酵母菌分类学的研究进展王志伟

第一篇：酵母菌分类学的研究进展王志伟

酵母菌分类学的研究进展

07级农学系生物技术2班王志伟0701024208

一、摘要随着生物技术的发展,一些新方法应用于酵母菌分类中,使酵母菌分类学研究从过去的传统分类系统过渡到以遗传特征（DNA序列）为主要依据的现代分类系统。本文将介绍脉冲电泳核型分析(PFGE)、PCR-LFP和RAPD 3种分子生物技术的方法、原理,以及在酵母菌分类鉴定方面的应用现状,并指出了各种技术的局限性和应用前景。

关键词：脉冲电泳核型分析(PFGE)PCR-LFPRAPD应用进展

二、简介经典分类学方法在酵母菌分类中的应用

经典分类学方法是酵母菌分类学方法的基础,包括形态学特征和生理生化特征。形态学特征包括宏观特征(菌落特征)、微观特征(细胞形态、无性繁殖方式、有性生殖方式、孢子类型、假菌丝的形成)等;生理生化特征包括对糖发酵和碳、氮源化合物同化的能力,对外源维生素的依赖性和不同温度下的生长能力等生理学特性。但是，随着酵母菌资源库不断丰富和新种不断被发现，单靠经典的形态学和生理生化差异作为酵母菌种间鉴别依据有时是不够的。所以现在该法只能作为酵母鉴定系统的基础辅助其他分类方法使用。

三、分子分类学方法在酵母分类中的应用

rDNA序列分析是近年来广泛应用的用于判断不同分类群亲缘关系远近的指标, 在rDNA中, 26SrDNA(LSU)和18SrDNA(SSU)以串联重复的方式排列,在细胞内有数以百计的拷贝,增加了扩增成功的可能性。rDNA内某些片段具有高度的保守性,同一细胞内不同拷贝的rRNA基因序列,因协同进化作用而被均一化,因此每一拷贝的序列是相同的。当前酵母分类中最为常用的包括18SrDNA、26SrDNA D1/D2区、ITS区等[1]。序列分析的大致流程是:活化菌株,提取目的菌株的基因组DNA,并以此为模板使用酵母菌通用引物扩增相应的区域,扩增产物经电泳检测,纯化后进行测序;将测序得到的序列提交到Genbank等核苷酸数据库,与库中所有酵母菌的同源序列进行相似性比较,与相似度最高的序列的碱基差异越小, 成为该序列所对应菌种的可能性就越大。也可以从核苷酸数据库中下载同源序列,构建系统发育树,研究菌株的系统发育地位。

3.1脉冲电泳核型分析(PFGE)：

脉冲电泳是一种可在琼脂糖凝胶中将不同大小的完整染色体DNA分子分开的技术；核型分析就是应用脉冲电泳方法发展起来的一种新的实验技术,把整个染色体包埋在琼脂糖凝胶中,依赖染色体的大小和立体结构（代表了一个生物所含有遗传物质的多少及其组成形态,该特征随物种变化而变化,因而具有特定的系统分类学意义）及在凝胶中的不同迁移速度把基因组分离成染色体带[2 ]。简要的实验步骤包括原生质体制备、制胶、电泳、凝胶的溴化乙锭染色观察4个过程。而影响PFGE 成败的因素主要有两种:一是完整染色体DNA 的制备,二是合适的脉冲电泳条件。脉冲电泳的原理是通过电场不断改变, 迫使DNA分子的泳动方向做相应的改变,小的DNA分子比大的变形快,故前者比后者泳动速度快,从而将不同大小的DNA分子分开[3]。随着脉冲电泳仪的改进以及完整染色体DNA提取方法的发展,脉冲电泳技术越来越多的被应用于酵母菌的分类学研究中，又因为PFGE分析带型清晰易辨、分辨力较强,可达10000 kb 以上,适用于近缘关系菌株的分类研究，可作为变种鉴别和种内分型的新基因型方法，故而它对于酿酒酵母菌在传统方法分属后的进一步分类有重要作用。

3.2限制性片段长度多态性DNA(PCR-LFP)

RFLP即限制性片段长度多态性(restriction ragment length polymorphism)是REFP 的改进形式,它采用DNA 探针和分子杂交技术,特异性更强。PCR-LFP 是将PCR扩增的基因组DNA用限制性内切酶酶解,经电泳分离后表现的限制性片段长度差异，酵母基因组含有丰富的遗传信息,且有较大差异,不同菌株的同源序列（5.8S-ITS区域的PCR-RFLP使用得最为广泛[4]）肯定具有不完全一致的酶切位点，,这为该方法在酵母菌分类上的应用提供了可能。，核糖体存在于所有生物细胞中,几乎有一个共同的起源,而且某些rRNA 序列对所有的同源生物是相当保守的,从而可以确定所有生物的分类地位。核基因组rDNA 的内转录区间ITS(Internal Transcribed Spacer)适用于种以下的分类和鉴定。利用引物扩增rDNA 的ITS 区域,用限制性内切酶消化,不用杂交,也可获得RFLP图谱。FERNANDEIESPLNAR 等扩增5.8SrRNA ,包括了内转录区间ITS1和ITS2 ,扩增后的基因数目从700～870 bp不等,以此对酵母菌进行RFLP鉴定分析[3 ]。

Kuhlea 等(2001)用PCR-FLP分析法分析了啤酒中的酵母类群CECT-ATA联盟建立了一个网上酵母菌鉴定数据库(http: / /www.xiexiebang.com /)里面存储了酵母菌5.8S-ITS 片段及经Cfo I、Dde I、Hae III, HinfI限制酶酶切后的信息,只需将菌株扩增的5.8 S-ITS片段大小和经酶酶切后的片断数量及大小

[5]输入数据库,就可快速简单地鉴定一个菌株到种。

3.3 随机扩增多态DNA(RAPD)

RAPD(随机扩增多态DNA)是在PCR 技术的基础上发展起来的一项多态分析新技术。其原理是利用大约10 个碱基的随机引物以PCR 技术为基础，对整个基因组DNA 进行扩增，得到多个片断，再利用聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）检测个体间扩增出的片断的多态性，可以辨别出菌株间基因组DNA 内核苷酸序列存在的微小变异[6]。由于该方法中选用引物的碱基是随机的,所用引物可达成百上千,可检测到生物体的整个基因组,既能检测有功能的基因编码区,又能检测到重复序列区。与RFLP相比RAPD 大大减少了如制备克隆、Southern印记、分子杂交

[7]等准备工作,简化了技术过程所需的条件 ,它以随机寡核苷酸为引物,比RFLP

多态片段短许多,更方便种与亚种的鉴别。

RAPD 的主要缺点有: ①RAPD 标记中的EB 染色带往往是一种混合标记,是在基因组DNA 中扩增位点不一,长度可能相同或不同的一组片段的混合片段标记;②RAPD 的扩增带多为显性标记,不能区分个体基因型是纯合型还是杂合型;③稳定性和重复性较差。

四、展望

酵母菌分类学方法的发展趋势应该是向着简便、快捷、准确、合理的方向发展。就当前情况来看,任何一种方法都不完美,只有将各种方法结合起来使用,才能达到令人满意的鉴定效果。随着生物技术正越来越多地应用于酵母菌的鉴定，目前流行的鉴定程序是,首先对酵母菌进行形态特征, 在此基础上对DNA测序分析,多种方法综合运用就会得到较为满意的结果。分子分类学方法的研究为酵母菌的分类展示了广阔的前景和越来越重要的作用。

五、参考文献：

[1] 王庆国.刘天明.酵母菌分类学方法研究进展微生物学杂志 2007年5月第27卷第3期

[2] 刘永翔.刘作易脉冲电泳技术在真菌研究中的应用贵州农业科学 2004 ,32(5):82～83

[3] 毛志群.张伟.马雯.分子生物技术在酵母菌分类中的应用进展河北农业大学学报2002年5月第25 卷增刊

[4] 卢君.李艳酿 分子生物学技术在葡萄酒相关酵母菌分类鉴定中的应用及研究进展酒科技2009 年第6 期（总第180 期）

[5] KUHL E A , J ESPEREN L , GLOVER R L K.Identification and characterization of S accaromyces cerevisiae strains isolated from West African sorghum beer[J ].Yeast ,2001 ,18(1):106938

第二篇：王伟简介

王伟简介

王伟，性别：女，出生时间：1977年5月26日，1996年毕业于长春煤炭工业学校师范专业，2006年学习汉语言文学，2009年毕业于渤海大学中文系，本科学历。

教学中潜心钻研教材教法，广采他山之石。先后参加南票区、葫芦岛市教师培训。课前，她围绕新课改理念，深刻领会新课标内涵，准确把握、认真钻研教材，制定科学合理的教学目标。课堂中，她把各种教学方法有机地结合起来，阅读教学做到融整体把握、突出重点、品味语言、领悟写法为一体，实现师生、生生之间平等对话，合作交流，她的课因学生个性的张扬而美丽，因教学理念的前卫而精彩。多节公开课已录入南票区教育局“名师俱乐部”。

她所带的中队常年坚持“阳光助残”，帮助双目失明的孤身盲人——杨振荣，多年来风雨无阻，从不间断，孩子们与杨爷爷朝夕相处，不是亲人，胜似亲人。时光流转，岁月更迭，虽然队员们更换了一批又一批，但“雷锋助残中队”阳光助残活动始终如一，一如既往，阳光助残的接力棒在一批又一批的队员手中不断地传承着。“雷锋助残中队”曾经被辽宁省评为“英雄中队”，“雷锋助残中队”的事迹先后在葫芦岛电视台、辽宁电视台、中央电视台等各家媒体不断播放。王伟本人参加了辽宁电视台《中国好人》“你是我的眼”节目的录制。辛勤耕耘换来累累硕果，多年来曾经荣获“葫芦岛市基础教育课程改革实验工作先进个人”、“葫芦岛市优秀班主任”、“葫芦岛市骨干教师”、“葫芦岛市家长学校骨干教师”、“南票区优秀教师”，所带班

级曾经荣获“辽宁省英雄中队”、“葫芦岛市红旗中队”、“葫芦岛市三好班级”、“南票区三好班级”，《我爱我班》被评为葫芦岛市优秀班会、《感恩》一课在南票区教学竞赛中被评为优质课。

成绩不能满足，荣誉催人奋进。作为一名教师，觉得自己始终要践行为人之道，从师之道。特别是在实施教师绩效考核的今天，她觉得教师更要讲敬业和奉献。她始终就是这样去做的，坚守着三尺讲台辛勤耕耘、开拓创新、默默奉献。她相信她的未来不是梦，因为，在她的心中，学生永远是天使，她就是为天使修补翅膀的人。

第三篇：邀请函王伟

主办单位：清镇市新发现信息周报

承办单位：待定

赞助单位:

支持单位:

合作单位： 贵州天运成企业管理咨询有限公司贵州六度文化传播有限公司清镇市市政府诚信办(拟定)

尊敬的董事长/总经理

您好！我们诚挚的邀请您参加“新发现商务”论坛，期待您的光临。论坛的核心是通过客户的交流资源共享由此带动的一系列其它领域的商务模式创新，帮助清镇中小企业及个商界人士降低成本快速发展。我们将邀请本土的是人类经济发展史中前所未有的科学技型、创新新型经济。移动互联网新技术、50年以来的第5个财富周期，每个周期的赢家往往比上一个周期的赢家创造更大的财富。新的赢家不断涌现，把握新的财富周期、顺应行业趋势、利用移动互联网，中小企业就能实现快速成长。移动智库，包括政府领导、知名学者、战略管理专家和新经济营销专家等，共同为中小企业出谋划策，帮助中国的中小企业快速建立渠道、快速树立品牌、快速营销突破、顺应产业趋势，智库在全国开展巡回活动，帮助中小企业快速成长。

【会议时间】：2011年 月日星期六 下午13:30

【会议地址】：清镇市东风发电厂新发现广告四楼

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【参会要求】：凭邀请函参加会议。仅限一人参加，无邀请函谢绝入场、参会企业商家客户均有机会获得新发现提供的广告支持及企业管理咨询服务……

【会议内容概述】：广告与产品的利润关系;中小型企业如何做有效宣传广告定位;清镇市目前的各类广告运作模式解析；企业主如何选择适合自己的广告，如何应用广告开发新市场建立销售渠道，广告与商人，参会嘉宾确认回执单

要求：请填写好回执单并加盖公章回转至0851-2529277（请及时回执，座位有限）会务专线：热线电话：0851-2529277***刘先生

第四篇：周口市电化教育先进个人事迹材料 西夏二中 王志伟

周口市电化教育先进个人事迹材料

西华县西夏镇第二初级中学

王志伟

王志伟，男，现年39岁，毕业于河南教育学院，中学二级教师，在西华县西夏镇第二初级中学工作。上班以来，一直担任学校八年级的英语教学工作，据学校工作的需要，我还兼职负责学校的多媒体教室、电脑室、卫星接收室和 光盘播放室的管理和维护工作。自从去年我县实施义务教育电教装备薄改以后，我还负责学校的网络设备和教室教学一体机的日常管护工作。

作为学校一名普通的教育工作者，在工作上，勤勤恳恳，无私奉献。辛勤的付出，工作中认认真真。得到了上级和学校领导及同事们的信任与尊重。在我的日常管护下，学校的电教设备完好无损，运行正常。不仅保障了学校电教工作的正常开展，还多次成功地举办了县级优质示范课的评选活动。得到县局和学校领导的表扬和肯定。

信息技术变革教育。2010年，国务院审议通过了《国家中长期教育改革和发展规划纲要(2010-2020年)》。《纲要》中明确提出：信息技术对教育发展具有革命性影响，必须予以高度重视。到2020年，基本建成覆盖城乡各级各类学校的数字化教育服务体系，促进教育内容、教学手段和方法现代化。充分利用优质资源和先进技术，创新运行机制和管理模式，整合现有资源，构建先进、高效、实用的数字化教育基础设施。加快终端设施普及，推进数字化校园建设，实现多种方式接入互联网。重点加强农村学校信息基础建设，缩小城乡数字化差距。

针对以上情况，我深感责任重大。作为一名青年教师，在政治思想方面，要让自己健康向上，正确引导和影响身边的同事和学生。在业务上，我积极参加市县举行的各种培训和学习活动。还通过电视、互联网了解国家大政方针，时刻把教育政策和正确的舆论导向放在第一位，在平凡的工作中，自觉地用中小学教师行为规范来约束自己。做好工作中的每一件事。

教育就是服务。做电教管理工作，我认为搞好服务就是本职工作。竭尽所能为全校师生服务，才是工作的重点。西夏二中是一所农村中学，办学条件有限，教师队伍缺乏。学校的电教设备在管理和维护工作方面不可或缺，学校领导比较重视，我也乐于付出。在学校领导安排任务之后，我总是第一时间出色完成，从不计个人得失。

微信公众平台，是传播信息，凝聚情感的校园新媒体。2014年10月底，我校成功开通了微信公众平台，我担负起每天的微信发布任务。通过微信平台，我们及时传播国家的教育政策和法规、校内外的教育信息和现代家教理念。微信平台的开通，我们加强了家校联系，提升了办学品质。得到了上级领导和社会的好评。

强化信息技术应用。提高教师应用信息技术水平，更新教学观念，改进教学方法，提高教学效果。2014年底，周口市信息技术能力提升国培教育工程动员会在西华召开。我作为西夏二中的教师代表参加了西华县国培辅导教师培训班。在培训班上，从北京奥鹏专家那里学到了新的教育理念。再次感到现代信息技术教育在教育发展中的重要性。日前，国培工作正在积极推进。我在做好本职教学工作的同时，还在不断认真做好我县初中英语07班的国培辅导工作。

为了加快推行学校的网络化、办公计算机化、无纸化，我和同事积极配合。电脑和网络一旦出现问题，我都积极主动去帮他们解决。由于自己的无私和热心，我在学校也成了大忙人。几年来，我在工作上的努力和付出，也得到了学校领导和同事们的一致好评。我个人认为，作为一个人还是多一份善良为好，帮助他人，快乐自己。

西夏二中自从接了网络光纤以来，我利用网络这个“平台”，建立了校园教师课改交流QQ群。利用网络，本校教师可以相互交流教学心得，极大的提高了教师的电教操作技能。在满足学生学习的同时，为我校信息技术的发展奠定了良好的基础。

成绩的取得，已属过去。在今后教育教学管理工作中，我会更加珍惜机会、奋进不止，为办好西华人民满意教育事业，做出更大的贡献！

第五篇：王志伟评李宝环的主题班会课

评李宝环的主题班会课

王志伟

1.目标：

这节课的目标制定的合理有效，贴地皮，接地气；英雄在学生的心目中往往是遥远的，触不可及的，李老师的这节课从海林本土的英雄杨子荣出发，切入主题，学生易于接受，整节课不在于对英雄实际和精神的歌功颂德，而是结合学生实际从小处着手，润物无声的陶冶学生的情操，树立正确的三观。

2.策略：

（1）整体感知策略：列举董存瑞、雷锋、鲁迅、袁隆平的事例，学生感知英雄，引入课题。

（2）小组讨论策略：不单纯讲述杨子荣的事迹，而是组织学生讨论，让思维碰撞。

（3）媒体辅助策略：李老师精心搜索的杨子荣视频，帮助学生深入了解英雄的精神。

（4）问题引领策略：李老师这节班会课的精彩之处，就在于问题提出的恰到好处，教师引导的水到渠成，学生在李老师的引导下思考老师的问题，发表自己的见解，陶冶了情操，升华了人格。

（5）氛围感染策略：最后一环的宣誓，振奋人心，学生受到这种易气氛的感染和熏陶。

3.评价：结合实际的问题可以再精心设计，再当时的氛围中，有思维绑架的嫌疑！