菌种安全管理制度

第一篇：菌种安全管理制度

盐城市妇幼保健院

菌种安全管理制度

1、菌种应专人负责保管，并由部门负责人经常督促检查。若因工作变动，应及时作好全面交换工作。

2、菌种应保存于安全的地方，所用冰箱等保存容器均应加锁，若要运输或携带必须置于金属罐内密封，由专人领取。

3、建立严格使用登记制度。

（1）所有菌种须按种类、来源、数量购买时期一一登记入册。

（2）使用时须使用者签字，主任审批。

（3）实验菌种使用完毕须高压来菌处理并作好销毁记录。

4、保存的菌种应于规定时间定期移种。

5、培养菌种的试管和干燥菌种的安瓿上应贴标签，写明编号，菌名及日期。

6、菌种不得外借，不得随便带出实验室。

7、菌种保存范围，转移和销毁等必须严格遵守卫生部有关规定，主任不定期检查，核实菌种使用销毁情况。

第二篇：菌种传代操作规程

GMP管理文件

题

目

菌种传代操作规程

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制

定

审

核

批

准

制订日期

审核日期

批准日期

颁发部门

质量部

生效日期

分发部门

化验室

一、目的：为使菌种传代操作规范化、制度化，故建立此规程

二、适用范围：菌种传代须按本规程执行。

三、责任者：微生物限度检查化验员，质量检测中心主任。

四、正文：

1、培养基的制备

按微生物限度检查用稀释剂、培养基配制操作规程及斜面配制操作规程配制好相应培养基。大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、沙门菌、用胰酪大豆胨琼脂斜面培养基，白色念珠球菌、黑曲霉用沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基，制备好的培养基预培养48小时后，确认无菌落生长方可使用。

2.菌种传代

2.1菌种传代前应准备好适于该菌种生长的培养基和培养设备，所有操作均应在符合生物安全保护的生物安全柜内进行。

2.2点燃酒精灯，在火焰上部操作，将原有的菌种斜面（简称菌种管）与待接种的新鲜斜面培养基（简称接种管）持在左手拇指、食指及中指之间，菌种管在前，接种管在后，使试管内斜面向上，两支试管口平齐，应斜持试管呈45°角，以免管底凝集水浸湿培养基表面。用右手在火焰旁转动两支试管胶塞，以便接种时易于拨取。再用右手持接种环的柄端，垂直或稍斜地把接种环在火焰上灼烧。将接种环烧红约30s，随后将接种棒金属部分在火焰上烧灼，以彻底灭菌。用右手的小指和手掌之间以及无名指与小指之间，在火焰旁分别拔除两支试管的胶塞，持住。在将试管口在火焰上通过以杀灭管口的细菌，但勿烧的过热，将烧灼的接种环插入菌种管内，先接触无菌苔生长的培养

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菌种传代操作规程

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基上，如有溶印则表明接种环未冷却，待冷后，再从斜面上挑取少许菌苔。取出时接种环不能通过火焰，应在火焰旁迅速插入接种管，在斜面上由下而上划

“Z”字型曲线，当接种完毕，立即将管口通过火焰灭菌，右手到火焰旁塞上胶塞，不要将管口离开火焰旁去迎接右手的胶塞。最后将接种环烧灼灭菌放置备用。

3.培养

将以上接种好的各菌管放入相应温度的培养箱内，白色念珠菌放入23-28℃培养箱内培养24-48h，黑曲霉放入23-28℃培养箱内培养5-7天，其它菌种放入30-35℃培养箱内培养18-24小时。

4.保存

除铜绿假单胞菌需室温保存外，将其它传代培养后的菌种应放入4-6℃的冰箱冷藏保存。

依据：《中国药典》2015版及中国药品检验标准操作规范

第三篇：食用菌菌种买卖合同[最终版]

出卖人： 签订时间：

买受人： 签订地点：

起始日期: 截止日期: 计划金额(元):

第一条 标的、数量、价款及交(提)货时间

产品名称

交货时间

单位

（kg）

数 量

单 价

保护价

（元/kg）

总金额

（元）

第二条 质量标准：按《食用菌菌种管理条例》和《无公害江山白菇省级地方质量标准》标准执行。检验标准、方法、地点及期限；买方于菌种接种之日起10日内提出验收要求的，按前款规定的质量标准到买方种菇地验收。卖方自接到买方在上述期限内提出的验收要求之日起3日内未办理验收的，视为质量不合格。买方在上述期限内未提出要求的，视为质量合格。

第三条 白菇菌种的交货地点、时间及提供方式：和方式为：_____________。

第四条 定金:买方在 年 月 日前向卖方支付收购定金______元。交货时定金(抵作货款)。定金支付后，因买方违约解除合同的，定金不予退还；因卖方违约解除合同的，应双倍返还定金。

第五条 标的物的所有权自_______时起转移，但买受人未履行支付款价义务的，标的物属于_________所有。

第六条 运输方式及运输费用负担；由卖方送到买方指定的——投售点。运输费用由_______方负担。

第七条 结算方式、时间及地点：_______________________________________。

第八条 担保方式(也可另立担保合同)__________________________________。

第九条 菌种瓶的供应及回收和费用负担：菌种瓶由卖方提供，每个菌种瓶收取押金______元，由买方于菌种出售后_____日内返还菌种瓶时按实际返还的个数退回。

第十条 本合同解除的条件____________________________________________。

第十一条 违约责任：违约方按合同总金额的______％向守约方支付违约金。

第十二条 合同争议的解决方式：本合同在履行过程中发生的争议，由双方当事人协商解决；也可由当地工商行政管理部门调解；协商或调解不成的，按下列第__种方式解决：

(一)提交______仲裁委员会仲裁；(二)依法向_______人民法院起诉。

第十三条 本合同自_______________起生效。

第十四条 其他约定事项；卖方必须做好对买方的售后技术指导服务。买方未按卖方的技术指导操作而引起的损害，由买方自负。菌种在有效期内出现质量问题的，由卖方负责调换。

出 卖 人 买 受 人

出卖人(章)： 买受人(章)：

住所： 住所：

法定代表人： 法定代表人：

居民身份证号码； 居民身份证号码；

委托代理人： 委托代理人：

电话： 电话：

开户银行： 开户银行：

帐号： 帐号：

第四篇：微生物菌种纯度检测技术规程

微生物菌种纯度检测技术规程范围

本规程规定了古菌、细菌、真菌、病毒（种）纯度检测的程序和方法。

本规程适用于从事微生物菌种资源保藏及研究的机构、大学、企业、个人等。术语、定义

下列术语和定义适用于本规程

2.1

纯度检测 purity check

指通过适当的方法检测菌种是否为纯培养物。

2.2

纯培养pure culture

由单个细胞的后代组成的培养物，即单细胞培养物或无性繁殖系。通常是由挑取单个菌落或利用单胞分离技术，移种繁殖获得。菌种的纯度检测

3.1 古菌和细菌的纯度检测

3.1.1 菌落形态

在特定的培养基上，将待检测培养物稀释涂布或平板划线，适宜培养后，同一平板上的单菌落的大小、形状、颜色、质地、光泽等是否相似；对于两种或以上形态的出发菌株，应再分别挑取单菌落划线或稀释涂布培养，检测是否重复出现相同特征。

3.1.2 细胞形态

对数生长期的培养物革兰氏染色反应应呈现一致性；细胞形状、大小、荚膜等特征应相似

3.1.3 芽孢大小、位置、形状

宜检测样品是否形成芽孢，对形成芽孢的菌种，其芽孢大小、位置、形状应相似。

3.2 放线菌菌种纯度检测

3.2.1 菌落形态

在特定的培养基上，将待检测培养物稀释涂布或平板划线,挑取单菌落，适宜培养后，在同一平板上单菌落形状、大小、表面状况、质地、光泽、颜色等应相似。如怀疑为细菌污染，则30℃液体培养24小时，培养液不应浑浊，如浑浊则视为细菌污染。

3.2.2 培养特征

分别接种三种以上培养基，在三种以上培养基上的培养特征应想同，包括气生菌丝、基内菌丝、可溶性色素的颜色等。

3.2.3 孢子丝及孢囊

在特定的培养基、培养温度及培养时间等条件下，孢子着生方式、孢子丝形态及其颜色或孢囊着生位置（气丝或基丝）、孢囊的形状，大小应呈现出一致性。

3.3 酵母菌种纯度检测

3.3.1 菌落形态

应对菌落形态相似性进行检测。在特定的培养基上，通过对待检测菌株进行稀释或划线涂布平板获取单菌落，一定的培养条件下，比较同一平板内，菌落的大小、形状、颜色、隆起、表面状况、质地、光泽等应一致。

3.3.2 个体形态

应对检测样品的个体形态进行检测。在指定的培养基及培养条件下，细胞形状、大小及细胞的增殖方式应一致。

3.3.3 繁殖方式

酵母繁殖的方式应一致，如是芽殖，出芽的方位、数量应一致。

3.4 丝状真菌菌种纯度检测

3.4.1 菌落特征

菌落的形态等表观特征应一致。

3.4.2 菌丝特征

在特定的培养基和培养条件下，菌丝分隔、菌丝形态等应一致。

3.4.3 其他主要显微特征应一致

3.4.4 检测是否有细菌污染

3.4.5 对于外观上不能确定菌种纯度的，利用单胞分离技术获得纯培养物进行对比，其菌丝、孢子等特征应与原始菌株的描述一致。

3.5 病毒的纯度检测

3.5.1 纯粹检查

应将待检病毒液直接接种含硫乙醇酸盐培养基（T.G）、酪蛋白胨琼脂培养基（G.A）、葡萄糖蛋白胨汤。通过一定温度时间培养后，检查结果应无细菌生长为纯粹。

3.5.2 支原体检查

检测由禽胚组织或其细胞所培养的病毒应用改良Frey氏培养基。检测其它培养方法所得病毒应用支原体培养基。任何一次琼脂平板上出现支原体菌落，判为阳性。阳性对照中至少有一个平板长菌落，而阴性对照中无菌落生长，则检验有效。

3.5.3 外源病毒检查

病毒类制品在毒种选育和生产过程中，经常使用动物或细胞基质培养，因此，有可能造成外源因子（特别是外源病毒因子）的污染。为了保证制品质量，需要对毒种和细胞进行外源因子检测。

3.5.3.1 病毒种子批外源因子检查

对病毒主种子批或工作种子批，应抽取足够检测试验需要量的供试品进行病毒外源因子检测。在试验前应用特异性抗体（血清）中和本病毒（或单克隆抗体），所用的抗体免疫源应采用与生产疫苗（或制品）不同种而且无外源因子污染的细胞（或动物）制品。如果病毒曾在禽类组织或细胞中繁殖过，则抗体不能用禽类来制备。若用鸡胚，应来自SPF鸡群。以下方法可以选择一种或多种进行。

3.5.3.1.1 动物试验法

3.5.3.1.1.1 小鼠试验法

取15－20g小鼠至少10只，用经抗血清中和后的病毒悬液，每只脑内接种0.03ml，同时腹腔接种0.5ml。至少观察21天。在观察期内至少有80％最初接种的小鼠存活，试验才有效。如果没有小鼠出现病毒感染，为符合要求。解剖所用在试验24小时后死亡或有患病体征的小鼠，直接观察期病理改变，并将有病变的相应的组织悬液通过脑内和颅腔接种另外至少5只15－20g小鼠，并观察21天，如果没有小鼠出现病毒感染，则符合要求。

3.5.3.1.1.2 乳鼠试验法

取出生后24小时内的乳鼠至少10只，用经抗血清中和后的病毒悬液，脑内接种0.01ml，同时腹腔接种至少0.1ml。每天观察，至少14天。在观察内至少有80％最初接种的乳鼠存活，试验才有效。如果没有小鼠出现病毒感染，为符合要求。解剖所有在试验24小时后死亡或有患病体征的乳鼠，直接肉眼观察其病理改变，并取有病变的相应的组织和脑、脾制备成悬液通过脑内和腹腔接种另外至少5只出生后24小时内乳鼠，并每天观察至接种第14天，如果没有小鼠出现病毒感染，则符合要求。

3.5.3.1.2 细胞培养法

3.5.3.1.2.1 非血吸附检查

用经抗血清中和后的病毒悬液，接种于生产用的同种的细胞。细胞至少接种6瓶，每瓶病毒悬液接种量不少于培养液总量的25％。于36±1℃培养，观察14天，必要时可更换细胞培养液，未见细胞病变（CPE）为阴性，符合要求。

3.5.3.1.2.2 血吸附病毒检查

上述接种病毒的各个细胞于第6－8天后和第14天，取出2瓶进行血吸附病毒检查。用0.2％－0.5%鸡和豚鼠红细胞混合菌悬液覆盖于细胞表面，分别置于2－8℃，20－25℃，30分钟后显微镜下观察，未见血球吸附现象为阴性，符合要求。

3.5.3.1.3 鸡胚检查法

在禽类组织或细胞中繁殖过的病毒种子需用鸡胚检查禽类病毒的污染。选用9－11日和5－7日龄两组SPF鸡胚，每组至少5只，分别于尿囊腔和卵黄囊接种经抗体血清中和后的病毒悬液，每胚0.5ml。孵育7日后，取尿囊液用豚鼠和鸡血细胞混合悬液做血球凝集试验应为阴性。被接种的鸡胚至少80％存活7天，试验有效。

3.5.3.2 生产用细胞外源因子检查

3.5.3.2.1 细胞直接观察

每批生产用细胞应留取5％（或不少于500ml）,细胞悬液不接种病毒，作为对照细胞加入与疫苗生产相同的细胞维持液，置于与疫苗生产相同的条件下培养，观察14天，在显微镜下观察是否有细胞病变（CPE）出现，无细胞病变（CPE）出现者为阴性，符合要求。在观察期末至少有80％的对照细胞培养物存活，试验有效。

3.5.3.2.2 血清吸附病毒检查

对生产用细胞外源因子检查的（1）项细胞培养物在观察期末取至少25％的细胞培养瓶进行血吸附病毒检查。（方法同病毒种子批外源因子检查的血吸附病毒检查）

参考文献

[1] 刘志恒，姜成林主编.放线菌现代生物学与生物技术.北京：科学出版社,Pp1-353.2004

[2] 杨苏声主编.细菌分类学.北京：中国农业大学出版社,Pp1-145.1997

[3] 沈萍，彭珍荣主译.《微生物学》，第五版，中文版,高等教育出版社，2004

[4] 中国科学院微生物研究所《常见与常用真菌》编写组.常见与常用真菌.北京：科学出版社,P1-317，1978

[5] 中国科学院微生物研究所《菌种保藏手册》编著组.菌种保藏手册.北京：科学出版社,P1-839，1980

[6] David R.Boone et al.Bergey’s Manual of Systematic Bacteriology.Second Edition.Volume One.Springer.2001

[7] Kirk P.M., P.F.Cannon, J.C.David and J.A.Stalpers(ed).Dictionary of the Fungi.9th edition.CABI Publishing.2001

第五篇：NY_T 528-2002_食用菌菌种生产技术规程

NY/T 528-2002 食用菌菌种生产技术规程

基本信息

【英文名称】Technical inspection of pure culture making of edible fungi 【标准状态】被代替 【全文语种】中文简体 【发布日期】2002/8/27 【实施日期】2002/12/1 【修订日期】2002/8/27 【中国标准分类号】暂无 【国际标准分类号】暂无

关联标准

【代替标准】暂无 【被代替标准】暂无

【引用标准】GB 4789.28-1994,GB 9687-1988,GB 9688-1988

适用范围&文摘

暂无