第一篇：6.核酸总结
核酸总结
核酸：重要核苷酸的结构和性质、核酸的结构特征、核酸的理化性质及常见研究方法和原理；
一． 结构和性质
验证DNA是遗传物质的实验有：细菌转化实验和噬菌体侵染实验。2.Chargaff规则
Chargaff等科学家用纸层析及紫外分光光度技术分析了各种生物的DNA碱基组成，结果显示A=T;G=C;A+C=G+T;A+G=C+T.结果说明，A与T，G与C配对。3.DNA的二级结构：
（1）Waston-Crick模型： DNA双螺旋的结构特征
①两条反平行多核苷酸链绕中心轴缠绕，右手螺旋
②骨架：内侧——碱基垂直于纵轴；外侧——戊糖、磷酸3`、5`磷酸二酯键连接平行于轴纵，大沟宽1.2nm深0.85nm;小沟宽0.6nm深0.75nm ③直径：2nm，二相邻碱基高度0.34nm二核苷酸夹角36有十个核苷酸一周高度3.4nm ④碱基互补配对:A T形成两个氢键;G C形成三个氢键
⑤碱基在一条链上的排列顺序不受任何限制，但其中一条链确定后，配对的另一 条链也相应地确定。⑵ Dikerson修正模型
① 碱基间夹角28-420，每一周螺旋含10.4个碱基对，其参数与碱基序列有关。② 组成碱基对的两个碱基不在同一平面，而是沿长轴旋转一定角度，形成类似螺旋桨叶片状结构，成为螺旋桨状扭曲，提高碱基堆积力，稳定DNA结构。⑶ DNA二级结构的多态性
DNA分子的结构可受环境的影响而改变，类型多种，典型为： ① A型、B型和Z型DNA
A型DNA比较粗短，右手螺旋，碱基倾角大，大沟深度明显超过小沟；DNA钠盐在相对湿度92%状态。
B型比较适中，右手螺旋，相对湿度75%状态；
Z型细长，左手螺旋，大沟平坦，核苷酸顺式结构和反式结构相间，磷酸和糖骨架呈Z字形。
维持DNA双螺旋的作用力
氢键：碱基间和螺旋外部
碱基堆积力
阳离子或带正电荷化合物与磷酸基团的作用 4.DNA的三级结构
细长的分子以一种高度压缩状态存在于细胞中，双螺旋的进一步扭曲形成的超螺旋和折叠就构成了三级结构。超螺旋，三级结构中的一种。
形成的前提：闭合环或两端构象处于能量最低状态。5.RNA结构的特点
RNA与DNA结构十分相似，二者相比有几点不同：
第一，核糖：核糖、脱氧核糖
第二，碱基：A、T、C、G；A、U、C、G 第三，二者在三维结构上的区别——RNA不具有规则的氢键结构，单链形式存在，只是回折，局部配对，不配对形成突环。tRNA的高级结构
由70～90个核苷酸组成，转运氨基酸、蛋白质合成起始、反转 录、代谢及基因表达调控中起着重要的作用。⑴ 结构特点
① 碱基组成由较多的稀有碱基多为转录后加工而来，② 3`末端为氨基酸接受臂CpCpA-OH ③ 5`末端作为pG or pG ⑵二级结构—三叶草形
叶柄是双螺旋氨基酸臂；突环三大一小
① 氨基酸臂：接受活化氨基酸末端为CCA。
② 二氢尿嘧啶环：8～12核苷酸，两个二氢尿嘧啶三到四对螺旋区,识别氨酰tRNA酶
③ 反密码环：7个核苷酸，三个碱基密码子，识别密码子 ④ 额外环：变化大，分类指标，假尿苷 ⑤ TψC环： 7个核苷酸组成，识别核糖体 ⑶ 三级结构
二级结构，不同部位的碱基间配对，折叠而成倒L型，胺酰tRNA合成酶结合于倒L型的侧臂上。
二． 核酸的理化性质
⒈酸水解
磷酸酯键与糖苷键对酸的敏感程度不同。磷酸酯键比糖苷键稳定；嘌呤碱的糖苷键比嘧啶碱的糖苷键对酸敏感；嘌呤与脱氧核糖的糖苷键最不稳定。
⒉ 碱水解
RNA磷酸酯键易被碱水解；DNA磷酸酯键对碱稳定
原因：RNA核糖上2’-OH基，在碱性条件下形成磷酸三酯，磷酸三酯极不稳定，随即水解，产生2’，3’环磷酸酯，进而分解成2’，3’核苷酸
DNA核糖上无2‘-OH基，不能形成磷酸三酯中间物因此可以抵抗碱水解。3.酶水解：外切酶和内切酶
4.核酸的酸碱性质：依赖于碱基，核苷，核苷酸的解离。5.核酸的紫外吸收：碱基的共轭双键决定了核酸有紫外吸收
最大光吸收值260nm，是核酸定量以及定性的基础
用A260/A280的比值可以判断样品的纯度：纯DNA的A260/A280比值应大于1.8,纯RNA应达到2.0。6.核酸的变性、复性及杂交
⑴ 概念：双螺旋区氢键的断裂，变成单键，不涉及共价键，磷酸二酯键断裂降解。
⑵ 引起变性的因素 ① 温度的升高 ② 碱酸改变
③ 尿素、甲醛等变性剂 ⑶ 变性的特点
①结构变成无规则线团
②紫外吸收升高、粘度降低、沉降速率增高、比旋下降、滴定曲线改变、生物功能减少或丧失
③爆发式，变性发生在很窄的温度范围，有一个相变的过程。
溶解温度（Tm值）：双螺旋失去一半时的温度，82-95℃ ⑷ 影响DNA Tm的因素 ① DNA均一性
均质DNA溶解过程在一个较窄的温度范围内；异质DNA溶解过程在一个较宽的温度范围内。② G-C含量
G-C含量越高Tm值愈高 原因：G-C间形成三对氢键
测定Tm可以推算出DNA碱基的百分组成；经验公式：XG+C=（Tm-69.3)×2.44 ③介质离子强度
离子强度较低的介质中,Tm值较低, 溶解温度范围较宽 离子强度较高的介质中,Tm值较高, 溶解温度范围较窄 RNA的变性
螺旋区较少,变性Tm值较低
tRNA螺旋区较多,变性Tm值较高，双链RNA类似于DNA。
复性：两条分开的链重新闭合为双螺旋称复性，可恢复理化性质。核酸的杂交
⑴ 概念：不同来源的分子，经热变性后，在冷却复性过程中，异源核酸分子间通过碱基配对形成杂交分子，称核酸杂交确定基因拷贝数量关系、基因图、遗传与进化的关系。
⑵ Southern 杂交： DNA 与DNA。
三． 核酸的研究方法
1.核酸的分离、提纯和定量测定 DNA的分离
核蛋白DNP=染色体DNA+组蛋白
⑴ 破碎细胞-→浓盐溶液抽提--→0.14mol/L盐溶液使DNP沉淀 有机溶剂法：氯仿和酚是蛋白质变性剂，使蛋白质沉淀而与核酸分开； ① 苯酚抽提，去蛋白，用乙醚和乙醇沉淀得到纯DNA ② 用氯仿-辛醇（或异丙醇）抽提，方法同苯酚。
离心后分为两相：上层水相含DNA，中层为蛋白质，下层有机相含变性蛋白质。
⑵ 蛋白酶水解法：制备大分子DNA，比较温和，常用蛋白酶水解后苯酚提取 细胞悬液2倍体积SDS（1%）---→广谱蛋白酶降解蛋白质---→苯酚抽提去蛋白---→RNAase去除RNA RNA的分离
⑴ 为防止RNA的降解要注意
① 器皿要经过特殊处理如高温、焦碳酸二乙酯处理等。② 加入强变性剂和RNAase抑制剂 ⑵ 分离方法
① 酸性胍盐/苯酚/氯仿抽提 ② 胍盐氯化铯密度梯度离心
③ 分离poly(A)+mRNA常用寡聚胸腺嘧啶核苷酸(oligo(dT)n)亲和层析法。测定方法：定磷法，定糖法，紫外吸收法A260 核酸的超速离心：核酸密度的测定，测定DNA中G-C含量，测定溶液中核酸的构象以及用于核酸制备。琼脂糖凝胶电泳 聚丙烯酰胺凝胶电泳
第二篇：核酸教案
第3节遗传信息的携带者——核酸
一、教材分析
《遗传信息的携带者——核酸》这一节虽然提出了遗传信息，但是对遗传信息的深入理解需要在必修2《遗传与进化》的模块中完成。本节课重点是让学生了解承载遗传信息的物质——核酸。通过上一节课所做的实验“观察DNA和RNA在细胞中的分布”，学生已经感受到遗传物质——核酸的真实存在和分布情况，这样对核酸有一个比较直观的感性认识，从而更好地理解核酸的种类有两种：脱氧核糖核酸（简称DNA）和核糖核酸（简称RNA）。在此基础上，理解核酸是一种生物大分子，它是由核苷酸连接而成的长链。教师可以从学生已有的学习知识入手，从核酸的基本组成元素出发，由元素组成核苷酸，由核苷酸组成核苷酸链，再形成核酸。注意利用课文中两种核苷酸的比较，以区分DNA和RNA的基本组成单位的不同，组成两种核苷酸碱基的不同和所含的五碳糖不同，提高归纳判断能力。
二、教学目标 1.知识目标
（1）说出核酸的种类。
（2）简述核酸的分子结构和功能。
（3）说出DNA和RNA在细胞中的分布情况。2.能力目标
（1）尝试进行自主学习和合作学习。
（2）学会运用比较、归纳等方法分析实验结果。3.情感态度与价值观
（1）参与小组合作与交流，培养学生自主、探究、合作式的学习方式。
（2）认识生物科学的价值，乐于学习生物科学，养成质疑、求实、创新及勇于实践的科学精神和科学态度。
（3）通过对核酸结构和功能的学习，使学生形成生物体内遗传信息多样化的观点。
三、教学重点和难点
重点：核酸的结构和功能。
难点：区别DNA和RNA各自的结构特点。
四、教学用具
多媒体教学课件、板书、动画。
五、教学过程 教学流程
教师活动
学生活动
设计意图
一、创设情境，导入新课。
以“华山游客要求退票被捅”事件为题，让学生试想一下，假如自己是警察，该如何破案？学生各抒己见。（提示：回忆破案片中警察会在犯罪现场收集什么？）针对这个案子，警方将进行DNA鉴定以核实嫌疑人身份。讲解：DNA指纹法技术在侦破工作中有着重要的用途。刑侦人员将从案发现场得到的血液、头发等样品中提取的DNA，与犯罪嫌疑人的DNA进行比较，就有可能为案件的侦破提供证据。
学生思考以下问题：
1.DNA指纹是不是平时说的手指印？
2.怎么知道那些DNA是否来自同一个人？（根据复杂的检测，观察DNA谱带是否完全相同）出示一张DNA指纹图，让学生推测谁是罪犯。讲解：每个人的DNA都不相同，因此可以根据DNA提供犯罪嫌疑人的信息，而每个人的DNA之所以不相同，是因为它携带生物个体的遗传信息不同。
根据学生的个人情况作答。认真听课，并做思考。
1、不是。
2、检测犯罪现场采集的DNA样品是否跟嫌疑犯的一样。1号
以近期一个热点新闻话题为开篇，引起学生的注意，为DNA鉴定的引入做好铺垫。
学生对DNA指纹法在案件侦破中的作用可能略有所闻，让学生分组进行合作式的讨论，然后让学生进行交流表达、回答提出的疑问，尽可能地让所有学生分享他们对遗传物质——核酸的认识。
二、核酸的分类、功能
板书：
一、核酸的种类和功能
提问：生物体内的核酸有哪些种类？具有什么功能？ 总结学生的回答，并适当写出板书。
学生已经预习过教材内容，可以回答出：核酸包括两大类：一类是脱氧核糖核酸，简称DNA；一类是核糖核酸，简称RNA。核酸是细胞内携带遗传信息的物质，在生物体的遗传、变异和蛋白质的生物合成中有重要的作用。
以问题的形式唤起学生对原有知识的记忆，且引起学生注意。
三、核酸在细胞中的分布
回忆上节课所做的实验：观察DNA和RNA在细胞中的分布。（板书：
二、核酸在细胞中的分布）
提问：实验用的染色剂是什么染色剂？它们各自可以让什么着色？DNA主要分布在细胞的什么部位？RNA呢？我们观察的是人口腔上皮细胞，它属于真核生物。那么原核生物中，DNA存在于什么部位呢？
吡罗红甲基绿混合染色剂；甲基绿使DNA呈现绿色，吡罗红使RNA呈现红色；DNA主要在细胞核，线粒体、叶绿体含少量。RNA主要在细胞质。拟核中。
学生刚做完“核酸在细胞中的分布”这个实验，印象较深刻，以一连串问题带着学生一起回忆，使学生对DNA和RNA的分布印象更深刻。
四、认识核酸的结构
学生带着三个主要问题阅读课本P28～P29，进行自主学习和交流：
1、核酸的基本组成单位是什么？由那些分子组成？
2、基本组成元素有哪些？
3、DNA与RNA的区别？（化学组成、结构）
投影图片：课本P28，图2－8脱氧核苷酸和核糖核苷酸，课本P29，图2－10 DNA与RNA在化学组成上的区别，图2－9脱氧核苷酸长链，由学生对上述问题一一回答，老师对学生理解不到的地方作必要的补充说明。
出示一小段脱氧核苷酸链及一小段核糖核苷酸链，讲解：绝大多数生物体的细胞中，DNA由2条核苷酸链构成。RNA由1条核苷酸链构成。强调核苷酸之间的连接位置。
学生快速阅读课本，回答问题：1.核苷酸是核酸的基本组成单位。一个核苷酸都是由一分子含氮的碱基、一分子五碳糖和一分子磷酸组成。由C、H、O、N、P五种元素组成。
学生根据看书情况从五碳糖、含N碱基、核苷酸链的区别等方面回答。
培养学生自学、归纳能力。
引导学生观察与思考，主动活得知识。
通过PPT使抽象的语言变为直观的图解，帮助学生直观认识核苷酸。
五、小结、习题巩固
列出表格：DNA、RNA的主要区别，分别从全称、基本单位、五碳糖、含N碱基、结构、存在部分、显色反应几方面对比。
提问：为什么DNA（或RNA）分子有多样性？ 总结出遗传信息蕴藏在核苷酸的排列顺序中。
提问：所有生物的遗传物质都是DNA吗？（RNA病毒的遗传物质是RNA）
布置学生下去查阅资料，思考：DNA鉴定技术除了可以用于破案，还能用在什么方面？习题巩固。
根据刚才所学，完成表格。
学生从蛋白质的多样性得到启发，回答出脱氧核苷酸数量大，其排列顺序极其多样化。延伸学习，引起思考。
使学生对DNA和RNA的区别掌握得更透彻。明确核酸分子的结构使之具有携带大量遗传信息的功能。
板书设计
第3节遗传信息的携带者——核酸 核酸的种类和功能
种类
DNA：脱氧核糖核酸
RNA：核糖核酸 功能：
二、核酸在细胞中的分布
DNA：真核细胞主要分布在细胞核内，原核细胞主要分布在拟核中。RNA：主要分布在细胞质中。核酸的分子结构
组成元素：C、H、O、N、P 含氮碱基
基本单位：核苷酸磷酸 五碳糖
脱氧核苷酸核糖核苷酸
磷酸、脱氧核糖、含N碱基磷酸、核糖、含N碱基（A、T、C、G）（A、U、C、G）核苷酸链：一般2条一般1条。
核酸：
DNA
RNA
第三篇：核酸说课稿
说课稿
各位老师同学们： 大家好！我是来自－－专业－－级的－－。今天我说课的题目是遗传信息的携带者——核酸。我将主要从如下六个部分进行我的说课。
首先是教材分析，本节课选自人教版高中生物必修一《分子与细胞》第二章第三节。本节内容包括核酸的分布和核酸是由核苷酸连接而成的长链。这节内容的学习对以后学习DNA复制和生物遗传方面的知识具有重要的意义，同时也是学生形成正确知识链的重要环节，具有不容忽视的地位。
高一年级学生在初中八年级时已经学习了DNA是遗传物质，对核酸有了一定的了解。在学习本节内容时，高一学生已经具有一定的抽象思维能力、综合思维能力，学生对遗传物质会产生强烈的好奇心。但是在整个认知的过程中，学生在思维能力方面或多或少的存在着一些问题。核酸过于抽象，学生不易理解。
在教材以及学情分析的基础上，根据《生物课程标准》的要求，我将本节课的重难定点为：核酸的结构和功能。那么，如何突破这个重难点呢？
建构主义认为学习是在一定的情境即社会文化背景下，借助教师和学习伙伴的帮助，利用必要的学习资料，通过人际间的协作活动而实现的意义建构过程。在建构主义这一理论的指导下，通过为学生提供模型建构的材料，创设问题情境，指导学生利用材料进行模型构建，构建出核苷酸分子以及核苷酸链，将微观的知识宏观化，形成意义学习，从而突破重难点。基于以上的分析，我确定了如下三维目标： 知识目标：
1、能够说出核酸的种类
2、能够简述核酸的结构和功能
能力目标：通过模型建构的方法，培养学生获取信息和动手操作的能力。情感目标：
1、对新科技的介绍，激起学生学习生物的兴趣。
2、认同生命的物质性。为了更好地达到三维目标，同时结合学生和教材内容的特点。我将主要利用模型建构这一直观教学的方法进行教学。在这个过程中，不仅能培养学生的观察动手能力，还能提高学生的思维合作能力。
在模型构建的过程中，我教师通过创设一定的情境，帮助学生进行小组合作学习，使学生能够独立思考，自主学习，积极参与到课堂学习中来。
综合以上，我设计的的教学流程是设置情境，导入新课；自主学习，获取知识；模型建构，突破重难点；总结归纳，形成知识框架。下面我将具体阐述我的教学流程： “疑，思之始，学之端。”先向学生介绍DNA指纹法这一高科技手段以及它在案件侦破中的作用，接着展示一幅DNA指纹图谱，提出疑问：从图中判断谁是罪犯？为什么DNA能够用来案件侦破？通过联系生活实际，引起学生的注意和兴趣，再提出问题，引起学生思考，使他们意识到DNA作为一种核酸的重要性，从而引出新课。接着呈现以下问题，1、核酸有几种类型？
2、核酸的功能是什么？学生带着问题自主阅读，归纳总结并完成课前所发的导学案。运用导学案的形式让学生有目的的进行阅读，将课堂还给学生，体现以学生为主体，教师为主导的新课标理念要求，并提高学生阅读能力和自学效率。
接着，就进入了本节课的中心环节，模型建构。在本环节中，依照核酸的形成过程引导学生分别构建核苷酸的分子结构模型和核苷酸链的模型。首先，将核苷酸与人体类比，让学生直观形象的认识核酸的基本单位——核苷酸，在对核苷酸有一个感性认识之后，向学生出示并介绍模具，同时提出问题：五碳糖的五个碳位于哪里？磷酸、碱基分别是连接在第几号碳原子上的？利用这两个问题引导学生仔细观察，并结合根据教材资料，分小组构建核苷酸的分子模型。接着，通过问题“ DNA的基本单位——脱氧核糖核苷酸和RNA的基本单位——核糖核苷酸有何区别”引导学生对图片资料进行进一步细致的观察，培养其信息提取能力。这样通过问题引导帮助学生解决可能存在的错误，更好地掌握核苷酸分子的结构，同时，学生自主构建模型，学习兴趣提高了，思维能力、动手能力、分析和解决问题的能力以及交流与合作的能力也得到了锻炼，达到了技能目标。随后，提出问题，“核苷酸是怎样连接成长链的呢”，引导学生回忆上一节的内容，“氨基酸是如何构成蛋白质的”类比这一现象，思考问题。由此转入核苷酸链的构建。提供相关图片资料，引导学生观察图片，小组内成员相互间合作共同构建模型。启发学生在已有知识的基础上，以类比的方式进行模型建构，使学生的学习热情高涨，充分的理解这一知识点。最后结合动画，补充漏点，梳理总结核苷酸链的形成。
这样通过模型建构，让学生将分散的五碳糖、碱基以及磷酸构建成核苷酸分子，并通过小组内成员的相互合作最后构建出了核苷酸链，在这个过程中，学生通过自己动手，在轻松的，与同学相互合作的学习情境中，将新知识有效地整合到自己原有的知识网络中，使知识体系得到丰富和发展。
最后，归纳总结，通过填写表格的形式梳理本节课知识点，巩固强化，使学生自己建构完整的知识体系。
根据教学内容，我设计了如下板书：这样的板书，可以突出本节课的重难点，体现知识点之间的联系，利用它对本节课进行小结，可使学生知识系统化。
本节课教学内容十分抽象、微观，学生学起来觉得比较困难。为此，我利用模型建构的方法让学生自主合作学习，发挥了学生的主体作用,使学生感知知识的形成,取得了很好的教学效果。这种自己动手、生生互动的教学场景和开放式的教学模式、学习方式正是新课程改革所倡导的。但是，模型建构的过程中，教师如何做好引导、指导工作，如何调动每一位同学的积极性，还有待于进一步研究。以上就是我的说课，谢谢大家！
第四篇：核酸抽提经验及原理总结
核酸提取原理及经验总结
一、核酸
核苷酸单体聚合而成的生物大分子，是生物细胞最基本和最重要的成分。一般认为，生物进化即始于核酸，因为在所有生命物质中只有核酸能够自我复制。今天已知核酸是生物遗传信息的贮藏所和传递者。一种生物的蓝图就编码在其核酸分子中。核酸是1869年米歇尔(F.Miescher)在脓液的白细胞中发现的。他当时称之为核素。阿尔特曼(R.Altmann)于1889年认识其酸性后，定名为核酸。
二、核酸的分类和功能
核酸分为核糖核酸(RNA)和脱氧核糖核酸(DNA)两大类。这两类核酸有某些共同的结构特点，但生物功能不同。DNA贮存遗传信息，在细胞分裂过程中复制，使每个子细胞接受与母细胞结构和信息含量相同的DNA；RNA主要在蛋白质合成中起作用，负责将DNA的遗传信息转变成特定蛋白质的氨基酸序列。核酸的基本结构单元是核苷酸，核苷酸含有含氮碱基、戊糖和磷酸3种组分。碱基与戊糖构成核苷，核苷的磷酸酯为核苷酸。DNA和RNA中的戊糖不同，RNA中的戊糖是D-核糖；DNA不含核糖而含D-2-脱氧核糖(核糖中2位碳原子上的羟基为氢所取代)。核酸就是根据其中戊糖种类来分类的，DNA和RNA的碱基也有所不同。下面我们看看DNA和RNA具体的差别：
（一）DNA的分子结构
1.DNA的碱基组成规律：Chargaff等根据分析各种生物及其不同组织内DNA样品水解液中的碱基含量的结果，得出以下结论：1）同一生物不同组织的DNA样品，其碱基成分含量相同。2）不同生物的DNA碱基成分含量不同。3）对某一生物讲，其碱基成分的含量不受年龄、营养及环境变化等影响。4）在同一生物的DNA碱基含量是A=T，G=C，A+G=C+T，碱基之间的这种关系称Chargaff法则。
2.DNA分子的基本结构：核酸分子内单核苷酸之间的连接键为3',5'-磷酸二酯键，是共价键。DNA分子的基本结构就是许多脱氧核糖核苷酸借磷酸二脂键相互连接而成的多核苷酸链。DNA链中碱基 的组成和排列顺序即为DNA的一级结构。DNA的遗传信息即储存在DNA分子的碱基排列顺序中。
.DNA分子的空间结构：DNA的二级结构是双螺旋结构，其特点为：1）两条链方向相反、相互平行、主链是磷酸戊糖链，处于螺旋外侧。2）碱基在螺旋内侧并配对存在，A与T配对的G与C配对，A与T之间二个氢键相连（A-T），G与C之间三个氢键相链（G-C）。3）螺旋直径2nm，二个碱基对平面距0。34mm，10bp为一螺距，距离为3。4nm。4）稳定因素主要是碱基之间的氢键和碱基对平面之间的堆积力。
（二）RNA的分子结构
RNA的基本结构是A、G、C、U四种碱基组成的核糖苷酸通过磷酸二酯键相链而成的多核苷酸链。有三种主要的RNA：据其作用可分转运RNA（tRNA）、信使RNA（mRNA）和核蛋白体RNA（rRNA），它们的二级 结构是单链局部双螺旋，共中tRNA结构较清楚：
1.tRNA tRNA一级结构特点是：1）核苷酸数目在70-90之间；2）含较多稀有碱基； 3）所有tRNA的3'末端均是-CCA的结构。tRNA二级结构特点： 呈三叶草形，有三环四臂。其中3'的氨基酸臂是携带氨基酸的位置，II环又称反密码环，此环顶端 由3个碱基组成反密码子，起到识别mRNA上对于密码子的作用。
2.Mrna mRNA是蛋白质合成的模板，真核生物的mRNA的5'端有m7Gppp的帽子，3'末端有20-200多聚A的尾巴上述两者之间为信息区，其中每三个相邻碱基组成一个三联体，代表一个氨基酸信号，即为密码子。不同mRNA具有不同的密码顺序，决定蛋白质多肽链的氨基酸排列顺序（一级结构）。
3.rRNA 核蛋白体RNA，它是细胞内含量最多的RNA：rRNA与多种蛋白质结合成核蛋白体，存在于胞浆，是蛋白质 合成的部位。
三、核酸的理化性质
RNA和核苷酸的纯品都呈白色粉末或结晶，DNA则为白色类似石棉样的纤维状物。除肌苷酸、鸟苷酸具有鲜味外，核酸和核苷酸大都呈酸味。DNA、RNA和核苷酸都是极性化合物，一般都溶于水，不溶于乙醇、氯仿等有机溶剂，它们的钠盐比游离核酸易溶于水，RNA钠盐在水中溶解度可达40g/L，DNA钠盐在水中为10g/L，呈黏性胶体溶液。在酸性溶液中，DNA、RNA易水解，在中性或弱碱性溶液中较稳定。天然状态的DNA 是以脱氧核糖核蛋白(DNP)形式存在于细胞核中。要从细胞中提取DNA 时，先把DNP抽提出来，再把P除去，再除去细胞中的糖，RNA 及无机离子等，从中分离DNA。
四、细胞裂解：
（一）裂解原理
在核酸提取过程中，细胞裂解是非常重要的。经典的裂解液几乎都含有去污剂(如
SDS、Triton X-100、NP-40、Tween 20 等)和盐(如 Tris、EDTA、NaCl 等)。盐的作用，除了提供一个合适的裂解环境(如 Tris)，还包括抑制样品中的核酸酶在裂解过程中对核酸的破坏(如 EDTA)、维持核酸结构的稳定(如 NaCl)等。去污剂则是通过使蛋白质变性，破坏膜结构及解开与核酸相连接的蛋白质，从而实现核酸游离在裂解体系中。裂解体系中还可能加入蛋白酶，利用蛋白酶将蛋白质消化成小的片段，促进核酸与蛋白质的分开，同时，也便于后面的纯化操作以及获得更纯的核酸。也有直接使用高浓度的蛋白质变性剂(如 GIT、GuHCl 等)裂解的，该方法已经成为了 RNA 抽提的主流，却不是基因组 DNA 抽提的主流。
（二）细胞的裂解方法
细菌细胞破碎方法有以下几种：1）机械方法：超声波处理法、研磨法、匀浆法，关于超声波处理法，要设定好超声时间和间隙时间，一般超声时间不超过5秒，间隙时间最好大于超声时间。2）化学试剂法：用含SDS或CTAB的溶液处理细胞，在一定的p H 环境和变性条件下,细胞破裂,蛋白质变性沉淀,核酸被释放到水相，p H 环境则由加入的强碱(NaOH)或缓冲液(TE、STE 等)提供，表面活性剂或强离子剂可使细胞裂解、蛋白质和多糖沉淀,缓冲液中的一些金属离子螯合剂(EDTA 等)可螯合对核酸酶活性所必须的金属离子Mg2+、Ca2+ ,从而抑制核酸酶的活性,保护核酸不被降解。；3）反复冻融法：将细胞在-20度以下冰冻，室温融解，反复几次，由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀，使细胞结构破碎。4）酶解法：加入溶菌酶或蜗牛酶、蛋白酶K等，都可使细胞壁破碎，核酸释放。蛋白酶还能降解与核酸结合的蛋白质,促进核酸的分离。其中溶菌酶能催化细菌细胞壁的蛋白多糖N-乙酰葡糖胺和N-乙酰胞壁酸残基间的β-(1 ,4)键水解。蛋白酶K能催化水解多种多肽键,其在65 ℃及有EDTA、尿素(1～4mol/ L)和去污剂(0.5 %SDS 或 1 %Triton X-100)存在时仍保留酶活性,这有利于提高对高分子量核酸的提取效率。在实际工作中,酶作用、机械作用、化学作用经常联合使用。具体选择哪种或哪几种方法可根据细胞类型、待分离的核酸类型及后续实验目的来确定。
（三）裂解方法的评价
含蛋白酶的裂解方法，可以认为是抽提基因组 DNA 的首选。裂解包括膜蛋白的游离和与基因组 DNA 相连接的蛋白质的游离。蛋白酶的作用是使蛋白质变小，故而对蛋白质的游离有巨大的促进作用；同时，巨大的基因组DNA 是很容易“缠”住大分子的东西的，蛋白质被蛋白酶消化变小后，则不容易被基因组 DNA “缠”住，有利于蛋白质在纯化操作中的去除，使最终获得的基因组 DNA 的纯度更高。另外一个思路是，如果基因组 DNA与
蛋白质 “缠”在一起，在纯化的过程中有两种可能：如果基因组 DNA 的特性占优势，则纯化时以 DNA 的形式被保留下来，导致蛋白质的残留；如果蛋白质的特性占优势，则纯化时以蛋白质的形式被去除，导致 DNA 的损失。当然去污剂裂解方法，仍然在细胞基因组 DNA 抽提方面有优势，尤其是当得率和纯度要求不是最高，而经济性及操作简单很重要时。控制好裂解液/样品的比例是该方法成功的关键。该方法结合高盐沉淀，可以实现最简单的操作，但纯度及得率的稳定性可能会比用 PC 抽提的差一些。
高浓度蛋白质变性剂(如 GIT、GuHCl 等)的裂解方法，是抽提 RNA 的首选。总 RNA 的抽提，最重要的是快速裂解细胞膜，至于与基因组 DNA 相连接的蛋白质的裂解以及基因组与蛋白质 “缠”住的问题，因为都不会对以后的纯化产生大的影响，可以不考虑。高浓度蛋白质变性剂能快速破坏细胞膜，进而迅速抑制住细胞内的 RNA 酶，从而确保了 RNA 的完整性。除了极少量不适用该方法的样品 – 主要是植物，其它绝大部分样品的 RNA 的抽提，都可以以高浓度的蛋白质变性剂为基础的。当然有些样品，如肌肉，即使是 RNA 抽提，也强烈建议使用含蛋白酶的裂解液(或者在操作中的某个时候使用蛋白酶消化蛋白质)，原因在于这些样品中的蛋白质，是非常难以去除的。该方法是获得最大得率和最高纯度的基础。
含 CTAB 的裂解液，几乎成为富含多糖的样品，如细菌、植物的基因组 DNA 抽提的首选裂解方法。该方法成功与否与两个因素有关：一是 CTAB 的质量，二是洗涤的彻底程度。CTAB 的质量对裂解效率有很大的影响，而且，似乎还说不清楚原因，因为即使是同一公司生产的纯度一样的 CTAB，批号不同，效果就可能差别很大。洗涤去除 CTAB 要比其它的盐难一些，同时，CTAB 的少量残留也会对酶活性有巨大影响，所以洗涤是否彻底也是该方法成功与否的关键。裂解时的温度，多使用 65C；但如果发现降解严重或者得率太低，可以试一下 37C – 45C 这个相对低温的区域。
SDS 碱裂解法是质粒抽提的首选裂解方法，具有快速、得率高、几乎无基因组 DNA 污染的特点。控制好裂解液/菌体的比例和操作的温和是该方法成功的关键。蛋白质的沉淀效率在 4C 会更好一些，所以，加入溶液 III 后在 4℃ 静置一段时间以及采用 4℃ 离心去蛋白质，都可以提高质量。该方法不一定要使用 PC 纯化，但结合 PC 纯化，可以获得纯度很高的质粒。RNA 的去除可以靠在溶液 I 中加入 RNase A(100ug/ml)或者在最后的溶解液中加入 RNase A(25 ug/ml)来实现。总的感觉是，在溶液 I 中使用 RNase A，RNA 的残留少一些。不过，经典沉淀几乎没有办法彻底去除 RNA 残留。另外，对大质粒(50 kb 以上)，该方法可能会有问题。
PCR 模板的简易裂解方法，也是使用面很广的一类方法。该方法的特点是无须纯化，样品被裂解后即可直接取裂解液用于 PCR，非常快速。也正因为不纯化，所以，假阴性(即没有扩增出来的阳性)比例也比较高。该方法最简单的就是反复冻融法，简便快捷，不需任何化学试剂，冻融离心，PCR检测就可以了。如果使用裂解法，哪么最简单的裂解液就是水，复杂一点的就会含有一些不会抑制后续的 PCR 反应，而且能提高裂解效率，甚至还可能部分消除样品内抑制 PCR 反应杂质的东西，如 Triton X-100、甲酰胺等。再复杂一点的就会含有诸如 Chelex 100 之类的能吸附部分杂质的介质。操作也非常简单，多使用温度的变化来实现样品的裂解，如煮沸、或者高温-低温的多次循环等。该方法最适合从一大堆样品中找出阳性样品，但却不适合用于判断某一个样品是阳性还是阴性。降低样品使用量可以提高阳性率，因为样品量的降低，同时意味着 PCR 的抑制物量的降低。
（四）样品与裂解液的比例
选择了合适的裂解液，下一步就是要控制好样品与裂解液的比例。这个问题非常重要，但却没有获得足够的重视。严肃的参考资料，都应该会提供一个简单的比例，如 1ml 裂解液可以用于 T mg 组织或者 C 个细胞；建议:样品量绝对要小于资料所提供的。起始样品用多大，并没有具体的说法。如果不是样品量有限，则以能抽提出满足数次成功实验所需的核酸量，作为决定样品起始量的基础，会比较合理的。不要因为 1ml 裂解液可以抽提 100mg 样品，就一定使用 100mg 样品。裂解液的用量，表面上与抽提的结果(纯度及得率)没有关系，然而，在实际操作中，对结果是有比较大的影响的。裂解液的用量原则是：确保能彻底裂解样品，同时使裂解体系中核酸的浓度适中。浓度过低，将导致沉淀效率低，影响得率；浓度过高，去除杂质的过程复杂且不彻底，导致纯度下降。另外，裂解液的用量是以样品中蛋白质的含量为基准的，而不是以核酸含量为基准，这一点务必牢记。
五、核酸提取
核酸提取包含样品的提取和纯化两大步骤。提取是使样品中的核酸游离在裂解体系中的过程，纯化则是使核酸与裂解体系中的其它成分，如蛋白质、盐及其它杂质彻底分离的过程。
（一）DNA提取的几种方法 浓盐法 ：1）利用RNA和DNA在电解溶液中溶解度不同，将二者分离，常用的方法是用1M 氯化纳提取化钠抽提,得到的DNP粘液与含有少量辛醇的氯仿一起摇荡,使乳化,再离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间，而DNA位于上层水相中,用2倍 体积95%乙醇可将DNA 钠盐沉淀出来； 2）也可用0.15 MNaCL液反复洗涤细胞破碎液除去RNP,再以1MNaCL提取脱氧核糖蛋白,再按氯仿---异醇法除去蛋白。两种方法比较,后种方法使核酸降解可能少一些；3）以稀盐酸溶液提取DNA 时，加入适量去污剂，如SDS可有助于蛋白质与DNA 的分离。在提取过程中为抑制组织中的DNase对DNA 的降解作用,在氯化钠溶液中加入柠檬酸钠作为金属离子的烙合剂。2 阴离子去污剂法：用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性,可以直接从生物材料中提取DNA。由于细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合,因为阴离子去污剂能够破坏这种价键,所以常用阴离子去污剂提取DNA。苯酚抽提法： 苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制了DNase的降解作用。用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA 联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。离心分层后取出水层，多次重复操作，再合并含DNA 的水相，利用核酸不溶于醇的性质，用乙醇沉淀DNA。此时DNA是十分粘稠的物质，可用玻璃漫漫绕成一团，取出。此法的特点是使提取的DNA保持天然状态。
4水抽提法：利用核酸溶解于水的性质,将组织细胞破碎后,用低盐溶液除去RNA，然后将沉淀溶于水中，使DNA淀溶于水中充分溶解于水中,离心后收集上清液。在上清中加入固体氯化钠调节至2.6M，加入2倍体积95%乙醇,立即用搅拌法搅出。然后分别用66%，80%,95%乙醇以及丙酮洗涤,最后在空气中干燥,既得DNA样品。此法提取的DNA中蛋白质含量较高,故一般不用。为除蛋白可将此法加以改良,在提取过程中加入SDS。
（二）RNA提取
所有ＲＮＡ的提取过程中都有五个关键点，即１）：样品细胞或组织的有效破碎；２）有效地使核蛋白复合体变性；３）对内源ＲＮＡ酶的有效抑制；４）有效地将ＲＮＡ从ＤＮＡ和蛋白混合物中分离；5）对于多糖含量高的样品还牵涉到多糖杂质的有效除去。但其中最关键的是抑制ＲＮＡ酶活性。
1）总RNA的试剂盒快速提取 一些公司推出的总RNA提取试剂盒,该总RNA纯化系统采用两种著名的RNA酶抑制剂,异硫氰酸弧(GTC)和β-巯基乙醇,加上整个操作都在冰浴下进行,这样就能显著降低RNA的降解速率。GTC和N-十二烷基肌氨酸钠的联合使用,将促使核蛋白复合体的解离,使RNA与蛋白质分离,并将RNA释放到溶液中。而进一步从复合体中纯化RNA,则根据Chomc zynski和Sacchi的一步快速抽提法进行,采用酸性酚-氯仿混合液抽提。低pH值的酚将使RNA进入水相,这样使其与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离。水相中的RNA可用异丙醇沉淀浓缩。进一步将上述RNA沉淀复溶于GTC溶液中，接着异丙醇进行二次沉淀，随后用乙醇洗涤沉淀，即可去除所有残留的蛋白质和无机盐，而RNA中如含无机盐,则有可能对以后操作中的一些酶促反应产生抑制。
2）氯化锂法提取总RNA： 本方法用高浓度尿素变性蛋白并抑制RNA酶，用氯化锂选择沉淀RNA，其特别适合于从大量样品中提取少量组织RNA，具有快速简洁的长处，但也存在少量DNA的污染及RNA得率不高,小RNA片断丢失的缺陷。）蛋白酶－热酚法：本方法适合于病毒RNA的提取。
六、核酸纯化
裂解完成后，液体体系中就包括了游离的核酸、蛋白质及其它大分子杂质、盐：纯化就是将核酸与其它游离成分分离的过程。就个人所知，目前在科研领域广泛使用的核酸纯化技术主要可以分为两大类：使用介质的和不使用介质的，使用介质的，一次就将核酸与其它所有杂质分开；不使用介质的，一定是首先将核酸和盐与大分子杂质分开，再通过沉淀核酸使核酸与盐分开(PEG 沉淀和 LiCl 沉淀除外)。使用介质的可以分为两类：离子交换介质和吸附介质。不使用介质的也分为两类：使用苯酚/氯仿抽提的和不使用苯酚/氯仿抽提的。
（一）纯化方法：下面比较一下具体的纯化技术：
1）经典的使用苯酚/氯仿抽提的纯化技术：细胞裂解后离心分离含核酸的水相，加入等体积的酚∶氯仿∶异戊醇(25 24 1 ∶∶体积)混合液。依据应用目的，两相经漩涡振荡混匀(适用于分离小分子量核酸)或简单颠倒混匀(适用于分离高分子量核酸)后离心分离。疏水性的蛋白质被分配至有机相,核酸则被留于上层水相。酚是一种有机溶剂，预先要用STE 缓冲液饱和，因未饱和的酚会吸收水相而带走一部分核酸。酚也易氧化发黄，而氧化的酚可引起核酸链中磷酸二酯键断裂或使核酸链交联;故在制备酚饱和液时要加入82羟基喹咛，,以防止酚氧化。氯仿可去除脂肪,使更多蛋白质变性,从而提高提取效率。异戊醇则可减少操作过程中产生的气泡。核酸盐可被一些有机溶剂沉淀,通过沉淀可浓缩核酸,改变核酸溶解缓冲液的种类以及去除某些杂质分子。典型的例子是在酚、氯仿抽提后用乙醇沉淀，在含核酸的水相中加入p H5.0～5.5，终浓度为0.3M 的NaAc 或KAc 后，钠离子会中和核酸磷酸骨架上的负电荷，在酸性环境中促进核酸的疏水复性。然后加入2～2.5 倍体积的乙醇,经一定时间的孵育，可使核酸有效地沉淀。其他的一些有机溶剂[ 异丙醇、聚乙二醇(PEG)等]和盐类(10.0mol/ L 醋酸铵、8.0mol/ L 的氯化锂、氯化镁和低浓度的氯化锌等)也用于核酸的沉淀。
2）使用离子交换介质的纯化技术：将裂解液过柱，核酸被联结在离子交换介质上；
洗涤去除残留的杂质后，用高盐缓冲液将核酸从介质上洗脱下来。再经过标准的乙醇/异丙醇沉淀、乙醇洗涤、干燥等操作，获得纯的核酸，溶解于合适的缓冲液中。3）使用吸附介质的纯化技术：将裂解液过柱，核酸被吸附介质选择性吸附；洗涤去除残留的杂质后，用水或者合适的低盐缓冲液将核酸从介质上洗脱下来，就可以直接用于后续实验。
4)密度梯度离心法：密度梯度离心也用于核酸的分离和分析。双链DNA、单链DNA、RNA 和蛋白质具有不同的密度，因而可经密度梯度离心形式形成不同密度的纯样品区带，该法适用于大量核酸样本的制备，其中氯化铯2溴化乙锭梯度平衡离心法被认为是纯化大量质粒DNA 的首选方法。氯化铯是核酸密度梯度离心的标准介质,梯度液中的溴化乙锭与核酸结合，离心后形成的核酸区带经紫外灯照射，产生荧光而被检测，用注射针头穿刺回收后，通过透析或乙醇沉淀除去氯化铯而获得纯化的核酸。
注：但是在日常实验过程中，通常用的纯化方法有主要有以下两种，一是化学方法，即PC 抽提 + 醇沉淀；二是物理方法，即介质纯化。第一种方法是利用 PC 对裂解体系进行反复抽提以去除蛋白质，实现核酸与蛋白质的分离；再用醇将核酸沉淀下来，实现核酸与盐的分离。第二种方法则是利用某些固项介质，在某些特定的条件下，选择性地吸附核酸，而不吸附蛋白质及盐的特点，实现核酸与蛋白质及盐的分离。高盐沉淀去除蛋白质是第一种纯化方法的一个变体，省略了 PC 操作的麻烦。当然，也有不纯化的抽提方法，但是用途多局限于简单的 PCR。其它杂质 – 如多糖、多酚等的去除，基本上都是在这两种方法的基础上，通过增加一些特别的试剂，或者增加一些额外的步骤来实现的。
（二）纯化方法评价
PC(P是英文酚的缩写，C是英文氯仿的缩写)抽提/醇沉淀方法，是一个永不过时的方法。稳定、可靠、经济、方便。PC抽提可以彻底去除蛋白质，醇沉淀可以去除盐，对于一般的干净的样品(杂质为蛋白质)，该方法完全可以获得高质量的核酸。虽然每次 PC 抽提都会损失一部分核酸(因为不可能将水相全部移取)，以及低浓度核酸的醇沉淀效率低，但这些问题都可以靠操作的调整而得以解决或者减少影响。该方法的最大的问题是不适合大规模抽提。PC抽提是去除蛋白质的一个非常有效的手段。苯酚能使蛋白质变性，变性后的蛋白质从水相中被析出，处于苯酚中或者苯酚/水相之间。PC 抽提的关键是，一要混匀彻底，二要用量足够。彻底混匀，才能确保苯酚与蛋白质的充分接触，使蛋白质完全变性。许多人总是担心混匀的剧烈程度是否会对核酸，尤其是基因组 DNA 造成破坏，实际上大可不必如此小心。剧烈的混匀操作，是会部分打断大分子的基因组 DNA，但该破坏作用不会强烈 到 DNA 变成 10kb 以内的小片段。手剧烈晃动混匀后，基因组 DNA 的片段，大部分会大于 20kb，这个大小，除了一些特别的要求外，对 PCR 和酶切，都是完全适用的。如果要求的片段非常大，如构建文库用，则不能使用剧烈的混匀方法，而只能来回温和颠倒混匀 – 此时的关键是：裂解液的比例要足够大，使体系不要太粘稠。用量要足够，是因为苯酚去除蛋白质是有一定的饱和度的。超过了该饱和度，裂解体系中的蛋白质不会被一次去除，必须靠多次抽提，方可彻底去除。另外，体系太粘稠的坏处是，蛋白质难以彻底去除，以及基因组 DNA 会断裂得更厉害，所以要注意裂解液与样品的比例。4C 离心操作有利于更彻底去除蛋白质。PC 抽提的另外一个用途是，利用酸性酚可以部分去除 DNA 的特点，在 RNA 抽提时获得 DNA 残留极少的 RNA。不过有一点要提醒的是，有些植物样品，在去除某些杂质之前，是不能使用 PC 抽提的，否则核酸必定降解。
高盐沉淀蛋白质/醇沉淀方法，同样也是一个非常不错的方法。与 PC 抽提方法相比，除了纯度的稳定性可能要低一点外，该方法几乎克服了 PC 抽提的所有缺点。更快、更轻松去除蛋白质所伴随的好处是，可以用于大规模抽提，不足是纯度(蛋白质残留)不够稳定。蛋白质的沉淀效率在 4C 会更好一些。
介质纯化方法，是一个越来越受到重视的方法。其最大特点是非常适合大规模核酸抽提，并且因为受人为操作因素影响小，纯度的稳定性很高(虽然纯度不一定比PC 纯化方法更高)。其致命弱点是样品过量。介质可以分为两大类，一类是柱式的，即介质被预先装填在下面是通的柱子里；另外一类则是颗粒状(如Glassmilk、磁性小珠等)。颗粒状的介质的纯化操作与经典的醇沉淀差别不大，都是通过数次的加液-倒液过程，干燥后，溶解即可获得纯化好的核酸。柱式纯化的操作虽然也是有加液-倒液过程，但因为加入的液体通过离心后会进入另外一个离心管中，与含有核酸的柱子完全是分开的，所以洗涤更彻底，操作更省力(不用操心将核酸倒掉了，或者液体的残留)。不过，介质纯化方法的成本是最高的。
（三）醇的沉淀
1）沉淀的原理目的：目的是使核酸从裂解体系中沉淀下来，从而实现核酸与其它杂质–主要是盐的分离。实际操作中，许多杂质也会与核酸一起被醇沉淀下来，尤其是当其它杂质的浓度也比较高的时候。醇的沉淀并不是非常特异性的，任何有机大分子及一些盐，当浓度达到一定水平后，都可能同步被沉淀下来。
就核酸而言，标准的醇沉淀要求有一定的盐及某一比例的醇用量，但这决不是说这些盐是必不可少的或者醇的比例是不可更改的。实际操作中不难发现，当裂解体系中核酸的浓度达到一定水平后，即使体系中不含教科书中建议的盐，单独使用醇也可以使核酸沉淀下来； 或者含有盐，使用低比例的醇也可以使核酸沉淀下来(当然，得率可能会降低)。知道这一点的意义在于：不要迷信标准方法的唯一性；相反，当使用标准方法碰到问题 – 主要是纯度问题时，完全可以通过调整沉淀条件来改善。最有参考价值的是 TRIzol 提供的一个沉淀方案：一半异丙醇加一半高盐溶液替代纯粹的异丙醇，可以大大降低多糖残留。另外一个问题就是，要坚信核酸的醇沉淀过程同样也是其它杂质的沉淀过程；调整醇沉淀的条件，虽然会降低核酸的得率，但因为可以大大提高纯度。
2)沉淀剂的选择： 醇沉淀使用异丙醇还是乙醇，我没有发现这二者对质量有大的影响，虽然许多人“发现”乙醇沉淀的核酸纯度更高。异丙醇沉淀的核酸比较紧凑，帖壁紧，颜色不是很白；乙醇沉淀的核酸比较蓬松，容易从壁上移动，颜色比较白。这是现象，提示结论：异丙醇沉淀的核酸不容易丢掉，但比较难洗涤。结合丢失和洗涤两个方面综合考虑，则建议：少量核酸用异丙醇沉淀(量少，洗涤不是问题，不丢失为先)，大量核酸用乙醇沉淀(量大，丢失不是问题，洗涤方便为先)。至于异丙醇沉淀更容易沉淀下盐的说法，我没有碰到过(我几乎不使用低温沉淀，难道低温沉淀比较容易出现盐沉淀？)；我更觉得出现该现象的原因就在洗涤的不彻底。当然，也不要忘记异丙醇沉淀的最大优点是体积小，可以使绝大部分的小量抽提操作在 1.5ml 离心管内完成。但由于其沉淀物很紧凑，洗涤时其中心部分不容易被洗涤到，所以，洗涤异丙醇沉淀的核酸的关键是：一定要使沉淀悬浮起来，一定要放置一段时间使沉淀最终变成蓬松的白色。如果再洗涤一次，质量决不会有问题的。当然，沉淀所用的试剂，不仅仅就乙醇和异丙醇，还有包括PEG、LiCl、CTAB 都可以用于核酸沉淀，虽然它们远没有醇沉淀的高使用频率，但却各有特点。LiCl 可以沉淀 RNA 以去除 DNA，CTAB 可以从含多糖的裂解体系中将核酸沉淀下来。PEG 是沉淀病毒颗粒的方便手段。3)沉淀温度的选择：如果核酸抽提的起始样品是杂质比较多时，原则上不要使用低温沉淀。低温沉淀能提高沉淀效率：当核酸浓度很低时，效果明显；当核酸浓度比较高时，效果不明显，但却会导致杂质的大大增加。
（四）核酸的洗涤
1）洗涤原理与目的： 洗涤对于整个提取过程来说，也是非常重要的。洗涤，首先一定要将沉淀悬浮起来；第二就是要控制一定的时间，尤其是当核酸沉淀比较大时(使核酸沉淀最终蓬松)；第三是少量多次；第四则是去上清要彻底。教科书中的操作基本上都是“倒掉上清后倒置在吸水纸上片刻”，这一描述本身没有问题，且十分方便，但因为他来自国外，自然就有了“水土不服”的问题。如果离心管是经过硅化的，因为液体几乎不挂壁，所以上清
可以去除得非常彻底；好的管子，即使没有经过硅化，残留量也非常少，也没有什么问题；差的管子，液体的挂壁非常可观，其残留量多到会影响后续的实验。唯一不受管子质量影响的操作，就是倒掉液体后再短暂离心，将残液用移液器吸出。一定要牢记的是，残液中都含有上一步操作中的杂质，其残留量与混匀程度、核酸沉淀的大小都有关。挥发时去掉的是乙醇，杂质是不会被挥发去除的。这步，切忌不要用手甩，这样容易将核酸甩掉。另外，核酸沉淀的大小及裂解液的裂解能力也决定了洗涤的强度。沉淀越大，裂解液的裂解能力越强，洗涤越要彻底：放置时间相对要长一点，洗涤次数也要考虑增加。当然，乙醇浓度的选择也非常重要，一般情况，洗涤一定要用室温的 75% 乙醇。
（五）核酸的溶解和保存
1）核酸溶解：纯化后的核酸，最后多使用水或者低浓度TE缓冲液溶解：其中 RNA 以水为主，DNA 则多以弱碱性的 Tris 或者 TE 溶解。经典的 DNA 溶解方法多提倡使用 TE 溶解，其中原因是有人认为 EDTA 可以减少 DNA 被可能残留下来的 DNase 降解的风险；如果操作过程控制得当，DNase 的残留几乎是可以忽略的，完全可以直接使用 Tris 或者水(pH 接近7)溶解 DNA。
2）核酸保存：基本上，核酸在保存中的稳定性，与温度成反比，与浓度成正比。一般的我们选择，-20℃ 或70℃ 保存的稳定。如果温度不合适，保存中核酸发生降解或者消失，首要原因是酶残留导致的酶解，第二个原因则是保存核酸溶液的 pH 值不合适导致的水解(RNA 在弱酸性更稳定，而 DNA 在弱碱性更合适)。还有一个不为人重视的，就是 EP 管对核酸的影响。首先一定要坚信一点，那就是核酸一定会与装它的容器的接触面发生反应，达到某种均衡。EP 管的材质，首先可能吸附核酸，其次还可以诱导核酸的结构发生某些变化，如变性。在核酸的浓度比较高时，这个现象可能观察不到；当核酸浓度很低时，则比较明显了。在低浓度的核酸中加入 Geletin,Glycogen,BSA 可以稳定核酸，虽然已经为实验所证明，但许多实验人员并没有将该建议当回事。现在制造 EP 管的材料远多于过去。这些新出现的材料，在强度、透明度等物理特征方面可能比原来的纯 PP 材质要好许多，但其化学特征，尤其是对核酸稳定性的可能影响，远没有研究透彻。正如现在的质粒可以改造得越来越适用某些要求一样，其负面产物可能是，抽提的质粒电泳的构型越来越多：除了原来的三种带型外，还可能出现 denatured cc、multimeric forms of cc 等等带型。
（六）核酸的浓缩
应用最广的核酸浓缩法是乙醇沉淀法。在中等浓度单价阳离子存在下，加入一定量的乙醇后，所形成有核酸沉淀可经离心而回收，甚至对低至pg量的DNA或RNA，也可定量回
收。回收的核酸可按所需浓度，再溶于适当的缓冲液中。
核酸浓缩的具体操作时，可向含样品的小离心管中加入V/10单价阳离子盐贮存液2V无水乙醇，混匀，放冰水浴中15～30min，取出目测平衡，0～4度，12000g，离心10min。吸弃上清，再另70%乙醇0.5～1ml，12000g，0～4度洗涤离心2min。吸弃上清，沉淀用油泵抽干或打开盖子晾干后，溶于适当体积的缓冲液中。单价阳离子盐的选择，主要基于下述
考虑：用醋酸铵可减少dNTP的共沉淀，但在以后要作核酸的磷酸化时应避免用醋酸铵，因铵离子是T，多核苷酸激酶的强烈抑制剂。当用较高浓度的乙醇沉淀RNA时，常用LiCl，因LiCl在乙醇中溶解度很高，不随核酸共沉淀。含有SDS的核酸样品，应使用NaCl，这时该去垢剂要70%乙醇中仍保持可溶。DNA和RNA沉淀，大多使用醋酸钠（pH5.2）。七 核酸质量的检测问题 将抽提好的核酸直接用于后续的实验，是唯一可靠的检测方法；除此之外的检测方法，都是相对的，而且并不十分可信。目前用于正式实验前检测核酸质量的方法，一是电泳，二是紫外分光光度仪。电泳检测的主要是核酸的完整性和大小，只要核酸不是太小或者太大(超出电泳分离范围)，该方法还是非常可信的；电泳还可以用于估计核酸的浓度，但其准确度与经验有关；另外，电泳也可能提供某些杂质污染的信息，但是同样与经验有关。紫外分光光度仪检测的是纯度和核酸含量，然而，由于紫外分光光度仪不能确保非常准确，而该仪器的灵敏度又非常高，所以，提供的结果并不十分可信。一般讲，同时进行紫外和电泳检测，综合二者的结果，可以做出一个更合理的判断。但由于这两个方法都有缺陷，所以，即使出现坏的结果能用于后续实验而好的结果却不能用于后续实验，也不用大惊小怪。
关于紫外分光光度仪的检测。首先，不要使用不能选择波长的仪器；使用那些已经固定了波长的仪器，大概可以算是你梦魇的开始(没有信息是可怕的，更可怕的是将错误的信息当真，其中280、320、230、260nm下的吸光度分别代表了核酸、背景（溶液浑浊度）、盐浓度和蛋白等有机物的值。)。其次，一定要经常调较仪器；调较可以使用非常纯的自备核酸，也可以使用苯酚。最后，要记住读数 A230 ：A260 ：A280 = 1：2(DNA 为 1.8)：1 为理论上的数据，实际测定时会有一些差别；但如果差别太大，就有问题了，有两个值得商榷的观点：如果 A260/A230 > 2 就是纯的，如果 A260/A280 > 2 就是核酸降解。A260/A230 如果比 2.0 大许多，一定是有杂质残留的(具体是什么杂质我不知道)。如果核酸抽提好后立即就测定，A260/A280 > 2.0 决不提示核酸降解，原因是：那些能导致 A260/A280 > 2.0 的核酸片段非常小，常规的沉淀是不可能将它们沉淀下来的；更可能的原因是：你仪器提供的 A260/A280 实际是 A262/A282 甚至 A264/A284 的值。纯的核酸的
吸光值，在 A230 是谷底，在 A260 是峰顶，在 A280 则正好是半山坡。根据曲线在底和顶的斜率最小，在半山坡的斜率最大的特点，不难得出如下结论：A230 和 A260 的读数受仪器准确性的影响比较小，而 A280 受仪器准确性的影响比较大。
关于电泳检测，观察琼脂凝胶中DNA的最简单方法是利用荧光染料溴化乙锭进行染色。该物质含有一个可以嵌入DNA的堆积碱基之间的一个平面基团，这个基团的固定位置及其与碱基的密切接近，导致染料与DNA结合并呈现荧光，其荧光产率比游离染料溶液有所增加。DNA吸收254nm处的紫外辐射并传递给染料，而被结合的染料本身则在302nm和366nm有光吸收。这两种情况下，被吸收的能量可在可见光谱红橙区的590nm处重新发射出来。因此，当凝胶中含有游离溴化乙锭时即可以检测到少量的DNA。
建议先电泳检测，再用紫外分光光度仪检测。电泳后，可以看到哪些样品根本就不能用(如降解太厉害)，以及核酸的大致浓度，这样就为紫外分光光度仪的检测提供了一个参考(降解的不必要测了，要测的该取多少量等)。
八、核酸中杂质的去除 关于核酸分离纯化阶段中除去多糖、蛋白质及不同类型核酸之间分离的一些方法，分别介绍如下：
（1）肝糖元、淀粉及粘多糖，由于其物理化学性质与核酸有许多相似之处，常在提取液中残存下来。除去的方法常有：①取材前尽量减少组织中多糖的含量，如先使动物饥饿数天然后杀死，可使细胞内肝糖元大大减少。②加入淀粉酶，将大分子多糖分解为小分子，在以后纯化步骤中逐渐被除去。③在浓磷酸盐存在下，以2-甲氧基乙醇抽提核酸提取液，使多糖溶于下层水相，核酸在上面有机层中。④以钙盐沉淀DNA，再以草酸钾处理，使之形成DNA钾盐回收，然后用离子交换法吸附DNA，使之与多糖分离。
（2）蛋白质的除去：由于核酸在细胞内以核蛋白体形式存在，不论采用哪种方法提取核酸，蛋白质都不同程度地存在于体系中。因此，除去蛋白质是核酸分离纯化不可避免的步骤。常用方法有下列几种：①加入去污剂如硫酸十二脂钠，从提取到分离纯化各阶段均可反复使用此法。去污剂与氯仿法或苯酚法结合使用，效果更加理想。②氯仿-戊醇或辛醇对提取液摇荡抽提，蛋白质在氯仿-水界面形成凝胶，离心后除去，核酸留在水溶液中。此法在分离纯化中也常反复使用。③苯酚水溶液抽提，在对氨基水杨酸等阴离子化合物存在下，DNA或RNA都可以进入水相，蛋白质则沉淀于酚层，然后取水相加入乙醇或2-乙氧基乙醇沉淀RNA或DNA，残余的酚可用葡聚糖凝胶G-10或G-25除去。
（3）不同类型核酸的分离：两种类型核酸的制备过程中，DNA制品中混杂着少量RNA或RNA制品中混杂着少量DNA是经常发生的。由于DNA和RNA结构和性质都很相似，而且分子量都十分大，所以两类核酸的分离是核酸纯化工作中比较复杂和繁琐的一步。从DNA中除去RNA的方法常有：①核糖核酸酸酶选择地破坏RNA，这是比较有效的方法，但使用的核糖核酸酶中常含有极微量的脱氧核糖核酸酶，必须事先加热处理除去，然后将纯净的核糖核酸酶与样品溶液一起在37℃孵育数分钟，就可达到破坏RNA的目的。②钙盐分步沉淀：在核酸溶液中加入1/10体积10%的氯化钙溶液，使DNA与RNA均成为钙盐后，再利用DNA钙盐在2/10体积乙醇中能形成沉淀析出，RNA钙盐不形成沉淀而彼此分离。③活性炭吸附：将处理好的活性炭按1/15～1/20体积加入每毫升含有0。5～1mgDNA溶液中，0～4。C下搅拌1h，以31000×g离心1h，除去RNA后的DNA回收率可达94%。
在RNA制品中除去DNA，苯酚水溶液抽提是较有效和常用的方法。在没有阴离子化合物存在下，以等体积90%苯酚水溶液反复抽提RNA，可以除去绝大部分DNA。此外，也可采用加入脱氧核糖核酸酶处理，破坏DNA，或参考上述DNA与RNA分离方法将DNA除去。
（4）同类核酸的分离 ：①RNA混合物的分离：经过提取的初步纯化的RNA制品中含有各类RNA和某些已降解的RNA混杂物。进一步纯化时，多应用柱层析、梯度离心及逆流分溶等方法。例如tRNA与rRNA的分离用吸附于硅藻土表面的甲基化白蛋白柱吸附后，以不同梯度氯化钠溶液洗脱，或用蔗糖梯度（顶部5%浓度，底部20%浓度）离心法分开。mRNA的代谢速度较快，在细菌中平均寿命为90min，在哺乳动物中约为几小时至十几小时，常用密度梯度离心法和DNA-琼脂柱进行分离。制备rRNA时，由于共沉作用，常混有mRNA，一般可用萘-1，5-二磺酸处理，使二者分开。各种tRNA的提纯，通常采用逆流分溶法在磷酸缓冲液-甲酰胺-异丙醇系统下进行，分离效果较好。②DNA混合物的分离：主要是变性或降解的DNA和天然的分离，常用磷酸钙、ECTEOLA-纤维素、DEAE-纤维素和甲基化白蛋白柱层析，逆流分溶，梯度离心等方法。一个具有生物活性高度提纯的DNA制品应具有如下标准：不含有蛋白质及多糖；不含有可透析的小分子杂物；在pH7时紫外吸收最大值在257～261μm之间，E（P）在6600左右；不含有RNA；固体为纤维状，水溶液具有高的粘度并有流动双折射作用；具有电泳均一性及超离心中单分散性；具有生物活性。
一、植物核酸提取
1976 年，Millgan 用Blin 和Stafford 描述的方法分离了植物DNA，然而这些DNA 是不能用于克隆的。在发明了去除植物DNA 上污染物的方法之后，人们可用分离动物组织DNA 的方法分离植物DNA。去除植物带电高分子污染物的方法有核分离（Bickle 等1977）。CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）分离（Murray，Thompson 1980）和盐酸／十二烷基肌氨酸钠分离（Sung，Slightom 1981）等。在这些方法中，CTAB 方法因简便、快速而使用最广泛。收集和保存植物组织的方法对于 DNA 的产量和质量也有很大影响。虽然已能成功地从植物标本和化石中分离出 DNA（Doyle，Dickson 1987），但采用新鲜材料能产生最好的结果，特别是对于产生大量单宁、酚或其他次级代谢产物的种。如材料不能马上进行提取，应保存在冷而湿的地方，例如在冰盒中。如有必要可以冷冻保存。如果没有条件，最好在无水CaSO４瓶中快速干燥（Liston 等 1990）。DNA 的提取应尽快进行，以防其降解（Pyle，Adams1989）。提取DNA 的过程中有许多因素能导致DNA 降解。首先是物理因素。因为DNA 分子量较大，机械张力或高温很容易使DNA 分子发生断裂。因此，在实际操作过程中应尽可能轻缓，尽量避免过多的溶液转移及剧烈的振荡等，以减少机械张力对DNA 的损伤，同时也应避免过高的温度。其次，细胞内源DNA 酶及细胞破裂释放的次级产物也会导致DNA 降解。所以在提取DNA 的实验中，设计了许多可供选择的分离缓冲液，以适应不同的植物材料。分离缓冲液的pH 值有时需要进行改进，pH 应避免接近降解酶的最适点。大多数降解酶和脂肪氧合酶pH 值的最适点在 5.0～6.0 之间，而DNA 酶pH 值最适点在 7.0 左右（Dunham，Bryant 1963）。由于在过酸的条件下，DNA 脱嘌呤会导致DNA 的不稳定，极易在碱基脱落的地方发生断裂，所以大多植物DNA 提取缓冲液的pH 值为8.0，有的甚至为9.0。缓冲液中包含了大量的复合物，如 EDTA（乙二胺四乙酸）、SDS（十二烷基硫酸钠）、牛血清白蛋白（BSA）、β-巯基乙醇、谷胱甘肽、二硫苏糖醇（DTT）、抗坏血酸（Vc）、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）、二乙基焦碳酸盐（DEPC）、溴化乙锭（EB）等（Hallick等1977）。但由于上述物质有些是抑制内切酶和非特异性核酸酶的，所以在其后的步骤中要将其除去。分离DNA 与蛋白质一般采用苯酚－氯仿抽取的方法。苯酚、氯仿对蛋白质均有极强的变性作用，而对DNA 无影响。下面的方法描述DNA 与污染物多糖的分离，也可用阴离子交换层析仪来进行。下面列出了3 种常见的分离植物总DNA 的方法。3 种方法溶解细胞膜和分离蛋白质的方法不同，各有其优、缺点。DNA制备
（一）植物总DNA的提取）CTAB 缓冲液方法：这是最广泛地用来分离植物DNA 的方法，对大多数植物种都适用，特别是当样本数量很小时。此法运用阳离子去污剂CTAB 溶解植物细胞膜，并与DNA 形成一复合物。其优点是不需要准备大量的植物组织，而且适合像叶、根、种子、胚、胚乳、花粉和悬浮培养的组织等多种类型的组织（Rogers，Bendch 1985）。另外，此法对样品数量的要求也不高，从小到毫克数量的标本（木乃伊、化石）到许多克的新鲜材料均可使用（Golenberg 等 1990；Rogers Bendch 1985）。A ：CTAB 的实验方法
1．材料（1）2 倍CTAB 缓冲液： 100 mmol／dm３Tris-HCI，pH 值 8．0 1．4mol／dm３NaCI 20 mmol／dm３EDTA 2％ CTAB（W／V）1％ PVP-360（W／V）0．2％ß-巯基乙醇（体积比，用前在通风橱中加）（2）清洗缓冲液： 76％乙醇 10 mmol／dm３乙酸铵（3）悬浮缓冲液： 10 mmol／dm３乙酸铵 0．25 mmol／dm３EDTA，pH 值 8． 2．步骤
1）加热分离缓冲液、研钵、研杵到60℃。
2）在热研钵中放人0．5～1．5g 新鲜或冰冻的叶子，用7．5ml 2 倍CTAB 分离缓冲液研磨（可加些石英砂帮助研磨）。对冻干的组织用1 倍CTAB 缓冲液研磨。把研碎的组织倒入50ml 管中，再用0．5ml 2 倍CTAB 缓冲液冲洗研钵，将冲洗液加到管中。
3）将试管在60℃下放置30～60 分钟，然后轻轻振荡，使之充分混合后降至室温
4）在试管中加入10ml 氯仿－异戊醇（24：1）萃取液（如颜色深可再进行一次），轻轻摇晃使其混合，在室温下1500r／min 离心5 分钟，使其分相。
5）将上层的水相倒入－15ml 管中，加2／3 体积的冷异丙醇，轻轻混合以沉淀核酸。如果
看不到核酸沉淀，可在－20℃下放置20 分钟或更长时间。6）室温下 800r／min 离心 3～5 分钟，如果看不到小团或沉淀，可在－20℃下放置 20分钟再离心。
7）小心地倒掉上清液，不要倒掉核酸，这时的核酸一般松散地贴在管的底部，加 15ml清洗缓冲液，轻轻地旋转清洗沉淀物，15～20 分钟后核酸将变得更白。
8）室温下800r／min 离心5 分钟（如不充分，则加大离心速度或延长离心时间），倒掉清洗缓冲液，将管倒扣在纸巾上，让沉淀物干燥，小心不要让DNA 滑掉。
9）按沉淀物的大小用少量悬浮缓冲液（10～100 μl）悬浮DNA。l0）用100μg／ml RNAase 在 37℃下温育 30～60 分钟。11）如果组织包含单宁或其他次级产物，可以对 DNA 作进一步纯化（可用氯仿、苯酚纯化）。一些材料可能需要用氯铯（CsCl）梯度纯化。上述方法也可以进行改进，像巯基乙醇的浓度可以提高至 25mmol／dm３，也可加入 l％的抗坏血酸、DTT 等，CTAB 也可用 SDS 取代（Golenberg 等1990），也可用 TE（10mmol／dm３Tris-HCI，pH 值 8。0，lmmol／dm３EDTA）作悬浮缓冲液。B ：CTAB 沉淀法
1．材料 2 倍CTAB 分离缓冲液；沉淀缓冲液： 100 mmol／dm３Tris-HCI，pH 值 8．0；20 mmol／dm３EDTA；2％CTAB（w／V）。2．步骤
1）与A中前4 个步骤同。
2）吸取上层水相，将其例入一个15ml 管中。
3）加 3 倍体积的沉淀缓冲液，使NaCI 的浓度减少到 0．35mol／dm３，室温下放置 30分钟。
4）室温下 2 000r／min 离心 5 分钟，以沉淀 DNA。
5）根据沉淀物的大小，用少量的悬浮缓冲液（10～100μl）悬浮DNA。6）虽然氯仿或苯酚提取DNA 是有效的，但是对那些包含单宁或其他次级产物的组织，可以在氯化铯梯度上进一步纯化。
（二）从植物组织提取基因组DNA
1、材料
水稻幼苗或其它禾本科植物，李（苹果）幼嫩叶子。
2、设备
移液器，冷冻高速离心机，台式高速离心机，水浴锅，陶瓷研钵，50ml离心管（有盖）及5ml和1。5ml离心管，弯成钩状的小玻棒。
3、试剂
1）提取缓冲液Ⅰ：100mmol/L Tris·Cl, pH8。0, 20mmol/L EDTA, 500mmol/L NaCl, 1.5%SDS。
2）提取缓冲液Ⅱ：18。6g葡萄糖，6。9g二乙基二硫代碳酸钠，6。0gPVP，240ul巯基乙醇，加水至300ml。3）80：4：16/氯仿：戊醇：乙醇 4）RnaseA母液：配方见第一章。
5）其它试剂：液氮、异丙醇、TE缓冲液，无水乙醇、70%乙醇、3mol/L NaAc。
4、操作步骤：
（一）水稻幼苗或其它禾木科植物基因组DNA提取
1）在50ml离心管中加入20ml提取缓冲液Ⅰ, 60℃水浴预热。2）水稻幼苗或叶子5-10g, 剪碎, 在研钵中加液氮磨成粉状后立即倒入预热的离心管中, 剧烈摇动混匀, 60℃水浴保温30-60分钟(时间长,DNA产量高), 不时摇动。
3）加入20ml氯仿/戊醇/乙醇溶液, 颠倒混匀(需带手套, 防止损伤皮肤)，室温下静置5-10分钟, 使水相和有机相分层(必要时可重新混匀)。
4）室温下5000rpm离心5分钟。
5）仔细移取上清液至另一50ml离心管,加入1倍体积异丙醇,混匀,室温下放置片刻即出现絮状DNA沉淀。6）在1.5ml eppendorf中加入1ml TE。用钩状玻璃棒捞出DNA絮团,在干净水纸上吸干,转入含TE的离心管中,DNA很快溶解于TE。7）如DNA不形成絮状沉淀,则可用5000rpm离心5分钟, 再将沉淀移入TE管中。这样收集的沉淀,往往难溶解于TE,可在60℃水浴放置15分钟以上，以帮助溶解。
8）将DNA溶液3000rpm离心5分钟, 上清液倒入干净的5ml离心管。9）加入5μl RNaseA(10μg/μl), 37℃ 10分钟, 除去RNA(RNA对DNA的操作、分析一般无影响，可省略该步骤）。
10）加入1/10体积的3mol/L NaAc及2×体积的冰乙醇,混匀,-20℃放置20分左右,DNA形成絮状沉淀。
11）用玻棒捞出DNA沉淀,70%乙醇漂洗,再在干净吸水纸上吸干。12）将DNA重溶解于1ml TE,-20贮存。
13）取2μl DNA样品在0。7% Agarose胶上电泳, 检测DNA的分子大小。同时取15μl稀释20倍, 测定OD260/OD280, 检测DNA含量及质量。
[注意] 5g样品可保证获得500μg DNA, 足供RFLP、PCR等分析之用。
（三）从李(苹果)叶子提取基因组DNA 1）取3-5克嫩叶, 液氮磨成粉状。
2）加入提取缓冲液Ⅱ10ml, 再研磨至溶浆状。10000rpm, 10min。3）去上清液,沉淀加提取液Ⅰ20ml, 混匀。65℃, 30-60min, 常摇动。4）同本节
（一）中步骤3-13操作。二 从动物组织提取基因组DNA
（一）动物组织提取基因组DNA
1、材料
哺乳动物新鲜组织。
2、设备
移液管、高速冷冻离心机、台式离心机、水浴锅。
3、试剂
1、分离缓冲液：10mmol/L Tris·Cl pH7。4, 10mmol/L NaCl, 25mmol/L EDTA。其它试剂：10% SDS，蛋白酶 K(20mg/ml或粉剂)，乙醚，酚：氯仿：异戊醇(25：24：1)，无水乙醇及70%乙醇，5mol/L NaCl，3mol/L NaAc，TE。
4、操作步骤：
1）切取组织5g左右,剔除结缔组织,吸水纸吸干血液,剪碎放入研钵(越细越好)。
2）倒入液氮,磨成粉末,加10ml分离缓冲液。3）加1ml 10% SDS, 混匀,此时样品变得很粘稠。
4)加50ul或1mg 蛋白酶 K, 37℃保温1-2小时, 直到组织完全解体。
5)加1ml 5mol/L NaCl, 混匀,5000rpm离心数秒钟。
6)取上清液于新离心管，用等体积酚：氯仿：异戊醇(25：24：1)抽提。待分层后,3000rpm离心 5分钟。
7)取上层水相至干净离心管, 加2倍体积乙醚抽提(在通风情况下操作)。8)移去上层乙醚,保留下层水相。
9)加1/10 体积3mol/L NaAc, 及2倍体积无水乙醇颠倒混合沉淀DNA。室温下静止10-20分钟，DNA沉淀形成白色絮状物。10)用玻棒钩出DNA沉淀,70%乙醇中漂洗后,在吸水纸上吸干,溶解于1ml TE中,-20℃保存。
11)如果DNA溶液中有不溶解颗粒,可在5000rpm短暂离心,取上清;如要除去其中的RNA,可加5μl RNaseA(10μg/μl), 37℃保温30分钟, 用酚抽提后, 按步骤9-10重沉淀DNA 12）以分光光度计测定DNA 的浓度（260nm），260／280nm 的光密度比值应在 1．8 以上，否则提示可能有蛋白质或苯酚的污染。13）以TE 溶液将DNA 样品稀释成所需的工作液的浓度。
14）取2μl 左右的样品进行电泳检测，以判断 DNA 是否有降解以及是否需要消除RNA(二）微量动物组织样品的总DNA 提取方法
从微量组织中提取DNA 的方法是1989 年由Singer-Sam（Walsh 等1991）发展起 的。此方法的基本原理是采用 BioRad Chelex 100（一种螯合剂）提取DNA。此方法简便
快速，提取后的DNA 样品可以直接作为PCR 的模板。具体的操作步骤如下：
1）取一小块冰冻的组织（少于1mg，可用经消毒的枪头钻取），或1～3 根带有毛根的毛发（需先经 90％、70％的乙醇和灭菌水依次清洗，并剪去毛干部分），或 1～5μl 血液，加入经过高温消毒的离心管中。离心管内事先加入 500μl 5％的Chelex 溶液。
2）将样品管在56℃下放置1 小时或更长时间，直至组织样品成粉末状（不同组织所需时 间各不相同）。3）在振荡器上振荡10～15 秒钟。4）在 95～100℃下煮 15～40 分钟。5）在振荡器上振荡10～15 秒钟。
6）将样品管在4℃下保存，进行PCR 反应之前再次离心，使Chelex 颗粒沉淀。取上清液（1～10μl）作为DNA 模板。
（三）陈旧、古老DNA 样品的提取方法
对于陈旧、古老DNA 的研究始于80 年代中期。1985 年，Paabo 采用克隆的手段首次从古埃及木乃伊中提取并测定了一段DNA 序列。然而，较为广泛地开展对古老DNA 的研究是在多聚酶链式聚合反应（PCR）发明以后才开始的（Mullis，Fallona 1987）。
经过一定时期的物理、化学作用（几十年至几百万年）的DNA 往往存在比较严重的降解，DNA 片段常常仅有几百个bp 的长度，并且可能存在碱基的修饰和一些抑制PCR 反应的物质。因此，在从陈旧或古老样品中提取DNA 时，最为关键的问题就是防止现代DNA 的 污染。进行DNA 提取操作的所有器皿、器械和试剂均要进行灭菌处理，提取过程应在超净台中进行。此外，提取时应设阴性对照，以监测是否存在外源DNA 的污染。下面介绍的是一种较为简便的提取方法。1）取样品少许（如哺乳动物的皮张可取 1cm × 1cm 见方的小块），用剪刀、手术刀等器械对样品表面进行处理，除去最容易遭受外来污染的表层。对于骨骼、琥珀等坚硬的样品则需要用小钢钻等特殊器械从内部取得样品。
2）经过表面处理的样品用90％乙醇、70％乙醇和去离子水依次进行清洗。
3）在灭菌的 Eppendorf 管中加入 200μl 去离子水、10μl 蛋白酶K（10mg／ml）和 1／10 体积的（20μl）10％的β-巯琉基乙醇。处理过的样品放入上述溶液前要尽可能剪碎。4）在56℃下消化48 小时。
5）样品管中加入等体积的5％～10％的Chelex100 溶液，在旋涡混合器上振荡5～10秒钟，然后在98℃下放置20～60 分钟。6）振荡混合5～10 秒钟，并使之冷却至室温。7）12 000r／min 离心 5～10 分钟。
8）小心取出上层清液，置另一干净的管中保存。
（三）细菌基因组DNA的制备
1、材料 细菌培养物。
2、设备
移液管, 高速冷冻离心机, 台式离心机，水浴锅。
3、试剂
1）CTAB/NaCl溶液：4。1g NaCl溶解于80ml H2 O,缓慢加入10g CTAB,加水至100ml。
2）其它试剂：氯仿：异戊醇(24：1)，酚：氯仿：异戊醇(25：24：1)，异丙醇，70% 乙醇，TE，10% SDS，蛋白酶 K(20mg/ml或粉剂)，5mol/L NaCl。
4、操作步骤：
1）100ml 细菌过夜培养液, 5000rpm离心10分钟, 去上清液。2）加9。5ml TE悬浮沉淀, 并加0。5ml 10% SDS, 50μl 20mg/ml(或1mg干粉)蛋白酶 K, 混匀, 37℃保温1小时。3）加1。5ml 5mol/L NaCl, 混匀。
4）加1。5ml CTAB/NaCl溶液, 混匀, 65℃保温20分钟。5）用等体积酚：氯仿：异戊醇(25：24：1)抽提, 5000rpm离心10分钟, 将上清液移至干净离心管。
6）用等体积氯仿：异戊醇(24：1)抽提, 取上清液移至干净管中。7）加1倍体积异丙醇, 颠倒混合, 室温下静止10分钟，沉淀DNA。8）用玻棒捞出DNA沉淀, 70%乙醇漂洗后, 吸干,溶解于1ml TE,-20℃保存。如DNA沉淀无法捞出,可5000rpm离心, 使DNA沉淀。9）如要除去其中的RNA, 可以按本章第三节中操作步骤处理。
（五）真菌DNA的提取
1）取真菌菌丝0。5g, 在液氮中迅速研磨成粉； 2)加入4mL提取液，快速振荡混匀；
3)加入等体积的4mL的氯仿：异戊醇(24：1)，涡旋3～5min（此处是粗提没有加酚，可以节约成本的哟！）； 4)1000rpm，4℃，5min；
5)上清用体积的氯仿：异戊醇(24：1)再抽提一次（10,000 rpm，4℃离心5 min）；
6)取上清，加入2/3倍体积的-20℃预冷异丙醇或2。5倍体积的无水乙醇沉淀, 混匀, 静置约30 min；
7)用毛细玻棒挑出絮状沉淀, 用75%乙醇反复漂洗数次, 再用无水乙醇漂洗1次, 吹干，重悬于500 ；
8)加入1 ul RNaseA（10 mg/mL），37℃处理1 hr；
9)用酚（pH8。0）：氯仿：异戊醇(25：24：1)和氯仿：异戊醇(24：1)各抽提1次（10,000 rpm，4℃离心5 min）；
10)取上清，1/10V 3M NaAc,2。5V体积的无水乙醇,-70℃沉淀30 min以上；
11)沉淀用75%乙醇漂洗，风干, 溶于200 ulTE中，-20 ℃保存备用。RAN提取
(一）细菌RNA的制备 1）菌体培养简略。
2）离心收集菌体菌体 经离心（5000g，5min）后，悬浮于终止缓冲液中（200mM Tris-HCl，pH8。0;20 mM EDTA;20 mM Na2N3;20 mM 金精三羧酸(ATA)）3)菌体裂解
加入STET缓冲液(8% 蔗糖;5% Triton X-100;50mM EDTA;50mM Tris-HCl pH 7。0)悬浮加入0。2 M 的VRC(0。2M和10 mM的氧钒核苷复合物)4)RNA提取 加入0。5 V的苯酚振荡1 min,0。5 V氯仿振荡1 min,10 000 g, 10 min,水相加入1/10 V的NaAc, 2 V的无水乙醇10000 g, 10 min沉淀溶于0,2 M 的VRC,以酚-氯仿抽提两次 5)RNA纯化 重溶沉淀于DEPC(焦碳酸二乙酯)处理的水中,加入CsCl溶液,于室温离心(200000 g,1 h)回收RNA沉淀,溶于DEPC处理的水中,加入1/10 V的3 M的NaAc, 2 V的乙醇,离心后 6．RNA的溶解 将RNA沉淀溶于水中(二)植物组织细胞RNA的制备 1)细胞处理： 将植物组织置于液氮中冻结，研成粉末，加入匀浆缓冲液，高速匀浆，后高速离心（20000g，10 min）2)RNA提取：上清液中加入皂土(4%),等体积的酚,低温振荡5min，200000 g, 10 min 3)重复该步骤一次 4)RNA沉淀： 于上清液中加入KAc至终浓度为0。2 M,加两倍体积 的无水乙醇,于0oC 30 min，30000g,20 min 5)RNA的溶解：沉淀溶于水中或TE缓冲液(三)哺乳动物细胞质RNA的制备 1)细胞培养： 人工组织培养2)细胞裂解：以含磷酸缓冲液（PBS）的生理盐水洗细胞悬浮于预冷的溶胞缓冲液中，加入24%的蔗糖，1%的NP-40溶胞缓冲液 3)去蛋白： 加入Protease K，于37 ºC温育30 min，酚抽提 4)去DNA：乙醇沉淀,悬浮于DNA消化液(DNase I, 0.2% SDS)5)沉淀RNA： 加入终浓度为0。3 M的NaAc, 2V 无水乙醇于-20 ºC 2 h, 离心收集RNA。
（四）真菌菌丝的总RNA的提取
RNA提取缓冲液（CTAB）：2% CTAB（W/V），2% 聚乙烯吡咯烷酮PVP（W/V），100 mM Tris-HCl（pH8.0，DEPC处理的水配置），25mM EDTA, 0.5g/L 亚精胺Spermidine，2.0M NaCl，2%巯基乙醇（V/V，使用前加入）。由于在高温灭菌条件下，Tris-HCl要和DEPC发生反应，所以配RNA提取缓冲液时直接用DEPC 处理的水配制即可。SSTE：1 M NaCl，0.5% SDS（W/V），10 mM Tris-HCl pH8。0，1。0 mM EDTA 10M LiCl 直接用蒸馏水配10M LiCl，加1‰的DEPC过夜后，高温灭菌。
3M NaAc 氯仿：异戊醇（24：1）酚（pH4.5）：氯仿：异戊醇（25：24：1）DEPC处理水 用1‰的DEPC处理蒸馏水过夜，高温灭菌 无水乙醇 70%酒精。
1）实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热，离心管中加入ME（巯基乙醇）（10mL 加80ul，50mL中加入300ul）；
2）取约0.8g菌丝体（液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了），在液氮中迅速磨成精细粉末，装入50 mL离心管，按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液，颠倒混匀； 3)65℃水浴3-10 min，期间混匀2-3次；
4）加入等体积的酚（注意是酸酚pH4.5）：氯仿：异戊醇（25：24：1）抽提（10,000 rpm，4℃，5 min）；
5）取上清，等体积的氯仿：异戊醇（24：1）抽提（10,000 rpm，4℃，5 min）；
6)加入1/4V体积10M LiCl溶液，4℃放置6hr以上(或过夜)； 7）10,000 rpm，4℃离心20 min； 8）弃上清，用500 ulSSTE溶解沉淀；
9）酚：氯仿：异戊醇（25：24：1）抽提两次, 氯仿：异戊醇（24：1）抽提1次（10,000 rpm，4℃，5 min）； 10）加2V体积的无水乙醇，在-70℃冰箱沉淀30 min以上； 11）12,000 rpm，4℃离心20 min；
12）弃上清。沉淀用70%酒精漂洗一次，干燥； 13）加200 ul的DEPC处理水溶解；
14）用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量（在抽提过程中，若蛋白质含量或其它的杂质还较多，可以增加抽提次数）； PCR 小量制备法
此方法的优点是一次可以提纯很多样品，比较快速，而且小于10mg（50mm）的新鲜叶子材料就可以产生足够的DNA，产生的DNA 对杂交实验是可用的（Millgan 1992）。这个方法存在的问题是DNA 沉淀物可能不够紧密，或不一定能形成一紧密的DNA 沉淀。1.材料
分离缓冲液：200 mmol／dm３Tris-HCI，pH 值 8．0；250 mmol／dm３NaCI；25 mmol／dm３EDTA；0．5 ％ SDS。2.步骤
（1）用1．5ml 离心管研磨小的组织样品。可取管口大小的新鲜叶子（＜10mg），冻在液氮中的叶子也可用。
（2）在研碎的样品中加 400μl 的分离缓冲液，用适合的速度涡旋 10 秒钟，以分散开样品。（3）在室温下将1．5ml 离心管中样品离心 12～15 分钟，沉淀细胞内物质。（4）搜集300μl 的上清液，弃去沉淀。（5）在上清液中加300μl 预冷异丙醇，倒转样品1～3 次，使之充分混合，在室温下至少放置5 分钟。
（6）将微离心管中的样品在室温下离心20 分钟，以搜集沉淀的DNA。（7）弃去上清液，用300μl 80％的乙醇室温下沉淀 10 分钟。（8）室温下离心样品12 分钟，弃去上清液。
（9）用300μl 80％的乙醇再洗后，室温下离心 5 分钟，弃去上清液。
（10）室温下干燥样品1 小时或将样品放过夜。（11）用 100μl TE 悬浮样品。
第五篇：核酸检测事迹材料
核酸检测事迹材料
核酸检测事迹材料1
郭xx，主管护师，20xx年加入中国共产党，儿科病房护士长。
在儿科临床护理工作，以病人为中心，以质量为核心。熟练掌握各项护理技能，扎实理论基础。作为主管护士，做好病房管理、护理质控、教学科研管理工作；做好抢救车管理，基础药品管理；加强护理安全管理，提高风险意识，提高患者依从性及满意度；配合医生抢救危重患者提高护理文件书写水平，严把出科病历质量关。担任科室教学护士及院感护士多年，是院级护理骨干及应急成员。作为党员，新冠疫情发爆发，第一时间向党组织递交了抗疫请战书。在科内加强患儿及家属封闭管理，消毒工作。进行个人防护培训。参与院级新冠肺炎防控督导检查，多次积极参与核酸采集及疫苗接种工作，参与核酸采集达1500余人次，疫苗接种近千人次，坚守党员先锋岗，主动投入到社区防控执勤。
核酸检测事迹材料2
杨xx，主任护师，加入中国共产党，护理部主任，面对疫情在医院统一部署下，带领团队迅速成立新冠肺炎防治护理领导小组，制定疫情期间各项制度及流程，发挥护理部-科护士长-护士长三级管理作用，高效应对疫情的同时为患者提供安全优质的护理服务。为缓解人力资源紧张，组建志愿服务队，500多名护士积极响应，为大规模核酸采集、疫苗接种等任务奠定人力基础。身为共产党员处处发挥先锋模范作用，无论预检分诊、发热门诊、隔离病房、隔离站点，还是核酸采集、疫苗接种、冬奥保障等工作，都能以身作则、周密部署，确保各项工作安全有序进行。
作为优质护理服务先行者，她坚持以患者为中心的服务理念，将学党史、悟思想、办实事落到实处，以“接诉即办”为抓手在急诊设立“更换尿管、胃管”一站式服务，方便长期置管患者就医；作为学科带头人，她抓质量，重培训，多次组织应急培训及演练，带出一支“召之即来、来之能战、战之必胜”的护理队伍；作为管理者，她充分调动护士长、护理骨干的积极性，挖掘她们的潜能，关心慰问家庭困难、患大病护士，培养专业、关爱、创新、自信的护理队伍。
作为延庆区医师协会护理专业委员会主任委员、区护理质控组组长，对我区二级医院及各社区卫生服务中心护理工作进行指导，通过实地检查针对问题定期召开质控组工作会，开展护理管理和技能培训不断提升全区护理人员技术水平和服务能力，为百姓健康保驾护航！
核酸检测事迹材料3
郑xx，xx医院党支部委员、重症医学科护士长。该同志曾获评xx市“先进护士”、xx市“优秀志愿者”等荣誉称号。
郑xx严谨务实，勤奋工作，对病人处处体现关怀、体贴与爱护。对技术，她时刻铭记精益求精的精神，不断创新，努力进取。在临床上，事事亲力亲为，起着指导、示范作用。郑xx充分发挥党员模范带头作用，义无反顾加入党支部抗疫先锋队，带领科室护理人员积极投入到新冠肺炎疫情防控各项工作中。同时她积极参与新冠疫苗接种、大规模核酸检测采样的工作，为疫情防控贡献出了自己的力量。在担任ICU护士长期间，她不断推陈出新，勇于改革，并坚持制度化管理、加强感染监控的管理、病人安全的管理及人性化管理，整体提高了护理质量。
核酸检测事迹材料4
80后女民警曹xx，毕业于中国人民公安大学涉外警务专业，能说一口流利英语，现为江岸区公安分局永清派出所武汉天地社区涉外警务室民警。
1月29日，永清派出所组建“转运突击队”，曹xx主动请缨。
2月1日下午，派出所接到辖区社区求助，一名确诊女患者的丈夫需要隔离。曹xx和同事敲开其家门，开门的六旬男子没戴口罩。有些紧张的曹xx稍作调整，便宣讲有关政策、询问还有哪些困难，很快取得对方的理解配合。
转运车辆空间狭小密闭，民警转运时风险高，能不能搞个“隔离仓”？曹xx找来塑料桌布和透明胶带，将车辆前后分隔封闭得严严实实。从此，所里有了一辆简易送治专用车。
“曹警官，我们这有两名密切接触者，不肯去集中隔离点，还把社区干部赶了出来，你快来看看吧。”2月4日下午4时许，曹xx接到辖区吉林社区求援电话，立刻和同事赶到该住户家门口。
社区工作人员说，这家男主人刚因新冠肺炎去世，女主人和儿子是密切接触者。曹xx耐心劝说了半个多小时，母子俩最终同意隔离，随民警和社区工作人员下楼。
疫情发生以来，曹xx依法送治又温情帮扶，是同事们眼中的“女汉子”，社区群干亲切地称她为“曹姐”，她先后配合社区劝说、转运“四类人员”十余名，在“拉网大排查”中成功劝说转运确诊、疑似病例4人。
核酸检测事迹材料5
她是一名疫情防控一线的女战士，西安人眼中的“大白”，是一名普普通通的疾控人。曾荣获陕西省地方病防治先进工作者，商洛市三八红旗手，商洛市学雷锋志愿服务最美志愿者，柞水县卫健系统先进个人等多项荣誉。她就是柞水县疾病预防控制中心的舒琴。提起她，不由得让人想起在新冠疫情肆虐三秦大地时，她勇担疾控人的使命，带领柞水县第一批核酸采样队支援西安抗疫的故事。
闻令而动，舍弃小家，紧急驰援
xxxx年12月18日中午，正在午休的舒琴被电话声惊醒，同事告知，支援西安核酸采集医疗预备队有她，随时待命驰援西安抗疫……接完电话，她感到既荣幸又忐忑，身为医者，国之有难，能为国家奉献自己的绵薄之力，也对得起“白衣天使”的称号，她的丈夫是中学教师，早出晚归，母亲体弱多病，小女儿5岁，大女儿11岁，家里和两个孩子的都离不开她……可她觉得，疫情就是命令，她费尽心思安抚好家人……
12月20日中午，突然接到下午5点出发支援西安的通知，她加急做了核酸检测，忙完工作，匆忙回到家顾不上吃饭就收拾行李。拖着行李刚下楼，遇到大女儿，女儿问：“什么时候回来……”被女儿问得突觉伤感，顿时泫然欲泣，她用力转了转眼球说：“要不了多久，你要听话！”“放心吧，妈妈！早点回来。”转身的那一瞬间，潸然泪下！
5时整，柞水第一批50人组成的支援西安核酸采样队奔赴战场，舒琴被确定为队长。早在武汉疫情发生时，看到全国医护人员在除夕夜从四面八方驰援武汉，她恨不得自己也是其中一员随军出征。当看着同行们夜以继日地奋战在一线，内心无比的感动和敬佩！此时轮到自己走上逆行之路，内心真的很复杂！有如愿以偿的快感，更有疫路艰辛的恐惧，有奔赴一线的自豪感，更有疫途迷茫不知归期的担忧！耳畔有大家的欢声笑语，偶尔也悄然无声，此刻没有一个词语能诠释她内心的感受……经过两个多小时的长途奔波，终于到达了西安市鄠邑区中医医院她们的暂居地。
入户检测，不惧严寒，迎难而上
舒琴深知，她是白衣战士，克服困难，迎难而上是她的职责。她的主战场是每天都有阳性新增病例的封控区，面临着极大的密接风险，再加上德尔塔的隐秘性和传播力更强，虽穿着二级防护，心理上也多少有些恐惧。
12月25日当天气温零下8度，数九寒天，寒风凛冽，大雪磅礴。村主任提出：“今天集中采样吧，你们脚下太滑入户不安全……”她断然拒绝：“不行，集中传播风险太大，我们还是入户！”穿上靴套，行走在雪地里真的是一走三哧溜，任凭刺骨的寒冷在她的身体上见缝插针，入户核酸采集她丝毫没有懈怠，采集20多户时已冻的瑟瑟发抖，但为了及时完成任务尽早筛查出阳性病例，她没有停下手中的工作，颤巍巍的将一个咽拭子掰断，冻僵的手使劲才将采集管拧紧，手太用力了脚下一滑重重的跌坐在地上，队友赶紧拉她，她却说：“我没事，先把这个放好！”她拼尽全力地站了起来，抖抖身上的雪，笑着说：“走，继续！”……就这样，在雪地里踉踉跄跄地采完样本已是下午了。
回到住处，按程序互相消杀，然后简单吃了晚饭，满身疲惫排山倒海般袭来，躺下却怎么也睡不着，感觉手脚还是木的，她换了3盆热水泡了脚，好不容易不冷了却奇痒难受，双手冻得小拇指好几个小时都伸不直……那种侵入骨髓的冷，是她从未体验过的。
不畏艰险，勇挑重担，操作规范
黄沙百战穿金甲，不破楼兰终不还！封控区一直是“主战场”1个多月的时间，舒琴的足迹遍布鄠邑区各个防疫重点区域，她的身影始终穿梭在抗击疫情第一线。
抗疫的每一天，哪里有需要，哪里就有她的身影！“封控区”实行严格封闭管理“只进不出，严禁聚集”的管理措施，所以她每天入户采样。面对这样的情况，她不敢有丝毫松懈，严格采样，规范操作，条件艰苦加上寒冷的天气，给身着密闭防护服的她带来了极大挑战。每采集一人就消一次毒，酒精成分的消毒液每消一次手，就带走一些热量，一人一次，十人十次，百人百次，手冻得早已麻木不能打弯，但是就是用这样冻僵的双手，一次次稳、准、规范地完成了采样操作，因为她知道规范操作才能防止交叉感染，保护好村民和自身安全！一次采样时，好心的村民看到她冻得手发抖，端来一盆热水让她暖手，她婉言谢绝了，因为她知道即使再冷也不能污染了村民的盆。
在这天寒地冻的户外采集核酸，她的面罩很快就起雾了，水汽在她睫毛上结成了冰花，视线变得模模糊糊，为了节省时间，为了节省物资，她顾不得换面罩和口罩，只是使劲眯一会儿眼睛用体温融化掉睫毛上的冰花再继续，为了尽快完成采样筛查出阳性病例，遇到人口多的村子，她常常从早上一直忙到天黑，不吃饭不喝水不上厕所，从不叫苦。因为她知道，抗疫其实就是在与病毒争锋，和时间赛跑！
身先士卒，关爱队友，不知疲倦
不要人夸好颜色，只留清气满乾坤。作为核酸采样队长的舒琴，白天在工作中，她不畏严寒，不怕苦，勇挑重担；因为她们每天的采样工作地点都不同，每天夜里她不敢早睡，怕耽误了工作，时刻关注工作群信息，12点多才收到次日的采样任务，她要将采样任务合理及时安排到每一位队友，等安排好次日工作往往都已是凌晨2点了才能休息，次日清晨，她又早早起床将任务分给各小组，组织队友们奔赴各个采样点......长此以往，超负荷的工作量和工作压力使她严重失眠，同寝室的队友都好奇的问她，每天这么累，你怎么还睡得那么晚？她却说，自己瞌睡少。
支援的那些日子里，队友的工作遇到困难了找她，防疫物资不够了找她，生活用品没有了找她，心情郁闷了找她，身体不适还是找她，她就是最贴心的姐姐，总是乐呵呵的竭尽全力帮助队友处理好工作、生活和心理上的各种问题。她在干好本职工作的同时，组织协调好所有队友的各项工作和生活起居，还主动帮助队友，迎难而上，起到了模范带头作用，所带领的核酸采样队在援助西安疫情防控工作中做出了积极贡献，得到西安人民的一致好评。
舐犊情深，亲情守护，倾情相伴
尊前慈母在，浪子不觉寒。在舒琴支援西安的那些日子里，年近七旬的母亲，为她扛起了照顾俩个孩子生活起居的重担，忙碌一天的丈夫每天晚上从学校回来顾不得休息主动辅导孩子学习，为了让她能安心工作，每次通话时，母亲总是说自己身体没问题，老公也总是说孩子们都很乖......直到那天，大女儿打来电话说，她和妹妹都住在舅舅家，外婆生病了是爸爸背着去医院了......她才得知，体弱的母亲因为劳累犯了腰椎病又住院了。挂了电话，她忍不住落泪了，生平第一次真正体会到，忠孝两难全，家人们为了支持她的工作付出了很多艰辛。
xxxx年12月26日支援西安采样工作完成，第一批核酸采样队员终于返柞，疾控中心主任张锋激动地说：“舒琴是一个爱岗敬业、工作严谨、信念坚定、敢于担当、忠于职守的好干部，用自己的实际行动，践行了医者仁心。”为了保护好柞水一方净土，舒琴号召带领队友在隔离酒店集中隔离，直到春节才返回家中。
核酸检测事迹材料6
有一种付出，叫无私奉献；有一种担当，叫责任担当；有一种爱，叫大爱无疆；有一种红，叫志愿者红。面对突如其来的疫情形势，小寨小学的教职员工正用自己的行动践行着教育者的力量。
为响应区上级部门的号召，我校积极行动，召集志愿者，我校牛小坤教师率先垂范积极报名。她带着一岁多的女儿住在学校，以校为家。疫情当前，她积极主动地扛起了疫情阻击战的大旗，投身核酸检测点支援疫情防控工作。她的爱人义无反顾的来到学校，帮忙照顾孩子。
从1月9日到1月18日，共做了8轮核酸检测，她都坚守在小寨小学核酸检测采样点，全力以赴配合村委会做好检测点群众的疏导、组织、咨询工作，配合医护人员进行信息采集、帮助群众做好信息登记、答疑解惑，维持秩序等全员核酸检测各环节工作，确保核酸检测采样工作有序进行。
1月9日下午四点开始第一次做核酸检测，村民们都很积极，排队有点拥挤，因为他们没有认识到病毒传播的速度之快，也不知道保持安全距离，牛小坤教师迅速疏导，耐心讲解，做安全宣传工作，直到村民们认识到安全距离的重要性。
在现场秩序维护过程中，面对群众的不理解、不支持，牛小坤同志总是耐心做好劝解工作。1月10日，她在队伍中碰见一个不愿意保持安全距离的老人，她主动上前讲解当前疫情防控的要求，告知老人按照一米线规范排队参加检测。老人当场就不乐意了，开口就是谩骂。针对这一情景，她依旧不厌其烦地耐心解释引导、好言相劝。最后，经过反复的解释和说明，得到了老人的理解与支持，并对刚才的言行表示歉意，问题也得到了妥善的'处理。遇到行动不便的老人时，她也会挺身而出，在做好防护措施的`情况下，主动搀扶老人，为老人搬凳子，尽最大可能的帮助老人，充分展现了教师志愿者的责任心。
1月13日，牛小坤教师的公公因病逝世，由于疫情没办法办丧礼，把公公的后事简单处理完后，她毅然返回学校，化悲痛为力量，继续服务于抗疫一线，舍小家，为大家，为战胜疫情凝聚力量。
因为牛小坤教师平时住在学校，对学校环境比较熟悉，她主动负责检测点卫生，哪里有垃圾，她都会第一时间捡起来。同时她也会及时为志愿者们提供热水，为医护人员冲满热水袋，希望在这寒冷的冬季，可以为工作人员带来一丝温暖。
在抗疫一线，她是一名“战士”；在学校，她是一名班主任。牛小坤教师心系学生，以父母般的情怀关注着学生的健康状况和动向。每天，她都会耐心细致地通过健康上报和微信等方式逐一核实学生的身体状况。她还通过多种途径向学生及家长普及疫情防控的相关知识和发送一些官方信息，力争在所辖区域起到积极的引导和带动作用。同时，她也关注学生的心理发展，通过微信、电话等方式，不定时为学生和家长做心理疏导。
抗疫同心，志愿同行，疫情无情，人间有爱。牛小坤教师用自己的实际行动，努力践行一名教师的使命与担当，为抗击疫情奉献出自己的力量！
核酸检测事迹材料7
李xx，护师，20xx年加入中国共产党，体检中心护士。
作为一名共产党员第一时间请战，支援新冠疫情防控一线，积极参与门急诊预检分诊工作，克服凛冽的寒风、酷暑的难耐，每天都以饱满的热情投身到工作中。多次利用休息时间参加延庆区内、支援顺义核酸采集，积极参加会展疫苗接种，跟随流动车到乡镇接种疫苗，在高温炙烤下，汗水浸透了衣被，摘下手套，双手因长时间被汗水浸泡而发白，变皱。在应对突发事件中能够快速响应，迅速参加到应急保障工作中。自参加工作以来，无论是工作任务多重，工作强度多大，还是遇到棘手的事，她都能出色地完成组织交办的任务，真正做到了“共产党员是块砖，哪里需要哪里搬”。
核酸检测事迹材料8
自沈阳市启动全员核酸检测疫情防控工作以来，泉园街道青阳社区齐动员工作人员，广大党员志愿者和热心群众放弃休假，冲在一线，大家团结一心，尽职尽责，舍小家为大家，社区志愿者闻萍就是其中的一位。
“只要有需要，我就肯定在。”当她在家休假时，看到沈阳市全员核酸检测的通知后，第一时间联系社区书记，主动请缨，加入核酸检测工作队伍，负责核酸检测登记、引导工作。尽管眼圈已经熬红，声音也有些嘶哑，但依然能够感受到这名志愿者扑面而来的活力。
她与社区工作人员一起布置检测场地，耐心疏导居民有序排队，提醒居民按规定戴好口罩并保持1、5米安全距离。清晨穿上防护服开始，她便积极地投入到检测工作，顾不上吃喝，一直同社区、医务人员坚守到检测结束。在紧张的检测工作中，闻萍始终保持着认真细致、精益求精的工作标准，高效率、高质量地完成自己的工作。
核酸检测事迹材料9
初入发热门诊，为了尽快适应，我每天会早点到单位，跟着其他老师学习流程，看老师们如何更好地完成工作，回到家自己会捋捋流程，很快我便适应了工作。我们会每天穿着笨重的防护用品，为患者通风两次，打扫卫生，并且为他们消毒擦拭房间物品，给予他们相应的治疗，很多人到了隔离病房，面对陌生的环境，与家人隔绝，不免会焦虑和恐惧，这时我们会及时对他们进行开导，给予他们关心。
在为门诊小儿患者采集核酸时，为了减少宝宝的痛苦和恐惧，我会说：“宝儿，你喜欢吃什么味的糖呢？阿姨这有好多口味，有草莓的、有橙子的、有苹果的。”这时小宝会张开嘴巴，我会动作很轻，但速度会快采集标本，这样会减少他们的痛苦，采完后好多小朋友都说：“没味”，我会告诉他明天来了给你多放点糖。虽然骗人不好，但我愿意做这个“坏人”。
来到发热门诊也100多天了，尽管劳累，但我会一直向前，“疫情不散，战斗不止”。
核酸检测事迹材料10
赵xx，副主任护师，20xx年加入中国共产党，保健科护理组长。
20xx年初，新冠肺炎疫情期间，作为中西医结合科的护士长，她第一时间在请战书上签下了自己的名字，不畏艰险，迎难而上。在疫情最严重的时候，勇敢的申请来到危险性极大的隔离病房和发热门诊工作。参与组件隔离病房，制定隔离病房工作流程，完成每天的消毒登记，帮助医护人员做好个人防护。对待出现发热的患者，耐心细致的解答疑问，帮助病人缓解心理焦虑，积极配合治疗。主动参与核酸采集，隔离人员采血。20xx年2月，因工作需要，被调到保健科工作后，科室迎来了全区新冠疫苗接种工作，时间紧任务重，面对全新的工作，每天加班加点，规划接种方案，鼓励大家克服困难，积极面对工作，最终和科室的同事们一起保质保量的完成了工作，没有出现任何工作上的失误。30余年的护理工作，早已把默默奉献作为了自己的工作常态，她用自己的`实际行动，践行了共产党员的初心和使命。
核酸检测事迹材料11
王xx，女，中共党员，xx区第三人民医院外科护士长，主管护师。
在日常工作中勤勤恳恳、任劳任怨，在平凡的工作岗位上，刻苦钻研、扎实工作、无私奉献。在新冠肺炎疫苗大规模接种工作中，医院牵头负责白莲池街道新冠疫苗临时接种点，她作为点位负责人，梳理工作流程，完善工作机制，统筹人员安排，加强与街道、社区的对接，井然有序推进疫苗接种工作，截止目前顺利完成了7万多剂次的新冠疫苗接种。
初，新冠疫情不期而至，区卫健局发布了《招募援鄂后备医疗队医务人员倡议书》，凭着从事护理工作，并担任医院综合一病区护士长职务的经历，王xx第一时间向报了名，成为第一批区级医院援鄂后备队员。
每逢疫情防控需要时，她总是第一时间投入到防控一线，参与到转运患者及核酸采样等工作中。她还兼顾了疫情期间病房常态化封闭式管理，保障了病区医务人员及病人安全。
5月10日，xx区白莲池新冠疫苗接种点正式启动，王xx在该点位负责接种全流程工作。王xx除了要安排接种点降温、防暑、防晒、防盗的措施，还要对预检医生、登记人员、接种护士、AEFI保障人员均需进行严格的专业培训。
王xx带领接种点的医护人员放弃了周末的休息时间，中午也是轮换着吃饭，晚上经常延时工作到七、八点钟。王xx负责的接种点位超前完成了全年疫苗接种工作，并增加完成了1。7万群众的接种工作，且未发生一例疫苗接种严重不良反应及群众投诉。
核酸检测事迹材料12
方xx，副主任医师，20xx年加入中国共产党，心胸血管外科医生。
从事临床工作的他，热爱医学事业，时刻严格要求自己，不断提升自己业务及教学水平，多次获得院内危急重症抢救病例一等奖，新技术新项目一等奖，“优秀带教医师”、“优秀教学干事”。不仅如此，工作中的他总会设身处地为患者着想，耐心细致为患者服务，多次收到锦旗及12320电话表扬，并荣获“优质服务之星”称号。新冠肺炎疫情为医疗工作的开展增加了新的挑战，他在认真做好日常医疗及疫情防控工作的同时，积极申请到抗疫一线，多次参与核酸采集及疫苗接种工作。
核酸检测事迹材料13
疫情就是命令。接到前往集中隔离点通知的宿xx，立即收拾行李，枕戈以待。隔离点各项任务紧急，隔离人员集中送来时，她和同事们都按照工作流程认真进行消毒登记，分发物资，进行防控知识培训，从上午忙到晚上，经常顾不上吃饭，也要保证隔离人员及时入住，忙碌到深夜也是常见事，但是她从不抱怨苦与累，因为她知道这是责任与义务，这是她这一代人的使命和担当。由于隔离环境略微艰苦，很多隔离人员有一些怨言，她积极对其进行疏通引导，以不卑不亢的态度，良好的耐心，幽默的语言宽慰被隔离人员的情绪，得到被隔离人员一致好评。隔离点工作的重点难点是核酸检测采样，风险自不必说，困难的是隔离人员有很多儿童，配合起来有难度。她始终以充足耐心，积极地引导鼓励；以自己精湛熟练的手法，完成孩子们的一次次采样，采样时手法轻柔缓慢，最大限度的降低了被采样人员的不适，从最开始“轻点，轻点”，变成后来的“你们辛苦了！”，得到了隔离人员的一致理解与支持。
核酸检测事迹材料14
疫情凶险，我深知与病人“零距离”接触会有极高危险，但是没有半点犹豫和退缩，为疫情防控出一份力是我的工作和责任，所以我主动申请加入发热门诊一线工作。前期进行了全面的培训，进入岗位后，在短时间内很快适应了工作的繁忙与防护服所带来的各种不便。
为病人采集核酸、采血、扎针输液等，严密监测病人生命体征及病情变化，严格执行医嘱及三查七对，认真执行各项操作规程，在病人解除隔离后，对留观病房进行消毒、隔离……一天工作结束，虽然劳累但很充实。我没有了最初的手忙脚乱和不适应，对发热门诊的工作开始得心应手，主动要求坚守岗位。目前已在发热门诊工作三个多月了，疫情得到了有效控制，但常态化防控下还是不能放松警惕。
特殊时期，尽己所能，扛起属于自己的责任。愿疫情散去时，我们摘下口罩尽情欢笑，生活恢复往日的繁花似锦，城市依旧车水马龙……
核酸检测事迹材料15
沈xx是xx采样点的点位长，当疫情突袭，她一听说社区急需志愿者，就毅然报名了，就这样一直在点位上坚守了近三十轮的区域核酸检测工作。从什么也不会的小白，到学会了如何安全消杀、信息录入、协调工作、维持秩序等等，她成为了一名优秀的点位长。她不仅照顾到每一位居民，还用温情对待每一位在点上服务的人。
在采样中，居民遇到困难，她都会耐心地一一解决；看到有志愿者不舒服，她就会主动接过别人的活；她还会抽空与医护聊聊天，以帮助他们缓解疲劳。点位上的企业志愿者负责人说：“我们公司的志愿者都喜欢你这里，舒心、愉快。”；医护临走时会说：“我希望下次还能分配到这里来哦！”她说：“我们是一个集体，核酸采样持续了这么久，大家都会觉得很累，那么我们更应该用快乐、积极、温暖的状态去相互对待，感受人间美好，才能坚定地走到成功！”
点击咨询 