体外诊断试剂生产用净化车间环境与控制要求

第一篇：体外诊断试剂生产用净化车间环境与控制要求

体外诊断试剂生产用净化车间环境与控制要求

第一条 对生产环境有净化要求的产品除应当满足《体外诊断试剂生产实施细则》的通用 要求外，其生产环境还应当满足本附录的要求。不同洁净级别生产区域的控制标准参见下表：

表 不同洁净级别生产区域的控制标准

洁净度级别 尘粒最大允许数/立方米 微生物最大允许数 ≥0.5μm ≥5μm 沉降菌数/皿 100级

3,500 0 1 10,000级 350,000 2,000 3 100,000级 3,500,000 20,000 10 第二条 企业应当明确工艺所需的空气净化级别，进入洁净室(区)的空气必须净化。

阴性、阳性血清、质粒或血液制品的处理操作应当在至少10，000级环境下进行，与相邻区域保持相对负压，并符合防护规定。

酶联免疫吸附试验试剂、免疫荧光试剂、免疫发光试剂、聚合酶链反应（PCR）试剂、金标

试剂、干化学法试剂、细胞培养基、校准品与质控品、酶类、抗原、抗体和其他活性类组分的配制及分装等产品的配液、包被、分装、点膜、干燥、切割、贴膜、以及内包装等工艺环节，至少应在100，000级净化环境中进行操作。无菌物料的分装必须在局部百级。

普通化学类诊断试剂的生产应在清洁环境（符合本细则第二十条规定）中进行。第三条 厂房应当具有防止昆虫和其他动物进入的设施。

第四条 企业应当提供洁净区内生产工艺流程图和空气调节、配电照明等平/立面图。新建、改建、扩建的洁净区厂房应当提供有资质的设计单位设计的图纸。

第五条 在设计和建设厂房时，应当考虑使用时便于进行清洁工作。洁净室（区）的内表

面应平整光滑、无裂缝、接口严密、无颗粒物脱落，并能耐受清洗和消毒，墙壁与地面的交界处宜成弧形或采取其他措施，以减少灰尘积聚和便于清洁。

第六条 洁净区应当配置空气消毒装置，有平面布置图、编号和使用记录。

第七条 洁净室(区)内各种管道、灯具、风口以及其他公用设施，在设计和安装时应考虑 使用中避免出现不易清洁的部位。

第八条 洁净室(区)应当根据生产要求提供足够的照明。主要工作室的照度宜为300勒克 斯；对照度有特殊要求的生产部位可设置局部照明。厂房应当具有应急照明设施。第九条 洁净室(区)的窗户、天棚及进入室内的管道、风口、灯具与墙壁或天棚的连接部 位均应密封。

第十条 更衣室、浴室及厕所的设置不应对洁净室(区)产生不良影响。

第十一条 洁净车间安全门向安全疏散方向开启，平时密封良好，紧急情况发生时应能保证 畅通。

第十二条 洁净室(区)内应使用无脱落物、易清洗、易消毒的卫生工具，应当指定地点存放，存放地不应对产品造成污染。

第十三条 操作台（板）应光滑、平整、无缝隙、不脱落异物，便于清洗、消毒，不使用木 质或油漆台面。

第十四条 洁净室(区)的空气如可循环使用应当采取有效措施避免污染和交叉污染。第十五条 空气洁净级别不同的相邻房间之间的静压差应大于5帕，洁净室(区)与室外大气 的静压差应大于10帕，应配备监测静压差的设备，并定期监控。

第十六条 洁净室(区)的温度和相对湿度应当与试剂产品生产工艺要求相适应。第十七条 洁净室(区)内安装的水池、地漏不得对物料产生污染。

第十八条 不同空气洁净度级别的洁净室(区)之间的人员及物料出入，应有防止交叉污染的 措施。应当建立、执行物料进出洁净区的清洁程序，有脱外包装室、净化室和双层传递窗（或气闸室）。第十九条 洁净室(区)和非洁净室(区)之间应有缓冲设施，洁净室(区)人流、物流走向应合 理。

第二十条 根据生产工艺要求，洁净室(区)内设置的称量室和备料室，空气洁净度级别应当 与生产要求一致，并有捕尘和防止交叉污染的设施。

第二十一条 在净化车间内工作的人员应穿着符合要求的工作服。工作服的选材、式样及

穿戴方式应与生产操作和空气洁净度级别要求相适应，并不得混用。洁净工作服的质地应光滑、不产生静电、不脱落纤维和颗粒性物质。无菌工作服必须包盖全部毛发、胡须及脚部，并能阻留人体脱落物。第二十二条 不同空气洁净度级别使用的工作服应当分别清洗、整理，必要时消毒或灭菌。

工作服洗涤、灭菌时不应带入附加的颗粒物质。工作服应制定清洗周期。100，00级以上区域的洁净工作服应当在洁净区内洗涤、干燥、整理，按要求灭菌。

第二十三条 洁净室(区)仅限于该区域生产操作人员和经批准的人员进入。

第二十四条 进入洁净室(区)的人员不得化妆和佩带饰物，不得裸手直接接触物料，净室

(区)应定期消毒。使用的消毒剂不得对设备、物料和成品产生污染。消毒剂品种应定期更换，防止产生耐药菌株。

第二十五条 在净化车间内工作的生产人员应有健康档案。直接接触产品的生产人员每年 至少体检一次。

第二十六条 应当建立、执行人员进出洁净区的清洁程序和管理制度，人员清洁程序合理。第二十七条 洁净区的净化系统、消毒及照明等装置应按规定进行清洁、维护和保养并进 行记录。

第二十八条 在净化车间内工作的生产人员应接受净化车间卫生管理制度、个人清洁卫生 制度、净化车间使用管理制度等内容的培训，合格后持证上岗。

第二十九条 企业应当在验证的基础上明确规定洁净区环境监测的项目和频次，在静态检

测合格前提下，企业应当按照规定进行洁净室(区)内空气温湿度、压差、风速、沉降菌和尘粒数的定期监测，并保存监测记录。

第三十条 生产激素类试剂组分的洁净室（区）应当采用独立的专用的空气净化系统，且净 化空气不得循环使用。

第三十一条 强毒微生物操作区、芽胞菌制品操作区应与相邻区域保持相对负压，配备独 立的空气净化系统，排出的空气不得循环使用。

第二篇：体外诊断试剂生产及质量控制技术指导原则

附件1：

体外诊断试剂生产及质量控制技术指导原则 ——酶联免疫诊断试剂生产及质量控制技术指导原则

（征求意见稿）

酶联免疫诊断试剂是指在酶标板上包被相关的抗原（或抗体）后，利用直接或间接的方法与待测样品中的相关抗体（或抗原）反应，形成的抗原抗体复合物再与相应的酶标记的抗体或抗原进一步反应，经过酶催化底物发生显色反应，由形成的颜色的强弱来判断样本中相应的抗体或抗原的存在。

为了规范酶联免疫诊断试剂的生产和质量控制，制定本技术指导原则。

本指导原则适用于应用酶联免疫法的第三类诊断试剂（病原微生物）的生产和质量控制，其他类酶联免疫诊断试剂参考本指导原则。国家药品监督管理部门将依据科学技术发展的需要，适时组织修订。

一、基本原则

（一）酶联免疫诊断试剂生产用的各种原料、辅料应当制定其相应的质量指标，并应符合有关法规的要求。

（二）酶联免疫诊断试剂的生产企业应具备相应的专业技术人员、仪器设备以及适宜的生产环境，获得《医疗器械生产许可证》；同时，生产企业应按照《体外诊断试剂生产实施细则（试行）》的要求建立相应的质量管理体系，形成文件和记录，加以实施并保持有效运行；生产企业还应该通过《体外诊断试剂生产企业质量管理体系考核评定标准（试行）》的考核。

（三）酶联免疫诊断试剂在研制时，应当遵循科学、规范的原则，各反应条件的选择和确定应符合基本的科学原理。

（四）酶联免疫诊断试剂生产过程中所用的各种材料及工艺，应充分考虑可能涉及的安全性方面的事宜。

（五）生产和质量控制的总体目标：保证试剂使用安全、质量稳定、工艺可控、检测有效。

二、原材料质量控制

（一）主要生物原料

与诊断试剂的质量最密切相关的生物原料主要包括各种生物活性抗原、重组抗原、单克隆杭体、多克隆抗体以及多肽类、激素类等生物原科。这类原料可用于包被酶标反应板、标记相关酶（辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等）、中和反应用抗原或抗体、制备校准品（标准品）等。一般应按照工艺要求对这类生物原料进行质量检验，以保证其达到规定的质量标准。主要生物原料若为企业自己生产，其工艺必须相对稳定；若购买，其供应商要求相对固定，不能随意变更供应商，如果主要原料（包括工艺）或其供应商有变更，必须进行原料验证，并进行补充申报。

主要生物原料的常规检验项目一般包括：

1、外观

肉眼观察，大部分生物原料为澄清透明的液体，不含异物、浑浊或摇不散的沉淀；或者为白色粉末，不含有其他颜色的杂质；特殊生物原料应具备相应外观标准。

2、纯度和分子量

主要经SDS-PAGE 电泳后，利用电泳扫描仪进行分析，也可用其他适宜的方法，如高效液相法等。根据所检测生物原料的分子量选择适宜丙烯酸胺凝胶浓度进行电泳。一般情况下，每个电泳道加样量为5μg，同时用已知分子量标准作参照，采用合适的电泳电流和电泳时间；电泳后的凝胶可用考马斯亮蓝染色或银染法染色。染色后的凝胶用电泳扫描仪分析原料的纯度和分子量。作为诊断试剂用生物原材料，用银染法染色后，纯度一般都要大于90％；用考马斯亮蓝染色后，纯度一般都要大于95％。

3、蛋白浓度

蛋白浓度可通过Lowry法、280nm 光吸收法、双缩脲方法等进行检测；

4、效价

效价的测定一般根据蛋白含量测定结果，通过倍比稀释法进行。效价应达到规定的要求。

5、功能性实验

功能性实验是指生物原料用于试剂盒实际生产中的情况，一般考查使用该原料的试剂的灵敏度、特异性和稳定性等，并比较其与上批次原料的相关性。

（二）生物辅料

生物辅料指的是在生产过程中作为蛋白保护剂用途的一类生物原料，主要包括小牛血清、山羊血清、牛血清白蛋白和酪蛋白等。这些生物原料均应按照《中国生物制品主要原辅材料质控标准（2000年版）》所规定的质量标准要求进行检验，达到相应的质量标准后方应用于生产。

生物辅料的供应商同样要求相对固定，不得随意变更供应商。

对于小牛血清或山羊血清、牛血清白蛋白以及酪蛋白等，还应进行功能性实验，即以其为原料配制10％浓度的稀释液作为样品，进行酶联免疫测定，均不得出现非特异性反应。

对于标记用酶，应在产品的质量标准中明示所使用的标记用酶的名称（如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等），同时应根据不同生产厂家的检定方法和质量标准进行检验，酶的纯度RZ值（OD403nm/OD280nm）应大于3.0。

（三）化学原材料

参照《中国生物制品主要原辅材料质控标准（2000年版）》分析纯级别进行检验。主要的检测指标包括：溶液外观、一般盐类检测、溶液pH值检测、溶解情况检测、干燥失重的检测、炽灼残渣等。

主要化学原材料的供应商要求相对固定，不得随意发生变更。化学原材料在购入时，原材料的生产商必须提供该批次化学原材料的质量质量保证材料和质量检验报告，其质量标准应达到生产所需的质量标准。

（四）其他物料

1、酶标板（1）外观

明亮处用肉眼观察板条的外观质量。如有欠注、飞边、肮脏、表面光洁度差，底部有波纹及划伤等应剔除。

（2）吸附能力和精密性

用一定浓度的正常人IgG包被板条，再用一定浓度的抗人IgG酶结合物吸附，通过显色反应，双波长酶标仪（主波长450nm，参考波长630nm）读数。计算CV值，批内CV≤5％，批间CV≤10％。

2、液体试剂装量瓶

包括阴阳性对照、样品稀释液、洗涤液、酶结合物或酶稀释液、底物或底物缓冲液等液体组分，均应有相应的装量瓶，并建立相应的质量控制标准，如不同的液体试剂所用的装量瓶规格、装量瓶的颜色、瓶盖的颜色等。

3、其他材料

包括试剂瓶标签、粘胶纸、铝箔袋、衬垫、可密封塑料袋、说明书、干燥剂和包装外盒等，均应符合相应质量控制标准，如数量、规格等。

（五）企业质控品 企业质控品包括阴阳性参考品的符合率、灵敏度（最低检出量）、灵敏度、精密性（均一性）等质控样品，对于定量检测试剂，还包括线性质控品样品。如该产品具有国家标准品或参考品，应使用国家标准品（参考品）进行标化；若该诊断试剂没有国家标准品（参考品），则企业参考品的质量标准不能低于国家药品监督管理部门已经批复的第一家试剂的质量标准。

企业质控品的基质应与诊断试剂的待测样品的基质基本一致，如待测样品为血清/血浆，质控品基质也应为血清/血浆。

三、试剂盒各组分的生产

酶联免疫诊断试剂盒主要组分的生产包括酶标记物的制备及滴配过程（酶工作液浓度确定）、各种工作溶液的配制、包被酶标反应板、分装及包装等步骤；并通过产品的半成品检定和成品检定两个质控过程来完成。

（一）各种工作液的配制

酶联免疫诊断试剂研制生产过程中所用的工作液一般包括：包被液、封闭液、阴性阳性对照、样品稀释液、洗涤液、酶结合物或酶稀释液、底物或底物缓冲液、终止液等，对定量检测试剂，还包括标准品（或校准品）溶液。若阴性阳性对照或其他液体组分涉及生物安全性问题，制备时应在相应的生物安全实验室完成。

各种工作液在配制过程中应严格按质量标准中的配方进行配制，充分混匀确保液体中的各种成分均匀，同时进行相应的质量检验并达到质量标准后，方可使用或者分装。对于定量检测试剂，其标准品（或校准品）溶液应该在量值上具有溯源性。

应对配制过程及配制的液体进行的质量控制，主要包括酶结合物的功能性实验及稳定性；各种溶液的外观、pH值及电导率的测定等；酶作用的底物应测定在无相应酶的情况下自身显色的情况，并制定合理的限定指标；终止液应对其终止酶促反应的能力进行测定。

（二）包被酶标反应板

包被前应对酶标反应板进行质量检验，如尺寸、外观、包装、吸附性能、精密性等，并记录酶标反应板的批号、数目、标识。酶标反应板经检验合格后方能用于包被。不同批号的板条不能混用。

选择经检定合格的包被原料（如抗原、抗体等），经一定的方法确定最佳包被浓度和酶结合物工作浓度，按照诊断试剂的生产规程，配制包被缓冲液、封闭液，经检验合格后，包被酶标反应板，经干燥后，已包被的酶标反应板用铝箔纸封闭（内置干燥剂），抽真空后，保存于28℃。

应对包被过程进行相应的质量控制，如包被用原料（抗原或者抗体等生物活性原料）的质量检验、包被液和封闭液的质控（如配方、外观、pH）、包被过程的监控（包括包被和封闭的体积、温度、湿度、时间等）、包被均一性检验、干燥过程的监控等。

（三）分装和包装 样品稀释液、洗涤液、酶结合物或酶稀释液、底物或底物缓冲液等溶液应严格按照质量标准中的量进行无菌处理后再分装，分装量的误差应小于<5%。

分装及包装均应按照相应的SOP的要求进行。包装前，应严格检查试剂盒的品名、批号等，核对各试剂盒各组分的数量，并在关盒前进行复核。

四、质量控制

（一）半成品质量控制

1、半成品抽样

检验人员按试剂的批号，根据抽样申请单抽取规定数量的半成品各组分，作号标记、待检。

2、半成品检验

利用上一批检定合格的试剂盒的相应组分，对本批生产出的各种试剂盒组分分别进行检验，检验结果达到产品的质量标准。

半成品检验，一般使用国家标准品（参考品）或经国家标准品（参考品）标化后的质控品。若某类试剂没有国家标准品（参考品），则使用企业参考品，但该企业参考品的质量标准不能低于国家药品监督管理部门已经批复的第一家试剂的质量标准。

检测所抽样的半成品的试剂盒性能，包括阴阳性参考品的符合率、灵敏度（最低检出量）、精密性等，均应达到相应质量标准的要求，对精密性，一般情况下CV不得高于15％（采用竞争抑制法的诊断试剂CV不得高于20％）。对定量检测试剂，同时应分析其线性相关系数和校准品检测结果的准确性。

企业应该具有对每一批试剂的半成品进行稳定性研究。

（二）成品质量控制

产品包装完成后，质检人员根据试剂的批号、实际包装量、抽样申请单的要求进行抽样，同时填写抽样数量和抽样日期，并且由抽样人签名。抽样数量应包括检定用数量和留样数量。质检人员同时应检查相关原始记录。

每一批酶联免疫诊断试剂报批批量最低要求：达到1万人份/批。

1、检验（1）成品检验

一般使用国家标准品（参考品）对成品进行检验，并达到质控品的质量要求。若该诊断试剂没有国家标准品（参考品），则使用企业参考品，但其质量标准不能低于国家药品监督管理部门已经批复的第一家试剂的质量标准。

（2）稳定性试验

在批放行前，每一批酶联免疫诊断试剂需具备稳定性研究资料。

第三篇：体外诊断试剂生产实施细则试题

《体外诊断试剂生产实施细则》考试题目

选择题：

1.本《细则》为体外诊断试剂生产和质量管理的基本要求，适用于体外诊断试剂的哪些过程：D A.生产、服务过程

B.设计开发、生产、服务过程

D.设计开发、生产、销售和服务的全过程

C.生产、销售、服务过程

2.某生产体外诊断试剂的公司以胶体金法生产的一试剂通过质量体系考核后，若运用胶体金法再生产一试剂，是否还用进行质量管理体系考核： B A.用

B.不用 C.视生产的具体试剂而定

D.没有相关规定

3.本《细则》管理的体外诊断试剂的范围是： C A.国家法定用于血源筛选的体外诊断试剂

B.采用放射性核元素标记的体外诊断试剂 C.除去A、B以外，其他体外诊断试剂

D.没有相关的规定

4.体外诊断试剂的生产企业应当至少建立、实施、保持多少个程序文件：

B A.15 B.16 C.17 D.18

5.体外诊断试剂的生产企业应当至少建立、实施保持多少个基本规程和记录：

D A.20 B.21 C.22 D.23

填空：

1.体外诊断试剂的生产企业应至少有二名质量体系内部审核人员。

2.体外诊断试剂的生产企业的生产负责人和质量负责人不得相互兼任。

3.体外诊断试剂的生产企业中从事高生物活性、高毒性、强传染性、强致敏性等有特殊要求产品的生产和质量检验人员应具备相关岗位操作资格或接受相关专业技术培训和防护知识培训。

4.生产体外诊断试剂的洁净车间有严格的清洁要求，其中人流物流要分开。

5.在生产体外诊断试剂的过程中产生的废液、废物等应进行无害化处理，应当符合相关的环保要求。

6.生产企业应当建立完整的产品研制控制程序，对设计策划、设计输入、设计输出、设计评审、设计验证、设计确认、设计更改应有明确规定。

7.体外诊断试剂的生产企业在对物料的采购和验收过程中，应按照物料的质量要求制定入库验收准则。

8.体外诊断试剂的生产企业应对每批产品中关键物料进行物料平衡核查。如有显著差异，必须查明原因，在得出合理解释，确认无潜在质量事故后，方可按正常产品处理。

9.体外诊断试剂的生产企业在生产过程应当具有可追溯性，应对物料及产品的追溯程度、追溯范围、追溯途径等进行规定；应建立批号管理制度，对主要物料、中间品和成品进行批号管理，并 保存和提供可追溯的记录。同一试剂盒内各组分批号不同时应尽量将生产日期接近的组分进行组合，应当在每个组分的容器上均标明各自的批号和有效期。整个试剂盒的有效期应以效期最短组分的效期为准。

10.体外诊断试剂的生产企业应当建立留样复验制度，规定留样比例、留样检验项目、检验周期和判断准则。留样品应在适宜条件下储存，以保证复验要求。应当建立留样品台帐，及时记录留样检验信息，留样检验报告应当注明留样品批号、效期、检验日期、检验人、检验结果等信息。留样期满后应对留样检验报告进行汇总、分析并归档。

11.体外诊断试剂的生产企业对不具备检测能力的外购物料，应制定验收规程。可以委托检验或试样方式进行验证。如委托检验，受托方应当具备相应的资质条件，企业应有委托检验协议，并保存检验报告和验收记录。如试样，企业应有试样验证的验收规程和记录，并保存试样批号、试样生产记录、检测报告、操作人员、批准人员签字等相关记录。

12.企业应当定期实施内部质量审核和管理评审，按照本细则要求对企业内部质量管理体系的运行状况进行审核并出具审核报告。企业按照纠正和预防措施控制程序实行自查、自纠，保存审核报告和纠正、预防措施记录。思考题：

1.公司在采购和生产的很多环节都要求做全面、详细的记录，达到可追溯性。谈谈你对这方面的理解 公司在采购和生产的很多环节都要求做全面、详细的记录以达到可追溯性，例如在采购原材料方面、在批生产批包装方面、半成品成品的批号管理方面、产品的检验记录方面等。公司之所以做这些方面的规定，是出于对顾客负责的方面和对自身负责的方面考虑的。首先，从采购原材料开始，到半成品、成品的批号管理，再到产品的检验记录方面，这样的话，如果发生了某批产品发生问题，我们就可以不断地溯源出导致产品发生问题的地方，从而找出问题、改正问题，从而保障了产品的质量，避免了公司的损失，保证了公司产品的不断畅销，这是出于对自身负责方面的考虑。其次，公司生产了产品，目的是帮助医院检测疾病，从而帮助患者恢复健康，如果我们的产品经常出现不合格品，导致医院的误诊，这就很可能会对患者造成很大伤害，甚至丧命；如果我们不断完善溯源性制度，那么就能督促公司生产更合格的产品，从而能够更好的帮助医院检测疾病；这是出于对顾客负责的方面考虑。

2.假如公司现在在生产某种体外诊断试剂，其中有一批产品被客户反馈为不合格。公司领导要你去查找这批产品不合格的原因，并要求写一份检测报告。你会怎么去调查，并且如何去写检测报告。

假如公司生产的某种体外诊断试剂，其中有一批产品出现不合格。那么，我会根据公司产品的销售记录，查看这批产品的批号信息，它卖到了什么地方，以及同批号的其他产品是否也出现了相同情况。如果其他产品没有出现异常，那么就按照销售记录、批号记录、成品质量监测记录、质量监控记录、生产设备检测记录、原料购买记录、原料监测记录的顺序，一步步查找出现问题的地方。如果其他产品也出现了类似的情况，那么除了要查以上情况之外，还要查看产品生产的技术文件以及第三方验证的文件等。

第四篇：体外诊断试剂生产及质量控制技术指导原则--生物芯片

附件6: 体外诊断试剂生产及质量控制技术指导原则 ——生物芯片类试剂生产及质量控制技术指导原则

前 言

本指导原则所定义的生物芯片诊断试剂是指将多个生物探针(包括DNA片段,寡核苷酸,抗原,抗体,组织,细胞等)按预先设计的排列方式固定在特制的基质(包括玻璃片,尼龙膜,硝酸纤维素膜等)上,用特定的方法提取生物靶分子并进行标记,然后与固定在基质上的生物探针特异性的结合,再用相应的检测设备(如激光扫描仪,CCD检测仪等)和分析方法(包括软件)进行检测,记录,分析,实现对生物靶分子的定性或定量检测的试剂.根据芯片制作的主要原料和方法,生物芯片可分为核酸芯片,蛋白芯片,细胞芯片,组织芯片,芯片实验室等.本指导原则是针对核酸和蛋白为检测靶分子生物芯片的生产及质量控制技术指导原则,其它类型靶分子检测的芯片诊断试剂可参考本指导原则.由于生物芯片技术还在不断发展,国家食品药品监督管理部门可依据科学技术发展的需要,适时组织对本指导原则进行修订.一,基本原则

(一)生物芯片诊断试剂生产用的物料包括:原料,辅料和包装材料.各种物料应当制定相应的质量指标,并应符合有关法规的要求.(二)生物芯片诊断试剂的生产企业应具备相应的专业技术人员,相适应的仪器设备和生产环境,获得《医疗器械生产许可证》;应当按照《体外诊断试剂生产实施细则(试行)》的要求建立相应的质量管理体系,形成文件和记录,加以实施并保持有效运行;应当通过《体外诊断试剂生产企业质量管理体系考核评定标准(试行)》的考核.(三)生物芯片诊断试剂的研制应当按照科学,规范的原则组织研发,各反应条件的选择和确定应符合基本的科学原理.(四)生物芯片诊断试剂生产过程中所用的物料及工艺,应充分考虑可能涉及的安全性方面的事宜.二,物料质量控制(一)核酸检测芯片

核酸芯片检测时,从生物样本中提取的核酸可用荧光标记,金标记和酶标记.检测方法包括光谱学方法和化学显色.下面为荧光标记芯片技术指导原则,采用金标记和酶联显色等的生物芯片诊断试剂可参照核酸芯片和蛋白芯片相关部分.1,主要生物原料

核酸检测芯片的主要生物原料包括模板DNA,dNTPs,引物,探针,标记物等.应按照工艺要求对这类生物原料进行质量检验,以保证其达到规定的质量标准.主要生物原料的供应商要求相对固定,不得随意变更供应商.(1)模板DNA 重组DNA:经测序验证,关键位置没有错误.1×TE溶解,浓度为1μg/μl以上,-20℃保存.(2)dNTPs(dATP/dUTP/dGTP/dCTP/dTTP)HPLC纯,PCR级,无DNase,RNase污染.-20℃以下保存.外购者,由生产厂家提供质量保证证明,达到生产要求.(3)引物

序列确证;进行PCR扩增后,克隆测序鉴定验证,建立引物标准品.生产中的引物原材料为冻干粉,PAGE纯或HPLC纯,外购者,供应商应提供该产品的质检证明,如PAGE电泳结果或HPLC分析图谱;自己合成的引物,需有PAGE电泳结果或HPLC分析图谱.用标准DNA模板扩增,电泳检测,谱带单一,大小正确,与对照引物比较,产物量一致.符合视为合格引物.-20℃以下保存.(4)探针(用于阵列制备)重组DNA, 冻干粉(或1×TE溶解液):每种90μg以上,酶切鉴定分析图谱.PCR产物,冻干粉(或1×TE溶解液):每种90μg以上,PCR电泳鉴定图谱.合成寡核苷酸:PAGE纯或HPLC纯,每种90μg以上,提供该产品的PAGE电泳分析图谱或HPLC分析图谱.外购者,供应商应提供质量保证证明,达到生产要求.探针序列的正确性:应用克隆鉴定的标准DNA杂交鉴定或进行测序鉴定.外购者,供应商应提供质量保证证明,达到生产要求.纯度和浓度检测:用电泳方法,电泳图谱没有杂带,目标条带的强度与已知浓度的标准DNA条带进行参比计算其强度.纯度较高的DNA,可用紫外分光光度计进行定量.检定合格后入库.避光,-20℃以下保存.(5)标记物

含有激发光波长和发射光波长介于280680nm的所有荧光分子,HPLC纯,供应商应提供质量保证证明.(6)Taq DNA聚合酶

SDS-PAGE 检测,纯度>95%,具DNA聚合酶活性,无核酸外切酶活性及核酸内切酶活性,具热稳定性,94℃1小时后仍保持50%活性,由供应商提供质量保证.-20℃保存.(7)UNG(尿嘧啶糖基化酶)具尿嘧啶糖基化酶活性,无核酸外切酶及核酸内切酶活性.1U UNG 37℃处理3分钟后,103拷贝以下含U模板被降解后,不能产生扩增产物,供应商提供质量保证.-20℃保存.(8)RT 酶

具有逆转录活性,供应商提供质量保证.-20℃保存.(9)RT-PCR酶

具逆转录酶活性和DNA聚合酶活性,无核酸外切酶活性及核酸内切酶活性,具热稳定性,94℃1小时后仍保持50%活性.-20℃保存.(10)缓冲液

各类酶制品需要的的反应缓冲液由厂家随酶制品提供,供应商提供质量保证.-20℃保存.2,主要生物辅料(1)杂交液

购买成品者,供应商提供质量标准,并按要求保存.自制杂交液,按半成品检定标准要求进行检定.(2)酶类

蛋白酶,核酸酶等,供应商提供质量标准,并按要求保存.(3)核酸提取试剂

供应商提供质量保证,并按要求保存.如果是自制提取液,按半成品检定要求.(4)鱼精DNA 供应商提供质量保证,并按要求保存.(5)封闭用蛋白

包括牛血清白蛋白,奶粉等,提供质量标准,并按要求保存.3,主要化学原辅料 参照《中国生物制品主要原辅材料质控标准(2000年版)》分析纯级别进行检验.主要的检测指标包括:溶液外观,一般盐类检测,溶液pH值检测,溶解情况检测,干燥失重的检测,炽灼残渣等.主要化学原材料的供应商要求相对固定,不得随意发生变更.化学原材料在购入时,原材料的生产商必须提供该批次化学原材料的质量质量保证材料和质量检验报告,其质量标准应达到生产所需的质量标准.(1)无机类

主要包括氯化钠,氢氧化钠,纯化水等.(2)有机类

主要包括有丙酮,乙醇,枸橼酸,吐温20,乙二胺四乙酸二钠,氨基吡啉等.(3)特殊化学原料

聚乙二醇,多聚赖氨酸,丙烯酰胺,甲叉双丙烯酰胺,N,N,N',N'-四甲基二乙胺(TEMED),溴化乙锭(EB),染色剂等.4,其他物料(1)载玻片

外观:明亮处用肉眼观察无缺刻,无划伤等.规格按设计要求.激光扫描仪扫描(波长为芯片检测波长):包被层基本均匀.(2)试管,吸头,试剂瓶等

一次性使用,由生产厂家提供质量保证,达到设计要求.(3)其他:说明书,包装外盒等

参照国家食品药品监督管理局颁布的《体外诊断试剂说明书编写指导原则》和《医疗器械说明书,标签和包装标识管理规定》执行.(二)蛋白检测芯片 1,主要生物原料

与生产的产品质量最密切相关的生物原料包括各种活性抗原,重组抗原,单克隆杭体,多克隆抗体以及多肽类生物原科.这类原料可用于点膜,标记相关酶,纳米金,光学基团及中和反应用抗原或抗体等.使用前应按工艺要求对这类生物原料进行质量检验,以保证其达到规定的质量要求.主要生物原料若为企业自己生产,其工艺必须相对稳定;若购买,其供应商要求相对固定,不能随意变更供应商,如果主要原料(包括工艺)或其供应商有变更,必须进行原料验证,并进行补充申报.主要生物原料的常规检验项目一般包括:(1)外观

肉眼观察,大部分生物原料为澄清透明的液体,不含异物,浑浊或摇不散的沉淀;或者为白色粉末,不含有其他颜色的杂质;特殊生物原料应具备相应外观标准.(2)纯度和分子量

主要通过SDS-PAGE电泳和电泳结果扫描仪进行检测,也可用其他适宜的方法,如高效液相法等.作为免疫诊断试剂用生物原材料,用银染法染色后,纯度一般都要大于90%;用考玛氏亮蓝染色后;纯度一般都要大于95%.SDS凝胶电泳法测定分子量.(3)蛋白浓度

蛋白浓度可通过Lowry法,280nm光吸收法,双缩脲方法等进行检测;(4)效价

效价的测定一般根据蛋白含量测定结果通过倍比稀释法进行.效价应达到设计规定的要求.(5)功能性实验 功能性实验是指生物原料用于试剂盒试剂实际生产中的情况,一般考查该原料使用后的试剂灵敏度,特异性和稳定性.2,主要生物辅料

生物辅料指的是在生产过程中作为蛋白保护剂用途的一类生物原料,主要包括小牛血清,山羊血清,牛血清白蛋白和酪蛋白等.这些生物原料均应按照《中国生物制品主要原辅材料质控标准(2000年版)》所规定的质量标准要求进行检验,达到相应的质量标准后方应用于生产.生物辅料的供应商同样要求相对固定,不得随意变更供应商.对于小牛血清或山羊血清,牛血清白蛋白以及酪蛋白等,还应进行功能性实验,即以其为原料配制10%浓度的稀释液作为样品,进行酶联免疫测定,均不得出现非特异性反应.对于标记用酶,应在产品的质量标准中明示所使用的标记用酶的名称(如辣根过氧化物酶,碱性磷酸酶等),同时应根据不同生产厂家的检定方法和质量标准进行检验,酶的纯度RZ值(OD403nm/OD280nm)应大于3.0.3,化学原辅料

参照《中国生物制品主要原辅材料质控标准(2000年版)》分析纯级别进行检验.主要的检测指标包括:溶液外观,一般盐类检测,溶液pH值检测,溶解情况检测,干燥失重的检测,炽灼残渣等.主要化学原材料的供应商要求相对固定,不得随意发生变更.化学原材料在购入时,原材料的生产商必须提供该批次化学原材料的质量质量保证材料和质量检验报告,其质量标准应达到生产所需的质量标准.(1)无机类

主要包括氯化钠,氢氧化钠,纯化水等.(2)有机类

主要包括有丙酮,乙醇,枸橼酸,吐温20,乙二胺四乙酸二钠,氨基吡啉等.(3)特殊化学原料

DAB(联苯二胺),染色剂等.4,其他物料(1)基质

以硝酸纤维素膜为例:孔径符合设计要求(0.45μm,0.22μm等),均一性(厚度及毛细迁移速度±20%),尺寸(与标识吻合)(2)瓶子和干燥剂

由生产厂家提供质量保证,达到规定要求.(3)其他:说明书,包装外盒等

应参照国家食品药品监督管理局颁布的《体外诊断试剂说明书编写指导原则》和《医疗器械说明书,标签和包装标识管理规定》执行.三,试剂盒各组分的生产

生物芯片主要包括DNA芯片,蛋白芯片,组织芯片,细胞芯片以及芯片实验室等.生物芯片诊断试剂产品基本可分成二个部分,一部分是芯片,另一部分检测用工作液.如果有配套的检测仪器,还需对仪器及处理软件的应用加以说明.(一)芯片的生产

芯片生产的基本过程包括探针的获取方法,纯化,点样,固定.1,探针获取

不同的芯片,主要是探针不同,生物芯片的探针主要包括以下几类,其它探针可参考制定相应的技术及质量标准.(1)DNA探针的获取

探针的形式有PCR产物,克隆DNA,人工合成DNA片段等;要求有生产程序和质量指标及检测方法,要进行纯化,有固定的纯化程序.(2)抗原的生产

抗原的获得方法包括细胞培养,从生物材料中分离提取,基因工程表达以及合成肽等.基因工程表达产物又分为纯抗原蛋白,融合蛋白等.(3)抗体

抗体分单克隆抗体和多克隆抗体.抗体制备包括细胞培养,动物腹水,基因工程表达等方式.(4)细胞和组织

包括细胞或组织类型,固定方法.组织材料还包括固定,包埋,切片等.(5)芯片实验室,包括各种管道泵的制作等.2,阵列的排列设计

阵列的排列包括依次排列,随机排列,对角线排列等,设计时需考虑重复次数等.3,点阵的制作

使用仪器的要确定型号,程序;手工制作的也要有标准操作程序.4,固定:包括固定方式,固定的条件等.应对芯片生产的过程进行相应的质量控制,如点样和固定过程的监控,点样均一性检验等.(二)工作液配制

1,芯片生产所需试剂,包括细胞培养基,探针制备试剂,阵列制作和固定试剂等.2,样品处理试剂,芯片检测靶分子分为核酸和蛋白质.检测核酸的样品处理试剂包括临床取样,DNA提取或RNA提取试剂,逆转录试剂,PCR扩增试剂,核酸标记试剂等;检测蛋白的处理试剂包括取样试剂,蛋白稀释液以及特殊试剂等.3,反应液:检测核酸时的反应液包括预杂交液,杂交液,洗脱液等;检测蛋白时,包括封闭液,抗原/抗体反应液,洗脱液,显色液,显色终止液等.(三)数据判读

1,判断标准及依据,包括Cut off值的确定依据.2,数据判读方式:人工还是软件判读.3,如果是软件判读,应提供软件判断的科学依据(包括生物学原理,数据获取原理和判断实验是否成立的依据)以及实验测试的原始报告(或数据),并需要说明:(1)软件的来源:购买或自己编制,是否获得注册等.(2)软件的用途:包括对数据的分析,存储,解读,含义等.(3)软件的使用:基本的使用程序.四,半成品质量控制(一)抽样

检验人员按批号抽取检定需要数量的半成品,作好标记,待检.(二)质控品

可用克隆并测序鉴定的DNA或经特异性鉴定的抗原(或抗体).质控品的基质应尽可能与被测物基质相一致.(三)检定要求 1,芯片检定

(1)灵敏度:最低检测限达到规定要求.(2)特异性:应达到规定要求.若进行全阴,全阳和交叉反应检测,全阴性检测应在没有靶分子存在时,所有检测位点没有检测信号;全阳性检测应在加入足够量的靶分子,所有检测位点均有检测信号;交叉反应检测时,用某一位点的靶分子检测,应只有该位点有检测信号,其它位点不能有检测信号.(3)精密性(均一性):用比最低检测限高一个数量级的质控品,重复检测10次,判定结果一致.考虑到芯片的多位点检测,因此要进行全位点和单个位点进行检测.半成品检定可以用克隆DNA和鉴定的抗原和抗体作质控品.2,工作液的检定

(1)物理检测:外观颜色正常,没有杂质.(2)质量检定:用被检定的工作液检测标准样,检测结果达到预定要求.五,成品质量控制(一)生产批量

申报生产的批量每批原则上不低于1000人份.(二)抽样

检验人员按批号抽取检定需要数量的半成品,做好标记,待检.(三)标准品(参考品)应用国家标准品或参考品进行检定,若无国家标准品(参考品),可以使用企业参考品,但其标准不得低于第一家已经获得批准的该类试剂.(四)检定要求

1,灵敏度:应达到规定要求.2,特异性:应达到规定要求.3,精密性(均一性):对某一样本,重复10次,对病种的定性检测结果一致.4,稳定性(仅对蛋白芯片)37℃放置至少3天,灵敏度,特异性和精密度仍达到规定要求.热加速破坏试验的时间长短,可由生产单位根据不同产品在37℃贮存与常温贮存(2℃8℃)中质量变化的相关性来决定

第五篇：体外诊断试剂人员及库房要求

体外诊断试剂人员及库房要求

主管检验师或具有检验学相关专业大学以上学历并从事检验相关工作3年以上工作经历。

验收、售后服务人员：2人

应具有检验学中专以上学历；

营业场所：其面积应与经营规模相适应，但不得少于100平方米。仓库：应设置符合诊断试剂储存要求的仓库，其面积应与经营规模相适应，但不得少于60平方米。

冷库：应设置储存诊断试剂的冷库，其容积应与经营规模相适应，但不得小于20立方米。冷库应配有自动监测、调控、显示、记录温度状况和自动报警的设备，备用发电机组或安装双路电路，备用制冷机组。