免疫组化常用方法介绍及个人经验总结

第一篇：免疫组化常用方法介绍及个人经验总结

免疫组化常用方法介绍及个人经验总结、定义

用标记的特异性抗体对组织切片或细胞标本中某些化学成分的分布和含量进行组织和细胞原位定性、定位或定量研究，这种技术称为免疫组织化学（immunohistochemistry）技术或免疫细胞化学（immunocytochemistry）技术。

2、原理

根据抗原抗体反应和化学显色原理，组织切片或细胞标本中的抗原先和一抗结合，再利用一抗与标记生物素、荧光素等的二抗进行反应，前者再用标记辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AKP）等的抗生物素（如链霉亲和素等）结合，最后通过呈色反应或荧光来显示细胞或组织中化学成分，在光学显微镜或荧光显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物，从而能够在细胞爬片或组织切片上原位确定某些化学成分的分布和含量。、分类

1）按标记物质的种类，如荧光染料、放射性同位素、酶（主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶）、铁蛋白、胶体金等，可分为免疫荧光法、放射免疫法、免疫酶标法和免疫金银法等。2）按染色步骤可分为直接法（又称一步法）和间接法（二步、三步或多步法）。与直接法相比，间接法的灵敏度提高了许多。

3）按结合方式可分为抗原-抗体结合，如过氧化物酶-抗过氧化物酶（PAP）法；亲和连接，如卵白素-生物素-过氧化物酶复合物（ABC）法、链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结（SP）法等，其中 SP 法是比较常用的方法；聚合物链接，如即用型二步法，此方法尤其适合于内源性生物素含量高的组织抗原检测。、目前几种常用免疫组化方法简单介绍 1）免疫荧光方法

是最早建立的免疫组织化学技术。它利用抗原抗体特异性结合的原理，先将已知抗体标上荧光素，以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原，在荧光显微镜下观察。当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后即会发出一定波长的荧光，从而可确定组织中某种抗原的定位，进而还可进行定量分析。由于免疫荧光技术特异性强、灵敏度高、快速简便，所以在临床病理诊断、检验中应用较广。

2）免疫酶标方法

免疫酶标方法是继免疫荧光后，于 60 年代发展起来的技术。基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，通过光镜或电镜，对细胞表面和细胞内的各种抗原成分进行定位研究。免疫酶标技术是目前最常用的技术。

本方法与免疫荧光技术相比的主要优点是：定位准确，对比度好，染色标本可长期保存，适合于光、电镜研究等。

免疫酶标方法的发展非常迅速，已经衍生出了多种标记方法，且随着方法的不断改进和创新，其特异性和灵敏度都在不断提高，使用也越来越方便。目前在病理诊断中广为使用的有 ABC 法、SP 三步法、即用型二步法检测系统等。

3）免疫胶体金技术

免疫胶体金技术是以胶体金这样一种特殊的金属颗粒作为标记物。胶体金是指金的水溶胶，它能迅速而稳定地吸附蛋白，对蛋白的生物学活性则没有明显的影响。因此，用胶体金标记一抗、二抗或其他能特异性结合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌 A 蛋白)等作为探针，就能对组织或细胞内的抗原进行定性、定位，甚至定量研究。由于胶体金有不同大小的颗粒，且胶体金的电子密度高，所以免疫胶体金技术特别适合于免疫电镜的单标记或多标记定位研究。由于胶体金本身呈淡至深红色，因此也适合进行光镜观察。如应用银加强的免疫金银法则更便于光镜观察。、被检测的物质

组织或细胞中凡是能作为抗原或半抗原，如蛋白质、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受体、酶、激素、核酸及病原体等都可用相应的特异性抗体进行检测。、特点

1）特异性强。免疫学的基本原理决定抗原与抗体之间的结合具有高度特异性，因此，免疫组化从理论上讲也是组织细胞中抗原的特定显示，如角蛋白（keratin）显示上皮成分，LCA 显示淋巴细胞成分。只有当组织细胞中存在交叉抗原时，才会出现交叉反应。

2）敏感性高。在应用免疫组化的起始阶段，由于技术上的限制，只有直接法、间接法等敏感性不高的技术，那时的抗体只能稀释几倍、几十倍；现在由于 ABC 法或 SP 三步法的出现，使抗体稀释上千倍、上万倍甚至上亿倍仍可在组织细胞中与抗原结合，这样高敏感性的抗体抗原反应，使免疫组化方法越来越方便地应用于常规病理诊断工作。

3）定位准确、形态与功能相结合。该技术通过抗原抗体反应及呈色反应，可在组织和细胞中进行抗原的准确定位，因而可同时对不同抗原在同一组织或细胞中进行定位观察，这样就可以进行形态与功能相结合的研究，对病理学领域开展深入研究是十分有意义的。、从蛋白水平检测角度，免疫组化技术与 Western blotting、ELISA 的异同

1）Western blotting：蛋白质免疫印迹，也是利用抗体抗原反应原理，结合化学发光等技术来检查组织或细胞样品内蛋白含量的检测方法。与免疫组化技术相比，定量可能更加准确；当然 Western blotting 也可定性和定位（通过提取膜蛋白或核蛋白、胞浆蛋白分别检测其中抗原含量，进而间接反映它们的定位），但敏感性远远低于免疫组化技术。

2）ELISA：酶联免疫吸附试验，也是利用抗体-抗原-抗原结合反应原理来检查体液或组织匀浆中蛋白含量的检测。与免疫组化技术相比，定量最准确，是分泌性蛋白检测首选方法之一。

8、免疫组化个人经验总结

1、方法操作不难，最大的难处是出现异常结果时如何解决？这就需要掌握免疫组化实验原理，每一步知道为什么这样做，这样你才敢大胆地改革先前的不对的方法步骤。如抗体孵育条件主要是抗体浓度、温度、时间，这三者一般是相互成反比的（相对），其中浓度是最重要的先决条件，温度决定反应的速度、时间决定反应的量。就拿温度来说，可以有 4 度、室温、37 度，我推荐4 度最佳，反应最温和，背景较浅；而 37 度反应速度较快，时间较短；室温我不太提倡，除非你每次都把环境温度控制在一定的范围，否则，尽量选择前两者。

2、免疫组化最大的优势是定位和定性。相比于其他蛋白检测方法，免疫组化具有定性灵敏度高、定位较直接准确，是定位检测分析首选方法。尤其对于有些因子的转位研究十分有用。

3、免疫组化结果定量分析的前提是高质量的染色切片。免疫组化结果也能定量分析，但必须是背景染色浅而特异性染色较深的情况下，分析最为准确，这种原则可能也是我们日常审稿时判定研究结果的必备条件。

4、免疫组化实验一定要设置阳性对照和阴性对照。阳性对照一般是用肯定表达这种抗原的切片来做；阴性对照一般是用 PBS 或非一抗替代一抗来进行反应，其余步骤均一致。前者是排除方法和实验系统有无问题；后者是排除有无一抗外的非特异性染色。

5、免疫组化的应用广泛，是当前实验研究的最重要方法之一。如今发 SCI 论文时，明显感觉仅靠量化的数据来发文章很难，加一些形态学数据或图片，老外十分欢迎，可能是怕你学术造假吧。当然也不能做假阳性或假阴性结果。

6、免疫组化技术掌握与否的鉴定标准是同一切片或不同切片中不同抗原均从摸索浓度或条件而做出优良的染色切片。

免疫组化技术掌握与否的鉴定标准是同一切片或不同切片中不同抗原均从摸索浓度或条件而做出优良的染色切片。我在平时带教中就发现许多研究生把我已经摸索很成熟的反应条件、浓度、方法步骤，重复运用于同一性质的切片和同一种抗体，做出来后就觉得自己已经掌握了免疫组化方法，更换一种抗体后，居然连二抗的种属来源都拿错了。失败往往促进你去思考试验原理和过程，成功有时也加快你自傲。

7、实验方法需要动手+ 动脑。如今我还不敢说我在免疫组化什么都知道。我只所以今天敢在这里说这说那，这是因为我经过了反复的动手+动脑，把理论原理运用于实践，在把实践中发现的问题带到理论知识中去解决，最终把理论与实践融会贯通。

第二篇：病理切片与免疫组化个人经验总结

免疫组织化学中对载波片和盖波片的处理

（一）载波片的清洁

进行免疫组化染色必须保证载波片的洁净否则常导致非特异性染色和组织脱片现象的出现而新的载波片常有油污等可能影响免疫组化染色的异物。因此必须对载波片进行清洁工作。常用的载波片清洁液是用重铬酸钾、浓硫酸和蒸馏水以不同比例混合配成不同强度的清洁液。

1． 常用清洁液的配制方法：

1．1重铬酸钾：浓硫酸：蒸馏水=1：1：10 重铬酸钾10g., 浓硫酸10ml, 蒸馏水100ml 1.2重铬酸钾：浓硫酸：蒸馏水=2：3：25 1.3重铬酸钾：浓硫酸：蒸馏水=2：5：25 2载波片的清洁方法

1。1先将载波片用清洁液浸泡12-24h 1．2流水冲洗后再用蒸馏水清洗3-5遍 1。3 95%的酒精中浸泡2h，用纱布擦干

1．4放入60℃烤箱中烤干或者自然晾干储存在玻片盒内备用

（二）载玻片的表面处理

在免疫组化试验中由于实验操作步骤的繁多常引起组织切片或者细胞涂片的脱落，影响检测效果，因此常需要用粘附济对切片进行处理。

1APES黏附剂APES是一种新型玻片黏附剂它的黏附剂机制是通过对玻璃表面的化学修饰改变玻璃表面的化学物理特性使组织切片活细胞成分牢固的贴附于玻璃表面不易脱落并可长期保存。是目前应用最多的组织黏附剂。

1．1APES工作液配制APES1ml丙酮50ml，混匀即可。

1．2切片处理方法1。1。1干警的切片放入盛有丙酮的染色缸中浸泡5min 1．1．2浸入APES工作液停留20-30s 1．1．3纯丙酮洗2次1。1。4放入烤箱37℃过夜1。1。5用干净玻片盒装好室温保存备用一般可存放半年以上

2多聚赖氨酸（poly-l-lycine.pll）多聚赖氨酸水溶液是一种良好的组织黏附剂使用浓度在0。005-0。01％但是由于价格较高在免疫组化中很少用。1．1多聚赖氨酸储备液的配制，将0.5g多聚赖氨酸充分溶于100 ml蒸馏水中，4℃或者-20℃保存备用（pll可反复水融）工作液可将pll原液稀释10-50倍使用 1。2切片的处理方法

1。1。1干净干燥切片浸入pll工作液，停留20-30s 1.1.3用干净玻片盒装好，室温保存备用一般可存放半年以上

（三）盖波片的处理

盖波片的处理方法如上,处理时间可适当缩短,清洁液浸泡2h即可（摘自常双锁主编医学常用实验技术精编）

石蜡切片微波修复抗原染色程序

1载玻片防脱片剂处理：可选择APES或poly-l-lycine。捞片后置烤箱58-60℃30-60分钟以上使切片紧密黏附 2． 切片常规脱蜡至水

3．30％H2O2+蒸馏水10份混合，室温5-10分钟以灭活内源性酶，蒸馏水洗3次 4．热修复抗原：将切片浸入0.01M购船酸盐缓冲液中（PH6。0），电路或微波炉加热之沸腾后断电间隔5-10分钟后，反复1-2次。冷却后PBS（PH7。2-7。6）洗1-2次。5滴加5％BSA封闭液室温20分钟，甩去多余液体不洗。6滴加适当稀释的抗（小鼠或兔IgG）.37℃1h左右或20℃时左右，也可4℃过夜，PBS（PH7。2-7。6）洗2分钟×3次。（一抗的稀释度孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说阳性染色强度不够时可提高一抗浓度和延长孵育时间背景过高时可降低一抗浓度和缩短孵育时间）

7．滴加生物素化山羊抗小鼠IgG（或兔、人IgG），20-37℃20分钟PBS（PH7。2-7。6）洗2分钟×3次。

8滴加试剂SABC,20-37℃20分钟.PBS（PH7。2-7。6）洗5分钟×4次.9.DAB显色：使用DAB显色试剂盒（AR1022）。取蒸馏水1ml加试剂盒中A,B,C试剂各1滴,混匀后加至切片,室温显色,镜下控制反应时间,一般在5-30分钟之间.也可自配显色剂显色。蒸馏水洗涤。

0．02M PBS（PH7。2-7。6）配法：

1000ml蒸馏水中加氯化钠8.5g,Na2HPO42.8g, Na2H2PO40.4g.如果用的是含水磷酸盐，应加上分子式中水的含量。

0．02M枸椽酸盐缓冲液：1000ml蒸馏水中加枸椽酸三钠（C6H5Na3O7·2H2O）3g, 枸椽酸（C6H8O7·H2O）0.4g 注意事项：

如果染色背景较高，在SABC反应之后，DAB显色之前，用加水0。01-0。02％TWEEN20的PBS（PH7。2-7。6）洗涤切片4次，单纯PBS洗2次，然后显色。

以上摘自武汉博士德生物工程有限工程公司所产的即用型SABC免疫组化染色试剂和使用说明书。

HE染色方法

1二甲苯I脱蜡10-15min 2二甲苯II脱蜡10-15min 3无水乙醇脱二甲苯1min×2次 4.95％乙醇 5.90％乙醇 6.85％乙醇 7自来水洗2min 8苏木苏染色1-5 min 9自来水洗1 min 10.0.5％-1％盐酸乙醇分化20S 11自来水洗1min 12稀氨水（1％）返蓝数秒，自来水或蒸馏水洗1 min 13尹红染色1-5 min 14自来水洗

15.85％乙醇脱水20S 16.90％乙醇30S 17.95％乙醇I 1 min 18.95％乙醇II 1 min 19.无水乙醇I 2min 20.无水乙醇II2min 21二甲苯I 2min 22二甲苯II2min 23二甲苯III2min 24中性树胶或加拿大树胶封固。结果：

细胞核呈蓝色，钙盐和各种微生物呈蓝染色或紫蓝色，细胞质，肌纤维，纤维结缔组织，红细胞和嗜尹红颗粒呈不同程度的红色。摘自梁晓俐主编病理学基础与实验技术

第三篇：免疫组化经验总结

免疫组化

关键词： 免疫 组织化学 细胞2012-03-30 14:41 来源：互联网 点击次数：14044 一，免疫组织化学简介

免疫组织化学又称免疫细胞化学，是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应炕原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来，借助显微镜(包括荧光显微镜、电子显微镜)的显像和放大作用，在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质(如蛋白质、多肽、酶、激素、病原体以及受体等)。

二，免疫组化技术的基本原理

免疫组化技术是一种综合定性、定位和定量；形态、机能和代谢密切结合为一体的研究和检测技术。在原位检测出病原的同时，还能观察到组织病变与该病原的关系，确认受染细胞类型，从而有助于了解疾病的发病机理和病理过程。

免疫酶组化技术是通过共价键将酶连接在抗体上，制成酶标抗体，再借酶对底物的特异催化作用，生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，于普通显微镜或电镜下进行细胞表面及细胞内各种抗原成分的定位，根据酶标记的部位可将其分为直接法（一步法）、间接法（二步法）、桥联法（多步法）等，用于标记的抗体可以是用免疫动物制备的多克隆抗体或特异性单克隆抗体，最好是特异性强的高效价的单克隆抗体。直接法是将酶直接标记在第一抗体上，间接法是将酶标记在第二抗体上，检测组织细胞内的特定抗原物质。目前通常选用免疫酶组化间接染色法。

三，免疫组化步骤

1，切片，烤片60℃，1h；

2，脱蜡及复水

二甲苯10min，100％乙醇5min，95％乙醇5min，90％乙醇5min，85％乙醇5min，80％乙醇5min，75％乙醇5min，60％乙醇5min，50％乙醇5min，30％乙醇5min，自来水1min，双氧水1min；

3，1份30％H2O2加10份蒸馏水，室温10min，蒸馏水洗3次，每次3min；

4，微波修复

将切片浸入0.01M枸橼酸缓冲液，微波中最大火力（98℃-100℃）加热至沸腾，冷却（约5-10min），反复两次；

5，将切片自然冷却至室温，PBS洗涤3次，每次5min；

6，封闭，5％BSA，室温20min，甩去多余液体；

7，滴加一抗，37℃，1h，或者4℃过夜；

8，PBS洗涤3次，每次3min；

9，滴加二抗，37℃，15-30min；

10，PBS洗涤3次，每次3min；

11，滴加SABC，37℃，30min；

12，PBS洗涤3次，每次5min；

13，1ml蒸馏水中分别滴加显色剂，混匀；

14，DAB显色剂配置好后，滴加于切片，室温，镜下检测反应时间（约5min）；

15，自来水冲洗干净，过蒸馏水；

16，苏木素复染2min，自来水冲洗；

17，脱水

30％乙醇3min，50％乙醇3min，70％乙醇3min，80％乙醇3min，90％乙醇3min，95％乙醇3min，100％乙醇3min，二甲苯20min；

18，树胶封片，镜检。

四，免疫组化常见问题分析

1，石蜡切片在染色过程中出现脱片现象

1）烤片时间不够，或温度不够，可以延长烤片时间和提高烤片温度；

2）用含有多聚赖氨酸的玻片，可以购买到或这自己做；

3）有些组织本身就容易掉片，如骨组织等，操作时冲PBS不要直接冲到组织上，冲到组织上方，让它流下冲洗组织；

4）用高温修复时，温度骤冷也可能引起。

2，边缘效应

1）组织边缘与玻片粘贴不牢，边缘组织松脱漂浮在液体中，每次清洗不易将组织下面试剂洗尽所致.解决办法：制备优质的胶片（APES或多聚赖氨酸），切出尽量薄的组织切片，不厚于4微米，组织的前期处理应规范，尽量避免选用坏死较多的组织；

2）切片上滴加的试剂未充分覆盖组织，边缘的试剂容易首先变干，浓度较中心组织高而致染色深。解决办法：试剂要充分覆盖组织，应超出组织边缘2mm。用组化笔画圈时，为了避免油剂的影响，画圈应距组织边缘3-4mm。

3，产生组织切片非特异性染色

1）抗体孵育时间过长、抗体浓度高易增加背景着色。这可通过缩短一抗/二抗孵育时间、稀释抗体来控制。这是最重要的一条；

2）一抗用多克隆抗体易出现非特异性着色，建议试用单克隆抗体看看；

3）内源性过氧化物酶和生物素在肝脏、肾脏等组织含量很高（含血细胞多的组织），需要通过延长灭活时间和增加灭活剂浓度来降低背景染色；

4）非特异性组分与抗体结合，这需要通过延长二抗来源的动物免疫血清封闭时间和适当增加浓度来加强封闭效果；

5）DAB孵育时间过长或浓度过高；

6）PBS冲洗不充分，残留抗体结果增强着色，在一抗、二抗或SP孵育之后的浸洗尤为重要；

7）标本染色过程中经常出现干片，这容易增强非特异性着色。

4，免疫组化染色呈阴性结果

1）抗体浓度和质量问题以及抗体来源选择错误；

2）抗原修复不全，对于甲醛固定的组织必须用充分抗原修复来打开抗原表位，以利于与抗体结合；建议微波修复用高火4次*6min试试。有人做过实验，这是最佳的时间和次数。若不行，还可高压修复；

3）组织切片本身这种抗原含量低；

4）血清封闭时间过长；

5）DAB孵育时间过短；

6）细胞通透不全，抗体未能充分进入胞内参与反应；

7）开始做免疫组化，我建议你一定要首先做个阳性对照片，排除抗体等外的方法问题。

5，背景

1，考虑一抗浓度高；

2，然后调整DAB孵育时间；

3，也要考虑血清封闭时间是否过短；

4，适当增加抗体孵育后的浸洗次数和延长浸洗时间等。

第四篇：个人经验总结

一学期很快地过去了，在各级领导和家长的支持下，幼儿各方面都取得了一定的成绩。为了将我的工作做得更好，特总结如下：

一、现状分析：

我班幼儿二十五人，其中男孩十二人，女孩有十三人，年龄在两岁半到三岁。其中十人是本期新插入的。本班大部分幼儿身体发育正常，他们喜欢问，求知欲强，对唱歌、跳舞有一定的兴趣，能用简单的语言表达愿望。经过一学期的学习，幼儿各方面进步很大。在本期以新《幼儿园教育指导纲要》和“三个代表”重要思想为指导，坚持“孩子第一”的原则，积极地将教育观念转变为教育行为，在一日保教各环节中认真落实《幼儿园教育指导纲要》；从而保证幼儿一日生活的愉快进行，促进孩子们全面发展。

二、政治思想方面：

本期在园领导组织下，观看学习了师德启示录和教师职业道德规范。在实际工作中把这种精神踏实奉献精神一直牢牢地记在心里，从而把孩子放在第一位，在工作中不分上下班，不计报酬，真正体现主人翁精神。

积极参加政治业务学习，做到认真做好笔记，会后写出自己的心得体会，不断提高自己的思想政治觉悟，不信、不传“法轮功”的歪理邪说，使自己的思想与党中央保持一致。

加强自身的文化修养，多读多看报刊杂志，努力提高自己的业务能力，用新的知识不断充实自己的头脑，尽快适应新形式的要求。

做到了团结同志，热爱集体，遵守幼儿园一切规章制度，保质保量的完成了本职工作。

工作中做到了服从领导安排，协调好本班教师的关系，共同配合，促进了幼儿全面发展。

三、业务工作内容

（1）教研工作

积极参加小班组的课题研究，仔细为新教师周碧上汇报课和教研课出力出策。认真听新教师的汇报课，并记录下来讨论，帮助了别人，也丰富了自己的已有经验。

认真完成教研组长交给的任务，主讲小班教师如何开展游戏。

（2）教学工作

细致耐心的做好个别幼儿工作。按照一日活动常规的要求，进行教养活动，着重教育幼儿爱护玩具，会收拾整理玩具，学会自己洗手，学会自己愉快进餐，愉快睡眠，自己上厕所等，培养幼儿养成良好的生活卫生习惯。促进了幼儿健康发展。根据季节变化，幼儿体质差异以及户外活动时活动量大小等及时给幼儿增减衣物，避免幼儿受热或着凉。开展符合本班实际的体育游戏，训练幼儿基本动作，锻炼幼儿身体动作的协调性，充分利用日光、空气、水等自然因素，对幼儿进行体格锻炼。培养幼儿活泼开朗的性格，增强了幼儿的自信心，敢于在陌生人面前展示自己，从而使自己的交往能力得到了提高。

环境创设：根据本班幼儿的实际特点和我班开展的亲子活动进行了环境的创设。比如：带孩子到公园进行户外亲子活动的照片以及六一庆祝活动的照片资料等。我们还布置了一些孩子喜欢的动物挂饰，以及节日彩带，气球等。

常规教育：托班幼儿自控力差，一日生活的自理能力还很差，因此，在常规教育中我们与幼儿家长保持了一定的联系，让自控能力差的孩子在家中也进行一定的常规教育，如：这学期新插入的幼儿，常有打人的情况，我们通过与家长共同教育，使孩子改掉了这一坏习惯。刘诺言、娄润秋和简靖逸开学时，爱抢别人的玩具，现在也有了很大的进步。

认真开展主题活动“家园共育”。结合《纲要》精神和我班幼儿的年龄特点，我班开展了主题活动“家园共育”，并制作了网络图，采取了家长助教，幼儿生日会，户外亲子活动，家园栏，每月一次家长开放日等多种形式，并随时记录幼儿的表现和张贴幼儿活动照片。让家长真正了解幼儿园，了解教师的工作，了解孩子的在园生活，更好地促进孩子的发展。

（三）保育工作。保育工作是幼儿园的永久之重，特别是我班幼儿年龄小，体制差，天气变化很容易生病，对此，我们几位老师非常重视保育工作。

记住家长的叮嘱，对每个幼儿的情况牢记在心，并落实。

对特殊幼儿细心照顾。如刘诺言,孙若馨等体质差的幼儿在游戏之后要及时隔背，冯唯恒小朋友有疝气，不能运动量太，如果肚痛就必须平着抱一会，婷婷小朋友上厕所时常常容易打湿裤脚，要时时注意，发现湿了立即换好„„.协助保健医生做好了卫生保健工作和预防工作，保证幼儿身体健康。为幼儿创设了丰富的物质环境，清洁卫生和生活环境。还为幼儿创设轻松愉快的精神环境，保证幼儿身心健康成长。

（四）家长工作

孩子年龄小，本期新生又多。家长工作是非常重要的。因此，从一开学，我们就向家长宣传先进的育儿经验，如：孩子入园的适应期，幼儿习惯养成，幼儿用药的正确性等。通过家园联系栏，家长借阅，电话联系，便条联系等多种形式，让家长了解幼儿在园的情况，也让我们了解了家长的想法，使教师我家长增进了理解和友谊。

通过开展家长会，家长开放日，“亲子”活动等，促进了家园之间的相互理解、支持。在教学活动、庆祝活动等都少不了家长的支持和理解，有的家长可以为孩子提供参观的场所；有的家长可以提供幼儿操作的材料„„不论是以哪种形式的帮助都是对幼儿教育的支持和理解

（五）安全工作 在一日保教活动中，我班教师始终以“安全第一”为原则。因为孩子有了安全才有健康发展。从晨间入园到离园，老师都要随时注意幼儿的安全，并检查幼儿活动场所的安全隐患。托班幼儿有流尿现象，我们也同样做到勤检查，勤换洗，像对待自己的孩子一样。

三、反思和今后改进方向

这一学期来，我的工作中还存在着很多不足，我班幼儿的常规还不够好，玩玩具时，不够爱惜，在收拾玩具和学具时，不能主动将其放回原处，并有随地乱扔的现象。同时，今后我要认真学习新的幼儿园指导《纲要》将纲要的精神落实到教育教学工作中。刻苦钻研新教材.加强理论学习，不断提高自己的理论水平。

第五篇：个人经验总结

个人经验总结

时间的脚步匆匆，在课改的春风下作为新课程实施的具体操作者，面对新课程赋予我们的更宽泛更具有弹性的选择空间。开展课程改革的目的在于让幼儿更快乐，健康的成长，以下是我在一个学期实践中的几点总结：

一、政治思想方面：

本人热爱祖国、热爱中国共产党。做为幼儿教师能时刻关注国际形式的变化，以三个代表的思想引领自我，爱岗敬业，遵守幼儿园的各种规章制度。能认真的参加政治学习，做好笔记，本学期主要学习了：十六届三中全会的精神；两会精神和《中国人民政治协商会议章程修正案》等内容。平时能严格的要求自己，以师德建设年的要求时刻提醒自己，认真的学习《中小学教师师德规范》，结合台江区优秀青年教师：郑婕老师的先进事迹鞭策自己的工作。时刻以“爱生敬业、诚实守信、服务家长、奉献社会”的口号严格要求自己。树立高度的责任心对待幼儿园中的新的教育形式，关注每一个幼儿和幼儿的每一个细节，以积极的情感态度和幼儿应对。积极参加团组织的活动，在活动中能积极发表自己的意见和建议，时时以一个优秀团员的标准要求自己。

二、业务工作方面

1、加强班级的管理工作，创设与幼儿互动的环境：

结合大班幼儿的特点构建一个安全、愉快、宽松的外部环境，让幼儿在教师，集体面前想表现、敢表现、喜欢表现并能得到教师与同伴的积极应对。在环境的创设上不再只是老师单方面的努力或者简单意义上幼儿的参与，而是让幼儿出主意、参与设计、参与材料收集、布置、参与环境的管理，体现幼儿的思维、幼儿的发现、幼儿的操作、幼儿的记录。物质环境上，让幼儿有丰富的操作材料进行动手探索，在实践的过程中对已有的经验进行整合并获得新经验。本学年主要创设了：数学区、特色角、科学区、语言区等。在数学区中投放更多的操作材料，并提供记录本，鼓励幼儿将自己发现的记录下来，培养记录的好习惯；科学区中投放：磁性、浮沉、轻重等方面的操作材料，让幼儿通过活动发现身边的秘密；在语言区重点提供拼音方面的内容，制作了有趣的拼音树，拼音小列车等，以游戏的形式巩固幼儿对拼音的认识；特色区的创设能时刻进行改动，根据幼儿最近绘画的状况，请幼儿自己发表怎样布置的意见，教师再和幼儿一起动手布置。结合安全教育创设安全墙饰，将幼儿的谈话、绘画内容和教师的壁画结合，设计更生动的墙饰，让环境更好的与幼儿互动。

最为班主任能做好班级财产的管理工作，按时领借材料，及时的归还保管室。随时根据主题和幼儿园要求调整班级环境和墙饰。本学期还能结合大班幼儿自尊心强的特点设计了名为“夺宝奇兵”的竞赛墙饰，改变以往单纯点红点点进行表扬的形式，采用幼儿自评，一月一总评的形式。新的形式不仅调动大班幼儿竞争的积极性，也使幼儿在每月的总评后有新的开始，让他们不会有一开始落后他人就泄气的想法，更加努力的表现自己争取进步。并将每月总评的结果和幼儿成长档案上及家园联系单上的星级宝宝评选挂钩，使幼儿更积极的参与到其中，取得更好的效果，使家长也投入到幼儿的进中。

2、教育教学方面

根据开放教育理念，及幼儿全面平衡发展的理论基础，以挖掘幼儿潜能为教育模式的基本框架，以幼儿的经验、能力、兴趣、需要为出发点，在课程统整化、教材生活化、教学活动化的理念指导下，用主题的形式，将各领域的学习关联起来，园内园外活动并重，使幼儿在生活中学习，在与环境中人、事、物产生交互作用中获取各种经验而成长。本学期主要开展了：一切都在变、有趣的桥、绿色家园、各式各样的服装、运动和我等活动。我能根据主题目标、幼儿的发展需求选择适合的活动，在开学初制订周计划并每周及时调整教学内容，严格按照周计划开展活动，完成教育教学任务。在活动中让孩子自主地学习，并对孩子的自主学习进行了研究和实践，努力探索孩子自主学习的所需要的条件和因素，总结教师在实践中，促进孩子自主学习所应具备的教育理念和教育策略，从而切切实实地促进孩子的自主学习能力的发展。小组教学和个别教育相结合，让教师和幼儿、幼儿与同伴之间有更多的交流和对话。和社区对话，利用社区的环境开展活动，在本学期中利用白马河公园开展了“我和小树交朋友”“学习雷锋好叔叔”的主题活动；在“绿色家园”的活动中，我能和孩子一起动手制作环保小标志，并一起张贴到社区的宣传栏中，获得较好的反响。

结合幼小衔接的特点开展数学和拼音的教育教学活动。采用一周一竞赛了解幼儿的学习情况；一周两教学是幼儿得到进步。对个别能力较弱的幼儿在平时的区角活动中进行个别辅导，并与个别家长进行交流，使每个孩子都得到进步。本学期我主要负责数学方面的教育教学，本班的孩子能熟练的掌握10以内数的加减法、区分左右、认识时钟、根据算式编应用题、以及10 以内数的连加连减。在学期末我们还开展了“我要上小学”的系列主题活动，在活动中让幼儿了解小学、了解小学生、了解小学生的学习情况；在平时的教育教学中模仿小学上课的形式，激发幼儿做一个优秀小学生的自豪感，样成良好的学习习惯。

注重幼儿品德教育，无论在教育活动或生活活动中，我都从细节做起，从一点一滴培养孩子的好习惯。在本学年中开展了“我是大班小朋友”“向雷峰叔叔学习”“从小爱劳动”等主题活动。同时还结合各种不同类型的活动对幼儿尽心爱父母，爱家乡的教育。结合安全教育活动和季节的变化对幼儿进行健康教育，还更加重视“关心他人”情感的培养，培养幼儿从小爱他人、关心他人、关心社会的良好情感。

3、爱的承诺方面

（1）平时能作到热爱学生，衣着整洁得体，语言规范健康，举止文明礼貌，注重自身的语言和谈吐，以优美大方的形象带给幼儿美好的体验。轻声细语的和孩子交流。结合主题活动，采取讨论的方式，和孩子共同制定班级常规。督促、提醒幼儿按讨论过的常规活动，提高幼儿的自省能力，建立以幼儿为中心的自律班级常规。培养良好的倾听和举手回答问题的好习惯。

（2）及时的撰写每月爱的承诺，根据家长的意见提出新的希望和要求。

（3）认真制定幼儿成长档案、社区成长档案和个人成长档案，能每月按时的增添新开展的内容，及时拍照记录，给幼儿的成长、自身的成长留下痕迹。丰富幼儿成长档案的内容，改变以往单纯以幼儿绘画作品为主的形式，收集幼儿绘画、手工、数学、拼音、谈话、记录等多种活动痕迹，并结合幼儿每月一评分发“小红花”丰富幼儿成长档案内容。还能利用问卷调查、小表格等形式让家长也参与到幼儿档案的制作中。在社区成长档案中制作班级主页，除了能介绍最近开展的活动外，还能根据家长的疑难给予解答，根据季节和实际情况的需要增添家教文章，如《幼儿心理健康的调查》《幼儿入小学注意》等；还能请个别家长撰写家教文章，向其余家长介绍自己的家教经验。认真的对待教师个人成长档案，每月及时反思，增添自己的学习心得和体会，制作个人主页，使成长档案更丰富。

（4）注意培养幼儿良好的生活习惯，如正确的睡姿、坐姿、站姿等，引导幼儿学会解决同伴间的小纠纷。教幼儿了解自我保护的常识和行为，如用眼卫生和换牙的注意事项等。根据天气的变化，提醒幼儿及时的穿脱衣物，多饮水。对个别体弱的孩子格外关心。

4、特色教学方面

认真的开展特色教育，在开学初制定好教学进度，画好所有范图，每周五按时开展活动。在活动中更加重视用笔和用墨的讲解和示范，使每个孩子都能较好的发展。注意个别幼儿的指导，纠正其不正确的用笔姿势。注意对幼儿作品的讲评，请幼儿自己观察发现优秀的作品，对有进步的孩子及时的表扬。将每次的幼儿作品进行展示，并请家长提出自己的意见和建议，及时的修改我们的教学。在期末布置幼儿特色展示区，将幼儿一学期以来的作品分别展示，让家长纵向比较了解孩子的进步。在期末撰写特色教育心得《教水墨画有感》。制作特色教育袋，整理特色教育的教材、范图、文章等内容，为今后开展活动做好准备。

5、其他方面

（1）能认真的开展年段长工作，带领年段教师开展教研和教育教学工作。在每次的教研活动中带头发表意见，总结年段教师的意见并进行交流。本学期与年段教师配合开展了年段班级家长会、家长开放日、六一海报的设计、六一游园活动、安全教育活动、毕业典礼等活动。

（2）本学期继续担任林张艳老师的指导教师，本学期主要对艺术教育教学方面的进行指导帮助。本学期在业务园长的带领下，开示范课：《歌曲——勤快人和懒惰人》、《绘画——我喜欢的桥》《绘画——海底的故事》，效果良好。年轻教师林张艳的汇报课也有很大的进步。

（3）本学期能认真对待幼儿园里的各项任务，在教师技能技巧比赛中获演讲二等奖、绘画三等奖、歌唱欢乐奖的好成绩。指导幼儿郑婧仪获市科协科幻画比赛一等奖，薛鑫仪获二等奖。薛鑫怡、张钰、詹妍、吴心悦、周仲卿分获幼儿园“爱妈妈”绘画比赛一二三等奖；薛鑫怡、林君艺、谢轩武获幼儿园“元宵花灯制作比赛”一二三等奖。

（4）本学期还能根据幼儿的发展选择科研的课题，从幼儿和教师的互动关系入手进行调查研究，撰写了论文《教师在教育过程中与幼儿互动关系的研究》。

三、做好家长工作——家园合作、同向同步

1、利用家园联系单向家长介绍幼儿每月的情况，及时的了解幼儿在家在园的情况，家园同步的开展教育教学工作。

2、本学期我们能认真的制作幼儿成长档案和社区成长档案，家长一起参与到制作的过程中，让他们更深刻的体验幼儿园教育的特殊性和趣味性，更家了解自己的孩子的发展状况。

3、通过及时更换家教之窗的家教知识，向家长宣传科学的育儿知识。本学期还承担了园社区宣传栏5月份设计工作，能根据幼儿园的动向和家长的需要制作有效的宣传栏，为家长提供帮助，得到家长的好评。

4、按时召开班级家长会和家委会，做好记录，能根据家长的意见和建议调整具体工作。在家委会的支持下开展好各种家长开放活动，如：家长开放日、六一游园活动等。

总之在这一年里我的工作取得了一定的成绩，但仍然存在许多的不足，如性格比较急，个别的家长也对我提出了意见和建议，在今后的工作中我会在反思中不断的改进自己提高自己。

胡天慧

2013年7月6日