年度安全与防污染工作总结

第一篇：年度安全与防污染工作总结

年度安全与防污染管理工作总结

今年，公司经历了领导班子重组、公司被例入黑名单的重大事件。公司深受打击，深刻反思，更加坚定目标、执行年度制定的全年安全生产与防污染管理工作方针。积极强化安全与防污染管理工作的落实,全力推进《海事局航运公司安全与防污染监督管理实施办法》的执行。在交通、海事局等各级领导的关心指导下，积极宣传安全生产管理与防污染管理工作，加强安全检查力度，严格执行安全生产责任制，积极开展船舶“两防”安全活动工作, 公司全体员工的共同目标得以实现-公司经营情况转危为安。公司深感体会船舶的安全生产管理与防污染管理工作的重要性和必要性。

公司在坚持安全生产与防污染管理的道路上，继续优化和落实安全生产责任制和安检工作，确保安全与防污染管理工作持续稳定。本年度安全管理工作总结如下：

一、船舶安全生产状况

今年上半年发生的险情，所幸未造成太大的经济损失及人员伤亡事件，公司对其船舶重点监管和普及安全生产管理知识。下半年船舶违章多为配员不足，公司招集其船舶全面开展安全生产知识讲座，提高船员安全生产意识，牢固安全生产责任意识感。

二、主要安全生产管理工作

（一）明确安全生产管理制度

根据2013年安全生产工作计划，公司将制定的安全目标分解落实到各船舶管理部门，做到责任分明，确保公司安全生产计划顺利完成。公司严格执行的安全生产和防污染管理制度，并将其制度全面落实到各船舶及船员。公司与各船舶责任人签订安全生产责任书、安全生产承诺书及防污染责任书。明确船舶安全生产管理和环境保护的重要性。公司每季度第三个月末将召开安全生产例会，总结并汇报每季度的安全生产状况。

（二）加强宣传教育安全生产管理工作

公司积极普及和宣传安全生产管理的重要性和利害性。定期开展

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4安全生产宣传工作和安全检查专项活动：（1）、在“安全生产活动月”期间，公司到船舶集中区域，并大力宣传和普及安全生产知识，（2）、在船舶较为集中时，安全主管组织海务、机务管理到船舶现场开展安全生产宣传教育活动，现场发放安全生产资料数份，确保安全生产知识全面普及，进一步提高船员的安全意识。使船员在生产中能按章操作顺利航行。

（三）加大检查力度、排除安全隐患，公司利用传统节日、安全活动月以及船舶检验等船舶较为集中时，开展船舶安全检查工作。公司组织并邀请海务、机务管理人员、海事处的安检员前往经xxxxxxxxx等地现场指导，开展船舶安全检查和安全隐患整治工作。

公司xx海事处及xx海事处在花都海事处管辖水域联合举办船舶演习和船员安全知识学习活动；对存在安全隐患的船舶现场讲解隐患的利害性并下令限时整改，确保船舶所有设备和机械正常运行，消除并杜绝安全事故的发生。

（四）完善规章制度、落实安全责任制

根据《广东省航运公司安全与防污染试行管理办法》的规定及公司制定的年度工作计划、目标，落实安全生产管理工作，不断优化和总结各规章制度和操作规程，建立船舶安全生产的《安全与防污染管理制度》，并发放到每艘船舶。制度中强烈要求指导船员在船舶航行和生产过程中，必须按章操作，严格执行督促各船舶参照《安全与防污染管理制度》的规定，落实各岗位责任制和安全生产责任制。

（五）完善互动机制，加强沟通

由于公司所属船舶处于异地营运，为更清楚了解船舶的航行动向和水上交通安全情况，公司创建的信息平台为船舶行航护驾。今年公司通过信息平台向船舶发布：霾雾、雷雨天气以及洪汛和通航等信息xx次。在恶劣天气和洪汛期间全天候与船舶保持有效的联系，及时向船舶发布天气预警和洪汛信息，提醒各船舶做好预防停靠工作。从根本上有效减少水上交通事故的发生。

（六）加强学习培训，增强安全意识

船员必须具备良好的综合素质和强烈的安全责任意识，以确保船

21/9/201

4舶安全航行。公司要求船员实行安全知识和实操技能的学习培训，组织船员回港参加基本安全培训和统考消限升类培训，利用节假日船员回港办证的有利时机，组织船员学习安全、操作和法规等方面的生产知识，进一步提升船员的综合素质。

（七）实行表彰惩罚制度

公司建立奖罚分明的表彰惩罚制度，激励所有船舶正常行驶，共同创造有效的经济利益，促进水上运输行业持续稳定发展。对本年度未曾违反安全生产管理和防污染管理等规定的船舶，公司给予充分的肯定和表扬奖励，组织其船舶进行表彰大会，鼓励所有船舶向其学习，并讲解安全生产所带来的利益效应。违规航行的船舶，严重影响公司的发展脚步，给正常航行的船舶带来经济上的直接损失，公司对违规航行的船舶实行惩罚处理，并做为公司的重点监管对象，实时管制。

三、存在的问题

公司在安全管理工作方面做了大量的工作，船舶的航行受极不稳定的人为和自然因素的影响，因此还存在不少的问题：

（一）船舶的动态监管不到位：船舶基本都处于异地营运，船舶航行动态的监管是我们难以控制。

（二）船员的安全意识薄弱：有少部分船员盲目追求经济利益，忽略安全生产违规航行，造成安全事故的险象环生，罚归获首是船员的安全意识单薄及操作不发造成。

（三）船员的技能有待提升：为适应目前的水运市场以及未来的发展趋势，现船舶业已向大型转化发展，因此船员的实操技能需进一步提高，符合社会发展所需。

四、今后的工作思路

安全是航运企业的生命线，是船舶运输一切工作的基础。我们必须严格执行安全管理，增强责任心、提高 安全工作的执行力，坚持务实创新的理念，严格履行安全管理、监督检查的职责，努力实现公司船舶生产、安全目标，真正做到、落实到“科学发展，安全发展”。

为确保船舶的安全生产，避免船舶海损事故的发生，我们公司在下班年将尽心尽职做好这几方面的工作：（1）、加大船舶的动态监管，31/9/201

4杜绝船舶违章航行、船员违章操作。（2）、加大船舶安全检查的力度，排除安全隐患。（3）、强化船员的思想教育，进一步提高船员的综合素质。（4）、加强船员的技能培训，提高船员的实操技能水平，避免人为造成的安全事故。（5）、加强船舶应急演习，提高船员的遇险应急救助能力。

41/9/2014

第二篇：航运公司安全与防污染管理规定

中华人民共和国航运公司安全与防污染管理规定

第一章 总

则

第一条 为提高航运公司安全与防污染管理水平，保障水上交通安全，防止船舶污染水域环境，根据《中华人民共和国海上交通安全法》、《中华人民共和国内河交通安全管理条例》、《国务院对确需保留的行政审批项目设定行政许可的决定》等法律、行政法规以及我国缔结或者加入的相关国际公约，制定本规定。

第二条 本规定适用于航运公司安全与防污染管理体系（以下简称安全管理体系）的建立、实施、保持及其相关活动的监督管理。

第三条 交通部主管全国航运公司安全与防污染工作。

中华人民共和国海事局依照本规定对航运公司安全与防污染活动实施监督管理。

有关海事管理机构依照中华人民共和国海事局确定的职责权限，具体负责本辖区航运公司安全与防污染活动的监督管理。

第二章 航运公司安全与防污染责任

第四条 航运公司应当建立、健全安全与防污染管理制度，完善安全与防污染条件，保障船舶安全，防止船舶污染水域环境。

第五条 航运公司应当确保向船舶提供足够的资源和岸基支持，并对安全与防污染工作进行监控，保持船岸之间的有效联系。

第六条 航运公司应当确定安全与防污染管理的方针和目标，并指定本公司主要负责人为安全与防污染工作的第一责任人。

第七条 航运公司应当具有适任的安全与防污染管理人员，并明确其岗位职责。

航运公司的主要安全与防污染管理人员不得在船上兼职或者跨航运公司兼职。

第八条 航运公司应当为船舶配备满足最低安全配员要求的适任船员。

第九条 航运公司应当确定船长在船舶安全与防污染管理方面的最终决定权。

第十条 航运公司应当建立教育培训制度，加强和规范安全与防污染知识的教育和培训，确保相关人员熟悉安全与防污染的有关规定和操作规程，掌握相应的操作技能，并提高对船舶安全与防污染的应急反应能力。

第十一条 航运公司应当建立船舶安全与防污染监督检查制度，确保对船舶及其设备进行有效的维护和保养。

第十二条 航运公司应当根据船舶的种类、航区等因素制定相应的岸基、船岸和船舶应急预案，并定期组织训练演习。

第十三条 中国籍船舶发生事故、重大险情或者被滞留时，航运公司应当尽快向船籍港所在地的交通部直属海事管理机构或者省级交通主管部门所属的海事管理机构报告。

第十四条 船舶所有人、经营人、光船承租人可以将其所属船舶的安全与防污染管理委托其他航运公司。

航运公司在接受安全与防污染管理委托时，应当与委托方签订安全与防污染管理协议，协议内容应当包括：

（一）当安全与防污染同生产、经营、效益发生矛盾时，应当坚持安全第一和保护环境优先的原则；

（二）本规定所有有关安全与防污染的责任和义务由受托方独立承担；

（三）在不妨碍船长履行其职责并独立行使其权力的前提下，受托方对处理涉及安全与防污染的事务具有最终决定权；

（四）委托方应当向受托方提供足够的资源，确保受托方有效开展船舶安全

与防污染管理工作；

（五）委托方船舶的船员配备和调动、船舶及设备维护、应急反应等方面应当服从受托方的指令。

委托方、受托方应当将双方及其船舶的详细情况及船舶管理协议报受托方所在地和船籍港所在地的交通部直属海事管理机构或者省级交通主管部门所属的海事管理机构备案。

第十五条 需要建立安全管理体系的航运公司，应当建立安全管理体系并保持体系的有效性。

需要建立安全管理体系的航运公司的范围，由交通部公布。

第十六条 需要建立安全管理体系的航运公司，除应当符合本章第四条至第十四条规定外，还应当满足以下要求：

（一）制定安全与防污染操作规程；

（二）确保当发生事故、险情和不符合规定情况时得到报告、调查、分析和纠正；

（三）有效控制与安全管理体系有关的所有文件和资料；

（四）对安全管理体系进行内部审核、有效性评价和管理复查。

第十七条 建立安全管理体系的航运公司，应当及时向公司所在地的交通部直属海事管理机构或者省级交通主管部门所属的海事管理机构报告安全管理体系运行过程中发生的重大事项。

第十八条 鼓励第十五条规定范围外的航运公司按照相关要求，建立、实施并保持安全管理体系。

第三章 航运公司安全与防污染管理体系的审核、发证

第十九条 安全管理体系经过审核，由中华人民共和国海事局及其指定的海事管理机构对符合条件的航运公司签发相应的安全与防污染能力符合证明（以下

简称符合证明）或者临时符合证明，对符合条件的船舶签发相应的安全管理证书或者临时安全管理证书。

审核、发证应当符合《中华人民共和国海事行政许可条件规定》规定的条件，并按照《交通行政许可实施程序规定》及中华人民共和国海事局制定的审核发证规则和审核发证程序执行。

第二十条 经过初次审核，对符合安全管理体系要求的航运公司，海事管理机构应当签发有效期为5年的符合证明。

第二十一条 船舶应当保存一份符合证明的副本，船舶所持符合证明副本中载明的船舶种类应当覆盖该船舶。

第二十二条 经过初次审核，船上的管理及操作符合安全管理体系要求的，海事管理机构应当向船舶签发有效期为5年的安全管理证书。

第二十三条 航运公司应当在符合证明的周年日前3个月内申请审核，船舶应当在安全管理证书第二和第三个周年日期内申请中间审核。海事管理机构根据审核、中间审核的结论决定符合证明、安全管理证书是否继续有效。

第二十四条 新成立的航运公司或者对原符合证明增加船种的航运公司应当申请临时审核。经过海事管理机构审核合格的，发给有效期为12个月的临时符合证明。

新建造船舶投入营运前或者航运公司新承担对某一船舶的安全与防污染管理责任或者船舶更换国籍的，航运公司应当为船舶申请临时审核，经过海事管理机构审核合格的，发给有效期为6个月的临时安全管理证书。

特殊情况下，海事管理机构可以对临时安全管理证书的有效期展期6个月。

航运公司应当在临时符合证明、临时安全管理证书有效期届满前2个月申请初次审核。

第二十五条 航运公司应当在符合证明、安全管理证书有效期届满前3个月申请换证审核；通过审核的，签发新的符合证明、安全管理证书。新签发的符合

证明或者安全管理证书自原证书的届满之日起算，有效期为5年。

第二十六条 在审核或者换证审核中，发现安全管理体系运行存在严重不符合规定的情况，或者有大量不符合规定的情况并且已经严重影响到安全管理体系运行的有效性时，海事管理机构应当对其在相应审核的6个月后实施跟踪审核。

航运公司所管理的船舶出现发生重大事故、连续发生事故、多次被滞留等情况时，海事管理机构应当对其实施附加审核。

第二十七条 海事管理机构在安全管理体系审核中发现不符合规定情况的，应当要求航运公司限期改正，并按时指派审核人员验证航运公司在规定期限内所采取的纠正措施。

第二十八条 符合证明、临时符合证明、安全管理证书和临时安全管理证书，由中华人民共和国海事局确定格式并统一制作。

第四章 监督检查

第二十九条 海事管理机构应当建立、健全航运公司安全与防污染的监督检查制度，对航运公司的安全与防污染管理活动实施监督检查。监督检查的情况和处理结果应当记录，由监督检查人员签字后归档。

海事管理机构实施监督检查时，有关单位和个人应当予以协助和配合，不得拒绝、妨碍或者阻挠。

第三十条 航运公司所在地海事管理机构发现航运公司在安全与防污染管理方面存在安全隐患时，应当责令其立即消除或者限期消除。

第三十一条 航运公司所在地海事管理机构发现航运公司应当办理符合证明而未办理的，或者航运公司、船舶不再符合签发符合证明、安全管理证书条件的，应当责令航运公司、船舶立即改正。船舶不按照要求改正的，对船舶可以采取责令停航、改航、停止作业、禁止进出港口等行政强制措施。

第三十二条 作出许可决定的海事管理机构发现航运公司未按照第二十三条、第二十四条、第二十五条的要求申请审核，或者审核发现有重大不符合规定情况的，应当注销符合证明、临时符合证明、安全管理证书或者临时安全管理证书；如果注销符合证明或者临时符合证明，所有相关安全管理证书或者临时安全管理证书也应当注销。

第三十三条 作出许可决定的海事管理机构发现航运公司未按照第二十七条的要求对安全管理体系审核中出现的不符合规定情况采取纠正措施的，应当注销符合证明或者安全管理证书。

第三十四条 有关海事管理机构应当建立、健全监督检查制度，对审核、发证及相关活动实施监督。

第五章 法律责任

第三十五条 违反本规定第七条、第九条、第十五条、第十七条规定，由海事管理机构责令改正，并可以对航运公司处以5000元以上3万元以下罚款。

第三十六条 违反本规定第十四条规定，受托航运公司未履行安全与防污染管理责任的，由海事管理机构责令改正，并可以对受托航运公司处以5000元以上3万元以下罚款。

第三十七条 有关审核人员违反本规定以及相应的审核发证规则和程序的，由有关海事管理机构责令改正；情节严重的，追究有关审核人员的行政责任。

第三十八条 违反本规定的其他规定应当进行处罚的，按照《海上海事行政处罚规定》和《内河海事行政处罚规定》执行。

第六章 附

则

第三十九条 本规定下列用语的定义：

（一）航运公司：是指承担安全与防污染管理责任和义务的航运企业，包括

船舶所有人、经营人、管理人和光船承租人。

（二）安全管理体系：是指能使航运公司人员有效执行航运公司安全和防污染方针的结构化和文件化的体系。

（三）符合证明：是指签发给航运公司，表明该航运公司安全管理体系符合要求的证明文件。

（四）安全管理证书：是指签发给船舶，表明其航运公司和船上管理已经按照安全管理体系运作的证明文件。

（五）安全管理体系运行的重大事项：是指建立安全管理体系的航运公司发生体系文件改版，体系内重大人事及机构变动，体系内船舶数量和种类变动，航运公司内部审核、有效性评价和管理复查发现体系运行出现重大问题等情况。

（六）不符合规定的情况：是指客观证据表明不满足某一具体规定要求的情况。

（七）重大不符合规定的情况：是指对人员或者船舶安全构成严重威胁或者对环境构成严重危险,并需要立即采取纠正措施的事项或者情况，包括未能有效和系统地实施本规则的有关要求。

（八）周年日：是指符合证明和安全管理证书有效截止日期的每年的该月该日。

第四十条 本规定自2008年1月1日起施行。

第三篇：安全生产与防污染整改报告

XXX安全与防污染整改报告

XX年XX月市海事局组织检查成员来我司针对安全与防污染管理工作进行全面检查和指导，针对检查中提出的不符合事项。公司高度重视，召开了专项整改会议，明确整改计划和措施，并限时整改。现将整改情况汇报如下：

一.未制定船舶水密设施检查、机舱污水处理、船舶装卸作业等操作规程。整改措施和结果：现已按要求将各项规程补充完善，已整改；

二.船员档案不完整。

整改措施和结果：按船舶配员补充健康证、身份证、岸基联系电话等资料，已整改；

三.安全培训时间没按计划完成。

整改措施和结果：按制定的船员培训时间和计划，已整改；

四.未制定和实施船员培训工作。

整改措施和结果：按要求制定培训计划，并开展船员培训工作，已整改；

五.未按船舶检查计划开展检查工作。

整改措施和结果：利用传统节假日、安全活动月和船舶较为集中年检时，对船舶进行一年2次的安全与防污染检查工作，已整改；

六.未制定联合演习计划。

整改措施和结果：按要求制定联合演习计划，在安全活动月和船舶集中地完成联合演习，已整改；

七.未制定档案管理规定。

整改措施和结果：已编制档案管理规定，已整改；

第四篇：PCR防污染措施

【分享】PCR污染与对策

PCR污染与对策

PCR反应的最大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性，但令人头痛的问题是易污染，极其微量的污染即可造成假阳性的产生.污染原因

(一)标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提取过程中，由于吸样枪污染导致标本间污染;有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散，导致彼此间的污染.(二)PCR试剂的污染:主要是由于在PCR试剂配制过程中，由于加样枪、容器、双蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染.(三)PCR扩增产物污染.这是PCR反应中最主要最常见的污染问题.因为PCR产物拷贝量大(一般为1013拷贝/ml)，远远高于PCR检测数个拷贝的极限，所以极微量的PCR产物污染，就可造成假阳就可形成假阳性.还有一种容易忽视，最可能造成PCR产物污染的形式是气溶胶污染；在空气与液体面摩擦时就可形成气溶胶，在操作时比较剧烈地摇动反应管，开盖时、吸样时及污染进样枪的反复吸样都可形成气溶胶而污染.据计算一个气溶胶颗粒可含48000拷贝，因而由其造成的污染是一个值得特别重视的问题.(四)实验室中克隆质粒的污染:在分子生物学实验室及某些用克隆质粒做阳性对照的检验室，这个问题也比较常见.因为克隆质粒在单位容积内含量相当高，另外在纯化过程中需用较多的用具及试剂，而且在活细胞内的质粒，由于活细胞的生长繁殖的简便性及具有很强的生命力.其污染可能性也很大.污染的监测

一个好的实验室，要时刻注意污染的监测，考虑有无污染是什么原因造成的污染，以 便采取措施，防止和消除污染.对照试验

1.阳性对照:在建立PCR反应实验室及一般的检验单位都应设有PCR阳性对照，它是PCR 反应是否成功、产物条带位置及大小是否合乎理论要求的一个重要的参考标志.阳性 对照要选择扩增度中等、重复性好，经各种鉴定是该产物的标本，如以重组质粒为阳 性对照，其含量宜低不宜高(100个拷贝以下).但阳性对照尤其是重组质粒及高浓度阳 性标本，其对检测或扩增样品污染的可能性很大.因而当某一PCR试剂经自己使用稳 定，检验人员心中有数时，在以后的实验中可免设阳性对照.2.阴性对照:每次PCR实验务必做阴性对照.它包括①标本对照:被检的标本是血清就用 鉴定后的正常血清作对照;被检的标本是组织细胞就用相应的组织细胞作对照.②试剂 对照:在PCR试剂中不加模板DNA或RNA，进行PCR扩增，以监测试剂是否污染.3.重复性试验

4.选择不同区域的引物进行PCR扩增 防止污染的方法 一． 污染的预防

进行PCR操作时，操作人员应该严格遵守一些操作规程，最大程度地降低可能出现的PCR污染或杜绝污染的出现。

（一）划分操作区：目前，普通PCR尚不能做到单人单管，实现完全闭管操作，但无论是否能够达到单人单管，均要求实验操作在三个不同的区域内进行，PCR的前处理和后处理要在不同的隔离区内进行： 1.标本处理区，包括扩增摸板的制备； 2.PCR扩增区，包括反应液的配制和PCR扩增；

3.产物分析区，凝胶电泳分析，产物拍照及重组克隆的制备。

各工作区要有一定的隔离，操作器材专用，要有一定的方向性。如：标本制备→PCR扩增→产物分析→产物处理。

切记：产物分析区的产物及器材不要拿到其他两个工作区。

（二）分装试剂：PCR扩增所需要的试剂均应在装有紫外灯的超净工作台或负压工作台配制和分装。所有的加样器和吸头需固定放于其中，不能用来吸取扩增后的DNA和其他来源的DNA： 1． PCR用水应为高压的双蒸水；

2． 引物和dNTP用高压的双蒸水在无PCR扩增产物区配制；

3． 引物和dNTP应分装储存，分装时应标明时间，以备发生污染时查找原因。

(三)实验操作注意事项 尽管扩增序列的残留污染大部分是假阳性反应的原因，样品间的交叉污染也是原因之一。因此，不仅要在进行扩增反应是谨慎认真，在样品的收集、抽提和扩增的所有环节都应该注意： 1.戴一次性手套，若不小心溅上反应液，立即更换手套；

2.使用一次性吸头，严禁与PCR产物分析室的吸头混用，吸头不要长时间暴露于空气中，避免气溶胶的污染；

3.避免反应液飞溅，打开反应管时为避免此种情况，开盖前稍离心收集液体于管底。若不小心溅到手套或桌面上，应立刻更换手套并用稀酸擦拭桌面；

4.操作多份样品时，制备反应混合液，先将dNTP、缓冲液、引物和酶混合好，然后分装，这样即可以减少操作，避免污染，又可以增加反应的精确度； 5.最后加入反应模板，加入后盖紧反应管； 6.操作时设立阴阳性对照和空白对照，即可验证PCR反应的可靠性，又可以协助判断扩增系统的可信性； 7.尽可能用可替换或可高压处理的加样器，由于加样器最容易受产物气溶胶或标本DNA的污染，最好使用可替换或高压处理的加样器。如没有这种特殊的加样器，至少PCR操作过程中加样器应该专用，不能交叉使用，尤其是PCR产物分析所用加样器不能拿到其它两个区； 8.重复实验，验证结果，慎下结论。二． 追踪污染源

如果不慎发生污染情况，应从下面几条出发，逐一分析，排除污染。

（一）设立阴阳性对照：有利于监测反应体系各成分的污染情况。选择阳性对照时，应选择扩增弱，且重复性好的样品，因强阳性对照可产生大量不必要的扩增序列，反而可能成为潜在的污染源。如果以含靶序列的重组质粒为对照，100个拷贝之内的靶序列就足以产生阳性扩增。阴性对照的选择亦要慎重，因为PCR敏感性极高，可以从其它方法（Sourthern 印迹或点杂交等）检测阴性的标本中检测出极微量的靶分子。此外，每次扩增均应包括PCR体系中各试剂的时机对照，即包括PCR反应所需的全部成分，而不加模板DNA，这对监测试剂中PCR产物残留污染是非常有益的。如果扩增结果中试剂对照为阳性结果，就是某一种或数种试剂被污染了。此时，要全部更换一批新的试剂进行扩增，扩增时设立不同的反应管，每一管含有一种被检测试剂，在检出污染试剂后，应马上处理。

（二）环境污染：在排除试剂污染的可能性外，更换试剂后，若不久又发现试剂被污染了，如果预防措施比较严密，则考虑可能为环境污染。环境污染中常见的污染源主要有： 1.模板提取时真空抽干装置； 2.凝胶电泳加样器； 3.电泳装置； 4.紫外分析仪；

5.切胶用刀或手术刀片； 6.离心机；

7.冰箱门把手，冷冻架，门把手或实验台面等；

此时可用擦拭实验来查找可疑污染源。1）用无菌水浸泡过的灭菌棉签擦拭可疑污染源；2）0.1ml去离子水浸泡；3）取5ml做PCR实验；4）电泳检测结果。

8.气溶胶。如果经过上述追踪实验，仍不能查找到确切污染源，则污染可能是由空气中PCR产物的气溶胶造成的，此时就应该更换实验场所，若条件不允许，则重新设计新的引物（与原引物无相关性）。三．污染处理

（一）环境污染

1.稀酸处理法：对可疑器具用1mol/L盐酸擦拭或浸泡，使残余DNA脱嘌呤；

2.紫外照射（UV）法：紫外波长（nm）一般选择254/300nm，照射30min即可。需要注意的是，选择UV作为消除残留PCR产物污染时，要考虑PCR产物的长度与产物序列中碱基的分布，UV照射仅对500bp以上长片段有效，对短片段效果不大。UV照射时，PCR产物中嘧啶碱基会形成二聚体，这些二聚体可使延伸终止，但并不是DNA链中所有嘧啶均能形成二聚体，且UV照射还可使二聚体断裂。形成二聚体的程度取决于UV波长，嘧啶二聚体的类型及与二聚体位点相邻核苷酸的序列。在受照射的长DNA链上，形成二聚体缺陷的数量少于0.065/碱基，其他非二聚体的光照损伤（如环丁烷型嘧啶复合体，胸腺嘧啶乙二醇，DNA链间与链内的交联和DNA断裂等）均可终止Taq DNA聚合酶的延伸。这些位点的数量与二聚体位点相当。如果这些位点（0.13/碱基）在DNA分子上随机分布，一个500bp片段的DNA分子链上将有32处损伤位点，那么，105个这样的分子中每个分子中会至少有一处损伤。相反，如果100bp的片段，每条链上仅有6处损伤，105个拷贝分子中将有许多分子没有任何损伤。这就是UV照射有一定的片段长度限制的原因。

（二）反应液污染

可采用下列方法之一处理：

1.DNase I法：PCR混合液（未加模板和Taq聚合酶）加入0.5U DNase I，室温反应30 min后加热灭活，然后加入模板和Taq聚合酶进行正常PCR扩增。该方法的优点是不需要知道污染DNA的序列；

2.内切酶法：选择识别4个碱基的内切酶（如Msp I和Taq I等），可同时选择几种，以克服用一种酶只能识别特定序列的缺陷，室温作用1h 后加热灭活进行PCR；

3.紫外照射法：未加模板和Taq聚合酶的PCR混合液进行紫外照射，注意事项与方法同上述UV照射法； 4.g射线辐射法：1.5kGy的辐射可完全破坏0.1ng基因组DNA，2.0 kGy可破坏104拷贝的质粒分子，4.0 kGy仍不影响PCR，但高于此限度会使PCR扩增效率下降。引物可受照射而不影响PCR，g射线是通过水的离子化产生自由基来破坏DNA的。

（三）尿嘧啶糖苷酶（UNG）法

由于UV照射的去污染作用对500bp以下的片段效果不好，而临床用于检测的PCR扩增片段通常为300bp左右，因此UNG的预防作用日益受到重视和肯定。

1.原理：在PCR产物或引物中用dU 代替dT。这种dU化的PCR产物与UNG一起孵育，因UDG可裂解尿嘧啶碱基和糖磷酸骨架间的N-糖基键，可除去dU而阻止TaqDNA聚合酶的延伸，从而失去被再扩增的能力。UNG对不含dU的模板无任何影响。UNG可从单或双链DNA中消除尿嘧啶，而对RNA中的尿嘧啶和单一尿嘧啶分子则无任何作用。

2.dUTP法：用dUTP代替dTTP，使产物中掺入大量dU。在再次进行PCR扩增前，用UNG处理PCR混合液即可消除PCR产物的残留污染。由于UNG在PCR循环中的变性一步便可被灭活，因此不会影响含dU的新的PCR产物。

3.dU引物法：合成引物时以dU 代dT，这样PCR产物中仅5%u2ca端带dU。UNG处理后，引物失去了结合位点而不能扩增。对长片段（1-2kb以上）的扩增用dUTP法效率较用dTTP低，而用dU法就可克服这一缺点。dU引物最好将dU设计在3%u2ca端或近%u2ca端。该法仅能用于引物以外试剂的处理。

4.优点：可以去除任何来源的污染；UNG处理可以和PCR扩增在同一个反应管内进行；由于扩增产物中有大量dU存在，可彻底消除污染源。

5.需注意的是掺入dUTP的DNA不应对产物的任何操作有影响，在进行PCR产物克隆时，应该转化UNG-（UNG缺陷）大肠杆菌受体菌，否则转化产物会被受体菌UNG消化掉。

（四）固相捕获法

用于去除标本中污染的核酸和杂质，原理如下：1）用一生物素标记的单链RNA探针与待扩核酸杂交，杂交区域是非扩增区；2）用包被链霉亲和素的固相载体来捕获带有生物素探针的杂交核酸，通过漂洗可去除污染的扩增产物和杂质；3）洗脱靶分子后用特异引物扩增非RNA探针杂交区域。第2）步的漂洗后可用PCR检测以确定标本是否被扩增产物或重组质粒污染。

（五）RS-PCR法（RNA-specific PCR）

也称为链特异性PCR，主要指用于RNA模板的特异性PCR法，该法可明显降低假阳性而不影响PCR的敏感性。其关键在于设计引物，逆转录引物的3%u2ca端（A区）有2 0个核苷酸左右为模板的特异性互不序列，5%u2ca端2 0个核苷酸（C区）为附加修饰碱基。与mRNA逆转录后，经超速离心使 cDNA与多余引物分开，再用和第二引物（C）以第一链cDNA为模板合成第二链cDNA，以后的PCR循环中用逆转录引物的B区和引物C进行扩增加尾cDNA，而污染的DNA或质粒DNA才不会被扩增。

（六）抗污染引物法

该对引物扩增时通过病毒DNA克隆如入质粒的位点。这一区域只存在完整的原病毒中，在重组质粒中，这一区域分成两个区域与克隆位点被。如果重组质粒污染了标本，也不能扩增出任何条带，即使出现了扩增带，其大小也与预期的不同。只有原病毒DNA才能被引物扩增，因此只要出现预期大小的扩增带就可以证明标本是阳性的，该法试用于环状靶分子系列。

四．其它PCR检测方法：

（一）两步法：是指在用套式PCR方法扩增某些含量低微的标本时，两对引物在同一个管中以简化步骤，减少污染。通常第一步进行20-25个循环，扩增外引物片段；第二步再进行10个循环，扩增内引物片段。两步法对内外引物的Tm值有特殊要求，即内外引物的退火温度高（如68℃），在此温度下内引物不与模板退火，然后降低退火温度（至55℃）再扩增内引物片段，这样，在操作过程中，仅打开PCR反应管一次，大大减少了污染的可能性。

（二）荧光法：亦称荧光PCR技术（fluoresence PCR, F-PCR），是1995年由美国PE公司首先研制成功的，它融汇了PCR的灵敏性、DNA杂交的特异性和光谱技术精确定量的优点，电脑同步跟踪，数据自动化处理，直接探测PCR过程中的变化以获得定量的结果，不需要做PCR后处理或检测，完全闭管操作。探针标记除用TET和FAM外，还可用HEX、JOE作为报告荧光，3′端的淬灭基团常用TAMRA。在探针保持完整时，荧光报告基团的荧光被荧光抑制基团淬灭，而在探针被切断后，荧光报告基团才发出报告荧光，且荧光的强度与PCR产物的数量呈正比。荧光检测仪器透过PCR管壁能直接检测到荧光信号的波长和长度变化。

主要有以下优点：

1.探针特异性强，假阳性率低； 2.操作快速，不需要PCR后处理；

3.定量范围宽，HBV 0.4fg-4000fg/ml(102-106 Dane′s particle/ml)； 4.闭管操作，PCR产物污染少； 5.灵敏度高。主要方法有： 1..荧光探针法：进行荧光PCR检测时，要求荧光探针必须完全与靶基因互补，长度以20-30个碱基为宜，必要时3′端磷酸化封闭，以防在扩增时作为引物延伸。该方法利用Taq酶的3′→5′聚合酶活性及5′→3′外切酶活性，可以在链延伸过程中实现链替换，并将被替换的探针切断，故可进行定性与定量检测。

荧光探针5′端标记的TAMRA，在480nm激发下产生530nm的红色荧光；3′端标记的FAM，激发后产生绿色荧光。PE公司推出的TaqMan系统，即采用双荧光探针，如配合使用PCR扩增与荧光检测合二为一的仪器，可进行实时（real-time）定量检测。2．分子信标法：分子信标（molecular beacon）是一个发夹样结构的特异探针，其环状部分与靶序列互补。在室温时，分子信标的发夹紧闭，荧光淬灭。PCR扩增时，随着温度升高，发夹松开，与单链模板特异结合，发出荧光。荧光强度与模板呈正比，故可用于PCR产物的定性及定量。

第五篇：船舶防污染预案

长江南京航道工程局东太湖综合整治试验段（行洪供水通道

吹填）第三标段项目经理部

船舶防污染预案

为有效处置船舶浸染突发事件，最大限度减少损失，根据《长江航道局安全预警和突发事件应急处置工作管理办法》及《长江南京航道工程局船舶防污染预案》要求，制定本预案。

一、组织人员分工

1、项目经理

督促安全主管制定和完善《船舶防污染预案》，检查船舶执行相关防污染规定，听取安全主管每月例行检查结果的汇报并提出完善性建议，船舶污染事故现场最高指挥员。

2、安全主管

负责检查、指导、监督项目部施工船舶的防污染工作：检查督促各船舶按规范配备防污设备、检查监督船舶防污染措施执行情况、在项目经理的指导下调查处理船舶污染事故。

3、船长

制定本船舶防污染措施并组织实施，定期对船舶防污设备的技术性能及使用情况进行自检，对安全主管每月例行检查发现的隐患进行清除，并将整改后的结果上报安全主管。船舶污染事故中配合安全主管进行调查和处理。

二、工作程序

（一）配备防污染设备

本项目所使用的船舶为一艘总吨位369吨重的绞吸式挖泥船、二十艘总吨位44至78吨重的液压抓斗式挖泥船和三十艘配套小吨位泥驳，所有船舶均需按照《内河航行船舶法定检验技术规则》对船舶防污染设备的配置定期做自检，并取得相关部门颁发的《内河船舶防止油污证书》。

（二）油类作业控制

1、作业前，必须检查管路、阀门，作好准备工作，堵好甲板排水孔，关好有关通海阀；

2、检查油类作业的有关设备，尤其是尾轴/甲板液压管系/甲板设备重点部位，使之处于良好状态；

3、对可能发生溢漏的地方，要设置集油容器；

4、受油双方协商联系信号，以受方为主，双方均应切实执行；

5、作业中要有足够人员值班，当班人员要坚守岗位，严格执行操作规程，掌握作业进度，防止跑油、漏油；

6、停止作业时，必须关好有关阀门；

7、收解输油软管时，必须事先用盲板将软管封好，或采取其他有效措施，防止软管克软管存油倒流入太湖；

8、将油类作业情况准确记入《油类记录簿》和轮机日志或值班记录簿；

（三）油污水和油泥的排放控制

船舶的压舱、洗舱（甲板）、机舱等含油污水及油泥，不得任意排放，应由油污水及油泥处理设施接收处理。确需排放时，应事先向海事部门提出书面申请，经批准后按规定条件在指定区域排放，排放应符合国家相关规定。

（四）洗舱水、压舱水和舱底水的排放控制

施工水域内船舶的压舱水、洗舱水、舱底水和生活污水，应委托污染物接收处理单位接收处理，不应任意排放。却需排放含油压舱水、洗舱水、舱底水的，应符合国际污染物排放的要求和标准，并在排放的24小时前报海事管理机构批准；排放生活污水的，须事先向海事管理机构报告。

（五）船舶垃圾倾倒控制

1、船舶垃圾是指船舶在生产施工过程中，产生的生活垃圾、生产垃圾两大类。生活垃圾主要来源于厨房垃圾、残肴饭菜等；生产垃圾包括破旧的滤芯、油污的棉纱和破布、灰渣、积垢、包装材料，船舶维修和保养产生的油漆废料、铁锈、机械设备的废料等垃圾。

2、船舶生活垃圾不得任意倒入港区或施工水域，平日应倒入带盖、不渗漏并有明显标志的生活垃圾储存容器或聚已烯材料制成的垃圾袋中，当船舶停靠后海基地或施工区域靠泊点时，可以向陆地指定的垃圾箱倾倒；航行船舶可在距最近陆地12海里以外的水域处理入海。并做好记录。

3、船舶生产垃圾（如油污的棉纱和破布、灰渣、积垢、铁锈等），港口施工船舶或停靠码头船舶应妥善将生产垃圾积存在铁桶内，存满时可向陆地指定垃圾箱倾倒，无指定垃圾箱时，应申请港口垃圾接收设备进行处理，不得任意倒入港口、施工水域；航行船舶可在距最近陆地12海里以外的水域处理入海。并做好记录。

4、一切塑料制品（包括塑料合成缆绳及一切粒状、块状的塑料衬垫物料、包装材料、聚纤维织物、食品用具、塑料袋等塑料垃圾）任何时候不得投放入海。船上垃圾过多，无法续存时，应申请港口垃圾接收设备处理。

5、施工驳船甲板上的泥沙、混凝土、石块等生产垃圾、平时应收集在甲板上四周围蔽的区域，当船舶靠泊码头时，将垃圾送到码头垃圾箱中。

6、所有船舶不得任意在港内冲洗甲板和舱室，确需冲洗时，事先必须申请当地海事部门批准。

7、航行在内河的所有船舶，严禁排放任何船舶垃圾。

8、船舶航行或拖带航行，在距最近陆地25海里以外时，可将漂浮的垫舱材料、衬料等废料处理入海。

9、如系为保障船舶及船上人员安全或救护海上人命所必需的船舶，可以不按以上规定处理船舶垃圾。

10、船员如果发现其它船舶违章处理垃圾，或本船垃圾逸漏污染海域，或发现海面污染严重时，应立即报告船长和值班负责人，船长应迅速向当地海事部门报告有关情况。

11、对于海事部门污染事故的调查，每位船员应积极配合，提供有关资料和证明。

（六）污染报告

1、船舶发现本船工附近水域出现油迹，应立即查清原因，非本船造成的，应先知当地海事部门；

2、属本船造成的，船舶应立即查明污染原因，采取有效措施阻止污染源，防止污染继续扩大，并向有关主管部门报告；

3、发生大面积污染时，船长应立即向当地海事部门和项目部报告，并组织船员按《船上油污染应急计划》进行应急处理，防止污染扩散。

三、溢油控制措施

（一）船舶营运作业过程中的溢油

1、船舶应急反应程序

（1）作业过程中发生溢油事故，船长应立即向全体船员发出船舶溢油应急反应部署命令，全体船员按本船油应急反应部署表”规定的职责，迅速到达自己的岗位。

（2）船长立即向当地海事机关或最近的事机关以及局报告。（3）立即查找和确定泄漏源和原因，并采取控制措施。

（4）用吸油材料等油污清除设备和材料，将已溢流在甲板上油围住、收集在一起，使排泄到船外的溢油量限制在最小程度。

（5）在进行加装燃油作业中发生溢油事故时，应立即停止该项作业，在溢油事故原因未检出并清除之前，不准再进行该项作业。（6）尽快用围油栏或代替物等将溢入海面的油围信防止扩散，同时用吸附材料等回收溢油。

（7）最后用用消油剂将油污清除，但使用前必须得到海事部门的许可，而且必须使用符合技术标准要求的物品。

（8）在做最后处理之前，船上应精心地保管回收的污油和清洁使用过的材料。

（9）当本船无力清除海面溢油时，应立即请求有关单位援助。

（二）事故性溢油

1、发生事故时，船长必须优先采取以下措施： 船舶应首先保证人命安全，确定下列各项事情： ①检查是否有受伤的人员 ②判断是否需要救助（救生）③决定是否弃船

2、检查是否有油溢出或判断是否可能有油溢出，一旦有油溢了央保证船舶和人命安全的条件下，船长应立即采取控制溢油措施。

3、根据周围环境判断如果船舶继续停在出事地点可使事态进一步恶化，则应将船舶移到安全场所。

4、向当地海事部门报告，并根据溢油严重程度，如有必要向周围船舶救援。

5、对各种事故采取应急措施时，都必须考虑船舶的应力和稳性。

6、当船舶结构受损极其严重时，为防止和控制溢油，应采取减载措施。

7、采取措施以防止火灾和爆炸事故的发生。

四、善后处理工作

船舶在溢油处理完毕后，须做好现场清理和善后处理工作，配合项目部、南京航道工程局和海事主管部门调查。