第一篇：ABO血型正反鉴定结果不符的原因分析
大连医科大学2012届本科毕业论文
ABO血型系统是人类发现的第一个血型系统，也是最重要的血型系统，对临床输血意义重大。ABO血型系统上有A、B、O、AB四种表型，也存在A亚型、B亚型、AB亚型。ABO系统抗原则有A、B、AB、A1抗原，在胎儿的第9周就可以检测出来，这些抗原随着个体基因变异或疾病的影响而改变。ABO血型系统有两个特点：
一、人红细胞上缺少某个抗原，血清中就存在针对该抗原的抗体，而且是高效价的；
二、不仅红细胞上有ABO抗原，分泌型者得分泌液中也存在某抗原[1]。根据这一特性来判断ABO血型。
临床上，当输入ABO血型不相合的血液时，会引起溶血性输血反应[2]，严重时会危及生命。为了保障临床输血的安全，对ABO血型定型规定做正反定型。当正反定型一致时，方可准确确定ABO血型。但实验中，往往会出现ABO正反定型不一致的情况。导致ABO正反定型不符的原因有很多，有试剂、方法、技术等因素的影响，更重要的是血液免疫因素的影响。本文就血液免疫因素方面对ABO正反定型的影响进行研究。现将武汉血液中心2011年1~4月份健康献血者ABO正反定型不一致及1~4月份医院送检的正反定型不符的患者标本进行研究，报告如下。
一． 材料与方法
1.1标本来源
武汉血液中心1~4月份健康献血者ABO正反定型不符标本及1~4月份各医院送检的正反定型不符而进行疑难血型鉴定的标本。其中健康献血者80例，患者标本35例。
1.2主要试剂与器材
试剂：抗-A、抗-B标准血清、抗-A1、抗-AB、谱细胞、O型试剂红细胞均为上海血液生物医药有限责任公司，人源性抗-A、抗-B，A、B型试剂红细胞为本输血研究室自制。
器材：离心机（日本久保田KA2200）；恒温水浴箱（HH60）；显微镜（CKTV-2）。
1.3实验方法 1.3.1 ABO正定型实验
取两支试管，分别加入两滴抗-A、抗-B试剂，在各加一滴3-5％受检者红细胞悬液，混匀，3500r/min离心15秒，观察结果。怀疑为亚型时，再加做抗-AB、抗-H试验。
1.3.2 ABO反定型实验
取四支试管，先各加入两滴受检者血清，再分别加入一滴A、B、O型试剂红细胞和受检者红细胞悬液，混匀，3500r/min离心15秒，观察结果。
1.3.3 吸收放散及唾液血型物质检测
吸收放散：用生理盐水将3ml受检者压积红细胞洗涤三次，取洗后的压积红细胞2ml，加入对应的人源性抗血清，4℃下吸收1小时，吸收后用4℃生理盐水洗涤5次，再放于56℃放散10min，数次振荡，3500r/min离心1min，取2滴放散液，加入对应的1滴A、B、O试剂红细胞，混匀，3500r/min离心15秒，观察结果。
唾液血型物质检测：受检者唾液离心去杂质后，煮沸10min，3500r/min离心5min，以2+凝集强度为标准将抗-A、抗-B标准血清和抗-H标化，取1滴上清液与标化后的1滴抗-A、抗-B标准血清和抗-H中和，然后加入1滴对应的A、B、O试剂红细胞，混匀，大连医科大学2012届本科毕业论文
AB O AB 1 抗-JKb B AB AB 1 AmB亚型：A3B AB B AB 1 A2B有抗-A1 O A A 1 A亚型：Ael O B B 1 B亚型：Bel AB A AB 2 缗钱状凝集 A AB AB 3 缗钱状凝集 A O A 1 缗钱状凝集 B O B 2 缗钱状凝集 O A O 1 缗钱状凝集 A O A 2 ABO以外抗体
阳性，谱细胞无法确定其特异性
B O B 1 同上 AB O AB 2 同上 AB A AB 3 同上 A AB A 1 同上 AB B AB 1 同上
O B O 1 同上
表-2健康献血者ABO正反定型不符原因在血型分布情况
血型 例数 冷抗体 抗原减弱或缺乏 抗体减弱或缺乏 不规则抗体 缗钱状凝集
A 26 12 1 1 11 1 B 23 7 1 0 13 2 O 8 2 0 0 5 1 AB 23 5 2 0 11 5
表-1表-2中，献血者标本中引起正反定型不符的原因：冷抗体占32.5％（26/80），抗原减弱或缺乏占5％（4/80），抗体减弱或缺乏占1.25％（1/80），不规则抗体占50％（40/80），缗钱状凝集占11.25％（9/80）。
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三、讨 论
本文研究排除技术因素及试剂因素对ABO正反定型不符的影响。笔者对80例ABO正反定型不符的健康献血者及35例定型不符的疾病患者进行ABO定型、吸收放散、抗体鉴定等实验，对结果分析如下：
从表-1中可以看出，在健康献血者中，引起ABO正反定型不符的主要原因是冷抗体32.5％（26/80）及不规则抗体50％（40/80）的产生。对于冷抗体，实验中将反应试管分别放在37℃水浴箱及4℃冰箱，改变反应温度来确认冷抗体[3]，当冷抗体存在时，可以将试管放于37℃下孵育，去除冷抗体后再准确定型。在不规则抗体引起的正反定型不符中，最多的是由于抗-M引起不符，占16.25％（13/80），其次是抗-Leb占12.5％（10/80）,b这些献血者无输血史及妊娠史，这些抗体属于天然抗体。抗-M及抗-Le都是不规则抗体，都会引起配血的不合，这类抗体如果在37℃盐水介质和抗人球蛋白反应是阳性，输血时则会产生输血反应[4]。对于此类献血者建议今后不宜献血，已献的血液适合做洗涤红细胞。表-1中还有一例是由于A2B产生抗-A1抗体而引起正反定型不符。A型抗原有两种，A、A1，A1型人红细胞上两种抗原都有，A2型人红细胞上只有A抗原[5]，在通常输血前检测试验中，患者与献血者的A1、A2型不必加以区分，除非当A2型或A2B型人血清中有抗-A1抗体存在时[6]。22％--26％的A2B个体血清中可以检出抗-Al[7]，抗-A1抗体在临床上意义不大，多数在25℃以上无活性，也有几例是由于抗-A1引起的溶血性输血反应[8]。对于A2B患者血清中存在抗-A1抗体的输血，应选择A2B亚型血，若无可以选择O型洗涤红细胞。本文还有11例正反定型标本，ABO以外抗体阳性，但上海谱细胞无法确定其特异性，此种情况可以增加谱细胞数，若仍不能确定特异性，可以采用分子生物学的方法来确定抗体的特异性。此外还有9例是由于缗钱状凝集导致正反定型不符，可能与标本使用的抗凝剂有关，EDTA抗凝剂能阻止补体的活化，补体存在时使反定型出现凝集[9]，导致正反定型的不符。4例亚型导致正反定型不符，减弱的抗原可以用吸收放散实验检测出来，它可以将抗原浓缩和粗纯化，灵活运用吸收放散实验可以准确定型[10]。出现亚型时，正定型加做抗-H、抗-AB,亚型红细胞与抗-AB反应是增强的[11]，检测H抗原的量对亚型鉴定是有帮助的。
从表-2可以看出，本文研究的80例健康献血者中，A型中出现ABO定型不符的例数最多，占32.5％（26/80），其次是B型、AB型，出现定型不符最少的血型是O型。可能是由于O血型的人体内无A、B抗原，在抗原方面出现的变异情况少[12]。
在35例患者标本中，从表-
3、4得出，抗原因素引起ABO正反定型不符的主要是白血病导致的抗原减弱。是因为白血病患者体内N-乙酰半乳糖转移酶受抑制，引起抗原的减弱[13]。而在抗体因素中，较多是由于患者体内产生较多的不规则抗体导致定型不符，最多的是抗-M，这些患者多数都有输血史及妊娠史，体内发生同种免疫反应产生的同种抗体，多为IgG类。还有1例肿瘤患者，免疫功能下降导致抗体合成受抑制，抗体缺乏导致定型不符。而自身免疫性溶血性贫血患者，自身抗体与红细胞结合，在高蛋白质溶液中可自发凝集，包被严重的在低蛋白ABO定型试剂中也可以凝集，使定型不符，可以用45℃生理盐水洗去自身抗体后就能准确定型。
综上，排除试剂和技术因素的影响，导致ABO正反定型不符的原因有：（1）抗原减弱 此原因引起的定型不符，对健康献血者是由于亚型，而患者则是疾病引起抗原减弱，最多的是白血病引起的减弱。（2）抗体减弱或缺乏 抗体水平与年龄有关。新生儿在出生后才产生IgM的ABO抗体，到3个月时才能检测出来，5~10岁时抗体数目最多，随后就渐渐下降，老年人在65~70岁以后，抗体水平最低。白血病、免疫缺乏性疾病及服用免疫抑制药物及骨髓移植的病人，由于血浆蛋白质中的丙种球蛋白减少从而导致抗体减
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参考文献 1、5.安万新，于卫建.输血技术学.第2版.北京:科学技术文献出版社，2010：45.2.Sazama K Reports of 355 transfusion-associated deaths,1976 through 1985.Transfusion 1990,30(7):583-590.3.张永海，李晓阳.ABO正反定型不符的原因及克服办法.卫生职业教育,2006,16（24）：126-127.4．李雪英，王文莉，李志平,IgM+IgG抗-M引起ABO血型正反定不符1例.当代医学，2010，16（19）:120-120.6.朱自严，郭忠慧，张雄民,ABO血型系统.免疫血液学,上海：上海科学技术出版社，2002:33-50.7.杰夫·丹尼尔．人类血型．朱自严．译．北京：科学出版社．2007:27—28.8.江建峰，林正明,A2B亚型伴有抗A11例.中国输血杂志,2008,21（1）：47-47.9.王晓颖，张坤莲.抗凝剂影响补体活化致ABO血型正反定型不符1例.中国误诊学杂志，2009,9（4）：981-982.10.Engelfriet CP What is the best techniques for the detection of red cell alloantibodies.Vox.Sang.1995,69(3):292-300.11.舒群峰，田方，曾付芳,Ax亚型及家系调查1例.中国输血杂志,2007,20（3）：237-238.12.杨珊,健康献血者与疾病患者ABO正反定型不符比较研究.临床血液学杂志,2009,22（5）:550-552.13.Akria Y,Takashik,Vibha D et al.Suppressed expression of blood group B antigen andblood group galactosyltransferase in a preleukemic subject.Blood.1985,66(4):990-992.14.王明元，周晓华，狄文英,等.ABO疑难血型基因分型研究.医学理论与实践,2009,22（4）:393-394.15.赵桐茂,人类血型分型的新纪元.中国输血杂志,2007,20(1):1221.16.郭如华，邢培清，张伯伟,PCR-SSP方法用于ABO疑难血型检定.中国输血杂志,2003,16（3）：187-188.大连医科大学2012届本科毕业论文
4、血液免疫因素
4.1、抗原减弱或封闭导致ABO正反定型不符。遗传基因可以决定红细胞表面抗原减弱或缺乏，这些减弱或缺乏的抗原也可以是获得性的。对于健康献血者来说，亚型最可能导致抗原的减弱，而患者则是由于所患疾病。最多的是白血病患者引起的抗原减弱或消失。白血病患者在疾病活动期抗原减弱，通常情况下抗原减弱是暂时的，但是患者在疾病缓解期又会恢复回原来的血型[5]。为了将抗原减弱与亚型区别，可以通过延长反应时间，在4℃放置后再试验，同时加做吸收放散，有条件的可以进行过唾液血型物质检测。怀疑亚型时，因为亚型红细胞上H抗原数目是增多的，正定型可以加做红细胞与抗-H、抗-AB抗体反应，多数反应比正常同型要强[6]，反定型加做血清与A1c、A2c细胞反应，用吸收放散试验来检测红细胞上是否有弱血型抗原及确定其亚型型别，检测唾液血型物质有助于ABO血型的准确定型。此外，卵巢囊肿、胃癌或肠道阻塞的患者，本身血清中会有大量血型特异性的可溶物质产生，能与抗-A抗-B试剂中和，使抗原被封闭，导致定型困难。这时可以将待检测红细胞用生理盐水洗涤三次后重新试验。自免贫、输血反应、新生儿溶血病及服用抗高血压药物的患者，红细胞由于被抗体致敏，使抗原被封闭，造成ABO正定型的困难，这时用吸收放散法去除致敏的抗体，然后再重复试验来准确定型。
4.2、未知的抗原反应导致正反定型不符
（1）获得性A或B抗原 患者红细胞与抗-A试剂反应，在显微镜下观察到混合视野凝集，Tn抗原活化的红细胞，证明有获得性A抗原。获得性B抗原的红细胞反应像AB型，血清内有抗B抗体，多为患肠道阻塞和消化道疾病的患者，病情好转时，获得性B抗原也随即消失。献血者的获得性B抗原，可能是原患疾病产生的，提倡对献血者进行健康调查时注意胃肠道患病史，避免此类献血者[7]。
（2）改变的抗原 多凝集细胞是指红细胞能被多数正常人血清所凝集，这种凝集反应叫多凝集反应，产生的原因有：T抗原活化（一般是红细胞受到细菌等污染）、Tn抗原活化（与血液学方面异常有关如溶血性贫血）、Cad多凝集。相对应的解决办法是:对于是由于Tn活化导致的多凝集反应，可用1％无花果酶或木瓜酶处理红细胞，而T活化的多凝集反应，由于其再室温下反应较强，在37℃下反应则较弱，故实验需在37℃下进行。
（3）低频率的抗原抗体反应 抗血清试剂抗-A、抗-B中可能存在低频率抗体，通常情况下，献血者或患者红细胞很少与抗血清试剂内的低频率抗体反应，但在有料想不到的极弱抗原存在时应该考虑低频率的抗原抗体反应。
4.3、抗体减弱或缺乏导致ABO正反定型不符
抗体的降低或缺乏，可以引起同族凝集素的减弱或缺乏。见于以下几种情况：（1）嵌合现象 此原因导致的抗体缺乏不是很常见。非同卵双胎的个体，双受精引起体内都认为是自己的两种种群的红细胞终生存在，这些人不会产生抗-A或抗-B抗体，从而导致正反定型不符。如骨髓移植后或换血治疗的患者。（2）丙种球蛋白过低血症、丙种球蛋白缺乏血症 白血病、免疫缺乏性疾病及服用免疫抑制药物及骨髓移植的病人，由于血浆蛋白质中的丙种球蛋白减少从而导致抗体减少，使正反定型不符。通过在反定型时，增加反应时间，加大血清量，在4℃温度下放置5~10min后再进行试验来准确定型。（3）年龄 正反定型不符情况在新生儿中出现最多。新生儿在出生后才产生IgM的ABO抗体，到3个月时才能检测出来，5~10岁时抗体数目最多，随后就渐渐下降，老年人在65~70岁以后，抗体水平最低。所以一般新生儿不做反定型，如果做反定型，可以加大血清量或实验中使用低离子强度溶液。（4）从正在输液患者一侧静脉采集血液标本，采集血液的部位不规范，导致血液被稀释而抗体反应假性减弱[8]。当非AB型病人大量输
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ABO定型，可以用基因分型来避免假阴性结果。笔者建议研究中国人的ABO基因特点及分子遗传背景，研制出适合我国人群的ABO血型鉴定试剂盒，提高血型鉴定的准确性。
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致 谢
感谢我的指导老师沈钢和石小玲老师。在整个实验中，从选题、查资料、写综述，到试验，以及最后统计、分析、攥写论文，他们都倾注了很多心血，给予了我很大的指导和帮助。他们不仅教给了我科研工作的基本的流程和方法，更重要的是，他们教给我科研工作者必须具备的严谨求实的科学态度。
感谢输血研究室的各位老师对我的关怀，感谢武汉市红十字血液中心的领导对我的关爱。
第二篇：abo血型鉴定
生理盐水凝集法
①玻片法：操作简单，适于大量标本检查，但反应时间长；被检查者如血清抗体效价低，则不易引起红细胞凝集，因此，不适于反向定型。
②试管法：由于离心作用可加速凝集反应，故反应时间短，而且，借助于离心力可以使红细胞接触紧密，促进凝集作用，适于急诊检查。
红细胞亚型抗原性弱，如抗A抗B标准血清效价低时，易造成漏检或误定。如加用O型（抗A、B）血清和反向定型，可避免此类错误。
玻片法凝集结果判断：红细胞呈均匀分布，无凝集颗粒，镜下红细胞分散。
在低倍镜下凝集程度强弱判断标准：
①呈一片或几片凝块，仅有少数单个游离红细胞为（++++）。
②呈数个大颗粒状凝块，有少数单个游离红细胞为（+++）。
③数个小凝集颗粒和一部分微细凝集颗粒，游离红细胞约占1／2为（++）。
④肉眼可见无数细沙状小凝集颗粒。于镜下观察，每凝集团中有5～8个以上红细胞凝集为（+）。
⑤可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多的游离红细胞（±）。
⑥可见极少数红细胞凝集，而大多数红细胞仍呈分散分布为混合凝集外观。
⑦镜下未见细胞凝集，红细胞均匀分布为（-）。凝胶微柱法
是红细胞抗原与相应抗体在凝胶微柱介质中发生凝集反应的免疫学方法。血型抗体为单克隆抗体，加入试剂、标本，用专用离心机离心后可直接用肉眼观察结果或用血型仪分析。此法操作标准化，定量加样，确保结果准确性。
抗A、抗B和抗AB标准血清标准
准血清均采自健康人，并应符合下述条件：①特异性：只能与相应的红细胞抗原发生凝集，无非特异性凝集。②效价：我国标准抗A和抗B血清效价均在1：128以上。③亲和力：我国标准要求抗A对A1、A2及A2B发生反应开始出现凝集的时间分别是15s、30s和45s；抗B对B型红细胞开始出现凝集的时间为15s。凝集强度为3min时，凝块不小于1mm2。④冷凝集素效价：在1：4以下。⑤无菌。⑥灭活补体。[3] 编辑本段注意事项
1、所用器材必须干燥清洁、防止溶血，凝集和溶血的意义一样。为避免交叉污染，建议使用一次性器材。标准血清从冰箱取出后，应待其平衡至室温后再用，用毕后应尽快放回冰箱保存。
2、加试剂顺序：一般先加血清，然后再加红细胞悬液，以便核实是否漏加血清。
3、虽然IgM抗A和抗B与相应红细胞的反应温度以4℃最强，医学教育网收集整理但为了防止冷凝集现象干扰，一般在室温20℃～24℃内进行试验，而37℃条件，可使反应减弱。
4、幼儿红细胞抗原未发育完全、老年体弱者抗原性较弱，最好采用试管法鉴定血型。
5、玻片法反应时间不能少于10min，否则较弱凝集不能出现，造成假阴性。
6、正、反定型结果一致才可发报告。
7、反定型法：先天性免疫球蛋白缺陷，长期大量应用免疫抑制，血型抗体可减弱或消失；血清中存在自身免疫性抗体、冷凝集素效价增高、多发性骨髓瘤、免疫球蛋白异常均可造成反定型困难；新生儿体内可存在母亲输送的血型抗体，且自身血型抗体效价又低，因而出生6个月以内的婴儿不宜做反定型。老年人血清中抗体水平大幅度下降或被检者血清中缺乏抗A及（或）抗B抗体，可引起假阴性或血型鉴定错误。[4]
ABO血型系统
英文：ABO blood group system 根据红细胞表面有无特异性抗原（凝集原）A和B来划分的血液类型系统。ABO血型系统是1900年奥地利兰茨泰纳发现和确定的人类第一个血型系统。根据凝集原A、B的分布把血液分为A、B、AB、0四型。红细胞上只有凝集原A的为A型血，其血清中有抗B凝集素；红细胞上只有凝集原B的为B型血，其血清中有抗A的凝集素；红细胞上A、B两种凝集原都有的为AB型血，其血清中无抗A、抗B凝集素；红细胞上A、B两种凝集原皆无者为O型，其血清中抗A、抗B凝集素皆有。具有凝集原A的红细胞可被抗A凝集素凝集；抗B凝集素可使含凝集原B的红细胞发生凝集。输血时若血型不合会使输入的红细胞发生凝集，引起血管阻塞和血管内大量溶血，造成严重后果。所以在输血前必须作血型鉴定。正常情况下只有ABO血型相同者可以相互输血。在缺乏同型血源的紧急情况下，因O型红细胞无凝集原，不会被凝集，可输给任何其他血型的人。AB型的人，血清中无凝集素，可接受任何型的红细胞。但是异型输血输入量大时，输入血中的凝集素未能被高度稀释，有可能使受血者的红细胞凝集。所以大量输血时仍应采用同型血。临床上在输血前除鉴定ABO血型外，还根据凝集反应原理，将供血者和受血者的血液作交叉配血实验，在体外确证两者血液相混不发生凝集，方可进行输血以确保安全。近年来发现存在于红细胞上的凝集原（即血型抗原）也存在于其他血细胞和一般组织细胞。所有细胞表面血型抗原的特异性可作为机体免疫系统鉴别自身和异物的标志。因此，在临床实践中血型鉴定也是组织器官移植成败的关键。人类血型有遗传特性，决定血型的血型抗原即凝集原ABOA和B及其前身物H，分别受ABO三个等位基因控制。A、B基因为显性基因，O（H）基因为隐性基因。它们的遗传规律所显示的父、母血型与子代血型间的关系，在法医学上可作为否定亲子关系的依据，若再配合其他血型系统的测定，则可判断亲子关系。
血型不仅在输血上有重要意义，而且在人种学、遗传学、法医学、移植免疫、疾病抵抗力（或易感性）等方面都有应用价值，在输血前，一定要检查病人(受血者)和输血人（供血者）的血型，并且要进行交叉配血试验。在临床医学中，除输血、移植免疫外，对新生儿溶血病、自身免疫性溶血性贫血特异性抗体的检查，也都需要血型知识和有关技术。ABO血型抗原具有种族差异。例如，中欧地区的人群中，约40％以上的人为A型，近40％的人为O型，10％的人为B型，6％的人为AB型；而90％的美洲土著人为O型。[5] 编辑本段举例分析
通常只用两种抗血清即抗A及抗B血清，就可将群体分为四种血型。
根据血型的遗传规律，和临床工作方例起见，配偶间所生子女的血型如下：
各种ABO配偶所生子女的血型:
婚配式 子女可能有的血型 子女不可能有的血型
A×A A、O B、AB
A×B A、B、O、AB 无
A×AB A、B、AB O
A×O A、O B、AB
B×B B、O A、AB
B×AB A、B、AB O
B×O B、O A、AB
AB×AB A、B、AB O
AB×O A、B AB、O
O×O O A、B、AB
婚配式 A型血的可能 B型血的可能
A*A 75% 0% 25% 0%
A*B 25% 25% 25% 25%
A*O 50% 0% 50% 0%
A*AB 50% 25% 0% 25%
B*B 0% 75% 25% 0%
B*O 0% 75% 25% 0%
O型血的可能AB型血的可能
B*AB 25% 50% 0% 25%
O*O 0% 0% 100% 0%
O*AB 50% 50% 0% 0%
AB*AB 25% 25% 0% 50% ABO血型鉴定总结
AB0血型鉴定原理
常用盐水凝集法检测红细胞上存在的血型抗原，以及血清中存在的血型抗体，依据抗原抗体存在的情况判定血型。常规的方法有：①正向定型：用已知抗体的标准血清检查红细胞上未知的抗原。②反向定型：用已知血型的标准红细胞检查血清中未知的抗体。结果判定：凡红细胞出现凝集者为阳性，呈散在游离状态为阴性。ABO血型定型原则见表1-5-2。
鉴定方法
（1）生理盐水凝集法：①玻片法：操作简单，适于大量标本检查，但反应时间长；被检查者如血清抗体效价低，则不易引起红细胞凝集，因此，不适于反向定型。②试管法：由于离心作用可加速凝集反应，故反应时间短，而且，借助于离心力可以使红细胞接触紧密，促进凝集作用，适于急诊检查。
红细胞亚型抗原性弱，如抗A抗B标准血清效价低时，易造成漏检或误定。如加用O型（抗A、B）血清和反向定型，可避免此类错误。
玻片法凝集结果判断：红细胞呈均匀分布，无凝集颗粒，镜下红细胞分散。在低倍镜下凝集程度强弱判断标准：①呈一片或几片凝块，仅有少数单个游离红细胞为（++++）。②呈数个大颗粒状凝块，有少数单个游离红细胞为（+++）。③数个小凝集颗粒和一部分微细凝集颗粒，游离红细胞约占1／2为（++）。④肉眼可见无数细沙状小凝集颗粒。于镜下观察，每凝集团中有5～8个以上红细胞凝集为（+）。⑤可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多的游离红细胞（±）。⑥可见极少数红细胞凝集，而大多数红细胞仍呈分散分布为混合凝集外观。⑦镜下未见细胞凝集，红细胞均匀分布为（-）。
（2）凝胶微柱法：是红细胞抗原与相应抗体在凝胶微柱介质中发生凝集反应的免疫学方法。血型抗体为单克隆抗体，加入试剂、标本，用专用离心机离心后可直接用肉眼观察结果或用血型仪分析。此法操作标准化，定量加样，确保结果准确性。
抗A、抗B和抗AB标准血清标准
准血清均采自健康人，并应符合下述条件：①特异性：只能与相应的红细胞抗原发生凝集，无非特异性凝集。②效价：我国标准抗A和抗B血清效价均在1：128以上。③亲和力：我国标准要求抗A对A1、A2及A2B发生反应开始出现凝集的时间分别是15s、30s和45s；抗B对B型红细胞开始出现凝集的时间为15s。凝集强度为3min时，凝块不小于1mm2。④冷凝集素效价：在1：4以下。⑤无菌。⑥灭活补体。血型鉴定操作时注意事项
一般注意事项：①所用器材必须干燥清洁、防止溶血，凝集和溶血的意义一样。为避免交叉污染，建议使用一次性器材。标准血清从冰箱取出后，应待其平衡至室温后再用，用毕后应尽快放回冰箱保存。②加试剂顺序：一般先加血清，然后再加红细胞悬液，以便核实是否漏加血清。③虽然IgM抗A和抗B与相应红细胞的反应温度以4℃最强，医学教育网收集整理但为了防止冷凝集现象干扰，一般在室温20℃～24℃内进行试验，而37℃条件，可使反应减弱。④幼儿红细胞抗原未发育完全、老年体弱者抗原性较弱，最好采用试管法鉴定血型。⑤玻片法反应时间不能少于10min，否则较弱凝集不能出现，造成假阴性。⑥正、反定型结果一致才可发报告。⑦反定型法：先天性免疫球蛋白缺陷，长期大量应用免疫抑制，血型抗体可减弱或消失；血清中存在自身免疫性抗体、冷凝集素效价增高、多发性骨髓瘤、免疫球蛋白异常均可造成反定型困难；新生儿体内可存在母亲输送的血型抗体，且自身血型抗体效价又低，因而出生6个月以内的婴儿不宜做反定型。老年人血清中抗体水平大幅度下降或被检者血清中缺乏抗A及（或）抗B抗体，可引起假阴性或血型鉴定错误。[6]
第三篇：ABO正反定型不符的问题分析及解决办法
ABO正反定型不符的问题分析及解决办法
ABO正定型是用已知的标准血清检测红细胞上未知的抗原
ABO反定型是用已知的标准红细胞检测血清中未知的抗体
一．引起ABO正反定型不一致的原因分析 1.技术因素例如
(1)试剂贮存不当
(2)使用技术错误
(3)使用错误的试剂
(4)使用污染或失效的试剂
(5)离心速度不当 2.存在IgM性质的自身冷抗体
由于自身冷抗体(冷凝集病,CHD)而导致自身溶血的病人，在低于37℃时血细胞自发凝集，影响正反定型。
3.抗原表达弱或缺失例如 a.白血病 b.双胞胎 c.H基因变异 4.高水平可溶性血型物质的病人。5.混合视野：例如
(1)来自近期输注非ABO同型红细胞病人的血样
(2)骨髓移植后不久
(3)Tn或A3型红细胞 6.缺失或弱抗-A、抗-B例如
(1)新生儿血清
(2)免疫缺陷、紊乱病人
(3)老年人 7.前带现象
当抗-A或抗-B的效价（如35000）IgG太高时, 立即离心法与A 或B细胞不反应。8.多凝集：多凝集红细胞，具有不正常的膜结构，可被正常成人血清凝集。9.不正常血清蛋白：
白蛋白/球蛋白比例失调的血清引起红细胞产生缗钱状假凝集。
10.血样血清中存在抗试剂成分的抗体：例如抗防腐剂的抗体、抗EDTA的抗体等，此种抗体可以通过将红细胞洗涤而解除。
二、ABO正反定型不符的解决方法有以下几个
（一）出现弱反应或缺失抗原的解决方法有
1.洗涤RBC且延长孵育时间进行试验，如果使用洗涤红细胞后反应加强，则考虑是血型物质的抑制
2.酶处理红细胞再次试验 3.吸收放散确定是否是亚型。
4.了解输血史(尤其是O型红细胞输注)来分析混合视野 5.了解病情诊断（尤其是白血病）6.了解是否是骨髓移植受者 7.了解是否是双胞胎
8.是否使用从前未使用过的单克隆抗体血清进行了血型鉴定 9.分泌型型物质检查
10.进行玫瑰花试验来确定是否混入其它红细胞，或进行细胞分离
（二）出现弱反应或缺失抗体例如 1.年龄：新生儿及老人。
2.低球蛋白血症：如白血病人、使用免疫抑止药物、低球蛋白的恶性淋巴瘤病人、骨髓移植后病人。
3.丙球缺乏血症：如免疫缺陷病人 4.双胞胎嵌合体 解决方法有 1.延长反应时间
2.放在室温检查血清中的抗体。用A、B、O及自身红细胞进行检查，用酶处理的A、B、O及自身细胞进行检查。可能需要在试验前进行冷抗体的自身吸收 3.确定病人年龄以及临床诊断（例如新生儿还有免疫病）有关新生儿血型，这是资格证经常考试的题目
例如，6个月大新生儿正定性型是O型，反定型是B型，请问新生儿是什么血型？答案应该是O型，因为婴儿尚未产生自己的抗体或有从母亲获得的血型抗体，所以新生儿不适合用血清做反定型。
4.确定输血史（例如非ABO同型的血浆输注）
（三）出现多余抗原（额外抗原）可能情况有 1.抗原发生改变：
（1）获得性B：肠道疾病患者，细菌作用导致
（2）多凝集现象：红细胞被掘大多数人的正常血清凝集
2.红细胞已经被抗体包被：例如自家免疫溶血性贫血、输血反应及HDN。
3.非抗－A及抗－B的抗体与相应抗原形成复合体吸附在红细胞表面，引起正定型非特异性凝集。
4.混合视野：非同型输注，例如O型红细胞给其他型输用，非ABO同型的骨髓移植，A3亚型等。
5.低频率抗原抗体反应：定型血清中的存在低频抗原的抗体，与对应的低频抗原产生阳性反应。解决方法有
1.将红细胞洗涤再进行试验，确定是否是病人或献血员的血清中存在针对ABO定型试剂成分的抗体
2.用O型及自身红细胞于室温检查病人血清，确定血清中是否有冷自身抗体，如果有，则用2ME或DTT处理。
3.用不同厂家的试剂检查洗涤的红细胞 4.了解病人的临床诊断
5.如果怀疑是获得性B，则用酸化的抗-B检查 6.进行ABH分泌型型物质检查
7.如果用多克隆抗-A检查结果是混合视野，则用蛋白酶处理RBC试验，考虑是否是多凝集
产生未知抗体反应的可能情况有
1.蛋白或血浆不正常引起的缗钱状凝集：
血清蛋白浓度异常，球蛋白浓度由于疾病而升高（例如多发性骨髓瘤），原发性巨球蛋白血症，纤维蛋白原浓度升高，血浆扩容剂的使用以及何杰金氏淋巴瘤，新生儿脐血中的华通氏胶。
2.冷反应性自身抗体：
存在ABO系统的意外抗体：例如A2或A2B个体血清中可能存在天然抗－A1，顺式AB人群中弱的抗-B,导致反定型试验多出抗体。
3.被检者血清中存在ABO系统以外的特异性冷同种抗体，反定型时出现假阳性反应。解决方法有
1.在室温及4℃检查，确定是否存在自身抗体或冷同种抗体
2.洗涤红细胞再次进行试验，防止血清中有针对试剂红细胞保存液成分的抗体 在37℃定型，去除冷自生抗体干扰后定型，血型物质检测
（五）混合视野凝集的解决方法有 1.确定是否近期怀孕或输血 2.确定临床诊断（尤其是白血病）3.是否是骨髓移植受者 4.是否是双胞胎
5.用细胞分离术将两群细胞分开，分别定型 6.ABH型物质检查 7.了解输血史
第四篇：ABO血型鉴定假阳性的原因浅析（精选）
ABO血型鉴定正反定型不一致的原因浅析
【摘 要】目的：探讨ABO血型正反定型不一样的原因。方法：ABO血型玻片法正定型和试管法反定型。
结果：血型鉴定的过程中会有某些干扰因素引起一些假象，造成血型鉴定假阴性或假阳性反应。结论：临床应采用正反定型对照的方法来确认血型，以免受各界因素影响而误导对试验结果的判断。
血型是以血液抗原形式表现出来的一种遗传性状，一般是不会发生改变的。我们平常所称的血型泛指ABO血型系统和RH血型系统。这两种血型系统不合极易造成输血反应，所以ABO血型鉴定的准确性是十分重要的。而血型鉴定的过程中会有某些干扰因素造成一些假象，如血液中含有较高的冷凝集素或自身免疫性抗体，使受检者红细胞上的抗原减弱等因素，造成血型鉴定假阴性或假阳性反应，病人血清或血浆中的白细胞过多，堵塞了凝胶间隙，从而影响了红细胞的沉降，造成假阳性等。从而出现正反定型不一致的情况，在这里我们浅析一下影响因素。
（1）新生儿:6个月以内的婴儿抗体多来自母亲，自身血型抗体效价又低，反定型时可能不凝集或凝集很弱，所以不宜做反向定型。
（2）老年人:随年龄增长老年人抗体水平呈逐渐下降趋势，造成鉴定困难。
（3）白血病、淋巴瘤及使用免疫抑制药患者、先天性丙种球蛋白缺乏症等。
（4）被检红细胞凝集力减弱，如A 2、A 2 B等亚型红细胞抗原性弱或由于恶病质病人，如白血病、某些恶性肿瘤使A或B抗原变弱，新生儿红细胞血型抗原形成不足等。
（5）全凝集与多凝集红细胞:红细胞被细菌污染，细菌酶消化了红细胞表面的唾液酸，暴露出T抗原而被激活，正常人红细胞上有T抗原，血清中有抗T，但因红细胞表面存在的唾液酶T抗原无活性，当红细胞被细菌污染后，使红细胞与多数人血清凝集称为多凝集，如与所有人血清都凝集称为全凝集。对这两种疑为全凝集或多凝集红细胞时，用多份AB型血清加以证实，因此种现象与AB型血清也发生凝集，应重新抽血，用标准的定型方法来测定患者准确血型。
（6）获得性B表现，某些肠道杆菌感染的患者，由于细菌等引起的获得性类B抗原，易产生假阳性结果，A型患者出现类B可判为AB型，O型错判为B型，此种现象当病情好转类B即消失。
（7）某些疾病如肝病、肾炎因患者血清中白蛋白含量低而致球蛋白含量相对或绝对性增高，多发性骨髓瘤因患者血清中病理性球蛋白增加易形成钱串状排列，而外观类似凝集，临床应用血浆扩容剂如低分子右旋糖酐均可使红细胞成钱串状假凝集。真与假的区别是在镜下观察时，假凝集红细胞呈钱串状排列，形状基本完整，加一滴等渗盐水于玻片上并混匀后钱串排列消失，而真凝集加等渗盐水凝集不消失，红细胞不会散开。
（8）反应温度不合适亦会造成假性结果。ABO血型鉴定主要测定体内的完全抗体，完全抗体最适温度多在22℃至4℃左右，属于IgM抗体，为冷性抗体，许多IgM类型的抗体在4℃时的反应强度远高于37℃。另外血型鉴定方法也会影响结果。如玻片法定型简单，不需要离心设备，仅靠抗体的力量，凝集红细胞而无离心的加速反应，所以反应的时间较长，不适合急诊，另亚型红细胞抗原与抗体的凝集反应慢，凝集强度弱，有时容易被忽略而导致定型错误，不适合用于反定型和交叉配血，只适于大规模血型普查。而试管法定型反应快，需时短，特别是紧急输血时可在抗原抗体反应 1min后离心观察结果。通过离心增强凝集，可发现亚型和较弱的抗原抗体反应，结果准确可靠，为临床常规应用的方法。
为临床输血安全在鉴定血型时采用正反定型，正定型是用标准血型抗体，对红细胞膜上ABO系统血型抗原的鉴定。反定型是用标准红细胞抗原对血清中ABO系统血型抗体的鉴定，其目的在于复检正定型结果的准确性纠正漏检误报，特别是一些具有弱抗原的亚型，正定型易被忽略，此外反定型还可以纠正某些肿瘤病人因红细胞抗原性减弱造成的正定型错误以及克服排除获得性类B抗原和全凝集现象对红细胞定型的干扰，可发现血清中存在的一些不规则抗体等。
总而言之，血型鉴定是一项重要而严肃的工作，关系到患者的生命安全。检验人员必须认真负责，严格按照操作规程操作，熟练掌握操作步骤，能察觉出检验结果的异样，并认真复查。尽可能的规避干扰因素，保证结果的准确性和可靠性。
【参考文献】
冯春颜，吴文权，彭友堂等。ABO血型鉴定结果的质量控制方法。现代简检验医学杂志，2007.22:113-114 王晨，钱宝华，韦燕萍等。7例ABO血型抗体减弱或缺乏的临床分析。临床输血与检验杂志，2008.10:243-245.
第五篇：试管法ABO血型鉴定
试管法ABO血型鉴定
1.检验目的
鉴定供受血者ABO血型，保证临床输血安全。2．检验方法 试管法 2.1.试管法 2.1.1.实验原理
ABO血型鉴定，是根据IgM类特异性血型抗体与红细胞膜上特异性抗原结合能出现凝集反应的原理，用已知IgM类特异性标准抗A和抗B血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或（和）B抗原，同时用已知标准A型红细胞和B型红细胞来测定血清中有无相应的天然IgM类抗A或（和）抗B。2.1.2.标本要求
静脉EDTA抗凝血2.0～3.0ml，以3000r/min离心3分钟，分离上清液。2.1.3.试剂
单克隆或多克隆抗A、抗B试剂，3-5% A、B及O型试剂标准红细胞悬液。2.1.4.器材
离心机，4℃冰箱、显微镜，12×70mm试管(以下称“小试管”),滴管，10mm×60mm透明的玻璃试管或塑料试管。2.1.5.操作步骤
2.1.5．1．正定型（查抗原）：取试管2支，分别标明抗A、抗B，加入抗A和抗B分型血清各2滴于试管底部，再以滴管分别加入受检者5%红细胞盐水悬液1滴，混匀。
2.1.5．2.反定型（查抗体）：取试管3支，分别标明A型、B型和O型细胞。用滴管分别加入受检者血清2滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B、O型5%试剂红细胞悬液1滴，混匀。
2.1.5．3.立即以3000r/min离心10秒。（离心时间为离心机校准时间）。2.1.5．4.轻轻摇动试管，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（或溶血）现象,如肉眼观察不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜下观察有无凝集。2.1.5．5.凝集强度判断标准
＋＋＋＋：红细胞凝集成一大片或几片，仅有少数单个游离红细胞，血清清晰透明。
＋＋＋：红细胞凝集成数个大颗粒凝块，有少数单个游离红细胞，血清透明。
＋＋：红细胞凝成数个小颗粒凝块，游离红细胞＜1/2。＋：红细胞凝成数个小颗粒凝块，游离红细胞＞1/2。±：红细胞凝成数个微小颗粒凝块，周围有很多游离红细胞。MF：混合凝集外观（mixed field，MF），镜下可见少数红细胞凝集，而绝大多数红细胞呈分散分布。
－：阴性，镜下未见红细胞凝集，红细胞均匀分布。HP：部分溶血（part hemolysis，HP），有些残留红细胞。H：完全溶血（hemolysis，H），无残留红细胞。2.1.5.6.报告受检者红细胞ABO血型（表1001-1）。
表1001-1 ABO血型鉴定结果判断
分型血清＋受检者红细胞
抗A ＋ － － ＋ 抗B － ＋ － ＋
A B O AB 受检者血型
A细胞 － ＋ ＋ －
B细胞 ＋ － ＋ －
O细胞 － － － －
受检者血清＋试剂红细胞
注：＋为凝集；－为不凝集
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