1ml加于试管内，立即或10min内观察结果。

(3)结果：出现红色为阳性反应。如欲观察有无氮气产生，可于培养基管内加1只小倒管，有气泡产生，则表示有氮气生成。如欲检查培养基中硝酸盐是否被分解，可取锌粉少许加入培养基内，如出现红色表明硝酸盐仍存在；若不出现红色，表示硝酸盐已被分解。

(4)应用：本试验广泛用于细菌鉴定。肠杆菌科细菌均能还原硝酸盐为亚硝酸盐；假单胞菌属中有的细菌能产生氮气，如铜绿假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌、斯氏假单胞菌，有的则能还原硝酸盐为亚硝酸盐，如鼻疽假单胞菌等；厌氧菌如韦荣菌也能还原硝酸盐为亚硝酸盐。7．卵磷脂酶试验

(1)原理：细菌产生的卵磷脂酶，经钙离子作用，能迅速分解卵黄或血清中的卵磷脂形成混浊沉淀状的甘油酯和水溶性磷酸胆碱。

(2)方法：取待检菌划线接种或点种在卵黄琼脂平板上，置35℃孵育3~6h，观察结果。(3)结果：3h后在菌落周围形成乳白色混浊，即为卵磷脂酶试验阳性，6h后该混浊圈可扩大到直径5~6mm。(4)应用：该试验主要用于厌氧的鉴定。产气荚膜梭菌和诺维梭菌为阳性，其他梭菌为阴性。蜡样芽孢杆菌亦为阳性。8．磷酸酶试验

(1)原理：磷酸酶是磷酸脂的水解酶，可使单磷脂水解，其反应可根据反应基质不同而异，如用磷酸酚酞为基质，经磷酸酶水解后可释放酚酞，在碱性环境中呈红色。

(2)方法：取待检菌接种于磷酸酚酞琼脂平板上，置35℃孵育18~24h，于平皿盖内加1滴浓氨水，熏蒸片刻，观察结果。亦可用液体培养基，经孵育后，向管内加400g/L氢氧化钠溶液1滴，观察结果。

(3)结果：菌落变为红色者为阳性。

(4)应用：主要用于致病性葡萄球菌与非致病性葡萄球菌的鉴别，前者为阳性，后者为阴性。

9．脂酶试验

(1)原理：细菌产生的脂酶可分解脂肪为游离脂肪酸。在培养基中加入维多利亚蓝可与脂肪结合成为无色化合物，如果脂肪被分解，则维多利亚蓝释出，呈蓝色。

(2)方法：将待检菌接种于含维多利亚蓝的脂酶培养基中，置35℃孵育24h，观察结果。(3)结果：培养基变为深蓝色者为阳性，否则可呈无色或粉红色。

(4)应用：主要用于厌氧菌鉴定。在拟杆菌中产黑色素拟杆菌中间亚种产生脂酶，其它拟杆菌阴性；在梭菌属中诺维梭菌和产芽胞梭菌也产生此酶，其它梭菌为阴性。10．CAMP试验

(1)原理：B群链球菌（无乳链球菌）产生一种“CAMP”因子，此种物质能促进葡萄球菌的β-溶血素的活性。因此，可在两种细菌的交界处溶血力增强，出现箭头型透明溶血区。

(2)方法：在羊血或马血琼脂平板上，先以β-溶血的金黄色葡萄球菌划一横线接种。再将待检菌与前一划线作垂直接种，两者应相距1cm，于35℃孵育18~24h，观察结果。每次试验应做阴阳性对照。

(3)结果：两种细菌划线交接处出现箭头型溶血区为阳性。

(4)应用：主要用于B群链球菌（阳性）的鉴定，其他链球菌均为阴性。11．石蕊牛乳试验

(1)原理：由于牛乳内含有丰富的蛋白质和糖类，各种细菌对这些物质的分解能力不同，故可有数种不同反应，用以鉴别细菌。(2)将待检菌接种于石蕊牛乳培养基中，若为芽胞梭菌，要在培养基中加入无菌铁末，置35℃孵育18~24h，必要时可延长至14d。观察结果。

(3)结果：①产酸：发酵乳糖产酸，使指示剂变为粉红色。②产气：发酵乳糖而同时产气，可冲开上面的凡士林。③凝固：因产酸太多而使牛乳中的酪蛋白凝固。④胨化：将凝固的酪蛋白继续水解为胨，培养基上层液体变清，底部可留有未被完全胨化的酪蛋白。⑤产碱：乳糖未发酵，因分解含氮物质，生成胺及氨，培养基变碱，指示剂变为蓝色。(4)应用：主要用于梭菌、链球菌和丙酸杆菌的鉴定。

五、抑菌试验

1．Optochin敏感试验

(1)原理：Optochin(奥普托欣)是盐酸乙基氢化羟基奎宁的商品名。对肺炎链球菌有特异抑制作用，其作用机制可能是干扰叶酸生物合成作用，而对其它链球菌则无此作用。

(2)方法：用棉拭子将待检菌的肉汤培养物均匀涂布于血琼脂平板上，贴上一张含5μg奥普托欣纸片，置烛缸或二氧化碳孵箱，35℃ 孵育18~24h，观察结果。(3)结果：抑菌圈直径大于14mm为敏感，小于或等于 14mm为阴性。(4)应用：主要用于肺炎链球菌（敏感）与其它链球菌（耐药）的鉴别。2．杆菌肽敏感试验

(1)原理：A群链球菌对杆菌肽几乎是100%敏感，而其它群链球菌对杆菌肽通常耐药。故此试验可对链球菌进行鉴别。

(2)方法：用棉拭子将待检菌的肉汤培养物均匀涂布于血琼脂平板上，稍干后贴一张含0.04U的杆菌肽纸片，置35℃ 孵育18~24h，观察结果。

(3)结果：抑菌圈直径大于10mm为敏感，小于10mm为耐药。(4)应用：主要用于A群与非A群链球菌的鉴别。从临床分离的菌株中有5%~15%非 A群链球菌也对杆菌肽敏感，如6%的B群链球菌、7.5%的C群链球菌和G群链球菌等。3．新生霉素敏感试验

(1)原理：金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌可被低浓度新生霉素所抑制，表现为敏感，而腐生葡萄球菌则表现为耐药。

(2)方法：用棉拭子将待检菌菌悬液均匀涂布于M-H琼脂平板或血平板上，在平板中央贴含5μg/片新生霉素诊断纸片一张，置35℃孵育16~18h，观察结果。(3)结果：抑菌圈直径大于16mm为敏感，小于或等于16mm为耐药。(4)应用：主要用于葡萄球菌某些种的鉴定。4．O/129试验

(1)原理：O/129（2，4二氨基-6，7-二异丙基喋啶）能抑制弧菌属、发光杆菌属和邻单胞菌属细菌生长，而气单胞菌属和假单胞菌属细菌则耐药。

(2)方法：用棉拭子将待检菌菌悬液均匀涂布于碱性琼脂平板上，将10μg/片及150μg/片的O/129诊断纸片贴于平板上，置35℃孵育18~24h，观察结果。(3)结果：出现抑菌圈者表示敏感，无抑菌圈者为耐药。

(4)应用：主要用于弧菌属、邻单胞菌属与气单胞菌属的鉴别，弧菌属和邻单胞菌属菌为敏感，气单胞菌属菌为耐药。其它菌属有发光杆菌属为敏感，假单胞菌属为耐药。5．氰化钾试验

(1)原理：氰化钾可抑制某些细菌的呼吸酶系统。细胞色素、细胞色素氧化酶、过氧化氢酶和过氧化物酶均以铁卟啉作为辅基，氰化钾与铁卟啉结合，使这些酶失去活性，使细菌生长受到抑制。(2)方法：将待检菌接种于氰化钾培养基中，同时接种一支不含氰化钾的对照培养基，置35℃孵育24~48h，观察结果。

(3)结果：细菌在氰化钾培养基中生长的（不受抑制）为阳性，不生长（抑制）为阴性。(4)应用：肠杆菌科中的沙门菌属、志贺菌属和埃希菌属细菌的生长受到抑制，而其它各菌属的细菌均可生长。

六、其它试验

1．克氏双糖铁或三糖铁琼脂培养基试验

(1)原理：克氏双糖铁(KIA)或三糖铁琼脂(TSI)培养基制成高层和短的斜面，其中葡萄糖含量仅为乳糖或蔗糖的十分之一，若细菌只分解葡萄糖而不分解乳糖和蔗糖，分解葡萄糖产酸使pH降低，因此斜面和底层均先呈黄色，但因葡萄糖量较少，所生成的少量酸可因接触空气而氧化，并因细菌生长繁殖利用含氮物质生成碱性化合物，使斜面部分又变成红色；底层由于处于缺氧状态，细菌分解葡萄糖所生成的酸类一时不被氧化而仍保持黄色。细菌分解葡萄糖、乳糖或蔗糖产酸产气，使斜面与底层均呈黄色，且有气泡。细菌产生硫化氢时与培养基中的硫酸亚铁作用，形成黑色的硫化铁。

(2)方法：用接种针挑取待检菌的菌落，先穿刺接种到KIA或TSI深层，距管底3~5mm为止，再从原路退回，在斜面上自下而上划线，置35℃孵 育18~24h，观察结果。(3)结果：常见的KIA反应有如下几种： ①斜面碱性/底层碱性：不发酵碳水化合物，系不发酵菌的特征。如铜绿假单胞菌。②斜面碱性/底层酸性：葡萄糖发酵、乳糖（和TSI中的蔗糖）不发酵，是不发酵乳糖菌的特征，如志贺菌。③斜面碱性/底层酸性（黑色）：葡萄糖发酵、乳糖不发酵并产生硫化氢，是产生硫化氢不发酵乳糖菌的特征。如沙门菌、亚利桑那菌、枸橼酸杆菌和变形杆菌等。④斜面酸性/底层酸性：葡萄糖和乳糖（和TSI中的蔗糖）发酵，是发酵乳糖的大肠菌群的特征，如大肠埃希菌、克雷伯菌属和肠杆菌属。

(4)应用：鉴别肠道杆菌用。KIA或TSI对初分离出的、可疑为革兰阴性杆菌鉴定特别有用。其反应模式是许多杆菌鉴定表的组成部分，也可作为观察其他培养基反应的有价值的质控依据。

2．氢氧化钾拉丝试验

(1)原理：革兰阴性细菌的细胞壁在稀碱溶液中易于破裂，释放出未断裂的DNA螺旋，使氢氧化钾菌悬液呈现粘性，可用接种环搅拌后拉出粘丝来，而革兰阳性细菌在稀碱溶液中没有上述变化。

(2)方法：取1滴40g/L氢氧化钾水溶液（应新鲜配制）于洁净玻片上，取新鲜菌落少许，与氢氧化钾水溶液搅拌混匀，并每隔几秒钟上提接种环，观察能否拉出粘丝。(3)结果：用接种环拉出粘丝者为阳性，仍为混悬液者为阴性。

(4)应用：主要用于革兰阴性菌与易脱色的革兰阳性菌的鉴别。大多数革兰阴性菌于5~10s内出现阳性反应，有的则需30~45s，假单胞菌、无色杆菌、黄杆菌、产碱杆菌、莫拉菌等大多数在10s内呈阳性，不动杆菌、莫拉菌反应较慢，大多数菌株在60s内出现阳性，而革兰阳性菌在60s以后仍为阴性。