VB在课件开发中的技术分析

第一篇：VB在课件开发中的技术分析

VB在课件开发中的技术分析

赵勇

(海军飞行学院 辽宁葫芦岛 125001)

摘 要:分析了VB在课件开发中的关键技术，并且给出设计思想及代码，与传统课件制作具相比具有更高的交互性和灵活性，给教学工作者制作课件提供了很大方便.关键词:VB；课件；计算机辅助教学

中图分类号:TP311文献标识码: A

A Technical Analysis of Developing Courseware with VB

Zhao yong

(Naval Flight Academy,Huludao, 125001)

Abstract: The key techniques of developing courseware with VB are analyzed and designing idea and codes are provided in this paper.Compared with the traditional tools, it is more interactive and flexible, and it helps teachers compile courseware more conveniently.Key words: VB;courseware;computer assisted instruction

计算机辅助教学（CAI）是一种利用计算机施行的自动化的教学技术.在CAI中，计算机用来向学习者呈示教学内容.而课件则是目前我国的计算机辅助教学广泛应用的一种形式.根据不同的教学功能和目的，CAI的教学方式大致可分为：指导和演示，操作和练习，对话，计算机模拟等.后三者都要求课件具有较高的交互性和灵活性，但传统的几种课件制作工具对课件的交互性以及灵活性支持不够且文件尺寸大，所以笔者利用VB开发了《数据结构算法动态演示系统》.实践证明应用VB开发多媒体课件，具有占用空间少、界面友好、交互性和可维护性强等特点.本文就VB在课件制作中关键技术进行分析.传统课件制作工具的比较

传统的课件制作工具由于特定的应用范围和应用水平，其主要的功能就是设计屏幕文本、图形等显示信息及相应的人机交互.本文根据用于组织和排序多媒体元素的思路，将课件制作工具大致分成以下3种：

1.1 基于页式的制作工具

在这种制作工具中，内容被组织成书籍的页.在制作过程中，可以将这些页排成有机的序列，用户可以按顺序一页一页的观看.并且制作者可以利用按钮、关键词（以不同的颜色、字体或背景等方法标出）来让用户跳转至所需的页面.除了传统的文字和图形外，还可以有声音、动画和数字化视频节目等超媒体元素出现在页面中.这种工具有HyperCard、SuperCard、HongTool、方正奥思、PowerPoint等.其中PowerPoint是基于幻灯片的，它的媒体集成能力不错，使用简单快速，现在国内课堂教学中用得较多.但PowerPoint的交互性考虑得很少，基本上是线性的阅读方式.1.2 基于图标的制作工具

这种制作工具借鉴了流程图的思想，多媒体元素和交互提示被组织成一个结构化框架中的对象.设计者通过拖放代表媒体的元素或交互控制的图标，直接设计流程，通过打开图标，来“填充”、“选择”或“链接”实际的内容.基于图标的制作工具显示各分支，结构直观、清晰，可以实现一定的交互，灵活性较好.这种工具有Authorware、IconAuthor、Interactive等.1.3 基于时间的制作工具

在这种制作工具中，元素和事件是沿时间线安排的，通常可以精确到1/30秒，其思想方法类似电影剧本.当有一条具有开始和结束的信息时，使用基于时间的工具是最佳的.顺序安排的图形帧以一种可设置的速度播放，其他元素可在事件序列中的某个给定时间或位置上

触发.基于时间的工具时序控制精确，声画同步可靠，但在制作上非常繁琐.这种工具有Director、Action、Flash等.2VB简介

自1991年Microsoft公司推出的Windows应用程序开发工具——Visual Basic，使得图形用户程序的编写变得简单.在Visual Basic中，既继承了Basic的程序设计语言简单易用的特点，其开发平台又采用面向对象、事件驱动的编程机制，用一种巧妙的方法把Windows的编程复杂性封装起来，提供了一种所见即所得的可视化界面设计方法.用VB编制Windows应用软件一般只需三个步骤：1）安置好所有的对象，利用系统提供的各种控件绘制屏幕窗体；2）设置每个对象的属性；3）对各控件对象在一定事件下要执行的动作进行编程，即针对对象的属性、事件选写过程，把程序代码加到对象上.3VB制作多媒体课件的技术分析

在制作多媒体课件中, 开发具有交互性强的动画是一个技术难点.其中动画包括有文字、图形或图像的移动、形状的大小改变、颜色的改变等.例如，要演示一个排序算法的执行过程，首先让用户输入要排序的数据，然后根据数据以及相应的排序算法利用动画将排序过程中的数据比较、位置交换、替换等形象地展示给用户.其中输入数据可调用VB中的inputbox和给变量赋值等方法来随时接收用户的数据，而这些数据就作为动画演示过程中的参数，系统根据不同的参数，展现不同的动画过程.而数据比较就用到VB中对象的形状大小改变、颜色改变等，位置交换与数据替换用到VB中对象的移动以及值的改变.此外，对于不同的学生，经常在课件演示过程需要暂停或对局部放慢播放速度或者重复播放等.以上这些功能若利用传统的课件制作工具，有些难以实现，有些则在制作上非常繁琐，而这些在VB中的实现却相对简单.下面介绍利用VB来制作多媒体课件的几点技术.3.1移动的实现

在课件中，经常会出现几个物件移动的动作.可以通过改变VB中控件的Top和Left属性来实现.移动是通过在一个循环中改变控件的坐标位置Top和Left来实现的.Public Sub movetopoint(obj As Object, x As Long, y As Long, time As Long)

Dim x0, y0, i As Long

x0 = obj.Left

y0 = obj.Top

For i = 1 To time

delay 1

obj.Left = x0 +((xy0)/ time)* i

Next i

End Sub

3.2形状的大小改变

在课件中，有时为了突出某物件，需将其逐渐变大或变小.可以通过改变VB中控件的FontSiz属性来实现.可根据需要利用循环来控制改变控件大小的速度.Sub changefontsize(a As Object, be As Integer, en As Integer, mi As Integer, time As Long)Dim i, j As Integer

For i = be To mi * time

a.FontSize = i

delay 1

Next i

For i = mi To en Step-

1a.FontSize = i

delay 1

Next i

End Sub

3.3 颜色的改变

在课件中，对某物件的颜色的改变也能达到很好的突出物件的效果，比如以闪烁的效果来引起观者的注意.VB中大多数控件有“Visible”、“ForeColor”属性,只要定时改变这些属性的值就可产生颜色改变或闪烁效果.为了做到定时修改,需要计时器(Timer)控件或自己编写延时函数.Sub timer1 timer()

Callisvisible(Ctrl1)

Callchangeclr(Ctrl2,clr1,clr2)

End Sub

Ctrl1和Ctrl2均为控件名，且Ctrl1应具有Visible属性，Ctrl2应具有ForeColor属性.clr1, clr2为颜色值.Sub isvisible(Ctrl1 as Control)

IfCtrl1.Visible=TRUEThen

Ctrl1.Visible=FALSE

Else

Ctrl1.Visible=TRUE

End If

End Sub

Subchangeclr(Ctrl2 as Control,clr1 as Integer,clr2 as Integer)

IfCtrl2.ForeColor=clr1Then

Ctrl2.ForeColor=clr2

Else

Ctrl2.ForeColor=clr1

End If

End Sub

对changeclr过程稍作修改,还可以给定多种颜色值循环改变控件的ForeColor，为了能同时实现多个控件的闪烁，可在该过程中使用Tag属性.3.4 “暂停”按钮的设计

由于课堂教学讲解的需要，在课件中经常需要中断正在演示的过程，以方便教师补充说明或强调重点，常见的课件无法做到这点.在VB 中通过一个Boolean类型的全局变量pause来控制.将pause初始化为False，当pause变量为False时，说明不需要暂停；当pause变量为True时，整个演示就会暂停下来.3.5 “速度设置”的设计

很多的课件的演示速度在制作时就已经确定下来了，无法根据每次的演示需要而进行调整.从而教师在演示过程中不能结合知识点的难度和学生的掌握程度控制演示的运行速度，不能很好地做到因材施教.在VB 中通过使用一个Slider控件，该控件有属性Value，其中设置属性Max、Min，分别用来设置控件的最大值和最小值；还有属性SmallChange、LargeChange，用于设置控件的最小间隔值和最大间隔值.课件演示过程中的延迟时间的长短就受到这个Value的控制.教

师可随时通过控件上的竖杆来调整课件的播放速度.3.6 “程序与执行结合”的设计

多数的计算机算法课程造成初学者学习困难的一部分原因是算法语句太抽象，采用了“程序和执行结合”技术后，学生就能很直观地从演示中联系到算法中每个语句的意义.用VB实现程序与算法的对应，即某条语句实现对应运动.在课件的制作中使用一个Image控件来指出程序的运行.程序中Image同算法的运行是同步进行的，课件程序的执行就是在算法将要执行之前进行改变的，而算法的控制是根据程序语句运行到的地方才发生相应变化的.4 结束语

应用VB创建了CAI课件后可生成EXE文件，脱离VB环境而直接在Windows下运行，并且文件占用很少的空间.笔者开发的《数据结构算法动态演示系统》总共演示了45个算法，但总容量才1.12M.实践证明，用VB来编写的课件：1.具有良好的操作界面，同时支持键盘和鼠标，操作简单.2.控制能力强,可具有随时暂停、重复和恢复等功能.3.交互性强.课件中使用的大部分参数可由使用者自行设置.学习内容及学习进度也可由使用者自行选择.4.可维护性强.课件采用模块化结构，易于维护.这些为开发多媒体CAI课件展示了美好的前景.参考文献：

[1] 胡宏算.数据结构演示系统(DSDEMO)-查找和排序[A].2003届本科毕业生优秀论文选(下册)[C].温州师范学院,2003．221～228．

[2] 王治文.计算机多媒体辅助教学及其软件设计[M].杭州：浙江科学技术出版社，2000．96～104．

[3] Brian Siler Jeff Spott.VB开发使用手册[M].北京：机械工业出版社，1999．

[4] 龚沛曾，陆慰民，杨志强.Visual Basic程序设计教程(6.0版)[M].北京：高等教育出版社，2000．190～227．

作者简介：

赵勇（1979-）男，海军飞行学院教研部讲师，主要研究方向为信息系统，虚拟现实； Biography：

ZHAO Yong(1979-)Male, Lecturer department ofNaval Flying Academy , the main research directions for information systems, virtual reality;

联系方式：

辽宁省葫芦岛市海军飞行学院教研部赵勇邮编：125001

电话：***

e-mail:zhaoyong1221@126.com

第二篇：VB在CAI课件开发中的应用

VB在CAI课件开发中的应用

孙文柱

(马鞍山电视大学 243000)

摘要：随着开放教育的飞速发展，多媒体CAI课件的运用日渐普及，这也是未来教育技术发展的大趋势。本文结合笔者制作“数据结构”课件的经验，浅谈了对多媒体课件的认识，介绍了用VB制作课件时的的一些方法和技巧。

关键字：CAI 开放教育 所见即所得 API ODBC

一、引言

伴随计算机多媒体技术的进步和硬件成本的下降，CAI（Computer Assisted Instruction）课件在教育上得到广泛应用，对教学质量的提高起到了很大作用，也引发了我们各级电大人对如何利用现代信息技术改革传统教学模式和教学方法的思考。开放教育的迅速发展导致了各级电大教学资源和教学人员的缺乏，为此迫切需要大量适合开放教育教学需要的辅助教学软件。虽然目前已有多家公司从事教育软件的开发，但由于电大教材体系，教学模式与普通高校有所不同，所以这些课件不一定适合电大教学的需要。所以要鼓励电大教师利用电大自身的系统优势积极自制各类辅助教学软件。

二、编程语言的选择

“工欲善其事，必先利其器”，制作一门课件，选择一个好的编程工具往往能起到事半功倍的效果。目前用于多媒体开发的主要有VB、AUTHORWARE和FRONTPAGE等，笔者经实践探索后认为，VB 6.0作为一门可视化的高级编程语言在交互性处理和对系统的访问能力上有其自身独特的优势。

VB 6.0不仅仅是一种编程语言，它是Microsoft公司推出的强大的集成式开发环境，VB是最早实现所见即所得环境的编程语言之一，由于其可视化环境，VB是一种非常有趣的编程语言。VB可以开发数据库、财务软件以及Internet控件等各种应用程序。在多媒体应用程序开发方面也具有强大的功能。

三、课件开发实例

下面笔者以最近自己开发的“数据结构”课件为例，详细介绍VB在整个课件开发过程中的应用。

(一)课程的结构及内容

根据“数据结构”课程的自身特点，依据开放教育先进理论，在进行教学设计、知识结构设计、交互界面设计、屏幕显示设计等多种设计和综合创造的过程中，坚持多媒体课件创作的基本原则，即：为学员提供丰富的学习资源，清晰的认知导航路径，能适应学习者特征的学习策略以及有效的自测反馈手段。本课件共分为六个部分：学习须知、新课学习、课后习题、习题训练、模拟试卷、帮助。

学习须知：以“数据结构”学习需要的前导知识为基础，设置十道测试题，做成动画，以过关的方式对学生的基础作初步了解，过关后学员可以查看该课程的教学大纲，实施方案，登录电大在线。该部分内容生动活泼，形象逼真。

新课学习：以“数据结构”课程为基础，按照教材的顺序进行编制，运用多媒体技术手段，通过动画、图片，把难于理解的知识点形象生动地表现出来，帮助学生消化、理解学习中的重点和难点问题，加深学生对知识的印象。强大的导航功能可以让学员按自己的需要学习。

课后习题：这部分选取了课本中的重点习题，重点实验，利用动画、音乐的手段让学员寓教于乐。交互式的控制方式可以让学员自己选题，控制解题步骤、实验步骤，从而进一步加深对课本重点、难点的理解。每个章节设置的“休闲一刻”栏目，提供游戏、音乐等娱乐方式供学员放松、欣赏。

习题训练：这部分按照教材从易到难做成习题库,设置选择题、填空题、解答题等栏目，每一章都有自己的习题。做选择题时，程序自动对学员选择的答案作出判断，并给出提示。做填空题、解答题时学员可以一边解题，一边查看参考答案。每章题目做完后自动进行成绩统计并给出相应学习建议。学员可以动态维护自己的题库，利用课件中提供的接口在库中进行修改，增加，删除等操作。

模拟试卷：提供十套模拟试卷及答案，供学员自测复习。为了便于学员脱机学习，提供相应试卷的打印功能。

帮助： 提供Windows标准格式的帮助文件，在帮助文件中给出操作方法及开发人员和教师信息，给学员操作、学习提供帮助。例如，通过教师的E-mail,学生学习过程中有疑难问题，可向老师咨询，老师通过E－mail将答案反馈给学生。

（2）课件开发过程中使用的一些技巧

1、课件中界面的设计

大多数课件在定制界面时习惯于将窗体的大小设置为整个屏幕，笔者在实践中发现如果将大小为全屏的窗体的背景色设为黑色，其上放一大小约为全屏2/3的 PictureBox控件来代替Form控件作为控件容器的话，学习者学习时视觉不易疲劳。

VB程序的界面是由一个个Form组成的，Form是VB程序中放置其他控件的平台。程序中的Form的过多，会对程序的运行速度起到制约。因此设计只涉及文本变化的界面时，可在原窗体基础上做改动，不要产生新的Form。比如在本课件的“习题训练”模块中，习题内容存放在数据库中，所有习题都设计在同一Form上出现，每次显示一题。当在模块中点击下一题按纽时，只是将对应Text控件中的内容作了替换。PicturBox控件上也可放置Text,Edit,CommandButton等控件，所以在能用PictureBox控件代替的地方，建议不用Form控件。比如在程序中经常用的反馈对话框，就可利用PictureBox控件来做，本课件中的七个主要界面就是用七个PictureBox控件来模拟七个Form的。这种做法大大加快了界面间的切换速度，也给VB在实现界面间的切换效果上提供一种新途径。

2、课件中图片的控制

课件中的静态图片我们一般采用Photoshop6.0制作。Jpg,Gif 是课件选用的较多的图片格式。对于静态图片利用PictureBox控件,Image控件可以直接加载。而对于常用的Gif动画VB6.0中未提供标准控件，这时我们可以利用

6、课件中可执行程序的调用

课件中“开心一刻”栏目附带的大量游戏和Flash音乐，主要是通过系统函数shell进行访问的，在VB程序中使用shell函数可方便的实现对EXE文件的访问。如调用Windows附件中的写字板可以采用如下格式：

Shell “C:Program FilesAccessoriesWordPad.exe”, vbNormalFocus。

7、在课件中访问Internet 随着Internet的发展和远程教学的需要，在多媒体CAI课件中实现对Ineternet的访问变得越来越重要。笔者发现市面上许多书籍介绍的VB对Internet的访问方法都比较复杂，如在程序中调用API函数，使用 [autorun] open=sjjg.exe icon=sjjg.ico 的文件的含义为打开根目录下名为sjjg的可执行文件，光盘的图标为sjjg.ico所对应的图片。

四、结束语

以上是笔者从事多媒体CAI课件开发过程中的一些心得和做法，是对开放教育教学的初步探索和尝试。在此基础上，我们可以利用VB丰富的网络功能，结合数据库服务器构建基于C/S模式的网上教学系统，提供E-mail,BBS,网上考试等功能。

参考文献

[1] 刘炳文 编著，《Visual Basic6.0 Win32 API》，北京：清华大学出版社 , 2001年9月

第三篇：如何开发课件

论如何设计开发多媒体教学课件

论文关键词：多媒体；多媒体教学；课件；素材采集

论文摘要：多媒体教学是一项随着多媒体技术和网络通信技术的发展而出现的新兴的有效的教学手段。文章介绍了多媒体技术和多媒体教学的基本知识，阐述了多媒体教学课件制作过程中的素材采集以及制作多媒体课件的必要性。

一、多媒体

我们通常所说的“媒体”（Media）包括其中的两点含义。一是指信息的物理载体（即存储和传递信息的实体），如书本、挂图、磁盘、光盘、磁带以及相关的播放设备等；另一层含义是指信息的表现形式（或者说传播形式），如文字、声音、图像、图形、动画、影像等。多媒体计算机中所说的媒体，是指后者而言，即计算机不仅能处理文字、数值之类的信息，而且还能处理声音、图形、视频等各种不同形式的信息。

多媒体教学是指在教学过程中，根据教学目标和教学对象，通过教学设计，合理选择和运用现代教学媒体，并与传统教学手段有机组合，共同参与教学全过程，以多种媒体信息作用于学生，形成合理的教学过程结构，达到最优化的教学效果。

（一）多媒体教学课件的创作流程

课件的一般制作流程包括：

1．目标分析：根据教学内容，明确要实现的教学目标，以及实现教学目标的途径——教学策略的分析，确定课件的框架和表现方法；进行课件的总体设计。

2．脚本编写：课件的脚本是课件的设计蓝图，作者应该根据教学目标，确定课件的具体表现方法和内容，直到每一屏幕（页）的具体内容安排。脚本的设计还要根据创作工具的特点以及人接受信息的心理特性等综合因素来考虑。脚本的设计过程实际上就是一个创意过程，创意的好坏取决于对教学内容的理解程度以及创作人员的水平，对课件的最终质量有很大的决定作用。

3．素材准备：多媒体课件中的基本元素——素材有相当一部分要事先准备好，如文字、图像、声音、动画、影像等原始素材，需要通过一定的方法采集或制作，有些还需要预处理和编辑。

4．创作设计测试 ：根据脚本设计的要求，利用创作工具把各种媒体素材集成创作为一个课件。课件完成以后，其进行反复的测试、试用，以便于发现并解决问题，尤其是对学生反馈的意见要认真研究对待，力争制作出对大多数学生适用的课件。另外，随着知识的不断更新、教学内容的不断发展以及教学形式的不断改进，多媒体教学课件也需要不断地加以修改、完善，以适应网络教学发展的需要。能否达到预想的效果，取决于所用的创作工具和创作者对课件使用的熟悉程度。

5．打包压盘：制作多媒体课件的最终目的是在教学上的应用，因此在创作的最后阶段还要将课件进行打包，根据课件的大小和需要可以拷贝到软盘或制作成光盘。变成一个可以脱离创作环境便于使用的实用课件。根据课件的不同格式和使用情况也可以发布到互联网或者学校的校园网上。

（二）多媒体课件制作的常用工具

上世纪80年代以来，国内外许多大型软件公司及一些专门的多媒体创作系统制作公司，相继推出了一系列多媒体课件开发工具，大大简化了多媒体产品的开发制作过程。借助这些工具课件，制作者可以简单直观地编制程序、调度各种媒体信息、设计用户界面等，从而摆脱繁琐的底层设计工作，将注意力集中于课件的创意和设计。现在比较流行的Flash,Autherware,Director,Powerpoint ,几何画板等软件，每一位教师没有必要精通所有的软件，只要略懂，发挥集体力量，便可以制作出较好的课件。这样，一方面可以提高制作课件的效率，另一方面，也提高了课件用于教学的实用率与利用率。

二、制作多媒体教学课件的必要性

（一）优化课堂教学，培养学生能力

传授知识是教学的根本。课堂教学是学生获取知识、培养能力、发展智力、进行德育教育的主要途径，教师在设计课件时，应考虑对学生能力的培养。多媒体课件应以学生为主体，课件应有学生动手操作的要求，使学生利用多媒体课件既增强了知识、又培养了能力。

（二）激发学生兴趣，提高学生自觉学习的能力

教师在课堂上不仅要传授知识、培养学生的学习能力，更重要的是如何激发学生的学习兴趣，使学生变被动学习行为为主动的自觉学习行为。因此，多媒体课件的设计，应把激发学生的学习兴趣、使其能够自觉学习作为一个主要目标，这样才能充分发挥多媒体课件的优越性。

三、课件制作过程中的素材采集

在多媒体创作中，多媒体素材的准备是一个十分重要的环节。如果没有一定数量的多媒体素材，再好的多媒体创作工具也难以创作出好的多媒体课件。多媒体素材包括文字、图像、图形、动画、声音、影像等。不同的素材，需要不同的采集方法和课件。

（一）文字素材的采集

各种媒体素材中文字素材是最基本的素材，文字素材的处理离不开文字的输入和编辑。文字在计算机中的输入方法很多，除了最常用的键盘输入以外，还可用语音识别输入、扫描识别输入及笔式书写识别输入等方法。一般而言，文字素材比较容易采集，利用Windows文件之间的复制－粘贴特性，各种文字素材可以非常方便地转移到多媒体课件中去。

（二）图像素材的采集

图像素材的采集则主要通过以下几种方式获得。最常用的是利用扫描仪或数码相机从外部采集图像数据；另外对于普通的照片、图象资料可以用扫描仪扫描到电脑里，再经过Photoshop等图象处理软件处理。对于教学过程中需要的计算机中的操作步骤等计算机内场景主要利用抓图工具来抓取屏幕上显示的图像。另外从网络上、素材光盘上间接取得素材也是课件制作中常用的图象素材收集方法。

（三）声音素材的准备

在多媒体课件中，适当地运用声音能起到文字、图像、动画等媒体形式无法替代的作用，如调节课件使用者的情绪，引起使用者的注意等。当然，声音作为一种信息载体，其更主要的作用是直接、清晰地表达语意。

课件中声音素材的采集和制作可以有以下几种方式：1．利用一些课件光盘中提供的声音文件。在一些声卡产品的配套光盘中往往也提供许多WAV或MIDI格式的声音文件。2．通过计算机中的声卡，从麦克风中采集语音生成wav文件。如制作课件中的解说语音就可采用这种方法。3．使用专门的软件抓取CD或VCD光盘中的音乐，生成声源素材。再利用声音编辑课件对声源素材进行剪辑、合成，最终生成所需的声音文件。

（四）视频素材的准备

视频作为多媒体家族中的成员之一，在多媒体课件中占有非常重要的地位。因为它本身就可以由文本、图形图像、声音、动画中的一种或多种组合而成。利用其声音与画面同步、表现力强的特点，能大大提高教学的直观性和形象性。

视频素材的采集方法很多。最常见的是用视频捕捉卡配合相应的课件（如Ulead公司的Media Studio以及Adobe公司的Premiere）来采集录像带上的素材。

另一种方法是利用超级解霸等课件来截取VCD上的视频片段（截取成*.mpg文件或*.bmp图像序列文件），或把视频文件*.dat转换成Windows系统通用的AVI文件。

采用专门的屏幕录象软件，可以将屏幕的操作变化过程详细的记录下来，形成视频文件，这种方法也是目前使用较多的视频采集办法，多应用于计算机信息技术相关的课件制作中。

四、专业课程教学课件的著作与发布

在完成素材加工后，就可以利用软件进行开发了，在开发过程中要注意以下几点：

注意良好的交互性，这样可极大地方便用户的使用。比如在不同的子页面中，增添一个返回按钮，浏览者可以方便地退回到上一级或主页面中。

注意风格的一致性，如不同页面的按钮或导航图标风格尽量作到一致，另外，一个多媒体教材的制作是多人合作的产品，如何分割任务，完成个人项目，最后的组合都需要很好的配合。在发布时要注意进行文件与目录的优化，删除临时文件以及没有使用的素材，仅发布所需要的文件，最后打包存盘。

总之，多媒体教学软件的研制开发需要在现代教育思想、教育理论、学习理论、教学设计理论等方面的指导下，做好教学设计工作，并在教学活动中反复使用，不断修改，才能使开发的多媒体教学软件符合教学规律，取得良好的教学效果。多媒体用于教学应以提高教学效率为最后目标，必须把多媒体的应用与现代教学理论相结合，只有掌握现代教学理论和现代教学手段的教师才能培养出现代化的学生，促进中小学由“应试教育”向“素质教育”的转变。总之，一个多媒体课件应该以充分发挥学生的潜能，强化教学效果，提高教学质量为重心。多媒体只是一种辅助教学的手段。俗话说：“教学有法，但无定法，贵在得法。”每一种教学方法都是一定活动方式的构成体。教师应该不断积累经验，掌握好多媒体课件的优势，努力获得更佳的教学效果。

附件3:

如何开发高质量的多媒体课件

一、多媒体课堂教学的基本要求

1.课堂教学应有充分的感性资料进行形象直观教学，如图片、录像、案例、动画、音响等；

2.交互性强，课堂互动，启发式教学； 3.设计问题、思考题、讨论题； 4.观点新、手段新； 5.信息量大、节奏快。

在教学内容、教学方法确定之后，对教学质量起决定作用的是教师的教学设计和授课技巧。

成功的教学设计可使课堂教学更具有艺术性和感染力，吸引学生，排除干扰，提高课堂教学效率和教学质量。这一切都可以体现在多媒体课件之中。

二、课件、多媒体课件、网络多媒体课件 1.课件

课件用于课堂教学的计算机辅助教学软件—Computer Assisted Instruction 简称CAI。• Computer（计算机）• Assisted（辅 助）• Instruction（教 学）• Multimedia（多媒体）2.多媒体课件

多媒体课件是各种多媒体技术的集成，利用性能卓越的硬件设备，通过科学合理的软件设计，将文字、声音、图形、图像、动画及影像等多媒体素材根据创作人员自己的创意融为一体，形成具有良好的交互性的多媒体计算机辅助课堂教学软件。

3.网络多媒体课件

网络多媒体课件适用于internet网络传输和用于网络教学的多媒体计算机辅助教学软件。

三、多媒体课件开发的步骤 1.选题

选择开发课件的课题是整个课件开发的第一步，确定一个好的课题是至关重要的。一个好的选题是成功的必要条件，必要时还得进行“查新”，避免与其他单位的作品雷同。选题的原则：

（1）价值性：课题应选择学科较为重要的内容或急需的内容，以及较为抽象的重点和难点。

（2）主题单一性：课题内容尽量集中，涉及面不要太宽。

（3）课题表现性：在选题上应选择用常规方法难以表现而又适合于计算机多媒体表现的课题。例如：一些微观、图片多、动画多、具有形象性的教材，适合于计算机模拟，直观性强，教学效果好，有利于开发和树立形象。

2.编制原则

一个好的多媒体教学软件（课件），必须具备：

（1）教育性：课题内容必须符合教学大纲，其表现形式必须符合教育心理学。（2）科学性：课题中涉及的科学原理、定义、概念一定要准确无误，阐述的观点、论据和涉及到的素材一定要真实、准确、标准化并符合科学的逻辑。

（3）技术性：熟练掌握制作设备的各项功能，尽量使用较新的设备以表现出新的创意,各项技术指标不能低于标准。

（4）艺术性： 编制的课件应具有艺术感染力，从构图、色彩、美工设计、布光、组合等等都应具有主题鲜明，从视觉和听觉上具有一定冲击力，逻辑思维应能引人入胜。

3.可行性分析

确定课题内容时，一定要根据现有的技术情况、设备情况、资金情况、编制人员素质情况来决定，没有把握完成的课题就尽量不要实施。选题确定后,必须经过专家的审议和有关领导的审定。开发这个课件的预算应在单位能够承受的财力之内，并且从这个课件上所获得的利益包括经济效益和社会效益，要大于对它的投入。另外，还应考虑：你打算用什么软件平台来开发这个课件？你准备花多少钱来开发这个课件。投入的资金应该根据开发这个课件的工作量和这个课件的预期收益来决定。

4.策划

策划组建制作群：编制工作人员应由课题专业的教师和影、像、编程的专业人员组合，成立制作组，明确分工。在制作时需要各方面的技术人员、管理人员的共同协作。一个好的课件是许多人智慧的共同结晶。

策划结构方式：这个课件将以什么样的结构来组织？采用什么方式来组织使得可维护性、可重用性最佳。

5.开发计划

首先要确定整个课件有多少任务，将整个制作过程的进度排出计划，不要出现前松后紧的现象。

（1）脚本需要专业老师编写；

（2）声音、文档等的输入，需要由一般人员完成；

（3）美工人员做界面美化工作，制作所有的动画、视频、图片、并负责总体创意；（4）程序总体编制，需要程序员完成。

开发的具体内容和调度结果，最后要体现在开发表上面。要制定一个开发计划表，严格按计划表实施。

6.编写脚本

课题选定后，由专业老师写出文字脚本。所谓文字脚本简单的理解就是将画面与解说词对应地写出来。即把程序要完成的事情，用文字表达出来，以表达出美工人员和系统分析员的意图，并帮助程序员来了解这些意图。脚本细致地描述了每一个模块的实现过程。这是程序员开发程序的依据。脚本要清晰易懂，且要指明程序中的重点和要点。

7.编程方框图

为了编程能顺利的进行，还需编写编程方框图。根据文字脚本将每个页面所包含的影像、图片、动画、文本、解说、音乐、热区、事件、文字按钮、图片按钮、动画按钮、子页面的设定，以及编程思路、页面链接一页一页的用几何图形表达出来。

8.模板编程

当以上几个方面都完成后,即可按分工同时进行各项工作。但经验告诉我们，最好先进行模板编程。也就是说，先根据文字脚本和编程方框图设计出各个页面。屏幕美工的设计在保持科学性的前提下，尽量提高艺术的整体性和同一性。还需考虑课件在完成后使用的载体，如：作品主要用于多媒体投影机，那整体创意在基调上最好采用明快、鲜艳、较高反差的方法。

因为多媒体投影机的使用环境很难做到全黑，使用上述方法能得到较好的效果。当然，作品若用于远程教育在网上使用，那就另当别论了。页面在设计时要不落俗套，要敢于创新，给人一种耳目一新的感觉。同样页面的直观、容易理解、容易操作仍然是作品实用性的一项重要指标。页面的编号与各种按钮和热区标识应尽量统一。

9.链接试运行

在模板编程完成后，即可进行链接试运行。虽然还未制作完各种素材，但可先使用一些现成的素材进行试运行。一切正常后，再去制作各种素材，这样可以避免许多重复劳动。因为，在编程时不会因为你的素材影响你的整体创意思维，反而还会根据整体创意思维指导以后素材的制作和各个构图的创意。在添加页面时，要经常进行打包测试，及时发现错误，避免发生返工的现象。当整个作品框架试运行正常后，还可以合理分配各种素材的空间，在保证一定画面质量的情况下，尽量压缩文件的容量。只要你的编程具有科学性，符合教育心理学而又具有一定的技术性，并且页面的交互顺畅，那么你将大功“初”成。以后素材的制作只是时间问题，各种素材制作完毕后，将代用的素材替换下来。

10.收集、制作、处理素材

这部分内容是重点，首先我们先介绍一下多媒体课件制作的相关软件、硬件。硬件：一台或多台多媒体计算机，配置有：较好的声卡（配音用）显卡、视频采集卡或Mpeg压缩卡（采集影像）、刻录光驱。

外设设备有：摄像机、数码像机、扫描仪、话筒、MiDi键盘、网络等。

软件：Windows操作系统,图形图像的处理可使用PhotoShop 6.0、我行我速等。音、视频处理可使用 Premiere 6、EO Video、iFilmEdit、Tmpgencplus、Real Producer Plus、豪杰超级解霸、Fireworks、WaveCN。动画处理使用 3D Studio Max、Flash及Gif Animator。合成平台可使用PowerPoint、FrontPage、Dreamweaver、AuthorWare、方正奥思、课件大师、其它多媒体创作工具等。有了上述条件后你就可以制作和处理素材了。

11.系统合成

素材制作处理完毕后，将做好的素材一一安装到已经调好的程序中。对整个程序的创意思维和具体的构图创意进行最后的完善。对整个程序从头至尾地、每一个界面、每一个功能进行全面“扫描”，以完成系统合成。

12.软件测试

最后阶段是对已经完成的程序进行检测，找出其中的错误和各种不稳定因素，并通知程序员对其进行修改，对程序的检测完成，确定没有错误后，软件就可以生产了。测试可以从以几方面进行：

1.错误测试； 2.功能测试； 3.效果测试。13.制作图标

任何一个软件都有自己的执行文件，以便打开程序。可根据自己制作的软件特点设计出有个性的图标。制作图标的程序较多。如AX lcons，Icon Cool等。14.优化、打包、刻盘或网上发布

打包，既是指将制作出的课件输出成32位的应用程序，可脱离制作平台而独立运行。程序在正式打包之前要进行优化。程序打包之前，要作好源程序的备份，并且作好其他的一切准备工作。在发行到光盘上时，要注意将所需要的外部文件都拷贝到光盘。刻制成原始光盘之后，还要再进行一次测试，防止因为发行到光盘后，发生了某些变化而使得程序不能够运行。或者是因为文件配置不合，而导致程序运行速度过慢。最后，要对光盘上的文件组织结构进行优化。如果文件结构非常松散，就会导致程序运行速度变慢。最后是将打包后的内容刻录到光盘上去或网上发布，课件的制作工作就完成了。

四、多媒体课件制作经验

（1）制作过程中应严格遵循多媒体课件制作流程，如果图省力、快捷而省略必要步骤，其结果会造成大量返工现象，势必会浪费更多的时间、精力及费用。

（2）多媒体课件不是教材的翻版，而是一个丰富、准确的科学内容和鲜明完整的艺术形式的作品。脚本要求科学严谨、重点突出、表现自然、逻辑思维清晰、发人深省、有张有弛、融会贯通，应是传统教学的一个飞跃。设计时应充分发挥多媒体的特征,以表达新颖的教学思路和新的创意。

（3）设计思路以简要明快、功能齐全为基调，除具有良好的交互性外，还应考虑具有直观性，使用简便等特点,学习者不需学习就可使用该软件。

（4）页面的创意是课件制作中的灵魂，它难度较高，需要创作人员有较高的审美意识及美术功底，设计的页面即要美观又能充分突出主题。

（5）影像视频流是课件中不可缺少的一部分，也是课件制作中的难点，影像制作除掌握摄录编基础知识外，还应掌握影像的采集、编辑，影像特技的制作。由于影像占用的空间较大，影像所选择的格式也是需要考虑的问题，影像量大时可考虑使用MPEG4、RM、asf、wmv等流媒体视频格式，它们有极高的压缩比。

（6）动画：在影像无法表达时，动画显得尤为重要，它可使页面显得活泼生动，因此有必要掌握gif、flash、3D动画的制作。

（7）制作过程中要充分发挥集体合作的精神，高质量的软件绝非一人能在短时间内完成，制作群的概念就是提倡集体合作精神。这能充分发挥每个人的特长，使整体制作水平能达到一个相当的境界，一个优秀的多媒体软件就此产生了。

五、多媒体课件制作工具

多媒体课件制作工具可使用PowerPoint、FrontPage、Dreamweaver、Flash、AuthorWare、方正奥思、课件大师、其它多媒体创作工具等，在多媒体课件设计时必须考虑课件的内容易于更改或扩充，使课件具有为学习者提供继承性学习、创造性学习和终身学习的空间，使之成为一个专业信息资源库。在比较多种多媒 体制作软件后，认为用网络制作软件比Authorware在设计上和制作上较容易掌握和操作，其最大的优点是可以随时更改、补充。随着因特网的迅猛发展，多媒体课件制作都应该向多媒体网络课件制作方向发展。所以我们推荐使用PowerPoint、FrontPage、Dreamweaver、Flash制作多媒体网络课件。

第四篇：流式细胞仪分析技术及应用(课件)

流式细胞仪分析技术及应用-------温医细胞生物学技术

流式细胞仪分析技术及应用

第一节 概述

第二节 数据的显示与分析

第三节 流式细胞仪技术要求

一、工作原理

一、参数

一、免疫检测样品制备

二、散射光的测定

二、数据显示方式

二、免疫分析中常用的荧光染料与标记染色

三、荧光测量

三、设门分析技术

三、免疫胶乳颗粒的应用

四、细胞分选原理

四、流式细胞技术的质量控制

第四节 流式细胞仪技术的要求

第五节、流式细胞仪的科研应用

第六节

流式细胞术在临床检测中的主要应用  流式细胞术(flow cytometry, FCM)亦称荧光激活细胞分选器(fluorescence-activated cell sorting, FACS):是一种集激光技术、电子物理技术、光电测量技术、电子计算机以及细胞荧光化学技术、单克隆抗体技术为一体的新型高科技仪器。/是对于处在快速直线流动状态中的细胞或生物颗粒进行多参数、快速的定量分析和分选的技术。/广泛应用于基础研究和临床实践各个方面，包括细胞生物学、肿瘤学、血液学、免疫学、药理学、遗传学及临床检验学等。

 流式细胞术发展史

1930年Caspersson和Thorell开始致力于细胞计数的研究

1934年Moldaven最早设想细胞检测自动化，用光电仪记录流过一根毛细管的细胞 1940年Coons提出结合荧光素的抗体去标记细胞内的特定蛋白 1949年Wallace Coulter申请了在悬液中计数粒子的方法的专利 1950年Caspersson用显微UV-VIS检测细胞

1953年Croslannd-Taylor应用分层鞘流原理，成功设计红细胞光学自动计数器 1969年Van Dilla及其同事在Los Alamos, NM发明第一台荧光检测细胞计 1972年Herzenberg研制出细胞分选器

1975年Kohler等提出单克隆抗体技术，为细胞研究提供大量的特异免疫试剂

目前国内主要流式细胞仪厂家：Beckton Dickinson(BD)公司；BACKMAN COULTER公司

 流式细胞术的特点：最大的特点是能在保持细胞及细胞器或微粒的结构及功能不被破坏的状态下，通过荧光探针的协助，从分子水平上获取多种信号对细胞进行定量分析或纯化分选。细胞不被破坏，测量快速、大量、准确、灵敏、定量

主要特点 ：1.单个细胞水平分析；2.多参数分析（同时多种荧光素标记）水平分析；3.灵敏度高；4.可分析大量细胞；5.速度快： 5000-10000个细胞/秒；6.统计学意义：提供细胞群体的均值和分布情况；7.分选感兴趣的细胞：血细胞、骨髓、组织培养细胞等。

第一节 概述

流式细胞仪是测量染色细胞标记物荧光强度的细胞分析仪，是在单个细胞分析和分选基础上发展起来的对细胞的物理或化学性质（如大小、内部结构、DNA、RNA、蛋白质、抗原等）进行快速测量并可分类收集的高技术。分为三大类：(1)类为台式机（临床型）：仪器的光路调节系统固定，自动化程度高，操作简便，易学易掌握。(2)类为大型机（科研型）特点：分辨率高，可快速将所感兴趣的细胞分选出来，并可以将单个细胞或指定个数的细胞分选到特定的培养孔或培养板上，同时可选配多种波长和类型的激光器，适于更广泛更灵活的科学研究应用。(3)类为新型流式细胞仪：15 个参数同时分析。高速分选速度达到50,000 个/秒，并可进行遥控分选，能够满足多种科学研究的要求。流式细胞仪常检测的细胞特性 细胞组成 细胞功能

一、工作原理 大小

细胞表面/胞浆/核--特异性抗原

①采用激光作为激发光源，保证其具有更好的单色性与激发 粒度

细胞活性

效率；②利用荧光染料与单克隆抗体技术结合的标记技术，DNA, RNA含量

胞内细胞因子

保证检测的灵敏度和特异性；③用计算机系统对流动的单细 蛋白质含量

激素结合位点

胞悬液中单个细胞的多个参数信号进行数据处理分析，保证 钙离子, PH值, 膜电位 酶活性

了检测速度与统计分析精确性。概括为三个系统结构：（1）液流系统：由样本和鞘液组成。鞘液（PBS或生理盐水）：主要作用是包裹样本流的周围，样品流在鞘液的环包下形成流体力学聚焦，包裹的细胞排列成单行，以每秒5000个-10000个细胞，每秒10米速度流动室喷出，保证每个细胞通过激光照射区的时间相等，从而得到准确的细胞荧光信息。鞘液在整个系统运行中流速是不变的。改变样本的进样速率开关，可提高采样分析的速度。

（2）光学系统：大多采用氩离子气体激光器。每个细胞所携带荧光物质被激发出的荧光信号强弱，与被照射 流式细胞仪分析技术及应用-------温医细胞生物学技术 的时间和激发光的强度有关，因此细胞必须达到足够的光照强度。激光光束在达到流动室前，先经过透镜形成光斑，这种椭圆形光斑激光能量分布属正态分布，为保证样品中细胞受到的光照强度一致。激光光束与细胞液流呈90°角方向照射，细胞产生散射光和荧光。

主要光学原件是滤光片，主要分成3 类：

1、长通滤片：（LP）：LP500滤片允许500μm 以上光通过，而500μm 以下光吸收或返回。

2、短通滤片（SP）：与长通滤片相反，如SP500 滤片允许500μm 以下光通过，500μm 以上光吸收或返回。

3、带通滤片（BP）：带通滤片可允许相当窄的一波长范围内光通过，一般滤片上有两个数，一个为允许通过波长的中心值，另一为允许通过光的波段范围。如BP500 表示其允许通过波长范围为75μm-525μm。

（3）数据处理系统

流式细胞仪与显微镜的区别

区别

流式细胞仪

显微镜

光源

激光

自然光、灯光 对象

细胞、生物粒子

细胞、组织等 承载工具 鞘液及流动室

载玻片 检测信号 光学信号

形态及染色 放大方式 PMT、放大电路 目镜×物镜、光学放大 统计

计算机，>5000 人工，200 结果

多参数，综合分析 简单，单参数

二、散射光的测定

散射光信号不依赖任何样品的制备技术（如染色），因此称为细胞的物理参数。（波长与激光相同。）主要分为: ①前向散射光（0°散射）FSC：激光束照射细胞时，光以相对轴较小角度(0.5°～10°)向前方散射的讯号用于检测细胞等粒子的表面属性，信号强弱与细胞体积大小成正比。

②侧向散射光（90°散射）SSC：激光束照射细胞时，光以90°角散射的讯号，用于检测细胞内精细结构和颗粒属性，即细胞膜、胞质、核膜结构性质。

目前采用FSC（表示细胞大小）SSC（表示细胞内颗粒的复杂程度）这两个参数组合，检测FSC与SSC信号通过计算机处理，可得到FSC-SSC图，可区分裂解红细胞处理后外周血白细胞中淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞三个细胞群体，或在未进行裂解红细胞处理的全血样品中找出血小板和红细胞等细胞群体。

三、荧光信号（FL）测量

当激光光束与细胞正交时，一般产生两种荧光信号：

①一种是细胞自发荧光：细胞自身在激光照射下，发出微弱荧光信号；

②另一种是经过特异荧光素标记细胞后，受激发照射得到的荧光信号，由于 90o 方向的散射光信号较弱，容易分离出荧光信号，因此此方向上放置必要的光学元件（滤光片、双色分光镜等），可以获取荧光信号。

通过收集两种以上不同波长的荧光信号FL1、FL2进行检测和定量分析，就能了解所研究细胞参数的存在与定量，反映生物颗粒表面和内部的各种情况。

常配置的激光器波长为488nm。

633nm激光管常用染料有APC、APC-Cy

荧光信号的宽度（如FL2-W）常用来区分双联体细胞，由于DNA 样本极易聚集，当两个G1 期细胞粘连在一起时，其测量到的DNA 荧光信号（FL2-A）与G2M 期细胞相等，这样得到的测量数据G2M 期细胞比率会增高，影响测量准确性。通过设”门”（gate）方法，将双联体细胞排除。其原理是双联体细胞所得到的荧光宽度信号（FL2-W）要比单个G2M 细胞大，因此设”门”后才能得到真正的DNA 含量分布曲线和细胞周期。不过通过荧光强度的高度峰和面积峰也可做同样分析。

四、细胞分选原理（图示见上）

通过流式细胞仪进行细胞分选主要是在对具有某种特征的细胞需进一步培养和研究时进行的。快速精度分选纯度90%-99%，且细胞活性不受影响。

1、细胞分选时，液流在驱动力作用下断成高度均一的液滴。在喷嘴下几毫米处，液滴从液流断开。

2、从颗粒被检测到液滴断开的时间由Accudrop技术直接计算。

3、符合分选条件的颗粒一旦被检测到，包含该颗粒的液滴断开时，液滴被充电。断开后的液滴仍然带电，带电的液 流式细胞仪分析技术及应用-------温医细胞生物学技术

滴通过被充电的偏转板。受到静电吸引或排斥，带电液滴将向左或右偏转。未带电的液滴不偏转而流入废液槽。检测指标：阳性百分率、绝对计数、平均荧光强度

（二）FCM 分选指标

分选速度：单位时间内分选的细胞数量。与悬液中细胞的含量成正比。一般要求分选速度至少达5 000个／秒左右，以保证被分选细胞的生物学活性不受影响。

分选纯度：被分选出的细胞所占的百分比，分选纯度与仪器的精密度直接相关，与实验设计的选择密切相关，可达到99%。

分选收获率：实际收获的分选细胞与设定通过测量点的分选细胞之间的比率。与纯度成反比。

分选得率：从一群体细胞悬液中分辨出目的细胞的总量，再经分选后得到目的细胞的实际得率。与分选速度成反比。第二节 数据的显示与分析

常用数据显示方式：单参数直方图、双参数散点图、二维等高图、假三维等高图、三参数散点图、设门分析技术

目前FCM 数据存贮的方式：采用列表排队方式。目前FCM 所采用的都是多参数指标，荧光参数标记物如是4 个，采用list mode 方式可大量地节约内存和磁盘容量。当一个细胞被测4 个参数，那么获取10000 个细胞，所占容量为4×10000 个（字或双字）。同时当只检测1 个参数时（如DNA），可灵活的关闭其它3 个参数，节省3/4 的空间数据的显示通常有一维直方图、二维点图、等高线图、密度图等几种。

一、参数

FSC：反映颗粒的大小。SSC：反映颗粒的内部结构复杂程度。FL：反映颗粒被染上的荧光数量多少。

二、数据显示方式

（一）单参数直方图---------由一维参数(散射光或荧光)与颗粒计数(COUNT)构成，反映同样散射光或荧光强度的颗粒数量的多少。横坐标表示荧光信号或散射光信号相对强度（FSC、SSC、FL1、FL2）四个参数的任何一个值。其单位是信道，横坐标可以是线性的，也可以是对数的，纵坐标一般是细胞数。

（二）双参数直方图---------双参数直方图：纵轴和横轴分别代表被测量细胞的两个测量参数，根据这两个参数就可以确定细胞在图上的表达位置。双参数信号通常采用对数信号，最常用的是点密图，在图中，每个点代表一个细胞，点图利用颗粒密度反映同样散射光或荧光强度的颗粒数量的多少。常用的表达方法有二维点图,等高线图,二维密度图。在二维图中，任选FSC、SSC、FL1、FL2 中二个参数作为X 轴、Y轴，在二维图上每个点代表一个细胞，可以区分细胞性质不同的群体；X 坐标为该细胞一参数的相对含量，而Y 坐标为该细胞另一参数的含量。在双参数图形中可以将各细胞亚群区分开，同时可获得细胞相关的重要信息。

（三）二维等高图---------由类似地图上的等高线组成，其本质也是双参数直方图。等高图上每一条连续曲线上具有相同的细胞相对或绝对数，即“等高”。曲线层次越高(越里面的线)所代表的细胞数愈多。等高线越密集则表示细胞数变化率越大。

（四）三参数直方图---------在三维图中，任选FSC、SSC、FL1、FL2 中二个参数作为X 轴、Y轴，Z轴为细胞数，构成三维图。

（五）流式细胞仪的多参数分析---------多参数分析：当细胞标记了多色荧光，被激发光激发后，得到的荧光信号和散射光信号可根据需要进行组合分析。

三、设门分析技术

Gate设置：指在某一张选定参数的直方图上，根据该图的细胞群分布选定其中想要分析的特定细胞群，并要求该样本所有其他参数组合的直方图只体现这群细胞的分布情况。

FCM的分辨率：分辨率是衡量FCM测量精度的指标，通常用变异系数CV表示。一般要求CV<8，最好CV<3。第四节 流式细胞仪技术的要求

一、免疫检测样品制备

细胞样品制备要求：

1、单细胞悬液；

2、细胞最适密度0.5×106-1.5×106个/ml；

3、荧光染色后尽量洗净细胞外多余染料，减少荧光本底；

4、双染色时尽量选择发射光谱不接近的荧光色素，产生易区别的两种荧光颜色；

5、如果细胞分选后继续培养，细胞样品制备和上机应该无菌操作。外周血淋巴细胞样品的制备：分离单个核细胞

培养细胞的样品制备：蛋白酶消化-----机械吹打-----使贴壁细胞脱落-----洗涤-----尼龙网过滤 新鲜实体组织单细胞悬液的三种制备：

单细胞悬液的保存： 流式细胞仪分析技术及应用-------温医细胞生物学技术

机械法（金属网引起细胞破碎）

深低温保存法（一年）酶处理法（选择最适宜消化酶）

乙醇或甲醇保存法（2周）化学试剂处理法（导致细胞成活率降低）

甲醛或多聚甲醛保存法（2月）表面活性剂处理法 注意事项：

1、新鲜组织标本应及时进行处理保存；

2、根据实验目的选择最隹的固定方法；

3、酶学法要注意条件的选择和影响因素，要注意酶的溶剂，消化时间、pH 值、浓度等方面对酶消化法的影响。

4、需注意不同组织，选择相应的方法；如富于细胞的组织——淋巴肉瘤、视神经母细胞瘤、脑瘤、未分化瘤、髓样癌以及一些软组织肉瘤等，不一定采用酶学法或化学法；往往用单纯的机械法就可以获得大量高质量的单分散细胞；

5、在使用酶学方法时，要重视酶的选用，如含有大量结缔组织的肿瘤——食管癌、乳腺癌、皮肤癌等，选用胶原酶较好。

二、常用的荧光染料与标记染色 适用条件: ①有较高的量子产额和消光系数；②荧光强度与光量子产额之间的关系由下式表示：F=Q(I-eεCL)F 表示荧光强度，Q 表示光量子产额，I 表示激发光强度，￡表示消化系数，C 表示染液浓度，L 表示溶液厚度。③对488nm的激发光波长有较强的吸收；④发射光波长与激发光波长间有较大的波长差；⑤易与标记单抗结合而不影响抗体的特异性 荧光素发射荧光的基本原理：荧光素受到一定波度（激发波长）的激光激发后，其原子核外的电子由于吸收了激光的能量，由原本运动处于基础态轨道跃迁到激发态轨道上运动，然后当电子由激发态重新回到基础态时，释放出能量并发射出一定波长（发射波长）的荧光。

1、要选择正确的激光器：不同荧光素用不同的激发光波长的激发光来激发：

FITC 和PE 等的激发波长均为488nm，用产生可见光的氩离子激光器；APC 和PC5 等的激发波长在红光范围，需使用发射630nm 波长红光的氦-氖激光器。

2、各种荧光素的发射波长也十分重要，据此可以确定其检测所需光电倍增管性质； 如FITC，被激光激发后发射绿光，检测时要使用第一光电倍增管（即PMT1）；PE 则发射橙色光，需用第二光电倍增管（即PMT2）；PC5 和PerCP 等，发射的是深红色光，这时需选择第三甚至第四光电倍增管（即PMT3 或PMT4）,等等

常用的几类荧光染料

（二）免疫荧光标记

名称染料激发发射光溶解性对PH敏感特点荧光染料与细胞成分的四种结合方波长或荧光性式

结构亲和式

颜色

嵌入结合 共价键结合 异硫氰酸荧FITC488绿 易敏感易溶于水，与抗体结光素合不影响特异性52

5荧光标记抗体特异性结合 得州红Texas 568红 不易不敏感稳定，偶联后量子产免疫荧光标记方法

red额低615直标：干扰少,但需购买多种单抗

藻红蛋白PE488橙间标：步骤多,干扰多,不需标记多种575抗体

易不敏感具较多发光基团，消藻青蛋白PC488红组合标记

光系数和量子产额高

别藻青蛋白APC633红 670 能量传递复PEcy5488红易不敏感减少交叉，成本高 合染料670

三、免疫胶乳颗粒技术的应用-----液相芯片技术

是把微小的乳胶微球分别染成上百种不同的荧光色，把针对不同检测物的乳胶微球混合后再加入待标本，在悬液中与微粒进行特异性地结合，经激光照射后不同待测特产生不同颜色，并可进行定量分析。因检测速度极快，所以又有“液相芯片”之称。流式细胞仪分析技术及应用-------温医细胞生物学技术

四、流式细胞技术的质量控制

（一）单细胞悬液制备的质控

（二）免疫荧光染色的质控 适当的制备方式（不同标本来源外周血、骨髓、培养细胞等）

温度 试剂选择

pH 样品处理（蛋白质浓度、缓冲液、细胞条件、活性、自发荧光等）

染料浓度 实体组织来源标本用机械法

固定剂 温度25~37℃，pH7.0~7.2

（三）仪器操作的质控

光路与流路校正: 确保激光光路与样品流处于正交状态，减少变异（CV）。PMT（光电倍增管）校准: 保证样品检测时仪器处于最佳灵敏度工作状态。绝对计数校准: 保证计数的准确性。

（四）免疫检测的质控

同型对照：即免疫荧光标记中的阴性对照，选用相同源性的未标记单抗作为对照调整和设置电压，以保证特异性。全程质量控制：与待测标本一起标记和检测，结果达靶值，提示本次实验结果可靠。第五节、流式细胞仪的科研应用

1、细胞表型分析

2、胞内蛋白的检测

3、细胞周期和DNA倍体分析

4、流式标准小球定量

5、分选

6、细胞内钙离子测量

第六节、流式细胞术的临床应用

1、细胞周期和DNA含量分析

2、细胞凋亡的检测和分析

3、血小板及血小板活化的FCM 分析

4、造血干细胞（CD34+细胞）的检测

5、白血病和淋巴瘤免疫分型

6、网织红细胞分析

7、残余白血病检测

8、淋巴细胞亚群分析

9、肿瘤耐药基因分析

10、AIDS病检测中的应用

11、自身免疫病相关HLA抗原分析

12、移植免疫中的应用

1、DNA 含量分析检测原理：DNA 含量常和某种细胞周期相关蛋白同时检测，来分析细胞处于某一特定周期阶段。恶变肿瘤细胞一般多出现异倍体，有很多研究证明DNA 含量分析对人肿瘤的诊断预后有很高的价值。荧光染料和细胞 DNA 分子特异性结合具有一定的量效关系： ① DNA 含量多少与荧光染料的结合成正比；

② 荧光强度与DNA 分子结合荧光素多少成正比；

③ 荧光脉冲与直方图的通道值成正比。因此，FCM-DNA 定量分析1 个细胞增殖群时，可将二倍体DNA 含量分布组方图分为三部分：

即G0/

1、S、G2M ；G0/1和G2M 细胞峰的DNA 分布均为正态分布，S 期可以认为是一个加宽的正态分布。在癌组织DNA 直方图上，异倍体峰前总可以见到1 个或大或小的二倍体峰位的G0/1 细胞峰。另外，显微图象分析仪做异倍体检测时，都采用组织中淋巴细胞做对照。

在同一个肿瘤的不同区域、或原发肿瘤和继发、或转移灶、或随肿瘤病程发展、或经治疗的肿瘤灶，其DNA 倍性可能有所变化，这种倍体类型的差异，称为DNA 倍体异质性。DNA分析的临床意义

DNA分析诊断肿瘤：----DNA非整倍体细胞峰-----突出的四倍体细胞峰

DNA倍体分析：结合临床病理的形态学诊断，对一些恶性肿瘤进行早期诊断，跟踪随访和早期治疗，大大提高一些肿瘤的治愈率和生存率。尤其对一些细胞抽吸物、体液、组织液的脱落细胞的分析，意义尤为重要。增殖状态分析：反映了肿瘤的生长速度和侵袭性 FCM在肿瘤早期诊断和鉴别诊断中的作用

DNA非整倍体的出现可能是癌前病变发生早期癌变的一个重要标志 在病理形态学不能做出诊断前可提供确切诊断信息 DNA非整倍体的交界瘤应按恶性对待

形态学表现良性的肿瘤出现非整倍体提示恶变可能 DNA指数可作为判断间叶组织肿瘤良恶性的辅助指标 细胞凋亡------（1）、早期细胞凋亡的流式细胞术检测：半胱氨酸蛋白酶3（caspases-3）

-------（2）晚期细胞凋亡的流式细胞术检测：DNA 含量分析法：目前检测凋亡细胞DNA 断裂的方法中，最常用、最简便的就是DNA 含量分析；DNA 直方图上显示在G0/1 峰前出现一个DNA 含量减少的亚二倍体或称亚G0/1 峰，又称凋亡细胞峰

第五篇：电磁技术在石油勘探开发中的应用

电磁技术在石油勘探和开发中的应用

高国忠博士今天上午在地质楼525会议室，给我们做了一个非常精彩的讲座，作为石油大学的老学长，其幽默的谈吐让我们倍感亲切。同时，其丰富的工作经验和学术功底给了我们很多启发和感悟。

电磁技术在石油勘探和开发中有着广泛的应用。在地球物理勘探中，有“重、磁、电、震”四种主要的方法。其中“电”，就包含电磁技术。通过人工或天然电场来获得大地电阻率，进而来评价地下构造。在地球物理测井中，有广为人知的电磁波传播测井，通过人工向地层发射电磁波，分析接收到的信号，测量电磁波的幅值和相位，来进行地层评价，可以评价地层厚度，寻找油气层。电磁波传播测井所用频率很高，探测深度很浅，是该种方法的弊端。

电磁技术还可以被应用在随钻测量中，众所周知，随钻测量实时从地下向地面传输信号，电磁波可以携带信息，又地下向地面传输。但面临的问题是，电磁波在地层传播过程中衰减十分严重，对于信号的损失也较为严重。我认为，可以再后续的信号处理中，寻求合适的算法进行数据重构，重新得到想要的信息。

井间电磁成像测井是当代地球物理应用技术发展的重要前沿，也是一项极具挑战性的重大研究课题。其能够提供井间电阻率的二维乃至三维图像，为油田勘探、开发提供一种有效实用的技术手段。可以用于研究井间油藏的构造形态、储层展布情况；描述油气富集区及井间的流体分布；检测油田开发动态，指示水驱、蒸汽驱和聚合物驱的波及前沿和方向，分析井间剩余油分布。

井间电磁技术基本方法是将反射器和接收器分别置于邻近的两口井中，发射器此阿勇磁偶极子源，工作频率10Hz-10KHz，接收器接收由发射器激发并经地层传播的电磁波，反演后获得井间地层电阻率的分布图像。成像处理，是在假定地层基本满足轴对称的条件下进行的，这时可把地层电阻率的空间分布简化为二维子午面上的分布。由于接收器的响应是二维子午面上电阻率泛函，如果把子午面“离散化”，即吧子午面分为许多方格，并假定每个像素的电阻率各为一固定值，响应则为各个像素数值的电阻率都相等时，其响应方程才可描述。测量过程中，以一定的深度间隔固定接收器的位置，发射器以连续测量的方式进行采样，这样可以得到数量众多的响应方程。通过反演求解方程的未知数，达到求解各像素电阻率值得目的。

井间电磁技术有两个人们比较关注的问题，一是如何提高分辨率，影响分辨率的因素主要频率频；二是如何减小金属套管对电磁信号的强烈衰减和相移作用。对于第二个问题，可以在套管材质上进行创新，发展一种非金属套管来代替当前的金属套管，此种方法正在试验中，已经取得阶段性成果。