实验五 细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的制片和简单染色

第一篇：实验五 细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的制片和简单染色

实验五

细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的制片和简单染色

一．实验器材 1.菌种

枯草芽孢杆菌12—18h。金黄色葡萄球菌24h牛肉膏蛋白胨琼脂泄密安培养物等。1.溶液和试剂

草酸铵结晶紫染液，齐氏碳酸复红染液，吕氏碱性美蓝染液，革兰氏染色用典液，乳酸碳酸棉蓝染液。

2.仪器和其他用品

酒精灯，载玻片，盖玻片，显微镜，双层瓶，擦镜纸，接种环，接种铲，接种针，镊子，载玻片夹子，载玻片支架，玻璃纸，平皿v型玻璃棒，滴管，解剖针，解剖刀，生理盐水，50%乙醇，20%甘油，高氏1号培养基平板。二．目的要求

1.学习并掌握微生物的制片及简单染色的基本技术 2.初步了解细菌，放线菌，酵母菌及霉菌的形态特征 3.巩固显微镜操作技术及无菌操作技术 三．基本原理

放线菌菌体由基内菌丝，气生菌丝和孢子丝组成，制片时不采用涂片法以免破坏细胞及菌丝体形态。通常采用插片法或玻璃纸法并结合菌丝体简单染色进行观察，在插片中首先将灭菌盖玻片插入接种有放线菌的平板，使放线菌沿盖玻片和培养基接触生长而附着在盖玻片上，取除盖玻片上，取出盖玻片可直接在显微镜下观察放线菌在自然生长状态下的形态特征，而且有利于对不同生长时期的放线菌形态进行观察。利用单一染料对菌体进行染色的方法称为简单染色。用于染色的染料是一类苯环上带有发色基因的有机化合物。常采用碱性染料进行简单染色，原因在于微生物细胞在碱性、中性及弱酸性溶液中通常带负电荷，而染料电离后染料部分带正电荷，很容易与细胞结合使其着色；当细胞处于酸性条件下，所带正电荷增加时，可采用酸性染料染色。

四、操作步骤

（一）细菌制片及简单染色。

1、涂片。

2、干燥。

3、固定。

4、染色。

5、水洗。

6、干燥。

7、镜检。

（二）酵母菌制片及简单染色。

水—碘液浸片法。将革兰氏染色用碘液用水稀释4倍后，滴加一滴于载破片中央，无菌操作取少许菌体置于染色中混匀，盖上破片后镜剑。

五、思考题。

第二篇：《酵母菌和霉菌》教案

第一节 酵母菌和霉菌

教学目标

1.了解酵母菌和霉菌（青霉或曲霉）的形态结构。

2.了解酵母菌和霉菌（青霉或曲霉）的营养方式和生殖方式。3.了解酵母菌和霉菌对自然界的意义和与人类的关系。

4.通过指导学生观察酵母菌、青霉或曲霉，继续培养学生的动手实验能力和观察能力。

5.尝试培养青菌和曲菌，并用显微镜观察。

6.通过了解酵母菌和霉菌与人类的关系，学会用一分为二的方法分析事物。重点、难点分析

重点：酵母菌和霉菌的形态结构和生活特点，酵母菌和霉菌对自然界的意义和与人类的关系是本章的重点知识。

1.通过学习酵母菌和霉菌的形态结构，让学生与所学过的植物细胞结构、细菌细胞结构进行比较分析，归纳总结出它们在细胞结构上的异同。

2.通过学习酵母菌和霉菌的生活特点，有利于了解酵母菌和霉菌对自然界的意义和与人类的关系，使学生懂得研究微生物的重要任务之一就是用其利，避其害。了解真菌在经济上所蕴藏的潜在价值是巨大而多样的。

难点：酵母菌的营养方式是本节的教学难点：

酵母菌既是异养（腐生）厌氧型真菌，又是异养需氧型真菌，要讲清酵母菌获得能量的方式有一定难度。教学建议

一课时

实践训练：观察酵母菌的形态 创新训练：霉菌的培养 教学过程

1.课前准备A：

首先做好酵母菌的培养。酵母菌的简易培养方法如下：

①提前2～3天用3％～5％的蔗糖或2％葡萄糖溶液放入鲜酵母或一小块发面，恒温22℃培养。

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②将苹果皮切碎或用散发酒味的水果皮，装入瓶内，注意瓶子不要太大，轻轻压实，加入凉开水浸没，不用接种，在较温暖的地方培养2～3天镜检，即能找到酵母菌。

2.课前准备B：

①介绍霉菌的简易培养方法。布置学生在课前2～3天用橘子或陈旧的馒头培养青霉或曲霉。

②利用二次接种的方法培养较纯净的青霉或曲霉。在课前2～3天，制备好青霉或曲霉的培养装片。具体操作方法详见课本。讲授新课

1．酵母菌

（1）关于酵母菌形态结构的教学：

指导学生制作含有大量酵母菌的临时装片，并指导学生用显微镜观察酵母菌的形态结构。通过对酵母菌形态结构的观察，对酵母菌建立感性认识。课前画好酵母菌结构的投影片，利用挂图及书中的插图，在课上放一段酵母菌形态结构的录像片段。讲述酵母菌结构时注意指导学生与植物细胞结构和细菌细胞结构进行比较。让学生指出它们的异同。这样使学生明确认识到：酵母菌的结构中有成形的细胞核。酵母菌是单细胞个体，属于个体微小的真菌。

（2）酵母菌营养方式的教学

强调指出：酵母菌不含叶绿素，不能进行光合作用，因此不属于自养生物。酵母菌在有氧的条件下生活，能把葡萄糖分解成二氧化碳和水；而在在无氧条件下，又可把葡萄分解成二氧化碳和酒精。

做演示实验：在课前1～2天用两个试管分别倒入含酵母菌的培养液，把其中一个试管用塞子堵上，一个敞着口，课上请学生分别闻一闻，让学生说出哪个有明显的酒味。并问为什么？同时让学生观察分析培养酵母的糖液中为什么会有气泡？

（3）在酵母菌与人类的关系 利用学生已经掌握的知识设问，如：

1、馒头、面包为什么是松软多孔的？

2、你们知道酵母菌有哪些利用价值？

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归纳总结：酵母菌是我国古代劳动人民应用较早的一类微生物，自然界中几乎到处都有酵母菌，已发现的酵母菌达数百种之多，绝大多数都是人类的好朋友，特另提在酒类酿造方面已经有四千多年的历史。另外酵母菌中含有丰富的蛋白质、维生素等营养物质，因此可利用酵母菌的菌体捉取辅酶A、细胞色素C、凝血质、卵磷脂和多种氨基酸等。近几年，酵母菌在石油脱蜡、酶制剂和发酵饲料等方面的应用也有了新的进展。

（4）关于酵母菌生殖方式的教学：

指导学生，制作临时装片，在显微镜下观察正在进行出芽生殖的酵母菌，在黑板上画简图示意，制作投影片。强调酵母菌出芽生殖的芽与绿色开花植物的芽不是一个概念。酵母菌细胞上长出的突起，比母细胞小得多，是母细胞上的一个芽体，脱离母体后，即成为个新的酵母菌，属于无性生殖。酵母菌还有另一种生殖方式为孢子生殖，在条件恶劣时，产生孢子，由孢子发育成新个体。

二、讲述霉菌的形态结构时，运用讲述与实验结合的方法。具体方法如下：（1）进行实验观察：

①取一块长有青霉的橘皮或长有曲霉的馒头，用放大镜进行观察。观察青霉或曲霉的形态和颜色；

②指导学生制作橘皮培养出的青霉装片，让学生在显微镜下观察。注意以下问题：取材用解剖针挑取少量，要从颜色很浅的绿色部分取材做装片，这样既能看到无色的分枝菌丝，又能观察到菌丝顶端的绿色孢子。

③课前制备好的青霉或曲霉的培养装片，做好示范镜，让学生观察。（2）学生观察后提问学生看到了什么？

让学生描述青霉或曲霉的形态和颜色。告诉学生在镜下观察到大量绿色成串的青霉的孢子，曲霉的孢子。常见的是黑、黄和橙红色，无色的部分是菌丝。然后进行青霉和曲霉形态结构的讲解。指出：青霉和曲霉呈现出的不同颜色是孢子的颜色，而它们的菌丝是无色的。

青霉和曲霉的菌体是由许多菌丝组成的，分为直立菌丝和营养菌丝。由于上有横隔，是多细胞个体。但不是所有霉菌都是多细胞个体。青霉和曲霉的每个细胞中都有细胞核，是真核生物。另外参照书中插图让学生比较青霉与曲霉分生孢子梗的区别：青霉孢子梗顶端无膨大；曲霉分生孢子梗顶端膨大成为球状。

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（3）关于青霉与曲霉的营养方式

强调：由于青霉和曲霉菌丝体中无叶绿素，不能进行光合作用，只能吸收现成有机物，进行腐生生活，所以为异养生物。

（4）青霉和曲霉的生殖方式

让学生从孢子梗的形态及孢子的颜色上分辨青霉和曲霉，指出它们是靠孢子生殖的，这种孢子可在空气中传播，每个孢子落到适宜的环境中，都可以发育成新个体。在温暖潮湿的季节里衣物有时会发霉，正是霉菌孢子大量繁殖的结果。

青霉、曲霉与人类的关系是怎么样的？

组织学生讨论青霉和曲霉对人类有益和有害的地方是什么，而后归纳总结。着重指出：曲霉是发酵工业及食品加工方面的重要菌种。2000年以前我国就已利用曲霉制酱，也是我国民间用以酿酒、制醋曲，制某些副食品的重要菌种。例如我国生产的腐乳有白腐乳、青腐乳和红腐乳之分，当你看到红腐乳时不要以为染了化学颜料，其实它是红曲霉分泌的红曲加工而成，由于人们选用了不同工艺，因而使腐乳各具特色。

青霉除了用于提取青霉素外，还用于制造有机酸、葡萄糖氧化酶和淀粉酶等。讲完课后根据教学目标进行检测，及时反馈，并请学生回答“动动脑”中提出的问题，而后指导学生看课外读物“青霉素的来历”。

作业布置：同步训练 板书设计：

第一节

酵母菌和霉菌

一.酵母菌：形态结构----酵母菌是单细胞个体，属于个体微小的真菌。营养方式-----腐生生活。

生殖方式------无性生殖、孢子生殖。

二.青霉与曲霉: 形态结构-----由许多菌丝组成的。生殖方式-----孢子生殖。营养方式-----异养生物。

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第三篇：革兰染色和血浆凝固酶实验

革兰染色和血浆凝固酶实验

实验目的：

掌握革兰染色法的原理以及实验步骤；理解血浆凝固酶试验的原理；掌握血浆凝固酶试验的操作方法以及结果判断。

试验仪器及试剂：

仪器：载玻片、特种铅笔、试管夹、酒精灯、打火机、接种环、染色盘、显微镜

试剂：龙胆紫溶液、碘溶液、脱色液、沙黄溶液、生理盐水、蒸馏水、菌种、金黄色葡萄球菌培养物、EDTA抗凝兔血浆等

实验原理：

革兰染色：细菌的不同显色反应是由于细胞壁对乙醇的通透性和抗脱色能力的差异，主要是肽聚糖层厚度和结构决定的。经结晶紫染色的细胞用碘液处理后形成不溶性复合物，乙醇能使它溶解，所以染色的前二步结果是一样的，但在G+细胞中,乙醇还能使厚的肽聚糖层脱水，导致孔隙变小，由于结晶紫和碘的复合物分子太大，不能通过细胞壁，保持着紫色。在G-细胞中，乙醇处理不但破坏了胞壁外膜，还可能损伤肽聚糖层和细胞质膜，于是被乙醇溶解的结晶紫和碘的复合物从细胞中渗漏出来，当再用衬托的染色液复染时，显现红色。红色染料虽然也能进入已染成紫色的G+细胞，但被紫色盖没，红色显示不出来。

血浆凝固酶试验：致病的葡萄球菌可分泌游离型凝固酶到菌体外，游离型凝固酶能被血浆中的协同因子激活为凝酶样物质，将液态的纤维蛋白原转变为固态的纤维蛋白而使血浆凝固。

实验步骤：

革兰染色：1.标记：用特种铅笔在载玻片上画一个小圈，用来大致确定菌液滴的位置。

2.涂片：滴加一小滴无菌生理盐水与洁净载玻片上，用打火机点燃酒精灯灼烧接种环，待接种环冷却后在培养基中取细菌，然后将菌落或菌苔轻轻涂布散开（菌液标本可直接涂在载玻片上），涂片完成消毒接种环，熄灭酒精灯。

3.干燥：涂片后在室温下自然干燥，也可在酒精灯上略加温，使之迅速干燥，但勿靠近火焰（火焰上方15cm左右，可用手背试温，要求以玻片背面触及手背皮肤热而不烫为宜）

4.固定：用高温进行固定，即用夹子夹取载玻片一端，标本面朝上，在酒精的外焰快速来回移动3~4次，共约3~4秒，放置待冷却后染色

5.染色：（1）初染：龙胆紫溶液染色10

s

后用蒸馏水冲洗，沥去水分

（2）煤染：碘液染色10

s

后用蒸馏水冲洗，沥去水分

（3）脱色：脱色剂脱色10-20

s

后用蒸馏水冲洗，沥去水分

（4）复染与水洗：沙黄溶液染色10

s

后用蒸馏水冲洗，自然干燥后镜检

6.显微镜观察

血浆凝固酶试验：1.取一张载玻片做好标记，一侧滴加生理盐水作为对照，一侧滴加兔血浆

2.接种环灼烧消毒，待冷却后用接种环挑取金黄色葡萄球菌在生理盐水侧涂匀；接种环灼烧消毒，待接种环冷却后再跳去金黄色葡萄球菌在兔血浆侧涂匀，5-10秒内观察结果

实验结果：

实验分析：

革兰染色：1、涂片时动作要轻柔，使其薄而均匀，动作过大会改变细菌的排列形式

2、固定这一步骤能杀死细菌，固定细菌结构，保证菌体能牢固地黏附在载玻片上，以免水洗时被水冲掉，并且能改变菌体对染料的通透性。

3、龙胆紫是碱性染料可与细菌的DNA

结合使细菌呈紫色

4、媒染剂的作用使增强染料与细菌的亲和力更好地加强染料与细菌的结合5、脱色是革兰染色的关键步骤，目的是帮助染料从被染色的细菌中

脱色，利用细菌对染料脱色的难易程度不同而将细菌加以区分；革兰阳性细菌不易被脱色剂脱色，而革兰阴性菌则易被脱色

6、复染的目的是使脱色的细菌重新染上另一种颜色，以便与未脱色菌进行比较

7、革兰阳性菌经染色后呈紫色而革兰阴性菌呈红色，另外要注意，在实验中经常会出现假阳性和假阴性的结果，假阳性主要是由于脱色不完全，可能是由于涂片过厚,或者是结晶紫染色过度，导致脱色不完全。假阴性可能是因为细胞固定过度，造成细胞壁通透性的改变，而出现假阴性结果;另外,细胞培养时间太长,可能已经有部分细胞发生死亡或者自溶,也导致细胞壁通透性的改变而出现假阴性结果。

血浆凝固酶试验：1、血浆凝固酶是鉴定致病性葡萄球菌的重要指标。

2、运用玻片法血浆凝固酶试验可检测游离型凝固酶，使用EDTA抗凝兔血浆试验效果最佳。

3、血浆凝固酶试验结果的判断:出现明显的凝聚颗粒为阳性、无凝集颗粒为阴性。

第四篇：土壤中放线菌的分离和纯化实验

土壤中放线菌的分离和纯化实验

一、实验目的

1、制作MS培养基的方法，掌握母液的保存方法。

2、掌握培养基的灭菌方法。

掌握外植体的消毒和超净工作台的使用。

4、掌握放线菌的分离纯化及染色的基本流程；

5、掌握高氏一号培养基的配制方法；

6、复习分离纯化放线菌的基本操作技术、培养方学会使用高压蒸汽灭菌锅。

7、培养微生物实验的设计思路和动手能力。

二、实验材料

高压蒸汽锅、培养瓶、石斛的愈伤组织、超净工作台，酒精灯、酒精棉球、镊子、电子天平、称量纸、烧杯、量筒、显微镜、三角锥形瓶、无菌培养皿、接种环、酒精灯、分析天平；接种环、载玻片、盖玻片、玻璃珠、移液枪、剪刀

三、实验原理

植物组织培养即植物无菌培养技术，又称离体培养，是根据植物细胞具有全能性的理论，利用植物体离体的器官(如根、茎、叶、茎尖、花、果实等）、组织（如形成层、表皮、皮层、髓部细胞、胚乳等）

第 1 页 或细胞（如大孢子、小孢子、体细胞等）以及原生质体,在无菌和适宜的人工培养基及温度等人工条件下，能诱导出愈伤组织、不定芽、不定根，最后形成完整的植株的学科。

四、实验步骤

1、配制MS培养基8L，称取马铃薯1600g、香蕉400g、蔗糖240g、活性炭8半勺、琼脂80g、配制 母液。

2、配制培养液时应注意：

①在使用提前配制的母液时，应在量取各种母液之前，轻轻摇动盛放母液的瓶子，如果发现瓶中有沉淀、悬浮物或被微生物污染，应立即淘汰这种母液，重新进行配制；为防止母液被微生物污染，有机母液放在冰箱里4℃保存；

②用量筒或移液管量取培养基母液之前，必须用所量取的母液将量筒或移液管润洗2次；

③量取母液时，最好将各种母液按将要量取的顺序写在纸上，量取1种，划掉1种，以免出错。溶化琼脂 用粗天平分别称取琼脂9 g、蔗糖30 g，放入1 000 mL的搪瓷量杯中，再加入蒸馏水750 mL，用电炉加热，边加热边用玻璃棒搅拌，直到液体呈半透明状。然后再将配好的混合培养液加入到煮沸的琼脂中，最后加蒸馏水定容至1 000 mL，搅拌均匀。

需要注意的是，在加热琼脂，制备培养基的过程中，操作者千万不能离开，否则沸腾的琼脂外溢，就需要重新称量、制备。此外，如果没有搪瓷量杯，可用大烧杯代替。但要注意大烧杯底的外表面不能沾水，第 2 页 否则加热时烧杯容易炸裂，使溶液外溢，造成烫伤。调pH 用滴管吸取物质的量浓度为1 mol/L的NaOH溶液，逐滴滴入溶化的培养基中，边滴边搅拌，并随时用pH试纸测培养基的pH，一直调到培养基的pH为6（5.8~6.5）左右为止。培养基的分装 溶化的培养基应该趁热分装。分装时，先将培养基倒入烧杯中，然后将烧杯中的培养基倒入锥形瓶（50 mL或100 mL）中。注意不要让培养基沾到瓶口和瓶壁上。锥形瓶中培养基的量约为锥形瓶容量的1/5～1/4。每1 000 mL培养基，可分装25～30瓶。培养基分装完毕后，应及时封盖瓶口。用2块硫酸纸（每块大小约为9 cm×9 cm）中间夹1层薄牛皮纸封盖瓶口，并用线绳捆扎。最后在锥形瓶外壁贴上标签。

3、高压灭菌 培养基的高压灭菌包括以下几个步骤。

第一，码放锥形瓶。将装有培养基的锥形瓶直立于金属小筐中，再放入高压蒸气灭菌锅内。如果没有金属小筐，可以在两层锥形瓶之间放一块玻璃板隔开。

第二，放置其他需要灭菌的物品。将其他需要灭菌的物品也放入高压蒸气灭菌锅内，如装有蒸馏水的锥形瓶、带螺口盖的玻璃瓶、烧杯、广口瓶（以上物品都要用牛皮纸封口），用报纸包裹的培养皿、剪刀、解剖刀、镊子、滤纸、铅笔等。

第三，灭菌。待需要灭菌的物品码放完毕，盖上锅盖。在98 kPa、121 ℃下，灭菌20 min。灭菌后取出锥形瓶，让其中的培养基自然冷却凝固后再使用。

第 3 页 4,、再在操净工上进行消毒，先用紫外线照射30MIN，然后送风，关闭紫外灯，改 用日光灯，对手用酒精进行消毒，对培养基表面也要用酒精进行消毒。准备工作好了，就进行接种。并且要在酒精灯旁边进行操作，避免污染。镊子要在双孔灭菌器上进行灭菌。

4、接种完成后要整理工作台，并且把培养瓶拿到培养架上进行日光培养。

五、放线菌的提取步骤

5、（1）称取土样2.00g，在火焰旁加到一个盛有48ml无菌水并装有玻璃珠的100ml锥形瓶中。振荡20-30min，使样品的菌体、芽孢或孢子均匀分散。静止20-30s，标记为编号1。

6、（2）按照一定的梯度进行稀释（该实验采用10倍梯度）

①取3个各装有9.5ml无菌水的25ml锥形瓶，分别按照顺序标记好2、3、4.②在超净工作台上，用微量移液器从1号锥形瓶中移取0.5ml土壤悬液加到2号锥形瓶中，摇匀后，再用微量移液器从2号锥形瓶中移取0.5ml土壤悬液加到3号锥形瓶中，依此类推，7、分别将土壤悬液制成10-

1、10-

2、10-

3、10-

4、10-

5、10-

6、10-

7、10-

8、10-

9、10-10的土壤稀释液。

六、稀释涂布法分离土壤中放线菌

8、（1）倒平板

9、将配制好并且灭菌的高氏一号培养基加热融化，待冷却至55—60℃时，往高氏1号培养基中加入1ml的0.5%重铬酸钾, 然后分别倒平板。方法是在超净工作台，右手持盛培养基的三角烧瓶，置火焰旁

第 4 页 边，左手拿平皿并松动瓶塞，用手掌边缘和小指、无名指夹住拔出。令三角瓶瓶口在火焰上灭菌，左手将培养皿盖在火焰附近打开一缝，迅速倒入培养液约15ml，加盖后轻轻摇动培养皿，使培养基均匀分布，平置于桌面上，待冷凝后即成平板。共制备6个平板（一个稀释度做3个平行样品）。

10、（3）涂布平板

11、用1ml无菌吸管分别精确地吸取10-

4、10-

5、10-6的稀释菌液1ml，对号放入编好号的无菌培养皿中，每一浓度对应两个平板。用无菌涂布棒（从浓度小液开始）将加入平板培养基上的土壤稀释液在整个平板表面涂匀，涂完一个平板用酒精灯灭菌。

12、（4）倒置平板

13、将培养基平板倒置（防皿盖的冷凝水下滴），置于28度培养箱中培养3d14、15、5、放线菌的纯化

16、（1）倒平板

同上

17、（2）平板划线

18、将蘸有菌种的接种环在平板培养基上做以Z字行划线，每划完一次要充分燃烧接种环烧掉残余微生物，再从上一次划线处末点开始下一次划线。划线完毕后盖上培养皿盖，倒置与恒温箱中培养。

6、放线菌的观察玻璃纸法

19、将玻璃纸剪成培养皿大小，用旧报纸隔层叠好后灭菌。

第 5 页 20、将高氏一号琼脂培养基熔化后在火焰旁倒入无菌培养皿内，每皿倒15ml左右，待培养基凝固后，在无菌操作下用镊子将无菌玻璃纸履盖在琼脂平板上即制成玻璃纸琼脂平板培养基。

21、（3）用接种环挑取纯化后的放线菌，在玻璃纸上划线接种。

22、（4）将接种的玻璃纸琼脂平板置28—30℃下培养。

23、（5）在培养至3天，5天，7天时，从温室中取出平皿。在超净工作台上，打开培养皿，用无菌镊子将玻璃纸与培养基分离，用无菌剪刀取小片玻璃纸置于载玻片上用显微镜观察。

7、放线菌保藏

斜面低温保藏法

长后，棉塞部分用油纸包扎好，移至 2—8 ℃的冰箱中保藏，保存 2—4 个月，移种一次。

将纯化培养后的放线菌接种在适宜的固体斜面培养基上，待菌充分生

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第五篇：实验四：细菌的接种、培养和分离技术

实验四：细菌的接种、培养和分离技术

一、实验目的与要求：

（1）掌握从环境（土壤、水体、活性污泥等）中分离培养细菌的方法，从而获得若干种细菌纯培养技能

（2）掌握细菌纯种分离的方法：稀释平板分离法和平板划线法。

（3）掌握几种接种技术：斜面接种技术、穿刺接种、稀释平板涂布法等。

二、实验原理

在土壤、水、空气或人及动、植物体中，不同种类的微生物绝大多数都是混杂生活在一起，当我们希望获得某一种微生物时，就必须从混杂的微生物类群中分离它，以得到只含有这一种微生物的纯培养，这种获得纯培养的方法称为微生物的分离与纯化。

为了获得某种微生物的纯培养。一般是根据该微生物对营养、酸碱度、氧等条件要求不同，而供给它适宜的培养条件，或加入某种抑制剂造成只利于此菌生长，而抑制其他菌生长的环境，从而淘汰其他一些不需要的微生物，再用稀释涂布平板法或稀释混合平板法或平板划线分离法等分离、纯化该微生物，直至得到纯菌株。

三、实验器材

1、牛肉膏蛋白胨培养基

2、盛9ml无菌水的试管，盛90m1无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶，1ml和5ml无菌 吸管，无菌培养皿；

3、接种环，土样，酒精灯等。

四、操作步骤

1、倒平板 将加热融化的牛肉膏蛋白胨培养基倒平板，并标明培养基的名称。

2、贴标签 接种前在试管上贴上标签，注明菌名、接种日期、接种人姓名等。贴在距试管口径2-3厘米的位置。

3、点燃酒精灯。

4、接种

取接种环 右手拿接种环(如握钢笔一样)、在火焰上将环端烧红灭菌，然后将有可能伸入试管的其余部分，均用火烧过灭菌。

环冷却 将灼烧过的接种环伸入菌种管，先使环接触边壁，使其冷却。

取菌种 待环冷却后轻轻沾取经稀释10倍的土壤悬液-环，然后将接种环移出菌种管，注意不要使环的部分碰到管壁，取出后不可使环通过火焰。

接种 在火焰旁迅速将沾有菌种的接种环在平板上划线。划线的方法很多，但无论哪种方法划线，其目的都是通过划线将样品在平板上进行稀释，使形成单个菌落。常用的划线方法有下列二种：

⑴用接种环以无菌操作挑取土壤悬液一环，先在平板培养基的一边作第一次平行划线3-4条，再转动培养皿约70°角，并将接种环上剩余物烧掉，待冷却后通过第一次划线部分作第二次平行划线，再用同法通过第二次平行划线部分作第三次平行划线和通过第三次平行划线部分作第四次平行划线(图A)。划线完毕后，盖上皿盖，倒置于温室培养。

⑵将挑取有样品的接种环在平板培养基上作连续划线(图B)。划线完毕后，盖上皿盖，倒置温室培养。

环灭菌 将接种环烧红灭菌。

5、挑菌 将培养后长出的单个菌落分别挑取接种到上述三种培养基的斜面上，分别置25℃和28℃温室中培养，待菌苔长出后，检查菌苔是否单纯，也可用显微镜涂片染色检查是否是单一的微生物，若有其他杂菌混杂，就要再一次进行分离、纯化，直到获得纯培养。

四、注意事项

1、实验操作过程中无菌操作。