第一篇：工艺安全管理发展论文
摘要：工艺安全管理是通过对化工工艺危害和风险的识别、分析、评价和处理，从而避免与化工工艺相关的伤害和事故的管理流程。本文介绍了工艺安全管理的发展过程，了解国内外工艺安全体系的完善历程，对我国工艺安全管理的发展提出建议。
关键词：工艺安全管理；基本要素；安全标准
1.发展历程
随着科学技术的发展，化学品种类变得越来越多，而且危险性也变的越来越大，同时，各个企业和工厂的操作工艺和条件变得越来越苛刻。上世纪末发生了一系列对人类和环境具有影响的重大安全事故，这些事故引起了各国政府对化工企业和工厂的工艺安全管理的思考，一系列关于企业安全的法律法规得以出台。1984年，印度博帕尔发生严重的毒气泄漏事件，为此美国专门成立了化工过程安全中心，主要帮助企业降低化工事故发生的风险。上世纪90年代美国职业安全健康管理局发布了高危化学品工艺安全管理系统的法律法规。1996年，为加强对事故风险的控制，美国环境保护局又将环境与公众安全纳入了监管范围。从上世纪80年代开始，工艺安全管理体系（PSM）在发达国家变的逐渐完善，PSM体系已经成为了化工企业的工艺安全管理的标准。
2.发达国家PSM实施情况
美国职业安全管理局为PSM体系规定了14个基本要素（如右图所示）。美国化学工程师协会化学工艺安全中心为其规定了12个基本要素（如下图所示）。这些要素大部分都是相同的，都是为采取有效防范措施以规避工艺安全潜在的危险隐患，进而使企业安全管理水平得到提高。
3.国内安全标准化体系
我国的工艺安全体系发展起步较晚，改革开放以来，我国工艺水平有了很大的提高，化工行业得到蓬勃发展，但是也发生了很多安全管理事故。为了有效遏制化学事故的发生，国家安全生产监督管理总局规定了危险化学品从业单位安全标准化通用规范（AQ3013－2008）。明确了高危化学品生产使用企业实行工艺安全标准化的总体原则、过程以及要求，它被使用于指导高危化学品生产和使用单位安全标准化系列的编制和实施，适用于国内高危化学品生产、储存和使用的企业。我国安全标准化体系包含了10个关键要素如下图所示）我国安全标准化体系的10个要素包含了PSM体系里所有的基本要素，与PSM体系是一个有机统一的整体。
4.安全管理案例分析
阿尔法平台大爆炸事故（规程不完善）。1988年7月6号英国北海阿尔法平台天然气生产平台发生爆炸，事故共造成176人死亡，大火燃烧7天才被扑灭。造成人员巨大伤亡的一个主要原因就是受当时认识的限制，人们对阿尔法存在的风险认识不足，平台设计工程师认为平台的钢铁结构足以承受任何重大事故的发生。石油公司认为即使事故发生，工人也有足够的时间坐直升机安全逃生，所以，当时认为人们在平台上的风险是可以控制的，对人员救援的风险重点是预防直升机坠毁。规程要求一旦发生安全事故，员工必须在宿舍区等待直升机来救援。正是这个规定导致了严重的后果，平台上的人们等待直升机的救援，耽误了逃生时间，从而酿成严重后果。从事故中可以看到，正是因为工艺安全管理规程的不完善，人们对潜在风险认识不足，对事故发生后安全逃生做出错误判断，从而酿成重大伤亡，因此推行工艺安全管理势在必行。
5.我国推行工艺安全管理注意事项
首先，我们应该充分认识到传统工艺安全与工艺安全管理的区别。传统的安全主要是指使用各类防护用品和建立相应的规章制度来保护作业人员，防止事故的发生。工艺安全管理强调采用科学系统的方法对工艺危害进行辨识，根据工厂不同生命周期的的特点采取不同的方式来辨别潜在的危害，并以此为基础，设法消除危害以避免事故的发生。工艺安全管理应该重视以往的经验教训，强调严格执行相关的设计标准和规范。工艺安全管理现在已经发展成为一门专业学科，所以在推行的过程中，需要政府和企业的大力支持。工艺安全管理最终是由人来实际操作的，所以我们需要提高管理人员和作业人员的安全管理意识和安全操作规范。工艺安全管理信息是提高工艺安全管理水平的重要条件之一，它是工艺安全管理的基础，是工艺安全管理的第一步。我们需要完善的技术标准作为工艺安全管理的坚实后盾。同时我们应该定期进行检查与自评，时刻保障工艺管理的时效性。
6.建议
由工艺安全管理要素可以看出，国内外所称的安全管理实际上是一个大概念，管理要素贯穿于生产的全过程。因此，在推广工艺安全管理体系时不能将其生搬硬套入我们的管理组织中。我们应该积极借鉴和吸收发达国家的工艺管理经验，大力发展我国的安全标准化体系，帮助国内企业识别、把控高危工艺中的风险，发展和完善国内企业的工艺安全标准化体系。
【参考文献】
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第二篇：工艺管理
轿车二厂总装车间工艺培训材料
1.什么叫做工艺?包括哪些内容?
工艺是利用生产工具对各种原材料、半成品进行加工或处理，最后使成为成品的方法，它是人类在劳动中积累起来并经过总结的操作技术经验。
工艺工作包括工艺管理、工艺技术、工艺装备和工艺人员培训等内容。
2.什么叫工艺管理?工艺管理的基本任务？工艺管理包括哪些内容？
工艺管理：科学地计划、组织和控制各项工艺工作的全过程。
工艺管理的基本任务：在一定生产条件下，应用现代管理科学理论，对各项工艺工作进行计划、组织和
控制，使之按一定的原则、程序和方法协调有效地进行。
工艺管理包括：管理体系，工艺文件，工艺纪律，现场管理，职工素质及工艺人员积极性，加强工艺管
理后的成效。
3.什么是工艺文件？工艺文件的内容？
工艺文件：指导工人操作和用于生产、工艺管理等的各种技术文件。
工艺文件分类：1）作业方法。装配顺序书、作业指导书、检验作业指导书、工艺控制、各类清单、工
艺路线和物流、定置、定量、文明生产等。
2）作业标准。操作规程、工艺标准、质量标准、工艺规范等。
3）定额标准。工时定额、材料定额。
4.工艺文件编制时必须遵从的原则?
工艺文件编制必须遵从：1）正确性；2）完整性，工艺文件和种类要齐全，内容要完整；3）统一性，工艺文件应按规定的程序办理更改手续，并及时进行更改；保证工艺文件的一
致性：装配顺序书与产品图样一致，装配顺序书与工具清单一致，装配顺序书
与现场一致，各使用点之间的工艺文件一致。
5.什么叫做工艺改进？工艺改进的内容、目的？
生产过程中，存在很多影响产品质量的问题，经过对这些问题的分析，找出影响质量的原因，同时采取一定的措施对工艺加以改进，从而达到改进质量、提高质量的目的，这个过程叫工艺改进。
工艺改进的内容包括：提高产品质量，对目前生产中存在的质量问题，采用新材料，新设备，新技术和
新工艺方法，用以解决存在的问题。
工艺改进的目的：经提高产品质量为中心，提高劳动生产率，减轻工人劳动强度，不断降低成本和工艺
投入。工艺改进的过程也就是产品质量提高取得较好经济过程，是技术革新工作的主
要内容之一。
6.企业管理的基础工作是什么？
工艺管理、质量管理、标准化是企业管理中重要的基础工作。
7.什么是工艺更改？工艺更改的目的及程序？
工艺更改通常指工艺文件（即工艺规程及内容）的修改。主要由于生产工艺、设备、工装、材料、工序内容、物流发生改变、引起产品结构、尺寸、技术条件改变而引起的工艺更改。
工艺更改的目的：1）完善现场工艺，满足生产需要；2）提高产品质量；3）新材料、新设备、新工装、新工艺及工艺管理方法和生产方法的采用；4）产品结构和产量的调整；5）新标准的采用。
工艺更改的程序：由现场工程师根据产品文件或生产实际填写《工艺文件更改通知单》，之后由本生产
线工艺员校对，再交技术主主管标准化审查，厂长审批，签字手续齐全后交发工艺员
编号，编号后现场工程师进行相应的文件更改。
8.什么是工艺纪律? 工艺纪律的主要内容?
工艺纪律是企业在产品生产过程中,为维护工艺的严肃性,保证工艺贯彻性执行，建立稳定的生产秩序，确保产品加工质量和安全生产而制订的具有约束性的规定，是保证企业有秩序地进行生产活动的重要厂规、厂法之一。即在生产过程中员工遵定的工艺秩序。
工艺纪律的主要内容：1）技术文件的质量。技术文件的种类（装配顺序书、操作指导书、设备操作规
程等工艺文件），对技术文件的要求（正确、完整、有效、受控）。2）设备和工
艺装备的技术状况。3）材料、在制品符合工艺要求。4）操作者。5）环境文明
卫生。6）检验的正确性和及时性。7）均衡生产。
9.开展工艺纪律工作的重要意义?
开展工艺纪律工作的重要意义是:1)促使企业严格管理;2)保证工艺技术与工艺管理的有效实施;4)稳定生产优质产品的重要手段;5)企业搞好文明生产的保证;6)保证特殊工序的质量。
10.企业员工应遵守的“三大纪律”？
三大纪律：劳动纪律、工艺纪律、质量纪律。
11.如何开展工艺纪律？
工艺是保证产品质量、指导工人进行生产的文件上的规定。工艺在生产过程中就是法规。法规的执行。是需要贯彻和监督的。现场工艺维护，首要的就是要执行工艺规程。
首先，必须向生产者进行工艺纪律教育，使其思想上有认识，行动上有规范；其次，工艺员必须和生产管理者共同对生产者在工艺文件规定的所有方面（工艺文件是否正确、统一、有效、受控，各项工艺参数的控制，工装使用，产品质量检测等是否正确执行）进行督促和检查。通常分为日检、周检和月检；第三，加强生产现场人员的工艺培训（包括人、机、料、法、环五大因素）。
12.操作者怎样执行工艺纪律?
操作者处于贯彻工艺纪律，遵守工艺纪律，保证稳定生产优质产品的支配地位。工艺纪律对操作者的要求：
①操作者全部实行持证上岗；
②熟记工艺内容，坚持“三按”即按图样、技术标准和工艺文件操作;
③生产前认真做好准备工作,保持工艺文件清洁、完好,工作场地干净、整洁，做好“5S”;
④认真执行自检活动（自检记录表、力矩校验表、工位日志），并作好记录，实行质量跟踪。
13.对操作者进行工艺纪律培训的目的?
1)明确的工艺观念、质量意识,能自觉遵守工艺纪律；
2)掌握本工种及相关工种的工艺理论及工艺常识；
3)能正确使用、保养设备、工艺装备、检测工具能进行简单修理；
4)熟练掌握本工种、本岗位操作技能，达到国家标准化要求。
14.现生产管理人员工艺纪律培训的目的?
1)按工艺要求(规定工艺、工装、设备、工艺参数、检查项目等)组织、管理生产。
2)加强生产管理，不断改善现场，提高各种工艺指标水平，实施各项改进方案，提高生产能力。
3)开展全面质量管理活动，加强产品自检、互检、专检、稳定产品质量。
4)实施现场定置管理，物流配送定置定量、先进先出管理，持续改善生产现场。
15.现场工艺管理的基本任务？
现场工艺管理的基本任务是：
1）
2）
3）
4）确保产品质量； 提高劳动生产率； 节约材料和能源消耗； 改善劳动条件和文明生产。
1)应在传统管理方法的基础上,积极采用现代的组织管理方法;
2)必须强化质量意识;
3)现场所涉及的有关单位应有机关地配合,以保证生产现场的物流和信息流的顺利畅通.17.生产现场工艺管理的主要内容?
1)指导和监督工艺规程的正确实施;
2)进行工艺质量控制;
3)建立现场施工档案,做好各种数据的记录和管理;
4)总结各种合理建议和先进经验,及时实施和推广;
5)搞好文明生产和现场定置管理;
6)做好外协件的质量控制;
7)搞好现场工艺纪律管理;
8)理顺物流。
18.工艺员生产现场服务的任务?
1)处理现生产中出现的问题,出现质量问题,与工艺、操作者、设备、零件、材料等因素有关，有时还可能遇到零件合格装出总成不合格，总成合格，零件不合格的现象等。工艺员到现场
共同解决的问题，若是工艺问题应考虑：工艺规程是否合理，工人是否按工艺规程操作，工
艺路线、工艺文件是否更改等。对于装配质量要考虑人的因素。
2)工艺人员编制的工艺文件，在现场服务时得到修改、补充、完善，更有效地指导生产。
3)验证产品设计的结构工艺性。及时发现问题，提出更改建议并与设计人员协商。
4)新产品现场装车指导。新产品或新车型试装车时，由工艺人员到生产现场向操作者讲解工艺
规程要点，指导出工序中关键质量特性要求，以及实现的方法，提出生产中的各项注意事项，并亲临示范，以便顺利进行产。制定临时装配工艺，总结试装中出现的问题，反馈给各有关
部门解决，19.工艺验证的基本任务?主要验证内容?
工艺验证的基本任务:通过小批试生产考核工艺文件和工艺装备的合理性和适应性,以保证今后批量生产中产品质量稳定、成本低廉，并符合安全和环境保护要求。
主要验证内容：
1）
2）
3）工艺关键件工艺路线和工艺要求是否合理、可行； 用的设备和工艺装备是否能满足工艺要求； 检验手段是否满足要求；
第三篇：安全管理论文—坚持预防为主实现安全发展
坚持预防为主 实现安全发展
当前钢铁企业由于缺乏对安全预防和应急处理的足够重视，生产的安全隐患像一颗潜伏在人们日常生产中的定时炸弹时时威胁着企业和职工生命财产的安全。鞍钢2.20钢水喷爆事故，梅钢2.23煤气中毒事故，以及令很多人现在还心有余悸的能源管控中心2.27事故等一系列残酷的事件无不赤裸裸地暴露出企业安全管理中存在“软肋”。企业必须从实践“三个代表”重要思想的高度，从维护改革发展稳定的大局出发，以对党、对社会、对人民高度负责的精神，认真贯彻落实党中央、国务院有关安全生产的指示精神，牢固树立“安全第一、预防为主、综合治理”的思想，以人为本，标本兼治，安全发展，落实安全生产责任，切实做好安全生产工作。
严格意义上讲，一切隐患和灾难都是人为的，是人们不理智、不合理的生产方式、生活方式和行为方式的结果。因此，安全生产中的关键措施是在生产中尽量减少那些可能产生隐患的因素。
对于一个企业而言，要想长期安全生产，最重要的是建立一套比较完善的安全管理机制，在此基础之上不断增强排除隐患能力。建立安全管理机制的目的就是要未雨绸缪，防患于未然，使一切潜在的隐患从根源上彻底杜绝！为了有效地预防和处理各种隐患，综合治理措施是必不可少的。这就需要企业从以下几点切实完善安全管理机制，提高安全管理职能。
第一，贯彻“安全第一、预防为主、综合治理”的方针，治理隐患、防范事故、标本兼治、重在治本。党的安全生产方针是完整的统一体，安全第一、预防为主、综合治理三者之间具有内在的严密的逻辑关系：坚持安全第一，必须以预防为主，实施综合治理；只有认真治理隐患，有效防范事故，才能把“安全第一”落到实处。安全生产工作要关口前移，重心下移。“预防为主”，古人云：“预则立，不预则废”，从古到今重视安全，所以“防”是实现安全生产的先决条件，要实现安全第一，必须以预防为主，要不断查找、排除、治理各种隐患，成事在人，谋事在先，尊重科学探索规律，遵循事物发展的客观规律，采取有效的事前控制措施，防微杜渐，防患于未然，把隐患消灭在萌芽状态，杜绝各类事故的发生。生产事故中有95%是“三违”造成的，是人为的责任事故。而这些责任事故的产生，首先是责任人的认识问题引起的。没有“预”便没有“防”，预防事故连想都没去想，怎么会防？“防”即防备、防范、防止，是实实在在的东西，看得见，摸得着，它是将“预”变成一种行为，一种手段、一项措施。购买安全保障设备，配备专职安全员，坚持安全巡查制度等等。由于有效的“防”能消除事故隐患，往往又会造成平安无事的表面现象，而这种表面现象又恰恰容易使人产生麻痹思想、责任懈怠，认为“防”得多余，使“防”的工作流于形式。因此，“防”也是一项长期的工作，需要长期坚持，从根本上保证安全生产。综合治理是安全生产方
针的基石，是安全生产工作的重心所在。把“综合治理”充实到安全生产方针当中，更好地反映安全生产工作的规律特点。总的来说，“安全第一，预防为主，综合治理”是国家对安全生产管理的基本方针的主要内容，“安全第一”是要求，“预防为主”是实现这一要求的基本保障，只有做到将安全放在首位，才能重视预防，同时只有作到有效预防，才能真正实现安全。
第二，生产安全管理部门要建立起完善而周密的安全管理组织体系，将安全管理整合到日常安全生产管理中。实行安全管理的目的在于预防事故。坚持各项行之有效的措施，层层落实安全生产责任制。一是强化法律观念，以安全生产方针为指导思想，认真学习并贯彻落实上级文件精神，以法律为准绳，时时刻刻扣紧安全生产法律这根弦，树立一种精神，就是实事求是、求真务实、夯实基础，提倡一种作风，就是真抓实干、扎扎实实、脚踏实地。二是要建立健全安全生产责任制，安全生产涉及到方方面面，纷繁复杂，是一个动态的多环节、多层次的系统工程，任意一个层次或环节失误，都有可能导致事故的发生，因而要严把每一个环节、层次或每一个人的安全生产关，就必须建立健全一套完善的安全生产责任制，将安全生产责任细化到每一个岗位，分解到每一个人。三是建立安全生产管理机构或配备专职的安全生产管理人员。强化各单位的安全管理能力，建立起统一领导、分工协作的组织体系，将安全网络延伸到每个角落。
第三，开展重点行业和领域安全生产隐患排查治理专项行动，坚决防范遏止重特大事故。在重点行业领域全面开展隐患排查治理专项行动，既是防范遏制重特大事故反弹的断然措施，也是综合治理、标本兼治，提高企业安全保障和监管能力，建立长效机制之策；既是一项集中开展的专项行动，也是一项需要持续努力、常抓不懈的重要的基础性工作。要排查事故隐患，做到经常化，制度化，不留死角。对于典型事故要深入剖析，举一反三，防止同类事故重复发生。要深入开展专项治理，特别要盯住工作不力的单位，确保整改到位。对隐患突出，不具备安全生产的生产区域，坚决关闭。持之以恒地强化隐患排查治理，加强对重大危险源的监控。
第四，加强安全法制建设，实施依法治理。一是建立规范完善的安全管理制度。目前有的生产领域违反安全管理制度严重，安全生产执法存在失之于宽、失之于软的现象。必须在贯彻执行上动真从严，下决心解决“执法不严、工作不实”的问题。纠正和惩处违法行为，严惩事故直接责任者。进一步完善安全法规体系和岗位作业标准体系。加大检查力度，杜绝违章作业。严肃查处各类事故，加大责任追究力度。二是完善安全生产监管体制机制，加强监管监察队伍自身建设。进一步理顺安全监管、安全监察和安全管理的职责关系。鼓励从安全生产实际出发，提高安全科人员、工段安全员的履职能力，严格执法树立良好的安全队伍形象。
第五，落实主体和责任制，纳入业绩考核。企业是安全生产的责任
主体。安全生产工作必须建立、落实企业法定代表人负责制，主体和责任制相辅相成，共同构成安全生产工作基本责任制度。企业主要领导是安全生产第一责任人，发展生产是业绩，安全生产也是业绩，要把安全生产纳入生产发展规划，逐级抓好落实。企业直接掌握生产经营决策权的第一负责人，必须对本单位的安全生产负总责，创建本质安全型企业，切实保障职工的生命安全和健康权益。第一负责人必须亲自带头，进行经常性的定期的监督性的安全检查和日常安全巡回检查，这是搞好安全生产的一个重要措施和手段，也是加强监管和减少或杜绝各类事故发生的必经途径。党对安全生产工作的指导，主要体现在大政方针、法制建设、工作格局、运行机制、舆论导向、政治保证等方面。很重要的一条，就是要明确责任制的落实，纳入政绩业绩，作为评价使用干部的重要依据。企业在落实法定代表人负责制的基础上，要层层建立安全责任体系，依法履行安全生产责任，加强企业内部管理，搞好安全生产工作，搞好安全监管，把住安全许可、项目安全评价、设计审查和竣工验收等关口，从源头上解决问题。
第六，加大科技投入，实施科技兴安战略，加强安全科研开发和技术改造，用科技创新引领和支撑安全发展，提高事故防范和处置能力。一要加快安全科技重大项目、重点课题研究攻关，尤其把高危领域的监测、防治、应急救援等技术作为重点。二是研发集成先进技术设备，为隐患治理和安全技术改造提供技术支撑，推广先进适用技术和设备，淘汰危及安全的工艺设备。三是重点引进安全专业人才，加快企业安全建设的步伐。全面落实“十二五”安全生产科技规划，加强安全生产领域的科技创新与进步。搞好产、学、研结合，推进原始创新、消化创新，搞好科研成果的转换与应用。加强安全技术改造，淘汰落后的技术装备，提高企业安全科技含量，提升本质安全水平。
第七，加强安全文化建设、安全生产宣传教育和培训工作。加大安全生产法律法规、方针政策、工作部署、典型经验的宣传和对典型事故案例的曝光，营造舆论氛围；采取有力措施，增强企业负责人、管理人员、员工的安全意识；全面加强安全培训工作，提高从业人员的安全素质。实施“全体职工安全素质工程”。宣传普及安全法律和安全知识。提高全体职工安全意识，动员全体干部职工更加重视和支持安全生产工作。毛主席曾经说过：“没有文化的军队是愚蠢的军队。”培训是提高职工素质的主要手段和重要途径，许多事故的发生主要是无证上岗，法规和安全意识淡薄，只有强化培训，才能提高全员的素质，只有加强培训，才能保证正确操作和使用先进的装备和应用先进的技术，才能真正体现合理化、科学化、规范化管理。对职工进行强制性的安全教育和培训。加强对安全生产的舆论监督。充分发挥工会等群众性团体的作用，保障职工安全健康权益。将安全生产纳入“平安建设”，使各具特色的安全文化进工段、进班组。
第八，加强安全生产应急管理。抓好预案体系建设，做到企业预案与总体预案、专项预案、具体预案相配套、相衔接，并确保预案质量；
抓好应急法规标准体系建设、应急救援队伍体系建设、信息平台体系建设、应急管理指挥体系建设；加强安全队伍建设，推进安全监管体制、机制、手段、方法创新，提高工作效率，强化安全监管监察队伍建设，提高履职能力。做好应急预案工作，提高防范处置重特大事故的能力。加强预案工作，抓紧建立覆盖各单位的应急预案体系，搞好培训演练，落实预案责任和防范措施；加强三级安全生产应急救援机构建设；规范事故信息的收集、报送和处理，提高应急能力和事故处理效率；加强各单位、各工段之间的联系，建立“统一指挥、反应灵敏、协调有序、运转高效”的安全生产应急救援工作机制；加强事故防范，配足应急救援的设备和物资；要全面完善应急预案。各种预案要一目了然，具体管用，切实增强针对性和可操作性；要按照“四不放过”原则严肃查处事故。
第九，促使安全生产走上法制轨道。加强立法工作，健全完善法律法规体系和规程标准体系，做到有法可依，有规可守、有标可循；推进安全生产普法工作，让安全生产法律法规进企业、进工段；强化执法工作，严厉打击违规生产行为，依法严肃查处各类事故，加大责任追究力度。企业的主要负责人要严格执法，六亲不认，不怕得罪人，让安全执法真正“硬”起来，“狠”起来，“严”起来，绝不能心慈手软，真正建立安全生产的长效机制。
现阶段的安全生产工作，面临着诸多的新情况、新问题，要发扬实事求是、改革创新精神，大胆实践，深入探索，实现安全发展。搞好安全生产，实现安全发展，必须把科学发展观真正落实到安全生产领域的各个方面和环节，抓住工作重点，采取切实可行措施，务求取得实效。
一言以蔽之，安全生产任重而道远，需要企业干部和职工同心同德，真正实现安全生产，把事故隐患消灭在萌芽状态。
气体公司
贾春生
2012年5月8日
第四篇：制药工艺论文
溶菌酶结晶的制备及活力测定研究 制药工程2011级制药11班 ×××
指导老师 ××
摘要
目的：探讨溶菌酶结晶的制备及活力测定的方法。方法：以蛋清为原料制备溶菌酶结晶，首先将鸡蛋中的蛋清与蛋黄分离，取蛋清，然后用处理好的“724”树脂吸附，接着用蒸馏水洗涤，再经树脂洗脱，将所需物质与鸡蛋清中的其他蛋白质分离，然后再经盐析、纯化处理所得到的溶菌酶即可得结晶。将所得酶和底物分别放入25 OC恒温水浴预热10分钟，吸取底物悬浮液4mL放入比色杯中，在450nm波长读出吸光度，此为零时读数。然后吸取样品液0.2mL（相当于10µg酶），每隔30s读1次吸光度，共计下四个读数。结果：无结晶生成。结论：溶菌酶结晶的制备及活力测定研究实验以失败告终。关键词：溶菌酶 结晶 活力测定
The Preparation Of Lysozyme Crystallization And Activity Assay
Pharmaceutical Engineering2011 ZhenlinWei
Supervisor Weimin
Abstract Gold: to study the lysozyme crystallization method of preparation and activity assay.Methods: with egg white lysozyme crystallization as raw material preparation, first of all, separate the eggs in the egg white and yolk, egg white, a “724” and then use processing resin adsorption, then washing with distilled water, then through resin elution, the required material and other protein separation of egg qing dynasty, and then received by salting out, purification processing of lysozyme crystallization.Put the enzyme and substrate respectively in 25 OC preheat constant temperature water bath for 10 minutes, drain the substrate suspension 4 ml into colorimetric cup, read the absorbance at 450 nm wavelength, this is zero readings.Then absorbs the liquid sample 0.2 mL(equivalent to 10(including g enzyme), every 30 s read 1 absorbance, a total of four readings.Results: no crystallization generated.Conclusion: the preparation of lysozyme crystallization and dynamic measurement experiment ended in failure.Keywords: lysozyme crystallization activity assay
前 言
溶菌酶(Lysozyme, EC 3.2.1.17)是一种专门作用于微生物细胞壁的水解酶 ,又称细胞壁溶解酶（Muramidase），是由英国细菌学家弗莱明(Fleming)在 192年在人的眼泪、唾液中发现的[1]。溶菌酶广泛存在于鸟类和家禽的蛋清中，哺乳动物的泪液、唾液、血浆、尿、乳汁、其它体液（如淋液）中及白细胞和组织（如肝、肾）细胞内，而且部分植物、微生物中也含有此酶[2]。其中人溶菌酶的活性是最高的，大约为鸡蛋清溶菌酶酶活力的 3 倍。但是蛋清中溶菌酶含量最丰富，约为 0.3%-0.4%左右，而且蛋清来源广泛，因此多数商品溶菌酶是从蛋清中提取的[3]。李鹤等在食品研究与开发中提到了溶菌酶已确定的三种作用：1)将溶菌酶固定化在食品包装材料上, 生产出有抗菌功效的食品包装材料, 以达到抗菌保鲜功能。2)将溶菌酶固定化在 HEPA(空气过滤器)上, 作为空调的空气净化系统, 使其具有高效除尘和杀菌两大功能。当空气通过滤网时, 先滤集捕捉尘粒和细菌,然后将捕捉到的细菌杀灭[4]。3)用溶菌酶非专一性地降解海洋生物高分子壳聚糖, 使其成为能被人体吸收的低分子量具有独特生理活性和功能性质的低聚壳聚糖[5]。近几年,溶菌酶被广泛运用于医药、食品行业。溶菌酶作为一种天然蛋白质, 能在胃肠内作用于营养物质被消化和吸收, 对人体无毒性, 也不会在体内残留, 是一种安全性很高的食品保鲜剂、营养保健品和药品[8]。溶菌酶可用于各种加工食品或饮料制作中, 集药理、保健和防腐三种功能于一体[10]。因此, 在倡导绿色食品的今天, 溶菌酶的应用前景是相当广阔的应用前景[6]。
1、材料与方法
1．1实验试剂
鸡蛋清，10%硫酸铵，固体硫酸铵，磷酸二氢钠，磷酸氢二钠，十二水磷酸二氢钠，十二水磷酸氢二钠，EDTA，底物干菌粉，“724”树脂，丙酮。1．2仪器
721型分光光度计，抽滤瓶及布氏漏斗，研钵，恒温水浴，离心机，透析袋，1cm x 35cm层析柱，吸量管：0.1ml、0.2ml、1ml、5ml，真空干燥器。
1．3实验方法及步骤 蛋清的制备
将4～5个新鲜的鸡蛋两端各敲一个小洞，使蛋清流出（鸡蛋清pH值不得小于8），轻轻搅拌5分钟，使鸡蛋清的稠度均匀，用两层纱布过滤除去脐带块，量体积约80~100ml，计量体积，用冰块预冷至0摄氏度备用[7]。树脂吸附 将处理好的“724”树脂用布氏漏斗抽干，取湿树脂20g（约为蛋清量的1/5~1/4），在不断搅拌下加入预冷的蛋清中，再继续搅拌3h使充分吸附，静置过夜（0~5摄氏度）[9]。洗涤
将树脂移入烧杯，取10%硫酸铵溶液30~40ml（树脂量2倍，不可多用！）分3次加入搅拌（15min）洗脱，抽干树脂，合并洗脱液（滤液），树脂保存供再生。
脱盐 沉淀用1ml蒸馏水溶解后转入透析袋，用蒸馏水透析24h（0~5摄氏度冰箱），中途换水3~5次，或流水（搅拌）透析24h。去除碱性杂蛋白
将上述透析液用1mol/LNaOH（最后用0.1mol/LNaOH）溶液调至pH8.0~8.5。如有沉淀，离心除去[14]。结晶
用药勺在搅拌下慢慢向酶液中加入5%（W/V）研细的固体NaCl，注意防止局部过浓。加完后用NaOH溶液慢慢调至pH9.5~10.0，室温下静置48h。结晶观察与收取
肉眼观察有结晶形成后，用滴管吸取结晶液1滴置于载玻片上，在低倍显微镜下观察并画出结晶图形。离心或过滤收集酶晶体，用少量丙酮洗涤晶体2次，以五氧化二磷真空干燥后称重。
酶活力的测定
底物的制备
将微球菌接种于液体培养基扩大培养(28℃,24h),再接种于固体培养基培养(28℃,48h),用无菌水将菌体洗涤, 4000rpm 离心10min, 弃上清,再洗菌体数次, 最后用少量无菌水制成悬液, 冷冻干燥即得干菌粉[11]。取干菌粉5g,加入少量0.1mol/L的pH6.2磷酸缓冲液置于匀浆器或研钵中研磨2min, 倾出并稀释至20～25mL,悬液的光密度OD450在0.5～0.7范围为宜。
酶液的制备
准确称取干溶菌酶粉5mg,用0.1mol/L的pH6.2磷酸缓冲液溶解成0.05mol/L酶液。
酶活力测定
将酶液与底物悬液分别置于25℃水浴中保温10～15min, 测底物悬液的OD450 值,作为对照。然后加入酶液0.2mL(约10μg酶蛋白)迅速摇匀。从加酶时开始记时, 每30s测1次OD450值,共测3次[17]。
酶活力的计算
以每毫克溶菌酶每分钟使吸光度降低0.001个单位为1个酶活力单位。溶菌酶活力=ΔOD450/(0.001×W)(U/mg)式中, ΔOD450 为450nm 处每分钟吸光度的变化；W为加入的酶量(mg)。1．4数据处理
（1）计算：活力单位定义是：在25摄氏度，pH6.2，波长为450nm时，每分钟引起吸光度下降0.001为一个活力单位。
每1mg酶活力单位数=吸光度×1000/样品（ug）
（2）计算溶菌酶的收率并由其效价计算总活力回收率。收率=干燥的酶重量/蛋清总重量×100% 总活力回收率=（酶重量×效价）/蛋清总重量
2、结果
在溶菌酶结晶制备时无结晶形成，无法进行酶活力测定实验。
3、结论及分析
3.1 可能与实验过程中溶液的pH值有关，酶活性在pH6.0~6.5最强,且在pH5~7范围内较稳定[15]。实验结果无结晶生成，其原因可能是在实验过程中溶液的pH过酸或过碱，导致酶失活了，故无结晶生成。
3.2 可能与实验过程中溶液的温度有关，酶活性在25~65摄氏度范围内随着作用温度的升高酶的活性增强,但温度太高则变性失活[16]。实验结果无结晶生成，其原因可能是在实验过程的溶液的温度过高，导致酶失活，故无结晶生成。
3.3 可能与实验所用的蛋清的量有关，因为是小实验，所以实验所用蛋清的量约80~100ml，本来蛋清中就含有多种蛋白质，溶菌酶的含量也不高，并且在实验的过程中还会造成一定程度的损失，导致达不到结晶时对溶菌酶的浓度要求，故无结晶生成。
参考文献
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第五篇：安全管理论文
强化安全意识创造和谐环境
安全就是生命，安全就是发展，安全就是效益，安全是我们企业永恒的主题，一起起安全事故警示我们安全生产一刻也不能放松。对于我们输电线路施工来说，虽然该项工作没有什么太高的技术要求，但存在施工战线长、涉及面广、受外界干扰因素较多、专业性比较强、施工安全管理难度大的现状。因此全国各地不断发生事故，对人民的生命财产造成了巨大的损失，对国民经济的健康发展造成了严重影响，究其原因，我个人认为主要可以归纳为以下几个方面：
有章不循，安全意识淡薄
各项规程、规定都是有血的教训，纵观事故现场，无不是违章操作、违章指挥、违反劳动纪律造成的。现场规章制度、安全标语随处可见，施工安全技术措施、操作规程制定了一大堆，但在执行中都成了摆设，没有落实到现场，现场管理人员把制度、措施的落实当做儿戏，工人一问三不知。
安全管理流于形式，弹性大。
安全管理会议大开、小开，安全管理的组织上建下建，但真正实干的太少，要么资金措施不到位，要么人员制度不落实；总之，生产现场安全管理混乱，安全管理名存实亡。每当有上级部门来检查时，现场就大张旗鼓的抓一阵子安全。可是，检查一过，又是一切照旧。
安全生产是关系人命的大事，任何疏忽大意都有可能酿成悲剧。有道是：“事未至而预图，则处之常有余；事即至而后计，则应之常不足”，预防为主是安全生产工作永恒的主题。我们必须增强忧患意
识，自觉把安全生产当做我们的头等大事来抓。转变观念，开拓创新，统筹规划，增强对安全生产工作的主动性和预见性，做到未雨绸缪，综合解决安全生产问题。
一、安全与生产的辨证关系
安全与生产、效益是密不可分的。只有安全好了,才能保证更好地生产。生产中存在着一定的不安全隐患,所以处处都要警惕、时时刻刻都要注意安全。安全是企业生产的前提，生产又是效益的保障。谈到效益,我们总是想到利润、成本、资金、节支等字眼,很少有人想到安全。但越来越多的现实已经向我们证明，只有安全好了，才是最大的效益，安全不好,出了事故，企业和个人都将受到损失，效益又从何谈起？
二、完善安全生产制度建设，推进安全科学化管理
安全重在管理，管理重在现场，现场重在落实。生产活动是一个变化的动态的过程,作为生产活动主体的各类人员，由于受各类环境因素和自身条件的影响，在这个过程中，经常会有各类不安全行为的发生，这就要各级管理人员、尤其是生产现场的班组长、安全员、技术员要多督促、多检查，发现隐患及时处理，认真落实好班组长安全生产责任制。各类检查人员要深入现场发现问题、解决问题，而不是应付差事走过场。同时，加大对各级管理人员的考核力度，一级管一级，下级对上级负责，层层落实好岗位职责，使生产现场控制在有序、平稳的状态中。
一是发挥好理念先导作用。心态安全是安全生产健康发展的基础
和前提，最能体现安全意识。无论是管理者还是普通员工，只有心态安全才会行为安全，才能保证安全制度落到实处。以安全价值观为核心的安全理念是心态安全文化建设的灵魂。追求健康是人皆有之的基本需求，可是为什么在一些现场“三违”现象屡禁不止？最根本的问题就是观念问题，就是没有树立正确的安全理念。比如说，一些单位盲目追求效益，迫使或诱发本单位职工拼设备、拼体力，违章冒险蛮干；又比如，上级组织安全大检查是帮助下级查出隐患，预防事故，这本是好事，可下级往往百般应付，恐怕查出什么问题，查出问题便想方设法大事化小、小事化了；再比如，“我要安全”本来应是职工本能的内在需要，可现在却变成了管理者强迫被管理者必须完成的一项硬性指标。如果上述错误观念不破除，正确的安全理念不树立，那么，安全生产的建设就永远是一座空中楼阁。
二是发挥好宣传教育作用。安全管理的落脚点在班组，防范事故工作的终端是每一位员工，目的就是要努力保证他们的人身安全。因此，如何提高每一位员工的安全意识，使之实现“要我安全”，到“我要安全”的根本性转变，是企业安全文化建设的中心任务。坚持以人为本的安全方针，营造“人人关注安全”良好氛围，必须拓宽宣传教育形式，建立起整体性的、全方位、全过程、全员的安全环境。通过电视、报刊、板报、标语、读本等媒体和安全知识竞赛、演讲比赛等形式多样的活动，加强安全生产宣传攻势，做到寓教于乐，使安全生产意识深入人心，安全知识广为传播，潜移默化地规范人的安全行为，培养人的安全心态。
三是发挥好亲情感染作用。从理论上讲，促使全员树立正确的安全意识，最基本、最有效的手段就是宣传教育。安全生产的宣传教育适应了职工群众对安全生产的内在需求，从主观上讲职工是愿意接受的。要解决安全问题入心入脑的问题，还应注重情感投入，可采用亲情教育法，时时提醒职工牢记亲人的嘱托；如为职工过生日，送警句，兄弟交心等方法，不失时机、潜移默化地向职工宣传安全思想。
四是发挥好管理规范作用。职工安全素质的高低与安全管理者的方法是有直接联系的。过去，管理者抓“三违”更多依赖的是批评教育和经济处罚。不可否认，批评和罚款能使违章职工的思想受到触动，但仅仅通过经济手段控制“三违”现象是不现实的。尤其是个别管理人员在执行制度过程中方法简单粗暴，很容易使职工感情上受到伤害，进而对安全管理人员产生抵触情绪和逆反心理，使经济处罚的有效作用大打折扣。为了增强管理效果，管理者应该在严格执行刚性制度的同时，注重柔性管理方法的使用。如在单位会议室 设“违章曝光台”，让违章指挥和违章操作者站到台上，将违章经过及危害说清楚，促使其自我反思，自觉遵守规章制度。企业管理人员要发挥示范作用，当生产条件达不到安全、危害员工健康时，不得盲目指挥、违章指挥。尤其当威胁到员工生命安全时，要把保障员工的安全放在第一位。此外，要为员工创造优美、舒适的工作环境，确保员工心情舒畅、精力充沛地去工作。
五是落实制度，“严”字当头，落实安全生产规章制度，规范人的行为对搞好安全生产工作极其重要。各级管理人员要抓好制度的教
育和落实，使广大员工懂得安全生产管理规章制度是用多少人的鲜血和生命及沉痛教训写成的，按规章制度和操作规程运作就是珍惜生命、珍惜父母的养育之恩，珍惜家人和儿女的情感。教育员工自觉用规章制度规范自己的行为，把自觉执行规章制度变成大家的自觉行为。落实安全生产规章制度，规范人的行为要狠抓一个“严”字，要“严”字当头，要严制度、严标准、严明劳动纪律。特别是对那些日常违章人员，在对其做到教育的基础上，利用暴光、经济重罚等措施，督促本人增强安全意识和抓好安全生产的自觉性。同时，还要坚持好各级管理人员现场值班制度，如不能做到，不论涉及到谁，都按规定进行考核及处罚，从而增强各级管理人员抓好安全生产的自觉性。
总之，安全工作只有起点，没有终点，只有真正做到领导重视，措施落实、考核到位，严格奖惩兑现，不断提高安全管理水平，才能确保安全生产。从而形成安全工作上下齐抓共管的良好局面，促进线路施工安全生产工作的稳步健康发展。
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