OLYMPUS生化一点总结

第一篇：OLYMPUS生化一点总结

[原创]看了OLYMPUS生化一点总结 Post By：2006-8-22 15:41:00 奥林巴斯光学工业株式会社创立于1919年，1920年首次在日本成功地将显微镜商品化，从而作为精密、光学技术的代表企业开始起步。

该公司以先进的光学技术及精密工艺为起点，经过多年的研制与开发，于1968年初成功地生产出第一台自动生化分析仪，从而首次涉足自动生化分析仪器领域。1974年生产出日本第一台使用速率法的自动生化分析仪ACA4型（12通道）。从20世纪70年代初开始至90年代，Olympus公司生产了十几种型号的大型及超大型自动生化分析仪，并于1994年开始进入中国市场。1996年以后更先后推出AU1000、AU400、AU640等大中型仪器，使在中国市场的占有量上升为500台左右。在新世纪到来之时，Olympus公司推出了全新设计的AU2700及AU5400。Olympus新仪器的主要设计思想是使大型实验室的成本消耗降低的同时仪器保养工作量也减少，而工作效率大为提高。

1、集束式点光源：该公司于1996年率先在AU600型生化仪上采用，以后生产的各机型均采用该技术，简而言之，该系统在光源和比色杯之间使用一组特制透镜，其目的是将原始光源灯投射出的光通过比色杯时将光束变成一束点光源（与传统仪器的楔形光束部同）。这样，即使比色杯最小反应体积只有120μl，光束也能完全通过。

2、光/数码信号直接转换技术：1996年该公司首次在AU600型生化仪上采用光/数码信号直接转换技术，它将光路种的光信号直接转变成数码信号，将电磁波对信号的干扰及信号传递过程种的衰减完全消除。在传统光路种，仪器、电机、电源及生化仪本身均会产生大量电磁波，这些电磁波对电信号产生不同程度的干扰。同时，电信号在传导过程中也有一定程度的衰减。这些因素都会影响测定结果的稳定性和精确性。Olympus革新性的将光信号转换成数码信号，同时采用光导纤维传输信号，这样可将测试精度提高进百倍，其发展趋势必将是今后生化仪优先采用的技术。

3、进样系统：

（1）常规样品：1980年该公司开始推广轨道式进样，最初采用后轨道，自1996年以后，该公司所有的生化仪全部改用侧轨道和前轨道。使进样既方便灵活又具有可扩展成自动化实验室的潜力。每个样本架可放置10个样品，样品架按功能及颜色分为常规、急诊、质控、定标、重测、空白样品架，仪器能自动识别。

（2）急诊样品；：AU系列生化分析仪均采用两种急诊样品插入方式。①独立急诊台方式。生化仪备有一专用急诊转盘，可同时放置22个急诊样品，另有7个位置可放置质控品和校准品，急诊转盘具有另冷藏功能，且可优先检测。如果使用专门配套的急诊试剂，4min后即可查到7项急诊结果；更设计有“一触即发”功能，即使毫无操作仪器经验的人，也能胜任急诊工作。一般情况下急诊台检测血清样品，也可以检测尿、脑脊液灯。急诊转盘也具有条形码阅读功能。需要测定急诊样品时，可随时插入，不影响常规样品的测试排序。②样品架急诊方式。AU系列生化分析仪均可使用轨道进行急诊样品插入，方法为使用红色样品架，当轨道上放有红色样品架时，机器可自动判断为急诊检测样品。

（3）重测样品：AU系列生化分析仪均可自动重测样品，当测试样品的结果超出了用户定义的范围，即可自动重测。如工结果偏高，则稀释后再测（后稀释）；如果结果偏低则增加样品量后再测。

（4）样品前稀释：由于软件功能种稀释比例最高为1：150，当一些免疫及特殊项目需更大稀释比例时，需使用前稀释功能，其方法为将待测样品加入比色杯中稀释，稀释倍数5～100倍，再将稀释样品加入测光比色杯中进行固定程序分析。

4、探针系统：传统的液面探针技术检测液面时通过阻抗，或者时测定电容电流。样品探针设计中具有超声波头，而超声波常常受周围环境的影响。当环境污染改变可导致超声波回音码的变化。AU系列样品探针为单根双腔型探针。样品量范围1.6～25μl，再检时从1μl开始，0.1μl步进，并采用随量跟踪技术以保证加样零误差。

⑴自动液面检测：探针带有感应装置，探到液面后会自动停止下降。⑵随量控制技术：探针可依据吸入液体的多少，自动调节探针的下降高度。探针液会自动调节高度以放置加注液体时溅到比色杯壁上，保证超微量分析的精确性。

⑶智能防撞保护功能：探针遇到纵向或横向一定阻力后会停止运动以保护探针，但只停止被撞探针的运动，以前已加试剂及样品的测试继续进行。

⑷防堵及探测血凝块功能：探针能自动探测血清中的血凝块或纤维蛋白而报警。当发生堵针时，探针内有一强水压将堵物冲出，可免除堵针时造成的测试结果不准确。发生堵针并处理后的样品会自动重测。

5、恒温系统：目前恒温系统应用较为广泛的使水浴式恒温和空气浴。水浴式恒温是温控装置是反应温度控制在37℃±0.1℃的水平，开机后水浴可以自动更换，换水后，仪器自动加入一定量水浴保护剂，其作用有：①使恒温水具有导电性；②抑制细菌生长③润化比色杯以免产生气泡。测定期间÷恒温水浴不断循环转动，通过恒温水的导电性保持恒定的水浴量，通过温控装置保持37℃±0.1℃的水平。水浴恒温的优点是温度均匀、稳定；缺点是升温缓慢，开机预热时间长，因水质化（微生物、矿物质沉积）影响测定，因测要定期换水和比色杯。为了加热均匀和防止变质，往往要设置马达循环转动和添加防腐剂。

空气浴恒温的优点是升温迅速，无需保养；缺点是温度易受外界环境影响。恒温系统突破性地采用氟利昂为反应槽恒温。反应杯放置在内部密封有氟利昂的金属环上，机内专门一块控制电路板，控制反应恒温、使反应盘内的温度始终在30℃±0.1℃或37℃±0.1℃，而且变温速度快。通过计算可得出25℃时的结果。恒温可靠，使得样品与试剂反应稳定完全，保证检验数据准确。

独创的恒温液循环加温方式，集干式空气浴和水浴的优点。它是在比色杯周围循环流动一种无味、无污染、无变质、不蒸发的稳定液。在比色杯与恒温液间有1mm空气夹缝，恒温液通过加热夹缝的空气达到恒温。这种技术既有水浴恒温温度稳定、均匀的优点，又具有空气浴升温迅速、无需维护保养的优点。恒温液为热容量高、蓄热能量强、无腐蚀的液体，使恒温均匀稳定。加上比色杯为可永久使用的硬质石英玻璃，免得定期更换与保养。

6、搅拌系统：

搅拌系统是指样品与试剂混合后须迅速分布均匀，其目的是更好更快测定其反应系统中的吸光度变化。OLYMPUS生化分析仪采用独创的四头回旋式双重清洗搅拌棒，搅拌棒表面采用不沾涂层，具有不沾异物，无携带污染物的特点。其搅拌为四头螺旋式高度旋转搅拌棒，旋转方向与螺旋方向相反，这样搅拌时比色杯内容物不外溢，不产生气泡，使检测结果更准确。搅拌棒一头搅拌样品或试剂，另外三头分别进行以清洗液清洗，温水自动冲洗及风干，四个步骤同时进行。这样，既加快了冲洗速度，又提高了冲洗质量，使搅拌系统不产生携带污染。

7、冲洗系统：

吸样针和搅拌棒：激流式单向冲洗和多步骤冲洗。样品、试剂探针的冲洗采用全新的“激流”（瀑布）式单向冲洗池。水流为从上向下的单向冲洗，将探针携带的污物冲向一排水口（就像人在自来水龙头洗手）。较之传统的涌泉式（就像人在洗脸盆内洗手，不能完全洗净）冲洗更干净、彻底。该技术用以改善冲洗效果，提高测试的准确性，防止交叉污染。

比色杯：OLYMPUS生化分析仪采用先进的温水八步骤自动清洗比色杯，使用更新的抽干技术，每次冲洗后遗留水量少于1μL，然后进行风干，使比色杯冲洗更干净，彻底，防止项目间的交叉污染。为了不影响速度，比色杯实行分组冲洗，即测定与冲洗同时进行，随时准备好测定使用的比色杯。通过编码盘测定每个比色杯，自动标出不合要求的比色杯，提示进一步处理。反应盘内装有高质量石英玻璃制成的反应杯，杯子宽度0.5cm，使试剂和样品用量大大减小，试剂量在200～300μL，样品量3～26μL。由于是独立的反应杯，当杯子污染或损坏时，便于取出清洗和更换。

比色杯冲洗八步流程：污染比色杯→加注清洗剂→吸干→加注清洗剂→吸干→加注温水→吸干→加注温水→吸干→加注温水→吸干（残留水量<1μL)→擦干、干燥→干净比色杯。

8、比色杯 AU2700的反应盘共有330个比色杯，采用单盘双轮式。比色杯为内外2圈，比色杯内外圈2个比色杯同时比色。比色杯采用硬质石英玻璃，光径6mm，耐酸耐碱，自动冲洗，可永久使用。仪器自动检测比色杯透光性，当发现有未清洗干净的比色杯时，会跳过该杯继续进行检测。

9、试剂系统 AU系列生化分析仪均采用开放式设计，用户可自行选择试剂。试剂瓶可分120ml、60ml、30ml、15ml几种，用户根据工作量大小自行选定。使用120ml试剂瓶时，一瓶试剂可检测多达4000个测试。该仪器使用条形码阅读试剂位及固定试剂位2种方式，开机后自动检测试剂量及可测项目数量，试剂仓采用半导体制冷（4～12℃）。

用户可根据自身经济实力选择使用配套的试剂。如使用该公司试剂，条形码登录会自动检测项目、出厂日期、有效期等。原厂试剂为浓缩型，仪器自动稀释后进行检测。该公司同时生产各种规格的定标液和质控液，若使用该公司的定标液校正仪器能使测定结果更稳定可靠。

10、电子系统 采用多微处理器（CPU）系统，各工作单元如光路、恒温、加样、搅拌、清洗等均有独立CPU。各CPU之间的通讯采用无噪音干扰的网络连接及传送，以提高速度和准确性、稳定性。操作系统采用Windows NT新图形软件。

11、条形码登录 AU系列生化仪条形码系统均为标准配置。条形码识别采用混合式，可使用NW7,Code128，Zof5standard，ISBTCode1，Zof5interleaved等，最大可使用22位。AU系列生化仪共采用5部条形码登录。配备有样品架、样品管（患者ID号）、急诊样品、试剂

1、试剂2共5部条形码阅读器。

12、软件功能 采用Windows NT软件，图形操作界面。AU2700主计算机能存储60000个患者数据，20000个反应曲线，并通过Internet进行远程培训及仪器故障判断。在样品质量分析种，可分析出溶血、脂浊、黄疸及血凝块等情况并给予提示报警。

第二篇：生化实验总结

一、实验技术

1.关于糖：本学期我们学习了两种总糖样品处理方法（面粉总糖酸水解以及肌糖原无氧酵解）以及两种测定还原糖含量的方法（斐林试剂热滴定及3，5-二硝基水杨酸法）。还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。

一种是费林试剂热滴定定糖法：在沸热条件下,用还原糖溶液滴定一定量的费林试剂时, 将费林试剂中的铜离子还原为氧化亚铜, 以亚甲基蓝为指示剂, 稍过量的还原糖立即将蓝色的氧化型亚甲基蓝还原为无色的还原型亚甲基蓝, 指示滴定终点。

另一个是3，5-二硝基水杨酸法测定还原糖：还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。

关于肌糖元酵解

2.关于蛋白质含量测定：本学期我们学习了醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白、氨基酸聚酰胺薄膜层析，以及利用溶解度差异提取血清中不同蛋白，并通过 BCA法、Folin酚法、凯氏定氮法测定蛋白质含量

3.关于酶活性学习了纤维素酶活力测定以及酶最适PH测定 4.关于稀碱法酵母核糖核酸提取以及紫外吸收法测定浓度

二、关于感悟 经过半年的生化实验的学习让我受益菲浅。在生化实验课即将结束之时，总结这学期的收获与不足。取之长、补之短，在今后的学习和工作中有所受用。

三、这半年的生化实验主要有菲林试剂热滴定定糖法、folin-酚法测蛋白、稀碱法提取酵母RNA、醋酸纤维薄膜电泳、RNA定量测定-UV吸收法、纤维素酶活力的测定、最适PH选取、肌糖元的酵解作用、N-末端氨基酸残基的测定--DNS-CL法柱层析分离色素、凯式定氮法等实验。

在这些实验中，凯式定氮法是给我印象最深的一个实验，因为这个实验使我认识了改良式凯式蒸馏仪的基本结构，同样的也让我透过这次实验掌握了凯式定氮法的操作技术。在这次实验中，我和我的同组者-韩文志犯了一些错误，而且是很不就应犯的错误，我们都忘了在做实验时要加入新的沸石，这是个很低级的错误，差点引起溶液的暴沸。透过这次错误我认识到，很多知识，即使是老师在怎样说，它也只是理论，当我们不能把它应用到实践中去时，它对我们都是毫无好处的。此刻更深的认识到了理论结合实际的观点。在这次实验中我们损坏了改良式凯式蒸馏仪，并且赔了钱，钱不是问题，重要的是操作的问题，我觉得我们在做实验时还是对仪器不是很熟悉，做实验时不认真。

还有一个是柱层析分离色素，这个实验主要是掌握吸附层析的原理和操作技术，我记得这次实验我是第二个到的实验室，当时还很有成就感，进来后就称菠菜，还有研磨，这是很累人的活，我觉得，因为想把它研磨的好些，又想

快点做实验，于是就一向磨一向磨，直到做下一步时才觉得手腕有点累。我记得在加棉花时，由于不明白就应加多厚，提取色素时还很是胆战心惊的。我觉得在这个实验中，装柱这一步是很重要的，于是我们很留意的装，直到柱面很平。直到最后，分离色素后，看到我们的色带分离的很好，很是高兴。

半年实验做下来，最“苦”的要数“菲林试剂热滴定定糖法”这个实验了。这个实验要求我们正确掌握滴定管的使用方法和热滴定的终点。由于全部滴定过程务必在沸腾状态下快速进行，而且终点不容易把握，我们滴了好几十次才确定了终点。当时我的同组者-韩文志已经被火烤的不行了。

在这半年的十几次的实验的学习中，我受益颇多。毫无疑问，它培养了我的动手潜力。每个实验我都会亲自去做，不放下每次锻炼的机会。经过这半年，我的动手潜力有了明显的提高；它让我养成了课前预习的好习惯。一向以来就没能养成课前预习的好习惯（虽然一向明白课前预习是很重要的），但经过这半年，让我不仅仅深深的懂得课前预习的重要，更领会了课前预习的好处。只有在课前进行了认真的预习，在做实验时效率才会更高，才能收获的更多、掌握的更多；它还提高了我处理数据的潜力；做实验就会有数据，有数据就要处理，数据处理的是否得当将直接影响实验成功与否。

半年实验虽然收获很多，但在这中间，我也发现了我存在的很多不足。我的动手潜力还不够强，当有些实验需要很强的动手潜力时我还不能从容应对；我的探索方式还有待改善，当应对一些复杂的实验时我还不能很快很好的完成；我的数据处理潜力还得提高，当眼前摆着一大堆复杂数据时我处理的方式及潜力还不足，不能用最佳的处理手段使实验误差减小到最小程度……总之，生化实验课让我收获颇丰，同时也让我发现了自身的不足。在实验课上学得的，我将发挥到其它中去，也将在今后的学习和工作中不断提高、完善；在此间发现的不足，我将努力改善，透过学习、实践等方式不断提高，克服那些不应成为学习、获得知识的障碍。在今后的学习、工作中有更大的收获，在不断地探索中、在无私的学习、奉献中实现自己的人身价值！

第三篇：2010生化实验室管理总结

2010---2011学年下学期华龙区三中生物化学实验室仪器室管理工作总结

2010---2011学年下学期华龙区三中生物化学实验室仪器室管理工作总结

一、实验室的管理

实验教学是生物、化学教学的一个重要组成部分，做好生物、化学实验，让学生巩固即得知识，培养学生实验技能，是中学生物、化学教学目标之一。

回想当初刚接手生物、化学实验室仪器室管理工作时，以前上课时没有感受到，看似简单的准备试验，看似清闲的仪器管理，其实还有许多意想不到的不易。首先，又脏又乱的实验室随着我的汗流浃背被清理出一桶又一桶的垃圾,落满尘土的试验台面擦了一遍又一遍,终于露出干净的本色,刚装修完的地面、走廊地面落下一块一块的青石灰泥，也随着我手中的小铲一下又一下的挥舞和着滴滴汗水终于被彻底铲除干净。还有实验室里几百个药品的试剂瓶让我茫然无措，几万元成堆的新进仪器让人无从下手，为了尽快熟悉他们，我整理、清洗了所有的橱柜里的仪器、药品，对照账目，一一排查，很快对实验室里的仪器药品都做到了心中有数。对仪器的摆放重新科学规划，把仪器与药品在有限的空间里巧妙地用柜子隔开，仪器室药品室看起来井井有条、干净整洁，加上几盆自己养殖的吊兰、菊花，不仅净化了室内空气，又平添了几分生机。如今学校新的实验楼已经建成，两室需再次搬迁，几十万元的仪器药品仍需再次规划摆放，热火朝天的劳动带来的大汗淋漓又再次驱走三九寒冬的寒意。新年开学，立即着手新实验室、新仪器室的整理，每天一上班就在实验室、仪器室里清点、搬运、摆放仪器，每天从上班忙到下班，一连三四个星期的时间，有同事问我:“你也没事，搬到新楼上咋不下来了呢？”不是没事，是没闲事，净忙事，抓紧忙完仪器整理摆放还要准备中招分组实验，一项又一项的工作在那排着队呢，哪里会有时间下楼来呢。

其次，实验仪器的准备，尤其是分组实验仪器的准备不仅繁杂，还需要谨慎细心。教学一线的老师们工作十分繁重，实验通知单常常是顾不上写。准备好的仪器药品，上课前，老师们取走实验仪器时，经常发现有遗漏的仪器药品，为了配合好教学，我有时亲自及时把仪器药品送到任课教师手中，我还参照教学进度计划，仔细认真钻研教材，明确教材中的每一个实验所用仪器、药品，主动提醒课任老师，不仅可以提早查漏补缺，免去了任课教师填写实验通知单的程序，减轻了负担。

针对每次生物分组实验，利用我以前担任过生物课的优势，仪器的准备、摆放、回收、清洗全由我一人动手，为任课教师节省了宝贵的时间和精力。化学分组实验也正在往这个方向努力。当然中招实验两科需要的仪器太多，一个人根本摆放不及，仍然需要科任老师协助。生物化学分组实验仪器准备和清洗回收工作相当繁重，几乎每一件用过的玻璃仪器、水槽、污物桶等都得认真清洗，这些工作都需要消耗很多气力和时间，经常被这些琐碎的工作累得腰酸背痛是常有的事，但是干一行爱一行是咱老实人的本分。

实验室在学校属于后方保障部门，为教学一线的老师们服务是工作重点，我在准备好化学、生物实验，管理各个实验室、仪器室、药品室的同时，物理老师需要时，我也会全心全意地为他们解决。实验室工作繁杂琐碎，做好一线老师的后勤，尽可能减轻他们的工作强度，分担它们的后顾之忧，是实验员的责任。

二、仪器室的管理

1．做好购置仪器、药品先行申请、入库验收工作，同时填写入库清单，及时完善仪器明细账。

2、做到购物有登记，帐目清楚，帐物卡三对应工作。教学仪器的借用严格按照教学仪器借用制度实行登记，如期归还，追还等。

3、仪器做到常清点，常保养，常维修，保证抽查准确，随取随用。

对显微镜等教学精密仪器，做到了定期检修、除尘、防锈、保养等工作。对标本类实施了定期检查、防蛀等加以妥善管理。

4、对新的实验仪器的性能、使用、操作方法做了充分了解，能熟炼地操作使用，更好地配合了任课老师的实验教学工作。

5、定期对仪器室、实验室进行卫生大扫除，平时做好两室保洁工作，及时做好迎检工作。

6、按时完成了本期的实验任务，在新的一年里，要更进一步加强学习，使自己的管理工作更上一个台阶。

这一学年尤其是上学期的迎检工作比较多，在这里感谢领导和课任老师的帮助，使每次的迎检工作都得到了上级部门的认可。回首看看，查漏补缺，也曾有一些纰漏，如药品借用虽然都有详细及时的往来记录，但是没有把库存和损耗随机账合并成一个账册，这一项已经改正，新的药品库存损耗随机账册已经设计投入使用。再有，平时补充购买实验材料时，没有做到详细询问记录每一笔校资投入账，在上级领导询问时没能脱口而出准确的仪器药品资金投入数，这一点也已改正。因此以后在工作中还要不断地汲取经验、查漏补缺、改进工作作风，更加谨慎细致，努力把两室管理工作、教学服务工作开展得更好。建议学校建设多媒体实验室一个，以改进我校实验教学。

生化仪器管理员

2011年7月

第四篇：生化知识点一句话总结

◎ RNase P中的RNA称M1RNA。◎ rRNA前体加工过程需要甲基化，主要是在核糖2’羟基上，真核生物rRNA甲基化程度比原核生物rRNA甲基化程度高。◎ 真核生物rRNA前体的甲基化、假尿苷酰化以及切割是由snoRNA指导的。◎ 真核生物tRNA基因的数目比原核生物tRNA基因的数目大。◎ 组蛋白、呼肠孤病毒和不少植物病毒的mRNA并无poly A尾巴。◎ 多聚腺苷化可被类似物3’脱氧腺苷即冬虫夏草素阻止。◎ 真核生物mRNA内部甲基化碱基为N6-甲基腺嘌呤（m6A）。DNA上的甲基化发生在CpG岛上的胞嘧啶的5'-C上形成5'甲基胞嘧啶。◎ 第一类内含子包括：四膜虫rRNA内含子、几种酵母线粒体的内含子、噬菌体T4胸苷酸合成酶的内含子等，它们有较大的同源性，可自我拼接。◎ 真核蛋白结构基因内含子有GT-AG规律。◎ 真核生物中U1、U2、U4、U5、U6 snRNA参与hnRNA的拼接，U3 snRNA参与rRNA的加工。◎ DNA核酸内切酶识别的是特异核苷酸序列，而RNA核酸内切酶识别的是加工部位的空间结构。◎ RNA复制的最低速度为35bp每秒。◎ 噬菌体RNA的高级结构参与了翻译的调节控制。◎ 碱基类似物进入体内要转变为相应的核苷酸才能表现出抑制作用。◎ 蛋白质合成的能量是GTP。◎ 蛋白质合成的早期研究是用大肠杆菌的无细胞体系进行的。◎ 在少数大肠杆菌噬菌体R17、Qβ的RNA基因组中，部分基因的遗传密码是重叠的。◎ I可与U、A、C配对。◎ 识别mRNA上多肽合成起始点的是16SrRNA。◎ 核糖体大小亚基与mRNA有不同的结合特性。◎ 多聚核糖体有三维空间结构，6个以上的核糖体组成的多聚核糖体有稳定的结构。◎ 氨酰tRNA合成酶催化的氨基酸活化由是在可溶性胞质内完成的，而不是在核糖体上完成的。◎ 氨酰tRNA合成酶催化的氨基酸活化首先是氨基酸的羧基端通过酸酐键与AMP上的5’-P相连，再转移到tRNA3'端核糖上的2'或3'-OH上形成酯键，但只有3'形式才能够参与下面的转肽反应。◎ 活化每分子氨基酸需消耗2个高能磷酸键。◎ 当有某种tRNA突变分子出现时，也必定有可以识别正常氨基酸的tRNA存在。◎ tRNAf与fMet结合参与肽链合成的起始。tRNAm携带正常Met掺入肽链。◎ 除了fMet-tRNAf之外，所有的氨酰tRNA必须与EF-Tu、GTP结合后才能进入70S核糖体A位点。◎ 嘌呤霉素的结构与氨酰tRNA 3’末的AMP相似，与肽酰转移酶而终止肽链合成。◎ 真核的RNA常只有一个AUG起始密码子，每种mRNA只能转译出一种多肽。◎ 氯霉素、四环素、链霉素只抑制原核生物的转译。新霉素、卡那霉素与原核生物细胞30S亚基结合，引起密码错读。◎ 亚胺环己酮只作用于80S核糖体，只抑制真核生物的转译。白喉毒素与EF2结合而抑制肽链移位。◎ 信号肽常见的氨基酸有：丙氨酸、亮氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸。◎ 多肽在内质网中的修饰有：N-信号肽的切除、形成双硫键、线性多肽呈一定的空间结构、初步的糖基化作用。◎ 线粒体定向肽富含正电荷氨基酸，如丝氨酸、苏氨酸。◎ tRNA突变可校正结构基因上的某些突变，使基因产物仍有功能，这称为基因校正突变。◎ 许多抗生素、毒素都是多肽合成抑制剂。◎ 脂类分子为生物小分子，它们可以聚集成超分子结构。◎ 生物大分子具有高度的特异性，生物间的差别都由它们决定。多糖、肽类聚合物的结构由合成它们的酶决定。◎ 细胞代谢的原则和方略：将各类物质分别纳入各自的共同代谢途径，以少数种类的反应如氧化还原、基团转移、水解合成、基团脱加、异构反应等转化为种类繁多的分子。◎ 关键的中间代谢物有：6-磷酸葡萄糖、丙酮酸、乙酰辅酶A。◎ 生酮氨基酸有：亮氨酸、异氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸。它们在代谢途径中能生成乙酰乙酸。◎ 丝氨酸脱羧后形成胆胺，是脑磷脂的组成部分。它在接受甲硫氨酸给出的甲基后形成胆碱，是卵磷脂的组成部分。◎ 任何催化剂，包括酶在内，仅能改变化学反应速度，不改变化学反应的平衡点。◎ 在一条代谢途径中，某些关键部位的正反应和逆反应往往是由不同的酶所催化，一种酶催化正的反应，另一种种酶催化逆的反应。这类反应称为相对立的单向反应。◎ NADPH主要来自于磷酸戊糖途径。◎ 酶活性的调节包括酶的变构效应和共价修饰。◎ 草酰乙酸作为合成氨基酸和核苷酸的前体物质，能被产物连续地反馈抑制。◎ 对PEP羧化酶的激活有：嘧啶核苷酸的前馈激活，乙酰辅酶A的反馈激活，前体二磷酸果糖的前馈激活。◎ 正常情况下，细胞的能荷约为0.9，变化范围为0.85——0.95。◎ 连锁代谢反应中一个酶被激活后，连续地发生其它酶的激活，导致原始信号的放大，这样的连锁代谢反应系统称为级联系统（casade system）。◎ cAMP可为环磷酸二酯酶水解产生5’AMP。◎ 蛋白激酶A有两种同工酶形式：Ⅰ型和Ⅱ型，它们至少有四个功能域：2个cAMP结合区域，1个二聚化区域，1个与催化亚基作用的区域。◎ 磷酸化酶激酶是一种钙离子依赖的蛋白激酶，细胞内底物为磷酸化酶b。糖原磷酸化酶同时受到共价修饰和变构作用的调节。◎ 肌磷酸化酶激活的级联反应中第一个酶的全称为肌糖原磷酸化酶激酶的激酶。◎ 高等动物细胞中酶活性的调节为磷酸化/去磷酸化作用。细菌中酶活性的调节为腺苷酰化/去腺苷酰化作用。◎ 核膜直接参与DNA复制的起始过程。◎ 脂肪和糖原都是作为供能物质被贮存的。◎ 葡萄糖进入肌肉和脂肪细胞的运输是它们利用葡萄糖的限制过程。◎ 可逆地与膜结合，并以其膜结合型和可溶型的互变来影响酶的活性和调节酶的活性，这类酶称双关酶。◎ 双关酶与膜结合状态和溶解状态的构象不同，其理化性质和动力学参数也不同。◎ 细胞内ATP浓度的变化，可通过双关酶的膜结合型/可溶型比值的改变来调节糖代谢的流量和去向。◎ 线粒体内膜的跨膜电位（ΔΨ）为导肽的蛋白转移提供能量。◎ 凡牵引蛋白跨膜运送至线粒体内基质的导肽，一般均含有导向基质肽段和水解部位。◎ 泛素的甘氨酸与底物赖氨酸的远端氨基形成异肽键。通常一个蛋白可以结合几个泛素分子。◎ 电位门控通道有：Na+通道、K+通道、Ca2+通道，由一条肽链组成，跨膜部分形成α-螺旋，中央部分形成离子通道。配体门控通道有：乙酰胆碱受体通道、氨基酸受体、单胺类受体通道、Ca2+激活的K+通道。◎ 神经组织对靶细胞膜透性和细胞代谢的调节可通过神经递质、局部递质、循环激素三种方式进行。◎ 细胞质膜受体分：依赖于神经递质的离子通道、与信号转导蛋白相偶联的受体、生长因子受体。◎ 体是信使RNA与蛋白质的复合物。它保护mRNA免受核酸酶的作用和控制其翻译功能。◎ 翻译控制RNA为20-30bp的寡聚核苷酸，可抑制翻译作用，具寡聚尿苷酸，可与信使RNA形成双链。◎ 酵母中的质粒为2μDNA，它包装在核小体中。◎ 病毒表达系统有：牛痘病毒（为双链DNA病毒）、昆虫多角体病毒、逆转录病毒、腺病毒。◎ Ti质粒只用于双子叶植物和少数单子叶植物的转基因。◎ DNA完全降解长用于建立次级基因文库。◎ 常用载体有：细菌质粒、酵母质粒、噬菌体、病毒。◎ 表示修饰基团在碱基上的写在碱基符号左方，表示修饰基团在核糖上的写在碱基符号左方。◎ Am表示：2’-O-甲基腺苷。ψ表示：假尿嘧啶核苷。DHU表示：二氢尿嘧啶核苷。◎ 双螺旋结构模型的主要依据有：X-光衍射数据、Norweger研究、Chargaff规则、电位滴定行为。◎ 原核细胞中，DNA常与多胺（精胺、亚精胺）结合；正核细胞中DNA一般与组蛋白结合。◎ 提纯的DNA为白色纤维状固体，RNA为白色粉末，不溶于有机溶剂。◎ 琼脂糖凝胶电泳一般分离较大的分子，聚丙烯酰胺凝胶电泳用于分离较小的分子。◎ 核酸的变性指核酸双螺旋的氢键的断裂，变成单链。核酸的降解是指多核苷酸链上的共价键（3’，5’-磷酸二酯键）的断裂。◎ 变性后DNA的粘度降低，浮力密度升高，生物活性丧失。DNA的变性是爆发式的。◎ DNA制品应保存在较高浓度的缓冲液或溶液中。常用1M/L的NaCl保存。◎ 苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸在近紫外区有光吸收是因为其R基团上含有苯环共轭双键系统。◎ 含两个以上肽键的化合物在碱性溶液中与铜离子生成紫红色到蓝紫色的络合物，称双缩脲反应。◎ 蛋白一级结构又称共价结构。包括肽链的数目、端基组成、氨基酸序列和二硫键位置。◎ 单体蛋白是由几个独立的肽段以二硫键连接而成的小分子蛋白。◎ 蛋白质变性的表现有：⑴丧失生物活性；⑵溶解度降低，粘度加大，扩散系数变小；⑶化学性质的变化；⑷对蛋白酶降解敏感性加大。◎ 蛋白质变性主要是由蛋白质分子内部的结构发生改变而引起的。◎ 血浆脂蛋白按其密度分为：乳糜微粒、极低密度脂蛋白、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白，由脂蛋白、磷脂、脂肪、胆固醇组成，是各种脂质在体内的运输形式。◎ 活性中心是指酶分子中直接和底物结合，并和酶的催化作用直接有关的部位。有两个功能部位：结合部位和催化部位。◎ 酶浓缩液加入等体积的甘油，于-20℃保存。◎ 维生素B2是核躺醇与6，7-二甲基异咯嗪和缩合物。◎ 生物素的结构为带有戊酸侧链的噻吩与尿素结合的骈环。◎ 叶酸分子由蝶啶、对氨基苯甲酸、L-谷氨酸连接二而成。◎ 叶酸参与核酸的合成，是骨髓巨红细胞、白细胞等细胞成熟和分裂所必需的物质。◎ 维生素C是一种己糖酸内酯。◎ 植物中，维生素C、谷胱甘肽、NADP+的氧化还原反应相偶联，是呼吸系统的基础。◎ 硫辛酸是含硫的脂肪酸，是丙酮酸脱氢酶、α-酮戊二酸脱氢酶的辅基，在转酰基中起作用。◎ 维生素D是固醇类物质。◎ 糖链突出于细胞膜表面是细胞间识别的基础。◎ 胰凝乳蛋白酶专一地切断苯丙氨酸和亮氨酸的羧端肽键。◎ 酶蛋白的荧光主要来自色氨酸与酪氨酸。◎ 血红蛋白与氧结合的过程呈协同效应，是通过血红蛋白的变构现象来实现的。它的辅基是血红素。由组织产生的二氧化碳扩散至红细胞，从而影响血红蛋白和氧气的亲和力，这称为波尔效应。◎ 胶原蛋白是由3股肽链组成的超螺旋结构的大分子蛋白，并含有稀有的羟脯氨酸和羟赖氨酸，它们是在翻译后经羟化加工而形成的。◎ 胰岛素是胰岛-β-细胞分泌的多肽激素，是由前胰岛素原经专一性蛋白水解，失去N端信号肽成为胰岛素原。再经肽酶激活失去C肽，最后形成具有生物活性的胰岛素。◎ 横纹肌的结构蛋白主要是肌动蛋白和肌球蛋白。它们各自通过线性缔合而成细肌丝和粗肌丝，肌肉的运动和肌原纤维的收缩就是这两种丝相互滑动的结果。◎ 多聚L-谷氨酸的比旋随PH改变是因为构象改变，L-谷氨酸的比旋随PH改变是因为电荷不同。◎ 蛋白的磷酸化位点有丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸。◎ 氨基酸定量分析的经典方法是茚三酮。氨基酸序列测定中最普遍的方法是PITC法。◎ 内质网膜的表面附着大量核糖体是肽链合成的场所，内质网膜的腔内是新生肽链折叠、修饰的场所。高尔基体的主要功能是糖蛋白的肽链修饰和蛋白分类及细胞定位。◎ 分离蛋白混合物的方法主要是根据蛋白的下列性质：分自大小、溶解度、电荷、吸附作用/对其它分子的亲和力。◎ 蛋白的磷酸化是可逆的，蛋白磷酸化需要蛋白激酶，蛋白去磷酸化需要蛋白磷酸酯酶。◎ 骨骼肌肉的收缩主要由两种收缩蛋白肌动蛋白和肌球蛋白以及两种跳进蛋白肌钙蛋白和凝血酶原所完成。◎ 真核细胞中已合成的蛋白质通过内质网膜运输时有信号肽、信号识别颗粒、停泊蛋白、信号肽酶等参与识别和运输作用。◎ 免疫球蛋白G在用木瓜蛋白酶处理时，可产生Fab片段，在用胃蛋白酶处理时，可产生Fab’2片段。◎ 氨基酸脱羧酶需要磷酸吡哆醛作为辅酶，丝氨酸转羟甲基酶需要四氢叶酸作为辅酶。◎ 蛋白激酶对糖代谢的调节在于调节糖原磷酸化酶和糖原合成酶。◎ 酶可以分位六大类：氧化还原酶、转移酶、水解酶、裂合酶、异构酶、连接酶合成酶 ◎ 用酶偶联法测定果糖-6-磷酸激酶的活性可以用醛缩酶、丙酮酸异构酶和甘油磷酸异构酶和NADH测定340nm光吸收的变化；也可以用磷酸烯醇式丙酮酸激酶、乳酸脱氢酶和NADH测定340nm光吸收的变化。◎ 果糖磷酸激酶催化F-6-P和ATP生成F-1,6-P。其逆反应由果糖-1,6-二磷酸酯酶催化。逆向反应和正向反应不是同一个酶催化，构成了一个循环称底物循环。◎ 在动物组织中蛋白激酶就其底物磷酸化的残基种类，可分为三类：Ser/Thr、Tyr、Ser/Thr/Tyr蛋白激酶，而在微生物中还发现His残基的蛋白激酶。◎ 一个有效的自杀性抑制剂应具备：⑴无酶不反应；⑵为靶酶专一激活；⑶与靶酶反应比解离更迅速。◎ 酶与酶或酶与蛋白相互作用是广泛存在的，如酶与抗体，酶蛋白与蛋白激酶，酶与蛋白类激活剂或抑制剂，除此之外有蛋白水解酶对蛋白质的降解，凝血过程中各个因子形成的级联反应，补体系统中各组分，的相互作用，信号转导过程中诸多蛋白质质间的相互作用，肌肉中各组分间的相互作用。◎ 生物体内有一些核苷酸衍生物可作为辅酶而作用，如NAD+、NADP+、FAD、CoA。◎ 一些生长因子有酶的活性，如表皮生长因子（GEF）受体有蛋白酪氨酸激酶活性，转化生长因子β（TGFβ）受体有蛋白有丝氨酸/苏氨酸激酶活性。◎ 核酸分子中含有嘌呤碱、嘧啶碱，所以对波长260nm的光有强烈的吸收。◎ 转移核糖核酸一般是由74个到85个核苷酸所组成。◎ 真核生物染色体DNA的主要结构特点是内含子和重复序列。◎ 细菌氨基酸饥饿时，rRNA的合成受到ppGpp、ppGppp的调节，其合成是由空载tRNA引起的。◎ 核苷酸生物合成时，从IMP（肌苷酸）转变为AMP经过腺苷酰琥珀酸，转变为GMP经过黄嘌呤核苷酸（XMP）。◎ 作为克隆载体的质粒须具备的条件有：复制起点、筛选标记、在非功能区的单一酶切位点。◎ 核苷三磷酸在代谢中起重要作用。ATP是能量和磷酸基团转移的重要物质，UTP参与单糖转变和多糖合成，CTP卵磷脂合成，GTP供给肽链合成时所需的能量。◎ A5’pppp5’A经蛇毒磷酸二酯酶部分酶解可以产生ATP和AMP。◎ 造成一个单顺反子产生多种蛋白质的原因有：基因重排、选择性拼接和RNA编辑。◎ 真核生物tRNA的加工有剪切、修饰、剪接、接CCA、编辑。◎ snRNA主要参与mRNA的加工成熟，snoRNA主要参与rRNA的加工成熟。◎ 已知核糖体失活蛋白有两类，它们分别具有位点专一性的N-糖苷酶和磷酸二酯酶活性 ◎ 纤维素和直链淀粉都是葡萄糖的多聚物，在纤维素中葡萄糖的构型是β-吡喃，连接方式为1→4连接；在直链淀粉中葡萄糖的构型是α-吡喃，连接方式为1→4连接。◎ 辛基葡萄糖可以用来增溶膜蛋白。◎ 直链淀粉是一种多糖，它的基本单位是α-D-葡萄糖，它们以1→4糖苷键连接；纤维素也是一种多糖，它的基本单位是β-D-葡萄糖，它们以1→4糖苷键连接。◎ 在脂肪酸的分解代谢过程中，长链脂酰辅酶A以脂酰肉碱的形式运到线粒体内，经过β-氧化作用，生成乙酰辅酶A，参加三羧酸循环。◎ 用于膜蛋白研究的去垢剂应具备的性质是亲水亲脂平衡值大于15，临界团粒浓度高。◎ 研究放射性同位素标记的配基与膜上受体结合常用的方法有：平衡透析、超离心、凝胶过滤、超滤。◎ 脑下垂体分泌的属于糖蛋白激素有促卵泡激素、促甲状腺激素、促黄体生成激素。◎ 维生素A是萜类化合物；维生素C是糖类化合物；维生素D是固醇类化合物。◎ 视紫红蛋白的辅基是11-顺视黄醛。◎ 生物体内关键的三个中间代谢物是：6-磷酸葡萄糖、丙酮酸、乙酰CoA ◎ 在糖异声作用中由丙酮酸生成磷酸烯醇式丙酮酸，在线粒体内丙酮酸生成草酰乙酸是丙酮酸羧化酶催化的，同时消耗1ATP；然后在细胞质内经磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶催化，生成磷酸烯醇式丙酮酸，同时消耗1GTP。◎ 生物工程主要包括：发酵工程、基因工程、细胞工程、蛋白质工程、糖工程。◎ NO是最小的信号分子，其主要功能有：⑴改变cGMP水平参与神经递质信号转导；⑵抑制血小板凝集，⑶激活DNA修复酶；⑷高浓度时促进前列腺素合成；⑸引起细胞衰老和死亡。

第五篇：生化试验思考题总结

Shaonanlee 黑暗舞者DID 生化实验思考题总结

1.蛋白质定量测量的方法有哪些？简要说明其原理。

答：a.紫外吸收，在280nm处有最大吸收峰。

b.定氮法，利用蛋白质中氮元素含量为16%固定比例来测定。

c.分光光度计法，利用OD值和蛋白质浓度成正比的原理。显色剂为考蓝。d.双缩脲法。也是利用显色反应。e.Folin酚法。

2.如果凝胶过滤层析分离的蛋白质样品中含有多种蛋白质，在各蛋白质分子量已知的情况下，如何判断哪一种蛋白质时所想要的？

答：现在假设有三种蛋白质a b c，分子质量a>b>c。

那么，a最先流出，在体积V1处有一个洗脱体积，对应的a的溶液浓度在 V1处也最高，就会有一个OD值的峰值。b c同理。由不同的OD峰值，对应不同的洗脱体积，就可以筛选出想要的蛋白质。如果想要b，那么在第 二个吸收峰的时候，找到相应的洗脱体积，然后在其附近的所接到的溶液 进行选取。就会得到想要的蛋白质。

3.如果盐析后的样品不经脱盐处理便上样电泳，对其结果有何影响？

答：如果没有去除清蛋白里面的盐分，则会使电泳速度下降。原因在于溶液离子

强度太大，蛋白质表面的电荷减少，所以导致电泳速度下降，甚至无法泳动。

4.对电泳所得的结果如何进行定量分析？

答：将电泳完毕的样品（凝胶），按条带宽度的分布剪下，分别把每个小块样品

用NaOH溶液漂洗，再将漂洗过的溶液进行OD值的测量。

Shaonanlee 黑暗舞者DID

5.使SDS-PAGE具有高分辨率的三个因素是什么？

答：浓缩效应。电荷效应。分子筛效应。

6.实验所得的各点数据中，哪些易出现较大的误差？

答：有两个点。第一个，在三十秒的点，反应速度太快，时间如果掌握不准，容易

出现误差。另一个，在3min的点，反应速度很慢，斜率小，则倒数大，所以 时间掌握不好，也容易出现大误差。

7.假如把碱性磷酸酶对底物的亲和力提高十倍，实验方案该如何修改？

答：把底物和酶的浓度都降低。

8.请举出三种提取质粒的方法，并简要说明其中一种方法的原理。

答：碱裂解（要求原理，书上有）；一步法（见书上46，47页有关TELT试剂的内容）

；SDS法；煮沸法。

9.分析质粒DNA切割不完全的原因。

答：a.质粒因素：碱裂解时间太长，无法复性；乙醇挥发不完全，影响酶的活性。

b.酶的因素：酶的浓度太高或者太低。或者酶的活性降低。

c.酶切体系：温度不是最适温度；时间不够长；缓冲溶液的问题。

10.分析酶切后没有观察到目的DNA的原因。

答：a.重组失败。

b.酶切失败。

c.目的基因量太少。

11.从哪些方面可预防PCR出现假阳性结果？

答：假阳性就是出现了不该出现的条带。

a.防止污染，例如模板的污染。b.引物设计合适，保证特异性。c.控制反应条件。

d.必要时，要减少循环次数。