微生物实验室培养基制作个人总结

第一篇：微生物实验室培养基制作个人总结

一．培养基的制备

仪器材料 微波炉、高压灭菌器、玻璃器皿、三角瓶，PH试纸、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、氯化钠、氢氧化钠。操作方法

１． 肉汤培养基制作 ⑴成分

肉浸膏（0.3%牛肉膏）500ml 蛋白胨 5g 氯化钠 2.5g 磷酸氢二钾 0.5g ⑵准备工作 配制调节PH用的0.1M氢氧化钠和1M氢氧化钠溶液。⑶操作

①称取牛肉膏，放入玻璃皿中，另入适量蒸馏水配成0.3%。②按比例加入适量蛋白胨、氯化钠、磷酸氢二钾搅拌。③搅拌加热至完全溶解。

④PH值调至7.8，煮沸10min，站足水分。

⑤待冷至40～50℃时，过滤。滤液分装于无菌试管内（达试管的1/3）或每管加4-5ml。塞好棉塞。

⑥置高压灭菌器内高压灭菌（121.3℃，20分钟即可）2．普通琼脂培养基制作

⑴成分 肉汤培养基 500ml 琼脂 8-15g ⑵制法

①先矫正肉汤培养基PH值。

②加入适量琼脂煮沸溶解，矫正PH值至7.4～7.6。③灭菌后使杂质沉淀。

④取其上清液灭菌后分装。倒入无菌平皿内凝固即成普通琼脂平板。

二、平板划线接种法 【方法】

1． 在平板底面上用记号笔作好标记，如菌种、班级，姓名、接种日期等，并在平板底面边缘作一原划线标记。

2．右手拿接种环，烧灼灭菌并冷却后，取混合菌液少许。3．左手斜持（45°角）琼脂平板，略开盖，平板在乙醇灯火焰左前上方约5～6cm距离。右手持已取标本的接种环在琼脂平板表面之一侧边缘，作原划线，见图5-2A。

4．接种环烧灼灭菌，冷却后自原划线末端沾取少许标本，使接种环与平板表面成30～40°角，运用腕力将接种环在平板上来回划线，见图5-2B。划线要密但不能重叠，充分利用平板的表面积，不要划破琼脂表面，并注意无菌技术，避免空气中细菌的污染。也可用分区划线法，即从原划线末端沾取标本后只划平板的1/5～1/4，划毕烧灼灭菌接种环，冷后同样划线，共计4～5次。接种环烧灼灭菌后方可放下（图5-2C、D、E）。

三.细菌在培养基中生长特性的观察 1.琼脂培养基 ⑴大小

⑵形状：圆形、不整形、针尖状、露滴状、同心圆状、颗粒状。⑶边缘：整齐、波浪状、锯齿状、卷发状。

⑷表面性状：光滑、粗糙、同心圆状、放射状、皱状、颗粒状。⑸湿润度：湿润、干燥。

⑹隆起度：表面隆起、轻度隆起、中央隆起、扣状扁平。

⑺色泽及透明度：无色、白色、黄色、橙色、红色；透明、半透明、不透明。⑻质地：坚硬、柔软、粘稠。

⑼溶血性：α型溶血 菌落周围有透明溶血环。

β型溶血 半透明带绿色溶血环。

γ型溶血 不溶血。

药物敏感试验

基本原理

细菌对抗菌药物的敏感试验，通常简称为细菌的药敏试验。在给患传染病动物进行治疗时，测定细菌对药物的敏感性，不仅有助于选择合适的药物，而且可为药物的用量提供依据。某种细菌对药物的敏感度，是指抑制该细菌生长所需的最低药物浓度。细菌在体外的敏感度和临床的疗效大体是符合的，但也有不一致者。目前供药敏试验的方法很多，可归纳为两大类，即稀释法和扩散法。有的以抑制细菌生长为评定结果的标准，有的则以杀灭细菌为标准。一般可报告为某菌对某抗菌药物敏感、轻度敏感或耐药。

稀释法是将抗菌药物稀释为不同的浓度，作用于被检菌株，定量测定药物对细菌的最低抑菌浓度(minimal inhibition concentration, MIC)或最低杀菌浓度(minimal bacteriocidal concentration, MBC)，可在液体培养基或固体培养基中进行。

扩散法（diffusion method）是将抗菌药物置于已接种待测细菌的固体培养基上（或内），抗菌药物通过向培养基内的扩散，抑制敏感菌的生长，从而出现抑菌环（带）。药物扩散的距离越远，达到该距离的药物浓度就越低，故可根据抑菌环的大小，判断细菌对药物的敏感度。抑菌环（带）边缘的药物含量即该药物的敏感度。此法操作简便，容易掌握，但只用于定性。因受纸片含药量不均及接种量等多种因素影响，结果不够准确，因此试验时应同时设立已知敏感度的标准菌株作为对照。

器材准备

1．菌种 大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、炭疽杆菌。

2．药敏试纸 含青霉素、链霉素、庆大霉素、氯霉素、磺胺嘧啶等药敏试纸，分装于灭菌平皿中。

3．培养基 普通肉汤、普通琼脂平板培养基。

4．其他 95％酒精、小镊子、麦氏比浊管、1mL刻度吸管、橡皮胶头等。

实验步骤

1．试管双倍稀释法

（1）抗生素原液的配制及保存：将抗生素制剂无菌操作溶于适宜的溶剂如蒸馏水、磷酸盐缓冲液中，稀释至所需浓度。抗生素的最初稀释剂通常用蒸馏水，但是有些抗生素必须用其它溶剂作初步溶解。常用抗生素原液的溶剂和最初稀释剂见表6-1。若制剂中可能含有杂菌，配制后宜用细菌滤器过滤除菌（可用玻璃滤器或微孔滤膜，孔径0.22m，但不可用纤维垫滤器）。分装小瓶，在－20℃冷冻状态下保存，可保存3个月或更久，每次取出一瓶保存于4℃冰箱，可用1周左右。

（2）培养基：一般采用普通肉汤培养基。如细菌生长缓慢，可加入0.25％～1％葡萄糖或5％～10％血清。

（3）方法：被测菌种悬液的制备：将较多量的菌种移种于肉汤培养管中，置37℃温箱中培养6h（生长缓慢者可培养过夜），使生长浊度达9×108个/mL（相当于麦氏比浊管第3管）。

抗生素溶液的双倍连续稀释：取13×100mm灭菌带棉塞试管13支（管数多少可依具体需要而定）。另将上述菌液作1︰10 000倍稀释（生长缓慢的细菌可稀释1︰1 000或更少），除第1管加入稀释菌液1.8mL外，其余各管均各加1.0mL。继于第1管加入抗生素原液0.2mL，混合后吸出1.0mL加入第2管中，用同法依次稀释至第12管，弃去1.0mL。第13管为生长对照。

表6-1 抗生素原液的溶剂和稀释剂

抗生素

丁胺卡那霉素 氯苄青霉素 杆菌肽 羧苄青霉素 头孢羟唑 头孢唑林 头孢甲氧霉素 头孢菌素I 氯霉素 氯洁霉素 多粘菌素B或E 红霉素

溶剂 蒸馏水

0.1mol/L PBS（pH值8.0）

蒸馏水 蒸馏水 蒸馏水 蒸馏水 蒸馏水

0.1mol/L PBS（pH值8.0）

甲醇 蒸馏水 蒸馏水 甲醇

稀释剂 蒸馏水

0.1mol/L PBS（pH值8.0）

蒸馏水 蒸馏水 蒸馏水 蒸馏水 蒸馏水 蒸馏水 蒸馏水 蒸馏水 蒸馏水

0.1mol/L PBS（pH值8.0）庆大霉素 卡那霉素

新青霉素I、II、III 青霉素G 萘啶酸 链霉素 四环素 妥布霉素 万古霉素

蒸馏水 蒸馏水 蒸馏水 蒸馏水 0.1mol/L NaOH

蒸馏水 蒸馏水 蒸馏水 蒸馏水

蒸馏水 蒸馏水 蒸馏水 蒸馏水 蒸馏水 蒸馏水 蒸馏水 蒸馏水 蒸馏水

培养及结果观察：置37℃培养16～24h，观察结果。凡药物最高稀释管中无细菌生长者，该管的浓度即为MIC。

MBC的测定：从无细菌生长的各管取材，分别划线接种于琼脂平板培养基，于37℃培养过夜（或48h），观察结果。琼脂平板上无细菌生长而含抗生素最少的一管，即为MBC。也可将上述各管在37℃继续培养48h，无细菌生长的最低浓度即相当于该抗生素的MBC。

结果报告：一般以MIC作为细菌对药物的敏感度，如第1～8管无细菌生长，第9管开始有细菌生长，则把第8管抗生素的浓度报告为该菌对这种抗生素的敏感度；如全部试管均有细菌生长，则报告该菌对这种抗生素的敏感度大小为第1管中的浓度或对该药耐药；如除对照管外，全部都不生长时，则报告为细菌对该抗生素的敏感度等于或小于第12管的浓度，或高度敏感。

2．扩散法（K-B法）

（1）含药滤纸片的制备：含有各种抗菌药物的滤纸片是扩散法中应用最多的。目前，我国生产含药滤纸片的单位不多，购买较为困难，即使购买也易过期失效，所以一般可应用自制的药敏滤纸片。其方法如下：

滤纸片：选用新华1号定性滤纸，用打孔机打成直径为6mm的小圆片，根据需要将数片包成一纸包或放入带棉塞的小瓶或小平皿内，121℃灭菌15min，置100℃干燥箱内烘干备用。

药液的配制：常用药物的配制方法及所用浓度见表6-2。

表6-2 药敏纸片的制备及含药浓度

药 物 青霉素 剂 量 注射用粉剂

制备方法

20mg加pH值6.0 PB缓冲液15.5mL，取1mL加PB缓冲液9mL

20mg加pH值6.0 PB缓冲液20mL 20mg加pH值7.8 PB缓冲液 8mL 以pH值7.8 PB缓冲液作100倍稀释 以pH值6.0 PB缓冲液稀释 20mg加水20mL溶解

药液浓度（g/mL）

200 1 000 2 500 2 500 1 000 1 000

纸片含量（g）10 25 25 10 10 新青霉素 注射用粉剂

注射用粉剂

链霉素

注射用针剂 注射用针剂

氯霉素

口服粉剂 土霉素 口服粉剂或片剂

25mg粉末，加2.5mol/L HCl 15mL 溶解后，以pH值6.0 PB缓冲液或水稀释 000 1 000 1 000 1 000 1 000 1 000 1 500 3 000 3 000 1 000 3 000 1 000 1 000 1 000 1 000 10 000 10 000 1 000 10 000 10 000 10 000 125 10 10 10 10 10 10 30 30 10 300 10 10 10 10 100 100 100 100 100 100 1.25 四环素 口服粉(片)

同土霉素

剂

注射用粉剂 口服片剂

以生理盐水稀释 同土霉素

以pH值3.0 PB缓冲液溶解后以pH值6.0 PB缓冲液稀释

以pH值8.2 PB缓冲液溶解后稀释 以水溶解，以pH值7.8 PB缓冲液稀释 同红霉素

以pH值7.8 PB缓冲液稀释 以pH值7.8 PB缓冲液稀释 以pH值7.2 PB缓冲液稀释 以pH值7.8 PB缓冲液稀释

以1mol/L NaOH 1mL溶解1片，用pH6.0 PB缓冲液稀释 以1mol/L NaOH 1mL溶解1片，用pH6.0 PB缓冲液稀释

以二甲基酰胺或丙酮溶解 以水稀释

以水或pH值8.2 PB缓冲液稀释 100mg加2.5mol/L HCl 1.25mL，加水至5mL，以pH值6.0 PB缓冲液稀释 100mg加水1mL，浓HCl 0.7mL溶解，以pH8.2 PB缓冲液稀释

100mg加水2mL，浓HCl 0.5mL溶解，以pH8.2 PB缓冲液稀释

100mg加浓HCl 1mL，溶解后以pH6.0 PB缓冲液稀释

1片研碎后加水2mL，浓HCl 0.25mL，以pH值6.0及7.8 PB缓冲液稀释 金霉素

口服粉剂

新霉素 红霉素 口服片剂 注射用粉剂 注射用粉剂

卡那霉素

注射用针剂

庆大霉素 注射用针剂 多粘菌素 注射用粉剂 万古霉素 注射用粉剂 呋喃妥因 粉剂或片剂 呋喃西林 粉剂或片剂 痢特灵 磺胺嘧啶片剂

粉剂或针剂

钠

磺胺二甲基针剂

嘧啶

长效磺胺 片剂 周效磺胺 片剂 磺胺甲基异恶唑

磺胺5-甲氧嘧啶

磺胺增效剂

片剂 片剂 片剂

含药纸片的制备：将灭菌滤纸片用无菌镊子摊布于灭菌平皿中，以每张滤纸片饱和吸水量为0.01mL计，每50张滤纸片加入药液0.5mL，不时翻动滤纸片，使滤纸片将药液均匀吸净，一般浸泡30min即可。然后取出含药纸片置于一纱布袋中，以真空抽气使之干燥。或直接将滤纸片摊于37℃温箱中烘干，烘烤的时间不宜过长，以免某些抗生素失效。对青霉素、金霉素等纸片的干燥宜用低温真空干燥法。干燥后，立即装入无菌的小瓶中加塞，置于干燥器内保存，也可将纸片贮藏于－20℃或家用冰箱冰冻。少量供工作用的纸片从冰箱中取出后应在室温中放置1h，使纸片温度和室温平行，防止冷的纸片遇热产生凝结水。

药敏纸片的鉴定：取制好的纸片3张，以标准敏感菌株测其抑菌环，大小符合标准者则为合格。纸片的有效期一般为4～6个月。

（2）操作方法：K-B法是用含有一定量抗生素的药敏纸片，贴在已接种试验细菌的琼脂平板上，经37℃培养后，抗生素浓度梯度通过纸片上弥散作用而形成，在敏感抗生素的有效范围内，细菌的生长受到抑制，在有效范围外，细菌能够生长，故能形成一个明显的抑菌环。以抑菌环的大小来判定试验菌对某一抗生素是否敏感及敏感程度。

用接种环挑取菌落4～5个，接种于肉汤培养基中，置37℃培养4～6h。

菌液稀释：用灭菌生理盐水稀释培养液使浊度相当于硫酸钡标准管（配制方法：1.175％氯化钡0.5mL、1％硫酸溶液99.5mL，充分混匀，将此溶液置于与肉汤培养基相同的试管中，用前充分振摇）。

用无菌棉拭子蘸取上述肉汤培养液，在管壁上挤压，除去多余的液体，用棉拭子涂满琼脂表面，盖好平皿，在室温下干燥5min，待平板表面稍干即可放置含药纸片。

用灭菌镊子以无菌操作取出含药纸片贴在涂有细菌的平板培养基表面。一个直径9cm的平皿最多只能贴7张纸片，6张纸片均匀地贴在离平皿边缘15mm处，一张位于中心。贴纸片时要轻轻按压，以保证与培养基密切接触。将平皿放37℃恒温箱，培养16～18h，观察结果（如图6-1）。结果判定：观察含药纸片周围有无抑菌环，量取其直径（包括纸片直径）大小，用毫米数记录，按抑菌环直径的大小报告敏感、中度敏感和耐药，具体标准见表6-3。

表6-3 抗菌药物的抑菌环与敏感标准

抗菌药物 丁胺卡那霉素 肠杆菌、肠球菌 葡萄球菌和青霉素敏感细菌 嗜血杆菌 杆菌肽 肠杆菌科 绿脓杆菌 先锋霉素I 氯霉素 氯林可霉素 粘菌素

复方甲氧异恶唑 红霉素 每片含药量(g)

耐药 10 10 10 10 100 100 30 30 2 10 25 15

≤11 ≤11 ≤10 ≤19 ≤8 ≤17 ≤13 ≤14 ≤12 ≤14 ≤8 ≤10 ≤13

抑菌环的直径（mm）

中等敏感 12～13 12～13 12～23

9～12 18～22 14～16 15～17 13～17 15～16 9～10 11～15 14～17

敏感 ≥14 ≥14 ≥24 ≥20 ≥13 ≥23 ≥17 ≥18 ≥18 ≥17 ≥11 ≥16 ≥18 庆大霉素 卡那霉素 甲氧苯青霉素 萘啶酸 新霉素 呋喃妥因 苯唑青霉素 青霉素G 葡萄球菌 其他细菌 30 5 30 30 300 1 10 10 300 10 300 300 10 30 2

≤12 ≤13 ≤9 ≤13 ≤12 ≤14 ≤10 ≤20 ≤11 ≤8 ≤11 ≤12 ≤12 ≤11 ≤9 ≤14

13～14 14～17 10～13 14～18 13～16 15～16 11～12 21～28 12～21 9～11 12～14 13～16 13～18 12～13 10～11 15～16

≥15 ≥18 ≥14 ≥19 ≥17 ≥17 ≥13 ≥29 ≥22 ≥12 ≥15 ≥17 ≥19 ≥14 ≥12 ≥17 多粘菌素B 链霉素 磺胺 四环素 妥布霉素 万古霉素 氯洁霉素

注意事项

1．稀释法

（1）接种量：接种细菌量的多少与MIC有一定关系。如用敏感的葡萄球菌对氯苄青霉素进行检测时，接种量增加1 000倍，MIC只略有增加，但对甲氧苯青霉素的敏感度则因接种量的不同而有较大变化，即使同一菌株，接种量小时为敏感，接种量增大时，其MIC则增加许多倍。

（2）培养基成分及培养条件：培养基的组成成分应保持恒定，外观清晰透明，pH值适宜。为了观察方便，还可向各管中加入葡萄糖及指示剂，以指示剂颜色的改变判定其是否生长。同时要注意选择适宜的培养温度，一般在12～18h观察药敏试验结果。如时间过长，细菌将会在高浓度的药物中生长。其原因，一是由于被轻度抑制的细菌开始繁殖，另一方面则是因为有些抗生素在37℃情况下不稳定，在其被破坏之后，受抑制的细菌也会再次生长繁殖。

（3）对于一些色泽深或本身呈混浊的中草药，其试管培养后不易观察细菌的生长情况。可从培养管移至平板培养基上，观察各管中的细菌是否被杀死。这种方法只能测定药物的最低杀菌浓度。

抑菌圈图示

含药纸片

抑菌圈

细菌菌苔（4）稀释时，每一个稀释度均应更换吸管。菌液及抗生素的加量要准确。

2．扩散法

（1）K-B纸片扩散法必须使用Mueller-Hintion（MHA）培养基，因其解释度的数据是用此培养基积累的，MHA培养基普通冰箱可保存2～3周，用前须放37℃10min，以使形成的水雾干燥。此培养基适合于快速生长的细菌，生长缓慢的细菌或厌氧菌，不宜采用K-B技术及其解释标准。

（2）接种用的菌液浓度必须标准化，以细菌在平板上的生长恰呈融合状态为标准，接种后应及时贴含药纸片和放入35℃（或37℃）培养。

（3）培养的温度要恒定，时间为16～18h，结果不宜判读过早。因培养过久，细菌能恢复生长，使抑菌环变小。培养时不应增加CO2，以防某些抗菌药物形成的抑菌圈大小发生改变及影响培养基的pH值。

第二篇：微生物实验室一般状况总结

微生物实验室及设备

一、选址：

1.实验室应选择在清洁安静的场所，远离生活区，锅炉房与交通要道；

2.实验室应选择在光线充足，通风良好的场所，要与生产加工车间有一定距离；

3.实验室应选择在方便选样与检验，距离车间较近的工作场所．

二、结构和布局：

根据实验实际需要，主要包括以下三大部分：细菌实验室、理化实验室、办公室．

1.办公室 2.理化分析实验室：（或者和细菌检验操作室合并）①理化分析室（物理化学分析，可兼作感观检验室）②仪器室（兼放细菌室显微镜等少量仪器）3．细菌实验室： ①细菌检验操作室； ②无菌室（微生物的扩培、接种制细胞培养液，灭菌后培养基的分装）； ③培养基制作室（培养基的配制，但灭菌后的培养基接种需在无菌室操作）；

一般布局要求如下：

1.办公室：办公室是化验人员进行原始记录等各项工作的场所，是与非化验室人员交往较多的场所，只需有桌、椅等简单设施即可．

2.细菌检验操作室（常规操作）细菌检验操作室是细菌检验主要操作室，主要设施是实验台．实验台的要求：a.实验台面积一般不小于2.4×1.3m； b.实验台位置应在实验室中心位置，要有充足光线． c.实验台两侧安装小盆与水龙头； d.实验台中间设置试剂架，架上装有日光灯与插座； e.实验台材料要以耐热、耐酸碱为宜．

3.无菌室：无菌室通过空气的净化和空间的消毒为微生物实验提供一个相对无菌的工作环境，无菌室是处理样品和接种培养的主要工作间，应与细菌检验操作室紧密相连．为满足无菌室无菌要求，无菌间应满足以下布局：a.入口避开走廊，设在细菌检验操作室内； b.与操作室用两道缓冲间隔开； c.无菌室与缓冲间均装有紫外灯，要求每3平米安装30ｗ紫外灯一盏； d.无菌室内设有实验台（实验台与边台皆可），紫外灯距实验台面要小于1.5m； e.无菌室与操作室之间设有双层窗构成小通道．

4.培养基制作室：培养基室是制作、配制微生物培养所需培养基及检验用试剂的场所，其主要设备应为边台与药品柜．

a.边台上要放置电炉，以满足熔化煮沸培养基时用； b.边台材料要耐高热、耐酸碱； c.药品柜分门别类存放一些一般药品及试剂； d.危险、易腐易燃有毒有害药品单独设保险柜存放； e.边台上要放天平，以称取药品用．

5.洗涤消毒室：洗涤消毒室用以消毒洗涤待用与已用之玻璃器皿，培养基及污物，其面积应大于10m2（此区域的部分职能可在理化分析室完成）．

为满足洗涤消毒的功能，洗涤消毒室应设有：

a.1-2个洗涤池，洗涤池上下水网要畅通；b.器皿柜或实验台，以放置洗涤好器皿；

c.高压灭菌锅，其所用电源应满足用电负荷；d.室内安有通风装置（通风柜）或换气扇； e.有条件的单位还可在该室内，设供日常检验用水蒸馏水器装置．

6.理化分析室（如果没有条件，这个可以和微生物常规实验室合并）理化分析室是物理化学分析的主要操作室a.实验台与细菌操作室要求相同b.设置通风柜以满足加热、消化、干燥、烧灼和化学处理等工作需要；c.洗涤池．

7.仪器室：如果没有条件，这个可以和微生物常规实验室合并，用以放置显微镜、电子天平及理化分析用小型仪器；a.要求清洁干燥、防潮防虫、避光； b.仪器台要稳固、牢靠．

从上述资料可以总结出简单微生物实验室须具备以下几点：1.办公室即实验纪录整理和相关资料文献存放区2.常规操作区包括（1）微生物试验结果的显微和理化检测（2）试剂、检验用仪器存放；药品需分门别类存放；危险、易腐易燃有毒有害药品单独设保险柜存放（3）培养基的一般配制；但培养基灭菌后的分装与接种必须在无菌条件下操作3.无菌操

作区此区域为洁净区，作为微生物接种扩培和微生物发酵产物后处理工作区；超净工作台可代替无菌室，提供相对无菌的工作平台．其构造主要有电器部分、送风机、三级过滤器（初、中、高）及紫外灯等。

特别注意：高压灭菌器材设备要独处放置。

三、一般仪器设备

1.恒温培养箱：主要用于实验室微生物的培养，一般有（1）普通培养箱：一般控制的温度范围为：室温＋５～６５度，又分为电热恒温培养箱和隔水式恒温培养箱．（2）生化培养箱：一般控制的温度范围为：５～５０度．（3）恒温恒湿箱：一般控制的温度范围为：５～５０度，控制的湿度范围为：５０～９０％．可作为霉菌培养箱．4）厌氧培养箱：适用于厌氧微生物的培养．可根据实际需要选用．

2.电热恒温干燥箱：用于吸管，平皿类玻璃器皿的干热、灭菌和烘烤．

3.高压蒸汽灭菌锅（又叫高压灭菌锅）：培养基、试验用培养皿等用品的灭菌．

4.冰箱：做暂时保藏菌种用.5.电子天平：一般要求具备精度达到万分之一的分析天平．

6.显微镜：观察微生物形态的必备仪器．

7.均质器：用于均质样品，有旋转刀片式和拍击式可以选择；例如旋转振荡器．

8．蒸馏水器：提供蒸馏水；根据现实情况，非必需.9．水浴锅：部分培养温度需要水浴（如大肠杆菌检验）

10.超净工作台：超净工作台作为代替无菌室的一种设备，使用简单方便，为实验的开展提供一个相对无菌的操作台．超净工作台根据风向分为水平式和垂直式．

11.摇床培养机：，制备细胞培养液时，用以摇匀接种微生物、细菌和细胞等.其它可能用到的设备：恒温水浴箱、菌落计数器、电位 pH计、高速离心机、冷冻离心机、紫外-分光光度仪等设备．

四、常规玻璃器皿

1.移液管：用于移取少量液体，常用的吸管有0.1刻度1mL及1.0刻度的10mL吸管等．

2.培养皿：为硬质玻璃双碟，常用于分离培养，盖与底大小应合适，常用规格为90mm．

3.三角烧瓶与广口瓶：多用于盛培养基及配制溶液，常用的规格有250mL、500mL、1000mL．

4.烧杯：供盛液或煮沸用，常用的规格为100mL、250mL、500mL、1000mL ．

5.量筒：用于液体测量，常用规格为100mL、250mL、1000mL ．

6.试管：用于菌种培养，有多种规格．

7.载玻片盖玻片：菌种涂片观察用．

8.微量移液管：移取微量液体，一般有1000～5000μl，100～1000μl，10～200μl，1～20μl，0.1～2μl等多种规格.其它，如试管架、毛刷、酒精灯、接种针、接种环、牛皮纸、脱脂棉等．

五、化学试剂和培养基

参照所需购买试剂和培养基原材料以及消毒液．

第三篇：食用菌实验-培养基制作

实验二

母种培养基制作

一、实验目的掌握斜面试管培养基的配制、消毒与灭菌等制作过程，为菌种转管、组织分离制作母种打下基础。

二、常用培养基配方

1．马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)

去皮马铃薯200克，葡萄糖20克，琼脂20克，水1000毫升，pH自然。2.PDA综合培养基

去皮马铃薯200克，葡萄糖20克，琼脂20克，磷酸二氢钾3.0克，硫酸镁1.5克，维生素B10.05克，水1000毫升，pH自然。

三、实验材料和用具

天平、电炉，18×180毫米试管，止水夹。纱布，棉塞，牛皮纸，皮筋，手套、菜板、刀、恒温箱，三角漏斗、支架（每组一套）。手提式高压灭菌锅。马铃薯、葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、琼脂等。

四、实验步骤与方法 1．PDA培养基的配制 2．装管、捆把 3．灭菌

锅内加适量水→ 灭菌物品放内锅→

加热 → 压力表0.05Pa 时放气 →压力表1.15Pa(121-126℃)时计时30分钟。

4.摆斜面。灭菌后将试管取出斜放在一根1厘米左右厚的木板条上，使试管内斜面的长度为试管长度的3／5。放置凝固后备用。

五、作业思考题

1．制作PDA培养基过程中，为什么要用牛皮纸将整捆的棉塞部分封盖灭菌? 2．灭菌时，加热水沸后，在锅内压力升至0.5Pa 时，为什么要打开放气阀? 3．写出试管培养基制作的工艺流程。4．消毒与灭菌是同一概念吗?为什么?

实验三

原种培养基制作

原种即二级种，就是将试管中的母种，接入菌种瓶内，等菌丝长满后形成的菌种。

一、实验目的

通过实验初步掌握原种培养基的配料、装瓶(袋)、灭菌、消毒、接种、培养等生产工艺流程。并了解原种培养基的不同配方及不同的制作方法。

二、实验材料和用具 天平，立式或卧式高压灭菌锅，菌种瓶或菌种袋(菌种瓶口径3厘米，容积750毫升)，塑料套环，塑料绳，擦布，锥形捣木。称，大盆

麦粒，麦麸，棉籽壳，不锈钢锅，石膏，碳酸钙，白糖，牛皮纸，皮筋，三、培养基配方

1．木屑米糠培养基(适用于香菇、木耳、猴头菇、杨树菇等木腐生类食用菌)：木屑(锯木屑)78千克，米糠或麦麸20千克，石膏1千克，蔗糖(俗称白糖)1千克。料水比为1：1．4～1．6，使含水量达到60%，即用手握抓材料时指缝现水而不滴水。

2．麦粒培养基(适用于平菇、草菇、猴头、金针菇等)： 麦粒200千克，蔗糖2千克，碳酸钙2千克，水500升。

3．棉籽壳培养基(适于多种食用菌)：

棉籽壳78%，麦麸10%，玉米粉10%，过磷酸钙1%，白糖l%，水料比约1:1.1-1.2。

四、实验步骤与方法 1．培养基的配制

1)木屑米糠培养基的配制：

拌料：根据计划生产原种的数量，计算出各种原料的用量，分别称取后，将不溶性辅料和主料掺拌均匀，将可溶性辅料加入水中溶解，逐渐泼入拌好的主料中，掺拌均匀，继续加水拌料。拌料时，边加水，边测含水量，以便控制水分，不至过多或不足。含水量的测定：拌好料后，用手抓一把培养料在手中紧握，手指缝中有水渗出但不下滴为适宜。料水比约为1:1.2-1.4 装瓶（袋）：将培养料装入750毫升的菌种瓶(或500毫升罐头瓶)中，边装边捣实(但不宜过紧，太紧则透气性差，菌丝生长不良)，以手按结实有弹性为宜，一直装到菌种瓶的瓶肩处。

打孔：培养料装好后，用锥形木棒从瓶中央向下打一个洞，洞深离瓶底部2～3厘米，这样一是可以增加瓶内氧气；二是有助于菌丝沿着洞穴向下蔓延；三是便于固定菌种块，不致游动而影响成活，有利于瓶下部菌丝生长良好。

擦瓶：打洞后，用湿毛巾或湿布多次将瓶口和瓶外粘附的培养料擦净，擦干，以免接种后污染

包扎：塞上棉塞，用牛皮纸将瓶口及棉塞包住，用绳扎紧。也可在瓶口上先放一层牛皮纸，再盖一层聚丙烯塑料薄膜，扎紧瓶口。2)棉籽壳培养基的配制：

棉籽壳原种培养基的配制方法同木屑培养基的相似，只是装瓶时培养料的压实要比木屑的紧，因棉籽壳颗粒较大，且能留有较多的空隙。3)麦粒培养基的配制：

浸料：将小麦粒用水浸4-8小时，煮沸20—30分钟，煮沸的过程中就加入蔗糖。最后使麦粒熟而不开花。滤去水分(滤液可制母种培养基或栽培时拌料用)，摊在通风处晾30—40分钟，使麦粒表皮不湿为宜。

装瓶：加入碳酸钙，拌匀后装瓶。装瓶时要注意边装瓶边将瓶轻轻地扣动，使瓶内培养料松紧度上下一致，装至粒面至瓶肩部。瓶口包扎同前。2．灭菌

包扎好的料瓶（袋）放入高压灭菌锅内进行灭菌。在1．5千克／平方厘米压力下，灭菌2小时即可。如用土蒸锅常压灭菌，须将水烧开后继续蒸10小时，缓慢降温后取出使用。

六、作业思考题

1．原种培养基装满瓶后，为什么要用湿毛巾或湿布多次擦洗瓶外和瓶颈? 2．原种培养基装好后，为什么要在当天及时进行灭菌? 3．原种培养基装瓶后，用锥形捣木在其中内插一个圆洞的目的是什么? 4．原种培养基装满瓶后，其瓶的上部培养料是松一些好，还是紧一些好?为什么? 5．培养料装得过松过紧都将产生什么样的结果?

第四篇：微生物实验室守则

微生物實驗室守則

1.須著長及膝蓋之實驗衣，並穿著長褲，若有長髮應予以適當束結，嚴禁穿著拖鞋或涼鞋。實驗室內嚴禁喧嘩嬉鬧、追逐、抽煙及吃食等行為。

2.非必要物品勿置於實驗室之桌面，實驗結束後，需加以清理，物品並應歸於原位。

3.實驗前後消毒桌面及手部，實驗時操作桌面應隨時保持乾淨。

4.應熟悉實驗室內所有設備，配置及正確操作方法。

5.顯微鏡使用後應清理乾淨，並清點附件是否齊備，關閉電源後再拔掉插頭，並歸定位，發現有任何異狀，即報告指導老師處理，任何配件或裝置避免任意交換或拆卸。

6.不可於點燃酒精燈時噴酒精，並隨時注意自己及他人之安全，酒精燈不用時應即熄滅。

7.實驗所用之菌體有些為致病菌，故須以無菌操作且避免用手及口的動作，如咬手指或用舌頭舔濕標籤。

8.實驗用之所有菌體或器具未經許可嚴禁攜出室外。9.接種針（環）於接菌前後務必以酒精燈滅菌。

10.含菌體之容器，應妥予加蓋，非必要時切勿任意打開。

11.實驗後待丟棄物品應妥善包裹或予殺菌處理再丟棄；固體培養基則不得倒入水槽中。

12.實驗結束後，應確實關閉所有不用之電源。

13.任何意外事件，應即報告助教及指導老師，亦應熟知其應變措施。

14.實驗操作過程中必須隨時注意自身及他人之安全，若有危及自身及他人安全之事件或違反實驗守則者，本實驗課成績一律以零分計。

微生物實驗室守則

1.須著長及膝蓋之實驗衣，並穿著長褲，若有長髮應予以適當束結，嚴禁穿著拖鞋或涼鞋。實驗室內嚴禁喧嘩嬉鬧、追逐、抽煙及吃食等行為。

2.非必要物品勿置於實驗室之桌面，實驗結束後，需加以清理，物品並應歸於原位。3.實驗前後消毒桌面及手部，實驗時操作桌面應隨時保持乾淨。

4.應熟悉實驗室內所有設備，配置及正確操作方法。

5.顯微鏡使用後應清理乾淨，並清點附件是否齊備，關閉電源後再拔掉插頭，並歸定位，發現有任何異狀，即報告指導老師處理，任何配件或裝置避免任意交換或拆卸。

6.於點燃酒精燈時噴酒精，並隨時注意自己及他人之安全，酒精燈不用時應即熄滅。

7.實驗所用之菌體有些為致病菌，故須以無菌操作且避免用手及口的動作，如咬手指或用舌頭舔濕標籤。

8.實驗用之所有菌體或器具未經許可嚴禁攜出室外。

9.接種針（環）於接菌前後務必以酒精燈滅菌。

10.含菌體之容器，應妥予加蓋，非必要時切勿任意打開。

11.實驗後待丟棄物品應妥善包裹或予殺菌處理再丟棄；固體培養基則不得倒入水槽中。

12.實驗結束後，應確實關閉所有不用之電源。13.任何意外事件，應即報告助教及指導老師，亦應熟知其應變措施。

14.實驗操作過程中必須隨時注意自身及他人之安全，若有危及自身及他人安全之事件或違反實驗守則者，本實驗課成績一律以零分計。

第五篇：微生物实验室规则

微生物实验室规则

1、进实验室应穿工作服，离室时脱去放在指定处所，工作服应定期消毒洗涤。

2、非必要物品勿带入实验室。

3、实验室内应保持肃静；不得高声谈笑；不准吸烟和进食；无菌室在工作前、工作后均须全面清扫、消毒。

4、如带有细菌的增菌液污染桌面或地面，应立即用消毒溶液倾覆其上，半小时后方可抹去；如有污染物污染工作服，应立即将工作服脱去以高压蒸汽法灭菌。

5、如有污染物污染手部，应立即将手浸泡消毒液内，经5分钟后，再用肥皂和水刷洗干净。如有污染物吸入口内，应立即吐出，并以大量清水漱口，根据需要亦可服用有关药物以防发生感染染。

6、接种环用后应立即在酒精灯火焰上烧灼灭菌；沾菌的吸管、玻片等用后应分别浸泡在盛有消毒液的玻璃缸内，其他已污染的试管、平皿等亦必须置于专用容器内，经灭菌后再进行洗涤。

7、用于消毒的酒精应放在加盖搪瓷缸内，如不慎着火，应立即用搪瓷盖盖上与空气隔绝即可灭掉火焰。

8、工作完毕时工作台用沾有消毒液的抹布擦拭干净，地面应用墩布擦拭干净。

9、检验人员应具备高度责任感，以严谨的科学态度从事检验工作。