第一篇：Transwell侵袭实验全面总结
Transwell侵袭实验全面总结
第一节 概念
这里想明确两个概念，一个是Transwell，另一个是肿瘤细胞侵袭模型。
1．Transwell
trans-这个词根有转移、转运、穿过等意思，well有小室的意思，可以从字面上理解，这是一类有通透性的杯状的装置，根据Corning公司的Transwell说明书中的介绍，可以认为这是一种膜滤器（Membrane filters），也可认为是一种有通透性的支架（permeable supports）。更准确地说，Transwell应该是一种实验技术，这项技术的主要材料是Transwell小室（Transwell chamber，Transwell insert），其外形为一个可放置在孔板里的小杯子，不同厂家对Transwell会有不同的命名，而不同型号也可有不同形状，不同大小，根据实验需要，可有不同选择。
但无论是何种外形，其关键部分都是一致的，那就是杯子底层的一张有通透性的膜，而杯子其余部分的材料与普通的孔板是一样。这层膜带有微孔，孔径大小有0.1－12.0µm，根据不同需要可用不同材料，一般常用的是聚碳酸酯膜（polycarbonate membrane）。下图是一个Transwell装置的纵切面
将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。我们将细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。
应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。当然不同细胞其体积不同，具体选择时要考虑到细胞大小。这里主要谈几种大家常用的实验：
（1）共培养体系：
小于3.0um孔径条件下，细胞不会迁徙通过，因此，若研究不涉及细胞运动能力，不需要细胞穿过聚碳酸酯膜，则应选择3.0µm以下孔径。常用0.4、3.0µm。我们实验室用的是0.4µm。将细胞A种于上室，细胞B种于下室，可以研究细胞B分泌或代谢产生的物质对细胞A的影响。
（2）趋化性实验
可用5.0、8.0、12.0µm膜，上室细胞可穿过聚碳酸酯膜进入下室，计数进入下室的细胞量可反映下室成分对上室细胞的趋化能力。
①细胞B对细胞A的趋化作用：将细胞A种于上室，细胞B种于下室，可以研究细胞B分泌或代谢产生的物质对细胞A的趋化作用。
②趋化因子对细胞的趋化作用：将细胞种于上室，下室加入某种趋化因子，可研究该趋化因子对细胞的趋化作用。
（3）肿瘤细胞迁移实验
常用8.0、12.0µm膜，上室种肿瘤细胞，下室加入FBS或某些特定的趋化因子，肿瘤细胞会向营养成分高的下室跑，计数进入下室的细胞量可反映肿瘤细胞的迁移能力。
（4）肿瘤细胞侵袭实验常用8.0、12.0µm膜，原理与肿瘤细胞迁移实验类似。
侵袭实验，其实原理简单地说就是用一层膜将高营养的培养液和低营养的培养液隔开，细胞放在低营养的培养液里，为了找吃的，细胞会往高营养的培养液里面跑，但是有膜挡着，所以要穿过膜才行。我们在膜上涂上一层基质胶，模仿细胞外基质，于是细胞要把基质消化了才可以从低营养的培养液跑到高营养的培养液里面，最后我们检测高营养的培养液里细胞量就可以知道细胞的侵袭能力了，大概原理就是这样的
．肿瘤细胞侵袭模型
用于研究肿瘤细胞侵袭能力的肿瘤细胞侵袭模型有如下几种（引自司徒镇强《细胞培养》）： 2．1 体内癌细胞侵袭模型 2．1．1 皮下移植侵袭模型 2．1．2 肌肉内移植侵袭模型 2．1．3 腹腔内移植侵袭模型 2．1．4 小鼠肾包膜下移植侵袭模型 2．1．5 鼠睾丸包膜下移植侵袭模型 2．1．6 小鼠耳廓皮下移植侵袭模型 2．1．7 鼠爪垫皮下移植侵袭模型 2．1．8 视网内界膜侵袭模型 2．2 体外癌细胞侵袭模型 2．2．1 体外静止器官培养法
2．2．1．1 半固体培养基单细胞器官培养法 2．2．1．2 液体培养基单细胞器官培养法 2．2．2 半体外半体内器官培养法 2．2．3 单层细胞器官培养法 2．2．4 瘤细胞球体器官培养法 2．2．4．1 静止球体器官培养法 2．2．4．2 旋转摇动球体器官培养法 2．2．5 单层细胞侵袭实验模型 2．2．6 Transwell侵袭小室测定法 可见，Transwell与侵袭实验之间并不能划等号，Transwell有多种应用，侵袭实验也有多种方法。所谓Transwell侵袭实验，其实是指将Transwell这一技术应用于肿瘤细胞侵袭研究的一种实验。由于其简单易行、重复性好，因而得到了越来越广泛的应用，但不能认为研究肿瘤侵袭只有Transwell一种方法。
第二节 Transwell侵袭实验 实验用品：① Transwell小室：
多种厂家可提供，论坛里常用的是Costar、Corning、BD生产的小室，我们实验室用的是Chemicon公司的ECM550系列，另有Boyden chamber、Millipore公司的millicell和雕弓满月射天狼战友介绍的Thincert。
这些厂家提供的小室，有的已铺好基质胶，买来就可以用，很方便，但也比较贵，我们实验室用的Chemicon公司的ECM550系列是已经铺好胶的，质量很好，但是非常贵，24孔板配套的小室，每个价格约130元，不推荐给大家。BD也有已包被好的，价格不清楚。Coster和Corning公司生产的小室，是论坛里比较常用的，好像是要自己铺胶，但据说每个小室成本只有40左右，应该比较适合中国国情。
下面是一些战友提供的价格，具体建议大家联系代理商咨询。linanping1979战友提供的价格：coster的24孔板的transwell的价格是456元RMB，8µm，用于肿瘤的侵袭实验。iceyxy战友提供的价格：Millipore的8µm的50个1760RMB，0.4µm的2000多，是一次性的。梅林战友提供的BD价格： 240RMB一块（6.5um，24孔，12instert），好像是没胶的。liguofan说国产的boyden30块一个。jjyy提供的价格是：corning cat No.3422.6.5mm transwell with 8.0um prore polycarbonate membrane insert，Qty 48,950人民币不到。平均每个20元不到。
Transwell小室按照公司的要求，都是一次性使用的。不过其实洗洗泡泡还是可以重复用的。我用的Chemicon公司的ECM554，用完后擦去基质胶，再用胰酶和75%酒精泡，可以把膜洗得很干净，用前用紫外里外都照30min。sword01战友提供的处理方法：用棉签轻轻擦去胶和反面细胞，清水冲洗，超声清洗，低挡，30min，清水3×5min，蒸馏水3×5min，室温凉干，用前紫外线小室正面3h，反面6h，微波，低火10min×2。
因为我买的是铺好胶的，所以没买Matrigel，二次利用的小室只用来做不需要铺胶的迁移实验。以前的Chemicon ECM550系列，膜很结实，擦不坏，可以反复用很多次，但现在的膜已经改用一种很薄很脆的材料，一般只能重复用一次，真黑啊！很多战友说Costar和Corning也是可以重复用的，大家可以试试。
另外，根据论坛战友提供的信息，osmonic公司有专用的膜出售，鼎国生物代理。Transwell小室用过后，可把原来的膜切下，贴上osmonic公司的膜，这样又可以用了，不过我没用过，有兴趣的可以试试。maojianwen战友的使用方法： trasnwell小室做一次后，将原来的膜去掉，重新泡酸，泡酒精，使用前照紫外，然后用女士用指甲油（注意用无色较稀的）将osmonic公司的膜贴上，剪掉多余的边缘。再照紫外。
② 上层培养液：
上层培养液采用无血清培养基，为维持渗透压，需加入0.05%-0.2% BSA。
③ 细胞：
值得注意的是，有侵袭能力的细胞才可用于Transwell侵袭实验。建议实验前先用酶谱法检测MMPs的表达，特别是MMP-2的表达。如果不清楚细胞MMPs的表达情况，就盲目进行Transwell侵袭实验，可能会造成不必要的浪费，一次Transwell侵袭实验花钱少则数百，多则数千，并不是笔小数目，还是小心为妙。另外，为了让实验结果更明显，可先撤血清让细胞饥饿12－24h，再进行实验。
④ 基质胶：
常用的是人工重构基底膜材料Matrigel，主要成分为层黏连蛋白和Ⅳ型胶原，生产厂家有BD、美国Collaborative Rsearch公司等。CaoY战友的帖这么说的：Matrigel是BD公司生产的，是一种细胞外基质，4度时是液体，在37度会逐渐凝固成胶状，不可逆。同样的东西在sigma叫ECM。zhangyong1036战友提供的价格：BD公司的matrigel 1500左右。如果购买的小室是已经铺好基质胶的，那么Matrigel就不需要购买了。
⑤ 下层培养液：
下层常用含5%－10% FBS的培养基，具体浓度根据细胞侵袭力而定，侵袭力弱的细胞可适当提高FBS浓度。下层也可用趋化因子，有战友将纤维粘连蛋白加入下层培养液作为趋化因子，但个人认为，FBS仍是最合适的。
⑥ 细胞培养板：
常用于Transwell侵袭实验的细胞培养板有6孔板、12孔板、24孔板等，以24孔最常用。细胞培养板没什么特殊要求，普通的细胞培养板就可以。但要注意，细胞培养板应当与购买的Transwell小室相配套。
⑦ 此外，膜的下室面可涂上纤维粘连蛋白（fibronectin，FN，Sigma有售），这样做的目的是使穿过膜的细胞更好地附着在膜上，也可用胶原（collagen）或明胶（gelatin）。很多战友认为这不是必须的，而且我也是不涂的，细胞照样贴壁很好。如果贴壁不好的话可以试试看。linanping1979战友认为，如果培养时间很长（>24h），细胞还是会掉到下室里面去，所以有条件的话，最好还是在膜下层涂上FN。另外，值得一提的是，膜下层涂上FN还有一定的趋化作用。zhangyong1036战友提供的价格： sigma的fibronectin，价格在1500左右。2．步骤
2．1 Transwell小室制备
2．1．1 无基质胶Transwell小室制备
① 包被基底膜：
用50mg/LMatrigel 1：8稀释液包被Transwell小室底部膜的上室面，4℃风干。如果需要在下室面铺FN的话，可将200ul枪头的尖端剪掉，吸取FN均匀涂抹在小室的下面。用胶原（collagen）的话，一般配成0.5mg/ml，直接用枪吸了涂在膜上。
② 水化基底膜：
吸出培养板中残余液体，每孔加入50ul含10g/LBSA的无血清培养液，37℃，30min。另有tianjin_glioma战友提供的方法：在上室的聚碳酸酯膜上加入稀释后的Matrigel（3.9ug/ul）60-80µl（注意体积不可太大，以刚把聚碳酸酯膜浸湿为最好），置37℃ 30min使Matrigel聚合成凝胶。
2．1．2 有基质胶的Transwell小室制备
Chemicon公司的ECM550系列说明书要求，将小室放入培养板中，在上室加入300µl预温的无血清培养基，室温下静置15－30min，使基质胶再水化。再吸去剩余培养液。
2．2 制备细胞悬液
① 制备细胞悬液前可先让细胞撤血清饥饿12－24h，进一步去除血清的影响。但这一步并不是必须的。② 消化细胞，终止消化后离心弃去培养液，用PBS洗1－2遍，用含BSA的无血清培养基重悬。调整细胞密度至1－10×105，个人认为不要超过5×105。
具体实验时采用密度要自己摸索，因为不同细胞，其侵袭能力是不同的。个人经验，细胞量过多，穿过膜的细胞会过多过快，如果最后用计数法统计结果的话将难以计数；而过少的话，可能还没到检测的时间点，所有的细胞都已穿过，因此最少也要保证在收样的时候，上室内还要有一定量的细胞存在。
个人认为，对照组和处理尽量不要分开计数，因为细胞数目的差异会严重影响实验结果。如果需要对细胞预处理而不得不分开计数，那么计数一定要多重复几次，力求准确，尽量保证对照组和处理组细胞密度一致。
2．3 接种细胞
① 取细胞悬液100－200µl加入Transwell小室，不同公司的、不同大小的Transwell小室对细胞悬液量有不同要求，请参考说明书。24孔板小室一般200µl。
② 24孔板下室一般加入500µl含FBS或趋化因子的培养基，不同的培养板加的量有不同要求，具体请参考说明书。这里要特别注意的是，下层培养液和小室间常会有气泡产生，一旦产生气泡，下层培养液的趋化作用就减弱甚至消失了，在种板的时候要特别留心，一旦出现气泡，要将小室提起，去除气泡，再将小室放进培养板。
③ 培养细胞：常规培养12－48h（主要依癌细胞侵袭能力而定）。时间点的选择除了要考虑到细胞细胞侵袭力外，处理因素对细胞数目的影响也不可忽视。
以我的课题为例，我使用的药物不仅会抑制肿瘤细胞侵袭力，还对细胞增殖有明显抑制。我选择的药物浓度是用MTT筛选出的72h的IC50。用这个浓度处理细胞，24h内对细胞增殖并无明显抑制，但24h后，抑制作用就开始出现了。所以，用这个浓度来做Transwell，处理时间也必须限定在24h内，否则一旦药物抑制了细胞增殖或者诱导出凋亡，使处理组细胞数目少于对照组，那么就难以肯定穿过膜的细胞比对照组少，究竟是由于侵袭被抑制引起，还是处理后细胞数目本身就比对照组少而引起的了。
时间过长不可以，同样，过短也不行，因为细胞内会有一定量的MMPs储存，短时间内可能侵袭能力不会有太大改变。同时从药物被吸收进去，进而发挥作用，影响MMPs表达，到最后释放到培养基中，还需要一个过程。时间点的选择可尽量长点，也可选择多个时间点研究时间依赖效应，但前提是这个时间范围内细胞数目不能有明显变化。
另外，我看到细胞在小室内的形态不是正常培养贴壁的形态，而是圆形的，仍是悬浮时的形态，不过会聚集成团，所以看到细胞不正常贴壁也不要紧张，是正常现象。在培养过程中，膜下会逐渐有少量小气泡产生，这是正常现象，可不予处理，但我遇到过培养一段时间后，膜下出现了大气泡，幸亏及时发现，否则后果将非常严重。因此，个人建议，最好接种细胞后1－2h把培养板从培养箱里拿出来看看，确信没有大气泡产生。
2．4 结果统计
检测穿过的细胞数有两种方法： 2．4．1 直接计数法
2．4．1．1 “贴壁”细胞计数
这里所谓的“贴壁”是指细胞穿过膜后，可以附着在膜的下室侧而不会掉到下室里面去。如下图： 通过给细胞染色，可在镜下计数细胞：
① 用棉签擦去基质胶和上室内的细胞。
染色：常用的染色方法有结晶紫染色、台肦蓝染色、Giemsa染色、苏木精染色、伊红染色等。
个人推荐采用0.1%结晶紫染色，这种方法有如下优势：（1）不需要固定细胞，直接染色即可。（2）配制简单方便。（3）染色后可以用33%醋酸脱色，将结晶紫完全洗脱下来，洗脱液可在酶标仪上570nm 测其OD值，间接反映细胞数。个人认为这是结晶紫染色最大的优势所在。因为，虽然经过准确的细胞计数，往往穿过膜的细胞数仍难以准确控制，可能某一批实验穿过的细胞会特别多，以致细胞成堆，这种情况下就难以计数了，这种情况下就可以用醋酸脱色后用酶标仪检测。使用结晶紫染色要注意，染色前要将膜风干，否则可能会染不上。
③ 细胞计数：我们使用的是Leica DC 300F正置显微镜进行观察和拍照，把Transwell小室反过来底朝上就可清楚看到小室底膜上下室侧附着的细胞。也有不少人用手术刀将膜切下后染色，再贴在玻片上，滴二甲苯，再盖上盖玻片，就可以长期保存，但是这样做小室就成了一次性的了，未免有点浪费。
取若干个视野计数细胞个数。论坛里一般采用3－5个视野，也有人用10个，都是随机选取，个人认为这样选择的视野带有很大的偶然性，也会掺进人为影响，特别是计数视野较少的时候。我选取16个视野，不是随机选择，而是有固定的位置。我们使用的显微镜所看到的视野的直径刚好是Chemicon公司的ECM550系列小室底面膜的直径的1/4。
如图，蓝色部分表示膜的大小，白色圆形表示视野的大小，绿色方形则表示拍照时所能拍下的视野的中心部分。这样，每个小室都拍摄如下图的16个视野进行计数，这样得到结果是比较客观和准确的。2．4．2 间接计数法
间接计数法主要用于穿过细胞过多，而无法通过计数获得准确的细胞数所采用的方法，与常用的MTT实验是同样的原理。2．4．2．1 MTT法
① 用棉签擦去基质胶和上室内的细胞
② 24孔板中加入500µl含0.5mg/ml MTT的完全培养基，将小室置于其中，使膜浸没在培养基中，37℃ 4h后取出。
③ 24孔板中加入500µl DMSO，将小室置于其中，使膜浸没在DMSO中，振荡10min，使甲臜充分溶解。取出小室，24孔板于酶标仪上测OD值。
2．4．2．2 荧光试剂检测
这类方法一般是与Transwell小室一起出售的，其原理与MTT法类似，是用一种荧光染料染细胞，再将细胞裂解，检测荧光值。Chemicon的ECM554即属于这类。
2．4．2．3 结晶紫检测
上文已说过，这里不再赘述，原理与MTT法也是类似的。但结晶紫染色还有个优点，就是染色和脱色的过程并不影响膜上细胞，在脱色后还可重新染色。2．4．2．4 “非贴壁”细胞计数
由于某些细胞自身的原因或某些膜的关系，有时细胞在穿过膜后不能附着在膜上，而是掉进下室。如下图：
Transwell的其他应用的实验步骤
1．Transwell肿瘤细胞迁移实验
过程与Transwell侵袭实验基本一致，不同的只是不需要铺Matrigel。个人认为，由于没有基质胶的阻挡，细胞穿过膜的速度较侵袭实验明显加快，所以细胞量要更大。我做侵袭实验的细胞密度是1×105，而迁移实验的密度是1×106。另外，下层培养液的FBS浓度也可适当下调，我做侵袭实验的浓度是5%，迁移实验的浓度是2.5%。
2．cathywxy战友的Transwell上皮细胞培养步骤
做了一段时间的原代细胞培养，把经验拿出来跟大家分享一下吧，请大家共同探讨：
（1）将雄性wistar大鼠麻醉，开胸，将气管取出，置于4℃含0.1%胰蛋白酶XIV（Sigma），100 U/ml青霉素和100ug/ml链霉素（Gibco-BRL）、无Ca 2＋、Mg 2＋，无血清的MEM。
（2）用无菌的细胞刮棒刮气管内壁，将所得溶液离心后得到游离细胞。
（3）离心后立即用新鲜的上述MEM溶液（含10%胎牛血清）清洗3次，以中和胰蛋白酶，再用含5%胎牛血清、100U/ml 青霉素和100 ug/ml 链霉素的LHC-8 medium（Biofluids）冲洗一次。
（4）冲洗过后，将得到的细胞悬液用台盼兰测定活力，若存活率大于90%，则将细胞以10 /cm密度接种于可通透的多聚碳滤膜上（12 mm SNAPWELL，Costar），以37°C 5%CO2-95% 空气含5% 胎牛血清（Gibco-BRL）and 100 U/ml 青霉素and 100ug/ml 链霉素的LHC-8 medium孵育6～10天。
（5）孵育后，经测定跨上皮电阻在1000~2000Ω之间，即可用于电生理试验。显微镜下气管上皮细胞形细胞呈铺路石状，圆形核位于中央，生长时常彼此紧密连接成单层细胞 62
3.metastasis战友的Transwell B16细胞的体外迁移实验
我以前用 costar的Transwell做过B16细胞的体外迁移实验，具体是这么做的：首先把Transwell倒置，在Transwell的PVPF膜（0.8 um）的下表面涂一层fibronectin（10 ug/ml，50ul），37度2小时，PBS洗一遍后，放入预先每孔加有600ul的培养基（含10%血清）的24孔板内，后在Transwell的内室加入细胞（100ul，用含0.1%血清的培养基稀释好自己所需密度），放入培养箱，12-18小时后，取出Transwell，用棉签擦去PVPF膜靠近内室那一面的细胞，另一面的细胞用甲醛室温固定30分钟，结晶紫染色20分钟，用清水洗3遍以上，后在显微镜下观察细胞，记数。
4．mci战友的内皮细胞HMEC-1迁移实验
1%明胶处理的transwell经无血清的MCDB131培液于培养箱中平衡1小时后，上室加入100µl用serum-free MCDB131稀释的5×104/孔的HMEC及不同浓度的药物，下室加入0.6ml serum-free的MCDB131培液及20%FCS刺激迁移，同时设置相应阴性及阳性对照，置于CO2培养箱中作用8小时，然后弃去孔中培液，用90%酒精常温固定30分钟，0.1%结晶紫常温染色10分钟，清水漂净，用棉签轻轻擦掉上层未迁移细胞，显微镜（Olympus，DP50，Japan）。下观察并拍照，最后用10%乙酸100µl/孔抽提10分钟，于600nm处测定OD值。抑制率计算公式为：抑制率（%）=【（OD值给药组-OD值无刺激阴性对照）/（OD值不加药阳性对照-OD值无刺激阴性对照）】×100%。
第二篇：Transwell侵袭实验总结
Transwell侵袭实验实验用品：
① Transwell小室：
多种厂家可提供，论坛里常用的是Costar、Corning、BD生产的小室，我们实验室用的是Chemicon公司的ECM550系列，另有Boyden chamber、Millipore公司的millicell和雕弓满月射天狼战友介绍的Thincert。
这些厂家提供的小室，有的已铺好基质胶，买来就可以用，很方便，但也比较贵，我们实验室用的Chemicon公司的ECM550系列是已经铺好胶的，质量很好，但是非常贵，24孔板配套的小室，每个价格约130元，不推荐给大家。BD也有已包被好的，价格不清楚。Coster和Corning公司生产的小室，是论坛里比较常用的，好像是要自己铺胶，但据说每个小室成本只有40左右，应该比较适合中国国情。
Transwell小室按照公司的要求，都是一次性使用的。不过其实洗洗泡泡还是可以重复用的。我用的Chemicon公司的ECM554，用完后擦去基质胶，再用胰酶和75%酒精泡，可以把膜洗得很干净，用前用紫外里外都照30min。sword01战友提供的处理方法：用棉签轻轻擦去胶和反面细胞，清水冲洗，超声清洗，低挡，30min，清水3×5min，蒸馏水3×5min，室温凉干，用前紫外线小室正面3h，反面6h，微波，低火10min×2。因为我买的是铺好胶的，所以没买Matrigel，二次利用的小室只用来做不需要铺胶的迁移实验。以前的Chemicon ECM550系列，膜很结实，擦不坏，可以反复用很多次，但现在的膜已经改用一种很薄很脆的材料，一般只能重复用一次，真黑啊！很多战友说Costar和Corning也是可以重复用的，大家可以试试。
另外，根据论坛战友提供的信息，osmonic公司有专用的膜出售。Transwell小室用过后，可把原来的膜切下，贴上osmonic公司的膜，这样又可以用了，不过我没用过，有兴趣的可以试试。使用方法： trasnwell小室做一次后，将原来的膜去掉，重新泡酸，泡酒精，使用前照紫外，然后用女士用指甲油（注意用无色较稀的）将osmonic公司的膜贴上，剪掉多余的边缘。再照紫外。
② 上层培养液：
上层培养液采用无血清培养基，为维持渗透压，需加入0.05%-0.2% BSA。
③ 细胞：
值得注意的是，有侵袭能力的细胞才可用于Transwell侵袭实验。建议实验前先用酶谱法检测MMPs的表达，特别是MMP-2的表达。如果不清楚细胞MMPs的表达情况，就盲目进行Transwell侵袭实验，可能会造成不必要的浪费，一次Transwell侵袭实验花钱少则数百，多则数千，并不是笔小数目，还是小心为妙。另外，为了让实验结果更明显，可先撤血清让细胞饥饿12－24h，再进行实验。
④ 基质胶：
常用的是人工重构基底膜材料Matrigel，主要成分为层黏连蛋白和Ⅳ型胶原，生产厂家有BD、美国Collaborative Rsearch公司等。CaoY战友的帖这么说的：Matrigel是BD公司生产的，是一种细胞外基质，4度时是液体，在37度会逐渐凝固成胶状，不可逆。同样的东西在sigma叫ECM。如果购买的小室是已经铺好基质胶的，那么Matrigel就
不需要购买了。
⑤ 下层培养液：
下层常用含5%－10%
FBS的培养基，具体浓度根据细胞侵袭力而定，侵袭力弱的细胞可适当提高FBS浓度。下层也可用趋化因子，有战友将纤维粘连蛋白加入下层培养液作为趋化因子，但个人认为，FBS仍是最合适的。
⑥ 细胞培养板：
常用于Transwell侵袭实验的细胞培养板有6孔板、12孔板、24孔板等，以24孔最常用。细胞培养板没什么特殊要求，普通的细胞培养板就可以。但要注意，细胞培养板应当与购买的Transwell小室相配套。
⑦此外，膜的下室面可涂上纤维粘连蛋白（fibronectin，FN，Sigma有售），这样做的目的是使穿过膜的细胞更好地附着在膜上，也可用胶原（collagen）或明胶（gelatin）。很多战友认为这不是必须的，而且我也是不涂的，细胞照样贴壁很好。如果贴壁不好的话可以试试看。linanping1979战友认为，如果培养时间很长（>24h），细胞还是会掉到下室里面去，所以有条件的话，最好还是在膜下层涂上FN。另外，值得一提的是，膜下层涂上FN还有一定的趋化作用。
2．步骤
2．1 Transwell小室制备
2．1．1 无基质胶Transwell小室制备
① 包被基底膜：
用50mg/LMatrigel 1：8稀释液包被Transwell小室底部膜的上室面，4℃风干。如果需要在下室面铺FN的话，可将200ul枪头的尖端剪掉，吸取FN均匀涂抹在小室的下面。用胶原（collagen）的话，一般配成0.5mg/ml，直接用枪吸了涂在膜上。
② 水化基底膜：
吸出培养板中残余液体，每孔加入50ul含10g/LBSA的无血清培养液，37℃，30min。
另有tianjin_glioma战友提供的方法：在上室的聚碳酸酯膜上加入稀释后的Matrigel（3.9ug/ul）60-80µl（注意体积不可太大，以刚把聚碳酸酯膜浸湿为最好），置37℃ 30min使Matrigel聚合成凝胶。
2．1．2 有基质胶的Transwell小室制备
Chemicon公司的ECM550系列说明书要求，将小室放入培养板中，在上室加入300µl预温的无血清培养基，室温下静置15－30min，使基质胶再水化。再吸去剩余培养液。
2．2 制备细胞悬液
① 制备细胞悬液前可先让细胞撤血清饥饿12－24h，进一步去除血清的影响。但这一步并不是必须的。
② 消化细胞，终止消化后离心弃去培养液，用PBS洗1－2遍，用含BSA的无血清培养基重悬。调整细胞密度至1－10×105，个人认为不要超过5×105。具体实验时采用密度要自己摸索，因为不同细胞，其侵袭能力是不同的。个人经验，细胞量过多，穿过膜的细胞会过多过快，如果最后用计数法统计结果的话将
难以计数；而过少的话，可能还没到检测的时间点，所有的细胞都已穿过，因此最少也要保证在收样的时候，上室内还要有一定量的细胞存在。
个人认为，对照组和处理尽量不要分开计数，因为细胞数目的差异会严重影响实验结果。如果需要对细胞预处理而不得不分开计数，那么计数一定要多重复几次，力求准确，尽量保证对照组和处理组细胞密度一致。
2．3 接种细胞
① 取细胞悬液100－200µl加入Transwell小室，不同公司的、不同大小的Transwell小室对细胞悬液量有不同要求，请参考说明书。24孔板小室一般200µl。
② 24孔板下室一般加入500µl含FBS或趋化因子的培养基，不同的培养板加的量有不同要求，具体请参考说明书。这里要特别注意的是，下层培养液和小室间常会有气泡产生，一旦产生气泡，下层培养液的趋化作用就减弱甚至消失了，在种板的时候要特别留心，一旦出现气泡，要将小室提起，去除气泡，再将小室放进培养板。
③ 培养细胞：常规培养12－48h（主要依癌细胞侵袭能力而定）。时间点的选择除了要考虑到细胞细胞侵袭力外，处理因素对细胞数目的影响也不可忽视。以我的课题为例，我使用的药物不仅会抑制肿瘤细胞侵袭力，还对细胞增殖有明显抑制。我选择的药物浓度是用MTT筛选出的72h的IC50。用这个浓度处理细
胞，24h内对细胞增殖并无明显抑制，但24h后，抑制作用就开始出现了。所以，用这个浓度来做Transwell，处理时间也必须限定在24h内，否则一旦药物抑制了细胞增殖或者诱导出凋亡，使处理组细胞数目少于对照组，那么就难以肯定穿过膜的细胞比对照组少，究竟是由于侵袭被抑制引起，还是处理后细胞数目本身就比对照组少而引起的了。
时间过长不可以，同样，过短也不行，因为细胞内会有一定量的MMPs储存，短时间内可能侵袭能力不会有太大改变。同时从药物被吸收进去，进而发挥作用，影响MMPs表达，到最后释放到培养基中，还需要一个过程。时间点的选择可尽量长点，也可选择多个时间点研究时间依赖效应，但前提是这个时间范围内细胞数目不能有明显变化。
另外，我看到细胞在小室内的形态不是正常培养贴壁的形态，而是圆形的，仍是悬浮时的形态，不过会聚集成团，所以看到细胞不正常贴壁也不要紧张，是正常现象。在培养过程中，膜下会逐渐有少量小气泡产生，这是正常现象，可不予处理，但我遇到过培养一段时间后，膜下出现了大气泡，幸亏及时发现，否则后果将非常严重。因此，个人建议，最好接种细胞后1－2h把培养板从培养箱里拿出来看看，确信没有大气泡产生。
第三节 Transwell的其他应用的实验步骤
1．Transwell肿瘤细胞迁移实验
过程与Transwell侵袭实验基本一致，不同的只是不需要铺Matrigel。个人认为，由于没有基质胶的阻挡，细胞穿过膜的速度较侵袭实验明显加快，所以细胞量要更大。我做侵袭实验的细胞密度是1×105，而迁移实验的密度是1×106。另外，下层培养液的FBS浓度也可适当下调，我做侵袭实验的浓度是5%，迁移实验的浓度是2.5%。
2．cathywxy战友的Transwell上皮细胞培养步骤
做了一段时间的原代细胞培养，把经验拿出来跟大家分享一下吧，请大家共同探讨：
（1）将雄性wistar大鼠麻醉，开胸，将气管取出，置于4℃含0.1%胰蛋白酶XIV（Sigma），＋＋100 U/ml青霉素和100ug/ml链霉素（Gibco-BRL）、无Ca
2、Mg 2，无血清的MEM。
（2）用无菌的细胞刮棒刮气管内壁，将所得溶液离心后得到游离细胞。
（3）离心后立即用新鲜的上述MEM溶液（含10%胎牛血清）清洗3次，以中和胰蛋白酶，再用含5%胎牛血清、100U/ml 青霉素和100 ug/ml 链霉素的LHC-8 medium（Biofluids）冲洗一次。
（4）冲洗过后，将得到的细胞悬液用台盼兰测定活力，若存活率大于90%，则将细胞以10 6/cm2密度接种于可通透的多聚碳滤膜上（12 mm SNAPWELL，Costar），以37°C 5%CO2-95% 空气含5% 胎牛血清（Gibco-BRL）and 100 U/ml 青霉素and 100ug/ml 链霉素的LHC-8 medium孵育6～10天。
（5）孵育后，经测定跨上皮电阻在1000~2000Ω之间，即可用于电生理试验。
显微镜下气管上皮细胞形细胞呈铺路石状，圆形核位于中央，生长时常彼此紧密连接成单层细胞片
链接：
3.metastasis战友的Transwell B16细胞的体外迁移实验
我以前用 costar的Transwell做过B16细胞的体外迁移实验，具体是这么做的：首先把Transwell倒置，在Transwell的PVPF膜（0.8 um）的下表面涂一层fibronectin（10 ug/ml，50ul），37度2小时，PBS洗一遍后，放入预先每孔加有600ul的培养基（含10%血清）的24孔板内，后在Transwell的内室加入细胞（100ul，用含0.1%血清的培养基稀释好自己所需密度），放入培养箱，12-18小时后，取出Transwell，用棉签擦去PVPF膜靠近内室那一面的细胞，另一面的细胞用甲醛室温固定30分钟，结晶紫染色20分钟，用清水洗3遍以上，后在显微镜下观察细胞，记数。
链接： http:///bbs/post/view?bid=66&id=2681611&sty=3&keywords=Transwell
4．mci战友的内皮细胞HMEC-1迁移实验
1%明胶处理的transwell经无血清的MCDB131培液于培养箱中平衡1小时后，上室加入100µl用serum-free MCDB131稀释的5×104/孔的HMEC及不同浓度的药物，下室加入0.6ml serum-free的MCDB131培液及20%FCS刺激迁移，同时设置相应阴性及阳性对照，置于CO2培养箱中作用8小时，然后弃去孔中培液，用90%酒精常温固定30分钟，0.1%结晶紫常温染色10分钟，清水漂净，用棉签轻轻擦掉上层未迁移细胞，显微镜（Olympus，DP50，Japan）。下观察并拍照，最后用10%乙酸100µl/孔抽提10分钟，于600nm处测定OD值。抑制率计算公式为：抑制率（%）=【（OD值给药组-OD值无刺激阴性对照）/（OD值不加药阳性对照-OD值无刺激阴性对照）】×100%。
链接： http:///bbs/post/view?bid=66&id=850667&sty=3&keywords=Transwell
第三篇：Transwell侵袭实验总结
1．Transwell
trans-这个词根有转移、转运、穿过等意思，well有小室的意思，可以从字面上理解，这是一类有通透性的杯状的装置，根据Corning公司的Transwell说明书中的介绍，可以认为这是一种膜滤器（Membrane filters），也可认为是一种有通透性的支架（permeable supports）。更准确地说，Transwell应该是一种实验技术，这项技术的主要材料是Transwell小室（Transwell chamber，Transwell insert），其外形为一个可放置在孔板里的小杯子，不同厂家对Transwell会有不同的命名，而不同型号也可有不同形状，不同大小，根据实验需要，可有不同选择。
但无论是何种外形，其关键部分都是一致的，那就是杯子底层的一张有通透性的膜，而杯子其余部分的材料与普通的孔板是一样。这层膜带有微孔，孔径大小有0.1－12.0µm，根据不同需要可用不同材料，一般常用的是聚碳酸酯膜（polycarbonate membrane）。下图是一个Transwell装置的纵切面
将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。我们将细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。
应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。当然不同细胞其体积不同，具体选择时要考虑到细胞大小。这里主要谈几种大家常用的实验：（1）共培养体系：
小于3.0um孔径条件下，细胞不会迁徙通过，因此，若研究不涉及细胞运动能力，不需要细胞穿过聚碳酸酯膜，则应选择3.0µm以下孔径。常用0.4、3.0µm。我们实验室用的是0.4µm。将细胞A种于上室，细胞B种于下室，可以研究细胞B分泌或代谢产生的物质对细胞A的影响。
（2）趋化性实验
可用5.0、8.0、12.0µm膜，上室细胞可穿过聚碳酸酯膜进入下室，计数进入下室的细胞量可反映下室成分对上室细胞的趋化能力。
①细胞B对细胞A的趋化作用：将细胞A种于上室，细胞B种于下室，可以研究细胞B分泌或代谢产生的物质对细胞A的趋化作用。
②趋化因子对细胞的趋化作用：将细胞种于上室，下室加入某种趋化因子，可研究该趋化因子对细胞的趋化作用。
（3）肿瘤细胞迁移实验
常用8.0、12.0µm膜，上室种肿瘤细胞，下室加入FBS或某些特定的趋化因子，肿瘤细胞会向营养成分高的下室跑，计数进入下室的细胞量可反映肿瘤细胞的迁移能力。
（4）肿瘤细胞侵袭实验常用8.0、12.0µm膜，原理与肿瘤细胞迁移实验类似。
transwell侵袭实验，其实原理简单地说就是用一层膜将高营养的培养液和低营养的培养液隔开，细胞放在低营养的培养液里，为了找吃的，细胞会往高营养的培养液里面跑，但是有膜挡着，所以要穿过膜才行。我们在膜上涂上一层基质胶，模仿细胞外基质，于是细胞要把基质消化了才可以从低营养的培养液跑到高营养的培养液里面，最后我们检测高营养的培养液里细胞量就可以知道细胞的侵袭能力了，大概原理就是这样的。
2．肿瘤细胞侵袭模型
用于研究肿瘤细胞侵袭能力的肿瘤细胞侵袭模型有如下几种（引自司徒镇强《细胞培养》）： 2．1 体内癌细胞侵袭模型 2．1．1 皮下移植侵袭模型 2．1．2 肌肉内移植侵袭模型 2．1．3 腹腔内移植侵袭模型 2．1．4 小鼠肾包膜下移植侵袭模型 2．1．5 鼠睾丸包膜下移植侵袭模型 2．1．6 小鼠耳廓皮下移植侵袭模型 2．1．7 鼠爪垫皮下移植侵袭模型 2．1．8 视网内界膜侵袭模型 2．2 体外癌细胞侵袭模型 2．2．1 体外静止器官培养法
2．2．1．1 半固体培养基单细胞器官培养法 2．2．1．2 液体培养基单细胞器官培养法 2．2．2 半体外半体内器官培养法 2．2．3 单层细胞器官培养法 2．2．4 瘤细胞球体器官培养法 2．2．4．1 静止球体器官培养法 2．2．4．2 旋转摇动球体器官培养法 2．2．5 单层细胞侵袭实验模型 2．2．6 Transwell侵袭小室测定法
可见，Transwell与侵袭实验之间并不能划等号，Transwell有多种应用，侵袭实验也有多种方法。所谓Transwell侵袭实验，其实是指将Transwell这一技术应用于肿瘤细胞侵袭研究的一种实验。由于其简单易行、重复性好，因而得到了越来越广泛的应用，但不能认为研究肿瘤侵袭只有Transwell一种方法。
① Transwell小室：
多种厂家可提供，论坛里常用的是Costar、Corning、BD生产的小室，我们实验室用的是Chemicon公司的ECM550系列，另有Boyden chamber、Millipore公司的millicell和雕弓满月射天狼战友介绍的Thincert。
这些厂家提供的小室，有的已铺好基质胶，买来就可以用，很方便，但也比较贵，我们实验室用的Chemicon公司的ECM550系列是已经铺好胶的，质量很好，但是非常贵，24孔板配套的小室，每个价格约130元，不推荐给大家。BD也有已包被好的，价格不清楚。Coster和Corning公司生产的小室，是论坛里比较常用的，好像是要自己铺胶，但据说每个小室成本只有40左右，应该比较适合中国国情。
下面是一些战友提供的价格，具体建议大家联系代理商咨询。linanping1979战友提供的价格：coster的24孔板的transwell的价格是456元RMB，8µm，用于肿瘤的侵袭实验。iceyxy战友提供的价格：Millipore的8µm的50个1760RMB，0.4µm的2000多，是一次性的。梅林战友提供的BD价格： 240RMB一块（6.5um，24孔，12instert），好像是没胶的。liguofan说国产的boyden30块一个。jjyy提供的价格是：corning cat No.3422.6.5mm transwell with 8.0um prore polycarbonate membrane insert，Qty 48,950人民币不到。平均每个20元不到。
Transwell小室按照公司的要求，都是一次性使用的。不过其实洗洗泡泡还是可以重复用的。我用的Chemicon公司的ECM554，用完后擦去基质胶，再用胰酶和75%酒精泡，可以把膜洗得很干净，用前用紫外里外都照30min。sword01战友提供的处理方法：用棉签轻轻擦去胶和反面细胞，清水冲洗，超声清洗，低挡，30min，清水3×5min，蒸馏水3×5min，室温凉干，用前紫外线小室正面3h，反面6h，微波，低火10min×2。
因为我买的是铺好胶的，所以没买Matrigel，二次利用的小室只用来做不需要铺胶的迁移实验。以前的Chemicon ECM550系列，膜很结实，擦不坏，可以反复用很多次，但现在的膜已经改用一种很薄很脆的材料，一般只能重复用一次，真黑啊！很多战友说Costar和Corning也是可以重复用的，大家可以试试。另外，根据论坛战友提供的信息，osmonic公司有专用的膜出售，鼎国生物代理。Transwell小室用过后，可把原来的膜切下，贴上osmonic公司的膜，这样又可以用了，不过我没用过，有兴趣的可以试试。maojianwen战友的使用方法： trasnwell小室做一次后，将原来的膜去掉，重新泡酸，泡酒精，使用前照紫外，然后用女士用指甲油（注意用无色较稀的）将osmonic公司的膜贴上，剪掉多余的边缘。再照紫外。② 上层培养液：
上层培养液采用无血清培养基，为维持渗透压，需加入0.05%-0.2% BSA。
③ 细胞：
值得注意的是，有侵袭能力的细胞才可用于Transwell侵袭实验。建议实验前先用酶谱法检测MMPs的表达，特别是MMP-2的表达。如果不清楚细胞MMPs的表达情况，就盲目进行Transwell侵袭实验，可能会造成不必要的浪费，一次Transwell侵袭实验花钱少则数百，多则数千，并不是笔小数目，还是小心为妙。另外，为了让实验结果更明显，可先撤血清让细胞饥饿12－24h，再进行实验。
④ 基质胶：
常用的是人工重构基底膜材料Matrigel，主要成分为层黏连蛋白和Ⅳ型胶原，生产厂家有BD、美国Collaborative Rsearch公司等。CaoY战友的帖这么说的：Matrigel是BD公司生产的，是一种细胞外基质，4度时是液体，在37度会逐渐凝固成胶状，不可逆。同样的东西在sigma叫ECM。zhangyong1036战友提供的价格：BD公司的matrigel 1500左右。如果购买的小室是已经铺好基质胶的，那么Matrigel就不需要购买了。
⑤ 下层培养液：
下层常用含5%－10% FBS的培养基，具体浓度根据细胞侵袭力而定，侵袭力弱的细胞可适当提高FBS浓度。下层也可用趋化因子，有战友将纤维粘连蛋白加入下层培养液作为趋化因子，但个人认为，FBS仍是最合适的。
⑥ 细胞培养板：
常用于Transwell侵袭实验的细胞培养板有6孔板、12孔板、24孔板等，以24孔最常用。细胞培养板没什么特殊要求，普通的细胞培养板就可以。但要注意，细胞培养板应当与购买的Transwell小室相配套。
⑦ 此外，膜的下室面可涂上纤维粘连蛋白（fibronectin，FN，Sigma有售），这样做的目的是使穿过膜的细胞更好地附着在膜上，也可用胶原（collagen）或明胶（gelatin）。很多战友认为这不是必须的，而且我也是不涂的，细胞照样贴壁很好。如果贴壁不好的话可以试试看。linanping1979战友认为，如果培养时间很长（>24h），细胞还是会掉到下室里面去，所以有条件的话，最好还是在膜下层涂上FN。另外，值得一提的是，膜下层涂上FN还有一定的趋化作用。zhangyong1036战友提供的价格： sigma的fibronectin，价格在1500左右
2．步骤
2．1 Transwell小室制备
2．1．1 无基质胶Transwell小室制备
① 包被基底膜：
用50mg/LMatrigel 1：8稀释液包被Transwell小室底部膜的上室面，4℃风干。如果需要在下室面铺FN的话，可将200ul枪头的尖端剪掉，吸取FN均匀涂抹在小室的下面。用胶原（collagen）的话，一般配成0.5mg/ml，直接用枪吸了涂在膜上。
② 水化基底膜：
吸出培养板中残余液体，每孔加入50ul含10g/LBSA的无血清培养液，37℃，30min。
另有tianjin_glioma战友提供的方法：在上室的聚碳酸酯膜上加入稀释后的Matrigel（3.9ug/ul）60-80µl（注意体积不可太大，以刚把聚碳酸酯膜浸湿为最好），置37℃ 30min使Matrigel聚合成凝胶。
2．1．2 有基质胶的Transwell小室制备
Chemicon公司的ECM550系列说明书要求，将小室放入培养板中，在上室加入300µl预温的无血清培养基，室温下静置15－30min，使基质胶再水化。再吸去剩余培养液。2．2 制备细胞悬液
① 制备细胞悬液前可先让细胞撤血清饥饿12－24h，进一步去除血清的影响。但这一步并不是必须的。
② 消化细胞，终止消化后离心弃去培养液，用PBS洗1－2遍，用含BSA的无血清培养基重悬。调整细胞密度至1－10×105，个人认为不要超过5×105。
具体实验时采用密度要自己摸索，因为不同细胞，其侵袭能力是不同的。个人经验，细胞量过多，穿过膜的细胞会过多过快，如果最后用计数法统计结果的话将难以计数；而过少的话，可能还没到检测的时间点，所有的细胞都已穿过，因此最少也要保证在收样的时候，上室内还要有一定量的细胞存在。
个人认为，对照组和处理尽量不要分开计数，因为细胞数目的差异会严重影响实验结果。如果需要对细胞预处理而不得不分开计数，那么计数一定要多重复几次，力求准确，尽量保证对照组和处理组细胞密度一致。
2．3 接种细胞
① 取细胞悬液100－200µl加入Transwell小室，不同公司的、不同大小的Transwell小室对细胞悬液量有不同要求，请参考说明书。24孔板小室一般200µl。
② 24孔板下室一般加入500µl含FBS或趋化因子的培养基，不同的培养板加的量有不同要求，具体请参考说明书。这里要特别注意的是，下层培养液和小室间常会有气泡产生，一旦产生气泡，下层培养液的趋化作用就减弱甚至消失了，在种板的时候要特别留心，一旦出现气泡，要将小室提起，去除气泡，再将小室放进培养板。
③ 培养细胞：常规培养12－48h（主要依癌细胞侵袭能力而定）。时间点的选择除了要考虑到细胞细胞侵袭力外，处理因素对细胞数目的影响也不可忽视。以我的课题为例，我使用的药物不仅会抑制肿瘤细胞侵袭力，还对细胞增殖有明显抑制。我选择的药物浓度是用MTT筛选出的72h的IC50。用这个浓度处理细胞，24h内对细胞增殖并无明显抑制，但24h后，抑制作用就开始出现了。所以，用这个浓度来做Transwell，处理时间也必须限定在24h内，否则一旦药物抑制了细胞增殖或者诱导出凋亡，使处理组细胞数目少于对照组，那么就难以肯定穿过膜的细胞比对照组少，究竟是由于侵袭被抑制引起，还是处理后细胞数目本身就比对照组少而引起的了。
时间过长不可以，同样，过短也不行，因为细胞内会有一定量的MMPs储存，短时间内可能侵袭能力不会有太大改变。同时从药物被吸收进去，进而发挥作用，影响MMPs表达，到最后释放到培养基中，还需要一个过程。时间点的选择可尽量长点，也可选择多个时间点研究时间依赖效应，但前提是这个时间范围内细胞数目不能有明显变化。
另外，我看到细胞在小室内的形态不是正常培养贴壁的形态，而是圆形的，仍是悬浮时的形态，不过会聚集成团，所以看到细胞不正常贴壁也不要紧张，是正常现象。在培养过程中，膜下会逐渐有少量小气泡产生，这是正常现象，可不予处理，但我遇到过培养一段时间后，膜下出现了大气泡，幸亏及时发现，否则后果将非常严重。因此，个人建议，最好接种细胞后1－2h把培养板从培养箱里拿出来看看，确信没有大气泡产生。
通过给细胞染色，可在镜下计数细胞：
① 用棉签擦去基质胶和上室内的细胞。
② 染色：常用的染色方法有结晶紫染色、台肦蓝染色、Giemsa染色、苏木精染色、伊红染色等。个人推荐采用0.1%结晶紫染色，这种方法有如下优势：（1）不需要固定细胞，直接染色即可。（2）配制简单方便。（3）染色后可以用33%醋酸脱色，将结晶紫完全洗脱下来，洗脱液可在酶标仪上570nm 测其OD值，间接反映细胞数。个人认为这是结晶紫染色最大的优势所在。因为，虽然经过准确的细胞计数，往往穿过膜的细胞数仍难以准确控制，可能某一批实验穿过的细胞会特别多，以致细胞成堆，这种情况下就难以计数了，这种情况下就可以用醋酸脱色后用酶标仪检测。使用结晶紫染色要注意，染色前要将膜风干，否则可能会染不上。
③ 细胞计数：我们使用的是Leica DC 300F正置显微镜进行观察和拍照，把Transwell小室反过来底朝上就可清楚看到小室底膜上下室侧附着的细胞。也有不少人用手术刀将膜切下后染色，再贴在玻片上，滴二甲苯，再盖上盖玻片，就可以长期保存，但是这样做小室就成了一次性的了，未免有点浪费。
取若干个视野计数细胞个数。论坛里一般采用3－5个视野，也有人用10个，都是随机选取，个人认为这样选择的视野带有很大的偶然性，也会掺进人为影响，特别是计数视野较少的时候。我选取16个视野，不是随机选择，而是有固定的位置。我们使用的显微镜所看到的视野的直径刚好是Chemicon公司的ECM550系列小室底面膜的直径的1/4。
第四篇：实验总结
2011------2012第一学期实验工作总结
实验室工作在学校领导的关心指导下，坚持以发展为主题，以教学为中心，以提高教学质量为重点，紧紧围绕学校整体工作，解放思想，更新观念，开拓进取，不断推进实验室工作向前发展。
一.认真学习，不断提高
9月开学之初，实验室组织大家认真学习了教育局和学校制定的有关实验教学和实验室管理的各项规章制度。认真做好实验室的日常管理工作，认真制订好实验室工作规划和实验教学计划，制订好仪器设备和药品的订购工作，确保实验的正常进行。我们认真准备好每一个演示实验和学生实验，确保实验开出率达100%，认真管理好每一件仪器和设备，努力提高仪器设备的利用率，认真做好实验室的清洁卫生工作，确保师生有一个良好的实验环境，认真收集和整理实验室资料。
二.服务教学，加强管理
以教学为中心，以提高教学质量为目的，加强实验教学环节。随意新课程的实施，实验教学任务量不断加大。在设备尚少的情况下，我校实验室充分利用现有资源，保证了实验教学的顺利进行。同时加强学生的实验基础技能，专业技能，综合技能的训练，为提高教学质量做出努力。在设备管理方面，我们根据新课程教学的需要，更新和自制了部分设备和仪器，使实验室管理步入了科学化、现代化、信息化管理的轨道。加强仪器设备管理，充分发挥仪器、设备的利用率，完好率。我们在仪器、设备管理方面做了大量工作，及时地做好仪器的征订、仪器的入库、仪器的报损和赔偿等工作，经常做到对仪器的清点、整理、除尘。做到账目物品相符，使固定资产管理，步入科学管理，现代化管理的轨道。
三.系统学习，钻研业务
要生存，要发展，就要不断创新。为此，我们十分注重自身素质和业务能力的提高，平时加强对教育教学理论的学习和研究，认真学习教材及《实验教学与仪器》和《教学仪器与实验》等杂志上有关实验室建设和管理的先进经验，积极撰写教研论文，积极自制教具，提高自身素质和业务水平，适应新任务、新形势发展的需要。总之，实验室工作还有不尽人意的地方，在今后的工作中，要注意查缺补漏，规范管理，积极宣传，提高自身的服务意识，让我校的实验教学能上一个新台阶。
四
三、注意节约，反对浪费，各种实验药品、用品要定量使用。
四、精心维护实验仪器设备，实验仪器设备定期维修和保养，延长使用寿命。
五、及时为教学一线教师准备好课堂教学所需演示实验。保证演示实验的效果，达到任课教师的满意。
六、强化实验仪器设备的管理，借还登记详实，有使用期限，到期不归还者，要及时通知本人归还。
七、在实验过程中如有违规操作造成损失损坏，应照价赔偿，并对其批评教育或进行通报。
八、有购置不到的仪器，实验教师自行研制，保证实验的顺利进行。
九、每月进行一次全面的安全自查工作，发现问题立即整改，自己不能解决的问题及时向学校主管领导反映给予解决。
十、加强防火、防盗、防人身伤害的管...随着教育教学的蓬勃发展，全面实施新课程中，不知不觉又过了一年了。这一年中，进一步解放思想，振奋精神，狠抓管理，向管理要质量，以质量求发展，全面推进江苏省标准化实验室建设，在学校领导的关心下，实验室取得了很大的成绩。
一、认真学习，不断提高
2006，我们认真学习了《江苏省中学理科教学仪器设备配备目录》和《江苏省中小学标准化实验室建设标准》，认真做好实验室的曰常管理工作，认真制订好实验室工作规划和实验教学计划，制订好仪器设备和药品的订购工作，确保实验的正常进行，认真准备好每一个演示实验和学生实验。认真管理好每一件仪器和设备，努力提高仪器设备的利用率，认真做好实验室的清洁卫生工作，确保师生有一个良好的实验环境，认真收集和整理实验室资料，把实验室工作推向了一个新水平。
二、服务教学，加强管理，发挥效益
近年来由于学校班数、班额增加，实验室又要提供作为各年级的补中、培优及各年级的各种大型考试，给我们的实验工作带来了很大的困难。但我们还是坚持以教学为中心，以提高教学质量为目的，刻苦钻研业务，克服各种困难，加强实验教学环节。2006，我们充分利用现有设备和资源，加班加点，保证了实验教学的顺利进行，并加强星期
六、星期日学生上实验课的管理，不断提高学生的操作技能，为提高实验教学质量做出了很大努力。在设备管理方面，我们根据新课程教学的需要，更新了部分设备和仪器。及时地做好仪器的征订、仪器的入库、仪器及时报损、仪器的赔偿等工作，经常做到对仪器的清点、整理、除尘。做到账目物品相符，并保持各个室的卫生清洁。本还对实验室网页进行了改版，使实验室管理步入了科学化、现代化、信息化管理的轨道。
三.认真学习，钻研业务，不断创新
要生存，要发展，就要不断创新。为此，我们十分注重自身素质和业务能力的提高，平时加强对教育教学理论的学习和研究，积极参加学校组织的新课程培训，积极撰写教研论文，积极自制教具。
实验室工作在学校整体教育教学工作中具有基础性、创新性等特点。我校一直以来十分重视实验教学工作。去年，我校在积极申报的前提下，被确立为省中小学示范实验室创建单位。学校认真对照标准，逐项进行了自查自评，同时在湖州市教育信息中心、县教育局保障中心有关专家的指导下，对实验室工作加以了整改。今年我校实验室被评为省中小学示范实验室。现将我校在创建省中小学示范实验室的一些做法报告如下：
一、学校情况简介
德清县实验学校坐落于县城武康镇曲园南路466号，于2003年10月22日正式动工兴建，2004年9月1日交付使用。学校占地面积73467平方米，建筑面积29076平方米，总投资6000万元，是一所县属公立全日制小学。学校设施设备齐全，行政楼、教学楼、艺术楼、图书科技楼、体育馆、报告厅、食堂等一应俱全，教学仪器、设施设备等均按省I类标准配备，有校园网、电视广播网、校园通讯网、家校互动网等系统，有标准的400米塑胶田径运动场，学校绿化面积40000平方米，绿化率达56%，是一所花园式的现代化学校。
学校设计规模为54班，现有学生2160人，42个教学班。在编教职工102人，专任教师96人，大专以上学历达100%，中级以上职称的教师有65人，本科学历66人，学校教师系县各学科教研大组成员有8人，县、市教坛新秀、教学中坚、教学能手36人，县级名教师7人。其中专职实验教师1人，兼职实验教师9人。
几年来，学校在“以人为本，以学生的最优发展为本”的办学宗旨指引下，按照“现代化、高质量、有特色、创一流” 的办学目标，扎实工作、创新教育，开拓性地进行教育教学活动，人本管理、班集体建设、校园文化、科普活动、少先队活动、艺术教育特色鲜明，成绩显著。学校先后获得国家少科院“科普基地”、省I类标准化学校、省语言文字规范化示范校、省健康促进学校、省卫生先进单位、省示范小学、市平安示范校园等40多项团体荣誉。
二、实验教学主要做法
为了创建省中小学示范实验室，更好地服务于学生、服务于教师、服务于学校。学校不断加强实验室管理工作，努力落实实验室配套设施建设工作，努力落实各年级实验开设率，从而有效提升学生的实验技能，培养学生爱科学、学科学、用科学的意识。办学以来，我校一直把此项工作列为学校工作的重要议事日程，认真规划，狠抓落实，检查督促，总结提高。
（一）健全网络，分工到位，形成共识。
办学之初，学校就成立了实验教学工作领导小组，健全了管理网络、明确分工、及时调整、加强指导。学校实验教学工作由校长全面负责，分管业务的副校长主管日常管理，由教务处按学期实验计划督促科学教师开展三至六年级实验教学，实验室负责教师督促相关教师做好实验登记工作。学期中途及学期末教务处协同实验室负责教师共同做好实验的检查与考核工作。
我校始终把实验教学工作作为全面实施素质教育的重要内容来抓。每学期初，实验室负责教师具体做好实验教学工作计划制定工作，教务处在教学工作计划中将实验教学作为工作措施之一加以强调。各责任处室、责任人互相配合，共同协作，分工不分家。领导的重视，也为全校教师树立了榜样，全体师生人人重视实验教学工作，积极参与，支持实验教学工作已形成了风气，形成了传统，呈现学校实验教学工作不断进取、积极向上的良好态势。这一良好现象不仅出现在学校，而且家长的配合也为学校的实验教学提供了极大的帮助。
（二）制度完善，条例清晰，责任到人。
根据国家和省市县的有关规定，学校进一步明确了实验教学工作职责，建立健全了德清县实验学校实验教学各项管理制度和职责：《实验员职责》、《重点要害部位安全管理制度》、《易燃易暴、剧毒物品、化学药品管理制度》、《学生实验规则》、《实验人员管理制度》、《实验仪器设备管理、使用、赔偿制度》等。
学校制订的各项规章制度和工作职责，把实验管理工作细化到学校工作过程管理和质量考核之中。相应出台了《实验学校技能教师教学工作量化考评细则》等考核评估办法，印发了《学校突发事件应急处理预案》，建立了《安全台帐》。四年多来，学校通过各项制度的落实，逐步实现了从“人管”到“法管”的规范化管理转变。
（三）经费落实，不断投入，优先发展。
建设工程重规划。学校规划初期，就把实验室的建设和管理摆在优先发展的重要地位，做到教育财政拨款迅速到位，积极推进了素质教育的现代化建设步伐。先后完成了几项重大的实验室建设工程：投入500万元建成科技实验楼，投入80万元完成了实验室基础设施的建设；投入30多万元购买了实验室仪器设备。
专项经费重落实。学校逐年逐步投入经费，每年做好实验室经费投入预、决算，落实实验室专项经费，不断加大教育投入，06年学校购买仪器设备5万多元，07年添置仪器设备4万多元，08年学校又投入经费6万添置实验器材和仪器。学校在财力不够宽裕的前提下，安排实验教师培训专项经费，积极组织实验教学人员参加各级培训，如科学教师新课程培训，省教师素质提升工程培训等，有效促进了实验教学人员的队伍整体素质地提升。
实验室建设重细化。我校实验室使用个数为3个(其中两个实验室从办学初一直使用至今，另一个为08学年由于学校扩班新增加；有1个实验室里安装了多媒体设备，促进实验教学的有效开展。)每个实验室面积为86平方米，有3个仪器室（仪器分类存放，有存储卡）。平均光照度大于300lx,实验桌为双人实验桌，桌面长1200mm，宽500mm，高70mm,符合3～6年级小学生的身体高度，其中，每个实验室设24组，每张实验桌上均配备自来水龙头、电源插座，每个实验室均有窗帘。仪器室数量为3个，总面积大于100平方米，有照明灯，里面配备有实验准备台和仪器存放橱，同时，配备窗帘和电源。化学药品准备室能及时排气。可以说，每个实验室的设备都全方位从学生角度考虑，使我们的学生使用得好、安全度高。
实验教师队伍重建设。小学科学教师是弱势群体，但我校对该队伍建设却相当重视。学校现有专任实验教师1名，其所任课每周四节，兼职实验教师9名，各科任教师学历均在大专以上，均获得初级、中级、高级职称（其中高级职称3人）。实验教师能独立完成小学科学的所有实验，热爱本职工作，并指导学生实验操作和实验教学研究。科学教师按老、中、青搭配，老年教师指导得力，中青年成长迅速。像周宏亮老师参加全国小学科学实验课评比获一等奖，所撰写论文多次获得省二等奖、市一、二等奖，所研究课题获得市三等奖；沈建锋老师在湖州市小学科学优质课评比中荣获一等奖，所撰写论文多次获得市一、二等奖。
（四）创新思路，内外结合，成效显著。
为了有效促进学校科学教师队伍与学生队伍的建设，我校努力践行“高位运作重心下移”的管理思想，集智慧生成，倾全力创新，共同谋求推动师生群体发展的新思路、新方法。
课内抓实：按教材要求开齐、开足、开好演示实验和学生实验。实验前科学教师准备充分，共同研讨，资源共享。每学期，学生演示实验开设率和分组实验开设率为100％，学生实验操作规范，实验室有使用计划，记录全面，有自制教具柜，实验教学气氛浓郁。
课外延伸：科学教师利用本土资源开展一系列实验，如实验室中午开放实验、科技社团活动、学生科普实践活动等。学校每周中午11：50至13：00实行实验室开放，学生在实验室专职教师的指导下组成实验小组进实验室做实验。学校科技社团以实验室为活动基地开展科技小制作、小发明、小论文等活动。依据上级文件精神，学校积极组织学生参加各级各类的科普竞赛活动，如《全国少年儿童科技之星》活动、全国海尔科技创新活动、浙江省亿利达青少年发明活动以及每年一度的科技创新大赛活动，取得了十分优异的成绩。如：在08年省“三小”竞赛中，我校301班的许涵飞同学在科学老师、家长的指导帮助下，所撰写科普论文《纸飞机的秘密》获省二等奖。同时，许多学生的小发明、小论文等科普文章陆续在《中国少年报》、《上海青少年科技报》等刊物上发表。正因为学校对科普方面的重视，学校被中国少年科学院授予“中国少年科学院科普基地”。
依托课题：全国级课题《依托联校共护莫干湖水资源的实践和研究》，开展实验教学，带领学生去实地进行调查，采集水样等。市级课题《小学科学课学生学业评价的实践与研究》，开展科学学业评价研究，使科学评价向规范化、科学化发展。
三、实验教学取得成效
1.学生科学素养得到有效提升。
科学实验的有效开展，使我们的孩子们在真刀真枪般的活动中有了第一性的切身体验，而这种体验正是他们在教师的带领下，对着一本教材来一番“纸上谈兵”式的学习中所不能有的。学生在这样的学习实践过程中，不仅获得了科学知识，而最重要的是经历了科学探究，掌握了科学探究的方法与科学思想，体验了科学探究的艰辛，从而真正达到培养学生科学素养的目的。几年来，学生在科普竞赛中喜获丰收。
德清县实验学校实验教学05-08学年学生科普获奖情况汇总
级别全国级省级市级县级
人次29222574
其中，县科技创新大赛连续四年获优秀组织奖，每年有几十名学生获奖（小发明、小论文、小制作、科普实践活动、科幻画），省、市获奖达十几人。
2.教师实验教学意识得到强化。
实验教学要求科学教师扮演多种角色，教师既要成为学生学习的指导者、智力资源的开发者、未来的设计者、又要成为心理医生和学生的伙伴，这样才能真正使实验教学获得成功。多种角色的扮演，促使科学教师的实验教学意识得到强化。几年来，我校科学教师在各级各类竞赛、评比中，共获得国家级荣誉、奖次6人次，省市级荣誉、奖次14人次。
德清县实验学校实验教学05-08学年教师获奖情况汇总
序号姓名活动名称获奖等级
1沈国鸿荣获第二届全国少年儿童“科技之星”优秀工作者奖
2沈建锋荣获第二届全国少年儿童“科技之星”优秀辅导员奖
3周宏亮科学课如何体现科学味国家级一等奖
4马顺华新教师眼中的小组合作学习国家级三等奖
5沈建锋小学科学（常识）课堂比武县二等奖
6周宏亮如何让科学探究的各个环节更富有科学性市二等奖县一等奖
7马顺华浅谈科学课中探究活动的有效开展县三等奖
8沈国鸿创设多种情境 激活课堂教学省级刊物《教育科研论坛》
9马顺华 教具《电路游戏板》县三等奖
10马顺华让小电珠亮得更久些——常识课堂需要研究性学习县三等奖
11周宏亮县第六届教学中坚评比县教学中坚
12沈建锋县第十届教坛新秀评比县教学新秀
13周宏亮县第二届名教师评比县名教师
14周宏亮课题《小学科学课学生学业评价的实践与研究》市三等奖
15周宏亮突出科学思想培养,求科学本质市一等奖
16沈建锋开展小学科技教育的再思考市二等奖
县一等奖
17周宏亮科技辅导中如何引导学生自我主动发展县三等奖
18马顺华培养小学生科学创新能力初探县三等奖
19周宏亮让科学本质教育扎实于科学探究的各个环节省一等奖
20周宏亮混合身边的物质省级公开课
21周宏亮《刍议小学科学课的有效记录》市、县一等奖
22沈建锋《让每个学生成为自由发展的人—谈谈科学课外辅导活动中学生的心理问题》县二等奖
23沈建锋县小学科学教师素质提升培训县级公开课
24沈建锋优质课评比《被压缩的空气》市一等奖
25周宏亮湖州市优秀教师评比市优秀教师
26周宏亮07县人民教育基金奖评比县人民教育基金奖
27周宏亮《让科学本质教育扎根于科学探究的各个环节》全国二等奖
28周宏亮首届小学科学优质课评比全国一等奖
29沈建锋《刍议小学科技活动的可持续发展》市二等奖
30周宏亮《刍议小学科学课的有效记录》省二等奖
31沈建锋展示课《压缩空气》县公开课
32沈建锋《科学教学学生科学意识的养成教育》县三等奖
33宋建锋08县青少年信息学竞赛县优秀科技辅导员
34周宏亮《电和磁教学设计》省级刊物《实验教材通讯》
35沈建锋08县信息技术评比《地震的预防》县三等奖
36周宏亮市第四届名师展示活动市公开课
3.家长科学意识提升迅速。初中、高中的实验教学与小学实验的特点对比，初中、高中的实验器材实验室都有的，而小学里超过半数的实验材料要让学生自己准备的，材料是生活中常见的用品，如植物方面的研究，植物的叶，观察小动物，酱油、醋、食用油、稻谷、大米等都要自己准备的。现在有更多的家长会去关注我的孩子有没有准备实验材料，准备的怎样等问题。每年的县科技创新大赛已经有越来越多的家长去关注，去指导。
4.促进学校教育教学水平的提升。像省I类化标准学校、中国少科院实验基地、县科普创新大赛组织奖等荣誉称号，一方面是对我校办学取得成效得充分肯定，另一方面也为我校的进一步发展打下了扎实的根基，有效地促进了我校教育教学水平的整体提升。
俗话说：“千言万语说不清，一做实验就分明”。在今后的工作中，我们将一如既往地抓细抓实实验教学工作，以省示范实验室为推动力，助推我校实验工作更为规范、科学、完善化发展，为促进教师教学提升、学生实验技能提高夯实有效平台。
一：德，首先本人拥护党的各项教育方针政策，遵守学校各项规章制度，配合领导工作，爱岗敬业，团结互助，工作勤恳踏实，认真做好自己的本职工作。对科学老师的各种要求总是竭尽所能，为让老师们满意而归，不惜牺牲自己的休息时间，加班加点，二：能，本人积极要求上进，认真自学实验管理的书籍，参加科学组的教研活动，了解
本学科的最新动态，了解科学老师的最新需求，以求领先一步领会与指导，在完成实验室常
规工作之余不时与任课教师沟通，对成功管理实验室打下了良好的基础，对实验室管理做到
严中有爱，爱生如子，做到职责分明，责任到人
三：勤本人工作勤奋，任劳任怨，实验保质保量，日常维护工作到位，废旧处理规范及时，不污染环境，实验室常做外借接待的场地，每次都做好卫生工作，管好学校交给的财产。
四：绩，实验开出率100%，顺利完成初三实验中考的实验准备工作，老师学生都比较满意。
当然管理永无止尽，仍有许多方面可以继续进步，比如还没有充分利用实验室资源更好 的为学生们提供更多的实验机会。
希望来年做的更好，与时俱进，再接再厉，更上一层楼。
生物是一门以实验为基础的学科，开展好实验教学，是学好生物的前提条件。生物实验具备培养学生观察和动手能力，培养学生动脑，启迪思维，开发潜能的作用。在这学期中，生物实验坚持以发展为主题，以教学为中心，以提高教学质量为目标，围绕学校的整体工作，解放思想，更新观念，开拓进取，不断推进实验室工作向前发展。本学期，在各位生物老师的配合下，实验室工作开展的井然有序。
一、工作任务完成情况
本人在开学初就制订出生物实验计划，推动了本期实验教学有序的有计划的进行。
严格实验准备制度，演示实验三天前，分组实验一周前交实验通知单到实验室，准备好实验后，老师先预做实验，以此保证实验顺利地进行。实验中损坏的仪器严格依照教学仪器赔偿制度实施处罚。
做到购物有登记，帐目清楚，帐物卡三对应工作。教学仪器的借用严格按照教学仪器借用制度实行登记，如期归还，追还等。
对显微镜等教学精密仪器，做到了定期检修、除尘、防锈、保养等工作。对标本类实施了定期检查、防蛀等加以妥善管理。有害、有毒的药品实行了专柜存放。
对新的实验仪器的性能、使用、操作方法做了充分了解，能熟炼地操作使用。而且积极参与了学生实验操作的指导工作，进一步锻炼了自己的动手能力，更好地配合了实验老师的教学工作。
按时完成了本期的实验任务，做到了实验室整洁、卫生。在新的一年里，要更进一步加强学习，使自己的管理工作更上一个台阶。
二、实验室管理
1．购置仪器、药品要先行申请，由主管领导审阅后报校长室审批后再购置，入库要验收，同时填写入库清单。仪器原则不外借，若借出要由主管教导或校长同意后才能，并要及时追回。
2．加强安全制度。药品、仪器橱要上锁，化学危险品橱要实行双人双锁保管，防盗门要早开晚锁，理、化、生实验室的灭火器、沙桶要定期检查、补充。实验室通风换气设备应保持经常运转。
3．仪器、药品存放制度。做到分类存放，定橱定位。每口橱上应挂有“仪器登记卡”并逐年修正。分组实验所用仪器药品一律应实验员发放，实验结束，及时清洗、整理、归放。
4．认真执行仪器保养，维修制度，并自制一些教具。仪器要做到常清点，常保养，常维修，保证抽查准确，随取随用。
5．继续做好资料档案工作。
根据市教委技术装备室重新下达的实验室技术资料档案要求，结合创建省重点中学要求，及时调整部署对仪器说明书，仪器材料的购置计划，听课笔记，学生实验记录，实验通知单等应保存的资料认真收集，及时归档。
6．实验室卫生工作。
定期对实验室进行卫生大扫除，平时做好实验室保洁工作，使其与实验室优美的环境融为一体。
三、实验教学
各任课教师要根据教材内容，提前1－2天开出实验通知单，或在特殊情况下，提前通知实验员（但在实验后要及时补填实验通知单），实验员根据通知单充分准备好仪器、药品，做到准、净、齐和及时，确保实验一次成功。对有些实验，实验员应事先亲自试验，若有改进的实验或利用自制教具进行教学的，要向教师说明使用方法和注意事项，确保万无一失。
对学生分组实验，任课教师必须在实验前把实验报告册发给学生进行预习准备，明确实验目的、要求和注意事项，在实验过程中实验员要协同教师随堂巡视，发现问题及时解决。
实验结束，让学生填写好“学生实验情况登记表”，对有报损的仪器还须填写“仪器报损登记表”，任课教师也要签上姓名和处理意见，然后有实验员签上处理意见后报上一级领导审批。
四、科研工作
组内教师平时认真学习，及时总结经验，馔写论文。顾巧凤、高俊芬、冀春媛、蔡小珍四位老师的实验论文在市实验论文评比中获奖。
当然本人的工作还存在一些不足，所以还要不断地改进工作作风，深入书本，深入课堂，了解实验还需要什么材料，怎样解决。努力把我校的生物实验教学工作开展得更好。
随着我校招生规模不断扩大,学生人数由过去的1000多增加到现在的2000多人,而且还将继续扩大.为了满足这一要求,学校必须要在现有的基础上动脑筋,想办法,挖潜力,扩大规模,扩建实验室.一,本期主要工作
本期开出并完成了生物教学大纲要求的大部分学生分组实验，顺利通过高二年级的实验操作考试,积极参加学校组织的各种政治学习,创省级实验示范中学的前期工作,建立各种档案,开展学生课外活动,认真完成本职工作,不缺席,迟到,早退,想方设法完成创重档案工作和实验开出率等工作.为了保证实验教学的质量,培养学生的动手能力,扩大学生的视野,新的教材增加了新的实验内容,将过去单一的实验内容改为综合性的内容;将过去验证性的内容,改为验证与设计相结合的内容;将过去陈旧性的内容,改为较先进,较现代化的新内容,大大提高了学生的分析问题和解决问题的能力.二,思想政治工作
在上好实验课的同时,实验室仪器维护,仪器设备登记造册管理,物资器材的借用等日常工作,同时还进行实验准备,理论学习,实验室建设等,认真工作.利用实验室这一宝贵的教学资源,以创省重点中学管理体系作指导,为提高学生实验素质作为指导,为实验老师和学生提供全面的服务.三,工作任务完成情况
在开学初就制订出生物实验计划,督促各年级生物老师制出了本期该年级的实验计划.由此推动了本期实验教学有序的有计划的进行.严格实验准备制度,老师先预做实验,以此保证实验顺利地进行.实验中损坏的仪器严格依照教学仪器赔偿制度实施处罚.做到购物有登记,帐目清楚,帐物卡三对应工作.教学仪器的借用严格按照教学仪器借用制度实行登记,如期归还,追还等.对显微镜,解剖器等教学精密仪器,做到了定期检修,除尘,防锈,保养等工作.对标本类实施了定期检查,防蛀等加以妥善管理.有害,有毒的药品实行了专柜存放.对新的实验仪器的性能,使用,操作方法做了充分了解,能熟炼地操作使用.而且积极参与了学生实验操作的指导工作,进一步锻炼了自己的动手能力,更好地配合了实验老师的教学工作.按时完成了本期的实验任务,做到了实验室整洁,卫生.在新的一年里,要更进一步加强学习,使自己的管理工作更上一个台阶.学校实验室在2006-2007年第一学期的工作中，由于有校行政领导的直接领导，市局装备室领导的具体指导，全体实验教师的共同努力，顺利地完成了本学期预定的工作目标。
1、我校实验室根据工作计划要求，做好了各科仪器设备、药品的增订、补订工作，为保证各科实验教学的顺利开展提供了坚实的物质基础。
2、我校实验室为保证各科实验教学的开展，积极安排好实验所需用品、药品，调整好实验课，协调各科老师的实验内容，提前根据教学进度准备好，演示和分组实验努力开足开全。
3、我校实验室还做好各科仪器、药品的保管工作，积极认真做好防震、防潮、防虫蛀、防腐、防尘工作，使器材处于待用状态；积极维修破损仪器，经常教育学生要积极实验，勤俭实验，保护仪器，尽量不浪费；我们还教育学生规范实验操作程序，防止不必要的损坏，杜绝实验事故。
4、我们特别注意做好安全防护工作，注意做好危险药品的保管工作，做到双锁保管，注意防火、防水、用电安全，杨舍镇教育系统安全工作现场会曾在我校召开，同时对我校实验室工作给予一定的好评。
5、我校实验室工作人员较少，但我们仍能保持经常性的清洁卫生，对公用物品进行维护，坚持了勤俭办学的原则。
6、我室工作人员加强自身师风师德的建设，不断进行实验教研活动，参加继续教育，提高业务水平。
7、我们还积极配合各条线工作，特别是配合班级加强学生思想道德、组织纪律、实验纪律教育，让学生在实验教学中冶炼情操，增长才干。
8、我校实验室工作取得一定的成绩，不足的是，我校实验室工作人员紧，尤其是缺少专业化的老师，人员也要年轻化些。
化学实验室是“知识”和“能力”之间的桥梁。做好化学实验，既能让学生巩固学得知识，又能培养学生运用知识解决实际问题的能力。因此，实验教学是化学教学的一个重要组成部分。作为一个实验室就必须配合任课教师做好教学后勤工作。
实验室工作是一个繁琐的工作，每学期初制定工作计划，根据教师的教学进度表制定这一学期的分组实验和演示实验的安排表。利用时间认真钻研教材，明确教材中的每一个实验目的和要求，所用仪器、操作步骤，虚心向同行学习，及时总结改进实验，研究实验成败的原因。认真阅读实验杂志，取人之长，补己之短，不断扩展自己的视野，积累经验。根据大纲要求，能开足全部演示实验和分组实验，配合学校对学生加强素质教育，健全《仪器赔偿制度》、《学生实验守则》、《安全卫生制度》等。培养学生严谨认真的实验态度，使学生在实验室里充分施展其才能的空间，促使他们动手、动脑，活跃思维，并努力创造条件，使同学们课外的科研性实验，小制作等顺利开展。
认真学习现代教育教学技术，并运用于实验教学与实验管理上，各类台帐资料齐全，并填写实验日志，记录实验情况。
开学初，通阅教材中所有实验，估计全年所有实验所需药品及仪器的名称数量，加以统计，参考现有库存量，写出订购清单。当购置药品收到时，及时开列清单，送交总务处，并分类入帐，妥善存放。
统观方面的工作，有些地方还不够好，今后将会进一步改进工作方法，提高工作效率和实验利用率。
随着教育现代化水平的不断提高，实验条件的不断改善，强化实验室管理工作，充分发挥实验室在素质教育中的作用，使之成为培养创新能力的基地，更好地为教学服务，我从以下几个方面做好实验室日常管理工作。
一、强化管理 规范到位
实验室的特点是教学仪器、药品、材料种类繁多，设备复杂。为此我做到如下几点：
1、新调入的器材药品，先检查验收，没问题后再登记入帐，记明规格、数量、金额。
2、标定橱目标签，每层所放教学仪器、药品、材料都编卡登记，做到教学仪器、药品存放定位，排列有序，取用方便安全。
3、任课教师领取实验教学仪器、药品先填写实验通知单，根据实验通知单提供器材，任课教师用完归还时检查核对，如有损坏或丢失，查明情况，按规定要求报废或赔偿。
4、任课教师领取危险药品时除填好通知单外，还要由主管领导批准签字，我根据实验通知单提供危险品，并严格控制危险品的领取量，剩余危险品做到妥善的回收和保管。
5、在期末认真清点仪器药品，履行报废手续，及时处理报废的仪器，做到帐物相符，帐物一致。
6、学期开始及时制订所需仪器、药品的采购计划并及时采购。
二、规章制度 落实到位
实验室的管理与使用必须严格遵照规章制度，才能使实验室管理的规范化得以实现，才能保障实验室教学的正常进行。如：在组织学生上第一节分组实验之前，认真学习各种规章制度。
2、学生在实验中损坏了仪器，依据责任大小，严格执行《关于学生损坏教学仪器赔偿的规定》，大大增强学生爱护仪器的意识。
3、在实验过程中要求学生严格遵守《学生实验守则》、《化学实验安全操作规范》，增强学生的安全意识，避免了意外事故的发生。
4、一些有毒、易燃、易爆等危险品分类放入危险品库内，严格执行双人双锁管理。
三、讲究科学 保管到位
实验室管理的方方面面都应讲科学，用科学，做到科学化管理，仪器药品存放本着上轻、下重、防潮、防压、防晒、防霉、防锈蚀、防虫蛀、整洁美观的原则。要保管好各种仪器、药品，防止各种事故发生。如：
1、将药品分类入橱，对化学试剂的标签及时进行防腐处理。
2、仪器和药品分开存放，金属仪器远离药品。
3、在怕潮湿的药品橱内放置干燥剂。
4、带磨口的
玻璃仪器洗净凉干，在磨口处垫上纸片存放。
5、胶塞、胶管用后洗净阴干，撒上滑石粉、防晒及防止与有机试剂接触。
6、铁制器材使用后保持干燥，及时除锈，图上黄油或少量机油。并经常检查，发现问题及时解决。
四、工作认真 责任到位
工作中我处处细心，时时留心。
1、做到“五查”：上班后首先检查实验室、准备室的水电是否关闭，门窗是否上锁，确保三室的安全；要经常检查灭火器、防火沙包是否齐备完好；经常检查实验室药品库通风设备是否完好使用；经常检查有毒、有毒、易燃、易爆等危险品是否存放好。
2、做到“四勤一备一及时”即玻璃仪器勤清洗；实验仪器勤保养；仪器、药品摆放勤整理；室内卫生勤打扫；急救药品材料要常备；发现仪器有损坏及时修理。强化“一个意识”。我对每个演示实验、分组实验中可能发生的危险因素考虑周全，在教师、学生实验之前，把实验中应注意的事项加以强调，并采取相应防范措施，以防突发事件发生，时刻把安全意识放到首位。
总之，实验室的工作千头万绪，实验室的管理水平永无止境，作为实验室工作人员，我尽职尽力，多动脑筋，多想办法，多阅读相关杂志，使自己的管理科学、更规范，以便更好地为教学服务。
本学期，生物实验室坚持以发展为主题，以教学为中心，以提高教学质量为重点，紧紧围绕学校的整体工作，解放思想，更新观念，开拓进取，不断推进实验室工作向前发展。
一、认真学习、不断提高
开学初，我们学习了《学校实验室工作规程》，规范实验室建设，修订了实验室各项制度。制定了本工作计划和学期工作计划，使工作有的放矢。
二、以教学为中心，以提高教学质量为目的，加强实践教学环节。
实践教学任务量很大，在人员少，设备少的情况下，充分利用现有设备和人才资源，保证了实践教学的顺利进行。本继续实行“演示实验分组化”的策略，增加学生的动手机会，锻炼学生的操作能力，使学生在实践中得到锻炼；并且强化了多媒体教学手段的辅助作用，使一些抽象的实验形象化，模糊的现象清晰化，微观实验得到宏观演示，解决了许多以前无法克服的难题，增强了学生的各种能力。
三、加强仪器设备管理，充分发挥设备的利用率，完好率。
本学期内，我们在设备管理方面做了大量工作，更新了一部分设备，设备的利用率达到100%，完好率达到100%，维护维修显微镜等设备为学校节约了大量资金。并使固定资产管理步入了科学管理，现代化管理的轨道。
四、加强仪器室安全管理。
按照上级规定，加强仪器管理力度，有毒药品、危险品分类存放，以保证安全。
五、做好台帐资料的整理工作。
本学期，在台帐资料的建立健全方面，做了较多的工作。为学校在下学期的现代教育技术应用评估中获得一等奖作了充分准备。
六、认真做好卫生工作。
实验室的管理中，卫生工作是一个很重要的方面。虽然自己的工作任务较重，加之实验室又常常作为考场、多媒体体教室等，但我仍认真做好实验室的卫生工作，特别是在学校及上级的各次检查中，受到了较高的评价。
总之，本学期工作虽然取得了一定的成绩，但离学校领导的要求仍有一段距离，本人会在今后的工作中不断加以改进。
第五篇：实验总结
方案总结
安庆石化公司腈纶车间生产的低聚合丙烯晴废水处理已进行了两个多月，在这两个多月的时间里，我们做了大量的实验制定了两套方案——物化法和生化法。
物化法。就是用物理化学方法将废水中的悬浮杂质通过化学药剂的作用，使废水中的废水中的污染物质絮凝沉淀下来。通过大量的实验得出了所需药剂的最佳用量（聚合PA 300ppm,PAM 1ppm）和最佳PH值（PH=8）。此时絮凝后的废水COD值在800mg/L左右，常试了各种氧化剂如次氯酸钠，高锰酸钾，重铬酸钾，氯酸钾，双氧水等等以及它们之间的不同组合处理，其效果并不理想，COD值在500mg/L左右。实验证明物化法处理丙烯晴废水只能维持COD在这个水平。COD再很难降下来。从而证明物化法实验失败。
生化法。利用微生物的降解废水中的有机物，来达到净化废水的目的。将絮凝后的废水上清液加入已经培养好的活性污泥重驯化培养，经过半个月左右时间，通过镜检观察发现有大量的微生物生存，并且有少量的低等原生动物如变形虫，漫游虫等和后生动物红斑飘体虫等。测此时的COD值发现，COD值降低不多最后稳定在400mg/L左右。再也很难降解下来。实验证明生化法不行。
通过进一步的研究废水中的污染成分，我们将废水取200ml放在95℃的烘箱中烘干，得到最后的沉淀干燥物，加蒸馏水定容到200ml，使沉淀物充分溶解，取水样做实验得出COD=130mg/L，与之前的COD值800mg/L相比相差巨大，最后通过分析认为废水中显COD值的污染物成分的沸点比水低，在烘干蒸发过程中随谁蒸发掉了，且这种地低沸点有机污染物抗氧化能力强，一般的化学氧化剂很难将其氧化掉，最后通过比较得出用防渗透技术应该可以达到要求。通过家用反渗透饮水机的实验得出其产水COD值达标，出水COD值在45mg/L左右。浓缩液通过再简单的絮凝沉淀处理后在进反渗透，不停的循环，可以实现废水的最终降解。而且实验证明，前处理做得好完全可以保护反渗透膜不至于被堵，能够稳定运行很长时间。故我们最终选择了反渗透技术来处理低聚合丙烯晴废水。
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