NGS仪器注意事项

NGS仪器注意事项

一．M220/ME220

1.ME220打开后需要选择程序进行降温，确保所有配件都放于水槽（2个），Fill水时时刻注意右侧瓶中水位变化，及时补水

2.Magnis BR打断采用M220

二．Zephyr

1.正式建库前,需要先进行O-Ring，大约2.5min

2.加水到枪头盒放置仪器内部，保持湿度

3.建库途中无异常报错拍照到群里确认再继续；如遇异常，按右下角紧急暂停，补救后松开暂停键，home（x,y,z）后，选择0-retry继续。

4.建库中加样、取样、分装、每一步PCR前，观察混样过程，防止少取漏取

三．酶标仪

1.打开酶标仪→仓门开关开→打开控件灯泡预热3min→选择立即检测QC程序→数据拷贝至专用QC表格，重命名当天日期

2.预文库浓度对应样本质量，异常时手动qubit。当预文库产量＜1500ng时，65°浓缩至15ul进行杂交。文库QC时，观察文库浓度对应预文库浓度，发现异常时手动qubit。

四．Magnis BR

1.-20°试剂提前30min解冻，开始前观察各组分试剂是否溶解或有胶状异常再进行使用；仪器开始运行前照30min紫外

2.操作时所有的二维码都朝着操作者，禁止手触碰铝箔包装，用PE手套操作。记录下使用index，AS如图：

3.选择protocol BurningRock HS, Rfor QC

Sample Type: FFPE DNA；Input Amount(ng:)200；

Pre-Capture PCR cycles: 12；Post-Capture PCR cycles: 12

4.程序结束后，手动qubit终文库LS浓度，QS中加30ulEB稀释封膜后测量QC。将所有试剂耗材拿出保存，结果出来后再丢弃。然后照2h紫外后仪器自动关机

五.Nextseq 500/550DX

1.上机程序

① flowcell：4个角和通道表面无异物，无裂痕；flowcell正反面卡扣不松弛。异常拍照发群

②Buffer：取出试剂盒上下摇晃几下，观察试剂无沉淀无异常

③废液盒：倒出所有废液

④Nextseq 500：Run Name: 上机当天日期;根据所用试剂盒选择mid/high；其余统一如图

⑤Nextseq 550DX：开机后为DX模式，先切换为RUO模式。操作同Nextseq 500，Run Setup选择Manual.Run Name: 上机当天日期+DX，注意Read Length前后顺序。

2.仪器清洗（post-Run）

①测序结束后，拍照记录仪器表面数据，flowcell保存写上使用日期，其余试剂盒全部丢弃

②测序完成后立即吐温清洗，保护管路，试剂盒中含有甲酰胺。清洗仪器前关机，关后边电源，5min开启。flowcell选用high，Nextseq 550DX有专用清洗flowcell。

0.05%吐温：200ml超纯水+100ul吐温→buffer清洗夹盒34孔刻度线处

15ml离心管：10ml超纯水+12ulNaclo→reagent cartridge28孔箭头标注

③吐温清洗后，超纯水再清洗一遍，上机待用。