第一篇：细胞工程读书报告
细胞工程读书报告
论文名称：细胞工程在生物制药工业中的地位 作者：胡显文 肖成祖 军事医学科学院生物工程研究所 北京100071
摘要：细胞工程是生物制药工业中的关键技术, 它是利用动物细胞体外培养和扩增来生产生物产品, 或者作为发现和测试新药的工具。该文综述了细胞工程发展的历史、现状和未来, 以及它在生物制药领域中的应用和局限。
这篇文章没有什么高端的，难以理解的知识，读完它就感觉重新上了一遍 细胞工程似的。只是它还要更为直白的简诉了细胞工程的历史与作用。
文章一开头先是向我们解释了什么是细胞工程。而后介绍了细胞工程的诞生——1920到1950年的疫苗制造。1950-1985年期间生产了多种人用疫苗来预防脊髓灰质炎 麻疹 腮腺炎 风疹 乙肝和带状包疹等，并用于生产兽用疫苗。在使用了具有无限增殖潜力的细胞系后，疫苗生产得到飞跃。某些来自人体或动物体内的细胞，在一定条件下的体外培养后，可以获得无限增殖的潜力。用它们来生产疫苗可以大大降低实验动物的用量，更为重要的是, 用动物细胞体外大规模培养技术生产的疫苗可以保证质量, 因为所用的细胞性质均一, 经过严格的安全检验, 克服了动物个体间的差异产生的疫苗质量不稳定的问题, 并且大大降低了来自动物的病原体传染给使用者的可能性。1970 年代的两项划时代的科学发现——— 基因重组技术和杂交瘤技术大大促进了动物细胞技术的进步以及在工业领域的应用, 使得动物细胞大规模培养技术在生产疫苗, 尤其在生产天然的用于诊断和治疗疾病的生物制品中具有举足轻重的作用。
细胞工程的临床应用具有许多的优点，对病人安全，质量有保障，产量有保障。现今已有大量的疾病可以通过细胞工程技术来治疗。而细胞工程的未来将会成为医学治疗的基础，可以预计, 细胞工程技术将继续在新疫苗、诊断和治疗生物制品的生产, 以及生物学研究领域发挥重要作用, 而且将在药物定向释放系统、基因治疗、细胞治疗以及组织工程等极富希望的新的治疗方法中起到重要作用。目前正处于临床实验的369 种生物医药产品来看,除许多基因重组蛋白药物的生产需要动物细胞大规模培养技术外, 细胞治疗、基因治疗、单抗生产和疫苗生产等四大类生物治疗药物和方法, 要进入实质性医疗应用, 其核心都要依靠细胞工程技术。
总之, 动物细胞技术已经在疫苗的生产, 基因工程和抗体工程的药物筛选、开发和生产中发挥了关键作用。目前,动物细胞技术已不只是用于获得研究、诊断或治疗用的蛋白质产品, 其应用领域已扩展到细胞治疗、基因治疗和组织工程等新的治疗方法中。可以预见, 在二十一世纪的生物学世纪中, 无论在生物学基础研究, 还是在生物高技术产业化领域中, 都将继续提供动物细胞技术应用的舞台。
而我们作为二十一世纪的生物科学本科生，更应该好好学习这门课程。它在人类社会的作用通过这篇文章的内容已经深刻的印在我的心头。在将来的人类社会中，以生物技术为基础的医学药物，人体科技研究都将成为最受关注的热点。但这些光鲜背后。生物学庞大的知识体系与依靠大量实验才能得到的理论成果也曾令我望而却步。但是我想说，没有努力何来成果，越伟大的成就往往需要与之相匹配的付出，不会天上掉馅饼让你坐享其成。
所以在今后的生物专业学习生活中，必要更加努力。打好坚实的基础，才能在二十一世纪的生物学大潮中站稳脚跟。
043131班
庄欣德
第二篇：细胞工程
正交试验设计过程
对于单因素或两因素试验，因其因素少，试验的设计、实施与分析都比较简单。但在实际工作中，常常需要同时考察3个或3个以上的试验因素，若进行全面试验，则试验的规模将很大，往往因实验条件的限制而难于实施。正交试验设计就是安排多因素试验、寻求最优水平组合的一种高效率试验设计方法。
一、正交试验设计的概念及原理
1、正交试验设计的基本概念
正交试验设计是利用正交表来安排与分析多因素试验的一种设计方法。它是由试验因素的全部水平组合中，挑选部分有代表性的水平组合进行试验的，通过对这部分试验结果的分析了解全面试验的情况，找出最优的水平组合。
2、正交试验设计的基本原理
在试验安排中，每个因素在研究的范围内选几个水平，就好比在选优区内打上网格，如果网上的每个点都做试验，就是全面试验。如上例中，3个因素的选优区可以用一个立方体表示（图10-1），3个因素各取3个水平，把立方体划分成27个格点。若27个网格点都试验，就是全面试验。3因素3水平的全面试验水平组合数为33=27，4因素3水平的全面试验水平组合数为34=81，5因素3水平的全面试验水平组合数为35=243，这在科学试验中是有可能做不到的。正交设计就是从选优区全面试验点（水平组合）中挑选出有代表性的部分试验点来进行试验。
3、正交表及其基本性质
3.1 正交表
由于正交设计安排试验和分析试验结果都要用到正交表，因此，我们先对正交表作一介绍。常用的正交表已由数学工作者制定出来，供进行正交设计师选用（详见有关参考书）。正交表记号为La（bc），其中L代表正交表，a表示试验的次数即行数，b表示因素的水平数，c表示因素的个数即列数。
3.2 正交表的基本性质
3.2.1正交性
•任一列中，各水平都出现，且出项的次数相等；
• 任两列之间各种不同水平的所有可能组合都出现，且出现的次数相等；
3.2.2代表性
• 一方面，任一列的各水平都出现，使得部分试验中包括了所有因素的所有水平；任两列的所有水平组合都出现，使任意两因素间的试验组合为全面试验。另一方面，由于正交表的正交性，正交试验的试验点必然均衡地分布在全面试验点中，具有很强的代表性。因此，部分试验寻找的最优条件与全面试验所找的最优条件，应有一致的趋势。
3.2.3综合可比性
任一列的各水平出现的次数相等；任两列间所有水平组合出现次数相等，使得任一因素各水平的试验条件相同。这就保证了在每列因素各水平的效果中，最大限度地排除了其他因素的干扰。从而可以综合比较该因素不同水平对试验指标的影响情况。
根据以上特性，我们用正交表安排的试验，具有均衡分散和整齐可比的特点。•所谓均衡分散，是指用正交表挑选出来的各因素水平组合在全部水平组合中的分布是均匀的。
所谓均衡分散，是指用正交表挑选出来的各因素水平组合在全部水平组合中的分布是均匀的5、试验结果分析
• 分清各因素及其交互作用的主次顺序，分清哪个是主要因素，哪个是次要因素； 判断因素对试验指标影响的显著程度； 找出试验因素的优水平和试验范围内的最优组合，即试验因素各取什么水平时，试验指标最好； 分析因素与试验指标之间的关系，即当因素变化时，试验指标是如何变化的。找出指标随因素变化的规律和趋势，为进一步试验指明方向； 了解各因素之间的交互作用情况； 估计试验误差的大小。
5.1直观分析法——极差分析法
计算简便，直观，简单易懂，是正交试验结果分析最常用方法。
Rj为第j列因素的极差，反映了第j列因素水平波动时，试验指标的变动幅度。Rj越大，说明该因素对试验指标的影响越大。根据Rj大小，可以判断因素的主次顺序。
Kjm为第j列因素m水平所对应的试验指标和，kjm为Kjm平均值。由kjm大小可以判断第j列因素优水平和优组合。
5.1.1确定试验因素的优水平和最优水平组合分析A因素各水平对试验指标的影响。根据正交设计的特性，对A1、A2、A3、A4来说，四组试验的试验条件是完全一样的（综合可比性），可进行直接比较。如果因素A对试验指标无影响时，那么kA1、kA2、kA3、kA4应该相等。如果kA1、kA2、kA3、kA4不相等。说明，A因素的水平变动对试验结果有影响。因此，根据kA1、kA2、kA3、kA4的大小可以判断A1、A2、A3、A4对试验指标的影响大小。由于试验指标为产率，若kA2>kA3>kA1>kA4，所以可断定A2为A因素的优水平。
同理，可以计算并确定B、C、D因素的优水平。
5.1.1确定试验因素的优水平和最优水平组合分析A因素各水平对试验指标的影响。根据正交设计的特性，对A1、A2、A3、A4来说，四组试验的试验条件是完全一样的（综合可比性），可进行直接比较。如果因素A对试验指标无影响时，那么kA1、kA2、kA3、kA4应该相等。如果kA1、kA2、kA3、kA4不相等。说明，A因素的水平变动对试验结果有影响。因此，根据kA1、kA2、kA3、kA4的大小可以判断A1、A2、A3、A4对试验指标的影响大小。由于试验指标为产率，若kA2>kA3>kA1>kA4，所以可断定A2为A因素的优水平。
同理，可以计算并确定B、C、D因素的优水平。
5.1.2确定因素的主次顺序
根据极差Rj的大小，可以判断各因素对试验指标的影响主次。极差越大的，该因素对产率的影响越大，反之越小。
5.1.3绘制因素与指标趋势图
以各因素水平为横坐标，试验指标的平均值（kjm）为纵坐标，绘制因素与指标趋势图。由因素与指标趋势图可以更直观地看出试验指标随着因素水平的变化而变化的趋势，可为进一步试验指明方向。
最后得出试验的最优组合和次优组合。
5.2方差分析
极差分析法简单明了，通俗易懂，计算工作量少便于推广普及。但这种方法不能将试验中由于试验条件改变引起的数据波动同试验误差引起的数据波动区分开来，也就是说，不能区分因素各水平间对应的试验结果的差异究竟是由于因素水平不同引起的，还是由于试验误差引起的，无法估计试验误差的大小。此外，各因素对试验结果的影响大小无法给以精确的数量
估计，不能提出一个标准来判断所考察因素作用是否显著。为了弥补极差分析的缺陷，可采用方差分析。
方差分析基本思想是将数据的总变异分解成因素引起的变异和误差引起的变异两部分，构造F统计量，作F检验，即可判断因素作用是否显著。
方差分析基本思想是将数据的总变异分解成因素引起的变异和误差引起的变异两部分，构造F统计量，作F检验，即可判断因素作用是否显著
5.2.1 偏差平方和
1616
nS总（y
n1
2y）2
j2n12jynCTIV2j2CTG21616,Gn1yn,f总16115S因素IjIIIII4CT
Ij、IIj、IIIj、IVj分别表示第j列中1,2,3,4水平对应的试验结果之和。
总偏差平方和＝各列因素偏差平方和+误差偏差平方和。
5.2.2自由度
f总=试验的次数-1；f因=因素的水平数-1。
5.2.3方差
A因素的方差=A因素的偏差平方和/A因素的自由度
误差的方差=误差的偏差平方和/误差的自由度
5.2.4构造F统计量
5.2.5列方差分析表，作F检验
• 当FA>F0.01(f1，f2)时，说明该因子水平的改变，对试验结果有高度显著地影响，记作**。当F0.01(f1,f2)>FA>F0.05(f1,f2)时，说明该因子水平的改变，对试验结果有显著地影响，记作*。当F0.05(f1,f2)>FA>F0.10(f1,f2)时，说明该因子水平的改变，对试验结果有一定的影响，记作*-。
查表可得F0.01(f1，f2)、F0.05(f1,f2)、F0.10(f1,f2)的值。
6、验证试验结果
经结果分析得出最优生产条件，进行最优试验条件的验证。
7、结论
通过了验证试验，最后可以得出结论。
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S因素
F因素f因素S误差
f误差
第三篇：细胞工程总结
★绪论：
细胞工程：是应用细胞生物学和分子生物学方法，借助工程学的实验方法或技术，在细胞水平上研究改造生物遗传特性和生物学特征，以获得特定的细胞、细胞产品或新生物体有关理论和技术方法的学科。★第一章：
细胞全能性：一个生活细胞所具有得产生完整生物个体的潜在能力。（作为植物组织或器官的基本单位细胞，在离题培养条件下，实现分裂和分化并能发育成胚胎和完整植株的能力）
细胞分化：导致细胞形成不同结构，引起功能改变或潜在发育方式改变的过程。
脱分化：培养条件下使一个已分化的细胞回复到原始无分化状态或分生细胞状态的过程。
再分化：当细胞脱分化以后，无序生长的细胞及其愈伤组织要重新进入有序生长才能再生为个体的过程。
按细胞分裂能力植物细胞可分为3类：第一类始终保持分裂能力：茎尖、根尖及形成层细胞。第二类分化终端细胞，永远失去分裂能力：筛管、导管、气孔保卫细胞等特化细胞。第三类暂不分裂细胞（G0细胞）在受到外界刺激后可重新启动分裂：表皮细胞及各种薄壁细胞。离体培养中器官发生的方式：先芽后根、先根后芽、愈伤组织的不同部位形成芽和根，在通过维管组织的联系形成完整植株。
器官分化过程：第一阶段外植体经过诱导形成愈伤组织。第二阶段是“生长中心”（即分生组织，愈伤组织中形成器官的部位）形成。第三阶段器官原基及器官形成（生长中心部位形成不同的器官原基，进而分化出相应的组织和器官）。
体细胞胚：离题培养下没有经过受精过程，但经过了胚胎发育过程所形成的胚的类似物。
体细胞胚形成的途径：1直接途径就是从外植体某些部位直接诱导分化出体细胞胚，如：直接从子叶基部的表皮细胞或切口处产生体细胞胚。
2、间接途径是在固体培养中外植体先形成愈伤组织，再分化发育产生体细胞胚；悬浮培养中先产生胚性细胞团再形成体细胞胚。与器官发生形成个体的途径相比，体细胞胚发育再生植株的特点：一是体细胞胚具有双极性，二是体细胞胚形成后与母体的维管束系统联系较少，即出现生殖隔离现象。
体细胞胚的特点：
1、起源于非合子细胞
2、双极性细胞能同时允许根芽发生
3、存在生殖隔离
4、经历类似合子胚发育的各种胚共四个发育阶段
5、遗传稳定变异相对较小
6、由性细胞发育而来 ★第二章;
离体培养条件下遗传变异的特点：普遍性、局限性、嵌合性、生理适应性。
影响体细胞遗传与变异的因素：1供体植物（原有的倍性水平在培养细胞多倍化过程中起着重要作用）2培养基及培养方式（培养方式、激素以及其他附加成分均会诱导体细胞变异的发生）3继代培养的次数（继代时间越长继代次数愈多细胞变异的概率就越高）。★第三章：
实验室的组成：基本实验室，辅助实验室，实验室布局。其中基本实验室分为准备室（进行一切与实验有关的准备工作）接种室（进行材料的离体无菌操作）培养室（对离体材料进行控制条件下的培养）。辅助实验室又分细胞学实验室和生化分析实验室。
基本设备配置：常规设备（天平、冰箱、酸度计、离心机、加热器、纯水器、分装设备）、灭菌设备（高压蒸汽灭菌锅、干热消毒柜、过滤灭菌装置、喷雾消毒装置、紫外灯）、无菌操作设备（净化工作台、接种箱）、培养设备（培养架、培养箱、摇床、生物反应器）、其他设备。灭菌技术：培养基灭菌（高压蒸汽灭菌或过滤灭菌）玻璃器皿灭菌（湿热和干热灭菌）金属用具灭菌（使用前干热灭菌使用中浸泡在70%的酒精中，再以火焰将酒精烧去，冷却）操作环境灭菌（气体熏蒸或紫外线照射）
培养基成分：无机盐类、有机化合物、生长调节物质、水、其他附加成分。
外植体：指用于离体培养的活的植物组织，器官等材料。
外植体的来源有三种：生长在自然环境下的植物、有目的地培养在温室控制条件下的生长的植物、无菌环境下已经经过离体培养的植物。培养基组成：
1、无机盐类：大量元素、微量元素；
2、有机化合物：糖类、维生素、肌醇、腺嘌呤、氨基酸、其他复合成分；
3、生长调节物质：生长素类、细胞分裂素类、赤霉素类；
4、水；
5、其他附加成分：琼脂、活性炭。
外植体灭菌选择：
1、种子灭菌；
2、芽，叶片，茎等组织材料灭菌；
3、未成熟胚，子房，及花药灭菌。注意：灭菌后的材料应立即接种培养，否则会造成二次污染。★第四章：
快速繁殖：利用细胞的再生特性，在组织培养条件下加速繁殖材料的个体生产提高繁殖系数
植物脱毒和快繁的意义：1能够有效保持优良品种特性2生产无病毒种苗，防止品种退化3快速繁殖新品种，加速优良品种推广4节约耕地，提高农产品商品产出率5便于运输
离体繁殖：在人工控制的无菌条件下，使植物在人工培养基上繁殖的技术。
立体繁殖的一般技术环节：1无菌培养物的建立2培养物的增殖3器官分化4植株的形成和移栽
培养基的增殖方式：芽增殖，不定芽增殖，胚状体的增殖，愈伤组织增殖。
增值方式的选择：首先选择茎芽增殖，其次是不定芽，除非万不得已不宜选择愈伤组织增值方式。
花药培养：把发育到一定阶段的花药接种到人工培养基上，使其发育和分化成为植株的过程。
花粉培养：从花粉中分离出花粉粒使之成为分散的或游离的状态，通过培养使花粉粒脱分化进而发育成完整植株的过程。共同点：利用花粉染色体、单倍体性培养发育
不同点：1.花粉培养可以避免花药壁花丝和药隔等体细胞组织的干扰能更好地调节控制雄核发育的各种因子；2.花粉数量大具有单细胞单倍性和较高同步性等特点，可以从较少的花药获得大量的花粉植物，3.花粉培养还能为研究细胞分化条件胚胎发生和形态发生机理提供较为理想的实验系统，4花药培养的成功为深入展开原生质体的培养遗传操作和发育分子生物学的研究提供了有用的材料和良好的技术基础。
单培体培养的特点;1体细胞染色体数目减半；生长发育弱，体型小，各种器官明显减小；2各种器官明显减少；3雌雄配子严重败育，有的甚至不能进入有性世代。
单培应用潜力:1迅速获得纯和性材料，缩短育种年限2获得育种中间材料3与诱变育种结合可提高诱变率4作为遗传工程受体更有效5与体细胞融合6用作基础研究的各个领域。
胚培养的意义:1克服杂交育种中杂种胚的早期夭折2克服珠心胚的干扰，提高育种效率3理论研究的意义，胚培养可用于探讨植物器官发生过程的许多问题，研究胚发育中胚乳的作用和进行胚胎切割实验等。胚培养类型:成熟胚培养和幼胚培养。
幼胚培养的生长发育方式：1胚胎发育2早熟萌发3愈伤组织 胚乳发育类型：核型 细胞型 沼生目型 ★第五章
植物细胞培养：在离体条件下对植物单个细胞或小的细胞团进行培养使其增殖的技术。
细胞悬浮培养：将单个游离细胞或小细胞团在液体培养基中进行培养增殖的技术。
用于建立细胞悬浮培养的愈伤组织要求：有较好的松散型，使之在悬浮培养的起始阶段易打散；还必须必备较强的增殖和再生能力。满足细胞悬浮培养体系的三条件：1悬浮培养物分散性良好，细胞团较小一般在30到50个细胞以下；2均一性好，细胞形状和细胞团大小大致相同，悬浮系外观为大小均一的小颗粒，培养基清澈透亮，细胞色泽呈鲜艳的乳白或淡黄色；3细胞生长迅速，悬浮细胞的生长量一般2到3天甚至更短时间可增加一倍。
悬浮细胞培养的同步化:同一悬浮培养体系中的所有细胞都同时通过细胞周期的某一特定时期。
同步化方法：分选法，饥额法，抑制剂法，低温处理法。
单细胞培养方式:微室培养，看护培养，平板培养，其他单细胞培养技术。
生物反应器类型：搅拌式，气动式，固定化细胞。悬浮细胞的生长动态（S曲线）：延迟期、指数生长期、直线生长期、减缓期、静止期。当细胞生长进入减缓期时，就要及时继代。★第六章
原生质体：除去细胞壁后的裸露的球形细胞。
原生质体的特点：虽然没有了细胞壁，但仍能进行植物细胞的各种基本生命活动，如蛋白质和核酸的合成、光合作用、呼吸作用以及通过质膜的物质交换等。
原生质体纯化方法：
1、沉降法；优点是搜集方法方便，操作简单，原生质体丢失少。但这种方法在漂洗过程中易造成原生质的损害且纯度不够好，常存在少量脱壁不完全的细胞和破碎的原生质体。
2、飘浮法；优点是可收集较纯净的原生质，还可避免在离心纯化过程中因震荡撞击或挤压引起的原生质损伤或破裂，所用试剂简单，成本低，从而造成原生质体的获得率较低。缺点是原生质在数量上损失较多。
3、梯度离心法：优点：获得原生质体更为纯净。原生质活力测定原理：
方法:荧光素双醋酸酯染色法（FDA），酚藏花红染色法，荧光增白剂染色法(CFW)，伊凡蓝染色法。
原生质的应用：1原生质由于脱去了细胞壁并且在离体培养条件下能够实现细胞的全能性而且再生植株，可以作为一个良好的试验系统而用于细胞壁的形成与功能，质膜的结构与功能，细胞骨架细胞分化与脱分化等基础理论问题的研究。2原生质体容易摄取外缘DNA、染色体、细菌、细胞器和质粒等，从而为高等植物细胞水平和分子水平的遗传操作提供理想的实验体系。3原生质体还可应用于体细胞杂交，无性系变异及突变体的筛选，细胞器的分离等研究。4原生质体可以作为植物生理学，分子生物学，遗传学，病毒学，育种学，体细胞遗传学和实验生物学等学科的理论和应用研究提供重要的实验体系。5作为遗传转化的受体。★第七章
植物体细胞杂交:又称原生质体融合将植物不同属种甚至科间的原生质体通过人工方法诱导融合，然后进行离体培养，使其再生杂种植株的技术。
融合方法：
1、PGE诱导融合方法，优点是融合成本低，不需特殊设备；融合子产生的异核率较高，融合过程不受物种限制。缺点是融合过程繁琐，PEG可能对细胞有毒害作用。
2、电融合法：优点是不存在对细胞的毒害问题，融合效率高，融合技术操作简便。缺点是仪器昂贵，给融合技术的实际应用带来一定的限制。★第八章
人工种子的概念：任何一种人工种皮包被或裸露的具有形成完整植株能力的繁殖体。人工种子的分类：（根据包被的需要程度分）
1、裸露或休眠的繁殖体。
2、被人工种皮包被的繁殖体。
3、水凝胶包埋在包被的人工种皮的繁殖体。（根据繁殖体的类型分）1体细胞人工种子2非体细胞人工种子 人工种子的特点：一 重要的经济作物、粮食作物以及多年生经济林木的人工种子报道日益增多。二 是以微器官为繁殖体的报道呈增加趋势，其中包括微芽、微枝、原球茎、小鳞茎和小块茎等。人工种子组成的三个部分：繁殖体、人工胚乳和人工种皮。★第九章
玻璃化:是指液体转化为非晶体的固化过程。
玻璃化法：是将生物材料经极高密度的玻璃化溶液快速脱水后直接投入液氮，使生物材料连同玻璃化溶液发生玻璃化转变，进入玻璃态。玻璃化的途径：1 大幅度提高冷却速率 2 增加溶液浓度 影响超低温保存效果的因素：植物的基因型 抗冻性及器官、组织和细胞的年龄及生理状态。
冰冻保护剂的特点：易溶于水，对细胞无毒，容易从组织细胞中清除。冰冻保护剂的类型：渗透型冰冻保护剂、非渗透型冰冻保护剂。第十章
植物基因转化受体系统：用于转化的外植体通过组织培养途径及其它非组织培养途径，能高效、稳定的再生无性系，并能接受外源基因的整合，对用于转化选择的抗生素敏感的再生系统。植物基因转化受体系统的类型：1 经过愈伤组织的受体系统 2 不经过愈伤组织的受体系统 3 原生质体在生系统 4 细胞系及其体细胞胚受体系统 5 生殖细胞受体系统。★论述题：
植物细胞工程的应用：
1、在植物育种上的应用：将常规植物育种技术与植物组织培养技术相结合，可以获得常规技术难以获得或无法获得的种质材料。（快速获得特殊倍性材料、克服远源杂交不亲和、克服杂种胚早期夭折、导入外援基因、突变体筛选、种质资源保存）
2、种苗脱病毒与快速繁殖：利用茎尖培养脱毒，在组织培养条件下或在具有良好的病毒传播隔离条件下进行无病毒种苗的快速繁殖；利用组织培养技术，亦使许多传统上繁殖系数很低的有性繁殖植物得以快速繁殖，大大提高了经济效益。
3、细胞培养生产有用次生产物：植物几乎能生产人类所需要的一切天然有机化合物，如：蛋白质、脂肪、糖类、天然药物、香料、生物碱及其它活性物质。4在植物生物学和发育生物学研究中的应用：植物不同组织、细胞培养获得再生个体，及其在此过程中所形成的调控技术本身，进一步揭示里植物细胞全能性学说的本质和内涵，是对细胞生物学领域的重要贡献。
5、在植物遗传、生理生化以及植物病理等基础研究中心的应用：利用细胞途径进行染色体操作，可以有目的地创造植物附加系，代换系，易位系为染色体工程的研究开辟新途径；细胞培养和组织培养为研究植物生理活动提供了理想技术体系；在人工培养条件下对植物抗病性进行研究，免除了环境条件的干扰，使得结果更加真实可靠。人工种子的应用前景：
1、微器官人工种子可能最先用于无性繁殖植物：微器官如微芽、试管块茎和试管鳞茎等作为繁殖体时，成苗率高且出苗整齐，具有田间应用的可行性，同时，在立体培养中，可采用脱毒技术首先出去病毒后再进行人工种子生产，可大大提高无性繁殖植物种子的质量，避免天然种苗引起的病害传播。
二、人工种子可用于天然种子繁殖后代群体变异大的植物：不定芽试管苗繁殖体技术已在生产上显示了树体整齐的优越性，以微芽为繁殖体的人工种子技术已经建立，可大大降低生产成本，减少运输损耗。
三、以体细胞胚为繁殖体的应用的可能性体细胞胚胎发生在多种作物中已经进行过深入研究，然而迄今仍未达到实际应用的程度。总之，目前体细胞人工种子技术还不完全成熟，但它在生物学和社会经济发展中的潜在利用价值不容否认。
第四篇：民族团结细胞工程
乌达力克乡中心小学民族团结“细胞工程”
实施方案
乌达力克乡中心小学
2015/10/13
乌达力克乡中心小学民族团结“细胞工程”
实施方案
一、工作目标
稳步推进我校民族团结教育、在校园广泛开展民族团结小标兵、引导各族青少年从小玩在一起、学在一起、成长在一起，使民族团结意识深入到我校的各个细胞，汇聚成廷大正能量。
二、主要内容及实施措施
（一）组织结构
为做好“十项工程”建设工作根据学校实际建立了如下的领导小组：
组长：吐尼沙姑丽。阿布都热衣木（校长）副组长：再纳普姑丽。努尔买买提（德育主任）
赵明（教务副主任）
成员：热子万古丽，布买热木，努尔阿米娜，孙艳丽，曹志荣
（二）实施民族团结宣传教育“细胞工程”。
l 坚持每天升（降）国旗、唱国歌、国旗下讲话、向国旗献词宣誓。2、坚持“民族团结课程”进课表、落每周 2 课时。、坚持民族团给教育“首课 5分钟”制度，探索建立 “课前三分钟”制度。
4、每月组织一次“民族团结教育课”教研活动。
5、班主任组织本班学生每天唱一首民族团结主题歌曲。
6、每学期组织师生观看一部民族团结主题的红色电影。
7、每学期组织师生开展一次民族团结主题的讲座。
8、将每周五确定为“民族团结教育宣传日” 利用校园广播宣传民族团结模范人物先进事迹，发生的校园内外、学生身边的民族团结真人真事。
9、各学校立足实际，建立校内“民族团结教育基地”，展示介绍新疆民族团结模范人物（如：王燕娜、艾尼 · 居麦、“烤肉大叔”阿里木 · 哈力克、莎车“切糕王子”阿迪力·买买提吐热等）的事迹资料以班级为单位，每月组织学生参观一次，了解一位民族团结英模，并组织学生谈感受、谈体会、写心得。、利用家长学校，每学期给家长上一节特色民族团结教育课；组织一次民族团结主题宣传教育家长会。11、学校每学期每月至少召开一次民族团结主题党支部会议，专题研究、安排邵署本校民族团结教育工作。12、学校自行制作民族团结教育主题的宣传标语，在教职工办公电脑桌面、班班通设备待机界面、LED 显示屏上滚动播放。、学校结合买际，在校园内打造一条民族团结教育走廊。
14、每年 5 月，举行民族团结宣传教育师生签名活动。
15.我校有维吾尔族，汉族，回族，蒙古族，锡伯族等5个民族组成的一个民汉合校，对我校来说推进民族团结非常重要的，因此我校每月一次开展手拉手活动加强各民族教师的团结意识。（三）实施民族团结实践体验“细胞工程”。、每学年开展民族团结主题“十个一”活动。（1）开好一次民族团结主题班会（2）举行一次民族团结主题团队活动（3）开展一次民族团结主题的心理辅导体验活动（4）阅读一本民族团结教育的书籍（5）举办一次民族团结主题的征文比赛（6）组织一次民族团结王题手抄报、黑板报比赛（7）举办一场民族团结主题文艺活动（8）开展一次民族团结主题的学生社会实践活动（志愿服务、慰问演出等），（9）召开一次全校民族团结工作总结表彰会。
（三）实施民族团结活动文化“细胞工程”。
1、每年 5 月举办校级民族团结主题文艺汇演。
2、每年 4 月举办校级民族团结主题的校园红歌大赛。
3、结合“去极端化”工作，开展民族团结主题系列校园文化活动。
4、聘请法制副校长，落实每周一节法制课制度，每学期至少举办一次法制宣传教育讲座。
（四）实施民族团结评选创建“细胞工程”。
通过开展评选创建活动，促进民族团结教育“进班级、进教研组（办公室）。
1、在学生中开展“民族团结小标兵、民族团结示范班级”创建活动。将创建结果与“三好学生，优秀少先队员、优秀班干部和优秀班主任、优秀班级评选挂钩，予以优先考虑。、在教职工中开展“民族团结好老师、民族团结示范教研组（办公室）创建活动。将创建结果与教职工评先选优、职称晋升、绩效考核、师德师风考核挂钩，予以优先考虑。
第五篇：细胞工程总结
广州大学生命科学学院
08生工2班
黄永平
0820020044
细胞工程考点总结
名词解释：
细胞工程：是指以细胞为对象，应用生命科学理论，借助工程学原理与技术，有目的 地利用或改造生物遗传特性，以获得特定的细胞、组织产品或新型物种的一门综合性 科学技术。
细胞周期：通常将通过细胞分裂产生的新细胞的生长开始到下一次细胞分裂形成子细 胞结束为止所经历的过程称为细胞周期。
细胞全能性：细胞具有该个体全部遗传的可能性，在一定条件下如受精卵一样，有发育成完整个体的固有潜在能力。两层含义：细胞无论是体细胞还是生殖细胞，均具有该物种全部的遗传信息；每个细胞均具有发育成完整个体的潜在能力。
细胞分化：指细胞在形态、结构和功能上发生差异的过程，包括时间上和空间上的分化。实质是基因的差异表达。
细胞脱分化：又称去分化，是指分化的细胞失去特有的结构和功能变成具有未分化细胞特性的过程，即分化细胞在适当的条件下转变为胚性状态而重新获得分裂能力的过程。可采用人工诱导技术诱导体细胞脱分化。
细胞再分化：指在离体条件下，无序生长的脱分化细胞在适当的条件下重新进入有序生长和分化状态的过程。事实上是基因选择性表达与修饰的人工调控的过程。
植物组织培养：是将植物器官，组织，细胞和原生质体等外植体在离体无菌条件下培养在人工培养基上，在适当的条件下诱发长成完整植株的一种技术。
植物激素：是植物自然状态下产生的对生长发育有显著作用的微量有机物，包括生长素家族、细胞分裂素家族、赤霉素、乙烯和脱落酸。
愈伤组织：原指植物在受伤之后于伤口表面形成的一团薄壁细胞。植物组培中，指脱分化后的细胞经过细胞分裂，产生无组织结构，无明显极性的松散的细胞团。
体细胞胚：又叫胚状体，是指离体条件下没有经过受精过程而形成的胚胎类似物。其发生途径是指体细胞在离体培养的过程中经历了胚胎发育过程，起源于非合子细胞。发生实质是细胞再分化。
人工种子：含义为将植物离体培养产生的体细胞胚或芽包埋在含有营养成分和保护功能的人工胚乳和人工种皮中，在适宜条件下发芽出苗的颗粒体，即人工种子。
细胞核移植：是一种利用显微镜操作技术将一种动物的细胞核移入同种或异种动物的去核成熟细胞内的技术。用该方法所得到的动物为核质杂种。
胚胎分割：是指借助显微操作仪切割早期胚胎成多等份，再移植给受体，从而制造同卵多仔后代的技术，是一种广义上的动物克隆技术。
性别控制：是通过人工操作手段繁殖所需要性别后代的一门技术，其方法主要包括受精前控制、胚胎移植前控制。
试管动物：又叫体外受精动物，是指将供体的精子与卵子在体外受精，体外培养胚胎发育到一定阶段，通过胚胎移植移入受体完成发育出生的动物。
试管婴儿：指将卵子与精子在体外受精，培养发育成早期胚胎再植回母体子宫内发育出生的婴儿也就是采用体外受精联合胚胎移植技术培育的婴儿。
细胞重组：是指从活细胞中分离出细胞器及其组分，在体外进行重新装配成为具有生物活性的细胞的一种技术。
细胞拆和：把细胞质与细胞核分离开来，然后把不同来源的细胞质和细胞核相互结合，形成核质杂交细胞。
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黄永平
0820020044 细胞融合：又叫体细胞杂交，是指将不同来源的原生质体融合并使之分化再生，形成新物种或新品种的技术。
体细胞杂交：是指将不同来源的体细胞融合并使之分化再生、形成新品种的技术。胚胎嵌合：又称胚胎融合，是将两枚或两枚以上的胚胎（同种或异种动物）的部分或全部细胞混合在一起，使之发育成一个胚胎，然后移植到受体内继续发育成嵌合体后代的技术。雌核发育：或孤雌生殖，精核进入卵细胞后未与卵核融合而退化，卵核未经受精而单独发育成单倍体。远缘杂交中有时会出现此种现象。
植物细胞培养：在离体条件下，将分离的植物细胞通过继代培养增殖，获得大量细胞群体的一种技术。
细胞株：通过克隆化培养从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊遗传、生化性质或特异性标记的细胞群。
细胞系：是由原代培养经传代培养纯化，获得的能在体外生存的细胞群体，第一次传代培养后的细胞，即称之为细胞系。
单克隆抗体：是指经过免疫哺乳类动物单一的B淋巴细胞，要以分泌单一性抗体，这种抗体具有特异性和同质性。
干细胞：同时具有自我更新以及产生分化细胞的增殖性细胞。
组织工程：是利用生命科学、医学、工程学的原理与技术，利用细胞、生物材料、细胞因子实现组织修复或再生的一门技术。
细胞凋亡：也叫程序性细胞死亡，是机体维持环境稳定、有基因控制的细胞自主的有序性死亡。与细胞增殖、分化一样，都是正常的生理现象。这种细胞行为在数量控制和形态塑造中具有的意义。P27 染色体工程：按设计有计划削减、添加和代换同种或异种染色体从而达到定向改变遗传特性和选育新品种的一种技术。
胚胎移植：又称受精卵移植，是指将雌性动物的早期胚胎，或者通过体外受精及及其他方式得到的胚胎，移植到同种的、生理状态相同的其他雌性动物体内，使之继续发育为新个体的技术。
胚胎工程：是按照一定的设计，有计划地消减、添加或替换同种或异种染色体从而达到定向改变遗传特性和选育新品种的一种技术。
简答题或问答题：
1．细胞工程的应用：
细胞工程的应用领域非常广泛，主要包括：优质植物快速培育与繁殖；动物胚胎工程快速繁殖优良、濒危品种；利用动植物细胞培养生产活性产物、药物；新型动植物品种的培育；供医学器官修复或移植的组织工程；转基因动植物的生物反应器工程；珍稀动植物资源的保存与保护；在遗传学、发育学等领域的理论研究；在能源、环境保护等领域的应用。
2．为一农业生物技术企业设计一用于花卉快速繁殖组培工厂？画简图，并说明各室要求。
实验室一般由准备室、无菌间、操作间、培养室、分析室等几部分组成，其首要要求是工作环境和条件必须保证无微生物污染，环境清洁，各室的要求如下；
准备室；一般要与其他室分割开来，需放置药品柜、器械柜、灭菌锅、过滤除菌器、天平，加热设备等；要求宽敞明亮，通风条件好。
无菌间：进行无菌操作。要求封闭性好，无尘、干燥清洁，大小要合适，没有死角，能较长
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0820020044 时间保持无菌保持清洁，应防止空气对流，墙面和地面要求光滑，密封、安装滑门，定期用甲醛和高锰酸钾产生的蒸汽消毒，使用前开紫外光灯20min，更衣换鞋。严格的应包括更衣间、缓冲间和操作间3部分，缓冲间处于两者间 操作间：
培养室：对离体材料进行控制培养，能控制光照和温度，其次为防止微生物感染，应保持干燥和清洁，一般设置在室内较少走动的内侧，需放置摇床、二氧化碳培养箱、生化培养箱光照培养箱、人工气候箱培养架等； 分析室：
3．分析比较细胞培养不同操作方式的优缺点。
分批式培养方式的优点有操作简单，培养周期短，能直观反映细胞生长代谢过程，生产规模放大比较容易，其缺点有不能控制底物浓度、细胞容易老化、生长周期短、效率低等；流加式培养的优点有可合理充足补充营养、减少产物反馈抑制、排除有害代谢物积累对细胞的损伤及细胞不易老化，另外还能避免一次性投料过多，改善培养液流体性质，延长指数生长期，其缺点是操作较麻烦，受生物反应器容积的限制等；半连续式培养能使细胞持续指数生长，可多次收获并且操作简便，生产效率高，其缺点是菌种易老化；连续式培养可使细胞在恒定状态下生长，细胞生长速率可基本保持不变，持续指数增长，但其缺点是收获细胞浓度不高、细胞分裂快、易变异、易污染等；灌流式培养可维持较高的细胞密度，使细胞处于较稳定的营养环境中，有害代谢废物积累低，反应速率易控制，培养周期长，目标产品回收率高，其缺点是仪器设备要求较高，操作较复杂等。
4．植物快速繁殖的技术路线：(P81)1）采集材料：①受精卵/②发育中的分生组织细胞（分生组织/根尖/嫩茎/幼叶/花等）/③雌雄配子及单倍体细胞；2）消毒材料：①自来水洗净然后用无菌纱布吸干水分，切成小块/②无菌环境中用70%酒精浸泡30~60秒/③材料移入漂白粉饱和液或0.01%升汞（HgCl2）水中消毒10min/④无菌水冲洗三四次；3）制备外植体：无菌环境下，用无菌刀剥去材料的鳞片、嫩枝的外皮或种皮胚乳（叶片不需），切成0.2~0.5cm厚的小片，操作中不可用手触碰；4）接种和培养：①接种：无菌环境下将切好的外植体立即接种在培养基上，每瓶4~10个②封口：接种后瓶、管用无菌药棉或盖封口，培养皿用无菌胶带封口③温度：培养基大多应保持在25℃左右，但要因花卉种类及材料部位不同而区别对待④增殖：在新梢等形成后需要继代培养；5）根的诱导：继代培养形成的不定芽和侧芽一般没有根，必须转到生根培养基上进行生根培养，一个月后即可获得健壮根系；6）组培苗的练苗移植：试管苗进入自然环境前必须进行炼苗，一般先将培养容器打开在室内自然光照3天，然后取出小苗，自来水洗净根须，栽入消毒过的基质，移植前适当遮阴，加强水分管理，保持较高的湿度，但基质不宜过湿，以防烂苗。
5．请分析植物激素在组织培养中的作用？
（答题要点：（1）、每种植物生长调节剂各自的作用。（2）、相对浓度）
植物激素：是植物自然状态下产生的、对生长发育有显著作用的微量有机物。
植物激素包括：生长素家族、细胞分裂家族、赤霉素、乙烯和生长抑制素。其中前三者是正向激素，后两者为负向激素。
生长素 植物体内的生长素是由色氨酸通过一系列中间产物形成的，主要途径是通过吲哚乙
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0820020044 酸。作用：在植物组织培养中，生长素主要用于诱导愈伤组织形成、诱导根的分化、促进细胞分裂、伸长生长。
Eg：吲哚乙酸：促进生长点细胞的分裂和非生长点细胞的伸长，诱导根原基的发生和根系的生成，促进雌花的分化和果实的成熟。
Eg：萘乙酸为代表的人工合成生长调节剂是一种生长素合成前体。
细胞分裂素 大多是嘌呤族衍生物，细胞生理素的生理作用主要是引起细胞分裂，诱导芽的形成和促进芽的生长。
赤霉素：广泛存在于植物体内，能促进细胞生长，与生长素一起可诱导细胞分化。经常使用的人工合成分裂素：6-苄氨基嘌呤（BA）、6-呋喃氨基嘌呤（又称激动素，KT）天然细胞分裂素:玉米素
分裂素和生长素通常一起使用，来促使细胞分裂、生长，一般在培养基中生长素与细胞分裂素的比值高时可诱导外植体生根，比值低时，可诱导外植体出芽，而比值适中时，愈伤组织增殖。
6、植物组织培养中出现的问题：
⑴玻璃化问题，即出现一些半透明状的畸形试管植物，该现象由于能引起植物的组织结构和生理功能异常，因此分化能力低，难以增殖成芽，也难以生根成苗，已成组织培养的一大问题；玻璃化现象主要是适应性的生理问题，其主要的防治措施有；适当提高光照强度，适当降低培养基中NH4﹢浓度，注意通气，注意细胞分裂素和生长素的配合以及激素和K+之间的配合使用，及适当进行低温处理等；⑵褐变问题，也是一种植物组织培养中常见的现象，已成为植物组织培养发展的一大障碍，防止或缓解褐变的方法有：选择适宜的外植体（生长旺盛时期的材料）；选择适宜的培养条件（酸性环境）；细胞筛选和材料的预处理，主要是剔除是褐变的细胞，减少材料醌类物质的产生等；使用抑制剂和吸附剂；⑶微生物污染问题；⑷其他问题，如研究水平，难培养植物，品种退化问题等。
7．什么是植物胚胎培养？植物胚胎培养有怎样的意义？
植物胚胎培养是指将植物的胚及具胚器官（如子房、胚珠、胚乳）在离体条件下培养，使之发育形成幼苗的过程。其意义有：克服杂种胚的败育，获得稀有杂种；获得单倍体和多倍体；打破种子休眠，促进胚萌发；快速繁殖良种，缩短育种周期；克服种子生活力低下和自然不育性，提高种子发芽率；提高后代抗性，改良品质；用于种子活力快速测定、种质资源的搜集和保存等。
8．植物脱毒的原理、方法：
答案
一、主要有物理、化学和生物三种方法；物理方法有高温处理和低温处理两种方法，高温处理又称热疗法，原理是有些病毒对热不稳定，植物基本不受伤害，得该方法只对部分病毒有效且高温处理容易使植物材料受热枯死，造成损失；低温处理又称冷疗法，原理是降低温度能使病毒活力下降，但该法用时长。化学方法是利用化学药品（嘌呤、嘧啶类似物、氨基酸、抗生素等）处理患病植物以抑制植物体内病毒的复制，但该法一些化学物质不能使病毒失活，且对植物有毒害；生物方法，其原理是病毒不会侵染植物的每一部位，因此选择不带病毒的外植体来再生植株就可以达到去病毒的目的；有茎尖培养，通常取0.2~0.5mm茎尖，该法周期短、效率高但培养基及剥离技术要求较高；微体嫁接法，适用于茎尖培养脱毒生根困难、不能形成完整植株的植物；另外，还有愈伤组织诱导脱毒、珠心胚培养法和花药培养脱毒。答案
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0820020044 1物理方法：a.高温处理.去除病毒的原理是一些病毒对热不稳定，在高于常温的温度下（35-40度）即钝化失火，繁殖力下降，失去侵染能力，而植物基本不受伤害。包括温汤处理（50度热水中处理数分钟至几小时）
热风处理（35-40度处理几十分钟至数月）
a.低温处理
原理：降低温度能使病毒代谢能力下降，活力下降。
2.化学方法：原理:利用嘌呤和嘧啶类似物、氨基酸、抗生素等化学药品处理患病植物可以抑制植物体内病毒的复制。3.生物方法 原理：病毒并不会浸染植物的每一个部位，因此选择不带病毒的外植株来再生植株就可以达到祛病毒的目的。
a.茎尖培养
最有效的植物脱毒方法，具有周期短、效率高的特点。原理：因为茎尖区无维管束，病毒难以进入。
b.微体嫁接法 原理：将极小的茎尖嫁接到不带病毒的种子实生苗砧木上得到无毒苗。c.愈伤组织诱导脱毒
原理：由无病毒细胞的产生的愈伤组织可以获得无病毒苗。
d.珠心胚培养法：原理：通过珠心胚培养可以获得无毒的再生植株，同时又保存了母株的遗传特性。
e.花药培养脱毒
原理：花药培养可产生无病毒植株。
9．脱毒植物的鉴定：
直接检测法（观察症状）
指示植物法，指采用对某种病毒反应敏感、症状明显的植物来检测病毒，指示植物一旦
1摩擦接种（与金刚砂混合）感染病毒就会在叶片或全株上表现出特有的病斑，具体方法有○和○2嫁接法；○3电镜法，用电子显微镜观察样品材料有无病毒存在，并可同时鉴定病毒颗粒大小、形状和结构；○4抗血清检测法，病毒携带抗原，注射进动物体内会在血清中产生抗体得到抗血清，不同病毒产生的抗血清具有高度的特异性和专一性；○5分子检测技术，利用已知病毒的核苷酸序列设计引物，采用PCR技术体外扩增病毒的DNA片段，或者通过探针杂交等分子技术检测。
10．什么是试管动物？试管动物培育一般经过哪几个步骤？其繁殖技术的关键问题有哪些？
试管动物，也称体外受精动物，是指将供体的精子和卵子在体外受精，体外培养胚胎发育到一定阶段，通过胚胎移植移入受体完成发育出生的动物。其培育步骤一般经过以下五个步骤：⑴精子采集与体外获能，卵子采集与成熟培养；⑵体外受精；⑶重组胚激活与体外培养；⑷胚胎移植；⑸体内发育、出生。关键问题有：①精子的采集、获能和卵子的采集与成熟培养；②体外受精问题；③胚胎体外培养中的发育阻滞问题；④胚胎移植成活率低的问题；
11．胚胎细胞克隆动物与体细胞克隆动物各有什么优势？
胚胎细胞克隆动物的优势有：⑴受体、供体均是胚胎细胞，胚胎细胞分化程度较低，成功率较高；⑵核供体取自同一胚胎，因而可能一次性繁殖性状相同或高度相似的动物。
体细胞克隆动物的优势有；⑴体细胞数量丰富，易于获得；⑵被获取核供体的动物不受性别限制，年龄不要求在能产生胚胎的年限。
12．胚胎工程动物培育的关键技术环节有哪些？如何控制成功率？
关键技术环节有：体外受精、人工受精、核移植和胚胎移植四个环节；要控制成功率，首先要对各个环节技术熟悉了解及掌握，即深化理论知识；另外在各个环节总结成功的经验，第5页，共9页 广州大学生命科学学院
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0820020044 如在胚胎移植上，应选择与供体发情周期同步的、生殖道正常、无疾病、繁殖史良好的雌性动物为受体接受胚胎移植；最后，还应加强术后护理等，这样将可提高成功率，总之，要控制成功率，应对各个环节的相关技术、应注意的问题进行精细控制，这样才能控制成功率。
13．植物细胞融合的过程：
首先取材（生长旺盛、生命力强的组织）并制备原生质体，即去除细胞壁，去除的方法有机械去除法和生物酶解法，然后纯化原生质体，纯化的方法有离心法（原生质体沉于离心管底部）、漂浮法和离心和漂浮结合法；接着是诱导细胞融合，诱导的方法分为生物法、化学法和物理法；生物法是利用病毒诱导细胞融合（病毒能与宿主细胞膜直接融合，打破两个细胞膜的隔阂引发细胞质的交流）该法需在适当pH下，有足够量的Ca2+存在；化学法是指采用化学诱导剂促使细胞融合的方法，常用的诱导剂有：NaNO3、高pH的高浓度Ca2+、聚乙二醇（PEG）等；物理法，常采用的方法是电融合诱导法，是利用电场来诱导细胞彼此连接成串，再施加瞬间强脉冲促使质膜发生可逆性电击穿，促进细胞融合的技术。
14．怎样获得植物的单倍体、三倍体和四倍体？
植物四倍体获得的方法：因秋水仙素能特异性地与细胞中的微管蛋白分子结合从而使纺锤丝合成受阻，最终形成染色体加倍的核，故可用秋水仙素来获得四倍体，其具体方法是根据不同植物对秋水仙素的敏感性不同调整秋水仙素浓度，其有效含量一般在0.01%~0.4%，以0.2%左右最为常用，然后，以适宜浓度处理分裂能力强的细胞，处理方法包括浸染法、涂抹法等，浸染法是先将种子浸种催芽，待胚根露白时把种子浸在秋水仙素溶液内24h，浓度高时处理时间可相应短些，且对于幼嫩而分裂迅速的组织也可短些，且处理时温度应在18~25℃之间；另外还可用细胞松弛素B来处理。单倍体的获得方法是：花药和花粉培养，具体方法是先花药制备与培养：取特定时期（单核期）未开放的花蕾，低温处理（放在4℃冰箱预处理）3~5天，然后用70%乙醇擦拭花蕾表面，在无菌条件下剥取花粉，接种于适当的培养基中，于25℃光照条件下培养，然后通过分离、过筛、清洗获得花粉外植体，最后经过植株再生发育成单倍体植株。获得植物三倍体的方法是，用以上获得四倍体的方法得到四倍体后，再以二倍体作父本，与四倍体母本植株杂交便可获得。
15．鱼的三倍体的获得方法：（如何用细胞工程的方法获得动物的三倍体？）
（1）温度休克法获得。温度休克法包括冷休克法（0~5℃）和热休克法（30℃）两种其关键是能否成功地阻止细胞分裂或卵子第二极体的释放。一般来说冷水性鱼类应用热休克法好，温水性鱼类用冷休克法效果较好。（2）水静压法，指采用较高的水静压（如65kg/gm2）可抑制卵子第二极体的释放或细胞分裂，产生多倍体，处理时间较短，一般在3~5min。（3）体细胞杂交，即通过四倍体个体与二倍体个体杂交而获得。
如何利用细胞工程方法获得鱼类或者是贝类的三倍体，四倍体。
生物学:主要通过杂交尤其种间杂交获得异源多倍体
物理学:温度休克法、水静压法和高盐高碱法等
温度休克法原理阻止第二次成熟分裂或第二极体的排出
水静压法原理
抑制第二极体的放出或第一次卵裂产生多倍体
化学:化学物质可用来阻止第二极体的排出或受精卵的有丝分裂而产生3n或4n，如细胞松弛素B。细胞松弛素Ｂ原理能抑制肌动蛋白聚合微丝，从而抑制细胞质分裂。
三倍体---原理，四倍体---原理？
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0820020044 如何鉴定得到了三倍体/四倍体？
16．什么是植物细胞培养？其特点有哪些？
植物细胞培养是在离体条件下，将分离的植物细胞通过继代培养增殖，获得大量细胞群体的一种技术。其特点有：①D10-200um,较微生物大30-100倍，②以一定细胞数的非匀相细胞团形式存在，很少单一细胞悬浮生长；③具纤维素细胞壁和大液泡，很容易被剪切力损伤；④生长速度慢,操作周期长,分批培养需2-3周,半连续/连续培养则2-3个月；⑤培养基成分丰富/复杂，适合微生物生长，防止污染更困难；⑥一般需光照光合, O2 和 CO2的含量与传递对细胞培养影响较大等特点。
17．什么是植物细胞固定化培养，它有什么优点？
植物细胞固定化培养是将游离的细胞包埋在惰性支持物内部或贴附在它的表面多糖或多聚化合物置备成的网状支持物中、培养液呈流动状态进行无菌培养的技术。其方法有：吸附、交联、共价结合和包埋等。其优点有：①细胞包埋后所受剪切力损伤减小，维持了细胞稳定性，适于植物细胞传统生物反应器的大规模培养；②细胞密度较高时不会改变培养液流体性质，利于传质；③次级代谢产物在细胞停长后才大量合成，固定化可将细胞生长与产物合成2个阶段分开；④细胞生长较缓慢，利于次生代谢产物积累；⑤增加细胞之间接触，促进了细胞间信息传递，利于代谢产物合成；⑥固定化细胞可反复使用，可利于连续培养和收获产物，降低成本等优点。
18．什么是次级代谢产物，如何提高植物次级代谢产物？
次级代谢产物上通过次级代谢合成的产物，大多是分子结构比较复杂的小分子化合物，如抗生素、激素、生物碱、毒素等。提高次级代谢产物产量需要考虑的因素有；细胞株、培养工艺、培养技术及培养设备等，具体是选育优良的细胞株，培养时保证培养基和培养条件符合细胞生长和代谢的需要，通过添加次级代谢产物的前体物质进行调控，还可以通过添加表面活性剂增加细胞膜的通透性等。
限制植物细胞培养大规模生产有价值次级代谢产物的影响因素
1.生物因素
（1）细胞株（2）细胞凋亡（3）细胞团（4）生物合成机制 2.化学因素
（1）营养盐（2）前体（3）诱导子（4）反馈抑制 3.物理因素
主要包括：光照、温度、通气、搅拌、pH值等。（1）光照（2）温度（3）pH 4.工程技术问题
（1）培养液的流变特性、（2）气体传递（3）搅拌与剪切力（4）泡沫与器壁表面粘附性
19．毛状根培养生产次级代谢产物：
毛状根又名发状根，是植株或组织、器官受到发根农杆菌感染后而形成的类似头发一样的根组织。利用毛状根培养可以克服天然根培养存在的难培养等问题与不足。将发根农根杆菌含有的Ri质粒中的T-DNA片段整合到植物细胞的DNA上诱导出毛状根；常用的毛状根诱导的方法有外植体接种法（共同培养2~3d）、茎秆接种法（植株的茎尖、叶片切去，划出伤口，将发根农杆菌接种在伤口处培养）和原生质体—农杆菌共培养法（培养3~5d）。毛状根培养的优点有；生长快，易培养；毛状根分化程度高，产生次级代谢产物能力强；通过
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0820020044 T-DNA改造，易于采用基因工程途径提高次级代谢产物产量等。
20．微藻特点与分类：
微藻分为原核藻类和真核藻类，现国内外已可以大量培养的微藻分别属于蓝藻门、绿藻门、金藻门和红藻门。微藻的特点有：①利用太阳能和CO2通过光合作用生产有机物，生长速度快，效率高，耗能低；②微藻提取有效成分需要复杂的前处理；③种类多，许多微藻可产生有生物活性的化合物；④可能利用贫瘠土地、盐碱地等极端环境；⑤微藻培养简单，容易产业化等。
21．动物细胞体外培养的特点有哪些？需要哪些条件？
培养特点有：①动物细胞大，无细胞壁，对机械搅拌或剪切力敏感；②动物细胞生长缓慢，易受污染；③正常细胞培养的世代数有限，只有癌细胞和发生转化的细胞才能无限生长下去；④动物细胞间主要以聚集体形式存在，大多需要贴附在载体表面才能生长等。动物细胞体外培养需要的条件有：①培养基，应包括细胞各种代谢所需的各种成分；②需平衡盐溶液、培养基pH调整液、细胞消化液和抗生素液等；③生长条件，包括温度、pH、渗透压、气体等；④培养工具，如GO2培养箱、相差显微镜、培养皿、培养瓶等。
22．动物细胞大规模培养的方法有哪些？各自主要是为了解决什么问题？
动物细胞大规模培养的方法及其为了解决的问题是：⑴转瓶（管）培养系统，为了解决从小量培养到大规模培养的过度问题；⑵微载体培养，为摆脱传统的培养瓶（管）培养限制，实现三维立体贴附培养；⑶中空纤维生物反应器培养，为改善传统培养方法的气体、营养物质及水分等物质的通透性使水分子、营养物质和气体可以透过，细胞也能在上面贴附生长；⑷大规模培养方式，常采用的是流加式培养和灌流式培养的操作方式，该法是为使细胞持续生长到较高的密度，目标产品达到较高水平。
23．动物细胞原代培养及技术要点：
接种组织块直接长出单层细胞或将组织分散成单外细胞再进行培养，在首次传代前的培养称为原代培养。原代培养的优点有：在一定程度上能反映体内的形态学特征，原代细胞是很好的实验材料，原代培养也是建立各种细胞系（株）必经的阶段。
原代培养取材时需要注意的几个问题是：①选择性取材，应选分化程度低、容易培养的组织，如胚胎、新生组织等；②取材要注意使用新鲜材料和保鲜，取材后一般6h内分离细胞；③取材应该严格无菌；④防止细胞机械损伤；⑤避免组织干燥等。动物细胞原代培养有组织块原代培养和细胞原代培养。
24．与常规细胞工程技术相比，转基因技术在生物遗传改造方面有什么特点？
转基因技术是通过人工方式将外源基因整合到生物体基因组内，并使该转基因生物能稳定地将此基因遗传给后代的技术。其与常规细胞工程技术相比，在生物遗传改造方面的特点有：可实现不同种类生物之间的基因重组，可使人类根据自己的意愿定向地改造生物的遗传特性，创造新的生命类型等。
25．乳腺生物反应器：
乳腺生物反应器是将外源基因置于乳腺特异性调节序列之下，使之在乳腺中表达，然后通过回收乳汁获得有重要价值的生物活性蛋白的技术。其在生产药用蛋白上具有巨大的优势，主要表现在：①生产出的药用蛋白与天然蛋白质的活性一致；②动物乳腺不仅能大量持续地表达蛋白质，可维持所表达蛋白质的稳定性，而且可通过诱导系统调控表达；③成本低，第8页，共9页 广州大学生命科学学院
08生工2班
黄永平
0820020044 安全性可靠；④药物分离纯化工艺简便等。
26．干细胞有什么特征？如何获得？
特性：具有自我维持与自我更新的能力，具有多方向分化的潜能，即可发育成各种胚胎组织的细胞，或可分化为本系统各谱系的细胞，干细胞分裂能力可维持相当长时间，有的可保存终生，既有生理性的更新能力，也具有对损伤与疾病导致的反应与修复能力。形态特征：通常呈圆形或椭圆形，体积小，核质比例大，具有较高的端粒酶活性，因此具有较强的增殖能力。增殖缓慢，质稳性。
获得的方法：可从早期胚胎内生细胞团或原始生殖细胞也可从自发或诱发的畸胎细胞中分离得到，也可通过核移植方法获得（？）。伦理方面的问题？？
27．目前，胚胎干细胞研究存在的问题：
有：⑴来源限制；⑵体外培养困难；⑶安全性不高；⑷伦理道德问题等。
28．什么叫组织工程，其基本要素有哪些？组织工程有什么作用？
组织工程是利用生命科学、医学、工程学的原理与技术，利用细胞、生物材料、细胞因子实现组织修复或再生的一门技术。其基本要素包括：种子细胞、支架材料、细胞因子三个。其作用主要表现在临床应用上，如用组织工程技术生产一些骨、肌腱、血管，人工肝等器官为医疗提供原料等。
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