MEF小鼠胚胎成纤维细胞知识总结（精选）

第一篇：MEF小鼠胚胎成纤维细胞知识总结（精选）

MEF小鼠胚胎成纤维细胞知识总结

2008-06-19 00:00 来源：丁香园

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知识总结

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1517 关键词： MEF小鼠 胚胎成纤维细胞

小鼠胚胎成纤维细胞的富集

1、给13-14天的孕鼠注射大约0.5ml阿佛丁。当鼠麻醉后，实施断颈法处死小鼠。

2、用70％乙醇擦拭腹部，把皮肤向后拉，暴露出腹膜。用消毒过的工具，剪开腹壁以暴露出子宫角。将子宫角移到10cm的皿里。用10ml不含钙镁离子的PBS洗三遍。

3、用剪刀剪开每一测的胚囊,并将胚胎移到培养皿中。

4、用两副钟表镊子将胎盘和膜与胚胎分离开，分离后切除内脏（所有深色的东西）。将胚胎转移到(有盖)培养皿中，用10ml不含钙镁离子的PBS洗三遍。

5、用带有弯钩的眼科剪将组织剪碎，当你剪的很累以致于不能再剪的时候，加入2ml胰蛋白酶/EDTA继续剪。再加入另外5ml胰蛋白酶/EDTA，并在37℃孵育大约20分钟。此时，返回至第一步，对下一只鼠进行操作。

6、执行1－4步，到将胚胎置于胰蛋白酶/EDTA中这一步。

7、吹打胰蛋白酶/EDTA中的胚胎，直到有很少的组织物残留。将皿放回培养箱再孵育10分钟。

8、用20ml培养基以终止胰蛋白酶/EDTA的消化，将皿中的物质转移至50ml锥形管中。

9、混匀管内的物质，加入到含有20ml培养基的T75培养瓶中。每个培养瓶中装大约3个胚胎。

10、将这些培养瓶放在培养箱中37℃培养过夜。

11、将胚胎置于PBS中，并重复第5步。

12、第二天更换培养基，以去除碎片和中毒的细胞及其分泌的物质。

13、当培养瓶中的细胞长到80-90%汇合时并仍处于指数生长期时，是冻存细胞的最佳时期。一般说来，这发生在准备胚胎的第二天。这可能或早或晚发生，所以请注意观察你的培养瓶。

注释：

我们已用CF－1品系的鼠制备了成纤维细胞。

培养基成分：

88％ DMEM 10％ FBS 1％ NEAA 1% 双抗

对于新建立的细胞系，要对样本进行支原体检测。

小鼠胚胎成纤维细胞的消化/传代

1、移去MEF培养基

2、用5ml不含钙镁离子的PBS洗涤细胞（以去除胰蛋白酶的抑制物）。

3、每个培养瓶里加入1.5ml的胰蛋白酶/EDTA（0.05%的胰蛋白酶），消化5min。

4、为了使细胞分散开，轻轻吹打细胞。

5、每加入1ml的胰蛋白酶/EDTA，加入至少1ml的MEF培养基以终止胰蛋白酶的消化。

6、将细胞悬液加入到15ml的锥形管中，吹打几次，使细胞分散为单个的。

7、在新的T75培养瓶中加入10mlMEF培养基。

8、将细胞悬液分装到新的T75培养瓶中，放在37℃培养箱中进行培养。

注释：

MEF培养基成分：

89% DMEM(Gibco # 12100-046)10% FBS(Gibco # 16000-044)1% NEAA(Gibco # 11140-050)MEF每传一代就会生长得更慢些。你第一次传代的比例可以是1:5，但是最后一次的传代（第4代或第5代）比例应该是1:2。

小鼠胚胎成纤维细胞的冻存

重悬培养基：

80% DMEM 20% FBS 1% NEAA 冻存培养基：

60％ DMEM 30％ FBS 20％ DMSO

1、用不含钙镁离子的PBS洗一次细胞。

2、加入胰蛋白酶/EDTA37℃消化大约5min。

3、将细胞吹打下来。

4、加入与胰蛋白酶/EDTA等体积的培养基以终止胰蛋白酶的消化。

5、吹散大块组织。如果还有大块组织存在，可将悬液加入到50ml的管中使其沉淀。

6、取上清液，将其分装到锥形管中，1000rpm离心5min。

7、每个冻存瓶中加入0.5ml（冻存液的一半体积）的重悬培养基重悬细胞。

8、逐滴加入等体积的（0.5ml/瓶）冻存培养基，混匀。现在DMSO的浓度是10％。

9、每个冻存瓶中加入1ml的细胞。

10、迅速将细胞转移到冻存的容器中，-70℃冻存过夜。（细胞不能长时间放置在室温而含有DMSO的情况下）

11、第二天将细胞放于液氮中长期保存。注释：

提前标注好冻存细胞的以下信息：

细胞系名称

传代的代数

冻存细胞的数目

日期

Initials 注明冻存/解冻形式

小鼠胚胎成纤维细胞的解冻/复苏

1、将冻存瓶从液氮中取出。

2、放在37℃水浴中快速解冻，being careful not to immerse the vial above the level of the cap.3、当仅还有一点冰晶残留时，用95％的乙醇消毒冻存瓶的外面，并将其置于hood中。（为什么用95％的乙醇消毒？hood是什么？）

4、轻轻地上下翻转细胞一次，将它们放入15ml锥形管中。

5、想管中逐滴加入10ml培养基。这一步操作不能少于两分钟。做快了对细胞将是一种打击，你将得到比其他方法具有更低生活能力的细胞。6、1000rpm离心5min。

7、将细胞重悬于10ml培养基中，然后放入T75培养瓶中。

8、放入37℃培养箱。

9、注明冻存/解冻的形式，以更新数据。

1、关于如何确底胚胎期12.5d~13d的小鼠？希望大家能够介绍一下自己所采用的方法，集思广益。我所采用的方法是选择同一天出生的三对小鼠，到成熟（8~10 w）后，分三周合笼，（每周合笼一对），然后待最早合笼的小鼠产崽后，再取另两个雌鼠的胚胎。不知道这样行不行，也没注意别人是怎样做的。另外问了几个外科的同学也没找到可以查出小鼠孕期的仪器。

2、关于提取MEF的比较好的protocol

3、关于MEF转染时起耐受性如何？这个我以后主要做这些，可能会积累一定的经验，但现在肯定有各位朋友已经从事或正在从事着方面的工作，希望能够分享经验。

4、关于其分泌细胞因子能力？我从一些文献上发现，MEF除了作为胚胎干细胞的饲养层以外，也是研究天然免疫的重要材料，如日本东京大学的AKIRA的实验室，大板大学的takashi fujita实验室就发了相当多的文章。从这些文献可以看出，MEF分泌细胞因子能力远远强于HEK293等工程细胞，相当于肝实质细胞，略低于几种免疫细胞。但较免疫细胞，我认为有其不可替代的优势：

（1）其并不是主要发挥免疫功能的细胞，只有在受到外界刺激时才会应答，分泌细胞因子，免疫细胞在不受刺激时也会为了维持稳态而不断产生细胞因子，即使有严格的control 组，但专门的免疫细胞即使是同一种细胞（DC，NK，T）但不同的细胞分泌细胞因子的能力也是参差不齐的。会造成control 相对不一致。

（2）另一方面，由于这些免疫细胞大部分都是悬浮的，不太容易转染，结果阳性率也会较低。（3）现在的分离MEF的方法很便宜，不复杂，而分离纯的免疫细胞（如NK，DC），需要MACS，FACS等，这对目前国内的实验室经费相对紧张的情况来说，不是很划算。因此除非是需要研究某一种免疫细胞，如果是为了研究天然免疫或者adaptive immune过程中某中基因，或者蛋白，或者某一信号通路等的作用，MEF 细胞不失为一种选择。

网友crepi 的观点：

1、我每次取的是16~18天的胚鼠 个人觉得无碍 我倒更喜欢大一点的胚胎 更好操作一点

2、我取的是皮肤 然后胰酶4度消化过夜 第二天终止消化 撕掉表皮 留下真皮 减碎 用的100目滤网过滤 这个胰酶消化的时间是个关键 时间长了 细胞容易死 时间少了，表皮不容易揭下来 我有此就是这样 消化了15个小时 结果接种下来的细胞不能贴壁 全死了

3、我用的培养液是DMEM+10%小牛血清 培养液也是关键 因为虽然都是成纤维细胞比较泼辣 但总归是原代 可能还是比较娇嫩 我前几天就是这样 后来发现是培养液出的问题 测的PH值都8.3了 细胞不死才怪 毕竟细胞耐酸不耐碱

4、原代培养的最大天敌还是污染

网友baichangming的观点：

MEF对培养基和血清的要求不高，一般的都行我用过高糖DMEM和D/F-12，生长情况都行，而且看不出什么差别。血清也是以前用几百块钱的国产标准胎牛血清也长得也不错，因为要养干细胞，所以现在换成进口Gibco胎牛的血清（两千多/500ml），感觉细胞的状态确实好了一些。我的血清浓度一般是16.66666%。

网友北羽迦楼的观点： 细胞没别的，就是很容易老化，一般我都是1:5~1:3传代，3代之后细胞就出现衰老了，我感觉年轻增殖能力强的MEF应该有着清晰的细胞轮廓，细胞立体效果不错，在相差显微镜下，细胞核清晰，细胞纤长，正在分裂或是刚刚分裂的细胞没有伸出伪足，但是同样有着更加明亮的轮廓，与细胞边缘相比，细胞呈深色（我觉得是透光效果不好）。一般在4×下观察最能看出细胞的状态，此时能看到细胞呈梭形或是三角形。细胞铺展很厉害，细胞的透光效果增加，说明开始衰老。衰老的MEF最好不要做feeder,但是也不是完全不好。但是要是做转染或是感染的话，出现衰老的MEF就不行了。所以一般就是3代以内做。

我们用的就是WiCell的protocal养，和前面那位战友发的差不多。只是我们用1mg/ml Collengase IV消化40min，用什么酶不重要，我觉得最重要的就是种盘后的换液。原代2小时不管还有多少米贴都不要，传代复苏后一小时就换。消化的时候也是要舍得，0.05%Trypsin-EDTA(GIBCO)，5min消化不下来的也统统不要。因为健康的MEF就是易消化易贴壁。老化以及混杂的其他细胞（神经、上皮）就没那么快了。

附带一句，易消化易贴壁是fibroblast的共性。

第二篇：小鼠胚胎成纤维细胞的原代培养

小鼠胚胎成纤维细胞的原代培养

一、实验材料 1．主要仪器设备

倒置显微镜、培养箱、离心机、25ml玻璃培养瓶、吸管；10ml尖底离心管、Ф80mm玻璃培养皿、青霉素小瓶、小鼠用解剖器械（包括眼科剪和眼科镊）2．试剂

RPMI 1640培养液、平衡缓冲生理盐水(PBS, pH7.2-7.4)、0.25%胰蛋白酶 3．实验动物

孕14～15天(E14～16)昆白母鼠，领自福建医科大学实验动物中心。

二、实验步骤

1.获取小鼠胚胎

(1)取孕14～15天的母鼠，断颈处死，置于蜡盘上

(2)75％酒精消毒后，用剪刀和镊子剪开下腹皮肤，用两把弯头止血钳夹住切口处的皮肤向头尾两侧牵拉即剥皮，用眼科弯镊和眼科弯剪打开腹腔，暴露出子宫。(3)用眼科弯镊夹住一侧子宫，分离子宫系膜，眼科弯剪剪断子宫角和子宫颈，将整个子宫分离下来（注意勿使子宫滑落到腹腔外，避免污染）。将子宫置于无菌滤纸上去除血迹。

(4)在超净台内将子宫移入预先盛有PBS的培养皿中，洗涤数次。

(5)将子宫移入另一盛有PBS的培养皿中，用眼科弯剪沿子宫系膜打开子宫，取出带有胎膜的胎鼠，并用两把眼科镊子剔除胎膜，取出胎鼠（一般有12只）。

(6)将胎鼠移入另一盛有PBS的培养皿中，用眼科剪和眼科镊去除胎鼠的头、四肢和内脏，得鼠胚躯干。

(7)将鼠胚躯干移至另一盛有PBS的培养皿中，用PBS洗涤两次至无肉眼可见的血色。

2.小鼠胚胎成纤维细胞的原代培养（组织块半消化法）

(1)将干净的鼠胚躯干移至青霉素小瓶内（每6个鼠胚躯干装1瓶），用眼科直剪剪成约1 mm3以下的碎块。

(2)用5ml的刻度吸管每瓶加入约3ml的PBS，混匀后连同鼠胚碎块一起移至一尖底离心管中。

(3)室温下静置5min，用刻度吸管吸去上清液，留下鼠胚组织碎块。

(4)向装有鼠胚碎块的离心管内加入1ml 0.25%胰蛋白酶消化液，轻轻吹吸30秒（可见组织块变得较为粘稠）。

(5)加入1 ml 1640培养液终止消化，室温下静置5min，吸去上清液，留下鼠胚组织碎块沉淀。

(6)每个离心管内加入5ml 1640培养液悬浮鼠胚组织块，并接种到25ml的螺口的培养瓶中（接种时应用滴管将组织块混匀）。(7)做好标记（如培养日期，细胞名称，编号），将装有鼠胚组织碎块的培养瓶放入37℃，5％CO2，100％相对湿度的培养箱中培养。

(8)培养的头两天不要晃动培养瓶，第三天可以观察，可见组织碎块附着于培养瓶底，周围细胞呈放射状生长，此时有多种细胞类型，有的是呈梭形的成纤维细胞，有的是呈圆形的上皮细胞。

第三篇：小鼠MCAO总结

小鼠MCAO模型

一、实验器材：

1.手术器械：眼科剪

1、显微剪

1、钩镊

1、直镊

1、显微镊

2、止血钳

1、持针器

1、缝合线（2-0/5-0）、缝合针、麻醉剂：10%水合氯醛（350mg/kg）2.栓线：0.18mm（20~25g）、0.20mm(25~30g)；在栓线10mm的位置用黑色记号笔标记；75%酒精清洁后置1: 2500单位肝素化生理盐水中备用。

3.其他用品：酒精棉球、75%酒精、生理盐水、注射器（1ml、2ml）、黑色记号笔、固定鼠用粗线绳、鼠板

二、步骤：Zea Longa 线栓法

1.麻醉：10％水合氯醛腹腔注射（350mg/kg）2.术前准备：仰卧位固定大鼠，备皮消毒 3.分离血管及挂线：

1)自胸骨柄到下颌骨间取长约1cm 正中切口。见下颌下腺，将其分离至两侧；

2)见右侧肩胛舌骨肌、胸骨舌骨肌、二腹肌形成的三角区，镜下分离此三角区内，暴露右侧颈总动脉（CCA）、颈外动脉（ECA）、颈内动脉（ICA）； 3)首先分离CCA于其上挂线1；

4)随后向头侧分离ECA血管及其分支，于ECA上头尾侧分别挂线2、3；

5)然后清除CCA分叉部脂肪，观察ECA分支与ICA关系，分离ICA及ECA分支，于其上挂线4；

6)注意操作轻柔避免迷走神经、舌咽神经、气管损伤，避免过度牵拉血管使其严重移位或断裂。

5.结扎：死结：线1、2；活结：线4；不系结：线3 6.剪口插入：

1)将鼠台逆时针旋转90°，在ECA上距分叉1~1.5mm用显微剪剪一切口； 2)将标记好的线栓由此切口插入CCA 中；

3)将鼠台转回，将线栓从CCA拔出至分叉稍尾侧，右手将线栓转向滑入ICA，右手拉开线4活结，后继续插入ICA，待有阻力时再进入少许，深度1cm+，到达大脑中动脉与前交通之间；

4)顺利插入后将丝线4扎紧，抽出线3减去多余线头。6.缝皮

7.术后：小鼠俯卧位，头略抬高，至于温湿度适宜环境。

三、注意事项：

1.雌性鼠对于牵拉等操作的反应更强烈，故建议选择雄性大鼠作为实验对象。

2.大鼠解剖学变异：一般而言，Fisher-344大鼠MCA解剖变异较小，闭塞后形成的梗死体积一致性好；Wistar-Kyoto 大鼠变异相对最大； 而Sprague-Dawley大鼠介于两者之间。3.麻醉：10%水合氯醛腹腔注射（30ml/kg），一般可持续1~1.5h。如按标准体重计算的麻醉剂量效果欠佳，可使用总量的10%进行追加。需注意反复多次或过量追加易造成动物死亡，或导致清醒推迟而影响再灌注前评分，从而使再灌注时间不能统一界定在2h。水合氯醛可使动物呼吸频率下降50%左右,但一般不会导致动物窒息而死亡。术中严密观察动物呼吸频率、深度及有无痰鸣音等。

4.分离气管前肌肉时注意保护好甲状腺和甲状旁腺。甲状腺呈鲜红色，紧密贴在气管前壁上，甲状旁腺位于甲状腺外上方，颜色略淡。血管分离要到位，使用电凝器可明显减少小血管的出血，从而保证手术野清晰，尤其是肌肉内部的血管和 ECA 的一些细小分

支，未明确时不可随意离断。结扎血管时要注意力度和方向，由于血管被膜被分离后血管表面相当光滑，结扎不牢可能导致难以控制的出血；术中还要注意保护与血管紧密相依的神经，注意观察神经的颜色、反光性和轻触时的感觉，切勿损伤或离断。牵拉迷走神经时可见动物呼吸明显减慢甚至血液呈深紫色，出现肢体末端紫绀。在无法给予辅助通气时，应暂停操作。一般来说，动物呼吸可恢复到麻醉后的平稳状态，血液颜色也可恢复到正常，这时再继续手术较为安全。

5.关于是否结扎 PPA 文献报道尚不一致。可沿ICA一直分离至看到其入颅分支与PPA分叉处，观察线栓走行状况，若顺利将长度约1cm的线栓插入，则可固定线栓而无需对 PPA进行操作； 如只进入5mm左右即遇到明显阻力，则线栓进入PPA的可能性很大，此时可将线栓撤离至ECA/ICA处，提起PPA，以帮助线栓沿ICA进入颅内而最终阻塞MCA。

6.Koizumi等1986年首次报道不开颅经CCA插入尼龙线栓致MCA闭塞；之后，Longa等进行了改良，将栓线从ECA插入，再灌注时将栓线抽回ECA内，通过CCA实现再灌注。Koizumi使用的丝线末段均匀包被硅胶，直径增加近30~40%，插入后不仅可伸入大脑前动脉ACA）近端，肯定阻塞ACA及前交通动脉，而且阻塞MCA及后交通动脉开口处，彻底阻塞MCA及其所有侧枝供应血管，形成供应区域完全缺血，因此局部梗死面积大，均匀一致，各动物间差异较小。Longa使用的4-0尼龙线末端球形扩大，但并非直接闭塞MCA，而是依靠结扎同侧ICA和其球形扩大的末端伸入ACA腔内、阻断经前交通动脉来自对侧ACA的血流形成局灶性脑缺血，但不能阻断来自后交动脉的侧枝供应，且丝线末端伸入ACA腔内位置不同，所起作用差异很大，因此形成的梗死面积很小，各动物之间差异较大。宋红松等建议采用Koizumi方法。丁香园：

1.注意尽量不要损伤在颈内颈外分叉下的交感神经节。2.栓线进入后颈内动脉后即可逐渐插入了，有时候很顺利一插到底，但有时候在中间就怎么也进不去了，这是因为在血管入颅穿过颅骨时有一个狭窄或者角度。因此，碰上这种明显阻力时，一定不能盲目向前使力插，越插栓线前端变形越进不去且容易损伤血管。这时候正确的作法是往外抽出较多栓线，也许会有一定的动脉血流出，不必慌，只要顺着血管走行调整一下进线角度轻柔的使劲，一般都能进去，反复试几次还不行最好换根栓线，很可能前端也经变形角度变了！颈内动脉的走向为内上方,可以用眼科镊夹住鱼线插,但进去后要注意,别太用力,要不血管就要破了

3.栓线不能在血管里反复进退，否则及容易造成蛛网膜下腔出血，而且很容易误解为模型成功，因为这时的神经功能改变也很明显，但并不是由于栓塞引起的

4.大鼠仰卧时，ICA从CCA分出后下行（向背侧）约5mm又分为两支A，即走向乳突泡（Mastoid bulla）的 翼腭A和进入颅内的ICA的延伸部分。因为翼腭A的走向几乎和分

支前的ICA走向相同，而ICA的延伸部分则是改向头侧走行，所以插线时会很自然的进入翼腭A。进线时，用镊子将ICA轻轻往头侧推一下，使ICA和其延长的分支成一直线，同时顺势插线，可很容易的进入颅内。或使栓线有一定程度的弯曲，且只要保证栓线向屋顶方向弯曲，一般都能将线插如颅内，决不会进入翼腭A。

5.注意手的感觉，轻缓推进，直至感觉到阻力为

止（当遇到阻力后，再插线会见到线弯曲）。可能有人会说，把血管插破了也未感觉到阻力或线遇阻后的弯曲。一个原因是线太硬，另一主要原因是当栓线从血管切口插入后为防止血液从此处流出，需要结扎一条细线，这条线结扎的松紧程度很关键，应在不流血的情况下尽可能的松，这样你会发现进线时很轻松，一旦遇到阻力，就会感觉到。后者至关重要，请体会。

6.栓线一旦进入ACA，就要把上面提到的那根细线适度扎紧（“适度”很重要，会影响到再灌流时大鼠的生死存亡），此时的关键是动作轻柔，不要使ICA有任何的牵拉，否则栓线会脱出ACA，可能会造成缺血失败。血管外的栓线不要留得过长，更不要缝在皮外，大鼠醒来后会自己拔出。

7.如果你用的是中长效麻醉剂，插线成功后，固定丝线，然后让其俯卧位，而且稍稍抬高其颈部，才能确保模型成功。8.术后一定要注意保暖。

9.插入线拴要轻柔熟练，速度尽可能快，以避免时间长了血管内血栓形成。

10.手术后评分的主观因素很大，有用5分制和11分制的，我个人认为用5分制比较准些。11.大鼠大脑中动脉永久性闭塞性脑缺血模型，梗死体积出现的最小时间点可能为2h，体积随时间进行性增大，至12h基本趋于稳定

12.整个试验是很费动物的，存在15-30％的淘汰率（如果你做的好），但注意严格控制自己淘汰的动物（纪录具体情况）。

13.除了刚才说的蛛网膜下腔出血外，还有一些老鼠肺出血明显，整个肺暗红，我也想不出原因，不知道是不是医学临床所说的脑肺综合症.14.术后处理：由于术后动物尚未清醒,因此护理也很重要。但为保证栓线成功,达到预期的阻塞时间,防止栓线脱落暂时把动物留在手术台上,保证动物不会因挣扎而把栓线过早脱落,但仍需监测体温,并注意保暖。再灌注后动物可放入笼中。另外笼中应保持干燥,没有积水及粉尘,防止动物误吸而窒息。我们在实验中发现一些模型症状不典型甚至没有症状,都是由于动物苏醒后极力挣扎使栓线过早脱落所致。手术后大鼠存活期可以满足通常的实验需求,一般来讲,随着栓塞和再灌注损伤时间的延长,死亡率会上升。大鼠在术后24～48小时最容易死亡,这种死亡是严重脑缺血损伤造成的,较直接的因素是脑水肿。用线栓制作持续性局灶性脑缺血模型时,术后要肌注庆大霉素预防感染;如果动物模型要生存1周以上,必要肌注速尿,防止因脑水肿动物在短期内死亡。术后饮水中加入葡萄糖,保证动物术后有充足的能量生存到实验要求的时间。

舍去标准：

⑴栓线插入深度不足18 mm,且无明显神经功能缺损表现或症状很轻的大鼠 ⑵ 蛛网膜下腔出血、MCA起始部或其附近的willis环动脉有凝血块的大鼠，因为这是出血性脑损伤或永久性脑缺血损伤，而非MCAO/Reperfusion损伤。3）手术时出血较多，症状很重的动物。死亡原因分析：

首先要找出死亡原因，解剖死亡大鼠的脑，先看是否有蛛网膜下腔出血，如有出血，表明死因是插线太深，以后注意插线深度；如无出血，则还要再看是否有严重的半球水肿，如水肿严重，则表明死因是脑缺血时间太重，需要缩短缺血时间；如既无出血，又无明显的脑水肿，那就要注意动物状态或生活环境是否太差。

第四篇：小鼠游泳实验及解剖总结

小鼠游泳实验及解剖总结

1测试小鼠的抗疲劳能力~有时候还需要测定其恢复能力~但实验周期长，故不作要求~

2首先抓取小鼠，在天平上放一个烧杯，去零，称重，记录小鼠体重，为m g 称保险丝，保险丝体重为小鼠体重百分之十~ Ps 方法：要用到刻度尺，首先称一定长度的保险丝的重量，如记为a cm，重量为n g，则我们要量取的保险丝长度为x=0.1m*a/n

3用细绳系上保险丝（要注意细绳的长度要适当），怎么系呢，系在尾巴根部，用一烧杯扣住小鼠，烧杯开口处有一小嘴，所以让小鼠的尾巴露出来即可~2个人操作，一个人用手按住烧杯，一手捏住小鼠尾巴中部，一人则将系有重物的细绳系在小鼠尾巴中部~

4一人将小鼠放入装有温水的超大量筒，一人开始将小鼠放入烧杯的同时，一人开始计时，等到小鼠下沉10秒，则停止计时。

5记录时间即可啦~ 补充：扔进大量筒之前可以先将小鼠打湿，为什么呢？因为小鼠的毛比较蓬松，里面充了空气，所以当把小鼠放进大量筒后，可能对实验有影响~有时甚至把小鼠毛给刮掉~ 比较严格的实验还要求小鼠要空腹，不然小鼠肚子里有粪便，对小鼠体重也影响~

小鼠解剖

解剖方法类似于蟾蜍解剖~用大头针固定~辨别雌雄，雌性有三孔：尿道，阴道，肛门。雄性少了阴道。对于雄性，有时候可以看到睾丸在外面，有时候在肚子里面~不同小鼠情况可能不同

观察的有心脏，肺部，食道，味，盲肠，颌下腺，舌下腺，腮腺，淋巴，胰脏，脾脏，输卵管，子宫，卵巢等等 颌下腺（2片）深红色，前段一块覆盖着半透明的舌下腺，因为半透明且覆盖在颌下腺上，所以也呈现深红色，所以可以将舌下腺那一片掀开，再放回去，可能比较容易观察，有的小鼠可能淋巴发育比较成熟，会覆盖在舌下腺上，注意区别。

盲肠：没有路的长，很容易辨别的吧。

对于雌性，要分清子宫（类似Y形）输卵管，卵巢的相对位置。

第五篇：知识总结

初中数学知识点总结：平面直角坐标系 初中数学知识点总结：概率的简单应用 初中数学知识点总结：数据的代表 初中数学知识点总结：统计表和统计图 初中数学知识点总结：坐标方法的简单应 初中数学知识点总结：解直角三角形 初中数学知识点总结：锐角三角函数 初中数学知识点总结：相似三角形 初中数学知识点总结：图形的相似 初中数学知识点总结：图形的平移与旋转 初中数学知识点总结：轴对称与中心对称 初中数学知识点总结：投影 初中数学知识点总结：视图 初中数学知识点总结：利用基本作图作三 初中数学知识点总结：掌握五种基本作图 初中数学知识点总结：梯形 初中数学知识点总结：特殊的平行四边形 初中数学知识点总结：平行四边形 初中数学知识点总结：多边形 初中数学知识点总结：勾股定理及其逆定 初中数学知识点总结：全等三角形 初中数学知识点总结：与三角形有关的线 初中数学知识点总结：简单事件的概率 初中数学知识点总结：数据的波动与分布 初中数学知识点总结：推理与证明 初中数学知识点总结：命题