食品中柑橘红2号测定（BJS,12）[5篇范例]

第一篇：食品中柑橘红2号测定（BJS,12）

附件1 食品中柑橘红2号的测定 BJS 201912 1 范围 本方法规定了柑橘类水果、果酱、蜜饯、果汁饮料、辣椒油、辣椒酱、火锅底料、肉制品中柑橘红2号的液相色谱-串联质谱测定方法。

本方法适用于柑橘类水果、果酱、蜜饯、果汁饮料、辣椒油、辣椒酱、火锅底料、肉制品中柑橘红2号的测定。

原理 试样用乙腈提取后，经氨基固相萃取柱净化，液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。

试剂与材料 除另有规定外，本方法中所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T 6682规定的一级水。

3.1 试剂 3.1.1 乙腈（CH3CN）：色谱纯。

3.1.2 二氯甲烷（CH2Cl2）：色谱纯。

3.1.3 甲酸（HCOOH）：色谱纯。

3.1.4 氯化钠（NaCl）。

3.1.5 氮气（N2）：纯度≥99.9 %。

3.2 试剂配制 3.2.1 乙腈-二氯甲烷溶液（1 %）：准确量取乙腈（3.1.1）1mL，于100mL容量瓶中，用二氯甲烷（3.1.2）定容至刻度，摇匀后备用。

3.2.2 甲酸-乙腈溶液（1 %）：准确量取甲酸（3.1.3）1mL于100mL容量瓶中，用乙腈（3.1.1）定容至刻度，摇匀后备用。

3.2.3 甲酸水溶液（0.1 %）：准确量取甲酸（3.1.3）1mL于1000mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀后备用。

3.3 标准品 柑橘红2号标准物质：分子式C28H16N2O3，CAS 号：6358-53-8，纯度≥90.0 %。

3.4 标准溶液配制 3.4.1 柑橘红2号标准储备溶液（200μg/mL）：准确称取按其纯度折算为 100% 质量的柑橘红2号标准品（3.3）0.01g（精确至0.00001g）于50mL容量瓶中，用乙腈（3.1.1）溶解并定容至刻度，摇匀，配制成浓度为200μg/mL的标准储备溶液，溶液转移至试剂瓶中，4℃冷藏保存，有效期6个月。

3.4.2 柑橘红2号中间溶液：准确移取一定量柑橘红2号标准储备溶液（3.4.1），用乙腈（3.1.1）稀释成一定浓度的中间溶液，溶液转移至试剂瓶中，4℃冷藏保存，有效期3个月。

仪器与设备 4.1 液相色谱-串联质谱仪：配电喷雾离子源（ESI源）。

4.2 电子分析天平：感量分别为0.00001g和0.01g。

4.3 超声波清洗器。

4.4 涡旋混合器。

4.5 离心机：转速≥8000r/min。

4.6 氮吹仪。

4.7 固相萃取装置。

4.8 氨基固相萃取柱：500mg，3mL。

4.9 微孔滤膜：有机相，孔径0.22μm。

4.10 均质机。

分析步骤 5.1 试样制备 固体样品切成小块，经均质机粉碎、混匀，分装于洁净容器中。其中水果样品只取果皮部分粉碎。

半固体样品直接经均质机均质、混匀，分装于洁净容器中。

液体样品摇匀后备用。

5.2 试样前处理 5.2.1 试样提取 称取试样2g（精确至0.01g）于50mL离心管中，准确加入10mL乙腈（3.1.1），涡旋振荡1min，加入2g氯化钠，剧烈振摇1min，超声10min，以8000r/min离心3min。取上清液乙腈层至15mL离心管中，40℃氮吹浓缩至干，用3mL乙腈-二氯甲烷溶液（1 %）（3.2.1）涡旋、超声溶解残渣，溶液待净化。

5.2.2 试样净化 用6mL乙腈-二氯甲烷溶液（1%）（3.2.1）活化固相萃取柱，待液面降至柱床表面时，将5.2.1的待净化液转移至固相萃取柱，同时收集流出液。用6mL乙腈-二氯甲烷溶液（1 %）（3.2.1）分两次洗涤15mL离心管，将洗涤液淋洗固相萃取柱同时收集流出液。合并流出液，在40℃条件下氮吹浓缩至干，准确加入10mL甲酸-乙腈（1%）溶液（3.2.2）溶解残渣，过微孔滤膜后，上机测定。

5.3 基质标准溶液制备 称取5个经质谱确认不含柑橘红2号的阴性样品于50mL离心管中，加入一定浓度的柑橘红2号的中间溶液，得到柑橘红2号含量为20ng、50ng、100ng、200ng、400ng的基质样品，其余按5.2步骤操作完成。其中阴性样品按照5.2步骤操作完成后，上机测试，不含有柑橘红2号。

5.4 仪器参考条件 5.4.1 液相色谱参考条件  a)色谱柱：C18柱（粒径1.7 µm, 75 mm× 2.1 mm），或性能相当者；

b)流动相：A为0.1 %甲酸水溶液（3.2.3），B为乙腈（3.1.1），梯度洗脱条件见表1；

c)进样体积：2.0μL；

d)流速：0.30mL/min；

e)柱温：40℃；

表1 流动相及梯度洗脱条件 时间/min 流动相A/% 流动相B/% 0.0 90 10 3.0 50 50 5.0 5 95 7.0 5 95 7.1 90 10 9.0 90 10 5.4.2 质谱参考条件  a）离子源：电喷雾离子源（ESI源），正离子模式；

b）监测方式：多反应监测（MRM）；

c）毛细管电压：3.0kV；

d）脱溶剂气温度：500℃；

e）离子源温度：150℃；

f）脱溶剂气流速：850L/h；

g）锥孔气流速：150L/h；

h）碰撞气（Ar）流速：0.12mL/min；

柑橘红2号的定性、定量离子对、驻留时间及碰撞能量见表2。

表2 柑橘红2号的质谱参考条件 化合物 母离子（m/z）子离子（m/z）锥孔电压（V）驻留时间（ms）碰撞能量（eV）柑橘红2号 309.1 153.0* 25 100 20 278.0 25 100 12 注：* 定量离子 5.4.3 定性测定 在相同试验条件下测定试样和基质标准溶液，若样品溶液中检出色谱峰的保留时间与基质标准溶液中目标物色谱峰的保留时间一致（变化范围在±2.5%之内），且样品溶液的质谱离子对相对丰度与浓度相当基质标准溶液的质谱离子对相对丰度相比较，相对离子丰度的相对偏差不超过表3规定的范围，则可判定样品中存在该组分。

表 3 定性时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度（%）k﹥50% 50%≥k﹥20% 20%≥k﹥10% k≤10% 允许的最大偏差（%）± 20 ± 25 ± 30 ± 50 5.4.4 定量测定 将基质标准溶液注入液相色谱-串联质谱仪测定，得到柑橘红2号的峰面积。以基质标准溶液浓度为横坐标，以柑橘红2号定量离子的峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线。将试样溶液（5.2）按仪器参考条件（5.4）进行测定，得到相应的试样溶液的色谱峰面积，根据校正曲线得到试样溶液柑橘红2号的浓度。试样溶液中目标物响应值若高于校正曲线线性范围，应稀释后进行分析。

在上述色谱和质谱条件下，柑橘红2号的标准溶液多反应监测质量色谱图参见附录A。

5.5 空白试验 除不加试样外，均按上述步骤进行操作。

分析结果的表述 试样中柑橘红2号的含量按式（1）计算：

................................................................（1）式中：

X — 试样中柑橘红2号的含量，单位为微克每千克（µg/kg）；

m — 由基质加标工作计算出的测定样液中柑橘红2号的含量，单位为纳克（ng）；

M — 试样的质量，单位为克（g）；

计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留两位有效数字。

精密度 在重复性条件获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10 %。

其他 当称样量为2g时，柑橘红2号的检出限为5µg/kg，定量限为10µg/kg。

附录A 柑橘红2号多反应监测质量色谱图 图A.1 柑橘红2号标准溶液的多反应监测质量色谱图（浓度10ng/mL）本方法负责起草单位：山东省食品药品检验研究院。

方法验证单位：北京市疾病预防控制中心、上海市质量监督检验技术研究院、、四川省食品药品检验检测院、武汉食品化妆品检验所、山西省食品药品检验所。

方法主要起草人：张艳侠、尹丽丽、卢跃鹏、薛霞、刘艳明、王骏。

第二篇：食品中辛基酚等5种酚类物质的测定（BJS 201913）

附件2

食品中辛基酚等5种酚类物质的测定

BJS

201913

范围

本标准规定了食品中辛基酚、正辛基酚、壬基酚、正壬基酚、双酚A的液相色谱-串联质谱测定方法。

本标准适用于婴儿配方食品、畜肉、禽蛋、水产品、罐头食品、植物油中辛基酚、正辛基酚、壬基酚、正壬基酚、双酚A的测定。

2原理

试样中加入同位素内标后，经乙腈提取，离心，取上清液经固相萃取柱净化，采用液相色谱-串联质谱仪测定，内标法定量。

3试剂和材料

除另行规定外，本实验所用试剂均为分析纯，水为GB/T

6682规定的一级水。

3.1

试剂

3.1.1

甲醇（CH3OH）：质谱级。

3.1.2

乙腈（CH3CN）：质谱级。

3.1.3

氨水（NH4OH）：色谱级。

3.2

试剂配制

0.05%

氨水溶液（V/V）：取氨水（3.1.3）0.5mL用水稀释至1000

mL。

3.3

标准品

辛基酚、正辛基酚、壬基酚、正壬基酚、双酚A标准物质和辛基酚-13C6、正辛基酚-D17、壬基酚-13C6、正壬基酚-D4、双酚A

-D4同位素内标的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见附录A表A.1，纯度≥98%。

3.4

标准溶液配制

3.4.1标准储备溶液（100

mg/L）：分别称取辛基酚、正辛基酚、壬基酚、正壬基酚和双酚A标准物质（3.3）10

mg（精确至0.000

g），用甲醇（3.1.1）溶解，并转移至100

mL容量瓶中，定容至刻度，标准储备液浓度为100

mg/L。溶液转移至试剂瓶中，贮存于-20

℃冰箱中，有效期12个月。

3.4.2混合标准中间溶液（1

mg/L）：分别准确吸取辛基酚、正辛基酚、壬基酚、正壬基酚和双酚A标准储备液(100

mg/L)(3.4.1)

mL至100mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，制成1

mg/L的混合标准中间溶液，溶液转移至试剂瓶中，置于4

℃冰箱中保存，有效期3个月。

3.4.3同位素内标标准储备溶液（100

mg/L）：分别称取辛基酚-13C6、正辛基酚-D17、壬基酚-13C6、正壬基酚-D4、双酚A

-D4同位素内标（3.3）10

mg（精确至0.000

g），用甲醇（3.1.1）溶解，并转移至100

mL容量瓶中，定容至刻度，标准储备液浓度为100

mg/L。溶液转移至试剂瓶中，贮存于-20

℃冰箱中，有效期12个月。

3.4.4同位素内标混合标准中间溶液（1

mg/L）：分别准确吸取辛基酚-13C6、正辛基酚-D17、壬基酚-13C6、正壬基酚-D4、双酚A

-D4同位素内标标准储备液(100

mg/L)(3.4.3)各1

mL至100

mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，制成1

mg/L的混合标准中间溶液，溶液转移至试剂瓶中，置于4

℃冰箱中保存，有效期3个月。

3.4.5

同位素内标混合标准工作液（100

μg/L）：分别准确吸取同位素内标标准储备液(1

mg/L)(3.4.4)各1

mL至10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，制成100

μg

/L的混合标准工作液。临用时配制。

3.4.6混合标准工作溶液：分别准确吸取混合标准中间液

(1

mg/L)(3.4.2)适量，加入同位素内标混合标准中间溶液（1

mg/L）(3.4.4)，使辛基酚、正辛基酚、壬基酚、正壬基酚和双酚A浓度分别为0.5

μg/L、1

μg/L、5

μg/L、10

μg/L、20

μg/L和50

μg/L的混合标准系列工作溶液。临用时配制。

3.5

材料

固相萃取小柱（官能化聚苯乙烯/二乙烯苯萃取柱）：200

mg，6

mL。

仪器和设备

4.1高效液相色谱-串联质谱仪，配电喷雾（ESI）离子源。

4.2天平：感量分别为0.001g和0.000

g。

4.3涡旋混合器。

4.4

离心机：转速≥8000

r/min。

4.5

超声波清洗器。

分析步骤

5.1

试样制备

5.1.1

乳粉、米粉：试样混合均匀，密封并标明标记，于-20℃冰箱冷藏保存。

5.1.2

禽蛋：取代表性试样约200

g，去壳后用组织匀浆机搅拌均匀，装入洁净容器中，密封并标明标记，于-20

℃冰箱中冷藏保存。

5.1.3水产品、畜肉：取代表性试样约200

g，用匀浆机匀浆均匀，装入洁净容器中，密封并标明标记，于-20

℃冰箱中冷藏保存。

5.1.4

植物油：试样混合均匀，装入洁净容器中，密封并标明标记，于-20

℃冰箱中冷藏保存。

5.1.5

罐头食品：取罐头中固形物试样约50

g,用匀浆机匀浆均匀，装入洁净容器中，密封并标明标记，于-20

℃冰箱中冷藏保存。

冷藏保存后的样品解冻后需再次经匀浆机均质后使用。

5.2

提取

准确称取1

g（精确至0.001

g）样品于15

mL具塞玻璃试管中，加入0.1mL同位素内标混合标准工作液（100

μg/L）(3.4.5)

和5

mL乙腈（3.1.2），涡旋混匀，超声提取15

min，8000

r/min离心5

min，取上层乙腈相；残留部分再用5

mL

乙腈重复提取一次，合并乙腈相，置冰箱-20℃冷冻2h，取出于8000

r/min离心5

min，取上清液待净化。

5.3

净化

取固相萃取柱（3.5），使用前用18

mL甲醇活化，6mL水平衡。将5.2项所得上清液加30

mL水稀释,充分摇匀后以1

mL/min~2

mL/min的速度上样，弃去滤液，用12

mL60

%甲醇水溶液（V/V）淋洗，弃去淋洗液，再用6

mL乙腈洗脱，洗脱液于50℃用氮气吹至近干。用1

mL甲醇溶解残渣，待测。

5.4

空白试验

除不加样品外，采用相同的分析步骤进行操作。

5.5仪器参考条件

5.5.1色谱条件

a)

分析柱：

C18

柱（3

μm，50

mm

×

mm），或性能相当者；捕集柱：

C18

柱（5

μm，50

mm

×

4.6

mm），或性能相当者；捕集柱位于进样阀之前。

b）流动相：A为0.05%氨水溶液（3.2），B为甲醇（3.1.1），洗脱梯度见表1。

c）流速：400

μL/min。

d)

柱温：30℃。

e)

进样量：10

μL。

表1

梯度洗脱程序表

时间（min）

A(%)

B(%)

0

14.5

14.51

5.5.2

质谱条件

a)

离子源：电喷雾离子源（ESI源）。

b)

检测方式：多反应离子监测（MRM）。

c)

碰撞气为高纯氮气，干燥气、雾化气、鞘气等均为氮气或其他合适气体，使用前应调节相应参数使质谱灵敏度达到检测要求，毛细管电压、干燥气温度、鞘气温度、鞘气流量、喷嘴电压、碰撞能量、碎裂电压等参数应优化至最佳灵敏度，监测离子对和定量离子对等信息详见附录B。

5.6

定性测定

按照超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱条件测定试样和标准工作溶液，记录试样和标准溶液中各化合物的色谱保留时间，当试样中检出与某标准品色谱峰保留时间一致的色谱峰（变化范围在±2.5%之内），并且试样色谱图中所选择的监测离子对的相对丰度比与相当浓度标准溶液的离子相对丰度比（k）的偏差不超过表2规定的范围，可以确定试样中检出相应化合物。

表2

定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差

相对离子丰度（%）

k＞50%

50%≥k＞20%

20%≥k＞10%

k≤10%

允许的最大偏差（%）

±

±

±

±

5.7定量测定

5.7.1标准曲线的制作

将混合标准工作溶液（3.4.6）分别按仪器参考条件（5.5）进行测定，得到目标化合物峰面积与内标峰面积的比值，根据标准曲线得到待测液中目标化合物的浓度。

对照品色谱图参见附录C。

5.7.2试样溶液的测定

将试样溶液（5.3）按仪器参考条件（5.5）进行测定，得到相应的样品溶液的色谱峰面积。根据标准曲线得到待测液中组分的浓度，平行测定次数不少于两次；样品中各待测组分的响应值应在标准曲线的线性响应范围内，若超出标准曲线线性范围，应用甲醇（3.1.1）稀释后进行分析。

结果计算

结果按式（1）计算：

…………………………………………（1）

式中：

X—试样中某种组分的含量，单位为微克每千克（μg/kg）；

c—由标准曲线得出的样液中某种组分的浓度，单位为纳克每毫升（μg/L）；

co——由标准曲线计算得到的过程空白样品中某种组分的浓度，单位为微克每升（μg/L）

V—试样溶液定容体积，单位为毫升（mL）；

m—试样称取的质量，单位为克（g）；

f—稀释因子。

计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留三位有效数字。

精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的20%。

8检出限和定量限

当称样量为1

g，定容体积为1

mL时，本方法中辛基酚、正辛基酚、壬基酚、正壬基酚和双酚A的检出限均为1.0μg/kg，定量限均为2.0μg/kg。

9其他

9.1实验中所用的器具均为玻璃材质，液相色谱-串联质谱仪的管线均为不锈钢或聚四氟乙烯材质。

9.2

严格控制试剂空白，空白值应不得对检测结果产生明显影响，否则扣除空白时会引起较大的误差。

附录A

辛基酚等5种酚类物质相关信息

表A.1

辛基酚等5种酚类物质英文名称、中文名称、分子式、CAS号、相对分子质量

序号

中文名称

英文名称

CAS登录号

分子式

相对分子量

辛基酚

4-tert-Octyl

phenol

140-66-9

C14H22O

206.33

正辛基酚

4-n-Octyl

phenol

1806-26-4

C14H22O

206.33

壬基酚

Nonylphenol

25154-52-3

C15H24O

220.35

正壬基酚

4-n-Nonylphenol

104-40-5

C15H24O

220.35

双酚A

Bisphenol

A

80-05-7

C15H16O2

228.29

辛基酚-13C6

4-tert-Octylphenol-13C6

1173020-24-0

C14H22O

212.28

正辛基酚-D17

4-n-Octyl

phenol-D17

1219794-55-4

CD3(CD2)7C6H4OH

223.43

壬基酚-13C6

3,6,3-Nonylphenol-13C6

1173020-38-6

C15H24O

226.40

正壬基酚-D4

4-n-Nonylphenol

-2,3,5,6-D4,OD

358730-95-7

C15H19D5O

225.38

双酚A-D4

Bisphenol

A

-3,3’,5,5’-D4

347841-41-2

C15H12

D4O2

232.31

附录B

超高效液相-三重四极杆串联质谱参考条件

质谱参考条件

a）电离方式：电喷雾负离子模式；

b）检测方式：多反应监测（MRM）；

c）离子源温度(TEM):650℃;

d）雾化气(Gas1):

55;

e）辅助气(Gas2):

65；

f）气帘气(Gurtain

Gas):

20;

g）电喷雾电压：-4500V；

h）干燥气流速：11

L/min；

i）定性离子、定量离子、碎裂电压和碰撞能量见表B.1。

表B.1

化合物定性、定量离子和质谱分析参数

化合物

Q1

Q3

DP/V

CE/V

辛基酚

205

133*

-80

205

117

-80

-80

正辛基酚

205

106*

-80

205

119

-80

-54

4-壬基酚

219

133*

-80

219

147

-80

4-正壬基酚

219

106*

-80

219

119

-80

双酚A

227

212*

-80

227

133

-80

辛基酚-13C6

211

139*

-73

正辛基酚-D17

222

108*

-80

壬基酚-13C6

225.1

138.9*

-90

正壬基酚-D4

223

110*

-80

双酚A-D4

231

216*

-80

*

定量离子。

附录C

超高效液相-三重四极杆串联质谱标准品色谱图

双酚A

双酚A-D4

B.2

B.1

壬基酚-13C6

4-壬基酚

B.4

B.3

4-正壬基酚

壬基酚-D4

B.6

B.5

对辛基酚-13C6

4-辛基酚

B.8

B.7

4-正辛基酚

辛基酚-D17

B.10

B.9

0.01

μg/mL混合标准溶液中各化合物MRM色谱图

图C.1

双酚A；图C.2

双酚A-D4；图C.壬基酚；图C.4壬基酚-13C6；图C.5正壬基酚；图C.6

正壬基酚-D4；图C.7辛基酚；图C.8

辛基酚-13C6；图C.9正辛基酚；图C.10

正辛基酚-D17

本方法负责起草单位：中国食品药品检定研究院。

方法验证单位：北京市疾病预防控制中心、国家食品安全风险评估中心、陕西省食品药品监督检验研究院、中国肉类食品综合研究中心、辽宁省食品检验检测院、湖北省食品质量安全监督检验研究院。

方法主要起草人：宁霄、金绍明、邵兵、黄传峰、曹进、丁宏、张烁。

第三篇：豆制品、火锅、麻辣烫等食品中喹诺酮类化合物的测定（BJS 201909）

豆制品、火锅、麻辣烫等食品中喹诺酮类化合物的测定

BJS

201909

范围

本标准规定了豆腐、豆干、火锅底料、麻辣烫底料及火锅和麻辣烫的食材中诺氟沙星、氧氟沙星、洛美沙星、培氟沙星、氟罗沙星、沙拉沙星、双氟沙星、司帕沙星、环丙沙星、达氟沙星、恩诺沙星的高效液相色谱-串联质谱检测法。

本标准适用于豆腐、豆干、火锅底料、麻辣烫底料及火锅和麻辣烫的食材中诺氟沙星、氧氟沙星、洛美沙星、培氟沙星、氟罗沙星、沙拉沙星、双氟沙星、司帕沙星、环丙沙星、达氟沙星、恩诺沙星的测定和确证。

原理

采用0.1

mol/L

EDTA-Mcllvaine

缓冲溶液提取样品中的喹诺酮类化合物，经离心和过滤后，上清液经HLB固相萃取柱净化后，用高效液相色谱-串联质谱仪检测和确证，内标法定量。

试剂和材料

以下所用的试剂，除特别注明外均为分析纯，水为GB/T

6682规定的一级水。

3.1

乙腈（CH3CN）：色谱纯。

3.2

甲醇（CH3OH）：色谱纯。

3.3

甲酸（CHOOH）：色谱纯。

3.4

甲醇（CH3OH）。

3.5

氨水（NH4OH）：浓度25%～28%。

3.6

乙二胺四乙酸二钠（C10H14N2Na2O8·2H2O）。

3.7

柠檬酸（C6H8O7·H2O）。

3.8

磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）。

3.9

氢氧化钠（NaOH）。

3.10

盐酸（HCl）：含HCI

38%。

3.11

乙酸铵（CH3COONH4）：色谱纯。

3.12

磷酸氢二钠溶液（0.2

mol/L）：称取71.63

g磷酸氢二钠（3.8），用水溶解并定容至1000

mL。

3.13

柠檬酸溶液（0.1

mol/L）：称取21.01

g柠檬酸（3.7），用水溶解并定容至1000

mL。

3.14

Mcllvaine缓冲溶液：将1000

mL

0.1

mol/L柠檬酸溶液（3.13）与625

mL

0.2

mol/L磷酸氢二钠溶液（3.12）混合，用盐酸或氢氧化钠调节pH至4.0±0.1。

3.15

EDTA-Mcllvaine

缓冲溶液（0.1

mol/L）：称取60.5g乙二胺四乙酸二钠（3.6）至1625mL

Mcllvaine缓冲溶液（3.14）中，超声使其溶解。

3.16

5%甲醇水溶液：取5

mL甲醇（3.4），用水稀释至100

mL。

3.17

25%氨水甲醇溶液：取25

mL氨水（3.5），用甲醇（3.4）稀释至100

mL。

3.18

标准品：标准品中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量见附录A表A.1，纯度≥99%。

3.19

标准储备液配制：分别精密称取标准品（3.18）约10

mg，置10

mL容量瓶中，加入0.2

mL甲酸（3.3），超声使溶解，用乙腈（3.1）定容至刻度，摇匀，配制成浓度为1.0

mg/mL的标准储备液，转移至溶剂瓶中于-18℃以下避光保存，有效期6个月。

3.20

混合标准溶液的配制：准确吸取标准储备液（3.19）1

mL于100

mL容量瓶中，用甲醇（3.2）定容至刻度，配制成浓度为0.01

mg/mL的混合标准溶液（环丙沙星、沙拉沙星浓度约0.015mg/mL），于4℃以下避光保存，有效期3个月。

3.21

混合标准中间溶液的配制：准确吸取混合标准溶液（3.20）1

mL至10

mL容量瓶中，用甲醇（3.2）定容至刻度，配制成浓度为1.0

μg/mL的混合标准中间溶液（环丙沙星、沙拉沙星浓度约1.5

μg/mL），于4℃以下避光保存，临用新配。

3.22

内标标准储备液配制：分别称取氘代同位素标准品（3.18）约10

mg，至10

mL容量瓶中，加入0.2

mL甲酸（3.3），超声溶解，用乙腈（3.1）稀释至刻度，配制成浓度为1.0

mg/mL的标准储备液，于-18℃以下避光保存，有效期6个月。

3.23

混合内标标准中间溶液的配制：准确吸取内标标准储备液（3.22）0.01mL于10

mL容量瓶中，用甲醇（3.2）定容至刻度，配制成浓度为1.0

μg/mL的混合内标标准中间溶液，于4℃以下避光保存，临用新配。

3.24

固相萃取小柱（500

mg，6

mL）：HLB柱或相当者。使用前依次以6

mL甲醇、6mL水活化，保持柱体湿润。

仪器和设备

4.1

液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。

4.2

分析天平：感量0.001g和0.00001

g。

4.3

涡旋振荡器

4.4超声仪

4.5离心机：转速≥8000

r/min

4.6

均质器

4.7

氮气浓缩仪

测定步骤

5.1

试样制备与保存

豆制品、火锅和麻辣烫的食材

从待检样品中取出样品约500g，用组织捣碎机充分捣碎混匀，装入洁净容器中，密封，并标明标记，于-18℃冷冻存放。

火锅底料、麻辣烫底料

固体状：从待检样品中取出样品约500g，用组织捣碎机充分捣碎混匀，装入洁净容器中，密封，并标明标记，于4℃冷藏存放。

半固体状：从待检样品中取出样品约500g，放入研钵中，迅速研磨均匀，装入洁净容器中，密封，并标明标记于4℃冷藏存放。

液体状：从待检样品中取出样品约500g，搅拌均匀后装入洁净容器中，密封，并标明标记，于4℃冷藏存放。

5.2

样品溶液制备

提取：称取5.0

g均匀样品（精确至0.001g），置50

mL离心管中，精密加入混合内标标准中间溶液（3.23）0.1mL，加入20

mL

0.1

mol/L

EDTA-Mcllvaine

缓冲溶液（3.15），涡旋混匀1min，超声提取15

min，8000

r/min离心5

min，上清液转移至50

mL容量瓶中，残渣用EDTA-Mcllvaine

缓冲溶液（3.15）同法重复提取两次，每次10

mL，合并上清液至同一容量瓶中，用EDTA-Mcllvaine

缓冲溶液（3.15）定容至刻度，混匀。用滤纸过滤（必要时10000

r/min离心5

min后过滤），续滤液待净化。

净化：精密吸取上述待净化液25.0

mL，以约1

mL/min的流速全部通过固相小柱（3.24），用3

mL

5%甲醇水溶液（3.16）淋洗，抽干，先后以6

mL甲醇、3

mL氨水甲醇（3.17）洗脱，合并甲醇及氨水甲醇洗脱液，45

℃氮吹至近干，准确加入2.0

mL流动相初始比例复溶液溶解残渣，过0.22

μm滤膜，续滤液供液相色谱-串联质谱仪分析。

5.3

基质标准工作溶液的制备

称取5.0

g空白试样（精确至0.001g），置50

mL离心管中，除不加入混合内标标准中间溶液外，其余同5.2操作处理后得到空白基质，共制备6份。

分别精密吸取混合标准中间溶液（3.21）0

mL、0.010

mL、0.020

mL、0.050

mL、0.100

mL、0.200

mL及混合内标标准中间溶液（3.23）0.025

mL于试管中，氮吹至近干，精密加入1.0

mL空白基质复溶，过0.22

μm滤膜，制成浓度为0

ng/mL、10

ng/mL、20

ng/mL、50

ng/mL、100

ng/mL、200

ng/mL的基质标准工作溶液（环丙沙星、沙拉沙星浓度为0

ng/mL、15

ng/mL、30

ng/mL、75

ng/mL、150

ng/mL、300

ng/mL，同位素内标浓度约25ng/mL）。

5.4

测定

5.4.1

液相色谱参考条件

1）

色谱柱：C18色谱柱，2.1

mm×50

mm×1.7

μm，或性能相当者。

2）

柱温：40℃。

3）

流速：0.25

mL/min。

4）

进样量：2

μL。

5）

流动相：A-5

mmol/L乙酸铵水溶液（含0.1%甲酸），B-乙腈。梯度洗脱条件见表1。

表1

梯度洗脱条件

时间（min）

A(%)

B(%)

0

10.5

13.1

5.4.2

质谱参考条件

1）

电离方式：电喷雾电离（ESI）；

2）

扫描方式：正离子扫描；

3）

检测方式：多反应监测MRM；

4）

离子源参数参考条件：

离子源接口电压，4000

V；离子源接口温度，350

℃；脱溶剂温度，250

℃；离子源加热温度，400

℃；雾化气流速，2.9

L/min；干燥气流速，10.0

L/min；加热气流速，10.0

L/min。

5）定性离子对、定量离子对参见表2。

表2

喹诺酮类药物主要质谱参数

序号

组分

母离子

子离子

Q1

预四极杆电压

碰撞电压

Q3

预四极杆电压

（m/z）

（m/z）

（V）

(V)

（eV）

诺氟沙星

320.2

*302.0

231.1

氧氟沙星

362.2

*318.2

261.1

洛美沙星

352.0

*265.0

308.0

培氟沙星

334.0

290.1

*316.2

氟罗沙星

370.0

*326.0

269.0

沙拉沙星

386.2

342.0

299.1

*368.1

双氟沙星

400.0

*356.0

299.0

司帕沙星

393.0

*349.0

292.0

环丙沙星

332.1

*314.1

287.8

231.0

达氟沙星

358.0

*340.1

283.2

82.1

恩诺沙星

360.0

*342.1

316.0

245.2

D8-环丙沙星

340.3

322.1

D5-恩诺沙星

365.1

321.1

D5-诺氟沙星

325.3

307.2

注：1.“*”表示定量离子；2.所列质谱参考条件是在岛津（LC/MS-8050）质谱仪上完成的，此处所列试验用仪器型号仅供参考，不涉及商业目的，鼓励方法使用者尝试不同厂家或型号的仪器；3.对不同质谱仪，仪器参数可能存在差异，测定前应将质谱参数优化到最佳；4.由于喹诺酮类化合物离子化受基质干扰较为

显著，方法使用者可根据实际情况选择表中所列离子对进行定性定量测定。

5.4.3

标准曲线绘制

取基质标准工作溶液（5.3）按浓度由低到高依次进样检测，内标法绘制标准曲线。

5.5

定性

在相同实验条件下，试样中待测物质的保留时间与标准工作溶液中对应的保留时间偏差应在±2.5%之内；且试样谱图中各组分定性离子的相对丰度与标准工作溶液定性离子的相对丰度，其允许偏差不超过表3规定的范围时，则可确定为样品中存在此种待测物。基质标准溶液多反应监测（MRM）典型图谱见附录B。

表3

定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差

相对离子丰度，%

＞50%

＞20%～50%

＞10%～20%

≤10%

允许的相对偏差，%

±20%

±25%

±30%

±50%

5.6

定量

待测样液中喹诺酮药物的响应值应在标准曲线线性范围内，诺氟沙星、氧氟沙星、培氟沙星、氟罗沙星以氘代诺氟沙星为内标，洛美沙星、双氟沙星、环丙沙星、达氟沙星以氘代环丙沙星为内标，司帕沙星、沙拉沙星、恩诺沙星以氘代恩诺沙星为内标，内标法定量。本方法中所列内标能基本满足方法要求，如条件允许，可采用各化合物的对应同位素化合物作为内标。

结果计算

试样测定结果按公式（1）计算目标物的含量：

………….(1)

式中：

X——试样中被测组分的含量，单位为微克每千克（μg/kg）；

m——试样的称样量，单位为克（g）；

C——由工作曲线计算得到的试样中被测组分的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；

V——定容体积，单位为毫升（mL）。

F——稀释倍数

计算结果需扣除空白值（空白基质），并保留三位有效数字。

检测方法灵敏度、准确度、精密度

7.1

灵敏度

诺氟沙星、氧氟沙星、洛美沙星、培氟沙星、氟罗沙星、双氟沙星、司帕沙星、达氟沙星、恩诺沙星检出限均为5

μg/kg，环丙沙星检出限为7.5

μg/kg，沙拉沙星检出限为7.5

μg/kg。

诺氟沙星、氧氟沙星、洛美沙星、培氟沙星、氟罗沙星、双氟沙星、司帕沙星、达氟沙星、恩诺沙星定量限均为15

μg/kg，环丙沙星定量限为22.5

μg/kg，沙拉沙星定量限为22.5

μg/kg。

7.2

准确度

本方法在15.0～100.0

μg/kg的添加水平上的回收率范围为65.0%～120.0%。

7.3

精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。

附录A

标准品信息

表A.1

标准品中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量

序号

化合物名称

英文名

CAS登录号

分子式

相对分子质量

诺氟沙星

Norfloxacin

70458-96-7

C16H18FN3O3

319.33

氧氟沙星

Ofloxacin

82419-36-1

C18H20FN3O4

361.37

洛美沙星

Lomefloxacin

98079-51-7

C17H19F2N3O3

351.35

培氟沙星

Pefloxacin

70458-92-3

C17H20FN3O3

333.36

氟罗沙星

Fleroxacin

79660-72-3

C17H18F3N3O3

369.34

盐酸沙拉沙星

Sarafloxacin

Hydrochloride

91296-87-6

C20H18ClF2N3O3

421.81

盐酸双氟沙星

Difloxacin

Hydrochloride

91296-86-5

C21H20ClF2N3O3

435.85

司帕沙星

Sparfloxacin

110871-86-8

C19H22F2N4O3

392.40

环丙沙星

Ciprofloxacin

85721-33-1

C17H18FN3O3

331.34

甲磺酸达氟沙星

Danofloxacin

mesylate

119478-55-6

C20H24

FN3O6S

453.48

恩诺沙星

Enrofloxacin

93106-60-6

C19H22FN3O3

359.39

D8-环丙沙星

Ciprofloxacin-d8

/

C17H10D8FN3O3

339.39

D5-恩诺沙星

Enrofloxacin-d5

/

C19H17D5FN3O3

364.37

D5-诺氟沙星

Norfloxacin-d5

/

C16H13D5FN3O3

324.37

注：市售标准品中部分为其盐酸盐或甲磺酸盐。

附录B

14种喹诺酮类化合物多反应监测（MRM）谱图

14种喹诺酮类化合物火锅底料基质标准溶液(100

ng/mL，氘代内标为25

ng/mL)多反应监测（MRM）谱图

本方法负责起草单位：四川省食品药品检验检测院

方法的参与验证单位：上海市食品药品检验所、辽宁省食品药品检验检测院、深圳出入境检验检疫局食品检验检疫技术中心、山东省食品药品检验研究院、湖北省食品药品监督检验研究院。

主要起草人：余晓琴，李道霞，黄丽娟，成长玉，李澍才，唐昌云

第四篇：食品中匹可硫酸钠的测定（2019）

附件

食品中匹可硫酸钠的测定

（BJS

201911）

范围

本标准规定了食品（含保健食品）中匹可硫酸钠的高效液相色谱-串联质谱联用测定方法。

本标准适用于果冻、蜜饯、糖果、饮料等食品（含与上述基质相同的保健食品及片剂、硬胶囊剂保健食品）中匹可硫酸钠的测定。

原理

试样粉碎后经水或甲醇溶液提取，必要时经聚酰胺净化后，经反相色谱柱分离，电喷雾离子源离子化，多反应离子监测检测，外标法定量。

试剂和材料

除另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T

6682规定的一级水。

3.1

试剂

3.1.1乙腈（CH3CN）：色谱纯。

3.1.2

甲醇（CH3OH）。

3.1.3

无水乙醇（CH3CH3OH）。

3.1.4

氨水（NH3žH2O）：浓度25

%~28

%。

3.1.5乙酸铵（CH3COONH4）：色谱纯。

3.1.6

三氯乙酸（C2HCl3O2）。

3.1.7聚酰胺固相萃取柱：取1

g聚酰胺粉（层析用，200目），用10

mL水活化，并装填于带有适量脱脂棉花的10

mL一次性注射器中。亦可采用商品化固相萃取小柱（1000

mg，6

cc），使用前用水活化，或按商品说明书进行活化操作。

3.2

试剂配制

3.2.1

三氯乙酸溶液（1

%）：称取10

g三氯乙酸（3.1.6），加1000

mL水溶解。

3.2.2

%甲醇溶液：量取700

mL甲醇（3.1.2），加水定容至1000

mL。

3.2.3无水乙醇-氨水-水溶液（7+1+2，体积比）：量取100

mL氨水（3.1.4），700

mL无水乙醇（3.1.3），水200

mL，混匀。

3.2.4乙酸铵溶液（10

mmol/L）:称取0.77

g乙酸铵（3.1.5），加入1000

mL水溶解，经0.22

μm水相微孔滤膜过滤后备用。

3.3

标准品：匹可硫酸钠，其中文名称、英文名称、CAS号、分子式、相对分子质量、结构式见附录A。

3.4

标准溶液配制

3.4.1

标准储备液（1000

mg/L）：准确称取匹可硫酸钠标准品10

mg（精确至0.00001

g），置于10

mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为1000

mg/L标准储备液，4℃避光保存，有效期1个月。

3.4.2

标准使用液（5

mg/L）：取标准储备液（3.4.1）1

mL于200

mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，制成浓度为5

mg/L的标准使用液，4℃避光保存，有效期7天。

3.4.3

标准系列工作溶液：准确量取标准使用液（3.4.2）适量，用水配制成质量浓度为5

ng/mL、10

ng/mL、50

ng/mL、100

ng/mL、250

ng/mL、500

ng/mL，或依仪器响应和实际情况配制适当浓度的标准系列工作溶液。

3.5

材料

3.5.1

微孔滤膜：0.22

μm，PES滤膜和PTFE滤膜。

仪器与设备

4.1液相色谱-三重四极杆串联质谱仪，配电喷雾（ESI）离子源。

4.2

分析天平：感量分别为0.0001

g和0.00001

g

4.3

超声波水浴。

4.4

恒温水浴锅。

4.5

固相萃取装置。

试样制备

5.1

果冻、蜜饯、糖果、固体饮料、片剂、硬胶囊剂

取适量代表性样品（硬胶囊剂取内容物），采用捣碎、剪碎或研碎等方式混匀，装入洁净容器中，密封并标记。

5.2

液体饮料

充分混匀，直接取用。

分析步骤

6.1

试样提取

6.1.1

果冻

称取1

g（精确到0.001

g）试样于50

mL离心管中，加入20

mL水，80

℃水浴至胶质溶散，水浴过程中注意摇散，提取液转移至25

mL容量瓶中，加入2.5

mL三氯乙酸溶液（3.2.1），用水定容至25

mL，待净化。若提取液浑浊，可取适量8000

r/min离心5

min，上清液待净化。

6.1.2

蜜饯

称取1

g（精确到0.001

g）试样于50

mL离心管中，准确加入40

mL水，超声提取15

min，8000

r/min离心5

min，上清液转移至50

mL容量瓶中，用5mL水洗涤残渣，洗涤液并入同一容量瓶，加入5

mL三氯乙酸溶液（3.2.1），用水定容至50

mL，待净化。

6.1.3糖果

6.1.3.1压片糖果

称取0.5

g（精确到0.0001

g）试样于50

mL离心管中，准确加入10

mL

%甲醇溶液（3.2.2），涡旋30

s，超声提取30

min，8000

r/min离心5

min。取上清液1

mL于5

mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，过PTFE微孔滤膜，待测。可根据实际浓度用水适当稀释至线性范围内，供液相色谱-质谱联用仪分析。

6.1.3.2其他糖果

称取1

g（精确到0.001

g）试样于小烧杯中，加入40

mL水，80℃水浴至样品溶解（胶基糖果水浴15min，水浴过程中注意摇散），转移至50

mL容量瓶中，用5

mL水洗涤烧杯，洗涤液并入同一容量瓶，加入5

mL三氯乙酸溶液（3.2.1），用水定容至50

mL，待净化。若提取液浑浊，可取适量8000

r/min离心5

min，上清液待净化。

6.1.4

固体饮料

称取1

g（精确到0.001

g）试样于50

mL离心管中，加入25

mL水，80℃水浴10

min，8000

r/min离心5

min，收集提取液，加入20

mL水洗涤残渣，涡旋30

s，8000

r/min离心5

min，合并两次提取液，于提取液中加入5

mL三氯乙酸溶液（3.2.1），用水定容至50

mL。若提取液浑浊，可取适量8000

r/min离心5

min，上清液待净化。

6.1.5

液体饮料

称取1

g（精确到0.001

g）试样于25

mL具塞比色管中，加入20

mL水，80℃水浴10

min，放冷后加入2.5mL三氯乙酸溶液（3.2.1），用水定容至25

mL。若提取液浑浊，可取适量8000

r/min离心5

min，上清液待净化。

6.1.6

片剂、硬胶囊剂

同“6.1.3.1压片糖果”。

6.2

试样净化

6.2.1果冻、液体饮料

取10

mL待净化液至已活化的聚酰胺固相萃取柱（3.1.7）内，待溶液流尽后，依次用10

mL水、15

mL

%甲醇溶液（3.2.2）洗涤，20

mL无水乙醇-氨水-水溶液（3.2.3）洗脱，收集洗脱液于80

℃水浴上蒸发至近干，用水定容至10

mL，过0.22

μm

PES或PTFE滤膜，待测。可根据实际浓度用水适当稀释至线性范围内，供液相色谱-质谱联用仪分析。

6.2.2蜜饯、其他糖果、固体饮料

净化操作同“5.2.1果冻、蜜饯、液体饮料”，洗脱液于80

℃水浴上蒸发至近干，用水定容至5

mL，过0.22

μm

PES或PTFE滤膜，待测。可根据实际浓度用水适当稀释至线性范围内，供液相色谱-质谱联用仪分析。

6.3

空白试样

称取空白试样适量，与试样同法处理，制得空白基质溶液。

6.4

仪器参考条件

6.4.1

色谱条件

6.4.1.2色谱柱：C18柱，2.1

mm×100

mm，2.6

μm，或同等性能的色谱柱。

6.4.1.2

流动相：10

mmol/L乙酸铵溶液+乙腈（85+15）

6.4.1.3

流速：0.3

mL/min

6.4.1.4

柱温：35℃

6.4.1.5进样量：5

μL

6.4.2质谱条件

6.4.2.1离子源：电喷雾离子源（ESI）。

6.4.2.2

扫描方式：正离子扫描。

6.4.2.3检测方式：多反应模式（MRM）。

6.4.2.4干燥气、雾化气、鞘气、碰撞气等均为高纯氮气或其他合适气体，使用前应调节相应参数使质谱灵敏度达到检测要求，喷雾电压、离子源温度、干燥气温度、鞘气温度、鞘气流量等参数应优化至最佳灵敏度。

6.4.2.5参考监测离子对和参考参数

表1匹可硫酸钠定性、定量离子和质谱分析参数参考值

名称

母离子

子离子

去簇电压（V）

碰撞能（V）

匹可硫酸钠

438.2

183.9*

120

438.2

278.2

120

*定量离子对

6.5

试样测定

将标准系列工作溶液和试样溶液分别注入高效液相色谱-质谱联用仪中测定。根据保留时间和相对离子对丰度比定性，外标峰面积定量。

表2

定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差

相对离子丰度（%）

>50

>20—50

>10—20

≤10

允许的相对偏差（%）

±20

±25

±30

±50

空白试验

除不加试样外，均按试样同法处理。

结果计算

试样中匹可硫酸钠的含量按下式计算：

式中：

X—食品中匹可硫酸钠（以C18H13NNa2O8S2žH2O计）的含量，mg/kg；

c—试品溶液中匹可硫酸钠（以C18H13NNa2O8S2žH2O计）的浓度，ng/mL；

V—试品稀释液体积，mL；

1000—单位换算；

m—试品质量，g。

计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。

检测方法的灵敏度、精密度、专属性

9.1

灵敏度

果冻、蜜饯、其他糖果、饮料取样量为1

g，稀释倍数为25时，定量限为0.125

mg/kg，检出限为0.05

mg/kg；压片糖果、片剂、硬胶囊剂取样量为0.5

g，稀释倍数为50时，定量限为0.5

mg/kg，检出限为0.2

mg/kg。

9.2精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。

9.3

专属性

空白试验应无干扰。

附录A

匹可硫酸钠相关信息

表A.1

匹可硫酸钠名称、CAS号、分子式、分子量、结构式

名称

CAS号

分子式

分子量

结构式

匹可硫酸钠

Sodium

picosulfate

10040-45-6

C18H13NNa2O8S2

481.41

附录B

标准色谱图

B.1

标准品总离子流色谱图（250ng/mL）

B.2标准品提取离子（定量）色谱图（250ng/mL）

B.3标准品提取离子（定性）色谱图（250ng/mL）

本方法负责起草单位：广东省药品检验所

验证单位：广东省食品检验所（广东省酒类检测中心）、广东省食品工业研究所有限公司（广东省质量监督食品检验站）、国家糖业质量监督检验中心、上海食品药品检验所、中国检验检疫科学院、中国食品药品检定研究院

主要起草人：何嘉雯、温家欣、赖宇红、刘亚雄、罗卓雅、方继辉

第五篇：实习六 食品中人工合成色素的测定

实习六

食品中人工合成色素的测定

（一）原理

聚酰胺是一种高分子化合物，又称“尼龙6”，在酸性条件下可与水容性酸性染料牢固结合；在碱性条件下则可解吸色素，用纸层析法或薄层层析法进行分离鉴别后，再与标准比较予以定性、定量。

（二）试剂

1． 聚酰胺粉（尼龙6）200目 2． 正丁醇 3． 无水乙醇 4． 1%氨溶液

5． 乙醇-氨液（9：1）6． 20%柠檬酸

7． 0.1%色素标准贮备液(1mg/ml):精确称取商品色素胭脂红、苋菜红0.1克容于蒸馏水，稀释至100毫升。

8． 展开剂（临用现配）正丁醇：无水乙醇：1%氨水（6：2：3）

（三）仪器 9． 沙氏漏斗-G3 10．抽滤瓶：500ml 11．100 ml，500 ml 12．血红蛋白吸管 13．展开缸

14．玻璃水泵

15．带塞刻度比色管：10 ml 16．恒温水浴

17．量筒：25 ml，50 ml 18．天平19．吹风机

20．吸管：1 ml 21．白瓷蒸发皿 22．中速层吸滤纸 23．温度计 24．PH试纸 25．玻璃棒 26．滴管(四)操作方法

1.样品处理（汽水类样品）：将样品用两个杯子反复倾倒100次除去CO2，精确吸取样品50 ml放入100 ml烧杯中，加热到70℃，备用。2．吸附去杂质：称取聚酰氨粉1g，加少量水调成糊状后倒入前处理的70℃的样品中，充分搅拌使样液色素全部被吸附，将样液全部移入沙氏-G3漏斗抽滤，用300ml 70℃ PH=4的蒸馏水分多次洗涤沉淀物，至洗液与原蒸馏水PH相同为止（洗涤过程必须充分搅拌，使所用的洗涤液与聚酰氨粉充分接触）。3.解吸: 用乙醇氨溶液15mlf分三次洗涤色素，解吸过程时时搅拌直至滤出液无色为止并收集全部解吸液。

4．浓缩: 将色素解吸液置于蒸发皿中在80℃水浴上浓缩至0.5-1ml，转入10ml刻度试管中，用少量50%乙醇洗涤蒸发皿，洗液并入并入刻度试管中。

5纸层析定性:为了判断样品中存在有几种色素以及是什么色素，必须进行纸层析进行鉴定。经上述浓缩后样品色素溶液于新华中速层析滤纸（8cm*16cm）距底边2cm的基线上点样点样点的直径应不超过2毫米为宜，样点间距离以及左右纸边各距2厘米。点样量20微升，同时根据样品颜色点上色素标准溶液点作对照。用展开剂在展开槽展开（展开前层析缸及滤纸先用相应的溶剂系统平衡10分钟后再展开）。待溶剂前沿到达离起始线12cm处，将滤纸取出于空气中晾干，测量各色素点的Rf值，于标准色素Rf值对照确定何种色素（以标准色素斑点Rf值衡量样品各色素斑点的Rf值是否于标准点在同一条直线上，色素的颜色是否完全一致，就可确定样品色素属于何种色素）。

Rf（比移值）=斑点移动距离/溶剂前沿距离 所使用的展开剂有：

1)正丁醇︰无水乙醇︰1%氨水 = 6︰2︰3 2)正丁醇︰吡啶︰1%氨水 = 6︰3︰4 3)异丁醇︰无水乙醇︰水 = 3︰2︰2 6．纸层析定量：将纸色谱的条状色斑剪下，用少量热水洗涤数次，洗液移入10ml比色管中，并加水稀释至刻度，作比色测定用。

分别吸取0.0 0.1 0.2 0.3 0.4ml胭脂红或苋菜红色素标准液分别置于10ml比色管中，各加水稀释至刻度。目视比色。

（五）结果计算

X（g/kg，g/L）=A/（m*V2/V1）

式中 A：测定样液中色素的含量（mg）

m：样品质量或体积（g，ml）V1：样品解吸后总体积（ml）V2：样液点纸体积（ml）