第一篇：血涂片制作和白细胞分类／ABO血型鉴定
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学号：
实验报告
说明：
1、实验报告务必独完成，对抄袭者将按不及格处理；
2、实验报告的格式请按下面的各项要求来填写，不要改动；
3、正文字体统一用“仿宋-GB2312”、，小四号，单倍行距，小标题加黑；
4、下面的“替换这里”字体底纹在完成后去除；
5、实验报告按时上传，上传时文件名统一按照网上说明来命名； 实验名称：血涂片制作和白细胞分类／ABO血型鉴定
同组姓名： 实验日期：4.13 室 温： 气 压： 成 绩： 教 师：
一、实验结果
（一）观察到的红细胞、白细胞
（1）单核细胞
（2）淋巴细胞
（3）嗜中性细胞
（4）嗜酸性细胞
（二）ABO血型鉴定结果
将本人血液加入到抗A凝集素和抗B凝集素中后均不发生凝集反应，加入到抗B凝集素中后颜色为血液原来的鲜红颜色；加到抗A凝集素后颜色变深但无凝血反应。
二、分析与讨论
（1）红细胞、白细胞的观察
血液由血浆和血细胞组成，而血细胞主要包括红细胞、白细胞和血小板。其中红细胞数量最多，约占全血体积的45%，成熟红细胞没有细胞核，呈中央凹的圆盘状。在油镜下观察红细胞，首先在数量上它占绝对优势，分布均匀，其次呈红色的圆形或椭球形。图片中数量最多的红色圆球形细胞便是红细胞。而白细胞和血小板所占体积不足1%。对白细胞进行瑞氏染色后根据细胞的染色特征，可将其分为两大类：1.颗粒白细胞：嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞；2.无颗粒细胞：淋巴细胞核单核细胞。其中嗜中性粒细胞细胞大小约10-12μm，核多分叶2-5叶或不分叶为杆状，颗粒细小,紫红色，约占白细胞的50%-70%；嗜酸性粒细胞细胞大小约10-15μm，核常分为2叶，颗粒粗大,分布均匀,桔红色，约占白细胞的0.5%-3%；嗜碱性粒细胞10-12μm核常呈S形（十分肥大）或不规则颗粒大小不等,分布不匀, 紫蓝色，约占白细胞的 0%-1%，数量极少，因此找到它需要运气、知识和眼力；淋巴细胞分大中小6-12μm以6-8μm居多，核圆或随圆形，很少,天蓝色，约占白细胞的20%-30%；单核细胞染色质致密,深紫色，大小约14-20μm，肾形或马蹄形，胞质多常染成浅灰蓝色，染色质疏松,着色较浅约占白细胞的3%-8%。白细胞的数量随不同的生理状态会有较大的波动，在实验观察中，以嗜中性粒细胞数最多，其次为淋巴细胞，单核细胞和嗜酸性细胞均只发现一个而嗜碱性细胞没发现。在观察白细胞类型时，首先观察是否存在颗粒，若无颗粒主要根据核质比，大的为淋巴细胞和核的形状马蹄型为单核细胞；若有颗粒则根据核的分叶数、形状；颗粒大小、颜色、以及颜色深浅综合来判断嗜中性粒细胞（核分多叶、细小的紫色颗粒、颜色深）、嗜酸性粒细胞（核分两叶、颗粒明显较嗜中性粒细胞粗大且颗粒呈桔红色，显微镜下看上去亮晶晶的）和嗜碱性粒细胞（没观察到）。
（2）ABO血型鉴定
人类红细胞膜上存在不同的特异糖蛋白抗原—凝集原，也存在于其它血细胞和一般组织细胞上，而血浆中存在着不与自身凝集原发生反应的凝集素，凝集原会与相应的凝集素发生凝集反应，使红细胞凝集成团，不能分开，红细胞破裂产生溶血。因此可用标准血清鉴定未知血型。在白瓷板上滴加抗A和抗B凝集素，然后加入本人血液，若与抗A凝集素反应产生沉淀而与抗B凝集素不反应则血型为A型；若与抗B凝集素反应产生沉淀而与抗A凝集素不反应则血型为B型；若均与抗A、抗B凝集素发生反应产生沉淀则血型为AB型；若均不与抗A、抗B凝集素反应则血型为O型。实际实验中，在加入本人血液后，血液与抗A、抗B凝集素反应均无沉淀，但加入到抗A凝集素中后呈深色，而加到抗B凝集素中呈鲜红色。理论上不发生反应应呈鲜红色，颜色变深可能与pH值有关。
三、结论
（1）本人找到了红细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞。
（2）本人的血型为o型，是万能供血者，可以帮助更多的人。
第二篇：abo血型鉴定
生理盐水凝集法
①玻片法：操作简单，适于大量标本检查，但反应时间长；被检查者如血清抗体效价低，则不易引起红细胞凝集，因此，不适于反向定型。
②试管法：由于离心作用可加速凝集反应，故反应时间短，而且，借助于离心力可以使红细胞接触紧密，促进凝集作用，适于急诊检查。
红细胞亚型抗原性弱，如抗A抗B标准血清效价低时，易造成漏检或误定。如加用O型（抗A、B）血清和反向定型，可避免此类错误。
玻片法凝集结果判断：红细胞呈均匀分布，无凝集颗粒，镜下红细胞分散。
在低倍镜下凝集程度强弱判断标准：
①呈一片或几片凝块，仅有少数单个游离红细胞为（++++）。
②呈数个大颗粒状凝块，有少数单个游离红细胞为（+++）。
③数个小凝集颗粒和一部分微细凝集颗粒，游离红细胞约占1／2为（++）。
④肉眼可见无数细沙状小凝集颗粒。于镜下观察，每凝集团中有5～8个以上红细胞凝集为（+）。
⑤可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多的游离红细胞（±）。
⑥可见极少数红细胞凝集，而大多数红细胞仍呈分散分布为混合凝集外观。
⑦镜下未见细胞凝集，红细胞均匀分布为（-）。凝胶微柱法
是红细胞抗原与相应抗体在凝胶微柱介质中发生凝集反应的免疫学方法。血型抗体为单克隆抗体，加入试剂、标本，用专用离心机离心后可直接用肉眼观察结果或用血型仪分析。此法操作标准化，定量加样，确保结果准确性。
抗A、抗B和抗AB标准血清标准
准血清均采自健康人，并应符合下述条件：①特异性：只能与相应的红细胞抗原发生凝集，无非特异性凝集。②效价：我国标准抗A和抗B血清效价均在1：128以上。③亲和力：我国标准要求抗A对A1、A2及A2B发生反应开始出现凝集的时间分别是15s、30s和45s；抗B对B型红细胞开始出现凝集的时间为15s。凝集强度为3min时，凝块不小于1mm2。④冷凝集素效价：在1：4以下。⑤无菌。⑥灭活补体。[3] 编辑本段注意事项
1、所用器材必须干燥清洁、防止溶血，凝集和溶血的意义一样。为避免交叉污染，建议使用一次性器材。标准血清从冰箱取出后，应待其平衡至室温后再用，用毕后应尽快放回冰箱保存。
2、加试剂顺序：一般先加血清，然后再加红细胞悬液，以便核实是否漏加血清。
3、虽然IgM抗A和抗B与相应红细胞的反应温度以4℃最强，医学教育网收集整理但为了防止冷凝集现象干扰，一般在室温20℃～24℃内进行试验，而37℃条件，可使反应减弱。
4、幼儿红细胞抗原未发育完全、老年体弱者抗原性较弱，最好采用试管法鉴定血型。
5、玻片法反应时间不能少于10min，否则较弱凝集不能出现，造成假阴性。
6、正、反定型结果一致才可发报告。
7、反定型法：先天性免疫球蛋白缺陷，长期大量应用免疫抑制，血型抗体可减弱或消失；血清中存在自身免疫性抗体、冷凝集素效价增高、多发性骨髓瘤、免疫球蛋白异常均可造成反定型困难；新生儿体内可存在母亲输送的血型抗体，且自身血型抗体效价又低，因而出生6个月以内的婴儿不宜做反定型。老年人血清中抗体水平大幅度下降或被检者血清中缺乏抗A及（或）抗B抗体，可引起假阴性或血型鉴定错误。[4]
ABO血型系统
英文：ABO blood group system 根据红细胞表面有无特异性抗原（凝集原）A和B来划分的血液类型系统。ABO血型系统是1900年奥地利兰茨泰纳发现和确定的人类第一个血型系统。根据凝集原A、B的分布把血液分为A、B、AB、0四型。红细胞上只有凝集原A的为A型血，其血清中有抗B凝集素；红细胞上只有凝集原B的为B型血，其血清中有抗A的凝集素；红细胞上A、B两种凝集原都有的为AB型血，其血清中无抗A、抗B凝集素；红细胞上A、B两种凝集原皆无者为O型，其血清中抗A、抗B凝集素皆有。具有凝集原A的红细胞可被抗A凝集素凝集；抗B凝集素可使含凝集原B的红细胞发生凝集。输血时若血型不合会使输入的红细胞发生凝集，引起血管阻塞和血管内大量溶血，造成严重后果。所以在输血前必须作血型鉴定。正常情况下只有ABO血型相同者可以相互输血。在缺乏同型血源的紧急情况下，因O型红细胞无凝集原，不会被凝集，可输给任何其他血型的人。AB型的人，血清中无凝集素，可接受任何型的红细胞。但是异型输血输入量大时，输入血中的凝集素未能被高度稀释，有可能使受血者的红细胞凝集。所以大量输血时仍应采用同型血。临床上在输血前除鉴定ABO血型外，还根据凝集反应原理，将供血者和受血者的血液作交叉配血实验，在体外确证两者血液相混不发生凝集，方可进行输血以确保安全。近年来发现存在于红细胞上的凝集原（即血型抗原）也存在于其他血细胞和一般组织细胞。所有细胞表面血型抗原的特异性可作为机体免疫系统鉴别自身和异物的标志。因此，在临床实践中血型鉴定也是组织器官移植成败的关键。人类血型有遗传特性，决定血型的血型抗原即凝集原ABOA和B及其前身物H，分别受ABO三个等位基因控制。A、B基因为显性基因，O（H）基因为隐性基因。它们的遗传规律所显示的父、母血型与子代血型间的关系，在法医学上可作为否定亲子关系的依据，若再配合其他血型系统的测定，则可判断亲子关系。
血型不仅在输血上有重要意义，而且在人种学、遗传学、法医学、移植免疫、疾病抵抗力（或易感性）等方面都有应用价值，在输血前，一定要检查病人(受血者)和输血人（供血者）的血型，并且要进行交叉配血试验。在临床医学中，除输血、移植免疫外，对新生儿溶血病、自身免疫性溶血性贫血特异性抗体的检查，也都需要血型知识和有关技术。ABO血型抗原具有种族差异。例如，中欧地区的人群中，约40％以上的人为A型，近40％的人为O型，10％的人为B型，6％的人为AB型；而90％的美洲土著人为O型。[5] 编辑本段举例分析
通常只用两种抗血清即抗A及抗B血清，就可将群体分为四种血型。
根据血型的遗传规律，和临床工作方例起见，配偶间所生子女的血型如下：
各种ABO配偶所生子女的血型:
婚配式 子女可能有的血型 子女不可能有的血型
A×A A、O B、AB
A×B A、B、O、AB 无
A×AB A、B、AB O
A×O A、O B、AB
B×B B、O A、AB
B×AB A、B、AB O
B×O B、O A、AB
AB×AB A、B、AB O
AB×O A、B AB、O
O×O O A、B、AB
婚配式 A型血的可能 B型血的可能
A*A 75% 0% 25% 0%
A*B 25% 25% 25% 25%
A*O 50% 0% 50% 0%
A*AB 50% 25% 0% 25%
B*B 0% 75% 25% 0%
B*O 0% 75% 25% 0%
O型血的可能AB型血的可能
B*AB 25% 50% 0% 25%
O*O 0% 0% 100% 0%
O*AB 50% 50% 0% 0%
AB*AB 25% 25% 0% 50% ABO血型鉴定总结
AB0血型鉴定原理
常用盐水凝集法检测红细胞上存在的血型抗原，以及血清中存在的血型抗体，依据抗原抗体存在的情况判定血型。常规的方法有：①正向定型：用已知抗体的标准血清检查红细胞上未知的抗原。②反向定型：用已知血型的标准红细胞检查血清中未知的抗体。结果判定：凡红细胞出现凝集者为阳性，呈散在游离状态为阴性。ABO血型定型原则见表1-5-2。
鉴定方法
（1）生理盐水凝集法：①玻片法：操作简单，适于大量标本检查，但反应时间长；被检查者如血清抗体效价低，则不易引起红细胞凝集，因此，不适于反向定型。②试管法：由于离心作用可加速凝集反应，故反应时间短，而且，借助于离心力可以使红细胞接触紧密，促进凝集作用，适于急诊检查。
红细胞亚型抗原性弱，如抗A抗B标准血清效价低时，易造成漏检或误定。如加用O型（抗A、B）血清和反向定型，可避免此类错误。
玻片法凝集结果判断：红细胞呈均匀分布，无凝集颗粒，镜下红细胞分散。在低倍镜下凝集程度强弱判断标准：①呈一片或几片凝块，仅有少数单个游离红细胞为（++++）。②呈数个大颗粒状凝块，有少数单个游离红细胞为（+++）。③数个小凝集颗粒和一部分微细凝集颗粒，游离红细胞约占1／2为（++）。④肉眼可见无数细沙状小凝集颗粒。于镜下观察，每凝集团中有5～8个以上红细胞凝集为（+）。⑤可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多的游离红细胞（±）。⑥可见极少数红细胞凝集，而大多数红细胞仍呈分散分布为混合凝集外观。⑦镜下未见细胞凝集，红细胞均匀分布为（-）。
（2）凝胶微柱法：是红细胞抗原与相应抗体在凝胶微柱介质中发生凝集反应的免疫学方法。血型抗体为单克隆抗体，加入试剂、标本，用专用离心机离心后可直接用肉眼观察结果或用血型仪分析。此法操作标准化，定量加样，确保结果准确性。
抗A、抗B和抗AB标准血清标准
准血清均采自健康人，并应符合下述条件：①特异性：只能与相应的红细胞抗原发生凝集，无非特异性凝集。②效价：我国标准抗A和抗B血清效价均在1：128以上。③亲和力：我国标准要求抗A对A1、A2及A2B发生反应开始出现凝集的时间分别是15s、30s和45s；抗B对B型红细胞开始出现凝集的时间为15s。凝集强度为3min时，凝块不小于1mm2。④冷凝集素效价：在1：4以下。⑤无菌。⑥灭活补体。血型鉴定操作时注意事项
一般注意事项：①所用器材必须干燥清洁、防止溶血，凝集和溶血的意义一样。为避免交叉污染，建议使用一次性器材。标准血清从冰箱取出后，应待其平衡至室温后再用，用毕后应尽快放回冰箱保存。②加试剂顺序：一般先加血清，然后再加红细胞悬液，以便核实是否漏加血清。③虽然IgM抗A和抗B与相应红细胞的反应温度以4℃最强，医学教育网收集整理但为了防止冷凝集现象干扰，一般在室温20℃～24℃内进行试验，而37℃条件，可使反应减弱。④幼儿红细胞抗原未发育完全、老年体弱者抗原性较弱，最好采用试管法鉴定血型。⑤玻片法反应时间不能少于10min，否则较弱凝集不能出现，造成假阴性。⑥正、反定型结果一致才可发报告。⑦反定型法：先天性免疫球蛋白缺陷，长期大量应用免疫抑制，血型抗体可减弱或消失；血清中存在自身免疫性抗体、冷凝集素效价增高、多发性骨髓瘤、免疫球蛋白异常均可造成反定型困难；新生儿体内可存在母亲输送的血型抗体，且自身血型抗体效价又低，因而出生6个月以内的婴儿不宜做反定型。老年人血清中抗体水平大幅度下降或被检者血清中缺乏抗A及（或）抗B抗体，可引起假阴性或血型鉴定错误。[6]
第三篇：实验六ABO血型鉴定、血涂片的制作与血细胞显微观察(精)
实验六：ABO血型鉴定、血涂片的制作与血细胞显微观察
一、实验目的.了解 ABO 和 Rh 血型分类系统的背景知识和遗传学原理 2.掌握微量采血及血涂片的制作方法
3.学习使用光学显微镜观察和区分红细胞与各种白细胞
二、实验材料
1.实验材料 ：医用采血针、酒精棉球、载玻片、血推片、消毒牙签 2.实验试剂： 瑞氏染液、抗 B 血清、抗 A 血清、生理盐水、蒸馏水 3.仪器设备： Motic 光学显微镜
三、实验内容和方法 ABO 血型鉴定
1.1 取一块清洁玻片，用记号笔标上记号。
1.2 用小滴管吸 A 型标准血清（抗 B）一滴加入左侧，用另一小滴管吸 B 型标准血清（抗 A）一滴加入右侧
1.3 以穿刺法自左手无名指指尖取血，在玻片的每侧各放入一小滴血，用牙签搅拌，使每侧抗血清和血液混和。每边用一支牙签，切勿混用。
1.4 静置室温下 10—15min 后，观察有无凝集现象，并据此判断血型。2 血涂片的制作及血细胞观察
2.1 取末捎血一滴置于玻片的一端 , 左手持载玻片 , 右手以边缘平滑的推片的一端从血滴前方后移接触血滴，血滴即沿推片散开。然后便推片与载片夹角保持 30-45 度平稳地向前移动 , 载片上保留下一薄层血膜
2.2 血涂片制成后可手持玻片在空气中挥动 , 使血膜迅速干燥 , 以免血细胞皱缩.2.3 用蜡笔在血膜两侧划线 , 以防染液溢出 , 然后将血膜平放在染色架上.加瑞氏
染液 2-3 滴 , 使覆盖整个血膜 , 固定 0.5-1.0 分钟.滴加等量或稍多的新鲜蒸馏水 , 与染料混匀染色 5-10 分钟.2.4 用清水冲去染液 , 待自然干燥后或用吸水纸吸干 , 即可置血涂片于显微镜下进行镜检。
2.5 白细胞分类计数: 选择涂片的体尾交界处染色良好的区域 , 在油镜下计数 100 个红细胞 , 按其形态特征进行分类计数 , 求出各类细胞所占比值。
注：
1.瑞氏染液 : 瑞氏染料 1g 加甲醇(AR)600ML。将瑞氏染料放在清洁干燥乳钵中 , 加少量甲醇 , 充分研磨使染料溶解.将已完全溶解的部分倒入棕色试剂瓶中 , 未溶解部分再加少量甲醇研磨 , 直至染料完全溶解于甲醇为止.新配制的染料偏碱 , 须在室温和 37℃ 下一定时间待染料成熟 , 主要美蓝逐渐增多为天青 B 后才能使用.贮存时间越久染色效果越好 , 因此 ,Deamgilliland 等采用吸光度比值(rA)作为瑞氏染料的质量规格.rA 测定方法如下 : 取瑞氏染液 15-25ul(视染液浓度而定)加甲醇 10ml 稀释 , 混匀后以甲醇为空白管分别以波长 650nm,525nm 比色 ,rA=A650/A525。因为美蓝吸收峰为波长 650nm, 伊红吸收峰波长为 525nm, 天青 B 吸收峰也为 650nm, 但吸光度 A 约为美蓝的一半.所以新配制染料的 RA 接近2, 随着美蓝逐渐氧化为天青 B,RA 也相应下降 ,RA 下降达 1.3±0.1 即可使用.瑞氏染料在贮存过程中必须塞严 , 以防甲醇挥发和氧化为甲酸.有人主张配方中加入 30ml 甘油 , 防止甲酸挥发 , 并可使细胞染色清晰.甲醇必须纯净 , 如甲醇中丙酮含量过多 , 染色偏酸 , 使细胞着色不良.2.磷酸盐缓冲液(PH6.4-6.8)：磷酸二氢钾 0.3g 加磷酸氢二钠 0.2g 再加蒸馏水至 1000ml, 配制成磷酸盐缓冲液调整 PH, 如无缓冲液可用新鲜蒸馏水代替.3.白细胞分类计数正常参考值 细胞类别 成人
杆状核 0.01-0.05 分叶核 0.50-0.70
嗜酸性粒细胞 0.005-0.05 嗜碱性粒细胞 0-0.01 淋巴细胞 0.20-0.40 单核细胞 0.03-0.08
四、注意事项
1)玻片的清洗：新玻片常有游离碱质 , 因此应用清洗液或 10% 盐酸浸泡 24 小时 , 然后再彻底清洗。用过的玻片可放入适量肥皂水或合成洗涤剂的清水中煮沸 20 分钟 , 再用热水将肥皂和血膜洗去 , 用自来水反复冲洗 , 必要时再置 95% 乙醇中浸泡 1 小时 , 然后擦干或烤干备用。使用玻片时只能手持玻片边缘 , 切勿触及玻片表面;, 以保持玻片清洁 , 干燥 , 中性、无油腻。
2)细胞染色对氢离子浓度十分敏感 , 在染色过程中玻片必须化学清洁 , 配制瑞氏染液必须用优质甲醇 , 稀释染液必须用缓冲液 , 冲洗用水应近中性 , 否则各种细胞染色反应异常 , 致使细胞的识别困难 , 甚至造成错误。
3)一张良好的血片 , 要求厚薄适宜 , 头体尾分明 , 分布均匀 , 边缘整齐 , 两侧留有空隙。血片制好后最好立即固定染色 , 以免细胞溶解和发生退行性变。
4)血膜未干透 , 细胞尚未牢固附在玻片上 , 在染色过程中容易脱落 , 因此血膜必需充分干燥.5)染色时间与染液浓度 , 室温高低 , 细胞多少有关.染液越淡 , 室温越低 , 细胞越多 , 所需染色时间越长或应适当增加染液量 , 因此染色时间应视具体情况而定.特别是更换新染料时必须经试染 , 摸索最佳染色条件.6)染液不可过少 , 以防蒸发干燥染料沉着于血片上难冲洗干净.7)冲洗时应用流水将染液冲去.不能先倒掉染液 , 以免染料沉着于血片上.8)染色过深可用甲醇或酒精适当脱色 , 最好不复染 , 必须复染时 , 可将染液先稀释好再复染.9)染色时应注意保护血膜尾部细胞 , 不能划掉.因为体积较大细胞常在此处出现.染色结果 : 在正常情况下血膜外观为粉红色 , 在显微镜下红细胞呈肉红色；白细胞胞浆能显示各种细胞的特有色彩 , 细胞核染紫红色 , 染色质清楚 , 粗细松紧可辨。染色结果偏酸 , 则红细胞和嗜酸性粒细胞颗粒偏红 , 白细胞核呈浅蓝色或不着色；染色结果偏碱 , 则所有细胞染成灰蓝色 , 颗粒深暗，嗜酸性颗粒可染成暗褐色 , 甚至紫黑色或蓝色。嗜中性颗粒偏粗 , 偏碱(紫黑色).血片原处呈绿色.五、思考题
(1)如何区别血液的凝集和凝固？其机理有何差别？
(2)根据你的血型，判断你能接受何种血型并且能够给何种血型供血？
(3)O 型血人又被称为“万能供血者”，试根据 ABO 血型分型作出你对这一说法的理解(4)试根据父母的血型，写出后代的可能血型：
第四篇：试管法ABO血型鉴定
试管法ABO血型鉴定
1.检验目的
鉴定供受血者ABO血型，保证临床输血安全。2．检验方法 试管法 2.1.试管法 2.1.1.实验原理
ABO血型鉴定，是根据IgM类特异性血型抗体与红细胞膜上特异性抗原结合能出现凝集反应的原理，用已知IgM类特异性标准抗A和抗B血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或（和）B抗原，同时用已知标准A型红细胞和B型红细胞来测定血清中有无相应的天然IgM类抗A或（和）抗B。2.1.2.标本要求
静脉EDTA抗凝血2.0～3.0ml，以3000r/min离心3分钟，分离上清液。2.1.3.试剂
单克隆或多克隆抗A、抗B试剂，3-5% A、B及O型试剂标准红细胞悬液。2.1.4.器材
离心机，4℃冰箱、显微镜，12×70mm试管(以下称“小试管”),滴管，10mm×60mm透明的玻璃试管或塑料试管。2.1.5.操作步骤
2.1.5．1．正定型（查抗原）：取试管2支，分别标明抗A、抗B，加入抗A和抗B分型血清各2滴于试管底部，再以滴管分别加入受检者5%红细胞盐水悬液1滴，混匀。
2.1.5．2.反定型（查抗体）：取试管3支，分别标明A型、B型和O型细胞。用滴管分别加入受检者血清2滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B、O型5%试剂红细胞悬液1滴，混匀。
2.1.5．3.立即以3000r/min离心10秒。（离心时间为离心机校准时间）。2.1.5．4.轻轻摇动试管，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（或溶血）现象,如肉眼观察不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜下观察有无凝集。2.1.5．5.凝集强度判断标准
＋＋＋＋：红细胞凝集成一大片或几片，仅有少数单个游离红细胞，血清清晰透明。
＋＋＋：红细胞凝集成数个大颗粒凝块，有少数单个游离红细胞，血清透明。
＋＋：红细胞凝成数个小颗粒凝块，游离红细胞＜1/2。＋：红细胞凝成数个小颗粒凝块，游离红细胞＞1/2。±：红细胞凝成数个微小颗粒凝块，周围有很多游离红细胞。MF：混合凝集外观（mixed field，MF），镜下可见少数红细胞凝集，而绝大多数红细胞呈分散分布。
－：阴性，镜下未见红细胞凝集，红细胞均匀分布。HP：部分溶血（part hemolysis，HP），有些残留红细胞。H：完全溶血（hemolysis，H），无残留红细胞。2.1.5.6.报告受检者红细胞ABO血型（表1001-1）。
表1001-1 ABO血型鉴定结果判断
分型血清＋受检者红细胞
抗A ＋ － － ＋ 抗B － ＋ － ＋
A B O AB 受检者血型
A细胞 － ＋ ＋ －
B细胞 ＋ － ＋ －
O细胞 － － － －
受检者血清＋试剂红细胞
注：＋为凝集；－为不凝集
第五篇：ABO血型鉴定假阳性的原因浅析（精选）
ABO血型鉴定正反定型不一致的原因浅析
【摘 要】目的：探讨ABO血型正反定型不一样的原因。方法：ABO血型玻片法正定型和试管法反定型。
结果：血型鉴定的过程中会有某些干扰因素引起一些假象，造成血型鉴定假阴性或假阳性反应。结论：临床应采用正反定型对照的方法来确认血型，以免受各界因素影响而误导对试验结果的判断。
血型是以血液抗原形式表现出来的一种遗传性状，一般是不会发生改变的。我们平常所称的血型泛指ABO血型系统和RH血型系统。这两种血型系统不合极易造成输血反应，所以ABO血型鉴定的准确性是十分重要的。而血型鉴定的过程中会有某些干扰因素造成一些假象，如血液中含有较高的冷凝集素或自身免疫性抗体，使受检者红细胞上的抗原减弱等因素，造成血型鉴定假阴性或假阳性反应，病人血清或血浆中的白细胞过多，堵塞了凝胶间隙，从而影响了红细胞的沉降，造成假阳性等。从而出现正反定型不一致的情况，在这里我们浅析一下影响因素。
（1）新生儿:6个月以内的婴儿抗体多来自母亲，自身血型抗体效价又低，反定型时可能不凝集或凝集很弱，所以不宜做反向定型。
（2）老年人:随年龄增长老年人抗体水平呈逐渐下降趋势，造成鉴定困难。
（3）白血病、淋巴瘤及使用免疫抑制药患者、先天性丙种球蛋白缺乏症等。
（4）被检红细胞凝集力减弱，如A 2、A 2 B等亚型红细胞抗原性弱或由于恶病质病人，如白血病、某些恶性肿瘤使A或B抗原变弱，新生儿红细胞血型抗原形成不足等。
（5）全凝集与多凝集红细胞:红细胞被细菌污染，细菌酶消化了红细胞表面的唾液酸，暴露出T抗原而被激活，正常人红细胞上有T抗原，血清中有抗T，但因红细胞表面存在的唾液酶T抗原无活性，当红细胞被细菌污染后，使红细胞与多数人血清凝集称为多凝集，如与所有人血清都凝集称为全凝集。对这两种疑为全凝集或多凝集红细胞时，用多份AB型血清加以证实，因此种现象与AB型血清也发生凝集，应重新抽血，用标准的定型方法来测定患者准确血型。
（6）获得性B表现，某些肠道杆菌感染的患者，由于细菌等引起的获得性类B抗原，易产生假阳性结果，A型患者出现类B可判为AB型，O型错判为B型，此种现象当病情好转类B即消失。
（7）某些疾病如肝病、肾炎因患者血清中白蛋白含量低而致球蛋白含量相对或绝对性增高，多发性骨髓瘤因患者血清中病理性球蛋白增加易形成钱串状排列，而外观类似凝集，临床应用血浆扩容剂如低分子右旋糖酐均可使红细胞成钱串状假凝集。真与假的区别是在镜下观察时，假凝集红细胞呈钱串状排列，形状基本完整，加一滴等渗盐水于玻片上并混匀后钱串排列消失，而真凝集加等渗盐水凝集不消失，红细胞不会散开。
（8）反应温度不合适亦会造成假性结果。ABO血型鉴定主要测定体内的完全抗体，完全抗体最适温度多在22℃至4℃左右，属于IgM抗体，为冷性抗体，许多IgM类型的抗体在4℃时的反应强度远高于37℃。另外血型鉴定方法也会影响结果。如玻片法定型简单，不需要离心设备，仅靠抗体的力量，凝集红细胞而无离心的加速反应，所以反应的时间较长，不适合急诊，另亚型红细胞抗原与抗体的凝集反应慢，凝集强度弱，有时容易被忽略而导致定型错误，不适合用于反定型和交叉配血，只适于大规模血型普查。而试管法定型反应快，需时短，特别是紧急输血时可在抗原抗体反应 1min后离心观察结果。通过离心增强凝集，可发现亚型和较弱的抗原抗体反应，结果准确可靠，为临床常规应用的方法。
为临床输血安全在鉴定血型时采用正反定型，正定型是用标准血型抗体，对红细胞膜上ABO系统血型抗原的鉴定。反定型是用标准红细胞抗原对血清中ABO系统血型抗体的鉴定，其目的在于复检正定型结果的准确性纠正漏检误报，特别是一些具有弱抗原的亚型，正定型易被忽略，此外反定型还可以纠正某些肿瘤病人因红细胞抗原性减弱造成的正定型错误以及克服排除获得性类B抗原和全凝集现象对红细胞定型的干扰，可发现血清中存在的一些不规则抗体等。
总而言之，血型鉴定是一项重要而严肃的工作，关系到患者的生命安全。检验人员必须认真负责，严格按照操作规程操作，熟练掌握操作步骤，能察觉出检验结果的异样，并认真复查。尽可能的规避干扰因素，保证结果的准确性和可靠性。
【参考文献】
冯春颜，吴文权，彭友堂等。ABO血型鉴定结果的质量控制方法。现代简检验医学杂志，2007.22:113-114 王晨，钱宝华，韦燕萍等。7例ABO血型抗体减弱或缺乏的临床分析。临床输血与检验杂志，2008.10:243-245.
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