点对点通信实验步骤2017

第一篇：点对点通信实验步骤2017

基于CAsyncSocket类的点对点通信客户机创建流程  通信流程：

1.服务器点击“监听”按钮开始监听，实现Create和Listen函数 2.客户机点击“连接”按钮进行连接，实现Connect函数 3.服务器端接受连接，并触发onAccept事件，实现函数Aeecpt 4.客户端或者服务器端点击“发送”按钮，发送文本框的数据

5.服务器端或者客户端接收数据，OnReveive事件被触发，实现函数Receive 6.客户端或者服务器端点击“断开”，执行函数close，触发另一端的onClose事件

自定义类获取对话框指针的方法

1.先在CMyDialog.cpp中声明一个全局变量CMyDialog* pDlg;2在OnInitDialog()初始化的时候，pDlg = this;3.在自定义类使用的时候，在自定义的类的Cpp中添加extern CMyDialog* pDlg;4.在自定类中使用pDlg->yourfunction(); 编程过程： 客户端：

1、创建MFC应用程序，勾选windows socket选项，如创建工程名为client，自动创建类CClientAPP和CClientDlg，并生成相应的源文件（.cpp）和头文件(.h)。APP代表应用程序。Dlg代表对话框

2、布置界面如下图所示

3、建立类向导，给文本编辑框，列表框定义变量名及类型

4、插入基于CAsyncSocket的类，如取名clientsock，确定后类视图下右键单击类并载入虚函数onReceive(),onClose()，如果是服务器端还要加载onAccept

5、程序的各个类之间建立联系，具体步骤：

5.1对话框界面与套接字建立连接。在ClientDlg.h文件中将“clientsock.h”文件包含进来，使其能够访问套接字，代码为#include” clientsocket.h”;并添加成员变量m_clientsock，代码clientsock m_clientsock;

5.2套接字与对话框界面建立联系。在套接字的源文件clientsock.cpp中，为使其能够访问对话框界面，添加对话框类头文件 #include”ClinetDlg.h”

5.3套接字类能够方便访问对话框的成员.在对话框中定义指向本身的指针，并在套接字类中引用该指针

在clientDlg.Cpp中定义个全局变量，类型为对话框指针

5.4在初始化函数中给指针赋值。将当前对话框赋值给指针变量：

5.5在套接字类中使用对话框指针。在clientsock.cpp文件中引入该全局变量extern CClientDlg * pdlg；

经过以上步骤，类之间的关系，以及对话框指针的设置完成。服务器过程与客户端是一样的，区别在于5.1创建套接字变量时应创建两个，一个用于监听，一个用于服务。

接下来是具体的编程过程

服务器端，如果工程名为server，插入的类名为sersock，且界面如下图，并按上述客户端方式已做基本设置,包括文件互相包含、创建指针机制、建立类向导，载入虚函数。如这些都完成，则开始编程

1、在类视图下，点击CServerDlg右键单击添加函数void myaccept（），void myrecv()和void myclose（）

2、双击监听按钮，实现监听：使用updatedata(),Create()和Lisen（）

3、双击发送按钮，实现发送：使用Send（）

4、当有客户端连接进来时，触发sersock下的onAccept()此函数下执行 pdlg->myaccept();在myaccept()中执行Accept（）

5、当有消息进来时，触发sersock下的onreceive()此函数下执行 pdlg->myrecv();在myrecv()中执行Receive（）

客户端

6、在类视图下，点击CClientDlg右键单击添加函数 void myrecv()和void myclose（）

7、双击连接，实现updatedata(),Create()和Connect（）

8、双击发送按钮，实现发送：使用Send（）

9、当有消息进来时，触发clientsock下的onreceive()此函数下执行 pdlg->myrecv();在myrecv()中执行Receive（）

第二篇：实验步骤

2.2.3.1最佳蒸煮时间测定

参照Aproved Method 66-50（AACC2000）。将面片切成长10cm的面条，取大约30根，用500mL蒸馏水在电磁炉上，以小火烹煮（尚朋堂的电磁炉在90℃档上，水处于微沸状态）。煮3min后每30s取一根面条，用小刀切开横截面，观察横截面有无白心，记录白心刚好消失的时间为最佳蒸煮时间。

2.2.3.2面条吸水率测定

准确称取25g左右(精确到0.01g)面条放入500mL沸腾的蒸馏水中煮到最佳蒸煮时间，立即用漏勺捞出，再用50mL蒸馏水冲淋，收集煮面及冲淋的水，室温下将面条沥干5分钟，准确称量，计算公司如下：

公式：面条吸水率（％）=（W2－W1）/ W1×100

W2 —蒸煮后面条重量，g

W1 —蒸煮前面条重量，g

2.2.3.3蒸煮损失率测定

预先称收集有煮面及冲淋的水500mL烧杯的重量（精确至0.01g），在温度为105℃的烘箱内将其蒸发干，干燥后的烧杯冷却后称重，直至恒重，精确至0.01g。

M2公式：L100%M1*(100M)

M2—烘至恒重干物质重量，g

M1—煮前面条质量，g

M—面条含水量，%

2.2.3.4熟面拉伸（Kieffer）测定

将速冻面块复热后，在冷水（0~5℃）中浸泡1min后在质构仪TA-XT2i上用A/KIE探头测

定，每组数据测6个平行样，取平均值。参数设定如下：

参数设定：

Test Made and Option: Measure force in tension

Pre Test Speed: 2.0mm/secTest Speed: 3.0mm/sec

Post-Test Speed: 10.0mm/secDistance: 40mm

Trigger Force: 5.0g

2.2.3.5剪切力（Firmness）测定

将速冻面块复热后，在冷水（0~5℃）中浸泡1min后在质构仪上选用A/LKB-F轻型切刀测

定，每组数据测6个平行样，取平均值。

参数设定：

Test Made and Option: Measure force in compression

Pre Test Speed: 1.0mm/secTest Speed: 0.5mm/sec

Post-Test Speed: 10.0mm/secForce: 2000.0g

Trigger Force: 5.0g

2.2.3.6TPA（质构剖面分析Texture Profile Analysis）测定

将速冻面块复热后，在冷水（0~5℃）中浸泡1min后，用TPA探头测定，铝合金材料，探头宽度与长度分别为：5mm和50mm。TPA测试是通过两次下压完成对样品的测试，每次下压过程均包含下压和收回两个阶段。TPA各参数设置及意义如下：

参数设定：

Pre-Test Speed: 1.0mm/secTest Speed:0.80mm/sec Post-Test Speed: 0.8mm/secTarget Mode: Strain Strain: 70.00%Time: 3.00sec Trigger Force: 5.0gTare Mode:

随着蒸煮时间的增加，吸水率随之增大，蒸煮损失也逐渐变大。这是因为随着面条蒸煮时间增加，淀粉的糊化更加完全，吸水量逐渐增加，同时面条淀粉和蛋白的溶出量也增加。

表2-4 蒸煮时间对速冻熟面质构品质的影响

剪切 拉伸 拉伸距

蒸煮时间

TPA

力(g)力(g)离(mm)硬度(g)粘着性 弹性 粘聚性 咀嚼性(g)回复性 483.08 27.12 85.29 1068.44 504.91 26.98 87.01 1117.30 460.09 24.68 78.58 1028.97 460.8022.37 77.18 1019.39

28.47 0.93 28.14 0.95 25.36 0.95 23.57 0.93

0.54 0.54 0.53 0.53

540.19 567.69 518.68 507.31

0.40 0.41 0.41 0.438 10 12

由表3-2可以看出，在不同蒸煮时间下，煮8min时质构测得的剪切力、拉伸指标和TPA指标都较强，而煮10min，12min，使得面条蒸煮时间过长，所以速冻熟面品质变差，面条整体口感偏软。

蒸煮过程对面条品质变化影响很大，因此要严格控制蒸煮时间及其蒸煮方式。本实验过程中，蒸煮8min时面条内部白心全部消失，且质构指标和蒸煮指标表现最好。因此，确定蒸煮时间为8min。

随着复热时间的增加，吸水率随之增大，蒸煮损失也逐渐变大。

表2-7 复热时间对速冻熟面质构品质的影响

复热时间 40 60 80 100

剪切 拉伸 拉伸距

TPA

力(g)力(g)离(mm)硬度(g)粘着性 弹性 粘聚性 咀嚼性(g)回复性 471.69 83.0026.29 1015.9626.97 0.95 472.30 82.4525.50 1001.7923.60 0.92 455.80 78.4123.63

972.8133.22 0.94

0.55 0.54 0.54 0.54

527.85 517.65 513.55 506.63

0.43 0.43 0.42 0.43

455.95 77.6322.718 980.4530.12 0.95

由表2-7可以看出，在不同复热时间下，复热40s和60s时质构测得的剪切力、拉伸指标和TPA指标都较强，而复热80s，100s，使得速冻熟面复热时间过长，所以速冻熟面品质变差，面条整体口感偏软。

本实验过程中，复热60s时速冻面块刚好全部化开，且质构指标和蒸煮指标表现最好。因此，确定复热时间为60s。

第三篇：通信实验心得体会

在做实验之前以为并不难做像以前做过的实验一样完实验以

后两下子就可以把实验报告写完。直到做完了实验以后才真正的认识到其 实这并不容易一件很挑战的事情而学到的知识与难度却成正比我 受益匪浅。

由于自己的理论知识基础并没有十分牢固实验过程中我遇到了许多难

题也使我感到了理论知识的重要性。但是我并没有气馁实验中每当发 现了问题自己看书者是与小组同学讨论他还不会的经过老师 的讲解以后终解决了问题而也就加深了我对课本理论知识的理解 到了“双赢”的结果。

通过本次铁路信号的实验我学习到了很多知识。首先我对于铁路信号及通

信有了更加深刻的认识彻得了解了其基本原理和科学方法且在电脑上 进行了中间站微机连锁模拟实验和编组站信号控制系统模拟的操作以及模拟站 场上的列车走位。最终基本掌握了此类设备的原理及操作方法到的不仅是 之前在书本上学到的条条框框是理论与实践相结合的情况下实际的操作经 验。实验培养了我在实验中研究问题、分析问题和解决问题的能力以及培养了 良好的工程素质和科学道德。例如团队精神、交流能力、独立思考等提高 了自己的动手能力养了理论联系实际的作风强了创新意识。我把实验的过程分为了三个阶段。

实验前我只是复习了一下书本上所提到的相关知识致了解了基本的内

容、原理、实验过程及注意事项等要凭借记忆完成实验没有在网上搜 索知识点进行更加全面的复习者是提前用计算机联锁仿真培训系统做好预习一点就导致了我在做实验的时候有一点不明所以的状况是很不应该 的后在其他事情上一定要杜绝此类事情的发生。

在实验进行的过程中我发现仅仅依靠书本上学到的知识是完全不够的。实

验时遇到了很多问题电脑端的有些按钮不知道是什么意思站股道图及 某些色灯信号机的表示方法及意义由于没有记得很清晰而造成了混淆或者不知 其意的状况发生开始时点击了始终端可是股道上的信号机并不变色而无法 办理进路等问题。有些问题是看书者是小组成员之间经过讨论就可以解决 的有一些问题只有在问过老师之后才找到了原因而解决了问题得 实验得以顺利完成。这次的实验让我对联锁有了新的认识脑里对信号、道 岔以及进路等理论上的概念形成了更加形象的轮廓。而我们的同组的六个成员 各有各的优势热烈的讨论中把实验完成个人也都有了不同的进步 会了彼此的更加好的方法或者新的知识。

在实验结束后经过了长时间的反思认为自己在这次实验中出现了一些

问题。比如在实验前的预习工作做的不好应该认真看书课本上的知识 学透在脑子里后再用仿真模拟软件进行熟悉和练习验时才能做到 从容应对验时在不知道按钮表示的意义的情况下应该乱点一气该 问老师有就是实验时列车不可以离开轨道不可以随意的后退须调 车才可以返回。知道了这些进之后能使实验完成的更好。

最后们组举行了小组讨论顾了实验时用到的理论知识析了实

验时我们出的错以及做的好的地方且交流了对此次实验的感想别说了 说在这次实验中获得的知识以及经验。下面就是我在这次实验过后经过了认真 的思考以后总结了我从中收获的一些经验 在做实验前须要认真做好预习定要将课本上的知识识透为这

是实验的基础则老师讲解时就会听不懂将使得在做实验时的难度 加大费做实验的宝贵时间。如果什么都不清楚做实验时才去摸索 将是极大的浪费时间得事倍功半。更要了解实验的各项注意事项等样 在做实验时才会沉着冷静道什么该做么不该做少了很多不必要的 损失。做实验时定要亲历亲为必要将每一个步骤个细节弄清楚 弄明白。实验后得复习考样印象才深刻得才牢固则过后 不久你就会忘得一干二净。做实验时师还会根据自己的亲身体会一些 课本上没有的知识教给我们宽我们的眼界我们认识到这门课程的应用 是多么的重要。实验前必须做好充分的准备能够应对实验过程中可能发生 的各种状况着应对。

当然此之外们不仅要在课堂上认真的学习理论知识是要在实

验的过程中理论结合实际能达到实验的预期。我们必须要坚持理论联系实 际的科学思想和科学方法实践来证实理论实践中加深对理论知识的理 解和掌握。所以验是我们快速认识和掌握理论知识的一条十分重要的途 径。在实验过程中免的会遇到很多问题己解决不了的时候一定要通过 请教老师能了解到问题的所在然后再得以解决对不可以想当然的根据 自己的想法在电脑上胡乱的操作样的结果会发生什么谁都不知道许会 出现不可控制的局面。

这次实验还有一个地方做的不好是应该提前用模拟仿真的软件在自己 的电脑上与小组成员一起进行模拟实验前学习如何操作自己能够更加 熟练的运用实验室模拟软件样就可以节省很多的时间到不浪费资源。然后是要及时和同学讨论实验析清楚实验的目的验器材验过 程等自己不会的明白的知识过讨论或者是老师时搞懂要 让它遗留在心里样永远都是疑问不到解答。最后我觉得十分重要的事 情是实验过后一定要及时的做好总结则过段时间对于实验过程多少都 会有所遗忘多出现的问题或者是精彩的地方都无法清晰的呈现在实验报告 里会是很大的损失。当然是要从总结中发现自己的不足与缺点下 一次的实验中予以改正取不再犯同类的错。

第四篇：会计电算化实验步骤

用友U8V11实验步骤：

1.程序——用友U8V11——系统服务——应用服务器配置——数据库服务器——增加— —数据源：default、数据库服务器：本机名（如不知道本机名，可以通过单击右下角类似主机的图标查看，服务器名即本机名）——测试连接——确定。

2.程序——用友U8V11——系统服务——系统管理——系统——注册。接下来会弹出一个 对话框，要确保第一行是本机名，如果不是，请更改成本机名。倒数第二行会自己出来，如果自己没有出来，请等一等，出来后，点击登录。账套——建立——新建空白账套——下一步——账套号（学号后三位）账套名称（姓名班级，如张三文会123-6）；启用会计期间（和手工帐的会计期间保持一致）——下一步——单位名称（手工账单位名称）——下一步（注意行业性质是2007 年新会计准则科目，其他不用变）——下一步（对勾全打上）——下一步——完成——是。

编码方案：第一行 4 2 2 2 2 2 2 2 2。其他行不用填写——确定。数据精度：不用变——确定。

权限——用户——增加（编号：001，姓名：自己的名字，所属角色：账套主管。编号：002-005是小组其他成员的名字，角色是普通员工）。

权限——权限——修改（001号所有的都打对勾，002-005号只在基本信息和财务会计前面打钩）——保存。

3、程序——用友U8V11——企业应用平台。此时会弹出一个对话框：第一行是本机名。第二行是001（即账套主管的编号），第四行会自动过入。日期是之前设置的日期——登录。

进入后：

1、增加会计科目。基础档案——财务——会计科目——增加（增加二级会计科目点击增加，增加三级会计科目点击增加下级）。

2、录入期初余额。财务会计——总账——期初——期初余额。录入完毕后，进行试算，试算平衡后，开始填制凭证。3.填制凭证。财务会计——总账——凭证——填制凭证。此时会让设置凭证，选择最长的 那个，即：现金收款凭证、现金付款凭证、银行收款凭证、银行付款凭证、转账凭证 之后定义凭证类别：

现金收款凭证 借方必有 1001 现金付款凭证 贷方必有 1001 银行收款凭证 借方必有 1002 银行付款凭证 贷方必有 1002 转账凭证 凭证必无 1001、1002 4.然后开始逐笔输入凭证。

输入完后：退出当前系统，换一个人开始下一步的工作。

比如换成002，进入后：

1.财务会计——总账——凭证——主管签字。2.财务会计——总账——凭证——审核凭证。3.财务会计——总账——凭证——记账 4.财务会计——总账——期末——对账。]] 完毕后开始截实验报告要求的凭证的图片和明细账的图片。

截图完毕后，退出当前系统，换成001登陆，填制UFO报表。1． 财务会计——总账——UFO报表。2． 文件——新建

3． 格式——报表模板——所在行业选2007年新会计制度科目。财务报表选资产负债表— —确认——确定。此时会出现带有公式单元的资产负债表。4． 双击左下角格式，使之变成数据二字。5． 数据——关键字——录入——确认——是。

6． 利润表也是这样编制的。编制完成后，可以对资产负债表和利润表截图。

第五篇：IP实验步骤基本实验步骤

IP实验步骤 基本实验步骤

(1)收获细胞，加入适量细胞IP裂解缓冲液(含蛋白酶抑制剂)，冰上或者4?裂解30min，12,000g离心30 min后取上清;(2)取少量裂解液以备Western blot分析，剩余裂解液将1μg相应的抗体和10-50 μl protein A/G-beads加入到细胞裂解液，4?C缓慢摇晃孵育过夜;(3)免疫沉淀反应后，在4?C 以3,000 g速度离心5 min，将protein A/G-beads离心至管底;将上清小心吸去，protein A/G-beads用1ml裂解缓冲液洗3,4次;最后加入15μl的2×SDS 加样缓冲液，沸水煮10分钟;(4)SDS-PAGE, Western blotting或进行质谱分析。

一、样品处理: 免疫沉淀实验成功与否，第一步处理样品非常关键。免疫沉淀实验本质上是处于天然构象状态的抗原和抗体之间的反应，而样品处理的质量决定了抗原抗体反应中的抗原的质量，浓度以及抗原是否处于天然构象状态。所以制备高质量的样品以用于后续的抗体-agarose beads孵育对免疫沉淀实验是否成功非常关键。在这个环节中，除了要控制所有操作尽量在冰上或者4?完成外，最为关键的是裂解液的成份。

用于免疫沉淀实验的样品一般是原代培养细胞裂解液或者细胞系裂解液。我们以常用的RIPA裂解液为例(主要含有pH7.4左右的离子缓冲液，接近生理浓度下的NaCl，一定比例的去垢剂和甘油以及各类蛋白酶抑制剂等)来说明其各主要成份的用途，进而帮助我们如何针对不同的实验目的和不同的蛋白质特性来选择最佳的裂解液。

a(缓冲液:离子缓冲液常采用pH7.4的Hepes或者Tris-Cl。b(NaCl浓度一般习惯用150 mM，这主要是因为150 mM接近生理浓度，不会破坏蛋白质之间的相互作用。然而细胞内部的NaCl浓度并不是均一的，局部NaCl的浓度可以低到50 mM，150 mM的NaCl有可能会破坏这个区域的蛋白质相互作用。因此裂解液配方最佳的NaCl浓度要视所分析的蛋白的亚细胞定位而定。

c(甘油由于其粘性，可以对蛋白质之间的相互作用起到一个很好的保护作用。一般添加10%的甘油有助于稳定蛋白质之间的相互作用。

d(裂解液中的去垢剂可以裂解细胞质膜，也同时破坏了许多细胞器的膜，从而释放了其中储存的许多蛋白酶。而由于用于免疫沉淀实验的去垢剂作用比较温和，因此蛋白酶的活性大部分得以保存。还有一部分蛋白酶来自胞质中，主要由于其抑制蛋白或者其活性抑制环境受到改变后从而恢复了蛋白酶活性。因此，添加蛋白酶抑制剂对于防止目的蛋白的降解从而完成免疫沉淀实验非常关键。一般主要通过添加EDTA抑制金属蛋白酶，通过Protease Cocktail(多种蛋白酶抑制剂混合物)可以抑制蛋白酶。

e(去垢剂对于免疫沉淀实验尤其是免疫共沉淀实验是一个非常关键的因素。不同的去垢剂种类和不同的去垢剂浓度主要通过影响以下三个因素来影响免疫沉淀效果:-细胞质/器膜的通透性:因为许多目的蛋白都定位在细胞器中，所以必须先将这些蛋白释放出来，抗体才能与之反应。

-膜蛋白的释放:许多膜蛋白的构象对去垢剂种类和浓度非常敏感，因此针对这类蛋白的免疫沉淀实验，需要谨慎地尝试多种去垢剂以及不同浓度。

-蛋白相互作用:不同去垢剂对不同性质的蛋白质的相互作用影响程度不一样，需要根据具体蛋白的特性进行分析选择去垢剂种类和浓度。而由于何种去垢剂适应作用于何种蛋白质现在很难精准预测，所以一个更为切实可行的办法就是通过具体实验筛选合适的去垢剂种类和浓度。

二、抗体-agarose beads孵育

裂解细胞，离心并去除不可溶的膜组份后，上清可以储存在-80?保存3个月，但最好能够使用新鲜制备的细胞裂解液上清去进行抗体-agarose beads孵育实验。抗体可以先加入上清中与样品孵育数小时后再加入Protein A或者G beads孵育过夜，也可以同时加入抗体和Protein A或者G beads孵育过夜。一般选择1mg总蛋白(1mg/ml)对应添加1 ug抗体，最高可以添加至5 ug抗体，过多的抗体会产生假阳性。这个步骤中关键因素在于选择合适的阴性对照。一般选用加同样量的IgG，但更为妥当的方法是选择针对胞内其它无关目的蛋白的一抗做对照。例如，做膜蛋白A的免疫沉淀，选择膜蛋白B来做阴性对照，只要确认二者之间没有相互作用;而做胞质可溶性蛋白C的免疫沉淀，则选择另外一个可溶性蛋白D来做阴性对照。同时，为避免Protein A或者G beads有(非)特异性吸附从而造成免疫沉淀实验结果的假阳性，一般在加入目的蛋白抗体之前，预先将Protein A或者G beads与细胞裂解液孵育数小时，然后取上清用于后续的抗体-agarose beads孵育。

同时，Protein A或者G beads对不同类型的抗体亲和力不同，结合一抗的种属和Ig亚型，选择合适的Protein A或者G beads也是决定免疫沉淀实验成功与否的一个重要因素。一般推荐使用Protein A和Protein G beads的混合物，这样可以达到最佳实验效果，而且省去了许多选择的烦恼。

三、抗体-agarose beads复合物洗涤: 除了选择特异性好的抗体以及选择合适的阴性对照外，去除免疫沉淀实验非特异性的一个办法是对抗体-agarose beads复合物进行多次洗涤。一般洗涤缓冲液使用和裂解液一样的配方，但去除甘油，以减少由于甘油的粘性带来的非特异性吸附。针对不同的实验要求，还可以通过更改NaCl的浓度以及去垢剂的比例，种类来达到去除非特异性吸附的效果。例如，针对单纯的免疫沉淀而非免疫共沉淀实验或者虽然是进行免疫共沉淀实验，但蛋白质之间的结合比较牢靠，可以考虑使用低浓度(0.2-0.5%)的SDS洗涤抗体-agarose beads复合物，这样可以去除绝大部分非特异性相互作用。

四、鉴定

免疫沉淀实验用途非常广泛(见IP: Q&A)，而且基于最基本的免疫沉淀实验衍生出了许多免疫沉淀相关实验手段(比如免疫共沉淀，染色质免疫沉淀和RNA-蛋白免疫沉淀)，因此，免疫沉淀实验的鉴定方法主要视实验目的而定。

我们在本手册中主要简单概述常见的免疫沉淀之后的WB检测需要注意的实验环节。由于

免疫沉淀实验使用目的蛋白抗体加Protein A/G beads与样品孵育，因此在最后离心获得抗体-agarose beads复合物后，eppendorf管中主要含有抗体，目的蛋白，Protein A/G beads以及一些其它非特异性作用蛋白。其中，抗体和目的蛋白以及Protein A/G beads三者之间是以非共价健结合在一起，只有Protein A/G与agarose beads是共价结合在一起的。因此，最后经过添加含巯基乙醇的加样缓冲液以及煮沸变性并离心出去Protein A/G beads后，eppendorf管只有抗体和目的蛋白以及少量非特异性吸附蛋白。这样SDS-PAGE中就含有目的蛋白和抗体二种蛋白，由于加样缓冲液中含有巯基乙醇从而导致抗体的重链与轻链之间的二硫键被破坏从而使得抗体分子变成重链分子(55KD)和轻链分子(25KD)。因此，WB显色反应中除了能检测到目的蛋白外，如果所使用的二抗与用于免疫沉淀实验的抗体分子属于同一种属的话，还能检测到重链和轻链分子。通常用于免疫沉淀的抗体量非常大(1ug)，所以当目的蛋白的大小接近重链或者轻链分子时，重链或者轻链分子的WB信号常常由于信号过强而导致影响对目的蛋白的WB结果判断。

针对上述情况，通常有二种解决办法: a(选择不同种属的抗体分别进行免疫沉淀实验和WB实验，这样再选择一个种属交叉反应比较弱或者无种属交叉反应的二抗进行WB实验，就可以大大减弱重链和轻链分子的WB信号。

b(使用交联剂将抗体和Protein A/G beads交联，然后通过添加不含巯基乙醇的加样缓冲液处理目的蛋白-抗体-agarose beads复合物，最后离心去除抗体-agarose beads复合物，上清中只留下目的蛋白。

免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)原理

IP是利用抗原蛋白质和抗体的特异性结合以及细菌蛋白质的“protein A/G"特异性地结合到抗体(免疫球

蛋白)的FC片段的现象开发出来的方法。目前多用protein A/G预先结合在argarose beads上，使之

与含有抗原的溶液及抗体反应后，beads上的prorein A/G就能达到吸附抗原的目的。通过低速离心，可以从含有目的抗原的溶液中将目的抗原与其它抗原分离。

免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法，是确定两种蛋白质是否在生理条件下有相互作用的有效方法。其原理是:当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质,蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X，那么与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合;也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用蛋白。

白与蛋白 寻找新的 经由免疫共沉淀然后通过质谱或者的相互 相互作用 WB鉴定新的相互作用蛋白 作用 蛋白

验证目的 经由免疫共沉淀然后通过使用待测 蛋白和 蛋白 待测蛋白 的抗体进行WB实验可以确定目的蛋 是否有 白

相互作用 和待测蛋白是否有相互作用 通过对经由免疫共沉淀而得到的DNA 片段进行PCR实验可以获得DNA片研究蛋白与DNA的动态作用 段的序列信息以及目的蛋白与DNA 之间的动态作用信息

通过使用针对组蛋白不同修饰位点的研究蛋白 抗体进行染色质免疫沉淀实验去检测

染色质 与DNA 研究组蛋白的各种共价修饰 组蛋白的不同修饰状态和目的基因启

免疫沉淀 的相互 与基因表达之间的关系 动子之间的动态相互作用，从而研究作用 组蛋白修饰与目的基因表达之间的关

系

基于CHIP的原理发展出来的RIP 研究蛋白与RNA的相互作用(RNA-IP)技术可以用来研究目的蛋 白与RNA之间的相互作用信息

我该选择什么样的抗体做免疫沉淀，免疫共沉淀和RNA免疫沉淀以及染色质免疫沉淀, 在所有免疫沉淀相关实验中，抗原的起始浓度相对其它免疫相关实验(WB和IF等)要低得多，所以对抗体的亲和力相对其它实验(WB和IF等)提出了很高的要求，这就需要使用高亲和力的抗体去进行免疫沉淀相关实验。同时，由于免疫沉淀相关实验主要是在生理条件性进行，所以需要抗体识别蛋白的天然表面构象，因此选择的抗体其针对的抗原决定蔟需要暴露在蛋白表面。这些因素对制备能成功应用于IP实验的抗体提出了很高的要求: a(用于免疫的蛋白抗原其构象需要尽量接近目的蛋白的天然构象或者用于免疫的多肽尽量暴露在目的蛋白的表面。获得接近天然构象的蛋白抗原的途径有很多，主要有天然提取，原核表达重组蛋白以及真核表达重组蛋白三种方式。这其中，就蛋白构象角度而言，天然提取是最佳途径，但这种方法受材料来源限制和纯化方法复杂等多因素影响，一般很少采用。原核表达因为成本低廉，操作方便最为受欢迎，但其受表达环境与大部分蛋白天然存在环境差别巨大，构象失真情况严重，抗原的构象质量有严重问题。大规模瞬时真核表达是近期新兴的表

达系统，具有表达环境接近天然，操作方便等诸多优点，是获取具有天然构象蛋白抗原的首选工具。

b(亲和力要比普通的抗体应用要求高得多。多克隆抗体由于可以结合目的抗原的多个抗原决定簇，所以在亲和力方面是首选。但考虑到特异性，获得单克隆抗体群是更好的选择。具体优缺点总结如下表。

单克隆抗体群(由一个免疫原产生的多 多克隆抗体 单克隆抗体 个单克隆抗体混合物)抗体抗原作由抗体的亲和力决定(极佳极佳 极佳 用信号强度 或者极弱)通常很好，但有时会极佳(由于选择可以进行IP且没有交特异性 极佳，但有时会有交叉反应 有非特异性相互作用 叉反应的抗体组成单克隆抗体群)亲和力高(由于抗体特异性好，亲和力高(由于选择可以进可以与目的蛋白的多特异性好，且可以无限量供优点 行IP且没有交叉反应的抗体组成单克个抗原决定蔟相互作应 隆抗体群)用)需要筛选亲和力高的抗体;能够筛选得到的符合条件的单克隆并非特异性相互作用很缺点 抗原表位可能会被相互作不多，所以单克隆抗体群也就不容易获难去除 用蛋白遮蔽 得

免疫沉淀效由抗体的亲和力决定(极佳极佳(由于选择可以进行IP且没有交极佳(由于亲和力高)果 或者极弱)叉反应的抗体组成单克隆抗体群)由抗体的亲和力决定和抗通常很好，但有时非免疫共沉淀原表位是否被相互作用蛋极佳(由于选择可以成功进行IP且没特异性相互作用会带效果 白遮蔽决定(极佳或者极有交叉反应的抗体组成单克隆抗体群)来假阳性 弱)由抗体的亲和力决定和抗

通常很好，但有时非原表位是否被遮蔽或者以染色质免疫极佳(由于选择可以成功进行IP且没特异性相互作用会带及抗原表位是否被交联实沉淀效果 有交叉反应的抗体组成单克隆抗体群)来假阳性 验所破坏决定(极佳或者极

弱)