第一篇：单克隆抗体技术个人总结
单克隆抗体技术个人总结
制备单克隆抗体
1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临床疾病的诊、防、治提供了新的工具。
制备单克隆抗体包括动物免疫、细胞融合、选择杂交瘤、检测抗体、杂交瘤细胞的克隆化、冻存以及单克隆抗体的大量生产，要经过几个月的一系列实验步骤，下面按照制备单克隆抗体的流程顺序，逐一介绍其实验方法。
一、细胞融合前准备
(一)免疫方案
选择合适的免疫方案对于细胞融合杂交的成功，获得高质量的McAb至关重要。一般要在融合前两个月左右确立免疫方案开始初次免疫，免疫方案应根据抗原的特性不同而定。
1.颗粒性抗原免疫性较强，不加佐剂就可获得很好的免疫效果。下面以细胞性抗原为例的免疫方案:
初次免疫1×10７／0.5ml ip(腹腔内注射)
↓ 2～3周后
第二次免疫1×10７／0.5ml ip
↓ 3周后
加强免疫(融合前三天)1×10７／0.5ml ip或iv(静脉内注射)↓
取脾融合2.可溶性抗原免疫原性弱，一般要加佐剂，常用佐剂：福氏完全佐剂，福氏不完全佐剂。要求抗原和佐剂等体积混合在一起，研磨成油包水的乳糜状，放一滴在水面上不易马上扩散呈小滴状表明已达到油包水的状态。商品化福氏完全佐剂在使用前须振摇，使沉淀的分枝杆菌充分混匀。
初次免疫Ag
～50μg 加福氏完全佐剂皮下多点注射
│(一般0.8～1ml 0.2ml／点)
↓3周后
第二次免疫 剂量同上，加福氏不完全佐剂皮下或ip
│(ip剂量不宜超过0.5ml)
↓3周后
第三次免疫 剂量同上，不加佐剂，ip
│(5～7天后采血测其效价，检测免疫效果)
↓2～3周后
加强免疫，剂量50～500μg
宜，ip或iv
↓3天后
取脾融合目前，用于可溶性抗原(特别是一些弱抗原)的免疫方案也不断有所更新，如①将可溶性抗原颗粒化或固相化，一方面增强了抗原的免疫原性，另一方面可降低抗原的使用量。②改变抗原注入的途径，基础免疫可直接采用脾内注射。③使用细胞因子作为佐剂，提高机体的 1
免疫应答水平，促进免疫细胞对抗原反应性。
(二)饲养细胞
在制备单克隆抗体过程中，许多环节需要加饲养细胞，如：在杂交瘤细胞筛选、克隆化和扩大培养过程中，加入饲养细胞是十分必要的。常用的饲养细胞有：小鼠腹腔巨噬细胞(较为常用)、小鼠脾脏细胞或小鼠胸腺细胞，也有人用小鼠成纤维细胞系3T3经放射线照射后作为饲养细胞，使用比较方便，照射后可放入液氮罐长期保存，随用随复苏。
小鼠腹腔巨噬细胞的制备
小鼠采用与免疫小鼠相同的品系，常用BaLb／c小鼠6～10周龄
↓
拉颈处死 浸泡于75％酒精，消毒3～5分钟
↓
用无菌剪刀剪开皮肤，暴露腹膜
↓
用无菌注射器注入6～8ml培养液
↓
反复冲洗，吸出冲洗液
↓
放入10ml离心管，1200转／分离心5～6分钟
↓
用20％小牛血清(NCS)或胎牛血清(FCS)的培养液混悬，调整细胞数1× 0５／ml
↓
加入96孔板，100μl／孔
↓
放入37℃ CO2孵箱培养
一般饲养细胞在融合前一天制备，一只小鼠可获得5～8×106腹腔巨噬细胞，若用小鼠胸腺细胞作为饲养细胞时，细胞浓度为5×106／ml，小鼠脾细胞为1×106／ml，小鼠的成纤维细胞(3T3)1×105／ml，均为100μl／孔。
(三)骨髓瘤细胞
骨髓瘤细胞系应和免疫动物属于同一品系，这样杂交融合率高，也便于接种杂交瘤细胞在同一品系小鼠腹腔内产生大量 McAb
常用骨髓瘤细胞系有：NS1、SP2／0、X63 Ag8.653等。
骨髓瘤细胞的培养适合于一般的培养液，如RPMI1640，DMEM培养基。小牛血清的浓度一般在10～20％，细胞的最大密度不得超10６／ml，一般扩大培养以1∶10稀释传代，每3～5天传代一次。细胞的倍增时间为16～20小时，上述三株骨髓瘤细胞系均为悬浮或轻微贴壁生长，只用弯头滴管轻轻吹打即可悬起细胞。
一般在准备融合前的两周就应开始复苏骨髓瘤细胞，为确保该细胞对HAT的敏感性，每3～6月应用8～AG(8氮杂鸟嘌呤)筛选一次，以防止细胞的突变。
保证骨髓瘤细胞处于对数生长期，良好的形态，活细胞计数高于95％，也是决定细胞融合的关键。
(四)免疫脾细胞指的是处于免疫状态脾脏中B淋巴母细胞棗浆母细胞。一般取最后一次加强免疫3天以后的脾脏，制备成细胞悬液，由于此时B淋巴母细胞比例较大，融合的成功率较高。
脾细胞悬液的制备：在无菌条件下取出脾脏，用不完全的培养液洗一次，置平皿中不锈钢筛网上，用注射器针芯研磨成细胞悬液后计数。一般免疫后脾脏体积约是正常鼠脾脏体积的２倍，细胞数为２×10８左右。
二、细胞融合，选择杂交瘤
(一)细胞融合流程
(1)取对数生长的骨髓瘤细胞SP2／0，1000rpm离心5分钟，弃上清，用不完全培养液混悬细胞后计数，取所需的细胞数，用不完全培养液洗涤2次。
(2)同时制备免疫脾细胞悬液，用不完全培养液洗涤2次。
(3)将骨髓瘤细胞与脾细胞按1∶10或1∶5的比例混合在一起，在50ml
料离心管内用不完全培养液洗1次，1200rpm,8分钟。
(4)弃上清，用滴管吸净残留液体，以免影响PEG的浓度。
(5)轻轻弹击离心管底，使细胞沉淀略加松动。
(6)在室温下融合:
① 30秒内加入预热的1ml45％PEG(Merek,分子量4000)含5％DMSO，边加边搅拌。② 作用90秒钟，若冬天室温较低时可延长至120秒钟。
③ 加预热的不完全培养液，终止PEG作用，每隔２分钟分别加入
1ml，2ml，3ml，4ml，5ml和10ml。
(7)离心，800rpm，6分钟。
(8)弃上清，先用6ml左右20％小牛血清RPMI1640轻轻混悬，切记不能用力吹打，以免使融合在一起的细胞散开。
(9)根据所用96孔培养板的数量，补加完全培养液，10ml一块96孔板。
(10)将融合后细胞悬液加入含有饲养细胞的96孔板，100μl／孔，37℃、5％CO2孵箱培养。
一般一块96孔板含有1×
107脾细胞。
(二)HAT选择杂交瘤
应用HAT 选择培养液筛选杂交瘤细胞的原理已在研究生专题讲座第六专题中已经提到，这里主要介绍加HAT选择培养的时间和浓度。
一般在融合24小时后，加HAT选择培养液。HT和HAT均有商品化试剂50×贮存，用时1ml加入50ml20％小牛血清完全培养液中。
因为在培养板内已加入饲养细胞、融合后的细胞，200μl／孔。所以在加选择培养液时应加3倍量的HAT。我们认为，融合后最初补加的量可用全量的2／3进行选择，可得到满意的筛选结果。
50×HAT
H: 5×10-3M
A: 2×10-5M
T: 8×10-4M
一般选择HAT选择培养液维持培养两周后，改用HT培养液，再维持培养两周，改用一般培养液。
三、抗体的检测
筛选杂交瘤细胞通过选择性培养而获得杂交细胞系中，仅少数能分泌针对免疫原的特异性抗体。一般在杂交瘤细胞布满孔底1／10面积时，即可开始检测特异性抗体，筛选出所需要的杂交瘤细胞系。
检测抗体的方法应根据抗原的性质、抗体的类型不同，选择不同的筛选方法，一般以快
速、简便、特异、敏感的方法为原则。
常用的方法有:
1.ELISA用于可溶性抗原(蛋白质)、细胞和病毒等McAb的检测。
2.RIA用于可溶性抗原、细胞McAb的检测。
FACS(荧光激活细胞分类仪)用于检查细胞表面抗原的McAb检测。
4.IFA用于细胞和病毒McAb的检测。
上述方法均为一般实验室的常规方法，故在此不介绍具体的实验过程。
可靠的筛选方法必须在融合前建立，避免由于方法不当贻误整个筛选时机。
四、杂交瘤的克隆化和冻存
克隆化一般是指将抗体阳性孔进行克隆化。犚r为经过HAT筛选后的杂交瘤克隆不能保证一个孔内只有一个克隆。在实际工作中，可能会有数个甚至更多的克隆，可能包括抗体分泌细胞、抗体非分泌细胞；所需要的抗体(特异性抗体)分泌细胞和其它无关抗体分泌细胞。要想将这些细胞彼此分开，就需要克隆化。克隆化的原则是，对于检测抗体阳性的杂交克隆应尽早进行克隆化，否则抗体分泌的细胞会被抗体非分泌的细胞所抑制，因为抗体非分泌细胞的生长速度比抗体分泌的细胞生长速度快，二者竞争的结果会使抗体分泌的细胞丢失。即使克隆化过的杂交瘤细胞也需要定期的再克隆，以防止杂交瘤细胞的突变或染色体丢失，从而丧失产生抗体的能力。
(一)克隆化方案
用克隆化的方法很多，而最常用就是有限稀释和软琼脂平板法。
1.有限稀释法的程序
① 制备饲养细胞悬液(同融合前准备)
② 阳性孔细胞的计数，并调细胞数在1～5×10３／ml
③ 取130个细胞放入6.5ml含饲养细胞完全培养液，即20个细胞／ml，100μl／孔加
A、B、C三排为每孔2个细胞。余下2.9ml细胞悬液补加2.9ml含饲养细胞的完全培养液,细胞数为10个／ml，100μl／孔加D、E、F三排，为每孔1个细胞。余下2.2ml细胞悬液补加2.2ml含饲养细胞的完全培养液，细胞数5个／ml，100μl／孔，加G、H
排，为每孔0.5个细胞。
④ 培养4～5天后，在倒置显微镜上可见到小的细胞克隆，补加完全培养液200μl／孔。
⑤ 第8～9天时，肉眼可见细胞克隆，及时进行抗体检测。
注:初次克隆化的杂交瘤细胞需要在完全培养液中加HT。
2.软琼脂法
① 软琼脂的配制
含20％FCS(小牛血清)的2倍浓缩的RPMI1640
1％琼脂水溶液：高压灭菌，42℃预热。
0.5％琼脂：由
份1％琼脂加1份含20％小牛血清的2倍浓缩的RPMI1640配制而成。置42℃保温。
② 用上述0.5％琼脂液(含有饲养细胞)15ml倾注于直径为9cm的平皿中，在室温中待凝固后作为基底层备用。
③ 按100／ml，500／ml或5000／ml等浓度配制需克隆的细胞悬液。
④ 1ml 0.5％琼脂液(42℃预热)在室温中分别与1ml不同浓度的细胞悬液相混合。⑤ 混匀后立即倾注于琼脂基底层上，在室温中10分钟，使其凝固，孵育于 37℃，5％CO2孵箱中。
⑥ 4～5天后即可见针尖大小白色克隆，7～10天后，直接移种至含饲养细胞的24孔
板中进行培养。
⑦ 检测抗体，扩大培养，必要时再克隆化。
(二)杂交瘤细胞的冻存
及时冻存原始孔的杂交瘤细胞、每次克隆化得到的亚克隆细胞是十分重要的。因为在没有建立一个稳定分泌抗体的细胞系的时候，细胞的培养过程中随时可能发生细胞的污染、分泌抗体能力的丧失等等。如果没有原始细胞的冻存，则因为上述的意外而全功尽弃。
杂交瘤细胞的冻存方法同其他细胞系的冻存方法一样，原则上细胞应在每支安瓿含1×106以上，但对原始孔的杂交瘤细胞可以因培养环境不同而改变，在24孔培养板中培养，当长满孔底时，一孔就可以冻一支安瓿。
细胞冻存液:
50％小牛血清
40％不完全培养液
10％ DMSO(二甲亚砜)
冻存液最好预冷，操作动作轻柔、迅速。冻存时从室温可立即降到0℃，再降温时一般按每分钟降温2～3℃，待降至-70℃可放入液氮中。或细胞管降至0℃ 后放-70℃超低温冰箱，次日转入液氮中。也可以用细胞冻存装置进行冻存。冻存细胞要定期复苏，检查细胞的活性和分泌抗体的稳定性，在液氮中细胞可保存数年或更长时间。
五、单克隆抗体的大量生产
大量生产单克隆抗体的方法主要有两种：
1.体外使用旋转培养管大量培养杂交瘤细胞，从上清中获取单克隆抗体。但此方法产量低，一般培养液含量为10～60μg／ml，如果大量生产，费用较高。
2.体内接种杂交瘤细胞，制备腹水或血清。
① 实体瘤法 对数生长期的杂交瘤细胞按1～3×107／ml接种于小鼠背部皮下，每处注射
.2 ml, 共2～4点。待肿瘤达到一定大小后(一般10～20天)则可采血，从血清中获得单克隆抗体含量可达到1-10mg／ml。但采血量有限。
② 腹水的制备 常规是先腹腔注射0.5mlPristane(降植烷)或液体石腊于BaLb／c鼠，1～2周后腹腔注射1×106个杂交瘤细胞，接种细胞7～10天后可产生腹水，密切观察动物的健康状况与腹水征象，待腹水尽可能多，而小鼠频于死亡之前，处死小鼠，用滴管将腹水吸入试管中，一般一只小鼠可获1～10ml腹水。也可用注射器抽取腹水，可反复收集数次。腹水中单克隆抗体含量可达5-20mg/ml，这是目前最常用的方法，还可将腹水中细胞冻存起来，复苏后转种小鼠腹腔则产生腹水快、量多。
六、单克隆抗体的鉴定
对制备的McAb进行系统的鉴定是十分必要的。应对其做如下方面的鉴定:
.抗体特异性的鉴定：除用免疫原(抗原)进行抗体的检测外，还应用与其抗原成分相关的其它抗原进行交叉试验，方法可用ELISA、IFA法。例如①制备抗黑色素瘤细胞的McAb，除用黑色素瘤细胞反应外，还应用其它脏器的肿瘤细胞和正常细胞进行交叉反应，以便挑选肿瘤特异性或肿瘤相关抗原的单克隆抗体。② 制备抗重组的细胞因子的单克隆抗体，应首先考虑是否与表达菌株的蛋白有交叉反应，其次是与其它细胞因子间有无交叉。
2.McAb的Ig类与亚类的鉴定：一般在用酶标或荧光素标记的第二抗体进行筛选时，已经基本上确定了抗体的Ig类型。如果用的是酶标或荧光素标记的兔抗鼠IgG或IgM，则检测出来的抗体一般是IgG类或IgM类。至于亚类则需要用标准抗亚类血清系统作双扩或夹心ELISA来确定McAb的亚类。在作双扩试验时，如加入适量的PEG(3％)，将有利于沉
淀线的形成。
3.McAb中和活性的鉴定：用动物的或细胞的保护实验来确定McAb的生物学活性。例如如果确定抗病毒McAb的中和活性，则可用抗体和病毒同时接种于易感的动物或敏感的细胞，来观察动物或细胞是否得到抗体的保护。
4.McAb识别抗原表位的鉴定：用竞争结合试验、测相加指数的方法，测定McAb所识别抗原位点，来确定McAb
识别的表位是否相同。
5.McAb亲和力的鉴定：用ELISA或RIA竞争结合试验来确定McAb与相应抗原结合的亲和力。
七、影响因素、失败原因分析
由于制备McAb的实验周期长，环节多，所以影响因素就比较多，稍不注意就会造成失败。
其主要失败原因和影响因素有:
1.污染：包括细菌、霉菌和支原体的污染。这是杂交瘤工作中最辣手的问题。一旦发现有霉菌污染就应及早将污染板弃之，以免污染整个培养环境。支原体的污染主要来源于牛血清，此外，其它添加剂、实验室工作人员及环境也可能造成支原体污染。在有条件的实验室，要对每一批小牛血清和长期传代培养的细胞系进行支原体的检查，查出污染源应及时采取措施处理。对于污染的杂交瘤细胞可以采取生物学的过滤方法，将污染的杂交瘤细胞注射于BALB／c小鼠的腹腔，待长出腹水或实体瘤时，犖^菌取出分离杂交瘤细胞，一般可除去支原体污染。
2.融合后杂交瘤不生长：在保证融合技术没有问题的前提下主要考虑下列因素①PEG有毒性或作用时间过长。②牛血清的质量太差，用前没有进行严格的筛选。③骨髓瘤细胞污染了支原体。④HAT有问题，主要是A含量过高或HT含量不足。
3.杂交瘤细胞不分泌抗体或停止分泌抗体
① 融合后有细胞生长，但无抗体产生，可能是HAT中A失效或骨髓瘤细胞发生突变，变成A抵抗细胞所致。
② 有可能是免疫原抗原性弱，免疫效果不好。
③ 对于原分泌抗体的杂交瘤细胞变为阴性，可能是细胞支原体污染，或非抗体分泌细胞克隆竞争性生长，从而抑制了抗体分泌细胞的生长。也可能发生染色体丢失。Goding91982)曾提出“三要”“三不要”，可能是防止抗体停止分泌的有效措施。
三要:
要大量保持和补充液氮冻存的细胞原管。
要应用倒置显微镜经常检查细胞的生长状况。
要定期进行再克隆。
三不要:
不要让细胞“过度生长”。因为非分泌的杂交瘤细胞将成为优势，压倒分泌抗体的杂交瘤细胞。
不要让培养物不加检查地任其连续培养几周或几个月。
不要不经克隆化而使杂交瘤在机体内以肿瘤生长形式连续传好几代。
.杂交瘤细胞难以克隆化
可能与小牛血清质量、杂交瘤细胞的活性状态有关，或由于细胞有支原体污染，使克隆化难以成功。若是融合后的早期克隆化，应在培养液加HT。
第二篇：单克隆抗体生产的杂交瘤技术
Hybridoma Technology for the Generation of Monoclonal Antibodies(mAbs)单克隆抗体生成的杂交瘤技术 Abstract 1 Introduction 2 Materials
2.1 Preparation of splenocytes 2.1 脾细胞制备 spleens from immunized mice 免疫小鼠的脾脏 RPMI-1640 medium(Serum-free cell freezing medium)无血清细胞冻存培养基 无血清细胞冻存培养基 3 Petri dishes 有盖培养皿 Sterile surgical instruments,including microdissecting scissors and forceps,for collecting animal samples 用于收集动物样品的无菌手术器械，包括显微解剖剪和钳子，5 sterile microscope glass slide with frosted ends 磨砂的的无菌显微玻片 6 15-ml conical tubes 15-ml 锥形瓶
2.2 Preparation of myeloma cells as the fusion partner 作为融合头（融合标签）的骨髓瘤细胞的制备 2.3 cell fusion 细胞融合
2.4 hybridoma screening by FACS 2.5 hybridoma screening by ELISA 通过ELISA进行杂交瘤筛选 2.6 hybridoma screening by IHC 2.7 hybridoma subcloning 2.8 hybridoma cryopreservation 低温保存杂交瘤细胞 2.9 antibody isotyping 抗体同型
2.10 thawing and growth of hybridoma cells 杂交瘤细胞的融化和生长methods 3.1 preparation of splenocytes from the immunized mouse 来自免疫鼠的脾细胞的制备 3.2 preparation of myeloma cells 骨髓瘤细胞的制备 3.3 cell fusion 细胞融合
3.4 hybridoma screening using flow cytometry 通过流式细胞仪进行杂交瘤筛选 3.5 hybridoma screening by ELISA 通过ELISA进行杂交瘤筛选 3.6 hybridoma screening by IHC 通过免疫组化进行杂交瘤筛选 3.7 hybridoma subcloning 杂交瘤亚克隆
3.8 hybridoma cryopreservation 杂交瘤低温保存 3.9 antibody isotyping 抗体同型
3.10 Thawing and growth of hybridoma cells 杂交瘤细胞的融化和生长 4 小记 参考文献
第三篇：个人技术总结
2005年个人技术总结
繁忙的一年就要结束了，总结这一年工作感觉收获颇丰，学到了很多新知识并且在实际工作中都得以应用。
今年上半年1~6月份在牡绥线负责初测和定测的深孔钻探技术管理工作，说实话对于深孔钻探管理还是第一次，有很多东西也不太明白，甚至不懂。在高级钻探技师的帮助和指导下，虚心学习，认真请教，不懂的地方及时请教很快掌握基础知识和要领，很快就进入了角色，对深孔钻探进行管理。在管理过程中遇到问题及时请教及时总结，避免走弯路使钻探工作顺利进行。代马沟（磨刀石）隧道共计有30个钻孔，最深的288.0米，最浅的孔只有30.0米。为了保证在工期内完成，我根据各单位钻机情况和钻探技术水平合理安排钻孔，尽最大能力的发挥出各自的优势，以最快的速度和质量完成任务。通过这半年的学习和实践使我又学到了许多书本上学不到的知识，更加完善了自己，为今后的工作奠定了坚实的基础。
下半年受分院的指派被借调到地路处参加沪昆线地质勘察管理工作，主要负责深孔钻探的管理和指导工作。这些钻孔地处高山峻岭之中，最大孔深达765米，一般孔身在150~200米，分布在全段150千米范围之内，地层主要以板岩 花岗岩为主，板岩的产状比较陡立，在钻探过程中很容易跑偏造成孔斜，也容易发生孔内事故，甚至影响工期。根据这些情况和特性，及时与钻探负责人及钻探技术人员沟通共同研究预防措施，提出建议，完善施工预案，使钻探工作得以顺利进行。
工作中严格要求认真检查发现问题及时纠正，不放过任何不符合规程 规范的死角。每天翻山越岭奔波在各工点之间检查与指导，深受各单位的欢迎。
这半年来将上半年所学到和掌握的深孔知识得到了充分应用和发挥，为今后的工作奠定了坚实的基础。
在管理深孔钻探的同时还负责浅孔钻探的巡视工作，这些钻孔的地层分别以石灰岩和花岗岩为主，石灰岩地区溶洞很发育，直径也较大，对工程的影响很大，如果在钻探时不能提供准确的地质资料就会埋下祸根，造成很大的损失。所以在巡视中认真检查严格把关坚持原则不放过任何不符合要求的钻孔，一经发现有质量问题绝不放过，及时采取补救措施或重干。
通过这一段时间的工作又学到了很多知识进一步丰富了自我，同时也得到了认可。受到了项目部及各委外单位的好评。
今后，还需要加强学习不断完善自我，发挥出更大的作用。
XXX地质队
XX
2005年12月20日
第四篇：个人技术总结
个人技术工作总结
本人从事工程项目施工管理16年，现结合工作实际，总结下园林植物种植工程质量控制要点 ：
1、植物种植点放样必须符合设计要求，并标明定点位置，树种名称、规格；
2、乔木土球挖掘规格
土球直径（cm）按胸高直径的8倍，土球厚度按胸高直径7倍；
3、灌木土球挖掘规格
土球直径（cm）按冠径的80%，土球厚度按冠径60%；
4、竹类土台挖掘规格
（1）必须选择2年生的边缘竹子为竹母；
（2）近距离移植必须多带宿土，来去鞭可适当放小，但地下鞭必须带有隐芽，否则就不发笋，延误竹林的满园；
5、树木种植穴（或槽—指散生竹）规格，必须符合设计要求
坑（穴）的直径大于土球或裸根苗根系约40CM，深度同土球或裸根系的直径，但必须松翻底土10CM以上，坑（穴）上下垂直，另外高燥砂性土地树穴宜稍深，低洼粘土地可稍浅，树穴提前2-3天开挖，以日光晒穴；
6、树木土球的包扎
土球的包扎常用草绳包扎，采用橘子瓣、五角形、铜线形皆可；但必须做到牢固、不露根、不掉土、确保土球不破碎、不脱绑；对名贵大树的包扎，除了用草缠绕，还必
须用细麻绳子等加固包扎；
7、树木挖掘
（1）挖掘裸根树木一定要用锐器，直径3CM以上的根要用锯锯断；伤口务必齐整；细根可用剪枝剪剪断，不得强拉或劈断，尽量保护毛细根；
（2）挖掘带土球树木，用锐利铁锹，保证不使土球松散，在整修土球时必须先扎腰箍；
8、树木运输前的修剪
（1）修剪可在树木挖掘前或后进行皆可，但大树必须在挖掘前修去一部分非留枝；
（2）修剪强度要根据树木的生物学特性、不同季节而定，以保证良好的姿态为前提来确定修剪量；（3）树木修剪要符合设计要求；
9、树木的装运
装运时应做到：轻抬、轻卸、轻装、轻放严禁拖拉，保证土球不破碎根盘无擦伤、无撕裂、不伤干、不折冠，严禁提拉主干装卸带土球树木；不得损伤竹竿和竹鞭之间的鞭芽；
10、树木种植时的修剪
（1）种植前应对苗木根系、树冠进行修剪，必须将劈裂、病虫、过长的根系以及徒长、过密、平行的枝条剪除，确保树木良好的自然姿态；
（2）剪口（或锯口）大于2CM的，必须进行消毒防腐处理；
（3）行道树定干高度宜在3M，香樟可定在2.5M以上，第一分枝点以下侧枝全部剪除，分枝点以上枝条酌情疏剪或短截；
（4）高大落叶乔木应保留原有树形，适当疏剪，保留的主侧枝应在健壮芽上短截，剪去1/5—1/3枝条；
（5）常绿针叶树不宜修剪，只剪去病虫枝、枯死枝、衰弱枝、过密枝与轮生枝、下垂枝和机械磨损枝；
（6）常绿阔叶树基本保证树形，收缩树冠，正常季节种植疏剪树冠总量1/3—3/5，保留主骨架，截去外围枝条，疏稀树冠内膛枝，摘除大部分树叶；
（7）花灌木以疏剪老枝为主，短截为辅；绿篱、球类修剪必须整齐一致，线条挺拔，造型美观，切口平整，园艺效果好；
11、树木的种植
树木种植要做到：“四随”即“随挖、随运、随种、随管”，如遇恶劣天气，必须采取措施保护树木土球；
（1）进场苗木必须当天种植完毕，否则必须做好假植处理；
（2）树木定向及排列；
树木种植时应选择树冠丰满完整、生长好、姿态美，面朝向主要视线；孤植树木的冠幅应完整；丛植树木将冠幅饱满的一面朝外，并做到前低后高；藤本植物应栽在建筑物或棚架基部，并将枝蔓固定在墙面或支架上；
（3）种植深度
种植深度应保证在土壤下沉后，根茎和地面等高或略高；竹类应较原来的深度加深5—10CM，四周围紧，培土捣实，勿伤鞭芽；
（4）土球包装物、培土、浇水
1）土球包装物，必须自下而上取下包装物，泥球如松散，底下包装物可剪断不取出；
2）填土达到土球深度2/3时，初步覆土夯实，浇足第一次水，待水份渗透后继续填土至地面平行，再浇第二次水，然后再填好种植土；
（5）树木垂直度、支撑、和绕杆
1）种植时应注意树干垂直不弯斜，注意树体重心的稳定；
2）支撑应因树设桩，（十字架撑、扁担撑、三角撑、单柱撑皆可）；
3）支撑时严禁将竹木桩打穿土球或损伤根盘；
4）支撑高度，必须控制在树主干高的1/2；
5）单支撑必须立于盛行风向一面，扎缚必须用软性物垫衬，还必须做到牢固、整齐、美观；
6）乔木干径在5CM以上的主干和一、二级主枝，必须进行绕杆，绕干的高度视树种不同而不同，必须用草绳或麻片等软性材料密密缠绕，必须做到牢固、整齐、美观；
（6）乔灌木定植数量
乔木、大灌木的种植数量必须符合设计要求。
二○一二年九月
第五篇：个人技术总结
个人专业技术总结
工作单位：中交二公局第四工程有限公司作者：阳晓明
2017年5月
个人工作技术总结
本人阳晓明，于2007年7月进入中交二公局四公司工作，2011年11月受聘工程师职称。期间先后在四川成绵乐铁路6标二分部、青海花久10标、西藏林拉5标，河南机西高速二期1标等项目担任工程部部长、副总工，工区长等职务，从事项目现场施工管理、工程变更管理、安全质量技术管理等工作。目前担任郑州机西高速二期1标的项目副总工，主要在分管项目大型交叉施工以及特殊结构的技术方案制定，工程技术质量管理以及变更等工作。在担任工程师期间，我认真履行自己的职责，突出技术管理的重要性，以提高技术干部队伍素质为重点，以强化管理为手段，抓好项目技术质量管理工作，同时不断加强学习，在过程中不断提高自己的业务水平，努力创新，积极应用四新技术提高生产效率，降低成本，取得了良好的效果。
一、总结经验、开拓创新
担任工程师这6年来，我先后参加过高速铁路、高原高速公路、平原高速公路的建设，期间主持过高铁大跨径跨河道的现浇梁施工，跨越既有线施工；参与了高海拔高寒地区冻土层防治施工，高横向落差的路基抗滑移施工；参加了下穿郑徐高铁采用新型材料穿越的变更设计，黄泛区软弱土层处理的变更设计；主导了40米箱梁整体式液压模板的设计和优化，平原区涵洞墙身采用液压模板的创新，并在实体上施工取得了成功；编制了跨连霍高速施工的安全技术方案，钢箱梁施工的安全技术方案等。在这几年从事一线生产过程中，我不断的实践学习，同时也通过过程中的历练在不断的自我提升。
做为一名技术质量管理的工作者，在工作中必须要不断的总结新的施工工艺与技术。在项目施工一线随时面临各种技术问题。在解决问题的同时更 应该想到的是是否有更好的解决方案，更便捷的方法与技术，要多探索与研究。在成绵乐高铁项目建设期间，我做为项目的副总工，主持了跨彭溪河特大桥的施工，其中跨越彭溪河的3跨一联32m+48m+32m的现浇梁为本桥的控制性工程，原设计为挂篮施工，但根据业主工期要求，按原设计施工工艺实施，工期无法保证。通过与业主和设计单位的沟通，变更施工工艺和设计图，采用满堂支架法施工。由于跨越河道，需采取特殊的支架跨越型式，工期紧，难度大，风险高。从施工进场，就对河道宽度，汛期，常年水位，最近十年的最大洪水水位和流量等进行摸排，参考以往项目的施工经验以及高铁项目的要求，通过大量的模拟方案组合和经济性分析比较，最终确定了跨河道采用临时桩基础、钢管桩加贝雷梁的跨越型式，并邀请局技术部进行复核验算，通过了专家评审会审核。本方案的顺利实施保证了工期，得到了业主单位的一致认可，同时给项目带来了可观的收益以及良好的荣誉。彭溪河特大桥施工现场代表二局作为铁路总公司（铁道部）检查的观摩点接受了上级的观摩。个人也获得多次项目先进个人称号。
在青藏地区施工期间，对高原高寒地区冻土层施工，通过查阅资料以及现场查看和大量的实验分析，发现土在冻结过程中不是都能产生冻胀的，产生冻胀是有条件的。如果条件充分则其冻胀量大，反之则其冻胀量小或不冻胀。因此土的冻胀，一般应当具有土、水、温及力四个条件。通常产生原因主要有：路床顶面不平整,易积水，被浸湿；路基填料不合格不均匀；路基填土的压实不均匀(固结的不均匀);冬季冻结时水分向上迁移，在春季时引起了土结构的变化；路基填筑厚度不足；路基受动荷载冲击与振动的影响，使得具有适当含水量的粉性土发生触变性的液化；路基排水不畅等。针对问题，分析了原因，制定实施方案，通过路基试验段总结如下：一是消除不均匀冻胀。主要是指消除路基病害地段与相邻地段的冻胀差值，或使这一差值在规 定距离内逐步消失，使线路达到合乎要求的标准；二是强调综合整治的整体效果。各种整治冻害措施的目的、作用和效果不尽相同，各有针对性和适用范围。因此要根据冻害的具体情况分析研究不同措施的互相搭配，注重它们的整体效果，以争取达到根除冻害的目的。在此期间，路基施工从多方面严格控制，冻土层防治取得了宝贵的经验。
2015年担任河南机西高速二期1标副总工期间，我一直坚持实事求是、求真务实的工作作风，在工作中严格执行公司的规章制度，按照设计文件及规范结合自己工作经验对施工技术人员及现场工人每一个分项开工都进行了技术交底。在每一分项执行过程中严格执行首件工程制。多交流、想办法、多总结、出成果。在施工过程中的一些细节也总结出方便、提高工作效率又能保证施工质量的好方法，好技术。
项目刚开始进场后，对项目梁场进行了精心的策划，将梁场各个施工区进行了明确的划分，项目进场就将梁场定位高标准、高起点。在实施过程中更是严要求，而且我们也想了好多好的办法改进施工工艺，比如将预制箱梁钢筋笼底腹板钢筋整体绑扎吊运，节约了时间。比如将锚下加强筋由绑扎改为焊接，节约了钢筋。在箱梁喷淋养生方面我们通过研究制定了整体式移动养生棚，改进了喷头，安装了视频终端系统，通过遥控器自动控制箱梁养生。
第二预制梁场参考大岳项目梁场筹建方案打造高标准梁场，从模板的选择，场地的选用都提前进行规划。对传统的施工工艺进行改进创新，预制箱梁外模采用可行走式整体液压模板，通过轨道行走系统、液压升降与平移系统，实现模板的拆装。40米外模分为20米两节，每节两个液压行走台车保持平稳，模板置于两个纵移小车上沿轨道可以纵向移动，每个小车设置水平和垂直两类千斤顶，水平千斤顶能使模板做水平移动，实现模板的开模与合 模，垂直千斤顶使模板上下升降运动，能调节模板高低，可实现模板安装的精准定位，消除漏浆错缝现象。每节20米外模采用整块钢板加工而成，没有中间拼缝。有效保证了箱梁外观质量。保证模板的整体拆装。该套液压整体式外模有以下几个优点：
1、预制梁液压整体式模板消除拼缝，避免了模板反复拼拆，保证外观质量同时节省了劳动力成本一半以上。
2、外模板拆装不需要龙门吊配合，节省了2台15t龙门吊，节约设备费用约70万。
3、施工过程中外模板拆装效率大幅提高，拆装模板3个工人在30分钟内即可完成。
4、预制梁液压整体式模板机械化水平高，定位精准，误差小，大大的提高了箱梁施工水平。
5、通过液压系统调整运输模板，大大降低了安全风险，减少了安全隐患。箱梁内模同样采用整体液压式模板，内模系统包括可收缩式内模、拆装台车、卷扬机3部分。40米箱梁内模整体分为两节20米内模，模板在横隔板处分为两节，整体内模板采用合页形式连接，上下合页之间采用联动杆的铰接形式，在联动杆上设置液压千斤顶，利用液压千斤顶水平顶升上下连杆铰链，使内模在断开处可以实现弯曲，缩小断面尺寸，实现内模的收缩，使内模与混凝土分离。利用卷扬机将缩小的模板抽拔水平拉出在拆装台车上。在拆装台车上通过液压千斤顶的回缩，实现模板伸开复位。该抽拔式内模优点如下：
1、大幅提高了内模拆拼模板效率，一个人完成了十个人的工作量，3个 工人在30分钟内即可完成模板的拆装和拼装。
2、采用液压整体抽拔内模拆除时工人不需要进入箱室内，在箱室外操作液压油泵与卷扬机即可完成，改善了工人劳动环境，降低了工人劳动强度。
3、采用液压整体抽拔内模在拼装台车上用液压油缸即可复原，完成内模拼装，安装施工效率实现质的突破。
4、内模采用大块钢模板加工而成，接缝少，整体性好，避免内模上浮，有效的提高了箱室内混凝土的外观质量。
采用技术创新对施工工艺以及机具进行了改进，消除了人为因素对梁体质量的影响，改善工人劳动环境，斜角度40米箱梁整体式液压模板属于国内首创。迎来了河南省全省观摩，获得了一致好评，同时第二预制场的箱梁预制今年也通过了质监站的验收，被评为河南省样板工程，为公司站稳河南市场打下坚实的基础。
二、技术、质量管理进一步认识
这几年以来不论是从技术层面还是管理层面虽然我也取得了一些成绩，但是还存在很多的不足，要面对各方各面的检查与事务，有的时候变得急躁，没有耐心，总是以自己经验来判断问题，没有更加深入分析原因。作为技术质量的管理者，经验确实很重要，但是具体问题更应该具体分析，更应该时刻去学习，提高自己的业务水平与工作能力，过程当中更应该以严谨、细致的心态去面对问题。这几年随着高速公路的发展，业主、监理对我们的工作要求更细致，标准越来越高，注重的更多的是结果，虽然过程中我们付出了心血与汗水，但是我觉得还是做得不够，我觉得更应该要有超前意识，想到别人之上，做到别人之前。随着技术标准提高，社会监管力度加大，质量要 求越来越严，我们的成本在逐年增加，效益在逐年减少，显然对项目管理来说应该越来越细，越来越规范化。通过每一道工序起始的技术交底，施工工艺和设备机具的小创新活动以及工序完成的总结，全面推进样板工程建设，并以样板工程为指导，全面提高总体施工技术、质量水平。
三、存在的不足与进一步的提高
在工作的过程中，随着接触的工作内容的不断更新，越来越能感觉到自己的不足。随着行业不断发展，施工工艺要求更加精湛，施工水平要求不断提高，标准化施工演变为常态。对工程成品的满意度也在逐年提升。对于我来说，压力也越来越大，技术储备还没有达到更高要求，精力分散较多，需要进一步提升自身业务能力，进一步提升标准化、精细化施工管理水平，进一步对管理创新、设计创新、技术创新、工艺创新、材料创新、设备创新的探索与应用。改进工作方式方法，把工作中的得失和每次出现的问题记下来以便吸取经验教训，遇到疑难问题要及时查阅相关资料并与他人沟通，耐心的听取他人提出的建议。在进行每一项施工任务前，先摆正自己态度，树立工作目标，不急不躁，然后再投入到生产活动中去，在施工过程中要经常提醒自己那些是不能触碰的红线。
随着行业发展，技术质量管理既是铺路石又是敲门砖。做为一名技术质量管理者要开拓思路，不断的学习，不断的总结，才能不断的提高，不断的进步。要以技术创新为动力，通过创新来提高施工水平，提高生产效率，从而实现个人和企业更大的发展。
点击咨询 