第一篇：微生物检验样品采集应注意的问题
微生物检验样品采集应注意的问题
样品的采集是微生物检验的重要组成部分，用于检验的样品数量和状况具有重要意义。这对取样人员和制样人员提出了很高的专业要求，既要保证样品的代表性和一致性，又要保证整个微生物检验过程在无菌操作的条件下进行。微生物检验样品的采集大致分为取样、包装密封、标志、样品的运输、接收、保存几个环节。1 取样
取样是指在一定质量或数量的产品中，取一个或多个代表性样品，用于感官、微生物和理化检验的全过程。首先在取样之前应确认货、证是否相符。其次取样工具要达到无菌的要求，对取样 具和一些试剂材料应提前准备、灭菌。如果使用不合适的采集工具，可能会破坏样品的完整性，甚至使样品采集毫无意义。应根据不同的样品特征和取样环境，对取样物品和试剂进行事先准备和灭菌等T作。另外要保证样品能够代表整批产品，其检测结果应具有统计学有效性，样品到达实验室时的状况应能反映出取样时产品的真实情况。取样时应根据不同的产品类型、产品状态等选择不同的取样方法和标准。
① 包装食品 对于直接食用的小包装食品，尽可能取原包装，直到检验前不要开封，以防污染。对于桶装或大容器包装的液体食品，取样前应摇动或用灭菌棒搅拌液体，尽量使其达到均质；取样时应先将取样用具浸入液体内略加漂洗，然后再取所需量的样品，装入灭菌容器的量不应超过其容量的3/4，以便于检验前将样品摇匀；取完样品后，应用消毒的温度计插入液体内测量食品的温度，并作记录。尽可能不用水银温度计测量，以防温度计破碎后水银污染食品；如为非冷藏易腐食品，应迅速将所取样品冷却至0～4℃。对于大块的桶装或大容器包装的冷冻食品，应从几个不同部位用灭菌工具取样，使样品具有充分的代表性；在将样品送达实验室前，要始终保持样品处于冷冻状态样品一旦融化，不可使其再冻，保持冷却即可。
② 生产过程中的取样 划分检验批次，应注意同批产品质量的均一性；如用固定在贮液桶或流水作业线上的取样龙头取样时，应事先将龙头消毒；当用自动取样器取不需要冷却的粉状或同定食品时，必须履行相应的管理办法，保证产品的代表性不被人为地破坏。
③ 液体产品 通常情况下，液态产品较容易获得代表性样品。液态产品一般盛放在大罐中，取样时，可连续或间歇搅拌，对于较小的容器，可在取样前将液体上下颠倒，使其完全混匀。较大的样品(100～500m1)要放在已灭菌的容器中送往实验室，实验室在取样检测之前应将液体再彻底混匀一次。
④ 固体样品 固态样品常用的取样工具有灭菌的解剖刀、勺子、软木钻、锯子和钳子等。面粉或奶粉等易于混匀的食品，其成品质量均匀、稳定，可以抽取小样品检测(如100 g)。但散装样品就必须从多个点取样，且每个样品都要单独处理，在检测前彻底混匀，并从中取一份样品进行检测。肉类、鱼类的食品既要在表皮取样叉要在深层取样。深层取样时要小心不要被表面污染。有些食品，如鲜肉或熟肉可用灭菌的解剖刀或钳子取样；冷冻食品可在未解冻的状态下可用锯子、木钻或电钻(一般斜角钻人)等获取深层取样样品；全蛋粉等粉末状样品取样时，可用灭菌的取样器斜角插入箱底，样品填满取样器后提出箱外，再用灭菌小勺从上、中、下部位取样。
⑤ 表面取样 通过惰性载体可以将表面样品上的微生物转移到合适的培养基中进行微生物检验，这种惰性载体既不能引起微生物死亡，也不应使其增殖。这样的载体包括清水、拭子、胶带等。取样后，要使微生物长期保存在载体上，既不死亡又不增殖十分困难，所以应尽早地将微生物转接到适当的培养基中。转移前耽误的时间越长，品质评价的可靠性就越差。表面取样技术只能直接转移菌体，不能做系列稀释，只有在菌体数量较多时才适用。其最大优点是检测时不破坏样品。
⑥ 空气样品的采取 空气的取样方法有直接沉降法和过滤法。在检验空气中细菌含量的各种沉降法中，平皿法是最早的方法之一，到目前为止，这种方法在判断空气中浮游微生物分次自沉现象方面仍具有一定的意义。过滤法是使定量的空气通过吸收剂，然后将吸收剂培养，计算出菌落数。2 包装密封
为保证样品的完整性，装有样品的包装物应进行封口，以证实其可靠性，即从取样地点至实验室这段时间不发生任何变化。可采用自粘胶、特制的纸黏着剂或者石蜡等封口，封口处应留填写日期、检验人员和货主签字的地方，然后盖上专用的印章。3 样品的标志
取样过程中应对所取样品进行及时、准确的标记。取样结束后，应由取样人写出完整的取样报告。样品应尽可能在原有状态下迅速运送或发送到实验室。保存的样品应进行必要的清晰的标记，内容包括：样品名称，样品描述，样品批号，企业名称，地址，取样人，取样时间，取样地点，取样温度(必要时)，测试目的等。标记应牢固并具防水性，确保字迹不会被擦掉或脱色。所有盛样容器必须有和样品一致的标记。在标记上应记明产品标志与号码和样品顺序号以及其他需要说明的情况。标记应牢固并具防水性，确保字迹不会被擦掉或脱色。当样品需要托运或由非专职取样人员运送时，必须封死样品容器。4 样品的运输
取样结束后应尽快将样品送往实验室检验。如不能及时运送，冷冻样品应存放在-15℃以下的冰箱或冷库内；冷藏和易腐食品存放在0～4℃ 冰箱或冷藏库内；其他食品可放在常温暗处。微生物检验样品应在取样后6 h以内送达实验室进行检验。样品的运输过程必须有适当的保护措施(如密封、冷藏等)，以保证样品的微生物指标不发生变化。运送冷冻和易腐样品应在包装容器内加适量的冷却剂或冷冻剂，但样品不可与冷却剂或冷冻剂直接接触，保证途中样品不升温或不融化，必要时可于途中补加冷却剂或冷冻剂。运送水样时应避免玻璃瓶摇动，水样溢出后又回流瓶内，从而增加污染。如不能由专人携带送样时，也可托运。托运前必须将样品包装好，应能防破损，防冻结或防易腐和冷冻样品升温或融化。在包装上应注明“防碎”、“易腐”、“冷藏”等字样。同时做好样品运送记录，写明运送条件、日期、到达地点及其他需要说明的情况，并由运送人签字。5 样品的接收 在接收样品时，实验室应与送样人共同相互确认样品与委托单上的内容是否一致。确认内容一般包括：品名；检验目的；检验项目；形状和包装状况(同体、粉状、冷冻、冷藏、零售、批发、无菌包装等都不同)；抽样数量(个数和质量)；抽样日期及送达日期；抽样地点；随货样附带的许可申请单编号；生产国或者生产厂家名称(进口商品)；抽样者的单位、姓名及有无封印；其他搬运、储存、检验时的注意事项。6 样品的保存
实验室接到样品后应在36 h内进行检测(贝类样品通常要在6 h内检测)，对不能立即进行检测的样品，要采取适当的方式保存，使样品在检测之前维持取样时的状态，即样品的检测结果能够代表整个产品。实验室应有足够和适当的样品保存设施(如冰箱或冰柜等)。保存的样品应进行必要和清晰的标记，内容包括：样品名称，样品描述，样品批号，企业名称、地址，取样人，取样时间，取样地点，取样温度(必要时)，测试目的等；样品在保存过程中应保持密封性，防止引起样品pH值的变化。不同类型的样品，保存方法不同：
① 易腐样品：要用保温箱或采取必要的措施使样品处于低温状态(0～4℃)，应在取样后尽快送至实验室，并保证样品送至实验室时不变质。易腐的非冷冻食品检测前不应冷冻保存(除非不能及时检测)。如需要短时间保存，应在0～～4℃ 冷藏保存，但应尽快检验(一般不应超过36h)，因为保存时间过长会造成样品中嗜冷细菌的生长和嗜中温细菌的死亡。
② 冷冻样品：要用保温箱或采取必要的措施使样品处于冷冻状态，送至实验室前样品不能融解、变质。冰冻样品要密闭后置于冷冻冰箱(通常为-l8℃)，检测前要始终保持冷冻状态，防止样品暴露在二氧化碳气体中。
③ 其他样品：应用塑料袋或类似的材料密封保存，注意不能使其吸潮或水分散失，并要保证从取样到实验室进行检验的过程中其品质不变。必要时可使用冷藏设备
第二篇：食品微生物检验教案第三章食品检验样品的采集和处理
第三章 食品检验样品的采集和处理
一、样品的采集与处理
食品检验样品采集的原则：
1、所采样品应具有代表性
每批食品应随机抽取一定数量的样品，再生产过程中，再不同时间内各取少量样品予以混合。固体或半固体的食品应从表层、中层和底层、中间和四周等不同部位取样。
2、采样必须符合无菌操作的要求，防止一切外来污染 一件用具只能用于一个样品，防止交叉污染。
3、再保存和运送过程中应保证样品中微生物的状态不发生变化
采集的非冷冻食品一般在0—5度冷藏，不能冷藏的食品立即检验。一般在36h内进行检验。
4、采样标签应完整、清楚
每件样品的标签须标记清楚，尽可能提供详尽的资料。
在食品的检验中，所采集的样品必须具有代表性，即所取样品能够代表食物的所有部分。如果采集的样品没有代表性，即使一系列检验工作非常精密、准确，其结果也毫无价值，甚至会出现错误的结论。食品因加工的批号、原料情况（来源、种类、地区、季节等）加工方法、保藏条件、运输、销售中的各环节及销售人员的责任心和卫生认识水平等无不影响着食品的卫生质量，因此要根据一小份样品的检验结果去说明一大批食品的质量或一起食物中毒的性质，就必须周密考虑，设计出一种科学的取样和样品制备方法。而采用什么样的取样方案主要取决于检验的目的，目的不同，取样的方案也不同。检验的目的可以是判定一批食品合格与否，也可以是查找食物中毒病原微生物，还可以是鉴定畜禽产品是否有人畜共患的病原体。目前国内外使用的取样方案多种多样，如一批产品按百分比抽样，才若干个样后混合在一起检验；按食品的危害程度不同抽样等。不管采取何种方案，对抽样代表性的要求是一致的。最好对整批产品的单位包装进行编号，实行随机抽样。
（一）样品的种类
样品可分为大样、中样、小样三种。大样指一整批；中样是从样品各部分取的混合样，一般为200g；小样又称为检样，一般以25g为准，用于检验分析。
（二）样品的采集
采样必须在无菌操作下进行。
采样的工具，如探子、铲子、匙、采样器、试管、广口瓶、剪子和开罐器等，必须是无
菌的。
根据样品种类，如袋、瓶和罐装者，应取完整的未开封的；如果样品很大，则需用无菌采样器取样；检样是冷冻食品，应保持在冷冻状态（可放在冰内、冰箱的冰盒内或低温冰箱内保存），非冷冻食品需在0~5℃中保存。
1、液体食品的采样
将样品充分混匀，用无菌操作开启包装，用100mL无菌注射器抽取，注入无菌盛样容器。
2、半固体食品的采样
用无菌操作拆开样品包装，用无菌勺子从几个部位挖取样品，注入无菌盛样容器。
3、固体样品的采样
大块整体食品应用无菌刀具和镊子从不同部位割取，割取时应兼顾表面与深度，注意样品的代表性；小块大包装食品应从不同部位的小块上切取样品，注入无菌盛样容器。样品是固体粉末，应边取边混合。
4、冷冻食品的采样
大包装小块冷冻食品的采样按小块个体采取；大块冷冻食品可以用无菌刀从不同部位削取样品或用无菌小手锯从冰块上锯取样品，也可以用无菌钻头钻取碎样品，注入无菌盛样容器。
固体样品和冷冻食品取样还应注意检验目的，若需检验食品污染情况，可取表层样品；若需检验其品质情况，应再取深部样品。
5、生产工序检测采样 ① 车间用水
自来水样从车间各水龙头上采取冷却水，汤料从车间容器不同部位用100mL无菌注射器抽取。
② 车间台面、用具及加工人员手的卫生检测
用板孔5cm的无菌采样板及5支无菌棉签擦拭25cm面积。若所采表面干燥，则用无菌稀释液湿润棉签后擦拭，若表面有水，则用干棉签擦拭，擦拭立即将棉签头用无菌剪刀剪入盛样容器。2
2③ 车间空气采样（直接沉降法）
将5个直径90mm的普通营养琼脂平板分别置于车间的四角和中部，打开平皿盖5min，然后盖上平皿盖送检。
６、食物中毒微生物检验的取样
当怀疑发生食物中毒时，应及时收集可以中毒源食品或餐具等，同时收集病人的呕吐物、粪便或血液等。
７、人畜共患病原微生物检验的取样
当怀疑某一动物产品可能带来人畜共患病病原体时，应结合畜禽传染病学的基础知识，采取病原体最集中、最易检出的组织或体液送检验室检验。
（三）采样的标签
采样前后应立即贴上标签，每件样品必须标记清楚（如编号、样品名称、生产单位、生产日期、产品批号、产品数量、存放条件、采样时间、采样人姓名、现场情况）。
（四）样品的送检要求
1、要快速运送，不要超过3小时。
2、若路途遥远，不需冷冻的样品可1~5℃低温下运送；如需保持冷冻状态在泡沫塑料隔热箱内。
3、要注意防污染、防散漏、防变质。
（五）样品的处理方法
1、液体样品的处理
液体样品，指粘度不超过牛乳的非粘性食品，可直接由灭菌吸管准确吸取25mL蒸馏水或生理盐水及有关检验的增菌液中，制成1︰10稀释液。吸取前要将样品充分混合，在开瓶、开盖等打开样品容器时，一定要注意表面消毒，无菌操作。用点燃的酒精棉球灼烧瓶口灭菌，用石炭酸或来苏尔消毒后的纱布盖好，再用灭菌开瓶器将盖启开。含有二氧化碳的样品可倒入灭菌的小瓶内，覆盖灭菌纱布，轻轻摇荡，待气体全部逸出后，再取样检验。
2、固体或粘性液体样品的处理
此类样品无法用吸管吸取，可用灭菌容器称取检样25g，加至预温45℃的灭菌生理盐水或蒸馏水225mL中，摇荡融化或使用振荡器振荡融化，尽快检验。从样品稀释到接种培养，一般不超过15min。
（１）固体食品的处理
固体食品的处理相对复杂，处理方法主要有以下几种： ①捣碎均质法：
将样品(≥100g)剪碎或搅拌混匀，从中取25g放入带225mL无菌稀释液的无菌均质杯中，以8000~10000r/min均质1~2min即可。
②剪碎振摇法：
将样品(≥100g)剪碎或搅拌混匀，从中取25g检样进一步剪碎，放入带225mL无菌稀释液和直径5mm左右玻璃珠的稀释瓶中，盖紧瓶盖，用力快速振摇50次，振幅不小于40cm。
③研磨法：
将样品(≥100g)剪碎或搅拌混匀，从中取25g检样放入无菌乳钵中充分研磨后，再放入带有225mL无菌稀释液的稀释瓶中，盖紧盖后，充分摇匀。
④整粒振摇法：
有完整自然保护膜的颗粒状样品（如蒜瓣、青豆等）可以直接称取25g整粒样品置于带有225mL无菌稀释液和适量玻璃珠的无菌稀释瓶中，盖紧瓶盖，用力快速振摇50次，振幅要大于40cm以上。
（２）冷冻样品
冷冻样品在检验前要进行解冻。一般在0~4 ℃下解冻，时间不能超过18h；也可在45 ℃下解冻，时间不能超过15min。样品解冻后，无菌操作称取检样25g，置于225mL无菌稀释液中，制备称均匀1︰10稀释液。
（３）粉状或颗粒状样品的处理
用灭菌勺或其他适用工具将样品搅拌均匀后，无菌操作称取检样25g，置于225mL灭菌生理盐水中，充分振摇混匀或使用振摇器混匀，制成1︰10稀释液。
二、各类食品微生物检样样品的采集与制备实例
（一）肉与肉制品样品的采集与制备
1、样品的采取（1）生肉及脏器检样
如是屠宰场后的畜肉,可于开腔后,用无菌刀采取两腿内侧肌肉各50g(或劈半后采取两侧背最长肌肉各50g);如是冷藏或销售的生肉,可用无菌刀取腿肉或其他部位的肌肉100g.检样采取后放入无菌容器内,立即送检;如条件不许可时,最好不超过3h.送检时应注意冷藏,不得加入任何防腐剂.检样送往化验室应立即检验或放置冰箱暂存.（2）禽类(包括家禽和野禽)鲜、冻家禽采取整只,放无菌容器内;带毛野禽可放清洁容器内,立即送检,以下处理要求同上述生肉.（3）各类熟肉制品
包括酱卤肉,肴肉,方圆腿,熟灌肠,熏烤肉,肉松,肉脯,肉干等,一般采取200g,熟禽采取整只,均放无菌容器内,立即送检,以下处理要求同上述生肉.(4)腊肠,香肚等生灌肠
采取整根,整只,小型的可采数根,数只,其总量不少于250g.2、检样的处理
（1）生肉及脏器检样的处理
先将检样进行表面消毒(在沸水内烫3s~5s,或灼烧消毒),再用无菌剪子剪取检样深层肌肉25g,放入无菌乳钵内用灭菌剪子剪碎后,加灭菌海砂或玻璃砂或玻璃砂研磨,磨碎后加入灭菌水225mL,混匀后即为1:10稀释液.（2）鲜,冻家禽检样的处理
先将检样进行表面消毒,用灭菌剪子或刀去皮后,剪取肌肉25g(一般可从胸部或腿部剪取),以下处理同生肉.带毛野禽去毛后,同家禽检样处理.（3）各类熟肉制品检样的处理 直接切取或称取25g,以下处理同生肉.（4）腊肠、香肠等生灌肠检样处理
先对生灌肠表面进行消毒,用灭菌剪子取内容物25g,以下处理同生肉.注:以上样品的采集和送检及检样的处理均以检验肉禽及其制品内的细菌含量从而判断其质量鲜度为目的.如须检验肉禽及其制品受外界环境污染的程度或检索其是否带有某种致病菌,应用棉拭采样法.3、棉拭采样法和检样处理
检验肉禽及其制品受污染的程度,一般可用板孔5cm2的金属制规板,压在受检物上,将来菌棉拭稍沾湿,在板孔5cm2的范围内揩抹多次,然后将板孔规板移压另一点,用另一棉拭揩抹,如此共移压揩抹10次,总面积50cm2,共用10只棉拭.每支棉拭在揩抹去完毕后应立即剪断或烧断后投入盛有50mL灭菌水的三角烧瓶或大试管中,立即送检.检验时先充分振摇吸取瓶,管中的液体,作为原液,再按要求作10倍递增稀释.检验致病菌,不必用规板,在可疑部位用棉拭揩抹即可.（二）乳与乳制品样品的采集与制备
1、样品的采取和送检（1）散装或大型包装的乳品
用灭菌刀,勺取样,在移采另一件样品前,刀,勺先清洗灭菌.采样时应注意部位等代表性.每件样品数量不少于200g,放入灭菌容器内及时送检.鲜乳一般不应超过3h,在气温较高或路途较远的情况下应进行冷藏,不得使用任何防腐剂.（2）小型包装的乳品
应采取整件包装,采样时应注意包装的完整.各种小型包装和乳与乳制品,每件样品量为:生奶1瓶或1包;消毒奶1瓶或1包;奶粉1瓶或1包(大包装者200g);奶油1块(113g);酸奶1瓶或1罐;炼乳1瓶或1罐;奶酪(干酪)1个.（3）成批产品
对成批产品进行质量鉴定时,其采样数理每批以千分之一计算,不足千件者抽取1件.2、检样的处理
（1）鲜奶,酸奶
以无菌操作去掉瓶口的纸罩纸盖,瓶口经火焰消毒后以无菌操作吸取25mL检样,放入装有225mL灭菌生理盐水的三角烧瓶内,振摇均匀(酸乳如有水分析出于表层,应先去除).（2）炼乳
将瓶或罐先用温水洗净表面,再用点燃酒精棉球消毒瓶或罐的上表面,然后用灭菌的开罐器打开罐(瓶),以无菌操作称取25g(mL)检样,放入装有225mL灭菌生理盐水的三角烧瓶内,振摇均匀.（3）奶油
以无菌操作打开包装,取适量检样置于灭菌三角烧瓶内,在450C水浴或温箱中加温,溶解后立即将烧瓶取出,用灭菌吸管吸取25mL奶油放入另一含225mL灭菌生理盐水或灭菌奶油稀释液的烧瓶内(瓶装稀释液应预置于450C水浴中保温,作10倍递增稀释时所用的稀释液亦同),振摇均匀,从检样融化到接种完毕的时间不应超过30min.注:奶油稀释液:格林氏液(配法:氯化钠9g,氯化钾0.12g,氯化钙0.24g,碳酸氢钠0.2g,蒸馏水1000mL)250mL,蒸馏水750mL,琼脂1g,加热溶解,分装每瓶225mL,1210C灭菌15min.（4）奶粉
罐装奶粉的开罐取样法同炼乳处理,袋装奶粉应用蘸有75%酒精的棉球涂擦消毒袋口,以无菌操作开封取样,称取检样25g,放入装有适量玻璃珠的灭菌三角烧瓶内,将225mL温热的灭菌生理盐水徐徐加入(先用少量生理盐水将奶粉调成糊状,再全部加入,以免奶粉结块),振摇使充分溶解和混匀.（5）奶酪
先用灭菌刀削去部分表面封蜡,用点燃的酒精棉球消毒表面,然后用灭菌刀切开奶酪,以无菌操作切取表层和深层检样各少许,置于灭菌乳钵内切碎,加入少量生理盐水研成糊状.(三)蛋与蛋制品样品的采集与制备
1、样品的采集(1)鲜蛋
用流水冲洗鲜蛋外壳，再用75%酒精棉球涂擦消毒后放入 灭菌袋内，加封做好标记后送检。
(2)全蛋粉，巴氏消毒全蛋粉，蛋黄粉，蛋白片
将包装铁箱上开口处用75%酒精棉球消毒，然后将盖开启，用灭菌的金属制双层旋转式套管采样器斜角插入箱底，使套管旋 转收取检样，再将采样器提出箱外，用灭菌小匙自上、中、下部 收取检样，装入灭菌广口瓶中，每个检样质量不少于100g，标 记后送检。
(3)冰全蛋、巴氏消毒;;全蛋、冰蛋黄、冰蛋白
先将包装铁听开口处用75%酒精棉球消毒，然后将盖开启，用灭菌电钻由顶到底斜角钻入，徐徐钻取检样。然后抽出电钻，从中取出检样200g装入灭菌广口瓶中，标明后送检。(4)对成批产品进行质量鉴定时的采样数量
蛋粉、巴氏消毒全蛋粉、蛋黄粉、蛋白片等产品以一日或一 班生产量为一批，检验沙门氏菌时，按每批总量5%抽样，但每 批最少不得少于3个检样。测定菌落总数和大肠菌群时，每批按 装罐过程前、中、后取样3次，每次取样50 g，每批合为一个检 样。
冰全蛋、巴氏消毒冰全蛋、冰蛋黄、冰蛋白等产品按每500 kg取样一件。菌落总数测定和大肠菌群测定时，在每批装罐过 程前、中、后取样3次，每次取样50 g合为一个检样。
2.检样的处理(1)鲜蛋外壳
用灭菌生理盐水浸湿的棉拭充分擦拭蛋壳，然后棉拭直接放 呻培养基内增菌培养，也可将整只鲜蛋放入灭菌小烧杯或平皿 中，按检样要求加入定量灭菌生理盐水或液体培养基，用灭菌桥i 拭将蛋壳表面充分擦洗后，以擦洗液作为检样检验。
(2)鲜蛋蛋液
将鲜蛋在流水下洗净，待干后再用酒精棉球消毒蛋壳，然/口 根据检验要求，打开蛋壳取出蛋白、蛋黄或全蛋液，放人带有玻 璃珠的灭菌瓶内，充分摇匀待检。
(3)全蛋粉、巴氏消毒全蛋粉、蛋白片、蛋黄粉
将检样放入带有玻璃珠的灭菌瓶内，按比率加入灭菌生理盐 水充分摇匀待检。(4)冰全蛋、巴氏消毒冰全蛋、冰蛋白、;;蛋黄
将装有冰蛋检样的瓶子浸泡于流动冷水中，待检样融化后取 出，放入带有玻璃珠的灭菌瓶中充分摇匀待检。
(5)各种蛋制品沙门氏菌增菌培养
以无菌操作称取检样，接种于亚晒酸盐煌绿或煌绿肉汤等增 菌培养基中(此培养基预先置于有适量玻璃珠的灭菌瓶内)，盖紧瓶盖，充分摇匀，然后放入(36士1)℃恒温箱中培养(20±2)h。
(6)接种以上各种蛋与蛋制品的数量及培养基的数量和成分
凡用亚础酸盐煌绿增菌培养时，各种蛋与蛋制品的检样接种数量都为30 g，培养基数量都为150 ml。
（四）水产食品样品的采集与制备
1、样品的采集
赴现场采取水产食品样品时，应按检验目的和水产品的种类 确定采样量。除个别大型鱼类和海兽只能割取其局部作为样品 外，一般都采取完整的个体，待检验时再按要求在一定部位采取 检样。在以判断质量鲜度为目的时，鱼类和体形较大的贝甲类虽 然应以个体为一件样品，单独采取，但当对一批水产品做质量判 断时，仍须采取多个个体做多件检验以反映全面质量。一般小型 鱼类和对虾、小蟹，因个体过小在检验时只能混合采取检样，在采样时须采数量更多的个体，一般可采500-10 00g;鱼糜制品(如灌肠、鱼丸等)和熟制品采取250 g，放灭菌容器内。
水产食品含水较多，体内酶的活力也较旺盛，易于变质。因 此在采好样品后应在8 h内送检，在送检过程中一般都应加冰保藏。
2、检样的处理(1)鱼类
鱼类采取检样的部位为背肌。先用流水将鱼体体表冲净，去 鳞，再用75%酒精的棉球擦净鱼背，待干后用灭菌刀在鱼背部 沿脊椎切开5 g，再沿直于脊椎的方向切开两端，两块背肌分 别向两侧翻开，然后用无菌剪子剪取25 g鱼肉，放入灭菌乳钵 内，用灭菌剪子剪碎，加灭菌海砂或玻璃砂研磨(有条件情况下 可用均质器)，检样磨碎后加入225 ml灭菌生理盐水，混匀成稀释液。
在剪取肉样时要仔细操作，勿触破及粘上鱼皮。如果是鱼康糜制品和熟制品则放乳钵内进一步捣碎后，再加生理盐水，混匀成稀释液。
(2)虾类
虾类采取检样的部位为腹节内的肌肉。将虾体在流水下冲 净，摘去头胸节，用灭菌剪子剪除腹节与头胸节连接处的肌肉，然后挤出腹节内的肌肉，取25 g放入灭菌乳钵内。以
后操作同鱼类检样处理。
(3)蟹类
蟹类采取检样的部位为胸部肌肉。将蟹体在流水下冲洗，剥去壳盖和腹脐，去除鳃条。再置流水下冲净。用75%酒精棉球擦拭前后外壁。置灭菌搪瓷盘上待干。然后用灭菌剪子剪开，成左右两片，用双手将一片蟹体的胸部肌肉挤出（用手指从足跟一端剪开的一端挤压），称取25g，置灭菌乳钵内。以后操作同鱼类检样处理处理
(4)贝壳类
贝壳类采样部位为贝壳内容物。先用流水刷洗贝壳，刷净后 放在铺有灭菌毛巾的清洁的搪瓷盘或工作台上，采样者将双手洗 净并用75%酒精棉球擦拭消毒后，用灭菌小饨刀从贝壳的张口 处缝隙中徐徐切人，撬开壳盖，再用灭菌镶子取出整个内容物，称取25 g置灭菌乳钵内，以下操作同鱼类检验处理。
上述检验处理的方法和检验部位均以检验水产品肌肉内细菌 含量从而判断其新鲜度为目的。如须检验水产食品是否污染某种 致病菌时，其检验部位应为胃肠消化道和鲸等呼吸器官:鱼类检 取肠管和鲸;虾类检取头胸节内的内脏和腹节外沿处的肠管;蟹 类检取胃和鲸条;贝类中的螺类检取腹足肌肉以下的部分，贝类中的双壳类检取覆盖在斧足肌肉外层的内脏和瓣鳃。
（五）软饮料、冷冻饮品样品的采集与制备
1、样品采集
(1)碳酸饮料、瓶(桶)装饮用水、果汁(浆)及果汁饮 料、含乳饮料、果味水、果子露、酸梅汤、固体饮料等采取样品时应采取原瓶(罐)、袋和盆装样品，散装者应用无菌操作采取 500ml，放入灭菌磨口瓶中。
(2)冰淇淋、冰棍采取样品时应采取原包装样品，散装者用无菌操作取样，放入灭菌磨口瓶中，再放入冷藏或隔热容器中。
(3)食用冰块取样应取冷冻冰块放入灭菌容器中。以上所有的样品采取后，应立即送检，最多不超过3 h
2、样品的采取数量
（1）碳酸饮料、果汁：采样时以四杯为一件，大包装者，一瓶或一桶为一件。（2）散装饮料：采取500ml。
（3）固体饮料：瓶装采取一瓶为一件，散装取500g。
（4）冰棍：如班产量为2万支以下者，一班为一批；班产量2万支以上者，以工作台
为一批。一批取3件，一件取3支。
（5）冰淇淋：以杯为1件，散装取200 g。（6）食用冰块：以500g为1件。
3、样品的处理(1)瓶(罐)装饮料
用点燃的酒精棉球灼烧瓶口灭菌，用石炭酸纱布盖好。塑料 瓶口可用75%酒精棉球擦拭灭菌，用灭菌开瓶器将盖启开，含有二氧化碳的饮料可倒入另一灭菌容器内，口勿盖紧，覆盖一灭菌纱布，轻轻摇荡。待气体全部逸出后，进行检验。
(2)冰棍
用灭菌银子除去包装纸，将冰棍部分放入灭菌磨口瓶内，木棒留在瓶外，盖上瓶盖，用力抽出木棒，或用灭菌剪子剪掉木棒，置45℃水浴30 min，溶化后立即进行检验。
(3)冰淇淋
放在灭菌容器内，待其溶化立即进行检验。
（六）调味品样品的采集与制备
调味品包括酱油、酱类和醋等，是以豆类、谷类为原料发酵 而成的食品，往往由于原料污染及加工制作、运输中不注意卫生 而污染上肠道细菌、球菌及需氧和厌氧芽子包杆菌。
1、样品的采取 1酱油和食醋
装瓶者采取原包装，散装样品可用灭菌吸管采取 2.酱类
用灭菌勺子采取，放入灭菌磨口瓶内送检。
2、检样的处理（1）瓶装样品
用点燃的酒精棉球烧灼瓶口灭菌，用石炭酸纱布盖好，再用 灭菌开瓶器启开后进行检验。
（2）酱类
用无菌操作称取25 g，放入灭菌容器内，加入灭菌蒸馏水 225 ml，制成混悬液。（3）食醋
用200~300g/L灭菌碳酸纳溶液调pH到中性。
（七）冷食菜、豆制品样品的采集与制备
冷食菜多为蔬菜和熟肉制品不经加热而直接食用的凉拌菜。该类食品由于原料、半成品、炊事员及炊事用具等消毒灭菌不彻 底，造成细菌的污染。豆制品是以大豆为原料制成的含有大量蛋白质的食品，该类食品大多由于加工后，通过盛器、运输及销售 等环节不注意卫生，沾染了存在于空气、土壤中的细菌。这两类 食品如不加强卫生管理，极易造成食物中毒及肠道疾病的传播。
1、样品的采取（1）冷食菜
采取时将样品混匀，采取后放入灭菌容器内。（2）豆制品
采取接触盛器边缘、底部及上面不同部位样品，放入灭菌容器内。
2、样品采取数量
冷食菜及豆制品均采样200g。
3、检样的处理
以无菌操作称取25 g检样，放入225 ml灭菌蒸馏水，制成混悬液。
（八）糖果、糕点果脯样品的采集与制备
糖果、糕点果脯等此类食品大多是由糖、牛奶、鸡蛋、水果等为原料而制成的甜食。部分食品有包装纸，污染机会较少，但由于包装纸、盒不清洁，或没有包装的食品放于不洁的容器内也可造成污染。带馅的糕点往往因加热不彻底，存放时间长头温度高，可使细菌大量繁殖造成食品变质。因此对这类食品进行微生物学检验还是很有必要的。
1、样品的采取
糕点、果脯可用灭菌镊子夹取不同部位样品，放入灭菌容器内;糖果采取原包装样品，采取后立即送检。
2、样品的处理（1）糕点
如为原包装，用灭菌银子夹下包装纸，采取外部及中心部位;如为带馅糕点，取外皮及内馅25 g;奶花糕点，采取奶花及 糕点部分各一半共25 g，加入225 ml灭菌生理盐水中，制成混悬液。
（2）果脯
果脯检样，采取不同部位称取25 g检样，加入灭菌生理盐 水225 ml，制成混悬液。（3）糖果
糖果检样，用灭菌银子夹取包装纸，称取数块共25 g，加入 预温至45 度灭菌生理盐水225 ml，待溶化后检验。
（九）酒类样品的采集与制备
酒类一般不进行微生物学检验，进行检验的主要是酒精度低的发酵酒。因酒精度低，不能抑制细菌生长。污染主要来自原料或加工过程中不注意卫生操作而沾染水、土壤及空气中的细菌，尤其散装生啤酒，因不加热往往生存大量细菌。
1、样品的采集
酒类样品，若是瓶装酒类应采取原包装样品2瓶，若是散装酒类应用灭菌容器采取500ml，放入灭菌磨口瓶中送检。
2、样品的处理（1）瓶装酒类
瓶装酒类用点燃的酒精棉球烧灼瓶口灭菌，用石炭酸纱布盖好，再用灭菌开瓶器将盖启开，含有二氧化碳的酒类可倒入另一灭菌容器内，口勿盖紧，覆盖一灭菌纱布，轻轻摇荡，待气体全部逸出后，进行检验。
2.散装酒类
散装酒类可直接吸取，进行检验。
（十）方便面(速食米粉)样品的采集与制备
随着生活水平的提高，生活节奏的加快，方便食品颇受人门 的欢迎，销售量越来越大。方便面(米粉)是最有代表性的方便 食品，方便面(米粉)是以小麦粉、莽麦粉、绿豆粉、米粉等为 主要原料，添加食盐或面质改良剂，加适量水调制、压延、成型、汽蒸后，经油炸或干燥处理，达到一定熟度的粮食制品。同 类食品还有即食粥、速煮米饭等。这类食品大部分均有包装，污染机会少，但往往由于包装纸、盒不清洁或没有包装的食品放于不清洁的容器内，造成污染。此外，也常在加工、存放、销售各 环节中污染了大量细菌和霉菌，而造成食品变质。这类食品不仅 会被非致病菌污染，有时还会感染到沙门氏菌、志贺氏菌、金黄 色葡萄球菌、溶血性链球菌和霉菌及其毒素。
1、样品的采集
袋装及碗装方便面(米粉)、即食粥、速煮米饭3袋(碗)为1件，简易包装的采取200g。2.样品的处理
(1)未配有调味料的方便面(米粉)、即食粥、速煮米饭用无菌操作开封取样，称取样品25 g，加入225 m灭菌生理盐水制成1:10匀质液。
(2)配有调味料的方便面(米粉)、即食粥、速煮米饭 用无菌操作开封取样，将面(粉)块、干饭粒和全部调料及 配料一起称重，按1: 1(kg/L)加入灭菌生理盐水，制成检样匀质液。然后再称取50 m匀质液力日至200m灭菌生理盐水中，成为1:10的稀释液
二、检验与报告
（一）检验
制备稀释好的检样，按不同的检验项目及时进行检验。食品微生物检验按国标检验方法规定。
主要检验项目： ①菌落总数的检验 ②大肠杆菌的检验
③致病菌的检验（包括肠道致病菌检验和致病性球菌检验等）
（二）报告
按检样项目完成各类检验后，检验人员应及时填写检验报告单，签名后送主管人员签字，加盖单位印章，以示生效，立即交食品卫生监督人员处理。
发出报告后样品的处理：
①阴性样品：在发出报告可及时处理；
②阳性样品：在发出报告以后3天才能处理样品； ③进口食品的阳性样品：要保存6个月才能处理。
小结：本章主要介绍了样品采集的原则、样品采集及处理的方法及检验程序。思考题：
1、食品检验样品采集的原则有哪些？
2、固体食品处理的处理方法有哪些？
第三篇：临床微生物检验标本的采集
临床微生物检验标本的采集及微生物检验报告的解读 一 临床微生物检验标本的采集
1.临床微生物检验的思路和原则
确保标本可靠（（分析前质量）保证检验质量
全面了解机体的正常菌群 快速准确提供信息
微生物学的定性、定量和定位分析 结合病情，与临床联系
2.微生物结果的影响因素
2.1针对性的检验申请、病人准备、标本的采集、标本的运输 标本的保存和处理（46~68.2%）； 标本检验（415%）； 结果审核和批准、危急值报告（18.547%）2.2正确采集、转运与保存微生物标本直接关系到致病微生物培养的正确性与阳性率，是从临床微生物检验获得正确结果的最关键一步。
2.3Garbage-In-Garbage-Out 不合格的标本-不正确的检验结果-错误的诊断-错误的治疗-卫生资源的浪费、病人费用增加、耐药菌株增加
2.4成功治疗感染症的重要前提: 正确的微生物学检验始自标本采取。否则工作人员水平再高也不可能得到正确的结果，临床医师、护士及检验人员都必须通晓其要领
3.标本采集前临床医师及护士要考虑的问题
3.1是否感染？细菌感染？真菌感染还是病毒、寄生虫感染？ 3.2何时采集样本？
3.3采集什么样的标本？怎样采集？样本是否足量？ 3.4采用哪种无菌容器或运送培养基采集标本？
3.5如何完善的填写标本申请单？针对某些特殊致病菌的排查要求应怎样写？（申请单信息越详尽，越有助于实验室出具符合临床情况的结果报告，如疑似诊断、准确的取材部位、甚至取样时用抗菌药物。）3.6关键需要特别重视的问题：标本采集是否规范 ；标本保存、运送是否规范 ？；无菌体液培养重视与否？
4.微生物检查的样本收集原则：
4.1收集样本时应使用严格的无菌技术，将污染情形降至最低。
4.2收集真正感染的病灶处之样本，且不受到邻近区域微生物的污染。
4.3采用无菌卫材收集样本，并置于已贴有病患标签之坚固且密和性佳的容器中，将容器置于适当的储存环境待送。
4.4在病患感染的急性期、使用抗生素或伤口局部治疗前收集标本，成人应需氧瓶、厌氧瓶同时培养，以提高阳性检出率和避免漏检。
4.5样本不可添加防腐剂，以免干扰病原菌分离。
4.6于送检申请单上提供足够的有关临床资料(如姓名、性别、年龄、病例号、临床诊断、标本来源、采集时间、检查项目、抗生素应用情况等)，以便实验室能够合理选择培养环境和培养基。4.7即刻将样本送检，不可拖延，标本采集后在室温下超过2h未送达实验室，可视为不合格标本。不能使用冷藏的样本检验。
4.8实验室只能接受和处理合格标本；对不合格标本退回必须说明原因，并应及时与临床联系。4.9厌氧菌样本采取必须隔绝空气，混入空气的样本影响检验结果，不能使用。
5.血液培养标本采集和处理：
5.１采血指征：
对入院危重感染患者应在未进行抗菌药物治疗之前，及时做血培养。一般患者出现以下一种体征时可作为行血培养的重要指征：
①发热（≥38℃）或低温（≥36℃）；②寒战；③白细胞增多（计数＞10.0×109/L，特别有“核左移”时）；④皮肤黏膜出血、昏迷、多器官衰竭，血压降低；⑤C反应蛋白升高及呼吸加快；⑥血液病患者出现粒细胞减少，血小板减少等，或同时具备上述几种体征时而临床可疑菌血症应采集血液培养。
新生儿可疑菌血症，应同时做尿液和脑脊液培养。5．2皮肤消毒程序：严格执行以下三步法。5.2.1 70%酒精擦拭静脉穿刺部位待30s以上。
5.2.2 1%~2%碘酊作用30s或10%碘伏60s，从穿刺点向外划拳消毒，至消毒区域直径达3cm以上。5.2.3 70%酒精脱碘：对碘过敏的患者，用70%酒精消毒60s，待酒精挥发干燥后采血。5.3培养瓶消毒程序：①70%酒精擦拭血培养瓶橡皮塞，作用60s；②用无菌纱布或无菌棉签清除橡皮塞子表面残余酒精。5.4静脉穿刺和培养瓶接种程序：
5.4.1在穿刺前或穿刺期间，为防止静脉滑动，可戴乳胶手套固定静脉，不可接触穿刺点； 5.4.2用注射器无菌穿刺取血后，勿换针头（如果行第二次穿刺，应换针头）直接注入血培养瓶，轻轻颠倒混匀防止血液凝固。立即送检，切勿冷藏。
5.5采血量：
成人采血量是8~10ml，儿童1~5ml。血液和肉汤之比为1:5~1:10。5.6血培养次数和采血时间：
◆根据研究，仅抽血培养1次分离率约占80%，培养2次的分离率约占90%，而培养3次的分离率约占99%。仅抽血培养1次，除了分离率低（其原因是菌血症常会暂时消失）外，且将很难评估病原菌是污染还是与感染有关。如果抽血培养2次或3次，则能够得到肯定。
◆采血培养应该尽量在使用抗菌药之前进行，24h内应采集2~3次做血培养（一次静脉采血注入到多个培养瓶中应视为单份血培养）。入院前两周内接受抗菌药物治疗的患者，连续3d，每天采集2份。对间歇性寒战或发热应在寒战或体温高峰到来之前0.5~1h采集血液，或于寒战或发热后1h进行。
5.7特殊的全身性和局部感染患者采血培养的建议：
◆可疑急性原发性菌血症、真菌菌血症、脑膜炎、骨髓炎、关节炎或肺炎，应在不同部位采集2~3份血标本。
◆不明原因发热，如隐性脓肿，伤寒热和波浪热，先采集2~3份标本，24~36h后估计体温升高之前（通常在下午）再采集2份以上。
◆可疑细菌性心内膜炎，在1~2h内采集3份血标本，如果24h后阴性，再采集3份以上的血标本。5.8标本运送：
采血后应该立即送检，如不能立即送检，需室温保存或置35℃~37℃孵箱中，切勿冷藏。
6尿液标本采集和处理：
6．1采样原则：标本需在应用抗菌药物之前或停用抗菌药物5天之后留取尿液标本；尿液在膀胱内应停留6～8 小时以上，使细菌有足够的时间繁殖。一般以清晨第一次的中段尿为宜。6.2采集方法：
6.2.1中段尿采集法：：成年男性和女性分别用肥皂水或1：1000 高锰酸钾水溶液清洗尿道口和外阴部，再用无菌生理盐水冲洗尿道口，然后排尿弃去前段尿液，收集中段尿5～10ml 盛于带盖的无菌容器内送检。
6.2.2导尿法：用导尿管导取10～15ml尿液，置灭菌容器中送检；长期留置导尿管者应更换新导尿管留尿；留置导尿时，用无菌消毒法消毒导尿管外部及导尿管口，用无菌注射器通过导尿管抽取尿液送检(不可采集尿液收集袋中的尿液送检)；
6.3送检：尿液收集后，盖上容器盖子立即送检，若无法及时送检，置于4℃冰箱中保存不可超过2小时。6.4注意事项：
◆收集尿液过程中，请勿将手伸入容器内，且尿液勿满出容器外，以免污染。而以无菌导管技术
收集尿液（特别是女性患者）的方法，已被认为不适合，因易引发尿道感染。◆如果同份标本中检出3种以上不同种微生物，可能由于采样本时受到污染所致。
7.痰及下呼吸道标本采集和处理：
7.1采集要点：所采集的痰标本，必须真正能代表肺部之分泌物者，通常清晨时痰液最多，且可能含较多病原菌。7.2采集步骤如下：
7.2.1以清水或牙刷清洁口腔及牙齿，不可用牙膏。
7.2.2指导病患从呼吸道深部咳出痰（不可含有唾液），装于无菌容器内。咳痰较困难者可用雾化蒸气吸入以利痰液咳出。幼儿可用手指轻扣胸骨柄上方以诱发咳痰。7.2.3气管下采集法：通常用于在给患者行纤维支气管镜时顺便抽取。7.2.4气管穿刺法：仅用于昏迷患者，由临床医师进行。
7.2.5痰标本应以脓样、干酪样或脓性粘液样性质的痰液为合格标本，痰量应为3~5ml。7.2.6无法及时送检的痰标本应置于4℃冰箱中保存待送。
7.2.7呼吸道标本采集方法：鼻咽拭子法，先用清水漱口，对光坐，头向上仰，口张大，用压舌板轻压舌根，用棉拭子在病人咽后壁，悬雍垂后侧涂抹数次．立即放入无菌试管中。
7.3痰TB菌涂片采集：痰涂片检查TB菌的初诊病人应送3份痰标本（夜间痰、清晨痰和即时痰）；如无夜间痰在留清晨痰后2~3小时再留一份痰标本，或送两份即时痰；治疗中或复诊随访病人按期每次送检两份痰（清晨痰和夜间痰）。
7.4痰标本采集说明：即时痰为病人就诊时咳出的痰液；清晨痰为清晨深咳出的痰液；夜间痰为就诊前一天晚睡前咳出的痰液。痰标本应以脓样、干酪样或脓性粘液样性质的痰液为合格标本，痰量为3~5毫升。
8.泌尿生殖道样本：
8.1阴道、子宫及前列腺等分泌物：由医生采集，收集于无菌试管内送检。淋病奈瑟菌检查时，不论男女尿道及子宫颈均需用拭子插入尿道及子宫颈3cm深取样送检，要避免阴道分泌物污染拭子。
8.2未成年人：若怀疑年幼女童有淋病性阴道炎时，则标本由阴道外围部位取得。
8.3男性：男性怀疑有急性淋病时，则由尿道取分泌物样本作抹片及培养，若怀疑有慢性淋病，样本可由医生采自前列腺或精囊。
8.4注意：从冰箱取出之携送培养基，须先放至室温约半小时，使其恢复室温，因淋病双球菌对温度相当敏感。
9.脑脊液样本：
9.1采集时间：怀疑脑膜炎时应立即采集脑脊液，最好是在应用抗生素之前采集脑脊液。9.2采集方法：腰穿法收取脑脊液3~5ml，盛于无菌试管中，应立即送检，同时注意保温，不可置于冰箱保存。
10.粪便与直肠拭子样本采集和处理：
10．1采集时间：
10.1.1腹泻患者于急性期，尽量在用药前采集粪便； 10．1.2伤寒患者于发病2w以后采集粪便； 10．1.3怀疑霍乱时立即采集粪便送检。10．2采集方法：
10．2.1自然排便法：取新鲜粪便的黏液、脓血、或絮状物等有意义成分，2～3g或1～2 m1，盛无菌容器内或置于保存液或增茵液内送检；若疑似霍乱者应置于碱性蛋白胨水中(pH8.6)。10．2.2直肠拭子法：难以获得粪便或排便困难患者及幼儿可采用此法，将拭子前端用无菌甘油或生理盐水湿润,然后插入肛门约4～5cm(幼儿2～3cm)，轻轻在直肠内旋转。擦取直肠表面粘液后取出，盛于无菌试管中或保存液中送检。
11眼、耳、鼻、咽拭子培养标本：
11.1采集眼分泌物：先用无菌生理盐水冲洗眼部,然后用棉拭于拭干，再用无菌棉拭于采集分泌物。
11．2采集咽分泌物：先用清水撤口．用压舌板将舌向下向外压，将咽拭子在咽后壁或悬雍垂后侧涂抹数次，切勿接触口腔和舌粘膜。
11．3采集耳、鼻或鼻咽分泌物：直接用拭子涂抹病灶部位,切勿接触周围粘膜或皮肤。11．4送检：标本采集过程中应注意避免粘膜上的正常菌群污染,标本采集后标明左、右眼（耳）或鼻咽部，连同拭子一起置无菌管内送检。
12.穿刺液样本：
12．1穿刺液培养标本：包括胸水、腹水、心包液、关节液、鞘膜液等。
12．2采集时间：一般在用抗生素等抗菌药物治疗之前，或在停止使用抗菌药物之后2～3d采集标本。
12．3采集方法：
12.3１无菌操作穿刺抽取标本或外科手术采集标本；
12．3.2标本采集量应>1ml(结核分支杆菌培养时应为l～5m1)； 12.3.3标本采集后注入无菌小瓶或无菌试管中立即送检；
12.3.4可在盛器中先加入灭菌肝素然后再加入穿刺液，以防止穿刺液凝固(0.5ml 肝素可抗凝5ml标本)。穿刺液包括胸水、腹水、心包液、关节液及鞘膜液。
13.脓汁及创伤感染分泌物标本的采集：
13．1采集要点：对采集标本部位应首先清除污垢，再以碘酒或酒精消毒，防止皮肤表面污染菌混入影响检验结果，盛放标本器皿应无菌。
13．2封闭性脓肿患者病灶局部的皮肤或粘膜表面：先用碘酒消毒，再用75%酒精脱碘，以无菌干燥注射器穿刺抽取，将采集的脓汁注入无菌试管中。
13．3开放性脓肿和脓汁分泌物：在患部附近的皮肤或粘膜用无菌纱布或棉布擦拭，供培养用的标本尽可能从深部流出，如为瘘管可在无菌操作下取组织碎片。
13．4大面积烧伤的创面分泌物：由于创面的部位不同，细菌种类也不同，故应用无菌棉拭子采取多创面的脓汁或分泌物，置于无菌试管送检。注意事项：烧伤12 小时内的创面及分泌物中细菌检出率较低。
14真菌感染培养标本采集：
14．1浅部真菌感染标本采集：
14.1.1皮肤：常规消毒皮肤，从皮肤癣菌皮损边缘刮取鳞屑，置无菌平皿内送检，皮肤溃疡则采集病损边缘脓汁或组织；
14.1.2指(趾)甲：消毒指(趾)指甲并去掉其表面部分，取可疑病变部分，用刀片修成小薄片5～6 片置无菌容器内送检；
14.1.3毛发：采集根部断折处，至少5～6 根送检。14.2深部真菌感染标本采集：
14.2.1血液：无菌采血8～10 m1，注入未用过抗生素的或可中和抗生素的血培养瓶中，立刻送检，如不能立刻送检时血培养瓶应放室温，但不可超过8~9h；
14.2.2脑脊液：采样量不少于3～5m1,分别注入两支无菌试管中送检(一管做真菌培养和墨汁染色一管测隐球菌抗原和其他培养)；
14．2.4呼吸道及泌尿生殖道：其深部真菌感染标本采集同一般菌培养标本。
15厌氧菌感染培养标本的采集：
15.1标本采集：
15.1.1标本不能被正常菌群污染,采集时尽量避免接触空气,立即送检,严格遵守无菌操作;15.1.2血液及其他体液(胸水、腹水、心包液、关节液、胆汁、脑脊液等)注入厌氧血培养,立即送检;15.1.3深部脓肿,在病灶部位开放前取材,可用针管抽取,针头用无菌胶塞密封,也可用血气采集针抽取,立即送检;
15.1.4抽出液体标本后,要尽快排除注射器内的空气。15.2标本运送：
152.1注意事项：标本采集后不得冰箱储存,必须尽快(半小时内)送实验室;15.2.2运送方法:a 注射器运送(标本抽取后尽快排除空气)或接种道专门的运送培养基中直接运送;b 含运送培养基的无氧小瓶运送;c 厌氧罐运送(组织块);d 大量液体标本运送时要装满标本瓶兵立即驱氧,加盖运送;e 一般不采用棉拭子法
二 微生物检验报告的解读
1细菌室药敏试验中常选用的抗生素种类
氨基糖甙类：阿米卡星、庆大霉素 1代头孢：头孢唑啉 2代头孢：头孢呋辛钠
3代头孢：头孢他啶、头孢噻肟、头孢吡肟（马斯平）单环 β-内酰胺类：氨曲南
广谱青霉素类：氨苄西林、青霉素G、苯唑西林 抗假单胞菌广谱青霉素：哌拉西林
复方β-内酰胺类：阿莫西林-克拉维酸（奥格门丁）氨苄西林-舒巴坦（优力新）哌拉西林-他唑巴坦（特治星）头孢哌酮-舒巴坦（舒普深）碳青霉烯类：亚胺培南、美罗培南 多肽类：多粘菌素E、替考拉宁 万古霉素 磺胺类：复方新诺明（甲氧苄唑-磺胺甲唑）林可霉素类：克林霉素 大环内脂类：红霉素 氯霉素：氯霉素
三代喹诺酮：环丙沙星、氧氟沙星 左旋氧氟沙星、莫西沙星 四环素类：四环素 利福平
2.耐甲氧西林葡萄球菌（MRS），CLS I规定，葡萄球菌如对苯唑西林（或甲氧西林）耐药：对青霉素类、头孢菌素类、碳青霉烯类和含酶抑制剂的复方制剂均应报告耐药，而不考虑体外药敏结果。
3.耐高浓度庆大霉素肠球菌
CLS I规定，肠球菌引起的全身性严重感染 常联合应用 β-内酰胺类和氨基糖肽类抗生素，如果肠球菌对高浓度庆大霉素耐药，则联合用药无效
三 与临床沟通中常见的问题
• 为什么微生物的报告时间这么慢？ • 为什么培养回报有细菌而病人情况良 ？ • 为什么送检的是脓痰却没有阳性结果 ？ • 培养阳性的细菌都需要用抗菌药物治疗吗？ • 选择药敏报告敏感的药物，为什么临床治病无效？
1.为什么微生物的报告时间这么慢
微生物的工作流程
细菌培养：接种标本，培养24~48小时
分离标本： 24~48 小时（需要时）
药敏： 18~24 小时 发结果： 阴性48小时
阳性？
真菌培养:因为生长缓慢，时间更长
2.涂片镜检结果与培养结果不吻合？
涂片镜检是报告所有检见的细菌，而培养的目的是检出致病菌。一些苛氧菌需在特殊的环境或培养基上才能生长。
3.尿培养结果报告“三种以上细菌混合生长”代表什么？
泌尿系统感染一般为一种细菌，有时可能有二种，但培养出三种或以上细菌说明标本污染，需要重新留取标本再做培养。
4.为什么培养回报有细菌而病人情况良好？
抗菌药物使用 或定植菌或污染菌
5.为什么送检的是脓痰却没有阳性结果？
5.1 是否送检前使用抗生素
5.2送检是否及时，痰涂片可能帮助判断 5.3 并不是感染性疾病，比如慢怚肺、老慢支 等 5.4实验室操作不规范
6.为什么化脓性感染病灶中取脓汁培养阳性低
脓液是由坏死的组织和吞噬了细菌而死亡的白细胞组成，都是无任何营养的物质，而细菌一般都需要在高营养的环境中才能生长，另白细胞释放的溶菌酶对细菌有杀灭作用，因此，在脓液活细菌较少。将脓液挤干净后在肉芽生长处取标本送检，如果化脓性病灶尚未破溃，要用注射器穿刺到一定深度（肉芽附近处）取标本送检。
7.明显稀便，培养结果为何正常 ？
大便普通培养，通常只能鉴定志贺菌、沙门菌感染，致病性大肠杆菌。怀疑霍乱时，需开霍乱弧菌培养。可能病毒感染(轮状病毒 轮状病毒)8培养阳性的细菌都需要用抗菌药物治疗吗？
8.1.培养阳性感染：可能为污染菌（血培养），可能为定植菌（痰），），任何结果必须结合临床情况进行评价－很重要
8.2.感染部位的清创，引流，换药比使用抗菌药物更重要
8.3.改善患者全身情况，器官功能支持，纠正酸碱电解质紊乱，低蛋白血症，高血糖等
9选择药敏报告敏感的药物为什么治疗无效？
9.1体外药敏试验只能预测体内治疗效果，并不完全等同 9.2.可能不是真正的致病菌（污染或定植）9.3.细菌本身因素（如诱导耐药，生物被膜）
CLSI中提示：部分细菌3天内即可发展为耐药，临床治病34天后，应重新分离细菌做药敏试验
9.5感染部位与药代动力学因素 给药剂量与用药方式 ：时间依赖性、浓度依赖性、抗生素后效应、特殊人群等因素。
9.6.感染原发灶 药敏试验仅报告细菌对药物的敏感性，但不同部位的感染，因根据药物浓度分布选择抗菌药物，药物剂型和生物利用度（纯品，商品）
10.是否能将所有的药都做药敏试验
10.1没有必要：通过耐药机制和标志性药物可以预测其他抗菌药物的敏感性，抗生素的等效性：是指用一种相关抗生素的试验结果预测同类抗生素体内抗菌活性。此特性允许检测少数几种抗生素而不影响临床对其他抗生素的广泛选择，试验的药物代表一类 药，而不是一种药。
如对肠杆菌头孢噻吩与其他一代头孢具有等效性，可用头孢噻吩结果预测其他一代头孢。10.2.没有可能：不是所用药物都可以做药敏试验（需要药物在体外稳定，需要有操作标 准和解释标准）有些细菌对某类抗生素天然耐药，则不需要做药敏试验 比如：嗜麦芽窄食单胞菌对碳青霉烯类天然耐药，治疗首选复方新诺明。
11.鉴定结果明明写着四联球菌、革兰氏阳性杆菌，为何没有药敏结果？
四联球菌为微球菌，一般不引起人体致病，为非致病菌，故考虑污染可能。药敏结果参照CLSI标准，目前革兰氏阳性菌没有参照标准，故暂不能做药敏试验，若需治疗可参照阳性球菌用药。
12.药敏试验报告中MIC越小的抗菌药物效果越好？
感染菌对同一种药物的MIC越小，效果越好，不同种抗菌药物之间 MIC无可比性，目前很多仪器报告的是检测折点，而不是真正的MIC 四 对临床的要求
临床医生应为实验室提供有用的临床信息，以便实验室有针对性地对可能的病原体进行鉴定。临床医生对药敏测定方法和微生物学知识有一定的了解，以更好地理解药敏试验报告中验报告中 S、I、R临床意义，以及体内、体外药敏不一致的现象。增强特殊标本的微生物送检的意识，提高诊断的阳性率。
五 呼 吁
1.请尽量在早上送检标本 2.请正确留取痰标本
3.请正确填写标本部位及名称
4.血培养－感染性疾病的病原学诊断有效手段 5.个别特殊病历多沟通，6.反馈抗生素疗效（药敏结果与临床疗效不符时）7.科研合作
第四篇：食品理化检验样品的采集、收样与检验
食品理化检验样品的采集、收样与检验
食品卫生微生物检验样品的采集和处理......................................................................................................1 生活饮用水水样的采集、收样与检验..........................................................................................................3 食品理化检验样品的采集、收样与检验......................................................................................................6
食品卫生微生物检验样品的采集和处理
一、范围
适用于各类食品样品的采样。
二、采样用品
灭菌探子、铲子、匙、采样器、试管、吸管、广口瓶、剪子、开罐器等。
三、样品的采集
在食品检验中，所采集的样品必须有代表性。食品中因其加工批号、原料情况（来源、种类、地区、季节等）、加工方法、运输、保藏条件、销售中的各个环节（例如有无防蝇、防污染、防蟑螂及防鼠等设备）及销售人员的责任心和卫生认识水平等均可影响食品卫生质量，因此必须考虑周密。
1、采样数量
每批样品要在容器的不同部位采取，一般定型包装食品采取一袋/瓶（不少于250g）及散装食品采取250g.2、采样方法
(1)采样必须在无菌操作下进行。(2)根据样品种类，袋装、瓶装和罐装食品，应采完整的未开封的样品。如果样品很大，则需要无菌采样器 取样；固体粉末样品，应边取边混合；液体样品通过振摇混匀；冷冻食品应保持冷冻状态（可放在冰内、冰箱的冷盒内或低温冰箱内保存），非冷冻食品需在1℃～5℃中保存。
3、采样标签
采样前或后应贴上标签，每件样品必须标记清楚(如品名、来源、数量、采样地点、采样人及采样时间等)。
四、送检
样品送到微生物检验室应越快越好。如果路途遥远，可将不需冷冻样品保持在1℃～5℃环境中(如冰壶)。如需保持冷冻状态，则需保存在泡沫塑料隔热箱内（箱内有干冰可维持在0℃以下）。送检时，必须认真填写申请单，以供检验人员参考。
五、检验
微生物检验室接到送检申请单，应立即登记，填写实验序号，并按检验要求，立即将样品放在冰箱或冰盒中，积极准备条件进行检验。
各食品微生物检验室必须备有专用冰箱存放样品。一般阳性样品，发出报告后3d(特殊情况 适当延长)，方能处理样品。进口食品的阳性样品，需保存6个月，方能处理。阴性样品可及时处理。
检验完后，检验人员应及时填写原始记录，签名后，送质控办 出具检验报告。
生活饮用水水样的采集、收样与检验
一、范围
本规范规定了生活饮用水及水源水的采集、收样与方法。本规范适用于生活饮用水及水源水的采集、收样与检验。
二、生活饮用水水样的采集
1、采样点的选择
采样点的设置应有代表性，应分别设在水源取水口、集中式供水单位出水口和居民经常用水点处。管网水的采样点数，一般按供水人口每两万人设一个点计算，供水人口在20万以上、100万以下时，可酌量増减。在全部采样点中，应有一定的点数选在易受污染的地点和管网系统陈旧部位。
具体采样点的选择，应由供水单位和当地卫生行政部门根据本地区具体情况确定。
2、水样量的体积
水样的体积，取决于所分析项目的多少以及选用的测定方法。分析常规水质项目，只需要3-5升水样，取样量应能满足欲测项目的需要。对于细菌与化学检验，由于采集、处理、容器等的不同，不能应用同一瓶水样。
3、水样容器
样品瓶可用硼硅玻璃瓶或聚乙烯塑料瓶，必须能够用塞或盖紧紧密封。
(1)选择容器的原则: a、容器不能是新的污染源。
b、容器壁不应吸收或吸附某些待测组分。
c、容器不应与待测组分发生反应。(2)容器的清洗原则
按水样待测组分的要求来确定清洗容器的原则。(3)用于微生物检验样品的容器
容器及瓶塞、瓶盖应能经受灭菌的温度，并且在这个温度下不释放或产生任何能抑制生物活动或导致死亡或促进生长的化学物质。为了除去余氯，在灭菌前向容器里加入硫代硫酸钠以还原余氯[每次125ml水样加0.1ml硫代硫酸钠溶液（100g/L）]。
热力灭菌分干热和高压蒸气灭菌两类。高压蒸气灭菌法要求121℃，15min,即可杀死芽孢。干热灭菌法杀死芽孢需160-180℃、维持2h。
4、样品保存
水样从采集到分析这段时间里，由于物理的、化学的、生物的作用会发生不同程度的变化，原则上应尽快测定。
（1）影响水质变化的因素
生物作用、化学作用、物理作用。（2）水样保存措施
通常将水样充满容器并密封，但对冷冻保存的水样不应充满容器。
水样保存，应达到：减慢生物或微生物作用，减慢化合物或络合物水解，避免分解，减少挥发与容器的吸附损失。保存方法，可采用控制pH值、加入化学剂、冷藏或冷冻。应根据具体组分选定适宜的保存方法。
5、现场采样和记录（1）现场采样
采集井水时,须先用泵充分抽水，以保证样品真正代表地下水源的实况。
采集自来水时，应开启龙头，适当放水数分钟后再取样，微生物样品应放水数分钟后关闭龙头，用酒精棉球擦试龙头口并点燃酒精棉球酌烧龙头口后迅速采样封口。
（2）采样记录
在采样现场把采样记录用胶纸粘贴或悬挂标签于水样瓶上,注明水样编号、采样者、日期、时间及地点等。
三、水样的接收
检验人员接到样品后，应与《样品检测流转通知单》所注明的内容进行认真核对，核实无误，检验人员在《样品检测流转通知 单》上签名，接收样品并做好收样等记；核实有误，则将样品与《样品检测流转通知单》退回质控办核查。
四、水样的检验
接收样品后，依据《生活饮用水卫生规范》中《生活饮用水检验规范》，针对《样品检测流转通知单》所标明的检验项目，选取适合本实验室的检验方法，在规定时限内进行检验和校核.食品理化检验样品的采集、收样与检验
一、范围
本规范规定了食品卫生检验方法理化部分样品的采集、收样与检验的基本原则和要求。
本规范适用于食品卫生检验方法理化部分。
二、采样原则
食品采样是指从较大批量食品中抽取能较好地代表其总体样品的方法。因此，应遵循下列采样原则：
1、代表性
在大多数情况下,待鉴定食品不可能全部进行检测,而只能抽取其中的一部分作为样品,因此,所采的样品应能够较好地代表待鉴定食品各方面的特性。
2、真实性
采样人员应亲临现场采样,以防止在采样过程中的作假或伪 造食品。所有采样用具都应清洁、干燥、无异味、无污染食品的可能。应尽可能避免使用对样品可能造成污染或影响检验结果的采样工具和采样容器。
3、准确性
性质不同的样品必须分开包装，并应视为来自不同的总体；采样方法应符合要求，采样的数量应满足检验及留样的需要；可根据感官性状进行分类或分档采样；采样记录务必清楚地填写在采样单上，并紧附于样品。
4、及时性
采样应及时,采样后也应及时送检。尤其是检测样品中水分、微生物等易受环境因素影响的指标，或样品中含有挥发性物质或易分解破坏的物质时，应及时赴现场采样并尽可能缩短从采样到送检的时间。
三、样品采集
1、采样应注意样品的生产日期、批号、代表性和均匀性(掺伪食品和食物中毒样品除外)。采集的数量应能反映该食品的卫生质量和满足检验项目对样品量的需要，一式三份，供检验、复验、备查或仲裁，一般散装样品每份不少于0.5Kg。
2、采样容器根据检验项目,选用硬质玻璃瓶或聚乙烯制品。
3、液体、半流体饮食品如植物油、鲜乳、酒或其他饮料，如用大桶或大罐盛装着，应先充分混匀后再采样。样品应分别盛放 在三个干净的容器中。
4、粮食及固体食品应自每批食品上、中、下三层的不同部位分别采取部分样品,混合后按四分法对角取样,最后取有代表性样品。
5、肉类、水产等食品应按分析项目要求分别采取不同部位的样品或混合后采样。
6、罐头、瓶装食品或其他小包装食品，应根据批号随机取样，同一批号取样件数，250g以上的包装不得少于6个，250g以下的包装不得少于10个。
7、掺伪食品和食物中毒的样品采集，要具有典型性。
四、样品的接收
检验人员接到样品后，应与《样品检测流转通知单》所注明的内容进行认真核对，核实无误，检验人员在《样品检测流转通知单》上签名，接收样品并做好收样等记；核实有误，则将样品与《样品检测流转通知单》退回质控办核查。
五、样品的检验
接收样品后，依据中华人民共和国国家标准GB/T 5009-2003《食品卫生检验方法
理化部分》，针对《样品检测流转通知单》所标明的检验项目，选取适合本实验室的检验方法，在规定时限内进行检验和校核。
第五篇：临床免疫检验质量控制及应注意问题
临床免疫检验质量控制及应注意问题
免疫检测目前涉及的范围极广泛，各种病原微生物抗体检测（特别是各型肝炎及艾滋病是各种医院必查项）。肿瘤标志物、一般免疫标志（如：免疫球蛋白、补体等）、激素等检测一般均归于免疫检测范围内。对一般全自动化免疫仪器，一般注意定期校准和做好室内和室间质控较容易，但涉及到酶标仪的工作的质控是较难进行的。以下讨论质控的一般概念及应注意事项。
一、质控目的
同其他专业一样，保证免疫检验质量，使其具有较高的重复性、准确性和各试验之间的结果可比性。原则及方法与其它专业质控类似。
二、免疫检验的标准化
免疫检验结果可比性很差，原因一是实验方法不统一，二是缺少用于参考比较的标准试剂，标准化迫在眉睫。1、方法标准化（１）实验方法分类 ①决定性方法
准确度高，系统误差小，测值接近真值。
用途：标准品检测；参考方法评价(一般不用于常规工作)②参考方法
被决定性方法证实干扰因素少，测量结果可靠。
用途：鉴定常规方法；质控品定值(有条件实验室可用于常规工作)③常规方法
有足够的精密度、准确性、特异性和适当分析范围。
用途：经方法评估和学术组织认可后推荐为常规方法。
例如： HBsAg 定量
决定性方法——紫外分光光度计测定蛋白
参考方法——高标记率固相放免
常规方法——酶标（２）实验方法选择原则
①实用性：速度快、标本用量少、操作简便、安全可行。②可信性：精密度、准确度、敏感性、特异性均达到要求。（３）方法的评估
参数设定 真阳性 TP，真阴性 TN，假阳性 FP，假阴性 FN。①敏感性
患者中阳性百分率(理想 100 ％)
公式：②特异性 × 100 ％
非患者中阴性百分率(理想 100 ％)
公式：③诊断指数 × 100 ％
①十②，理想为 200 ％，不宜采用范围(100 — 170 ％)④诊断效率
某试验性准确区分患者及非患者能力
公式：⑤阳性预测值
X100 ％
在所有阳性结果中真正患者百分率。(理想 100 ％)
公式：⑥阴性预测值 × 100 ％
在所有阴性结果中非患者百分率。(理想 100 ％)
公式 ： 2、试剂标准化（１）分级 ① WHO 国际标准品 ② WHO 国际参考品 ③国家标准品 × 100 ％
按国际标准品复制的标准品，效力单位与①严格一致。④研究室或厂家标准品
暂时用于工作的标准品，自行效价，但有国际标准品后，必须标化。⑤免疫学质控标准品和参考品
一般用国际标准品或国际参考品标化的用于质控的物质。（２）免疫常用国际标准品和参考品
免疫学检验质控常用国际标准品和参考品
三、常用免疫质控 1、质控一般要求（１）标本收集及处理
每种标本有一定收集要求，应与临床医生、负责取血者及运送标本者交代清楚以便配合。有些标本要求特殊，应特别注意，例如测补体标本不能存于室温或 4 ℃ 活化影响检测。HBeAg 不能反复冻融，破坏蛋白。
（２）仪器的校准与标定(以酶标仪为例)
在免疫检测中酶标仪是最常使用的仪器，仪器的校准一定要定时进行（一般使用频繁不超过半年，一般使用不超过一年）。校准应在仪器购买时请厂家对性能光路等校准并给出参数。此时，应做功能校准，选取定值校准品（含不同滴度及阴、阳标本）4-5 天检测。其中对实验影响较大的加样器及水浴用温度计均应进行计量校准后使用，前者可采用称重法校准，后者可到国家计量单位进行。（３）对照及质控品
对照（一般指阴、阳对照）最好使用与被测样品同类物质。质控品一般可来自质控控制单位（如：各级临检中心），必要时可自制，但最好应与有溯源性标准物质进行比对。定量者可制作标准曲线。自身抗体等可使用国际通用阳性对照血清。质控品一般应包括高、中、低三种滴度。2、酶标方法实验的质控（１）实验前
特别要注意标本要求不溶血、无乳糜，并注意贮存温度。仪器应做好校准和标定。其中酶标仪在购买时应注意到厂家提供的光路校准及技术要求，（注意最好无漂移）。安装后要进行功能校准。定性校准选阴性，高、中、低值阳性血清各 2 份连续进行 5天检测。定量校准在 96 孔板上选 20 处，随机测定，结果与标定值比较应在 ± 2SD 内。加样器应定期校准。水浴箱除对温度计校准外，每次实验时温度计均应复测。（２）实验中
① 按校准程序操作，不得随意减省操作步骤。②质控分为室内和室间质控。
一般室内质控应据工作量多寡决定间隔时间。质控物质可购买或自己标定，但要注意应有高、中、低值阳性质控品及阴性质控品。一定要设立低值者。除定期开展质控外，在实验不稳定时要及时做。特别注意要每月做图总结。对失控应有记录并分析原因提出处理意见。在判断失控上可使用 Westgard 规则，特别要注意以下几种情况。
Ａ： l 2S ：一质控点在 ± 2S 之外应警惕。
Ｂ： R 4S ：连续 2 个质控点相差 >4S。
Ｃ： 4 1S ：连续 4 个质控点落同侧± 1S 之外。
Ｄ：７ X ：连续 7 个质控点落均值一侧。
Ｅ： 7 ↑／↓：连续 7 个质控点均↑或↓同一周期变化。（３）实验后
质控时还应注意收集临床资料，随时调整。（４）开展质控特别应注意的几个问题 ①试剂盒内阴、阳对照与质控不完全相等
临界值质控品是保证实验质量的关键。
作用：
Ａ：控制灵敏度，可测试剂盒灵敏度是否达标。
Ｂ：控制精密度，连测 20 次，可获得均值 ②室内质控不合格的失控处理
Ａ：停止发放报告。
Ｂ：查找原因：质控品是否有效，试剂、仪器及操作等，必要时重校准仪器，做试剂比对。重新合格后报告负责人方能发出报告。③关于室间质控
Ａ：如部、市均未开展室间质评的试验应定时比对(例：抗 HP)
Ｂ： 80 ％以下得分应找原因及时纠偏。
和标准差 SD。做质控图，控制室内精密度。
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