第一篇：刘洁uint 4 初二第六 七周学案
Uint 4Whatdid you do last weekend ?
Section B
一、我爱记单词
1.跳 ___________________2.森林 ________3.自然的 __________4.疲倦的，疲劳的_____
5.移动 __________________ 6.呼叫，喊叫___________ 7.语言 _____________8.飞 _______________
9.惊奇，惊讶______________10.惊慌的，吓坏了的___________11.弄醒，醒___________________
二、短语大闯关
1.熬夜_____________2.对。。大声喊叫（生气）____________________________(不生气)
3.把。。弄醒____________4.向。。外看______________5.使。。保持______________
6.看见某人正在做某事 ____________________7。开始做某事 ＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿
三、句子我最棒
１．在那里我们搭起帐篷，生火来取暖并在上面煮食物。
There we ________ _______ our tents and _______a fireto ________ ______ warm and cook food on..2.我们在帐篷外面看时，我们看到一条大蛇在火堆附近睡觉。
When we _______________of ourtent , we ________ a big snake _________ near the fire.3.我们呼喊我们的父母以便让他们知道险情。
We _________________ our parents to ______ them _______ about the danger.4.这样弄醒了蛇，蛇移进了湖附近的森林里。
This _______ the snake ______ , and it ________ ______ the forest near the lake.四． 大显身手
1.To my __________ , he passed the test.A surpriseBsurprisedC surprisingD surprises
2.I saw a girl ______ a horse
A ridesB ridingCto rideD rode
3.The boy needs to have a rest.Don’t _____
Awake up himB stay up himC wake him upDstay him up
4.I ______ the picture on the wall just now.AputtedupB putted onC putonD put up
5.The boy was so ______ that he shouted _________everyone.AangrilyatBangrily;toC angry;atDangry;to
6.There are many _________ on the farm.A sheepsB sheepC mouses
7.Don’t ______ too late , or you’ll feel tired tomorrow.A.wake upBputupCstay up
Uint 4Whatdid you do last weekend ?
Section A
一、我爱记单词
1..扎营；搭帐篷 _________2.绵羊（复数）________3.自然的 __________4.疲倦的，疲劳的_____
5.老鼠（复数）___________6.呼叫，喊叫___________ 7.语言 _____________8.飞 _______________
9.惊奇，惊讶______________10.惊慌的，吓坏了的___________11.弄醒，醒___________________
二、短语大闯关
1.以...身份工作___________2.跑开 ____________3.在湖边野营_____________
4.告诉某人关于某事 ____________5.在星期六早上______________________
三、句子我最棒
1.我在自然历史博物馆当导游。
I ____________ a guide_______the NaturalHistory Museum.2.我向游客讲述蝴蝶及他们的生活习惯
I_______the visitors _______ their livinghabits.3.为了看足球赛我熬到深夜。
I _____________________ to watch the soccer game.四、大显身手
1._______ did you visit the Science Museum?
----three months ago.A.WhenB.WhereC.WhatD.Which
2.My weekend was great.(就划线部分提问)
_______________your weekend ?
3.They visited the Palace Museumyesterday.(否定句)
They ________ _______ the Palace Museumyesterday.4.We travelled to Dalian by air last summer.(就划线部分提问)
________________you _______ to Dalianlast summer?
5.I went swimming with my friends.(就划线部分提问)
________________you ________ swimming with?
6.My father travelled to England last month.(就划线部分提问)
____________your father ________ last month?
7._____ a teacher ,Mr.Wang thinks it;s ver important to teach the students how to learn.A: FromB.WithC.AsD.Of
第二篇：初二第11-13周足球
第11周 第（1）课
年级
初二年级(1—8)班
时间：2008年11月
授课教师：许靖东、艾斯克 教学内容 ：足球教学 教学目标
1、积极参与活动和练习，能在学习中体验乐趣，在运动中展示自我，增强自信。
2、熟悉球性，巩固和提高对球的控制能力，发展个人技术；了解下底传中的技术要求和动作要领，掌握包抄的时机，培养战术意识。
3、发展足球专项身体素质，学习利用足球运动锻炼身体的方法。学会与同伴合作，发挥团队精神，提高人际交往能力。重难点：
重点：支撑脚的位置和脚触球的部位
难点：支撑腿的弯曲、主动迎球后撤时间的掌握
教学设计
准备部分 1.课堂常规
2.绕田径场跑1200米.3.做徒手操.(1)头部运动 2*8(2)扩胸运动 2*8(3)振臂运动 2*8(4)体转运动 2*8(5)腹背运动 2*8(6)压腿运动 2*8(7)手腕脚踝运动 2*8 教师口令洪亮,精神饱满.培养一名学生在队伍前面带操.△
○○○○○○ ○○○○○○ ●●●●●● ●●●●●●
1.跑步时不要说话.2.做徒手操时要认真.3.积极配合体委工作.基本部分 学法指导：
一、尝试性踢、停球练习
教师提示：正脚背、外脚内侧、脚外侧、脚尖、脚后跟等
二、脚内侧踢、停球
三、两人一球相距5米踢、停球练习
四、游戏（点球射门）
重难点突破：
利用体验与探究提高学生的学习兴趣 预测： 矫正：
结束部分：
1、教师带领学生进行以下肢为主的放松活动。2.、探究适合自己的放松方式。
3、安排学生收拾器材归还。
4、师生再见。
课后记：
第11周 第（2）课
年级
初二年级(1—8)班
时间：2008年11月
授课教师：许靖东、艾斯克 教学内容 ：足球教学 教学目标
1、积极参与活动和练习，能在学习中体验乐趣，在运动中展示自我，增强自信。
2、熟悉球性，巩固和提高对球的控制能力，发展个人技术；了解下底传中的技术要求和动作要领，掌握包抄的时机，培养战术意识。
3、发展足球专项身体素质，学习利用足球运动锻炼身体的方法。学会与同伴合作，发挥团队精神，提高人际交往能力。重难点：
重点：支撑脚的位置和脚触球的部位
难点：支撑腿的弯曲、主动迎球后撤时间的掌握
教学设计
准备部分 1.课堂常规
2.绕田径场跑1200米.3.做徒手操.(1)头部运动 2*8(2)扩胸运动 2*8(3)振臂运动 2*8(4)体转运动 2*8(5)腹背运动 2*8(6)压腿运动 2*8(7)手腕脚踝运动 2*8 教师口令洪亮,精神饱满.培养一名学生在队伍前面带操.△
○○○○○○ ○○○○○○ ●●●●●● ●●●●●●
1.跑步时不要说话.2.做徒手操时要认真.3.积极配合体委工作.基本部分 学法指导：
1、原地脚背内侧传接球，部位准确，小腿摆动迅速
2、距离25—30米，左、右脚各50—60次
× × × ×
× × × ×
形式：集中讲解示范，二列横队练习教法及要求：
1、移动中注意重心变化
2、假动作逼真，过人迅速
3、变向变速均要快捷
4、无障碍前交叉假动作过人
5、有障碍假动作过人
重难点突破：
1、重点：传球的准确性与针对性；包抄跑位及时；对球的状态判断正确。2.、难点：在运动中作出正确的判断并及时调整。预测： 矫正：
结束部分：
1、教师带领学生进行以下肢为主的放松活动。2.、探究适合自己的放松方式。
3、安排学生收拾器材归还。
4、师生再见。
课后记：
第12周 第（1）课
年级
初二年级(1—8)班
时间：2008年11月
授课教师：许靖东、艾斯克 教学内容 ：足球教学 教学目标
1、积极参与活动和练习，能在学习中体验乐趣，在运动中展示自我，增强自信。
2、熟悉球性，巩固和提高对球的控制能力，发展个人技术；了解下底传中的技术要求和动作要领，掌握包抄的时机，培养战术意识。
3、发展足球专项身体素质，学习利用足球运动锻炼身体的方法。学会与同伴合作，发挥团队精神，提高人际交往能力。重难点：
重点：支撑脚的位置和脚触球的部位
难点：支撑腿的弯曲、主动迎球后撤时间的掌握
教学设计
准备部分 1.课堂常规
2.绕田径场跑1200米.3.做徒手操.(1)头部运动 2*8(2)扩胸运动 2*8(3)振臂运动 2*8(4)体转运动 2*8(5)腹背运动 2*8(6)压腿运动 2*8(7)手腕脚踝运动 2*8 教师口令洪亮,精神饱满.培养一名学生在队伍前面带操.△
○○○○○○ ○○○○○○ ●●●●●● ●●●●●●
1.跑步时不要说话.2.做徒手操时要认真.3.积极配合体委工作.基本部分 学法指导：
1、掌握基本技术较差的学生个别练习
2、教师个别指导
3、参加比赛的学生合理运用所学技术 形式与教法：
二列横队，足球场慢跑，听哨音后快速冲刺20米。连续8次。
× × × × ×
重难点突破：
1、重点：传球准确，跑位及时到位。2.、难点：传跑配合默契，传球具有隐蔽性 预测： 矫正：
结束部分：
1、教师带领学生进行以下肢为主的放松活动。2.、探究适合自己的放松方式。
3、安排学生收拾器材归还。
4、师生再见。
课后记：
第12周 第（2）课
年级
初二年级(1—8)班
时间：2008年11月
授课教师：许靖东、艾斯克 教学内容 ：足球教学 教学目标
1、积极参与活动和练习，能在学习中体验乐趣，在运动中展示自我，增强自信。
2、熟悉球性，巩固和提高对球的控制能力，发展个人技术；了解下底传中的技术要求和动作要领，掌握包抄的时机，培养战术意识。
3、发展足球专项身体素质，学习利用足球运动锻炼身体的方法。学会与同伴合作，发挥团队精神，提高人际交往能力。重难点：
重点：支撑脚的位置和脚触球的部位
难点：支撑腿的弯曲、主动迎球后撤时间的掌握
教学设计
准备部分 1.课堂常规
2.绕田径场跑1200米.3.做徒手操.(1)头部运动 2*8(2)扩胸运动 2*8(3)振臂运动 2*8(4)体转运动 2*8(5)腹背运动 2*8(6)压腿运动 2*8(7)手腕脚踝运动 2*8 教师口令洪亮,精神饱满.培养一名学生在队伍前面带操.△
○○○○○○ ○○○○○○ ●●●●●● ●●●●●●
1.跑步时不要说话.2.做徒手操时要认真.3.积极配合体委工作.基本部分 学法指导：
1、足球半场内进行，掌握较好的学生进行一次传接球
2、注意传接球的合理性
3、教师个别进行纠正指导
××××
××××
重难点突破：
1、重点：传球准确，跑位及时到位。2.、难点：传跑配合默契，传球具有隐蔽性 预测： 矫正：
结束部分：
1、教师带领学生进行以下肢为主的放松活动。2.、探究适合自己的放松方式。
3、安排学生收拾器材归还。
4、师生再见。
课后记：
第13周 第（1）课
年级
初二年级(1—8)班
时间：2008年11月
授课教师：许靖东、艾斯克
教学内容 ：足球教学测试（女生）教学目标
1、熟悉球性，巩固和提高对球的控制能力，发展个人技术；了解下底传中的技术要求和动作要领，掌握包抄的时机，培养战术意识。
2、发展足球专项身体素质，学习利用足球运动锻炼身体的方法。学会与同伴合作，发挥团队精神，提高人际交往能力。
3、通过测试了解学生的学习情况。
重难点：
重点：支撑脚的位置和脚触球的部位
难点：支撑腿的弯曲、主动迎球后撤时间的掌握
教学设计
准备部分 1.课堂常规
2.绕田径场跑1200米.3.做徒手操.(1)头部运动 2*8(2)扩胸运动 2*8(3)振臂运动 2*8(4)体转运动 2*8(5)腹背运动 2*8(6)压腿运动 2*8(7)手腕脚踝运动 2*8 教师口令洪亮,精神饱满.培养一名学生在队伍前面带操.△
○○○○○○ ○○○○○○ ●●●●●● ●●●●●●
1.跑步时不要说话.2.做徒手操时要认真.3.积极配合体委工作.基本部分 学法指导：
1、足球半场内进行，掌握较好的学生进行一次传接球，根据传教球的情况教师给出评价。
2、注意传接球的合理性。
3、女生进行小场足球教学比赛。
4、男生进行自主练习。
重难点突破：
1、重点：传球准确，跑位及时到位。2.、难点：传跑配合默契，传球具有隐蔽性 预测： 矫正：
结束部分：
1、教师带领学生进行以下肢为主的放松活动。2.、探究适合自己的放松方式。
3、安排学生收拾器材归还。
4、师生再见。
课后记：
第13周 第（2）课
年级
初二年级(1—8)班
时间：2008年11月
授课教师：许靖东、艾斯克 教学内容 ：足球教学测试 教学目标
1、熟悉球性，巩固和提高对球的控制能力，发展个人技术；了解下底传中的技术要求和动作要领，掌握包抄的时机，培养战术意识。
2、发展足球专项身体素质，学习利用足球运动锻炼身体的方法。学会与同伴合作，发挥团队精神，提高人际交往能力。
3、通过测试了解学生的学习情况。
重难点：
重点：支撑脚的位置和脚触球的部位
难点：支撑腿的弯曲、主动迎球后撤时间的掌握
教学设计
准备部分 1.课堂常规
2.绕田径场跑1200米.3.做徒手操.(1)头部运动 2*8(2)扩胸运动 2*8(3)振臂运动 2*8(4)体转运动 2*8(5)腹背运动 2*8(6)压腿运动 2*8(7)手腕脚踝运动 2*8 教师口令洪亮,精神饱满.培养一名学生在队伍前面带操.△
○○○○○○ ○○○○○○ ●●●●●● ●●●●●●
1.跑步时不要说话.2.做徒手操时要认真.3.积极配合体委工作.基本部分 学法指导：
1、足球半场内进行，掌握较好的学生进行一次传接球，根据传教球的情况教师给出评价。
2、注意传接球的合理性。
3、男生进行小场足球教学比赛。
4、女生进行自由活动。
重难点突破：
1、重点：传球准确，跑位及时到位。2.、难点：传跑配合默契，传球具有隐蔽性 预测： 矫正：
结束部分：
1、教师带领学生进行以下肢为主的放松活动。2.、探究适合自己的放松方式。
3、安排学生收拾器材归还。
4、师生再见。
课后记：
第三篇：第六七课知识总结
文化生活第六、七课知识总结
1、中华文化的基本特征有哪些？--------源远流长、博大精深、包容性
2、中华文化的博大精深体现在哪些方面？
（1）独特性-----独树一帜，独领风骚。
（2）区域性-----一方水土，一方文化。
（3）民族性-----中华之瑰宝，民族之骄傲。
3、中华文化与民族文化的关系？
①中华文化呈现着多种民族文化的丰富色彩；各民族文化既有中华文化的共性，又有各自的民族特性。②各民族文化都是中华文化宝库中的瑰宝，都是中华民族的骄傲；各兄弟民族的文化相互交融、相互促进，共同熔铸了灿烂的中华文化。
③各族人民对中华文化的强烈认同感和归属感，显示了中华民族厚重的文化底蕴和强大的民族凝聚力。
4、为什么要弘扬和培育中华民族精神？
［重要性］中华民族精神，深深植根于绵延数千年的优秀文化传统之中，始终是维系中华各族人民共同生活的精神纽带，支撑中华民族生存、发展的精神支柱，推动中华民族走向繁荣、强大的精神动力，是中华民族之魂。
［必要性］
① 面对世界范围各种思想文化的相互激荡，要使全体人民始终保持昂扬向上的精神状态，必
须更高地举起民族精神的火炬，把弘扬和培育民族精神作为文化建设极为重要的任务。
②弘扬和培育中华民族精神是提高全民族综合素质的必然要求。
③弘扬和培育中华民族精神是不断增强我国国际竞争力的要求。
④弘扬和培育中华民族精神是坚持社会主义道路的需要。
⑤弘扬和培育中华民族精神是发展中国特色社会主义先进文化、建设社会主义文化强国的客观要求。⑥有利于增强全民族的文化创造力，树立高度的文化自觉和文化自信，建设社会主义核心价值体系。⑦有利于维护国家统一、民族团结，有利于全面建设小康社会，实现中华民族的伟大复兴。
5、如何大力弘扬和培育民族精神？
（1）要发挥 “主心骨”的作用，即充分发挥在社会主义理论体系在现代化建设中的指导作用。
（2）要继承和发扬中华民族的优良传统，包括中华民族历史上形成的优秀文化传统和我们党在长期革命斗争和建设实践中形成的优良传统。
（3）要正确对待外来思想文化的影响，既要注意借鉴、吸收各国创造的先进文明成果和长处，又要警惕西方敌对势力对我国进行西化、分化的图谋。
（4）要与弘扬时代精神相结合，既要弘扬以爱国主义为核心的民族精神，又要不断注入以改革创新为核心的时代精神
（5）铸造中华民族的精神支柱，为中华民族的生存和发展强基固本。
(6)以科学发展观为指导，立足于社会主义现代化建设的实践，做中华民族精神的传播者、弘扬者和建设者，努力铸造中华文化新辉煌。
第四篇：商业银行第六七章
第六章企业贷款
短期贷款:银行对企业发放的短期流动资金贷款具有自动清偿的性质。
定期贷款:这是指贷款期限在1年以上的贷款。由于企业定期贷款不具有自动清偿性质，只能从企业的收益或借新债来偿还 企业借款理由的分析.:销售增长导致的借款 2.营业周期减慢引起的借款 3.固定资产购买引起的借款4.其他原因引起的借款 借款企业的信用分析:为了确定企业的未来还款能力如何。影响企业未来还款能力的因素主要有：财务状况、现金流量、信用
支持以及非财务因素企业的财务状况和现金流量构成企业的第一还款来源，而信用支持为第二还款来源，非财务因素虽不构成直接还款来源，但会影响企业的还款能力。
对借款企业的财务分析1.审查借款人的损益表 ：毛利润率=毛利/销售收入净额，营业利率=销售利润/销售收入净额，净利润率=净利润/销售收入净额（每一元获利指标），股利发放率=股利/净利润，直接成本比率=销售成本/销售收入
2.审查借款人资产负债表：借助于以下三大比率指标进行：营运效率：总资产周转率=销售收入净额/资产总额（每一元创造销售收入）。固定资产周转率=销售收入净额/固定资产净值。资产报酬率=税前净利润/资产总额。权益报酬率=净利润/有形净资产。、杠杆比率：资产负债率=负债总额/资产总额。负债与所有者权益比率=负债总额/所有者权益总额。负债与有形资产比率=负债总额/有形资产。利息保障倍数=税前净利润+利息费用/利息费用。和流动比率(流动比率=流动资产/流动负债与速动比率=现金+可转让证券+应收账款净额/流动负债）。
对借款企业现金流量的分析：1.净利润不能偿还贷款只有现金才能偿还贷款。
2.现金流量分析的内容
现金流量包括现金流入量、现金流出量和现金净流量；现金净流量为现金流入量与现金流出量之差。计算方法为：
现金净流量＝经营活动的现金净流量（销货现金、利息与股息现金、增值税销款和出口退税）＋投资活动的现金
净流量（出售证券、出售固定资产、收回对外资本金）＋融资活动的现金净流量（短长期贷款、发行股票与贷款）借款企业的担保分析 ：1）抵押:不转移财产占有权 2）质押:将其动产或权利移交银行占有3）保证:由保证人按照约定发行债
务或者承担相应的责任4）附属合同:其他债权人签署的第二责任的协议，为银行提供对其他债权人的债务清偿优先权。成本加成贷款定价法（1）银行筹集足够的可贷资金的成本；（2）银行的经营成本（工资和物质设施的成本）；
（3）银行对违约风险所进行的必要补偿；（4）每笔贷款的适当利润以保证银行的所有者获得必要的收益。因此有： 贷款利率＝筹集资金的边际成本＋银行的其他经营成本＋预计违约风险补偿费用＋银行预期的利润
价格领导模型贷款利率的公式为：贷款利率＝优惠利率（成本和银行预期的利润）＋加成部分（违约风险贴水＋期限风险贴水）成本—收益定价法：（1）贷款产生的总收入；（2）借款人实际使用的资金额；
（3）贷款总收入与借款人实际使用的资金额之间的比率为银行贷款的税前收益。
成本—收益定价法：：（1）贷款产生的总收入；（2）借款人实际使用的资金额；
（3）贷款总收入与借款人实际使用的资金额之间的比率为银行贷款的税前收益。
第七章 个人贷款
个人贷款的特点：1.高风险性（1）消费信贷的还款来源不稳定，波动性较大。（2）信息不对称风险比较严重。
（3）贷款结构内含较高的利率风险和违约风险。
2.高收益性：消费信贷的高风险性决定了它也具有高收益性。消费信贷的收益主要来自于利息收入与其他相关手续费。
3.周期性：消费信贷的周期性体现在较高的经济周期敏感性。4.利率不敏感性
个人信用评估方法：1.Z计分模型：是以会计资料为基础的多变量信用评分模型，较为明确地反映借款人在一定时期内的信用
状况，Z值越大，信用就越好；Z值越小，信用就越差。2．“5C”判断法3．信贷记分法
影响个人贷款定价的因素：1.资金成本2.风险3.利率政策4.盈利目标5.市场竞争6.担保7.规模 8.选择性因素
个人贷款定价模型：1.成本加成定价模型贷款价格=资金成本+贷款费用+风险补偿费+目标利润2．基准利率加点定价模型（价
格领导模型）3．客户盈利分析模型：来源于某客户的总收入=为该客户提供的成本+银行的目标利润
个人贷款实际利息计算方法。1.短期消费信贷实际利息计算方法：年百分率法、单一利率法、贴现率法、追加贷款率法、78s 条
款法、浮动利率法以及补偿存款余额法等。2．长期消费信贷实际利息计算方法（1）固定利率抵押贷款的定价（2）可调整利率抵押贷款的定价（3）有首付情况下的消费者抵押贷款定价
制约农村个人信贷的主要因素有： 1）收入预期不稳定。2）信用环境差。3）个人信贷运作机制存在缺陷、操作过程和办理
手续繁琐、收费环节多、收费标准高等问题
第五篇：微生物第六七章总结（推荐）
微生物的生长和控制
第一节：测定生长繁殖的方法
一.测生长量
(一)直接法：有粗放的测体积法和精确的称干重法。(二)间接法：1.比浊法2.生理指标法 二.计繁殖数
(一)直接法：指用计数板(例如血球计数板)在光学显微镜下直接观察细胞并进行计数的方法。此法十分常用,但得到的数目是包括死细胞在内的总菌数。可以采用特殊的染色法计算活细胞。
(二)间接法：
1.平板菌落计数法：可用浇注平板或涂布平板或滚管法等方法进行。2.厌氧菌的菌落计数法：亨盖特滚管培养法。
第二节微生物的生长规律
一.单细胞微生物的典型生长曲线
它只适合单细胞微生物如细菌和酵母菌,非典型的丝状菌生长曲线缺乏指数生长期, 与此期相当的只是培养时间与菌丝体干重的立方根成直线关系的一段快速生长时期。根据微生物的生长速率常数, 即每小时分裂次数(的不同, 一般可把典型生长曲线粗分为延滞期、指数期、稳定期和衰亡期等4个时期。(一)延滞期：
延滞期又称停滞期、调整期或适应期。
影响延滞期长短的因素：菌种类型，接种龄，接种量，培养基成分。(二)指数期：
指数期又称对数期
在指数期中,有 3 个重要参数,其相互关系及计算方法在书P155 影响对数期的因素：菌种，营养成分，营养物质浓度，培养温度(三)稳定期：
细胞内开始积聚糖原、异染颗粒和脂肪等内含物;芽孢杆菌一般在这时开始形成芽孢;在这时开始以初生代谢物作前体,合成抗生素等对人类有用的各种次生代谢物。
稳定期到来的原因是:①营养物尤其是生长限制因子的耗尽;②营养物的比例失调;③有害代谢产物的累积;④物理化学条件越来越不适宜等等。(四)衰亡期：
有的微生物在这期会进一步合成或释放对人类有益的抗生素等次生代谢物;而在芽孢杆菌中, 往往在此期释放芽孢;等等。第三节影响微生物生长的主要因素
其中最主要的温度、pH和氧气。一.温度：
生长温度三基点:最低生长温度、最适生长温度和最高生长温度。在不同温度下，微生物的代谢产物可能会发生改变。二.PH：除不同种类微生物有其最适生长PH外, 即使同一种微生物在其不同的生长阶段和不同的生理、生化过程, 也有不同的最适PH要求。三.氧气：
按照微生物与氧的关系,可把它们粗分成好氧微生物和厌氧微生物两大类。细分为专性好氧菌，兼性厌氧菌，微好氧菌，耐氧菌和厌氧菌。关于厌氧菌不能存活于氧气环境中的解释，现在普遍认为是因为厌氧菌中不存在过氧化氢酶和SOD（超氧化物歧化酶）
第四节微生物培养法概论
一.实验室培养法(一)固体培养法
1.好氧菌的固体培养：主要用试管斜面、培养皿琼脂平板。
2.厌氧菌的固体培养：高层琼脂柱，厌氧培养皿，亨盖特滚管技术(二)液体培养法
1.好氧菌的液体培养：(1)试管液体培养;(2)三角瓶浅层液体培养;(3)摇瓶培养
第五节有害微生物的控制
灭菌:采用强烈的理化因素使任何物体内外部的一切微生物永远丧失其生长繁殖能力的措施,称为灭菌.消毒:是一种采用较温和的理化因素,仅杀死物体表面或内部一部分对人体或动、植物有害的病原菌, 而对被消毒的对象基本无害的措施。
防腐:防腐就是利用某种理化因素完全抑制霉腐微生物的生长繁殖, 即通过制菌作用防止食品、生物制品等对象发生霉腐的措施。例如：低温，缺氧，干燥，高渗，高酸，高醇，防腐剂。
一.物理灭菌因素的代表——高温 1.干热灭菌法
把金属器械或洗净的玻璃器皿放入电热烘箱内, 在150～170℃下维持1～2 h后, 可达到彻底灭菌(包括细菌的芽孢)的目的。2.湿热灭菌法(1)常压法
①巴氏消毒法：此法可杀灭物料中的无芽孢病原菌(如牛奶中的结核分枝杆菌或沙门氏菌), 又不影响其原有风味。
具体方法可分两类: 第一类是经典的低温维持法(LTH),例如用于牛奶消毒只要在63℃下维持30 min即可;第二类是较现代的高温瞬时法（HTST）,用此法作牛奶消毒时只要在72℃下保持15 s。
③间歇灭菌法：适用于不耐热培养基的灭菌，将待灭菌的培养基放在80～100℃下蒸煮 15～60min,以杀灭其中所有的微生物营养体, 然后放至室温或 37℃下保温过夜, 诱使其中残存的芽孢发芽,第二天再以同法蒸煮和保温过夜, 如此连续重复 3 天即可在较低的灭菌温度下同样达到彻底灭菌的良好效果。(2)加压法
①常规加压蒸气灭菌法：一般称作“高压蒸气灭菌法”，一般要求为121℃，时间维持15-20min ②连续加压蒸气灭菌法:在发酵行业里也称“连消法”。此法仅用于大型发酵厂的大批培养基灭菌。
利用温度杀菌时几个关键的数值：
①D值是指在一定的致死温度下，90％的活菌被杀死所需的时间（min),即为D值。
②Z值是指如果在加热致时间曲线中，加热时间缩短90％，所需升高的温度，这所需升高的温度即为z值，或者说杀菌时间变化10倍，相应的温度变化值。影响加压蒸气灭菌效果的因素： 1.灭菌物体含菌量
2.灭菌锅内空气排除程度 3.灭菌对象的 pH 4.灭菌对象的体积 5.加热与散热速度
微生物的遗传变异和育种
第一节遗传变异的物质基础 个基本概念:(1)遗传型：又称基因型, 指某一生物个体所含有的全部遗传因子即基因的总和。
(2)表型：指某一生物体所具有的一切外表特征和内在特性的总和,是其遗传型在合适环境条件下通过代谢和发育而得到的具体体现。
(3)变异：指生物体在某种外因或内因的作用下所引起的遗传物质结构或数量的改变,亦即遗传型的改变。
(4)饰变：即一种不涉及遗传物质结构改变而只发生在转录、转译水平上的表型变化。一.三个证明遗传物质是核酸的经典实验：(一)经典转化实验：肺炎双球菌的转化实验(二)噬菌体感染实验(三)植物病毒的重建实验 二.原核生物的质粒简介：
(1)F质粒：又称F因子、致育因子或性因子,是E.coli等细菌决定性别并有转移能力的质粒。(2)R质粒：又称R因子，为细菌提供抗药性。(3)Col质粒：编码细菌素的质粒。
(4)Ti质粒：即诱癌质粒或冠瘿质粒。Ri质粒与Ti质粒类似。
(5)mega质粒：即巨大质粒,存在于根瘤菌属中, 其上有一系列与共生固氮相关的基因。(6)降解性质粒：只在 Pseudomonas(假单胞菌属)中发现。这类质粒可为降解一系列复杂有机物的酶编码,从而使这类细菌在污水处理、环境保护等方面发挥特有的作用。(7)2μm质粒存在于酵母菌细胞中。
第二节基因突变和诱变育种
一.基因突变
（一）突变类型 1.营养缺陷型：某一野生型菌株因发生基因突变而丧失合成一种或几种生长因子、碱基或氨基酸的能力,因而无法再在基本培养基(MM)上正常生长繁殖的变异类型。
2.抗性突变型：指野生型菌株因发生基因突变,而产生的对某化学药物或致死物理因子的抗性变异类型。6.产量突变型：通过基因突变而产生的在代谢产物产量上明显有别于原始菌株的突变株, 称产量突变型。产量高则为正变株，产量低则为负变株。
（二）基因突变的特点
①自发性②不对应性③稀有性⑤可诱变性⑥稳定性⑦可逆性
（三）基因突变的机制
1.诱发突变：诱发突变简称诱变,是指通过人为的方法, 利用物理、化学或生物因素显著提高基因自发突变频率的手段。凡具有诱变效应的任何因素, 都称诱变剂。(1)碱基的置换：因它只涉及一对碱基被另一对碱基所置换。
置换又可分两个亚类:一类称转换,即DNA链中一个嘌呤被另一个嘌呤或是一个嘧啶被另一个嘧啶所置换;另一类称颠换,即一个嘌呤被另一个嘧啶或是一个嘧啶被另一个嘌呤所置换。①直接引起置换的诱变剂: 例如亚硝酸、羟胺和各种烷化剂等 ②间接引起置换的诱变剂: 5-溴尿嘧啶等
(2)移码突变：指诱变剂会使 DNA 序列中的一个或少数几个核苷酸发生增添(插入)或缺失,从而使该处后面的全部遗传密码的阅读框架发生改变。能引起移码突变的因素是一些吖啶类染料。
(3)染色体畸变：包括染色体结构上的缺失、重复、插入、易位和倒位,也包括染色体数目的变化。某些强烈理化因子, 如电离辐射(X射线等)和烷化剂、亚硝酸等会导致染色体畸变。2.自发突变：指生物体在无人工干预下自然发生的低频率突变。
（四）紫外线对 DNA 的损伤及其修复
嘧啶对UV的敏感性比嘌呤强得多, 其光化学反应产物主要是嘧啶二聚体(TT, TC, CC)和水合物,相邻嘧啶形成二聚体后, 造成局部DNA分子无法配对。二.突变与育种
(一)自发突变与育种 1.从生产中育种 2.定向培育优良菌株(二)诱变育种
1.诱变育种是指利用物理、化学等诱变剂处理均匀而分散的微生物细胞群, 在促进其突变率显著提高的基础上,采用简便、快速和高效的筛选方法, 从中挑选出少数符合目的的突变株,以供科学实验或生产实践使用。2.艾姆斯试验
艾姆氏试验是一种利用细菌营养缺陷型的回复突变来检测环境或食品中是否存在化学致癌剂的简便有效方法。（三致作用：致癌致畸致突变）实验菌种：鼠伤寒沙门氏菌的组氨酸营养缺陷型
试验方法：是在含待测可疑“三致”物的试样中,加入鼠肝匀浆液, 经一段时间保温后,吸入滤纸片中, 然后将滤纸片放置于上述平板中央。经培养后,出现结果。有三种结果
①在平板上无大量菌落产生, 说明试样中不含诱变剂;②在纸片周围有一抑制圈, 其外周出现大量菌落, 说明试样中有某种高浓度的诱变剂存在;③在纸片周围长有大量菌落, 说明试样中有浓度适当的诱变剂存在。加入鼠肝匀浆的作用：因许多化学物质原先并非诱变剂或致癌剂,只有在进入机体并在肝脏的解毒过程中, 受到肝细胞中一些加氧酶的作用,才形成有害的环氧化物或其他激活态化合物, 故试验中先要加入鼠肝匀浆液保温;3.营养缺陷型突变株的筛选方法
①与筛选营养缺陷型突变株有关的 3 类培养基: 基本培养基(MM,符号为[-]):仅能满足某微生物的野生型菌株生长所需要的最低成分的组合培养基,称基本培养基。
完全培养基(CM,符号为[ + ]):凡可满足一切营养缺陷型菌株营养需要的天然或半组合培养基, 称完全培养基。
补充培养基(SM,符号为[ A]或[B]等):凡只能满足相应的营养缺陷型突变株生长需要的组合或半组合培养基, 称补充培养基。
②与营养缺陷型突变有关的 3 类遗传型个体: 野生型:指从自然界分离到的任何微生物在其发生人为营养缺陷突变前的原始菌株。
营养缺陷型:野生型菌株经诱变剂处理后, 由于发生了丧失某酶合成能力的突变,因而只能在加有该酶合成产物的培养基中才能生长, 这类突变菌株称为营养缺陷型突变株。
原养型:一般指营养缺陷型突变株经回复突变或重组后产生的菌株,其营养要求在表型上与野生型相同。
(3)营养缺陷型的筛选方法 ①诱变剂处理
②淘汰野生型：通过抗生素法或者菌丝过滤法即可 ③检出缺陷型：
夹层培养法: 先在培养皿底部倒一薄层不含菌的基本培养基（MM）,待凝,添加一层混有经诱变剂处理菌液的基本培养基（含菌MM）,其上再浇一薄层不含菌的基本培养基（MM）,遂成“三明治”状。经培养后,对首次出现的菌落用记号笔一一标在皿底。然后, 再向皿内倒上一薄层第四层培养基——完全培养基（CM）。再经培养后,全长出形态较小的新菌落, 它们多数都是营养缺陷型突变株。限量补充培养法 逐个检出法 影印平板法
④鉴定缺陷型:可借生长谱法进行。
第三节基因重组与杂交育种
真核微生物中的有性杂交、准性杂交、原生质体融合以及原核生物中的转化、转导、接合和原生质体融合等。
一.原核生物的基因重组
特点为: ①片段性,仅一小段DNA序列参与重组;②单向性,即从供体菌向受体菌(或从供体基因组向受体基因组)作单方向转移;③转移机制独特而多样,如接合、转化和转导等。(一)转化
1.定义：受体菌直接吸收供体菌的DNA片段而获得后者部分遗传性状的现象,称为转化或转化作用。通过转化方式而形成的杂种后代,称转化子。
2.感受态：凡能发生转化, 其受体细胞必须处于感受态。感受态是指受体细胞最易接受外源 DNA 片段并能实现转化的一种生理状态。(二)转导 1.定义：通过缺陷噬菌体的媒介,把供体细胞的小片段 DNA 携带到受体细胞中,通过交换与整合, 使后者获得前者部分遗传性状的现象, 称为转导。
2.普遍转导：通过极少数完全缺陷噬菌体对供体菌基因组上任何小片段DNA进行“误包” , 而将其遗传性状传递给受体菌的现象,称为普遍转导。
3.局限转导：指通过部分缺陷的温和噬菌体把供体菌的少数特定基因携带到受体菌中, 并与后者的基因组整合、重组, 形成转导子的现象。(三)接合
1.定义：供体菌(“雄性”)通过性菌毛与受体菌(“雌性”)直接接触, 把 F 质粒或其携带的不同长度的核基因组片段传递给后者, 使后者获得若干新遗传性状的现象, 称为接合。2.E.coli的4种接合型菌株
根据F质粒在细胞内的存在方式, 可把 E.coli 分成 4 种不同接合型菌株
(1)F+ 菌株即“雄性”菌株, 指细胞内存在一至几个F质粒, 并在细胞表面着生一至几条性菌毛的菌株。
(2)F-菌株即“雌性”菌株, 指细胞中无 F 质粒、细胞表面也无性菌毛的菌株。它可通过与F+菌株或F’菌株的接合而接受供体菌的F质粒或F’质粒, 从而使自己转变成“雄性”菌株;也可通过接合接受来自Hfr菌株的一部分或一整套核基因组 DNA(3)Hfr菌株:在Hfr菌株细胞中, 因F质粒已从游离态转变成在核染色体组特定位点上的整合态, 故Hfr菌株与F-菌株相接合后, 发生基因重组的频率要比单纯用F+与F-接合后的频率高出数百倍。
二.真核微生物的基因重组(一)有性杂交
有性杂交, 一般指不同遗传型的两性细胞间发生的接合和随之进行的染色体重组,进而产生新遗传型后代的一种育种技术。(二)准性杂交 1.定义：准性生殖是一种类似于有性生殖,但比它更为原始的两性生殖方式, 这是一种在同种而不同菌株的体细胞间发生的融合,它可不借减数分裂而导致低频率基因重组并产生重组子。2.准性生殖过程
(1)菌丝联结：它发生于一些形态上没有区别、但在遗传型上却有差别的同种不同菌株的体细胞(单倍体)间。发生菌丝联结的频率是极低的。
(2)形成异核体：两个遗传型有差异的体细胞经菌丝联结后,先发生质配,使两个单倍体核集中到同一细胞中, 于是形成了双相的异核体。异核体能独立生活。
(3)核融合：或称核配, 指在异核体中的两个细胞核在某种条件下,低频率地产生双倍体杂合子核的现象。
(4)体细胞交换和单倍体化：体细胞交换，即体细胞中染色体间的交换,也称有丝分裂交换。3.准性杂交育种
(1)选择亲本：即选择来自不同菌株的合适的营养缺陷型作为准性杂交的亲本。(2)强制异合：即用人为的方法强制两个营养缺陷型的亲本菌株形成互补的异核体。(3)移单菌落：将平板上长出的单菌落移种到基本培养基[-]的斜面上。
(4)验稳定性：指设法检验获得的菌株究竟是一种不稳定的异核体,还是稳定的杂合二倍体。(5)促进变异：把上述稳定菌株所产生的分生孢子处理,以促使其发生染色体交换、染色体在子细胞中分配不均、染色体缺失或畸变以及发生点突变等变化,从而使分离后的杂交子代(单倍体杂合子)进一步增加新性状变异的可能性。第四节菌种的衰退、复壮和保藏
一.菌种的衰退与复壮
衰退：是指由于自发突变的结果, 而使某物种原有一系列生物学性状发生量变或质变的现象。具体表现有: ①原有形态性状变得不典型了②生长速度变慢,产生的孢子变少③代谢产物生产能力下降,即出现负变④致病菌对宿主侵染力的下降,⑤对外界不良条件包括低温、高温或噬菌体侵染等抵抗能力的下降等等。狭义的复壮仅是一种消极的措施，指的是在菌种已发生衰退的情况下, 通过纯种分离和测定典型性状、生产性能等指标,从已衰退的群体中筛选出少数尚未退化的个体, 以达到恢复原菌株固有性状的相应措施。
广义的复壮则应是一项积极的措施, 即在菌种的典型特征或生产性状尚未衰退前,就经常有意识地采取纯种分离和生产性状的测定工作, 以期从中选择到自发的正变个体。(一)衰退的防止 1.控制传代次数
2.创造良好的培养条件
3.利用不易衰退的细胞传代 4.采用有效的菌种保藏方法(二)菌种的复壮 1.纯种分离法 2.通过宿主体复壮 3.淘汰已衰退的个体 二.菌种的保藏
1.定义：通过适当的方法使得微生物能够长期存活，并保持原种的微生物学性状稳定不变的一类措施。
2.原理：首先应挑选典型菌种或典型培养物的优良纯种, 最好保藏它们的分生孢子、芽孢等体眠体;其次,还要创造一个有利于它们长期休眠的良好环境条件。3.七种常用的方法： 冰箱保藏法（斜面）冰箱保藏法（半固体）石蜡油封保藏法 甘油悬液保藏法 砂土保藏法
冷冻干燥保藏法：干燥，低温，无氧，有保护剂 液氮超低温保藏法：超低温（-196℃）
各大菌种保藏单位普遍使用冷冻干燥保藏法和液氮超低温保藏法
微生物的生态
1.土壤中微生物的数目：
尽管土壤的类型众多, 其中各种微生物的含量变化很大, 但一般来说, 在每克耕作层土壤中,各种微生物含量之比大体有一个 10 倍系列的递减规律: 细菌(～108)>放线菌(～107 , 孢子)>霉菌(～106 , 孢子)>酵母菌(～105)>藻类(～104)>原生动物(～103)2.微生物与生物环境间的关系：
①互生：两种可单独生活的生物, 当它们在一起时, 通过各自的代谢活动而有利于对方, 或偏利于一方的生活方式,称为互生。
②共生：是指两种生物共居在一起, 相互分工合作、相依为命, 甚至达到难分难解、合二为一的极其紧密的一种相互关系。
③寄生：一般指一种小型生物生活在另一种较大型生物的体内(包括细胞内)或体表, 从中夺取营养并进行生长繁殖,同时使后者蒙受损害甚至被杀死的一种相互关系。前者称为寄生物,后者则称作宿主或寄主。④拮抗：指由某种生物所产生的特定代谢产物可抑制他种生物的生长发育甚至杀死它们的一种相互关系。⑤捕食：一般指一种大型的生物直接捕捉、吞食另一种小型生物以满足其营养需要的相互关系。
习题：
一.填空题
1.证明核酸是遗传物质基础的是三个经典实验分别是：____、____和____。2.细菌的质粒种类很多，其中接合性质粒如____，抗药性质粒如____，产细菌素质粒如____，诱癌质粒如____等。
3.常见的“三致”是指____、____和____，目前检出某试样是否含有三致作用的减简便。高效的试验是____。
4.与营养缺陷突变有关的三类培养基是____、____和____。其符号分别是____，____和____。5.检出营养缺陷型一般有四种方法：____，____，____和____。
6.艾姆斯试验中用的菌株是____的____缺陷型菌株，通过____突变可以测定待测样品中“三致”物质的存在。
7.普遍转导与局限转导的区别在于：①普遍转导噬菌体是____噬菌体，而局限转导噬菌体是____噬菌体。②普遍转导噬菌体能够转移供体菌的____基因，而局限转导噬菌体只能转移供体菌的____基因。
8.在大肠杆菌接合过程中，有四种独特的菌株参与，他们是____、____、____和____。9.目前国际上代表性菌种保藏机构如美国的ATCC仅使用两种保藏方法，即____和____。二.判断题
1.原养型是野生型的别称，两者不仅表型相同，而且遗传型也一致。2.受体细胞实现DNA转化，必须先出现感受态。
3.5-尿溴吡啶是以碱基是以碱基颠换的方式引起基因突变的。
4.微生物菌种退化的问题在工业生产中有时会遇到，一旦菌种退化，生产效率下降，更重要的是：退化菌种群体中再也找不到生产能力正常的细胞。
5.准性杂交中能够导致低频率的基因重组是因为这些真菌的杂合二倍体细胞在进行减数分裂时，同源染色体进行配对而发生染色体之间交换的结果。
6.在筛选营养缺陷型时，在完全培养基中加入青霉素，可以有效杀死大量生长繁殖的野生型菌株，从而达到浓缩营养缺陷型的作用。7.普遍转导可将供体菌的任何基因转导，故可使受体菌成为获得全套供体菌基因组的转导子。8.转化和转导都不需要供体菌和受体菌的完整细胞直接接触而进行的。
9、当大肠杆菌的F+和F-菌株发生结合时，F因子由供体菌进入受体菌，从而使原F+变成了 F-，而原F-变成了F+。
10.粘质沙雷氏菌在25℃下形成血红色菌落，但置于37℃下则形成无色菌落，这说明该菌种发生了衰退。
11.C+G%值差别越远的两种生物，其亲缘关系必然十分疏远。12.亲缘关系越近的微生物，其碱基序列也越接近，故核酸分子杂交的同源性百分值就越高。13.微生物的数值分类法实际上是一种利用计算机进行的统计分类方法。三.选择题
1.2μm质粒存在于（）中 A.草履虫 B.酿酒酵母 C.大肠杆菌 D.粗糙脉胞菌
2.某微生物经诱变后，其DNA链上的A变成G,这种突变属于（）A.转换 B.颠换 C.移码 D.转座 3.最易引起移码突变的诱变剂是（）A.亚硝酸 B.烷化剂 C.5-尿溴吡啶
D.吖啶类染料
4.有一种检出营养缺陷型的夹层培养法，要在培养基中先加入3薄层片培养基，经过培养后再倒入第4层培养基，这四层加入的顺序是（）A.MM+含菌MM+SM+CM B.MM+含菌MM+MM+CM C.MM+含菌MM+MM+SM D.MM+含菌MM+CM+SM 5.有一种简便的，快速的鉴定营养缺陷型的方法是（）A.青霉素法 B.夹层平板法 C.影印平板法 D.生长谱法
6.必须经过两性细胞如何而完成的高频率基因重组并产生杂种子代的杂交方法，称为（）A.准性杂交 B.接合 C.有性杂交 D.转导
7.发生低频率的染色体重组并产生杂种子代的方式，称为（）A.准性杂交 B.接合 C.有性杂交 D.转导
8.供体细胞和受体细胞通过缺陷噬菌体作为媒介，从供体细胞传递部分染色体至受体细胞的现象，称为（）
A.接合 B.转化 C.转导 D.性导
9.供体菌的游离DNA不通过细胞间的接触直接进入受体菌并实现部分染色体遗传重组的现象，称为（）
A.接合 B.转化 C.转导 D.转染
10.白喉棒杆菌被β噬菌体溶源化后，称为产毒株，此即（）A.转化 B.转导 C.转染 D.溶原性转变
11.在细菌接合实验中，不同菌株接合后的使受体菌获得较多供体菌性状的配对是（）A.F+和F-B.F和F-C.F+和Hfr D.Hfr和F-12.对于低温保藏菌种来说，以下四种温度中以（）为最好 A.0℃ B.-20℃
C.-70℃
D.-196℃ 13.人体正常菌群与人类的关系属于（）A.互生 B.共生 C.寄生 D.拮抗
14.下列微生物中，有一种非但不是条件致病菌，而且还可以制成优良益生菌制剂的是（）A.大肠杆菌
B.脆弱拟杆菌 C.白色假丝酵母
D.嗜酸乳杆菌 四.问答题
1.简述微生物遗传育种中常用的方法。2.微生物污染食品的途径有哪些？
3.菌种保藏原理是什么？简要介绍三种常用的方法？
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