第一篇：大豆异黄铜甙元提取方法的研究
大豆异黄铜甙元提取方法的研究
大豆异黄酮（soybean isoflavone）是大豆种子中的一类次生代谢产物，近年来大量研究表明：大豆异黄酮具有预防癌症、心血管疾病、骨质疏松症、抗氧化和降低妇女更年期综合症等重要生理功能，引起了学术界的广泛关注，大豆异黄酮成了世界各国科学家研究的热点。大豆异黄酮是一种多元酚类混合物，分为游离型的甙元和结合型的糖甙两类，而大豆及大豆食品中的大豆异黄酮主要以糖甙型形式存在，人体一般不吸收此种形式的异黄酮。据文献报道，甙元形式的异黄酮比糖甙形式的异黄酮具有更高的生物活性。可见大豆中异黄酮甙元含量不足5%，但比糖甙型表现出更高的生物学活性，因此，如何从大豆中提取出甙元形式的异黄酮从而大大提高其生理活性，就成了近年来大豆异黄酮研究中的一个热点。目前较常见的大豆异黄酮提取方法有：热水浸提、乙醇及乙酸乙酯等有机溶剂浸提法等，其提取产品中异黄酮是以糖甙结合的形式存在。为获得高生物活性的游离型大豆异黄酮甙元，我们提出酸碱水解法提取大豆异黄酮的新工艺，该提取方法利用大豆异黄酮甙、大豆异黄酮甙元以及大豆异黄酮甙元钠盐在分子极性上的差异，最终提取出大豆异黄酮甙元成分。具体提取工艺如下：大豆→粉碎→酸水解→碱水解→乙醚萃取→酸中和→乙醚萃取→异黄酮甙元粗提品。通过单因素实验和正交实验确定了碱水解的最佳提取工艺条件。结果表明，碱水解的最佳条件是：碱解pH 8.75，温度50℃，提取时间90min，此条件下大豆异黄酮甙元提取率为44.3％，粗提品纯度达19.9％。
关键词：大豆异黄酮 甙元 酸碱水解 提取
第二篇：异文化の研究方法
異文化の研究方法について
この地球にはたくさんの国家がある。国によって言葉や文化などが違うことは私たちにとって誰でも知っていることである。こういう違う文化は一般的に「異文化」と呼ばれている。
聖書にこういう話がある：God afraid human to build the Babel Tower, so He made human has different language to make them chaos.この話は本当かどうか私は分からない、ただ社会を研究するときに、異なる文化は「理解」（Understand）と「結合」(Combine)に意味するではないかと思う。私たちは他の国から何を学べるか、その国の文化はどういう意味なのか、これは異文化研究するためにもっとも基本な方法である。
ある国の文化生活に入る前に、まず自分の立場（Researcher’s position）をはっきり分からなければならない：私は傍観者（visitor）であるか、それとも参与者（involver）であるか、ということだ。なぜかというと、研究の立場によって観点が違うからだ。参与者は文化研究に通じて、もっとも経験を得る人かもしれない。しかし、参与者は本来の意味を変え、その文化を自分なりの意味の文化に変えてしまう可能性がある。というのは、社会研究者はあまり社会に参与しすぎないほうがいいと思う。一方、傍観者は最初から最後まで自分の観点を持つことができる。しかし、回りの人と交流しなければ、現実の社会でその研究して得た結論が実現することは難しい、その結論は一部だけのものにすぎない（One face of it）。とういうことで、研究者の立つ場（Researcher’s position）は非常に重要である。
他国の文化と比較するときに、もう一つの注意しなければならない問題は、研究者の総体的な見方（Researcher’s perspective）である。つまり、その研究者は他国の伝統文化を受け入れるつもりがあるかどうかということである。例えば、強い国は弱い国によくこう言っている：“Your country is a waste land, I come here to save you” or “To improve your poor life”… しかし、研究者が異文化社会に入る前に、本来の考え方を忘れ、その国の生活に入ってみなければならないと思う。一番最初の問題は、“Try to change them”ではなく、“Understand them”ということである。その国の文化を全部理解した後に“Improve or change the tradition”ということを考えても遅くない。
以上の問題を注意すれば、私たちは異文化を研究するために一番根本なやり方を見付け、それにその文化を理解することができると思う。もちろん、他国の文化に参与し、そしてその国の人々と付き合う方法がたくさんあるが、研究者にとって、自分なりの方法を見付たほうがいい。ということで、たくさん存在する異文化を研究するために、できるだけ自分に合う研究方法を見つけ、その社会に参与することが大切である。しかも、別の国の人々と接する同時に、その異文化から学び、ほかの生活方法も見つけられると思う、これは“Learning from Researching”とも言えるだろう。
第三篇：多糖的提取纯化及分析鉴定方法研究
多糖的提取纯化及分析鉴定方法研究
王霄
(合肥工业大学 生物与食品工程学院，安徽 合肥230009)
摘要：详细介绍了动植物多糖的常见提取纯化方法的最新研究进展，并比较了各种方法的优缺点。每种方法都有各自的优缺点，在提取时应根据所选材料的性质选用不同的方法，有些方法在一定的条件下可与别的方法协同作用，并对糖的含量测定及分析鉴定方法的研究进展作了概述。
关键词：多糖；提取；纯化；分析鉴定；研究进展 中图分类号：TU 411.01文献标识码：A
Progress of Polysaccharides Extraction, Purification and Identification Methods
WANG Xiao
(School of Biological and Food Engineering, Hefei University of Technology, Hefei 230009, China)
Abstract: This paper reviews the extraction, purification and identification methods of animal and plantpolysaccharides, and compares the advantages and disadvantages of each mothed.Each mothed has its own advantages and disadvantages, appropriate mothed should be selected according to the nature of the chosen material, and some of these methods can be synergy with other methods under certain conditions.In addition, analysis and identification of polysaccharides are outlined.Key words: polysaccharides;extraction;purification;analysis and identification;research progress
菌来源的糖缀合物具有广泛的药理及生物活性
0多糖概述
多糖（polysaccharide）是由糖苷键结合的糖链，至少要超过10个以上的单糖组成的聚合糖高分子碳水化合物。由相同的单糖组成的多糖称为多糖，如淀粉、纤维素和糖原；以没的单糖组成的多糖称为杂多糖，如阿拉伯胶是由戊糖和半乳糖等组成。多糖不是一种纯粹的化学物质，而是聚合程度不同的物质的混合物。多糖类一般不溶于水，无甜味，不能形成结晶，无还原性和变旋现象。多糖也是糖苷，所以可以水解，在水解过程中，往往产生一系列的中间产物，最终完全水解得到单糖。
近年来，国际上对糖及糖复合物的研究己成热点，糖类结构测定和生物活性研究取得了明显的进展。大量实验事实揭示糖类是重要信息分子，参与许多生理和病理过程
[1-2]
[3]。
在对各种中药材化学成分研究的过程中，人
们逐步提高了对植物多糖的关注。植物多糖研究比较深入的是茶多糖、菜籽多糖、南瓜多糖、苦瓜多糖、银杏叶多糖、枸杞多糖等等，植物多糖在抗生素替代物及保健品领域已经取得很好的应用。多糖作为重要的生物活性物质具有调节免疫、抗肿瘤、降低糖脂、延缓衰老等活性，在医疗保健、食品、动物养殖等领域有着广阔的应用前景
[4-7]。
1多糖的提取工艺
1.1 水提醇沉法
水提醇沉法是提取多糖最常用的一种方法。多糖是极性大分子化合物，提取时应选择水、醇等极性强的溶剂。用水作溶剂来提取多糖时，可以用热水浸煮提取，也可以用冷水浸提渗滤，然后将提取液浓缩后，在浓缩液中加乙醇，使其最
。到目前为止。己有
300余种多糖类化合物从天然产物中被分离出来，其中从中草药、食药用菌中提取的水溶性多糖最为重要。已发现有100多种中草药、食药用
终体积分数达到70 %左右，利用多糖不溶于乙醇的性质，使多糖从提取液中沉淀出来，室温静置5 h，多糖的质量分数和得率均较高。影响多糖提取率的因素有：提取温度、浸提料液比、提取时间以及提取次数等。为此，研究者对影响多糖提取工艺的这些因素进行了大量研究。林娟[8]
等研究表明水提法提取甘薯多糖的优化工艺条件为：提取温度85℃，加水比1：7，提取时间2.5h，提取率为26．71％。刘永[9]
等研究表明：最佳提取条件为95℃，料液比1：20(g：mL)，提取时间2h，提取3次，茶叶多糖含量为35.92 mg/g。
水提醇沉法提取多糖不需特殊设备，生产工艺成本低，安全，适合工业化大生产，是一种可取的提取方法。但由于水的极性大，容易把蛋白质、苷类等水溶性的成分浸提出来，从而使提取液存放时腐败变质，为后续的分离带来困难，且该法提取比较耗时，提取率也不高[10]。
1.2酶法提取
酶技术是近年来广泛应用到有效成份提取中的一项生物技术，使用酶可降低提取条件，在比较温和的条件下分解植物组织，加速有效成分的释放或提取。此外，使用酶还可分解提取液中淀粉、果胶、蛋白质等非目的产物。此法可使后续的浓缩和脱蛋白工艺更简易、省时，粗多糖的纯度更高。但会提高生产成本，对提取条件要求较高。杨云
[11]
等人采用的单酶法和复合酶法提取大枣多糖，单酶法提取多糖含量最高可达44.69％，而复合酶法多糖最高含量可达68.13％。1.3超声波提取
超声法是利用超声波对细胞组织的破碎作用来提高多糖浸出率的，具有快速、安全、简便、成本低、多糖提取率高，成分又不被破坏等优点，但对提取设备要求较高。李进伟
[12]
等通过响应面
分析法考察超声波功率、提取时间、提取温度、料液比对枣多糖得率与纯度的影响，得出枣多糖最佳的提取工艺条件为：超声波功率86～96W，提取温度45～53℃，提取时间20min，料液比1:20（g:ml），枣多糖得率7.63%，纯度35.57%。与传统的水浴浸提法相比，该方法不仅缩短了提取时间，且提高了枣多糖得率与纯度。1.4微波提取
微波萃取是高频电磁波穿透萃取媒质，到达被萃取物料的内部，能迅速转化为热能使细胞内部温度快速上升，细胞内部压力超过细胞壁承受力，细胞破裂，细胞内有效成分流出，在较低的温度下溶解于萃取媒质，通过进一步过滤和分离，获得萃取物料。赵怡红
[13]
等研究表明北冬虫夏草
多糖微波提取最佳条件：微波功率550W、固液比l：30、提取时间30s、提取1次，多糖收率3.67％。刘青梅
[14]
等研究结果表明:对于紫菜多糖
提取微波提取优于热水提取,微波冻融提取效果最佳,提取率最高达7.45%,而热水提取率为2.05%.影响微波浸提的主要因素为浸提时间,其次是微波功率和液固质量比。优选方案为微波功率200W、提取时间8 min、水与紫菜液固质量比40:1。
1.5超临界流体提取
超临界流体提取法根据某些气体在超临界状态下具有特殊的液相性质，对一些组分有较好的溶解性，用来提取目的产物。一般采用CO2超临界萃取多糖组分。朱俊玲
[15]
通过超临界CO2流体
萃取处理芦荟多糖，多糖得率为85.1％，是传统方法的1.5倍。超临界萃取的最佳工艺条件是乙醇用量为250 ml/100g芦荟、萃取压力为25 MPa、萃取温度为35℃。1.6超滤法
超滤是一种膜分离技术。该技术应用于多糖的提取，具有不损害活性、分离效率高、能耗低、设备简单、可连续生产、无污染等优点[16]。
1.7酸提法
有些多糖适合用稀酸提取，并且能够得到更高的提取率。如赵宇等
[17]
对海蒿子多糖的提取方
法研究发现，从多糖提取得率来看，酸提法优于传统的水提法。不过此方法只在一些特定的植物多糖提取中占优势，目前报道的并不多。不过在操作上还是应该严格控制酸度，因为在酸性条件下可能引起多糖中糖苷键的断裂。1.8碱提法
与酸提法类似，有些多糖在碱液中有更高的提取率，尤其是含有糖醛酸的多糖及酸性多糖。不过，也应控制碱的浓度，因为有些多糖在碱性较强时也会发生水解。
2多糖纯化方法
2.1除蛋白
根据蛋白质在氯仿等有机溶剂中变性的特点，用V（氯仿）∶V（戊醇或正丁醇）为5∶1 或4∶1，混合物剧烈振摇20～30 min，蛋白质变性生成凝胶，离心分离，分去水层和溶剂层交界处的变性蛋白质。此种只能除去少量蛋白质，效
率不高，须反复多次，多糖有损失。但此方法比较温和，在避免多糖降解上效果较好，如配合加入一些蛋白质水解酶，用Sevage 法效果更佳。李婉婷
[18]
研究结果表明木瓜蛋白酶-Sevage法除
去款冬花多糖中的蛋白最为理想，该法的最佳工艺条件为：木瓜蛋白酶的酶底比为l％，pH值7.0，先在50℃水浴中酶解2h，再经Sevage法脱蛋白3次，其蛋白脱除率为88.95％，多糖保留率为92.63％。2.2透析法
透析法是利用一定孔目的膜，使无机盐或小分子糖透过，而将大分子的多糖截留下来从而达到纯化多糖的目的。此法的关键是要选择孔目合适的透析膜。纤维膜孔径为2～3nm，可使单糖分子通过，分离效果较好，透析时常需要多次换水，溶液的pH值维持在6.0～6.5范围内。2.3凝胶柱层析法
凝胶柱层析法主要是根据多糖分子的大小和形状不同而达到分离目的。但溶液流经多孔性凝胶柱时，小分子已扩散人孔中，各溶质依分子量大小顺序依次流出。此方法快速、简单、条件温和。常用的凝胶有葡聚糖凝胶(Sephadex)和琼脂糖凝胶(Sephamse)，以不同浓度的盐溶液和缓冲溶液作为洗脱剂。此法还可进行多糖相对分子量的测定。王赫
[19]
采用Sephadex G-100凝胶色谱柱
分离纯化，从龙胆水溶性多糖中分离纯化得到2 种不同的均一多糖组分TP-
1、TP-2。2.4纤维素住层析法
纤维素阴离子交换剂柱层析对多糖的分离是利用pH 6时，酸性多糖能吸附于交换剂上，中性多糖不吸附，用pH相同离子强度不同的缓冲液将酸性强弱不同的酸性多糖分别洗脱出来。常用的阴离子交换纤维素有DEAE-纤维素和ECTEOLA纤维素。张兰杰
[20]
等就采用DEAE-纤维素柱分离
北五味子多糖，分别得到了白色结晶和黄色粉末两种多糖产物。
3多糖的分析
3.1含量的测定
测定方法：硫酸-苯酚法、硫酸-蒽酮法、比色定量法、分光光度法、纸色谱法、离子交换色谱法、yaphe [21]
法、薄层色谱法、酶法、原子吸
收法
[22]、HPLC法、凝胶电泳法、亲和电泳法连、续流动分析法检测法
[23]、次亚碘酸盐定量法、蒽
酮-硫酸法（总糖）、DNS法
[24]
（还原法）、磷钼
比色法、邻钾苯胺比色法等。每种方法只对某些多糖的测量效果好。比色法分光光度法离子交换色谱法酶法和电泳法等可同时用于多糖的定性定量分析。3.2纯度鉴定
多糖是高分子化合物，其纯品微观上是不均一的，通常所说的多糖纯品实质上是一定分子量范围的均一组分。多糖纯度鉴定的常用方法：超离心、高压电泳、凝胶层析、HPLC法等。现在应用较多的是HPLC法，旋光度测定[25]
也是纯度
测定的一种方法。3.3分子量的测定
多糖分子量的测定是研究多糖性质的一项重要工作常用方法：渗透压法、蒸气压渗透剂法、端基法、粘度法、光散射法、凝胶色谱法、超过率法、沉淀法、凝胶电泳法、HPLC法、超离心分析法、分子筛色谱法、GPC法
[26]。
4多糖的鉴定
4.1 多糖一级结构测定
多糖的一级结构分析，主要是分析组成多糖的单糖类型、数目连接方式及苷建构型。常用化学法和仪器分析法。多糖组分与分子比例测定法：部分酸解法、完全酶解法、色谱法；吡喃、呋喃环形式结构的分析：红外光谱；连接次序：选择性光谱法、糖苷键顺序水解、核磁共振； α-β-异头异构体：糖苷酶水解核磁共振；羟基被取代情况：甲基化反应、气相色谱、过碘酸氧化、Smith降解法和测硫酸基法（terho法）、核磁共振、质谱法；糖链、肽链连接方式：单糖与氨基酸组成、稀碱水解法、肼解反应；多糖结构的分析方法很多，迄今没有一种方法可以单独完成多糖结构的分析。仪器分析与化学方法相结合是常用的多糖结构测定方法。4.2多糖高级结构测定
目前研究多糖的二级结构常用的手段是NMR技术，如2D-NMR，13C谱，通用的方法是将现代NMR技术与理论计算相结合通过一定的理论计算筛选构象，主要的理论计算方法有从头计算、丰度经验计算及经验力场计算
[27]
。圆二色
谱法（CD）也可用于糖的构象分析,张丽萍等
[28]
应用谱测定了金顶侧耳多锗的水溶液构象近年来，以精确三维结构知识为基础揭示重要生命活
动的规律已达到前所未有的深度和广度[29]，多糖
作为一类重要的生物活性大分子其结构的研究势
必推动对多糖的认识向深层次发展。多糖的应用展望
我国对多糖的研究起步较晚，但近年来的工作取得了较大的进展，愈来愈多的多糖被发现并证实它们具有复杂广泛的生物活性和功能。随着对多糖生物活性的深入研究，多糖的生物活性机理，功效因子会更加明确，它的应用领域也将会更加拓宽。然而，由于多糖本身结构比较复杂，种类繁多，其结构测定和分离纯化有很大的难度；有些多糖在天然植物中的含量低且不易分离及多糖的药理作用与诸多因素有关，给多糖的研究和应用带来许多的挑战，这需要相关行业的人士共同应对。
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第四篇：论文单细胞蛋白的提取方法及发展方向研究
------------------------学 院 毕 业 论 文
学 院（系）：
专
业：
学 生 姓 名：
学
号：
指 导 教 师：
评 阅 教 师：
完 成 日 期：
e
0
【摘 要】本文简单概述了单细胞蛋白，及单细胞蛋白在工业、农业、饲料等方面的应用；阐明了单细胞蛋白的开发和生产前景
【关键词】 单细胞蛋白 安全性 提取制备工艺 应用 发展前景
目 录
引言: 单细胞蛋白的营养价值极高，氨基酸的组成较为齐全，含有人体必需的8种氨基酸，而且生产效率高，生产原料来源广，可以工业化生产，它不仅需要的劳动力少，不受地区、季节和气候的限制，而且产量高，质量好。所生产的蛋白质等营养物质含量高，对人体无致病作用，味道好并且易消化吸收，对培养条件要求简单，生长繁殖迅速等。单细胞蛋白的生产过程也比较简单，目前有多种提取工艺。单细胞蛋白不仅能制成“人造肉”，供人们直接食用，还常作为食品添加剂，用以补充蛋白质或维生素、矿物质等。单细胞蛋白既可变废为宝，又可获得高层次的综合经济效益，解决环境污染问题。单细胞蛋白作为饲料蛋白，已被世界广泛应用。作为一种新型食品原料的问世，单细胞蛋白单细胞蛋白液受到都可接受性、安全性等问题。因为单细胞蛋白的核酸含量在4%～18%，食用过多的核酸可能会引起痛风等疾病。此外，单细胞蛋白作为一种食物，人们在习惯和心理上一时也难以接受。因此 1
研究单细胞蛋白的提取方法及发展方向是一个必要的问题。
内容：
《单细胞蛋白的提取方法及发展方向研究》
单细胞蛋白的概述
单细胞蛋白：英文名Single-Cell-Protein，简称SCP。是从人工培养的单细胞生物中获得的菌体蛋白质，又叫微生物蛋白，菌体蛋白。作为一种生物化工高新技术产品单细胞蛋白是由许多工农业废料及石油废料微生物菌体。因而，单细胞蛋白不是一种纯蛋白质，而是由蛋白质、脂肪、碳水化合物、核酸及不是蛋白质的含氮化合物、维生素和无机化合物等混合物组成的细胞质团。单细胞蛋白的特点：
第一，营养物质极为丰富。其中，蛋白质含量高达
40%～80%，（而作物中蛋白质含量最高的大豆仅达35％~45％），比大豆高10%～20%，比肉、鱼、奶酪高20%以上；从氨基酸的组成来看，单细胞蛋白中除含硫氨基酸不足外，其他氨基酸含量充足并保持良好的平衡。同时还含有多种维生素、碳水化合物、脂类、矿物质，以及丰富的酶类和生物活性物质，如辅酶A、辅酶Q、谷胱甘肽、麦角固醇等。
第二，原料来源广泛，可就地取材，廉价大量地解决原料问题。一般有以下几类：1.碳水化合物。2.烃类、石油、天然气及相关产品，如原油、柴油、甲烷、乙醇等；3.无机气体4.有机工农业废水（①农业废物、废水，如秸秆、蔗渣、甜菜渣、木屑等含纤维素的废料及农林产品的加工废水；②工业废物、废水，如食品、发酵工业中排出的含糖有机废水、亚硫酸纸浆废液等；）
第三，单细胞蛋白质生产周期短，效率高。如酵母菌在良好条件下每接种100千克，1天即可获得2500千克酵母，其生长繁殖速度约为大豆的1300倍，为动物生长的2000倍。微生物的生长速度世代周转迅速因此生产效率高。
第四，节约土地，可以完全工业化生产。生产不受季节气候的制约，易于人工控制，同时由于在大型发酵罐中立体式培养占地面积少。单细胞蛋白生产比农业生产需要的劳动力少，又不受地区、季节和气候条件的制约，可在占地有限的小设备上进行，不仅数量大，而且质量好，远远超过现有粮食品种的蛋白质。
第五，单细胞生物易诱变，比动、植物品种容易改良，因此可采用物理、化学、生物学方法定向诱变育种，获得蛋白质含量高、质量好、味美，并易于提取蛋白质的优良菌种。
第六，核酸含量高，细菌细胞中核酸含10%-18%。酵母（干基）6%-11%,肉只有2%。核酸过多会抑制动物的生长，若摄入过多的核酸，会造成血液中含酸量上升，大多数动物和人代谢利用核酸的能力有限，可导致体内尿酸积存。由于尿酸在生理的PH条件下是微溶的，它会在关节沉淀或析出结晶，造成痛风或风湿性关节炎；又由于在尿中含量大于其溶解度，会在泌尿系统中沉淀成结石。单细胞蛋白的安全性： 核酸问题：
核酸的组成成分嘌呤碱基，在动物体内会转变成尿酸，尿酸在无脊椎动物、鱼类、两栖类和许多哺乳动物体内会在尿酸酶的作用下继续转变成水溶性更大的尿囊素，因此饲料中即使有很高含量的嘌呤存在不会造成危害。人体内尿酸酶含量很低，嘌呤基本分解代谢物为低溶解度的尿酸摄入过多的嘌呤化合物则会使血浆和尿液中尿酸含量过高从而导致它在关节与软组织中积累和形成尿路结石。另外，细胞中有难于消化的类脂——细胞膜，影响蛋白质等营养物质的消化吸收。因此在使用时要限量使用。所以作为人类食品的SCP其摄入量必须加以控制。成年人每日摄入核酸量不得超过2g，食用的SCP也必须是除核酸产品。
食品安全对SCP的影响：
SCP作为饲料蛋白已被广泛的应用，但作为人类食品联合国蛋白质咨询组织对SCP的安全性评价做出了一系列的规定：生产菌株不是病原菌，不产生毒素；石油原料中多环芳香族烃含量低，农产品原料中重金属与农药的残留量不能超过标准；培养及产品处理过程中无污染，无溶剂残留；产品中应无病原菌、无活细胞、无原料和溶剂残留；产品必须进行小白鼠和大白鼠的毒性试验和两年的致癌实验，还要进行传代遗传、哺乳、致畸及变异应实验。这些试验通过后，还要安排
作人的临床试验，测定scp对人的可接受性和耐受性。可用于食品的scp生产的酵母菌主要有酿酒酵母、产朊假丝酵母和乳清酵母(脆壁克鲁维酵母）等。
单细胞蛋白的提取方法：
单细胞蛋白的生产要求：生产菌种繁殖速度快，菌体收量大；原料价格低，易得到或利用工农业废料；菌种营养要求底，培养方法简单；发酵时不易污染杂菌，分离回收容易；菌体蛋白含量高，氨基酸组成好，适口性好；菌体及蛋白无毒性、病原性及致癌性；不产生废水及其他污染；易于包装运输和储藏。
单细胞蛋白的生产步骤包括原料处理、发酵基质的调配、发酵条件的控制、菌体回收及分离、纯化等几个环节。发酵过程中温度的控制、氧的供应及热量的排放是生产中要注意的问题。饲用单细胞蛋白生产可采用固体发酵，使用单细胞蛋白生产采用液体发酵工艺，发酵结束后，收获的方法有离心分离和压滤法。菌体收获后必须洗涤数次，以尽量将培养基洗掉。藻类的培养则是在池内进行，并需要足够的光照，培养过程要经常搅拌以补充表面养分。单细胞蛋白的一般工艺流程：
通气 原料 —— 上清液
↓ ↓ ↑
菌种→种子扩大 →发酵罐培养 →培养液 → 分离 →菌体
↓ 动物饲料←干燥←洗涤或分解← ↓
↓
食品←干燥←纯化←蛋白质抽取←分离←水解
近几年主要的单细胞蛋白提取制备工艺技术及应用有：（1）菌糠单细胞蛋白饲料生产方法
（2）单细胞蛋白质作为鱼类和贝类饲料的用途（3）利用皂素生产废水发酵生产单细胞蛋白的方法（4）单细胞蛋白材料的用途（5）一种单细胞蛋白饲料的生产方法
（6）仅微溶于水或不溶于水的活性物质和单细胞蛋白质材料的混合 物的水分散体
（7）利用柑桔废渣生产单细胞蛋白(SCP)饲料的方法（8）利用提取甾体皂甙元的残渣生产单细胞蛋白的方法（9）一种单细胞蛋白质饲料及其加工工艺
（10）冷法絮凝提取味精废液中单细胞蛋白质的方法（11）单细胞蛋白和蔗糖的生产方法
（12）利用抗氨固氮菌生产富硒单细胞蛋白,维生素E和菌肥的方法（13）固态发酵生产单细胞蛋白（14）一种单细胞蛋白的生产方法（15）生产甜菜渣单细胞蛋白的新方法（16）利用啤酒废渣生产单细胞蛋白（17）粗淀粉一步法生产单细胞蛋白技术
（18）固态法单细胞蛋白(SCP)塔式发酵机（19）糟渣原料生产单细胞蛋白饲料技术（20）一种利用浓醪酒糟生产单细胞蛋白的方法（21）一种利用海洋酵母菌生产单细胞蛋白的工艺（22）利用废糖蜜生产单细胞蛋白饲料的方法
（23）用大豆乳清废水生产单细胞蛋白的复配酵母的制备方法（24）柑橘皮渣单细胞蛋白饲料生产技术
单细胞蛋白的应用：
一、SCP 在饲料中的应用
单细胞蛋白含有蛋白质、碳水化合物、无机盐、维生素等，其丰富的营养，可作为饲料的蛋白源，配制饲料可代替部分鱼粉。例如用假丝酵母及产朊酵母作为菌种，利用亚硫酸废液或石油生产酵母菌体，可用于牲畜饲料。用它喂养家禽、家畜，效果好、生长快，奶牛产奶多，鸡产蛋率增高，并能增强机体免疫力。据分析，酵母单细胞蛋白中蛋白质含量为45％－55％，比大豆高30％以上；细菌的单细胞蛋白中蛋白质的含量高达70％，比大豆高50％，比鱼粉高20％。因此，在各类饲料中加入单细胞蛋白添加剂，可以取得诸如使猪长得更快、牛产奶更多这样的效果。
二、SCP在食品加工中的应用：
SCP在食品加工中也有着重要作用，（1）可以增加谷类产品的营养价值。选用高赖氨酸含量的单细胞蛋白加到面包等谷物食品中可提高植物蛋白的生物价，也可提高谷物食品中的维生素。（2）它能
提高食品的物理性能，例如：经组织化处理的浓缩蛋白具有理想的咀嚼性、松脆性、在水中无分散性。把活性干酵母加入意大利烘饼中可提高其延薄性能，把食用酵母以1%～3%的比例加入肉制品中可提高肉与水及脂肪的结合能力。（3）它还能提高食品的风味，例如：酵母的浓缩蛋白质具有显著的鲜味，已被广泛作为饲料、肉汁等食品的增香剂。酵母质壁分离物可作为烘烤食品的增香剂。
三、SCP的其他应用：
由于SCP中维生素、矿物质含量丰富，因此常用于补充许多食物所需全部或部分的维生素和矿物质。以酵母菌和假丝酵母菌生产的SCP，可直接用作人的食品。从酵母菌体重可提取辅酶A、细胞色素C及维生素等药物，此外，SCP还可用于合成现稳和粘合剂。
单细胞蛋白的发展前景：
食品安全对单细胞蛋白生产的影响：
全世界对食品安全的重视也限制了SCP的发展。食品安全不仅表现在人的直接食品对饲料的原料的安全性也提出了要求。传统的以石油化工为原料为主要碳源（烃类、甲醇、乙醇、乙酸等）的SCP生产既有安全问题又受到石油短缺的影响。废弃物为原料的SCP粗放生产方式生产也存在着化学和有害物质的污染问题。原料的问世，都会产生可接受性、安全性等问题。单细胞蛋白也不例外。此外，单细胞蛋白作为一种食物，人们在习惯上一时也难以接受。但经过微生物学家的努力，这些问题会得到圆满解决。
单细胞蛋白的发展前景：
中国作为一个人口大国，人口众多不仅粮食趋于紧张，食物结构以植物蛋白为主，动物蛋白的摄入量与欧美各国相差悬殊，而且人民的食品结构中存在着严重的蛋白质供应不足。而世纪生物科技革命的主战场在大农业。开展新农业科技革命，应以生物工程为中心，改革传统农业，创建新型农业。微生物新型农业的开发是生物工程技术推动农业发展的主要体现。发展微生物新型农业，由植物、动物资源为主组成的“二维结构”传统农业，调整为植物种植业、动物养殖业和微生物发酵转化业的“三维结构”的新农业，这是一个产业结构健全、资源节约型农业；此外，白色农业是节土、节水型农业，能缓解传统农业“与人争地”、“与人争水”日益尖锐的矛盾。
微生物单细胞蛋白也更适合我国的国情，一但进入大规模的商品化生产，必将对缓解蛋白饲料紧张、促进养殖业的迅速发展、增强人民的体质发挥重要的作用，因此发展单细胞蛋白产业具有广阔开发前景。
我们每年有数千万吨的稻壳、棉籽壳、玉米芯等农业废弃物可以用来作为单细胞蛋白的生产原料。据有人测算，仅仅利用这些废弃物的２０％，就可形成年产１００万吨单细胞蛋白的生产能力，在工业生产的废渣废水中含有糖类和其他营养物质，从工厂排放后极易发生腐败，严重污染环境。利用这些废弃资源生产单细胞蛋白不仅可降低水的生物需氧量和化学需氧量，从而减轻环境污染。既可变废为宝，又可获得高层次的综合经济效益，解决环境污染问题。单细胞蛋白作
为饲料蛋白，已被世界广泛应用。许多国家单细胞蛋白的生产已具有+很大的规模，取得了丰硕成果。德国、美国、前苏联、加拿大等国早已用单细胞高活性生物饲料代替了鱼粉。
SCP单细胞蛋白的开发与生产一方面，微生物蛋白食品的开发可以缓解耕地减少、粮食紧缺的矛盾，另一方面，高蛋白的微生物蛋白食品的开发，也有利于改善人们的食品结构，满足我们既要吃饱、又要吃好的要求。不仅为解决人类食品和饲料问题开辟了新的途径，并且单细胞蛋白质研究发展的实验要比研究农作物或家畜的实验易于进行，而且在极短的时间内就可得到有价值的数据与结果，而人类自身也会直接从单细胞工业的发展中享受到巨大的利益。
一座占地不多，年产10万t单细胞蛋白的微生物工厂，能相当于11.9988×104 hm2耕地生产的大豆蛋白质，或是19.998×106 hm2原饲养牛羊生产的动物蛋白质。发展白色农业，可实现“人畜分粮”的目标，能极大地缓解粮食紧缺问题，白色农业的微生物饲料为畜牧业的发展提供保障。我国现有秸秆6亿多t，若其中2亿t秸秆通过微生物发酵工程转化为饲料，则可得到800亿kg饲料粮，约为目前我国年用饲料粮的1/2，真正实现“人畜分粮”。通过引进新物种，开发挖掘潜在生态位，增加多功能循环链，提高系统综合生产力。微生物肥料、食用菌和沼气菌的引入，填补了农业生态系统中的一些潜在生态位；微生物肥料和微生物农药的应用，可以减少能源、资源消耗，减轻环境污染，实现农业动植安全生产和生态环境保护；食用菌及沼气菌的引入食物链后具有多种功能，如可实现食品、饲料、燃料
和肥料的协调生产和利用，大大提高了有机废弃物的利用效率；微生物生态环保护剂可清除空气中韵有毒气体、水和土壤中的有害重金属及有害化学物质，是世界上正在发展的一项环保新产业。新型微生物农业的崛起，标志着我国新的农业科技革命的到来，它符合生态大农业的发展要求，必将使我国的农业发展走上一条高效和可持续发展之路。单细胞蛋白作为当前比较尖端的科技产品，还处于刚刚起步阶段，尤其在我国还不成熟，其发展前景是广阔的
参考文献：
⑴王尔冒 主编 食品营养与卫生 科学出版社出版，2004 ⑵周家春 食品行业新技术 化学工业出版社，2005 ⑶郭雪山，肖玫 单细胞蛋白的应用及其开发前景 中国食物与营养 2006，5，5 ⑷钱爱东 食品微生物学 中国农业出版社 2008，2、⑸魏瑶.单细胞蛋白[J] 四川粮油科技 2003，4
致谢词
美好的大学生活，伴着这篇论文的最后一个字结束。三年的时光，学习充盈了我知识的宝箱，生活丰盈了我稚嫩的羽翼，让我不断地成长。
这篇论文是我学习成果、无数教诲、关爱和帮助的结晶。很庆幸这些年来我遇到了许多恩师益友。感恩之情难以用语言量度，谨以最朴实的话语致以最崇高的敬意。
首先，我要感谢我的指导教师冷妍老师。不仅在论文的完成上给予我指导，还在三年的学习上、生活上还是工作上都给予了我无私的帮助和热心的照顾，让我在诸多方面都有所成长。其次，感谢我的专业课老师，你们传授给我的知识让
我在食品检测和营养学的理论和实践中不断地前进，是我成长的源泉，也是完成本论文的基础。同时，我要感谢辽阳职业技术学院所有教过我的老师，是他们传授给我方方面面的知识，拓宽了我的知识面，培养了我的功底。还要感谢我的各位朋友、同学、室友等能和相遇、相交、相知是人生的一大幸事。
最后，感谢我的家人，他们是我生命中永远的依靠和支持，他们无微不至的关怀，是我前进的动力；他们的殷殷希望，激发我不断前行。没有他们就没有我，我的点滴成就都来自他们。
本论文的完成远非终点，文中的不足和浅显之处则是我新的征程上一个个新的起点。我将继续前行！
第五篇：木本植物基因组DNA提取方法的对比研究开题报告
1.选题依据
1.1 论文题目及研究领域
1.1.1 论文题目: 木本植物基因组ＤＮＡ提取方法的对比研究 1.1.2 研究领域: 木本植物DNA的提取研究 1.2 论文研究的理论意义和应用价值
DNA是遗传信息的载体,是最重要的生物信息分子,是分子生物学研究的主要对象,因此DNA的提取也应是分子生物学实验技术中的最重要、最基本的操作，如不能有效的完成DNA提取方面的工作，那就根本谈不上进行分子生物学方面的实验。植物DNA的提取和纯化是植物基因工程研究的基础操作，实施分子标记，基因文库的构建，基因分离及遗传转化和鉴定等都是以提取DNA为前提。如何简捷高效地提取到纯净、合格的DNA分子，一直是植物生物学者关注的问题。
随着DNA分子标记技术和重组DNA技术的发展，制备完整、纯度较高的基因组DNA日益显得重要。我们在进行木本植物DNA水平遗传多样性研究时，首先遇到的问题是如何快速获得较完整、纯度较高的基因组DNA。由于植物细胞与动物细胞不同，具有一层坚硬的细胞壁，且含有较多的多糖、色素、脂质和多酚等物质，给植物DNA提取带来很多困难，特别是多糖和多酚类物质不易与DNA分开。相对于草本植物，多年生木本植物的次生代谢类物质含量更高，高质量的DNA提取难度更大[1]。
大多数植物DNA提取方法所提取得到的DNA粗提物中往往含有大量RNA、蛋白质、多糖、单宁和色素等杂质，这些杂质有时很难从DNA中除去，大多数蛋白质可通过酚-氯仿-异戊醇处理后变性、沉淀除去，绝大部分RNA可通过经RNase 处理后除去。但大多数木本植物富含多糖、多酚类物质，DNA常受到严重的多酚污染，造成DNA沉淀物难以溶解或溶液色深；多糖污染直接影响基因组DNA的限制性核酸内切酶的酶切效果。多酚类、多糖物质的污染会造成AFLP酶切连接等后续实验效果差，甚至后续PCR没有扩增产物[2]。在大多数木本植物基因组DNA的提取方法中，SDS法和CTAB法是目前最为常用的两种方法。
本试验以细胞生物学研究为基础，以如何获取高质量、高纯度DNA为目的，比较CTAB法和SDS法红豆杉和银杏基因组DNA的提取效果，对两种方法提取的DNA进行琼脂糖凝胶电泳分析和紫外吸收分析，分别对两种方法所提取的红豆杉和银杏基因组DNA的效率和质量进行分析，从中选出一种更适合木本植物基因组DNA的提取方法。
1.3 DNA提取研究概况和发展趋势
Avery在1944年的研究报告中写道：“当溶液中酒精的体积达到9/10时，有纤维状物质析出。如稍加搅拌，它就会象棉线在线轴上一样绕在硬棒上，溶液中的其它成份则呈颗粒状沉淀。溶解纤维状物质并重复数次，可提高其纯度。这一物质具有很强的生物学活性，初步实验证实，它很可能就是DNA（谁能想到！）”。对DNA分子的物理化学研究导致了现代生物学翻天覆地的革命，这更是Avery所没有想到。Fricdrich Miescher ,瑞士生物学家，有机化学家。1868年医学毕业以后，在著名的有机化学家Hoppe-Seyle的实验室以脓细胞为材料，研究淋巴细胞的组成。1869年他从脓细胞的细胞核中分离出含有大量磷的“核素”即是DNA,是人类第一次真正提取的的DNA。
年代初,DNA被证明是所有生物最主要的遗传物质。随着生物化学、分子生物学、遗传学的发展,基因工程和生物技术的创立,DNA的有关技术也得到了飞速发展。DNA提取方法成了这些研究和应用中最重要的技术之一。目前已经建立了用于各种不同目的的DNA提取方法,这些方法也被用于生物学,尤其是生物工程的各个方面。但是,对于不同的植物样品,由于其组织成分的差异,采取的DNA 提取方法不完全一致。.文献综述
2.1 南方红豆杉概况
红豆杉属(Taxus L．)植物属红豆杉科，为常绿乔木或灌木。红豆杉(Taxus mairei)又名紫杉、赤柏松，是第三世纪孑遗植物，被称为植物王国里的“活化石”，因其资源稀少，被列为世界珍稀树种加以保护，在我国为珍稀濒危物种。在几千万年的历史长河中，红豆杉是历经强度阳光、低薄空气、高温干旱、严寒冰川等地球气候巨变的考验，演化遗留下来的物种。其树体极大的适应存活能力所具有的各种生物石碱、化合物，既是本身生存的需要，也是现在被人类认识和开发的珍稀贵重药物。南方红豆杉广泛分布福建、浙江、安徽、江西、湖南、湖北、四川等省，生于海拔1300米以下，喜湿润的微酸性粘质土壤，多生长在山的中下部及沟谷旁，常与刺栲、丝栗栲、甜槠、木荷、杜英、枫香、杉木等混生。2.2 南方红豆杉的化学组分
根据国家标准共测定我国南方红豆杉的平均化学指标分别为(10项): 原料含水率7.94﹪、冷水抽提物0.385﹪、热水抽提物0.765 ﹪、乙醚抽出物2.855﹪、NAOH抽出物12.17 ﹪、苯醇抽出物1.391 ﹪、木素含量27.01 ﹪、半纤维素含量11.78 ﹪、综纤维素含量65.5 ﹪、PH值5.33[3]。2.3 红豆杉主要价值
红豆杉因其次生代谢物质紫杉醇良好的抗癌效果而受到人类的关注，从红豆杉树皮和嫩叶中提取的紫杉醇，是继阿霉素和顺铂之后被公认最好的广普、强活性天然抗癌药。红豆杉除了重要的药用价值以外，其独特的外观造型、四季常青的鲜艳绿色，又是不可多得的绿化树种，具有很高的观赏价值。其次红豆杉属植物木材由于其优良品质还是不可多得的木材树种。2.4 银杏概况
银杏（Ginkgo Liloba L.）俗称白果，公孙树。最早出现于3.45亿年前的石炭纪，曾广泛分布于北半球的欧、亚、美洲，与动物界的恐龙一样称王称霸于世，至50万年前，发生了第四纪冰川运动，地球突然变冷，绝大多数银杏类植物濒于绝种，唯有我国自然条件优越，才奇迹般的保存下来。所以，科学家称它为“活化石”，“植物界的熊猫”。2.5 银杏主要价值
银杏叶也具有重要的药用价值。到目前为止已知其化学成分的银杏叶提取物多达160余种。主要有黄酮类、萜类、酚类、生物碱、聚异戊烯、奎宁酸、亚油酸、蟒草酸、抗坏血酸、a-已烯醛、白果醇、白果酮等。中国科学院植物所等单位于60年代用银杏叶研制出舒血宁针剂，经试验对冠心病、心绞痛、脑血管疾病有一定的疗效。同时，银杏叶也可以作为农药使用[4]。
3.实验原理
2.1 CTAB法提取原理
CTAB(cetyltriethyammoniumb romide,十六烷基三甲基溴化铵)法是一种快速简便提取植物基因组DNA的方法：先将新鲜的叶片放在液氮中研磨，破碎其细胞，然后加入CTAB分离缓冲液。再经氯仿-异戊醇抽体除去蛋白质，最后得到DNA。
2.2 SDS法提取原理
SDS法(Sodium dodecyl sulfate，十二烷基磺酸钠)先将新鲜的叶片在液氮中研磨破碎其细胞壁，然后加入SDS使其细胞膜破裂。并同时将蛋白质、多糖等杂质同核酸分开。加入KAc可使SDS—蛋白质复合物转变为更小的钾盐形式，使沉淀更加完全[5]。
2.3 紫外吸收法分析原理
组成核酸分子的碱基，均具有一定的吸收紫外线特性，最大吸收值在波长为25038 ［3］丁晓东，吕柳新.从顽拗植物荔枝中提取基因组DNA技术的研究［J］.应用与环境生物学报.2000，6(2)：142370.［5］王景雪, 孙毅, 高武军.-种简便实用的植物总DNA提取方法[J].山西大学学报，2000，23(3): 27139.［8］黄丰, 周联等.植物中药材总DNA提取方法比较[J].中药新药与临床理,1999 ,10(1): 1814.［11］李思光，罗玉萍, 陈万秋等.猕猴桃基因组DNA的提取及其RAPD扩增研究[J].南昌大学学报，2001，25(3):264–268.
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