病毒和病毒成份的提纯剖析

第一篇：病毒和病毒成份的提纯剖析

第十四章 病毒和病毒成份的提纯

一、病毒的提纯(一)沉淀法(二)层析法

(三)两相溶剂间分配系数法(四)红细胞吸附法(五)电泳法(六)超速离心法(七)超滤法

二、病毒蛋白亚单位的分离

三、病毒脂质的抽提

四、病毒糖类的抽提

一、病毒的提纯

所谓病毒提纯,就是应用各种物理、化学方法，以不使病毒受损伤和失活为前提，去除宿主细胞组分等非病毒杂质，提取出高纯度浓缩的病毒样品。病毒提纯是病毒学研究的重要前提，病毒微细形态结构的研究、病毒抗原蛋白的分离提纯、病毒化学成分及其遗传物质——DNA或RNA的详细研究都需要高纯度的病毒样品。

病毒纯度只是一个相对的概念，很难有绝对的标准，通常以下几点可以作为判定标准。

1.物理均一性

测定病毒样品的物理均一性,是证明其纯度的常用方法,包括电镜检查、病毒粒子沉降系数和扩散常数及其在凝胶电泳、等电聚焦中的迁移率等。

2.病毒滴度与蛋白含量的比例

测定病毒材料的感染力或其血清学反应滴度与其蛋白含量的比例，也是一种通常采用的纯度测定方法。病毒滴度对蛋白含量的比例越高,说明病毒的纯度越高。

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3.免疫学反应

免疫反应单一而无非特异反应，则说明病毒材料比较纯净。

4.结晶形成

病毒粒子在十分纯净的情况下，经常可以形成结晶，但少数混有杂质的病毒样品亦可形成结晶，所以这也只是一个相对标准。

病毒提纯的主要依据和条件有:(1)病毒只在活的细胞内寄生、复制和增殖, 要在病毒不失活的前提下，使之从细胞中释放出来，去除细胞成份。有些病毒如痘病毒、正粘病毒、副粘病毒、披膜病毒,病毒粒子被释放到细胞外，可以从培养液或尿囊液中提纯； 而另一些病毒如腺病毒、乳多空病毒、小DNA病毒，在毒粒成熟后只有少数病毒释放到细胞外，大量提纯时必须首先裂解细胞，使病毒大量释放。实验室常用冻融、研磨、高速捣碎、超声波处理或高压冲击、中性去污剂裂解、蛋白酶解等物理和化学的方法。通过这些方法处理获得的粗制的病毒悬液，其中常含有大量的细胞碎片，一个有效的方法是以2000～ 6000r/min离心30～40分钟，可除去90％以上的细胞碎片和杂质。

(2)病毒粒子实际上是大的蛋白颗粒，可以应用提纯蛋白质的一些技术方法。(3)对大小、形状和密度高度一致的病毒粒子,可以采用分级分离的技术。当然不同的病毒，其生长特性及理化学性质不同，因此提纯方法也不尽一致。

(一)沉淀法

主要是从稀的悬浮液中浓缩病毒，有中性盐沉淀法、聚乙二醇(PEG)沉淀法、有机溶剂沉淀法、等电点沉淀法、皂土法和鱼精蛋白沉淀法等。

1.中性盐沉淀法

病毒一般在45%以上饱和度的硫酸铵溶液中沉淀，且保持其感染性。在含有病毒的组织培养液中加入等体积的饱和硫酸铵，可以很容易地沉淀某些病毒如狂犬病毒、鸡新城疫病毒等。

2.聚乙二醇沉淀法

聚乙二醇(PEG)为水溶性非离子型聚合物，具有各种不同的分子量，用于病毒沉的主要是分子量为2000～6000的PEG。将PEG配成50%左右的溶液，或直接将固体PEG加于

235 毒悬液中, 使其达到所需浓度,通常在4℃搅拌过夜，然后离心使病毒沉淀。Tanncock(1985年)成功地用PEG浓缩了禽脑脊髓炎病毒。

3.有机溶剂沉淀法

甲醇、氯仿、正丁醇、氟碳化合物等都可用于提纯病毒，但乙醚、氯仿等脂溶剂对于具有脂质囊膜的病毒具有破坏和灭活作用，故不适于这类病毒的浓缩提纯。

4.等电点沉淀法

病毒粒子在等电点时，所携带的正电荷与负电荷相互中和，因而失去相互排斥的作用而发生沉淀。多数病毒的等电点在pH4.5～5.5之间，因此在pH3～6范围内均可沉淀，由于一部分细胞成份在等电点时亦发生沉淀，此法效果不太理想，但从感染的组织培养液中浓缩病毒，可以获得较好结果。应用酸性范围的等电点沉淀或分级沉淀病毒时，必须注意pH对病毒活性的影响及病毒粒子电荷与组织蛋白电荷的差异。

5.皂土法

Girin(1989年)应用皂土在酸性条件下(pH4～4.5)吸附轮状病毒SA-11，再在碱性条件下（pH 8.5），又使其洗脱下来,从而达到纯化目的。

6.鱼精蛋白沉淀法

鱼精蛋白为碱性蛋白，具有携带其它蛋白质共沉淀的作用，能和直径大于50nm的病毒共同沉淀而不影响病毒的感染力。当向这种沉淀物加入1mol/L NaCl时,病毒又重新释放到悬液中，而鱼精蛋白仍然沉淀。直径小于50nm的小型病毒则不与鱼精蛋白共同沉淀。因此，可利用鱼精蛋白去除病毒材料中直径大于50nm的异种蛋白质。

(二)层析法

病毒粒子表面携带特定的电荷群，因此病毒对离子交换树脂及类似的其它吸附剂具有亲和性。利用吸附剂的层析法分为两种，一种是正吸附法，即依据病毒粒子表面所携带的电荷进行特异性吸附，然后用适当浓度的离子溶液将病毒粒子解离回收；另一种是负吸附法，即只吸附组织或宿主细胞成份等非病毒蛋白，而让病毒粒子通过。收集滤液后经差速离心沉淀法回收病毒。由于各种病毒的大小和表面结构等理化性质不同，因此对吸附剂的亲和性也有显著的差异。

236 1.萄聚糖柱层析法

将初步浓缩的材料，通过葡聚糖G-150或G-200柱层析，然后用0.02～0.15mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.6)洗脱，分部收集，测定280nm波长处的OD值，将含病毒的各部分相混合，再浓缩，透析之后，即可得到比较纯净的病毒，Nagano(1989年)用Sephacryls-1000 柱层析纯化了鸡传染性支气管炎病毒。

2.凝胶层析法

①磷酸钙凝胶:这是病毒吸附层析法中较为常用的凝胶，由0.5mol/L CaCl2和0.5mol/L Na2HPO4溶液混合制备凝胶状沉淀物。在中性条件下生成的凝胶称为“brushite”，在碱性条件下生成的凝胶称为羟基磷灰石(hydroxypatite)。两者均用0.001mol/L磷酸盐缓冲液悬浮，置于4℃4～5天，使它充分沉淀后应用。

②氢氧化锌凝胶:是由7mol/L氨水与0.1mol/L醋酸锌溶液滴加混合(pH8.5)而制备的，在制备后数小时内较稳定，可作为吸附剂。Newton和Beris等将水泡性口炎病毒悬液与氢氧化锌凝胶混合，使其形成复合体后沉淀，然后用0.08mol/L EDTA(pH8.5)解离病毒，获得较好的回收量。

③焦磷酸镁凝胶:是由0.1mol/L焦磷酸钠和0.1mol/L mol/MgCl2，以2：10(体积)比例在室温中缓慢滴加混合而获得的较稳定的焦磷酸镁凝胶。西村等将牛痘病毒悬液同此凝胶混合，使病毒吸附于凝胶，然后用0.1mol/L盐水洗2次，最后用0.3mol/L枸橼酸钠溶液解离病毒，将病毒较好地回收于水相中。

3.离子交换纤维素柱层析法

离子交换层析适于分离几乎所有带电荷的分子。通常有阴离子交换剂和阳离子交换剂两种。

某些病毒可以被离子交换剂经离子键作用而吸附，通过改变平衡液的离子强度, 使其再洗脱下来而达到纯化目的。腺病毒和口蹄疫病毒被DEAE纤维素吸附，可分别再用0.5mol/L和0.15mol/L NaCl溶液洗脱下来，从而得以纯化。

4.亲和层析法

亲和层析是一种特殊的吸附层析,基质与待分离物具有特异的生物亲和力。通常是将特异的抗体经共价偶联作用结合在配基上组成一种不溶性配基。当相应的抗原物质通过固定配基装成的层析柱时，即被吸附。随后再改变实验条件，将其洗脱下来，达到纯化的目的。该法是于80年代初期开始用于病毒的分离提纯，不仅纯度好，敏感，而且回收率高。

237 Njayou(1991年)应用此法成功地提纯了麻疹病毒。他们应用猴抗麻疹病毒的IgG进行共价偶联，获得了高纯度而有活性的病毒，回收率可达总回收成份的30％。Rimmelzwaan(1987年)应用犬细小病毒的中和性单克隆抗体亲和层析，纯化了细小病毒，经SDS—PAGE和 ELISA鉴定，99％以上的杂蛋白被洗除，收获了70～90％的病毒抗原成份。

(三)两相溶剂间分配系数法

该法主要原理就是高分子物质以溶质形式存在于两相溶剂中，根据其分配系数的不同而选择性地分配于其中的一方，从而达到纯化的目的。所采用的溶剂主要有: 葡聚糖硫酸盐(Dextran Sulphate,DS)和聚乙二醇(PEG)或甲基纤维素(MC)和聚乙烯醇(PVA)，形成 Ds—PEG系、Ds—PVA系和Ds—MC系。利用病毒在有机溶剂中的分配原理，在适当的溶剂系统和葡聚糖层之间进行多次反复转换，不仅能够浓缩病毒，而且还可以纯化病毒。

通常是将两相溶剂如Ds—PEG以适当的重量百分比混合，然后加入病毒液，数次激烈振荡混合，置于4℃ 24～36小时，即可分离为两层，病毒将特异地分布于其中一方(如Ds层中)。适当改变溶剂的混合比例时，分配于Ds层中的病毒可由Ds层转入 PEG中，而得以浓缩。若调节适当，一步就可浓缩100倍，两步浓缩就可以达到10000倍。

非病毒物质通常以不同的方式进行分配，从而达到浓缩纯化的目的。Nammar(1991年)应用Ds—PVA系纯化了反转录病毒。两相溶剂间分配系数法简单、温和，并能使病毒得到较高的浓缩和纯化。但是为了获得高度纯化的病毒，还需配合应用其它方法。

(四)红细胞吸附法

所谓病毒的红细胞凝集反应，就是指病毒被红细胞表面粘蛋白吸附的现象。自Hirst 发现流感病毒的红细胞凝集性质以来，随后相继发现其它一些动物病毒也有红细胞凝集性。Stanley证明，流感病毒在0℃时被红细胞吸附，而在37℃时却从红细胞上脱离下来的性质，从而将此方法应用于病毒提纯。

我们实验室应用醛化鸡红细胞吸附马流感病毒，取得较好效果。具体方法是: 采取鸡血，以无菌生理盐水洗涤3次后制成压积红细胞。另取福尔马林和生理盐水等量混合，制成福尔马林盐水。在2份福尔马林盐水中加入1份压积红细胞，充分振荡15min，置2～8℃冰箱内48h，每天振荡2～3次。届时取出，再振荡1次，后用700r/min 离心 5 ～10min，弃上清，再加20倍量生理盐水，振荡混合后置2～8℃ 冰箱过夜。弃上清，加入20倍量生理盐水，如上洗涤3次。取沉淀红细胞，加入相当于初次压积红细胞量的生理盐水，混匀后即可应用。

将马流感病毒感染的鸡胚尿囊液，作2500r/min离心10min，吸取上清液。取保存于2～8℃的病毒液100ml，加入2～8℃的醛化红细胞悬液6ml，充分振荡15min，立即放入冰箱内每2h振荡1次，共2～3次，随后置冰箱中过夜，待其自然沉淀。次日吸出上清，238 如其血凝价在1:15以下，则证明已经充分吸附，此时即可进行释放，否则需再补加醛化红细胞悬液继续吸附。在已充分吸附病毒的醛化红细胞沉淀中，加入相当于原病毒液1/10量的5mol/L NaCl溶液,充分振荡，置37℃水浴中4h，每隔30～60min振荡1次。取出后立即以700r/min 离心10min。吸取上清液，即为浓缩病毒液，必要时可对已释放过病毒的醛化红细胞作第二次释放，方法同前。

上述吸附-释放方法，可将病毒浓度提高10倍左右(以血凝效价表示)。

(五)电泳法

先将病毒悬液对缓冲液透析。根据病毒的种类不同，选择适当的缓冲液，但离子强度不能超过0.3mol/L以上。病毒粒子依据其所携带的电荷，在电场中或向正极，或向负极移动，因此电泳结束后，分段收集病毒区带部分，就能达到提纯的目的。

(六)超速离心法

病毒粒子经过初步浓缩之后，要进一步纯化，通常采用超速离心法，它是分离提纯不同大小的病毒的有效方法之一。在应用超速离心法沉淀病毒时，必须了解所用离心机的离心力。离心机由于转头的回转产生了强大的离心力, 这种离心力是随转头的大小和离心管至转轴中心的距离而变化的。高速和超速离心机的离心条件，有的以每分钟速度(r/min)表示，有的则以离心力——重力加速度g.(980cm/S2)为单位来表示。离心沉淀时，沉降速度与离心力有关。

离心机转速在4000r/min左右的称为低速(普通)离心机；转速至 25000r/min左右的称为高速离心机；转速25000r/min以上的称为超速离心机。高速和超速离心机装有冷冻装置和抽真空装置，以保持离心腔中恒定的低温，并减少转头运转时空气的摩擦力。超速离心机有制备和分析用两类，最近又生产出制备、分析及区带连续离心三用装置在一起的离心机，有的还带扫描装置。

使用超速离心机的分离提纯方法有三种:(1)差速离心法；(2)速度区带离心法；(3)平衡密度梯度离心法(或等密度梯度离心法)。

1.差速离心法

这是应用较早的简单方法，建立在不同大小和比重的粒子在沉降速度上存在差别的基础上。具体做法是将被分离的样品交替进行低速离心与高速(或超速)离心。沉降速度差别在一个或几个数量级的粒子，可用本法分离提取。粒子大小、转速与离心沉淀时间的关系，差速离心适用于从组织培养液、鸡胚尿囊液或经过红细胞吸附-释放的病毒悬液中提纯病毒。在由感染细胞或组织匀浆中提取病毒时，由于与病毒大小相近的细胞亚单位及碎片的存在，提纯效果不理想。差速离心法的优点是能迅速处理大量样品，故常作为病毒精

239 制的第一个阶段，或者用于病毒样品的浓缩和粗提。

以差速离心法分离提纯病毒时，经常以低速(2000～3000r/min，20～30min)及中速(10000r/min，20～30min)去除较大的宿主细胞碎片、污染的细菌及其他较大的杂质。然后，选择在60min内能够沉淀80%以上的病毒粒子的较高速度，离心1～2h，使病毒沉淀。对中、大型病毒如流行性感冒病毒，在经红细胞吸附-释放后，于 25000r/min离心60min，即可达到目的。小型病毒如脊髓灰质炎病毒、披膜病毒，则需以35000～ 45000r/min离心1～2h。高速或超速离心沉淀物，可用研磨和超声波振荡等方法打碎后悬浮于缓冲液中。对于非病毒杂质较多的样品进行差速离心，由于病毒对沉淀物的非特异性吸附而有较多损失。

2.速度区带离心法

是根据被分离物质在强大离心力中沉降速度不同而进行的分离方法。该法使用的介质密度应该小于被分离物质的密度。介质可以为均一密度，也可以为梯度密度。当被分离的物质沉降到与介质密度相等的区域时就不再沉降。不同分子形成不同的区带，而称为速度区带。该法要求样品浓度为顶端浓度梯度的1/10，样品体积为离心管体积的5%。常用的介质有蔗糖、甘油、聚蔗糖等。在病毒纯化时，将病毒样品溶液层加于密度梯度层的顶部，借助病毒粒子或其亚单位成分本身的浮密度差别，在离心力作用下降到密度相等的介质层内，最后排列成带状停留不动。密度较小的粒子或成分停留在上面的几层内，密度较大的粒子或成分沉降于下面几层内。应用密度梯度法，可以获得相当纯净的病毒样品。病毒粒子或成分的沉降速度取决于其大小、形状及比重，也取决于离心力及悬液介质的密度和粘度。蔗糖是生物大分子粒子密度梯度分离时最常应用的材料，因其易溶于水，且对核酸及蛋白质呈化学惰性。常用的梯度范围从5～20%或10～60%。

除蔗糖浓度连续梯度离心外，近来有人在两层浓度梯度上层加病毒浓缩样品，经超速离心后将病毒收集于两层界面处；也有人在单层蔗糖浓度溶液上层加病毒浓缩样品，经超速离心，使病毒沉淀于蔗糖溶液底部。这两种方法比较简单，但浓缩提纯的效果远远不如多层连续梯度法。

3.平衡密度梯度离心法

平衡密度梯度离心法是根据粒子的浮密度不同而加以分离。所谓浮密度就是物质的质量减去在一定介质中所受的浮力, 亦称有效密度。

制备梯度的方法有两种：一种是在饱和的CsCl溶液上面层加病毒样品(容量比1: 4)；另一种是将病毒样品与CsCl浓溶液均匀地混合。一般用水平转头，经较长时间的超速离心，在离心管中形成CsCl的浓度梯度，并由于离心力的作用，样品中的病毒粒子分布于相应密度的区域内。这种方法在分析离心中是最常用的。应用本法时，离心转头的回转数越高，离心时间越长，越能接近平衡状态。

240平衡密度梯度离心法广泛应用于病毒和核酸的提纯上。用平衡密度梯度离心法提纯的动物病毒有多型瘤病毒、牛痘病毒、乙型脑炎病毒、狂犬病病毒和马传贫病毒等。有的病毒在这些无机盐类溶液中被破坏，可加入0.2～0.5%牛血清白蛋白，或用0.5～3.0%甲醛先将病毒粒子固定，然后进行平衡密度梯度离心，常能较好地回收病毒。大多数病毒的浮密度在1.10～1.40范围内。所以制备密度范围为1.0～1.7的悬浮介质，便可满足大多数病毒密度梯度离心的需要。

4.密度梯度离心法的操作程序

(1)密度梯度的制备:制备密度梯度的方法有不连续的(即人工操作)和连续的(即机械操作)密度梯度两种。

不连续的或分层的密度梯度的制备 不连续的密度梯度是以人工操作法制备的，在一定温度下(一般在20℃或在25℃)配制一系列浓度差为5%的梯度溶液,例如蔗糖可配制成5、10、15、20、25、30、35、40%(W/V)等溶液(用蒸馏水或适宜的缓冲液配制)，用皮下注射器或微量吸管，小心地先吸取浓度最大的溶液注入离心管底，然后依次加入较低的各个浓度(40%→5%)，一层覆盖着一层地层加于离心管中，注意避免产生气泡。假如各层界面被冲动破坏，则应重新制备。也可以将长针头插入管底，依次从浓度低到高加入各溶液。

连续的密度梯度的制备 为了产生一个连续的密度梯度，常用梯度混合装置来制备梯度。

梯度混合装置由A和B管组成。两管之间用双通活塞联结。在活塞关闭的状态下，向A管中加入低浓度蔗糖溶液，向B管中加入高浓度的蔗糖溶液，两管中容量要相等。在B管出口处用一根聚乙烯小管连接到离心管。在给B管充液时，可将聚乙烯小管的流出口向上转动，使之超过液体的水平面，从而阻止液体流出。充液后可将小管接到离心管中使之贴着管壁，然后开动小搅拌器，使搅拌棒转动，同时打开两管间活塞。这三个操作要同时进行，以保证梯度的连续性。当梯度液体自B管流出时不允许移动离心管，待离心管中所盛的梯度溶液的体积达到需要量之后，将离心管小心地静止于4℃ 1～2h，以平衡之。

现在不少“制备用超速离心机”携带有“密度梯度制备自动装置”。按照这个方法制备的蔗糖浓度梯度，理论上按公式计算。

这些浓度梯度是根据样品和实验目的而专门选用的。一般使用的浓度梯度范围为20%→5%，40%→10%，或60%→10%等。

(2)加入样品:用如上所述注射器或微量吸管吸取悬浮于适宜缓冲液中的病毒或核酸样品(约梯度介质体积的1/10容量)，从液面上方1mm处，紧贴着离心管壁轻轻层加于梯度介质面上。

(3)高速或超速离心:将加入样品的离心管装入套管内，也可将离心管置于转头的套管内，以免在装进套管时震动液体。拧紧套管螺帽，将套管吊在水平转头上，置于离心机

241 内。梯度离心一般用高速或超速离心机。离心速度和时间，根据所分离的样品选定。离心开始，样品中各种粒子逐渐分离，分布于相应的密度梯度层中成为带状(如为透明的聚碳酸酯离心管，则可以清楚地见到带状分离，并拍照)。离心时间到时，使离心机自然停止，不许制动，以免破坏梯度。

(4)梯度的分段收集(取样):在离心完了以后，为了把已分离物质的各条带分开，必须取出梯度溶液。梯度溶液的分段收集方法有如下几种。

①取代法：从离心管底部穿刺或将带长针头的注射器插入离心管底，使一种稠密的介质，如60～70%(W/V)蔗糖溶液，缓慢地注入于离心管底部。然后用一个注射器或移液管，从上面逐一移出各部分。或者在离心管的颈部加上一个塞子，这个塞子附着一根收集导管，通向一个部分收集器，收取各部分。

②穿刺法：将离心管固定于特制的固定架上，在其底部装上一个垂直向上的空心针穿刺，使梯度溶液自由滴出，可用部分收集器或用小试管分段收集。超速离心机一般都带有此装置。此装置的缺点是离心管在用一次后即废弃。

③虹吸法：此法的优点是不必穿刺离心管，离心管可反复使用。经我们多次试验，此法简便易行，对梯度密度无破坏。用一根大穿刺针截两段做虹吸管，以接上 50 ～100ml玻璃注射器进行送气的方法，分段收集梯度溶液。

④注射器吸取法：用弯曲的针头(J状)接在注射器上，从梯度最上层开始向下逐层小心吸取液体。

5.梯度各层液体的密度测定

(1)称重量法：用10ul微量注射器吸取样品，加入于已知重量的毛细管中，在 1/10万分析天秤上称重，计算重量(g/ml)，即为梯度溶液的密度。

(2)测定折射率法：用阿贝氏折光仪测定各梯度层溶液的折射率(25℃)。(3)浮漂法：向已制备好的各种密度溶液中滴入一滴样品，找出相应的样品浮密度溶液，即为该梯度层的密度。

6.各梯度分层液中病毒分布的鉴定

(1)以紫外分光光度计测定蛋白质和核酸吸收峰。吸取各层梯度溶液，用蒸馏水或缓冲液适当稀释后，测定波长280和260nm的OD值。然后以各梯度层管号为横坐标，其OD值为纵坐标画曲线，即为各梯度层中蛋白质-病毒含量图，有些病毒260nm OD值较高。

(2)以各种血清学方法测定各梯度层中病毒的抗原效价或用组织培养法测定病毒滴度，证实病毒分布区域。

(3)用电子显微镜负染法观察病毒粒子及其纯度。将各梯度层样品装入透析袋中，置于适宜的溶液中透析去盐，然后取一滴样品用蒸馏水稀释，滴附于铜网膜上，用磷钨酸负染后电镜下观察病毒粒子。

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(七)超滤法

超滤法是利用超滤膜将水、盐及小分子滤过，将一定大小的大分子或病毒等颗粒截住从而使后者得到浓缩的一种方法。超滤膜的孔径有多种，可根据被截留的分子大小而选择。超滤法是浓缩大容量的病毒样品的一种非常有效的方法，其优点是可以在室温或低温下操作；对被浓缩的产物损害很小；浓缩的同时可达到部分纯化；如选择合适的膜和操作参数，可达到很高的回收率；此外，超滤系统可密封以防止外来污染。超滤系统目前主要有三种，即搅拌池式，浅道流动系统和中空纤维系统。搅拌池式是一种最简单的超滤系统，由超滤室及磁力搅拌器组成，通过正压而使液体通过滤膜。此方法简单，但浓缩样品量有限，一般在2000ml以内，而且滤膜孔易于堵塞。浅道流动系统的特点是液体在膜表面的螺旋形浅道中流动，液体与膜的接触面积也大于搅拌池系统，因而滤过速度大为提高。中空纤维系统是由很多根空心纤维成束装配而成，每根纤维即为一个微细管型膜，因此，其有效的膜面积远远大于前二个系统，滤过速度很快，适用于大体积的浓缩。

二、病毒蛋白亚单位的分离

病毒具有几种以上的蛋白质,每一种蛋白质通常都由分子量较小的许多相同的亚单位组成。病毒的结构蛋白决定着病毒粒子的结构及其与细胞受体部位结合的特异性。病毒的血清学特异性和酶活性也决定于蛋白质。结构蛋白还有保护病毒核酸的作用——核酸处于蛋白外壳的内部，或与蛋白质互相缠绕而成核蛋白。因此病毒基因组受到有关蛋白质的保护，从而可以抵抗理化学因素的降解作用。

蛋白质构成病毒质量的大部分，病毒粒子内的蛋白质可以单独地或与糖、脂类结合在一起，成为糖蛋白或脂蛋白。病毒结构蛋白可以从提纯的病毒制品中通过与核酸和其它蛋白分离, 而又不打断肽键的处理方法得到。分离时须用中性去污剂、极性试剂或阻止蛋白聚合的保护剂如尿素、盐酸胍、去氧胆酸钠和SDS等,或改变pH值等方法加以处理。

三、病毒脂质的抽提

病毒中有许多种脂类化合物，包括磷脂、中性脂肪、脂肪酸、脂肪醛及胆固醇等。病毒脂质的主要成分是磷脂，它在许多病毒中具有结构上的功能。病毒的磷脂就在囊膜中，它对病毒颗粒的结构完整性是很重要的。这是因为当这类病毒用脂溶剂或某些磷脂酶处理后就显著地丧失了感染性。

病毒脂质大部分来源于感染前就存在于宿主细胞的脂质。病毒的有些脂质与糖结合形成糖脂，有些脂质与蛋白结合形成脂蛋白。

抽提病毒脂类时最常用的溶剂系统是氯仿－甲醇。有人应用此溶剂系统抽提SV5的病毒脂质,其方法是:

243(1)取冻干的病毒样品,用氯仿：甲醇：水=65：25：5的溶剂,在室温下抽提二次,每次20 min,接着在氮气下用沸腾的溶剂抽提一次20min。

(2)合并抽提物,加入其1/6体积的水 ,混合后分为水相和有机相。如存在神经节甙脂,则进入到水相中,而其它全部脂质仍留在有机相中。

(3)将这一部分溶剂移到旋转器或蒸发器中,在氮气下驱除有机溶剂,即获得总的脂质。

四、病毒糖类的提取

糖是所有病毒核酸的组成成份之一,有些病毒还含有葡萄糖基嘧啶,另一些病毒则含有糖蛋白。病毒囊膜的主要成份是糖蛋白,通常位于病毒粒子的表面,使它们具有血清学活性。

下面是Lai提纯禽肿瘤病毒糖类的方法：

(1)用1%SDS(内含0.05mol/L 2-巯基乙醇)在37℃裂解提纯病毒30min,在此裂解物中加入5倍体积的乙醇,沉淀病毒的糖蛋白,将此沉淀物溶于0.1%SDS,0.1mol/L Tris(pH8.0)中;(2)用饱和酚抽提病毒糖蛋白,取水相加入5倍体积的乙醇(内含2mol/L NH4Ac)沉淀回收病毒糖蛋白,再用75%的乙醇洗一次,溶于0.1%SDS,0.1mol/L Tris中；

(3)用灰色链丝菌酶1mg/ml处理48h,再用0.05mg/ml的浓度处理 48h,以水解糖蛋白;(4)水解的糖蛋白通过Sephadex-G50凝胶层析过滤法，蛋白酶K，是一种切割活性较广的丝氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键。此酶经纯化去除了RNA酶和DNA酶活性。由于蛋白酶K在尿素和SDS中稳定，还具有降解天然蛋白质的能力，因而它应用很广泛，包括制备脉冲电泳的染色体DNA，蛋白质印迹以及去除DNA和RNA制备中的核酸酶。蛋白酶K的一般工作浓度是50—100μg/ml。在较广的pH范围内(pH 4-12.5)均有活性。

推荐反应缓冲液：50mM Tris-HCl(pH7.5),10mM CaCl2。

蛋白酶k配制标准：20mg/ml蛋白酶K配制标准(proteinase K)：将200mg的蛋白酶K加入到9.5ml水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。

蛋白酶K的保存：保存在-20℃冰箱里，避免反复冻融，有效保证12月。孵育温度为55至65℃，理想孵育温度为58℃，孵育时间为15分钟至48

244

小时;理想孵育时间为2小时。

作用：蛋白酶K在原位杂交技术中通常用于杂交前的处理，它具有消化包围靶DNA蛋白质的作用，以增加探针与靶核酸结合的机会，提高杂交信号.但蛋白酶K的浓度过高、消化时间过长或孵育温度过高时，都会对细胞的结构有一定的破坏，导致组织切片的脱落，细胞核的消失，从而影响杂交结果。EDTA缓冲液可以替代蛋白酶K的作用，解决上述出现的问题，并能达到理想的染色效果。

蛋白酶K的应用比较广泛，它可以消化包围靶DNA蛋白，因此使用蛋白酶K能够增加探针与靶核酸结合的机会增强杂交信号，但在使用蛋白酶K时要主要使用的浓度，过高或者过低都会破坏细胞的结构、核消失等影响试验结果。

245

第二篇：病毒教案

2．能力目标

①通过对实际生活经验的总结来认识病毒的种类，以提高学生的归纳、总结能力和逻辑 思维能力。

②通过观察思考，说出病毒与生物圈中其他生物的关系。3．情感、态度与价值观目标 ①通过对病毒与人类关系的学习，激发学生学习兴趣，培养学生热爱科学、关注病毒的情感。②通过对病毒的了解可培养学生良好的日常行为习惯，增强对病毒预防和治疗的意识。教学方法及学情分析：

在日常生活中，学生通过电视、网络、报刊等途径知道了流行性感冒、艾滋病等是由病毒引起的，对流行性感冒、甲型h1n1流感的预防措施有亲身经历，对艾滋病毒在全球的发展趋势、预防措施等也有所了解，为利用讨论、交流等活动主动获取知识做好了铺垫。

由于病毒十分微小，要借助电子显微镜才能观察到它们，因此学生对病毒的认识是非常抽象的。学生对于病毒的认识是具有一定的生活常识的，但是往往局限于影响人类健康以及给农业、养殖业所造成的危害方面，缺乏对病毒与人类关系的全面、客观的认识。在教学过程中，必须充分利用图片资料和文字资料，结合学生的生活常识来增强对病毒的感性认识，引导学生客观理解病毒与人类的关系，了解病毒的生命活动和传播方式，运用所学知识解决生活中的实际问题。所以本节课选择自主自学、合作探究、知识整合等恰当的学习方法和学生一起体验知识的生成的过程，同时启发学生对事物要从正反两方面去观察、去思考，化害为利，为人类拥有健康的生活服务。课前准备：

教师：收集有关病毒的资料和相关图片。

学生：学生收集了解病毒的相关知识，学生按每四人一小组划分学习小组，每小组一名发言代表。教学过程：

教学环节及时间安排教师活动学生活动设计意图 复习提问

（5分钟）教师展示图片表格，通过对比的的方式复习动物细胞和植物细胞的区别： 细胞壁细胞膜细胞质细胞核液泡 动物细胞无有有有无 植物细胞有有有有有

学生通过动物细胞和植物细胞图片回忆区别：

通过植物细胞和动物细胞的区别，感受几乎所有的生物是由细胞构成，给病毒没有细胞结构埋下伏笔。创设情景 激发兴趣（3分钟）【过渡语】：你听说过“手足口病”“禽流感”“艾滋病”吗？这些疾病传播搞得全世界人心惶惶。你知道这些令人生畏的疾病的罪魁祸首是什么吗？现在医院的输液室里人满为患大家知道是哪些病毒在作怪呢？据有关专家统计，人类和动物所患的传染病60%都有由病毒引起的。病毒的威力为何如此巨大？它是一种什么样的生物呢？那这节课就由我带领大家揭开病毒神秘的面纱！学生集体回答：

病毒、流感、肝炎、艾滋病、小儿麻痹症、狂犬病„„

通过引申，进一步激起学生的兴趣及好奇心，感受到病毒的可怕和危害为后面的学习打下基础。自主学习（15分钟）【过渡语】：大家都已经感受到了病毒无处不在，那么你们见过病毒吗？为什么？ 知识点一：病毒的形态结构

1、病毒的大小：

病毒的形体及其，通常只有借助 才能观察到。

点拨：病毒的大小用纳米来表示的(1毫米=106纳米)。如果将一根头发丝横切，在其横切面上能放大约1亿个病毒。

2、病毒的形态：

病毒的形态，主要有、、等。

点拨：病毒的形体极其微小，结构简单，但它们的个体形态却是形态各异，丰富多彩。如：hiv病毒呈袋状球形，sars病毒呈冠状。

3、病毒的结构： 植物、动物都是由 构成的，是生物体结构和功能的基本单位。病毒是一类不具有 的微生物，其结构简单，一般由 和 组成。

点拨：病毒不具有细胞结构，但是它仍然具有严整的结构，主要由蛋白质外壳和内部的遗传物质组成（遗传物质的核心是核酸）。

猜一猜：下面大家根据提示猜一猜我所描述的是哪种病毒？看哪个同学最少的提示下，最先猜出来，请听第一个： 1、2003年2月28日，意大利医生卡洛•乌而巴尼在河内一个华裔美国商人身上首次采得样本。2、2003年一场罕见的传染病在神州大地肆虐，主要集中在广州、北京等大城市。

3、一时间口罩成为最流行的“装备”。

5、科学家们说，变种冠状病毒与流感病毒有亲缘关系，将其命名为“sars病毒”。【过渡语】：你们从哪看出来时sars病毒的？看来都是口罩漏的馅，请听第二个： 1、1981年发现该病，国际医学界至今尚无对付该病的持续疗法和疫苗；

2、全球因该病而死的人数已超过2500万，该病成为威胁人类生存的“世纪杀手”；至2005年底，全球感染人数已达3860万； 3、12月1日被国际卫生组织以该病命名；

4、主要有三种传播途径：性接触，血液和母婴。【过渡语】：既然病毒没有细胞结构，那它怎样生活、繁殖呢？ 知识点二：病毒的生命活动

1、病毒的生活方式：

病毒的生活（营养）方式：，它们必须在其他生物的 内才能生活和繁殖。

知识点拨：病毒要是离开了活细胞，通常会变成结晶体，等待时机，寻找新的寄主。一旦有机会侵入新的活细胞，生命活动就会重新开始。

2、病毒的繁殖方式： 病毒以 的方式进行繁殖。

噬菌体繁殖的过程，可分为三个步骤：

请同学们通过课本并结合图片尝试描述 知识点拨：

①侵入：噬菌体的尾部附着在细菌的细胞壁上，然后入侵。②复制组合：噬菌体巧妙地利用寄主（细菌）细胞的“机器”，大量在复制子代噬菌体的遗传物质和蛋白质，并形成完整的噬菌体颗粒。

③释放：噬菌体成熟后，在潜伏后期，溶解寄主细胞壁的溶菌酶逐渐增加，促使细胞裂解，从而释放出子代噬菌体。

（噬菌体在37℃下大约四十分钟就可以产生100～300个子代噬菌体）

3、病毒的分类： 病毒的种类很多，由于它们对细胞的侵染具有特定性、选着性，一种病毒通常只能侵染某种。根据它们侵染 的不同，可以将病毒分为、、等不同的类群。学习阅读课本找出相应的答案：

1、微小、电子显微镜

通过给出的数据感受病毒的微小。

2、多种多样、球状、杆状、蝌蚪状。

通过图片了解病毒虽然小但是的形态多种多样。

学生认真观察图片结合题目找到病毒与动物、植物的区别

3、细胞、细胞、细胞结构、蛋白质、遗传物质

学生根据老师的提示结合生活中的知识猜出病毒的名称

学生在第三个提示一时间口罩成为最流行的“装备”能猜出是sars病毒。

学生有的在第一条提示就猜出是hiv病毒，通过每条提示的公布，更加确定是艾滋病毒。

1、寄生、活细胞

2、自我复制

阅读课本结合图片理解噬菌体繁殖过程 ①侵入活细胞

②病毒会以细胞内的物质为原理，在自己遗传物质的“指挥”下制造出新的病毒 ③当细胞破裂后，这些新的病毒被释放出来，继续侵染其他细胞

3、特定的细胞、细胞种类、动物细胞、植物细胞、细菌细胞学生通过自学课本完成知识点，锻炼学 的自学能力。

通过图片的观察真正的感受病毒形态多样、结构锻炼学生的观察、总结能力。

通过猜一猜的形式给学生介绍sars病毒、艾滋病毒，调动课堂气氛，使学生在积极的态度下获取知识。

通过自学的形式完成书本上的知识，观察噬菌体繁殖过程示意图，结合课本能概述病毒繁殖的过程 合作探究(10分钟)【过渡语】：在生态系统中，病毒是非常活跃的一员，它在自然界的分布极其广泛，几乎可以感染到所有生物，那么病毒会对生物圈中的其他生物造成那些危害呢？ 知识点三:病毒和人类的关系

观察图片，思考病毒对人和动植物的影响。

1、病毒侵入生物体后往往改变生物的 或导致被侵染细胞 而。如

使烟草业受损，能杀死绿脓杆菌等。

2、约有 的动物和人类疾病是由病毒引起的，人们在对病毒的研究中取得了一些可喜的成果。如用病毒制成 可减少疾病的流行。探究活动：

（1）病毒与植物、动物最关键的区别是什么？为什么病毒还属于生物？（2）分析下列病毒分别属于哪类病毒？

乙肝病毒、ev71肠道病毒、绿脓杆菌噬菌体、腮腺炎病毒、水稻条纹叶枯病毒（3）病毒对人类的关系有害的一面？ 知识点拨：

①部分病毒危害人类的身体健康，如感冒病毒、乙肝病毒，天花病毒、狂犬病毒，艾滋病病毒等。

②许多病毒会危害人类的经济作物、家禽家畜等，如烟草花叶病毒，猪瘟、鸡瘟病毒，马铃薯病毒。

③一些细菌病毒会破坏人类使用微生物进行生产的产业，如味精业。（4）病毒对人类的关系有利的一面? 知识点拨：

①预防接种：制造病毒疫苗(流感疫苗、牛痘疫苗等)控制一些疾病。疫苗就是经过人工处理的减毒病毒

②噬菌体可以作为防止某些疾病的特效药。如：人们用绿脓杆菌病毒防止烧伤病人伤口受绿脓杆菌感染化脓；用病毒防止手术后病人长伤疤等。

③利用病毒可制高效的生物农药，如利用多角体病毒防治松毛虫、粘虫等，即达到控制害虫的目的，对人畜健康和环境又完全无害。

④在基因工程方面：噬菌体应用于转基因、基因治疗等方面。知识小结：

对于病毒和其他生物尤其和之间人类，大家都会认为病毒都是有害的但是它也能服务与人类，所以大家对任何事物要从正反两方面去观察、去思考，化害为利，为人类拥有健康的生活服务。观察图片思考

郁金香碎色病毒：侵染郁金香，能使其花朵更加绚丽多彩，赏心悦目。

禽流感病毒：侵染禽类后，可使它们生病甚至死亡，个别变异类型也可感染人类及其他哺乳动物。

sars相关冠状病毒：侵染人体后，会引起患者严重急性呼吸综合征，出现发热、干咳、呼吸急促等症状，患者死亡率极高。

水稻矮缩病毒：侵染水稻后，能引起水稻矮缩病。病株矮缩，分蘖增多，叶片浓绿、僵直，不能抽穗结实。

1、某种特征、破裂、死亡、烟草花叶病毒、绿脓杆菌噬菌体 2、60%、疫苗

分小组讨论：找小组代表回答：

（1）病毒没有细胞结构，病毒以自我复制的形式进行繁殖。（2）动物病毒、动物病毒、细菌病毒、动物病毒、植物病毒。

（3）有害：大多数病毒入侵生物体后往往会导致疾病的发生，从而严重危害人类、动植物的健康，给畜牧业造成巨大损失，降低农作物的产物。

（4）有利：疫苗可以有效地预防人类疾病；制造杀虫剂。

积极鼓励学生独立学习通过学生对本节课知识整合，锻炼了学生的归纳问题的能力和表达问题的能力。

教师根据学生自主学习的情况，巧妙启发，积极引导，共同总结，这样就能突破本节课的难点。

引导学生认识病毒对人类生活有利的方面，使学生全面地、客观地了解病毒与人类生活的关系，指导学生全面地、辩证地看待病毒与人类的关系，培养相应的 科学素养。知识整合 迁移应用（10分钟）【过渡语】：病毒的种类繁多，根据它们侵染细胞种类的不同，可将病毒分为： 分类侵染

对象举例结构图 植物

病毒专门侵染植物细胞烟草花叶病毒 动物

病毒专门侵染动物和人体细胞流感病毒 细菌

病毒专门侵染细菌大肠杆菌噬菌体 比一比：看谁在最短的时间里记住 病毒身体太微小，电子显镜才找到； 形态多种又多样，球状杆状蝌蚪状； 种类根据寄主分，动物植物噬菌体； 病毒结构太简单，外是蛋白内遗传； 病毒生活太聪明，不是自养是寄生； 病毒生活太稀奇，不是分裂是复制； 与人关系太密切，不只有弊也有利； 【过渡语】：时逢换季，感冒的人又多起来了。最新研究发现，人的一生平均感冒200次，每次平均持续9天，一辈子感冒症状持续时间平均大约为5年。我给大家介绍有关感冒的相关知识。

感冒的三大真相：

第一个：感冒是由病毒引起的上呼吸道感染“综合征”，有超过100种以上的病毒可能诱发感冒。

第二个：一般来说，感冒的症状会持续一星期，不论服药与否。

第三个：感冒的起点，应该是出现症状的一天前，此时病毒已经在你的体内驻扎。更确切地说，感冒病毒会在体内潜伏18―48个小时，然后突然爆发。最早出现的症状主要为咽喉肿痛、打喷嚏、鼻塞流涕、身体疲倦。六种养生好食物吃掉感冒病毒：

一、大蒜有抗病毒及消炎的作用，经常食用大蒜能预防感冒，及时吃些大蒜能促使身体发汗，将感冒病毒扼杀在摇篮中。

三、柑橘汁富含柠檬酸、氨基酸、碳水化合物、脂肪、多种维生素、钙、磷、铁等营养成分。同样具有清热解毒，预防感冒的作用。

四、鸡汤所含有的某些特殊化学物质，感冒初起，喝些鸡汤可以有效地消除呼吸道中的病毒，使呼吸道恢复正常状态，从而促进痊愈。

五、蜂蜜尤其是富含蜂王浆的蜂王浆蜜，含有生物活性物质，坚持每日食用2至3次蜂蜜(每次30克左右)的人，对病毒性感冒的抵抗力能提高3至4倍，不易感冒。对于已感冒及其它病毒性疾病的患者，食用蜂蜜，也有利于康复。

六、牡蛎富含锌元素等，对调节机体的细胞免疫状态，以及防御感冒都有益处。分组讨论：大家结合自己的生活经验思考如何预防感冒？ 如何预防感冒：

1、经常锻炼身体，增强抗病能力。

2、常吃一些有助于增强免疫力的食品。

3、按时休息。

4、少去公共场所，由其是老人和婴儿尽量不要去这些地方。已患感冒的人更不应该去探望其他人，避免与感冒人交叉感染。

5、晨起开窗，使空气流通。知识小结：

通过今天的学习，大家要改变对病毒不公平的看法，冬天已经来了希望大家通过今天的学习好好的锻炼身体、好好吃饭、好好睡觉健康成长！学生根据所学的知识进行总结，将病毒分类

植物病毒：专门侵染植物细胞，如烟草花叶病毒、水稻矮缩病毒

动物病毒：专门侵染动物和人体细胞，如流感病毒、乙肝病毒、ev71肠道病毒、腮腺炎病毒 细菌病毒：专门侵染细菌，如绿脓杆菌噬菌体、大肠杆菌噬菌体

比一比：快速记忆看谁记得快记得准，找4名学生背诵比赛，选出第一名，鼓掌鼓励。学生通过数据感受到病毒感冒多人们生活的影响有多大。

学生根据所学的知识，根据自己身体的变化和相应的症状，在自己的饮食上要多多注意，有的学生马上就说出还要多吃蒜来的呼声。

学生分小组讨论结合生活常识 各出各的点子：打流感疫苗，注意保暖，多锻炼，少去人多的地方„„通过表格和图片展示、文字描述等形式进一步引导学生认识病毒的种类，学生根据所学知识进行分类并举例。锻炼了学生的学习能力。

通过口诀记忆所学的知识点，帮助学生识记，用比赛的方法促进学生快速记忆。

学生在求知中体验，在体验中求知，从中感受到成功的乐趣

这一环节的设计促进了主动知识的学习知识并应用到生活当中，起到举一反三的作用。解决一些生活中的实际问题 当堂训练 巩固达标（5分钟）a类：

1、病毒的组成成分是（）

a、脂类、蛋白质 b、脂类、遗传物质

2、病毒的生活环境是（）a、空气中 b、水

3、正常出生，体重在2500克以上的婴儿，在出生会24小时内接种卡介苗和乙肝苗。人类接种的病毒疫苗应该是（）

a、活的具有感染性的病毒 b、植物细胞 b类：

4、下列哪一项不是人类利用病毒为人类服务的实例（）a、无脊椎动物病毒制成杀虫剂 b、给高烧病人注射青霉素

d、用噬菌体治疗烧伤病人的化脓性感染

5、下列有关病毒的描述，不正确的是（）a、营寄生生活 b、能繁殖后代

6、下列生物中不具有细胞结构的是（）

7、烟草花叶病毒（简称tmv）感染烟草花叶片能使叶片出现斑点，从而降低烟叶的质量。科学家做出了如下实验，据下图分析：

①烟是花叶病毒结构非常简单，无______结构，它由_____外壳和内部的______组成。②把有病斑的烟叶榨汁，用细菌过滤器进行过滤，再用过滤后得汁液去感染正常烟叶，烟，烟叶会得病吗？ ；为什么？。

③对有病斑的烟叶进行提取分离后，获得的病毒应该是含有 的病毒，此实验可以说明rna是 物质。病毒可以寄生在 的细胞内，靠自己的遗传物质，利用寄主活细胞内的物质，制造出许多，从而是烟草患病。学生独立自主完成，课堂检测要及时互纠。

2、d

4、b

7、①细胞、蛋白质、遗传物质

②会、因为烟草花叶病毒比细菌小很多，能通过细菌细菌过滤器进入滤液中 ③rna、遗传、烟草、rna、烟草花叶病毒

保持课堂安静，让学生静下心来，进行自主学习，锻炼自学能力，独立解决学习目标。

针对不同层次的学生提出明确的完成目标

教学反思: 学生是学习发展的主体，把 学生放在生动活泼的主动发展的位置上，充分发挥他们的主观能动性，使他们成为学习的主人。《课程标准》的课程理念是“面向全体学生，提高生物科学素养，倡导探究性学习”。在教学设计中大量的采用由学生课前收集相关资料的方法，锻炼了查找、收集资料的能力，收集资料过程中可以充分发挥学习小组的集体作用，培养了合作精神。在课堂教学过程中，有目的的设置疑问，展开讨论，于讨论中明晰知识，准确把握生物学概念，培养了科学严谨性。知识点通过讲练结合，重点内容知识点拨，将知识点落实到位，能从书本获得的要由学生去自主获取，教师的任务是指导其去伪存真，去粗留精。教师在课堂教学中的作用是指导，在关键性问题上指引探究方向，控制教学进程，总结归纳知识，纠正探究过程中的偏差，而不是干涉学生对知识的获得过程，这样可以充分体现学生在学习过程中的主体地位。

在教学过程中发现，学生对于资料和信息往往只是停留在收集层面，分析、加工信息的能力不强，今后的教学中要积极引导学生提高对信息进行一定的科学认识和理性思考能力。同时，资料的收集要进行分工，不然会加重学生的负担和造成资料的重复。

第三篇：病毒检讨书

大家好！我的名字叫病毒，病毒检讨书。我的名字听起来很难听，人品也很坏。自从有了地球生灵，我就开始肆意破坏！我曾害死了千千万万的生命，由于我小得不能再小，所以人类直到19世纪末才被人类发现，和人类玩了千万年的捉迷藏。所以本人作以下检讨：我错了，我有罪。我不应该在一年四季都大肆破坏地球的每一个生灵，另外，我还有个人英雄主义，检讨书《病毒检讨书》。我不但在生物体内破坏一下下，还看很多的正常细胞不顺眼，全把他们变成自己的人----全被我感染了，像我这样的败类，必将被生物大家庭給抛弃！光顾骂了，其实我还有很多优点哦！如果没有我，那个种动植物就会疯长，地球将毁灭！还有我们的兄弟---牛痘，他种在动物体内，能有效防止天花病毒，他就是我们的骄傲！检讨了这些，大家能原谅我吗？

第四篇：新城疫病毒

新城疫病毒 新城疫病毒（NDV）属于副黏病毒科，腮腺炎病毒属。DNV对外界环境的抵抗力较强，对乙醚、氯仿敏感，其所有毒株都能凝集多种禽类和哺乳类动物的红细胞。本病的传播途径主要是呼吸道和消化道。一年四季发生，各种日龄鸡都能感染发病，大多3～5天死亡；在免疫鸡群中可散在发生非典型新城疫。新城疫病毒治疗，肌肉注射香港奥邦禽优乐，治疗量：0.5ml/公斤，即可治愈。

第五篇：病毒教案

鹤城中学生物学科教案

第五章 病毒 授课者：麦北进

学习目标：

（一）知识目标

1、了解病毒的发现过程和种类

2、理解和掌握病毒的特征、生活和繁殖。

3、理解病毒与生物圈中其他生物的关系，特别是与人类的关系。

（二）能力目标

培养学生分析、讨论、概括的能力。

（三）情感、态度和价值观目标

通过对病毒与人类关系的学习，培养学生用辩证的态度看问题。重点与难点

1、教学重点：病毒的结构和生活，病毒与人类的关系。

2、教学难点：病毒的生活和繁殖。

一﹑预习要点：

1.19世纪俄国科学家 在研究烟草花叶病时，发现病毒。

2.病毒都 细胞结构，比细胞，需要用 才能观察到。3.病毒的结构，由

外壳和内部

组成。病毒不能

生活。只能寄生在其他生物的 内。根据寄生的生物种类不同,病毒通常可分为____ __病毒、病毒和__ _ __病毒,后者也称为__________。

4.病毒只能寄生在 里，靠自己的 中遗传信息，利用细胞内的物质，制造出新的病毒。病毒离开了活细胞，通常会变成。5.病毒的常见形态有________、_________、________。

6.人类一方面设法________和_________病毒性疾病，一方面______ 为人类造福。

二导入新课

到2013年4月19日为止，上海市H7N9禽流感确诊6人，死亡4人。

踏踏实实地学是你成功必经之路。鹤城中学生物学科教案

李某，男，87岁。2月19日发病，3月4日死亡。

吴某，男，27岁，系猪肉商贩。2月27日发病，3月10日死亡。储某，男，48岁，江苏如皋人，从事鸡鸭运输工作。

3月28日出现咳嗽、咳痰症状，4月1日出现发热，3日死亡。於某，女，52岁。3月27日出现低热，29日就诊，后病情加重，于4月3日经抢救无效死亡。

李某，男，4岁，幼托儿童。3月31日出现发热39℃、流涕症状，4月1日就诊，4日确诊。目前患儿一般情况良好，体温36℃。曹某，女，67岁。3月22日出现咽痛、咳嗽、发热寒战症状，24日就诊，27日收治入呼吸科ICU，4月4日确诊。目前病情危重。

请问引起H7N9禽流感的元凶是什么？

谁能用肉眼看见病毒？它的结构和生活有什么特点？

三、教学过程

[学点一]病毒的发现、大小、形态。认真阅读P89的文字，完成下列问题：

1、俄国科学家 在研究烟草花叶病时，发现病毒。(伊万诺夫斯基)

2、病毒的形体极其________，通常只有借助__________ 才能观察到他们。（小，电子显微镜）

3、病毒的常见形态有________、_________、________。（球状，杆状，蝌蚪状）随堂练习(一)

1、首先发现“滤过性病毒”的科学家是（B）

A.巴斯德 B.伊万诺夫斯基 C.达尔文 D.列文虎克 2、20世纪初，科学家首次用哪种仪器观察到烟草花叶病（D）A.放大镜 B.高倍光学显微镜 C.低倍光学显微镜 D.电子显微镜

3、病毒的形态有哪三种？

、、。（球状，杆状，蝌蚪状）

[学点二]病毒的结构、种类

踏踏实实地学是你成功必经之路。鹤城中学生物学科教案

认真阅读P90的文字，完成下列问题：

1、病毒的结构 ________，没有_________.一般由____________ 和内部的_________组成。（简单，细胞结构，蛋白质外壳，遗传物质）

2、根据 寄主不同 可分为：

1）专门寄生在动物和人体细胞的病毒叫 __动物病毒，如艾滋病、禽流感、口啼疫_。2）专门寄生在植物细胞的病毒叫_植物病毒_, 如烟草花叶病、萝卜花叶病_； 专门寄生在细菌细胞内的病毒叫细菌病毒_(也叫_噬菌体_)，如_大肠杆菌噬菌体__。随堂练习(二)

1、病毒的结构是由什么组成的（）A.细胞壁、细胞质、细胞核 B.细胞膜、细胞质、细胞核

C.纤维素外壳和由遗传物质构成的核心 D.蛋白质外壳和由遗传物质构成的核心

2、引起艾滋病、口蹄疫、烟草花叶病的病毒分别属于（）A.人类病毒、细菌病毒、植物病毒 B.动物病毒、动物病毒、植物病毒 C.人类病毒细菌病毒、植物病毒 D.动物病毒、细菌病毒、植物病毒

[学点三]病毒的生活、繁殖

病毒只能_________在____________里，病毒一旦离开，通常会变____ __。病毒靠自己的遗传物质中的_________，利用_________，制造出 ____________ , 这就是它的 ___________。（寄生，活细胞，活细胞，结晶体，遗传信息，细胞内的物质，新的病毒）随堂练习(三)1、1.SARS病毒作为生物的主要理由是(D)A.能使人致病 B.具有细胞结构 C.由有机物组成 D.能繁殖产生后代

2、将病毒从细胞中提取出来，提纯呈结晶状态后，病毒会（A）A.失去生命活动 B.正常生活，但不繁殖。C.正常生活 D.结构马上解体

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[学点四]病毒与人类的关系

认真阅读P91-92的文字，完成下列问题：

1、病毒的危害是什么？

__引起人、动物患病有：乙肝、非典、艾滋病、禽流感、口啼疫、脊髓灰质炎、天花等。

2、病毒的益处所有哪些？

利用减毒或灭活的病毒研制各种预防疾病的疫苗

四、小组讨论

1、有一次，一个同学拿来一份鸡的血液，说可能这只鸡患有鸡瘟，想拿到学校的显微镜下查一查。老师马上说你一定查不到。提出疑问：老师为什么这么说？

____________________________________ _____

2、禽流感是禽流行性感冒的简称，它是由禽流感病毒引起的传染病。科学家研究发现，目前在世界各国发生的禽流感致病病毒多为H5N1型甲型流感病毒。该病毒具有高致病性，会造成大批禽类死亡，而且已经出现了人被感染而死亡的现象。

（1）H5N1属于

病毒。它与噬菌体在结构上的共同特点是： 都没有

结构，只有

和。

（2）H5N1的寄主是。

3）有人说禽流感病毒即能寄生在鸡鹅鸭体内，又可以入侵人的体内，还可以感

染周围的树木，你如何看待这种说法？

4）小明家里所养的鸡全部因为禽流感而死亡，一家人围绕如何处理这些死鸡展开了讨论，并产生了分歧。奶奶说：“将死鸡洗干净后，留着吃。”爸爸说：“将死鸡腌制了吃。”妈妈说：“将死鸡切碎后，作饲料用。”小明则坚持要将死鸡用土深埋或用火烧毁。你赞同谁的意见？说明你的理由。

五、达标检测：

1．下列不具有细胞结构的生物是：（）

踏踏实实地学是你成功必经之路。鹤城中学生物学科教案

A.细菌； B.草履虫； C.SARS病毒； D.衣藻。

2、噬菌体是（）

A．动物病毒 B．植物病毒

C.细菌病毒

D．病菌

3、病毒繁殖的场所是：（）

A．水中； B.空气中； C.活细胞中； D.陆地上。

4、2007年，禽流感趁着春寒再度肆虐亚洲，我国也出现了禽流感病例。下列关于禽流感病毒的叙述，错误的是()A细胞微小、结构简单 B只能寄生在活的细胞内 C能使人禽致病 D能够利用它来防治禽流感

5、痢疾杆菌噬菌体属于（）

A．细菌病毒 B.动物病毒 C.植物病毒 D.人类病毒.6、下列叙述中不属于病毒特点的是：（）A.只能寄生在活细胞里； B.没有细胞结构；

C.离开活细胞通常会变成结晶体； D.个体较小，用光学显微镜才能看见。7、2009年4月份以来，由甲型H1N1病毒引起的流感在全球多国

暴发。下列对病毒描述正确的是（）

A.不含遗传物质

B.能独立生活

C.都会使人得病

D.没有细胞结构

8、下列关于病毒的叙述不正确的是（）

A.病毒比细菌小得多 B.病毒的形状多样，有球形、杆形、蝌蚪形等 C.病毒都没有细胞结构 D.病毒对人类都有害

9、下列哪一项不是人类利用病毒为人类服务的实例（）A.无脊椎动物病毒制成杀虫剂 B.给高烧病人注射青霉素

C.用噬菌体治疗烧伤病人的化脓性感染 D.给健康人注射流行性乙型脑炎疫苗

五、能力提升

1（2009锦州）下列生物中不具有细胞结构的是（）

A.EV71病毒 B.痢疾杆菌 C.草履虫 D.酵母菌

2.（2009山东）自今年3月份开始，一场突如其来的流感疫情开始在墨西哥发生并迅速蔓延到全球许多国家，经专家研究确定，甲型H1N1流感病毒是引起该疫情的病原体。下列各项中能表明该病毒属于生物的是

A.由有机物组成 B.具有细胞结构

C.能在动物体内繁殖 D.能使人体患病

3、根据你所掌握的有关信息资料回答下列问题：(1)引发非典型性肺炎的病微生物类型是()。A．细菌 B．真菌 C．病毒 D．微生物(2)非典型性肺炎在国际上的名称叫()。A．SAKS B．SRAS C．SARS D．SASE(3)该类生物的结构特点是()。

A．由单细胞组成 B．由原核细胞组成 C．由真核细胞组成 D．无细胞结构 踏踏实实地学是你成功必经之路。鹤城中学生物学科教案

(4)非型性肺炎一旦暴发，很难控制，原因在于它的传播途径是()A．水 B．空气 C．接触 D．食物 6 踏踏实实地学是你成功必经之路。